A hematopoese nas serpentes inicia-se durante a embriogênese e através dos processos de alterações da vida fetal. A primeira atividade eritropoética é extraembrionária, a partir de células mesodérmicas do saco vitelínico e durante o desenvolvimento embrionário torna-se intraembrionário. Em serpentes recém-nascidas e adultas, o principal foco hematopoético ocorre na medula óssea. O objetivo deste estudo foi caracterizar os diferentes estágios de maturação das células sanguíneas da serpente O. guibei, com base em estudos de microscopia, reações citoquímicas e aspectos ultraestruturais. Fragmentos de vértebras de serpentes recém-nascidas e adultas (n=11) foram coletados para obtenção da medula óssea que foi fixada em formol cálcio ou Bouin e processadas para histologia de rotina. Cortes histológicos, imprint de medula óssea e esfregaços sanguíneos foram corados com Rosenfeld, hematoxilina e eosina ou azul de metileno. As reações citoquímicas realizadas foram ácido periódico de Schiff (PAS), azul de toluidina (AT), Sudan Black B (SBB), benzidina peroxidase (PA) e fosfatase ácida (FA). Para a microscopia electrónica de transmissão (TEM), a medula óssea foi fixada em paraformaldeído a 4% + glutaraldeído 2%, em tampão Tyrode, pós fixados em tetróxido de ósmio a 1% e embebidos em resina Epon 812. A maior parte das células progenitoras de células sanguíneas foram identificadas em focos hematopoiéticos ativos na medula óssea de vértebras e costelas. As linhagens azurofílicas e linfoides foram morfologicamente similares aos de outros répteis. A linhagem granulocítica foi classificada como mieloblasto, promielócito, mielócito e granulócito maduro. Mielócitos podem ser diferenciados em basófilos com grânulos grandes, redondos e eletrondensidade homogênia ou heterófilos, com grânulos de tamanhos e formas variadas na análise MET. TB e PAS foram positivos nos grânulos imaturos e maduros basófilos. Por outro lado, heterófilos e azurófilos mostraram reação fortemente positiva para lípidos de SBB e BP. FA foi encontrado nos azurófilos em várias fases de maturação. As diferentes fases de eritrócitos foram classificadas como: proeritroblasto, eritroblasto basófilo, eritroblasto policromático, proeritrócitos e eritrócitos maduros. Os trombócitos apresentaram positivadade para PAS. As características dos trombócitos maduros e imaturos foram definidas através da TEM apresentando corpos densos, grânulos alfa, microtúbulos e sistema canalicular aberto. Concluindo, a medula óssea das costelas e vértebras é um importante foco hematopoético nas serpentes O. guibei recém-nascidas e adultas. Os aspectos morfológicos, citoquímicos e ultraestruturais são úteis para identificar e caracterizar os diferentes estágios de maturação das células sanguíneas / Hematopoiesis in snakes begins during embryogenesis and the process changes through fetal life. The first erytropoietic activity is extraembryonic from mesoderm cells of the yolk sac and during the embryonic development it becomes intraembryonic. In newborn and adult snakes, the main site of hematopoiesis occurs in the bone marrow. The aim of this study was to characterize different stages of blood cells maturation of O. guibei snakes, based on microscopic studies including cytochemical stains and ultrastructural features. Fragments of vertebrae of newborn and adult snakes (n= 11) were collected to obtain bone marrow that was fixed in Bouin or formol calcium and processed routinely for histology. Tissue sections, imprint of bone marrow and blood smears were stained with Rosenfeld, hematoxylin and eosin or methylene blue. The cytochemical reactions performed were periodic acid-Schiff (PAS), toluidine blue (AT), sudan black B (SBB), benzidine peroxidase (BP) and acid phosphatase (FA). For transmission electron microscopy (MET), bone marrow was fixed in paraformaldehyde 4% + glutaraldehyde 2% in Tyrode buffer, postfixed in 1% osmium tetroxide and embedded in Epon 812 resin. Most of progenitors of blood cells were identified in the active hematopoietic focus in bone marrow of vertebrae and ribs. The azurophilic and lymphocytic series were morphologically similar to those of other reptiles. Granulocytic lineage was classified as myeloblast, promyelocyte, myelocyte and mature granulocytes. Myelocyte can be differentiated into basophils, with large, round and electrondensity homogeneous granules or heterophils, with varied size and shapes granules in the TEM analysis. AT and PAS were positive in the immature and mature basophils granules. On the other hand, heterophils and azurophils showed strong positive reaction for lipids staining of SBB and BP. FA was found on azurophils in various stages of maturation. The different stages of erythrocytes were classified as: proerythroblast, basophilic erythroblast, polychromatic erythroblast, proerythrocyte and mature erythrocytes. Thrombocytics cells showed PAS positive. The characteristics of mature and immature thrombocytes were defined using TEM identifying the dense bodies, alpha granules, microtubules and open canalicular system. Concluding, the rib or vertebral bone marrow is an important hematopoietic site in the newborn and adult O. guibei snakes. The morphologic, cytochemical and ultrastructural characteristics are useful to identify and characterize different stages of maturation of blood cells

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T18:09:09Z : No. of bitstreams: 1 ferreirajunior_rs_me_botfm.pdf: 1446696 bytes, checksum: dbfee5e5aa68ebc4a664a665cf902076 (MD5) / O ensaio imunoenzimático de ELISA foi utilizado para avaliar, acompanhar e comparar a resposta imune humoral de camundongos SWISS durante o processo de hiperimunização com veneno nativo e irradiado com Cobalto-60 (60Co) obtido das serpentes Crotalus durissus terrificus, Bothrops jararaca, Bothrops jararacussu e Bothrops moojeni. A potência e a capacidade de neutralização foram avaliadas por meio de desafios “in vitro”. A imunidade obtida ao final do processo de hiperimunização foi verificada mediante desafio “in vivo” e os efeitos colaterais foram avaliados. A imunização dos animais, com uma DL50 de cada veneno, ocorreu nos dias um, 15, 21, 30 e 45, quando foram colhidas amostras de sangue. No 60º dia ocorreram os desafios. Os resultados demonstraram que o teste de ELISA mostrou-se eficiente na avaliação, acompanhamento e comparação da resposta imune dos camundongos durante o processo de hiperimunização. Os títulos do soro produzido com veneno nativo foram semelhantes aos títulos do soro obtido com veneno irradiado. A capacidade imunogênica foi mantida após a irradiação com 60Co. O soro produzido a partir do veneno irradiado de Crotalus durissus terrificus apresentou potência e capacidade de neutralização maiores, quando comparado ao soro obtido a partir do veneno nativo.Os anticorpos antiveneno nativo e irradiado, mediante os desafios “in vitro”, mostraram-se igualmente eficazes na neutralização dos venenos de Bothrops jararaca, Bothrops jararacussu e Bothrops. Todos anticorpos foram capazes de neutralizar cinco DL50 dos respectivos venenos. As alterações clínicas foram mínimas durante o processo de hiperimunização com veneno irradiado e evidentes com veneno bruto. / ELISA was used to evaluate, follow, and compare the humoral immune response of Swiss mice during hyperimmunization with natural and Cobalt-60- irradiated (60Co) Crotalus durissus terrificus, Bothrops jararaca, Bothrops jararacussu, and Bothrops moojeni venoms. Potency and neutralization were evaluated by in vitro challenges. After hyperimmunization, immunity was observed by in vivo challenge and the side effects were assessed. The animals’ immunization with one LD50 of each venom was on days one, 15, 21, 30, and 45, when blood samples were collected; the challenges occurred on the 60th day. Results showed that ELISA was efficient in evaluating, following, and comparing mouse immune response during hyperimmunization. Serum titers produced with natural venom were similar to those with irradiated venom. Immunogenic capacity was maintained after 60Co irradiation. Serum produced from Crotalus durissus terrificus irradiated venom showed higher potency and neutralization capacity than that from natural venom. Antibodies from natural and irradiated venom by in vitro challenges were also efficient in neutralizing Bothrops jararaca, Bothrops jararacussu, and Bothrops moojeni venoms. All antibodies were capable of neutralizing five LD50 from these venoms. Clinical alterations were minimum during hyperimmunization with irradiated venom and evident with natural venom.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:11:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000419311-Texto+Completo-0.pdf: 1361781 bytes, checksum: b2420e6628557cca585fc9b340850f47 (MD5) Previous issue date: 2008 / This work was carried out at a highland area of the Sul-Riograndense Shield, located within São Jerônimo and Barão do Triunfo Municipalities, and aimed to describe composition, seasonal activity cycle, reproductive and feeding patterns of a squamate assemblage. Sampling happened from April 2004 to April 2006, and the squamate specimens were visual search in the study area (VS) or collected by resident collaborators (RC). Total sample, including both methods, comprised three species of Amphisbaenidae, six species of lizards (Anguidae (1), Gymnophtalmidae (1), Scincidae (1) and Teiidae (3)) and 24 species of snakes (Colubridae (20), Elapidae (1), Lepthotyphlopidae (1) and Viperidae (2)), which correspond to 33. 7% of the squamate fauna of Rio Grande do Sul. The two most frequent species of Amphisbaenidae, Amphisbaena munoai and Anops kingii, had unimodal pattern of seasonal distribution, sexual dimorphism of snout-vent length (SVL) (females > males, t test p < 0. 001) and seasonal reproductive cycle in spring and summer. Both species consumed several prey categories, but termites (Isoptera) seem to be a base element of their diet. Reproductive data were analyzed for the two most frequent lizard species, Cnemidophorus lacertoides and Cercosaura schreibersii, which presented typically seasonal reproduction, recorded in spring and summer. In both species mature females had significantly larger SVL than males (t Test; p < 0. 001). On the other hand, mature males of both species had larger (Ancova; p < 0. 001) head length and width than females. Total sample of snakes comprised 325 specimens, the most frequent being: Bothrops pubescens (27. 69%), Philodryas patagoniensis (12. 31%), Philodryas olfersii (12%) and Tantilla melanocephala (8. 62%), which together corresponded to 60. 62% of the total sample. Taking into consideration only the snakes caught by PV, there was significant correlation between the relative frequency of active/month snakes and temperature (Anova, p < 0. 001) and, inversely, significant correlation was observed between relative frequency of sheltered/month snakes and temperature (Anova, p < 0. 001). Data on the diet of 17 species were gathered and anuran amphibians (including tadpoles) was the most used food item. The reproductive period was remarkably seasonal, recorded in spring and summer. It is also presented herein the first record of ophiophagy for Echinanthera occipitalis (=Taeniophallus occipitalis), which swallowed a specimen of Tantilla melanocephala. A species of anuran amphibian, Melanophryniscus pachyrhynus, was rediscovered. It was so far known only by two syntypes collected in southern Brazil about 100 years ago. The description of the species was redone and the geographical distribution was increase. / O presente estudo foi desenvolvido em uma área elevada do Escudo Sul-Riograndense localizada entre os Municípios de São Jerônimo e Barão do Triunfo e teve como objetivo descrever a composição, ciclos de atividade sazonal, padrões alimentares e reprodutivos de uma taxocenose de escamados. O período de amostragem ocorreu de abril de 2004 a abril de 2006, onde os escamados foram procurados ativamente na área (PV) e recolhidos por colaboradores residentes (CR). Considerando os dois métodos aplicados, foram amostradas três espécies de Amphisbaenidae, seis espécies de lagartos (Anguidae (1), Gymnophtalmidae (1), Scincidae (1) e Teiidae (3)) e 24 espécies de serpentes (Colubridae (20), Elapidae (1), Lepthotyphlopidae (1) e Viperidae (2)), totalizando 33,7 % da fauna de escamados do Rio Grande do Sul. Para as duas espécies mais freqüentes de Amphisbaenidae, Amphisbaena munoai e Anops kingii foi observado um padrão unimodal de distribuição sazonal, dimorfismo sexual no comprimento rostro cloacal (CRC) (fêmeas > machos, Teste-t p < 0,001) e um ciclo reprodutivo sazonal ocorrendo na primavera e verão. Ambas as espécies apresentaram diversas categorias alimentares na composição de suas dietas, entretanto térmites (Isoptera) parecem compor um elemento base. Dados reprodutivos foram analisados para as duas espécies mais freqüentes de lagartos, Cnemidophorus lacertoides e Cercosaura schreibersii, que apresentaram reprodução tipicamente sazonal ocorrendo na primavera e verão. Em ambas as espécies, fêmeas maduras apresentaram CRC significativamente maiores que machos (Teste t; p < 0,001). Por outro lado, machos maduros de ambas as espécies apresentaram comprimento e largura da cabeça (Ancova; p < 0,001) maiores do que fêmeas. Foram capturadas 325 serpentes, sendo as mais freqüentes: Bothrops pubescens (27,69%), Philodryas patagoniensis (12,31%), Philodryas olfersii (12%) e Tantilla melanocephala (8,62%), que juntas corresponderam a 60,62% do total da amostra. Utilizando-se apenas as serpentes capturadas por PV, pode-se observar correlação significativa entre a freqüência relativa de serpentes ativas/mês e a temperatura (Anova, p < 0,001) e, de caráter inverso, foi observada correlação significativa (Anova, p < 0,001) entre a freqüência relativa de serpentes capturadas abrigadas/mês e a temperatura. Foram obtidas informações sobre a dieta de 17 espécies e anfíbios anuros (incluindo girinos) foi o item alimentar mais utilizado. O período reprodutivo foi marcadamente sazonal ocorrendo na primavera e verão. Analisando a dieta das espécies de serpentes foi observado o primeiro registro de ofiofagia para Echinanthera occipitalis (= Taeniophallus occipitalis), que ingeriu um exemplar de Tantilla melanocephala. Por ocasião dos trabalhos de campo foi redescoberta a espécies de anfíbio anuro Melanophryniscus pachyrhynus conhecida até então por apenas dois síntipos coletados no sul do Brasil a cerca de 100 anos atrás. A espécie foi redescrita e teve sua distribuição geográfica ampliada.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2015-10-20T15:14:03Z No. of bitstreams: 1 JulianaFelixDaSilva_DISSERT.pdf: 3172083 bytes, checksum: 0b4b23addc49fd9790ec430dc1ac0b32 (MD5) / Approved for entry into archive by clediane guedes (clediane@bczm.ufrn.br) on 2015-10-20T15:38:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JulianaFelixDaSilva_DISSERT.pdf: 3172083 bytes, checksum: 0b4b23addc49fd9790ec430dc1ac0b32 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-20T15:38:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JulianaFelixDaSilva_DISSERT.pdf: 3172083 bytes, checksum: 0b4b23addc49fd9790ec430dc1ac0b32 (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / Os acidentes of?dicos s?o um grave problema de sa?de p?blica. Cerca de 90 % dos casos na Am?rica Latina s?o associados a serpentes do g?nero Bothrops. Atualmente, a principal forma de tratamento dispon?vel ? a soroterapia antiveneno, que apresenta algumas desvantagens, tais como inefici?ncia quanto a efeitos locais, riscos de rea??es imunol?gicas, custo elevado e dif?cil acesso em algumas regi?es. Nesse contexto, a busca por novas alternativas para o tratamento de picadas de serpentes se faz relevante. Jatropha gossypiifolia L., esp?cie vegetal popularmente conhecida no Brasil como ?pinh?o-roxo?, ? bastante utilizada na medicina popular como antiof?dica. Portanto, o objetivo do presente estudo ? avaliar a atividade antiof?dica desta esp?cie frente ?s atividades enzim?ticas e biol?gicas do veneno da serpente Bothrops jararaca. O extrato aquoso das folhas foi preparado por decoc??o. Os estudos de inibi??o foram realizados in vitro, pr?-incubando-se quantidade fixa de veneno com diferentes quantidades do extrato por 60 min a 37?C, e in vivo, atrav?s do tratamento oral ou intraperitoneal dos animais, em diferentes doses, 60 min antes da inje??o do veneno. A atividade proteol?tica sobre a azocase?na foi eficientemente inibida, o que indica a??o inibit?ria frente metaloproteases (SVMPs) e/ou serinoproteases (SVSPs). O extrato inibiu a atividade fibrinogenol?tica, o que tamb?m foi confirmado por meio de zimografia, onde foi poss?vel visualizar que o extrato inibe preferencialmente enzimas fibrinogenol?ticas de 26 e 28 kDa. As atividades coagulante sobre o fibrinog?nio e sobre o plasma foram significativamente inibidas, sugerindo uma a??o inibit?ria sobre enzimas semelhantes ? trombina (SVTLEs), bem como sobre toxinas ativadoras de fatores da coagula??o. O extrato prolongou o tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa), o que sugere que o extrato inibe tanto SVTLEs quanto a trombina end?gena. A atividade defibrinogenante in vivo foi inibida eficientemente pelo extrato pela via oral, confirmando os resultados anteriores. A hemorragia local tamb?m foi inibida significativamente pela via oral, indicando uma a??o inibit?ria frente SVMPs hemorr?gicas. A atividade fosfolip?sica n?o foi inibida. Mesmo assim, as atividades edematog?nica e miot?xica foram eficientemente inibidas, por via oral e intraperitoneal, o que pode indicar a??o inibit?ria do extrato frente fosfolipases (PLA2) do tipo Lys49 e/ou SVMPs, ou ainda uma a??o anti-inflamat?ria contra os mediadores qu?micos end?genos. Com rela??o ao poss?vel mecanismo de a??o, observou-se que o extrato n?o apresenta atividade proteol?tica, por?m apresenta capacidade de precipitar prote?nas. Adicionalmente, o extrato apresentou significativa atividade antioxidante em diferentes modelos, o que pode justificar ao menos parcialmente a atividade antiof?dica apresentada. A atividade quelante de metais apresentada pelo extrato pode ser correlacionada ? inibi??o de SVMPs, uma vez que estas s?o enzimas dependentes de metais. A an?lise fitoqu?mica revelou a presen?a de a??cares, alcaloides, flavonoides, taninos, terpenos e/ou esteroides e prote?nas, dos quais os flavonoides podem ser apontados como compostos majorit?rios, tendo em vista o perfil cromatogr?fico obtido por cromatografia em camada delgada (CCD). Em conclus?o, os resultados demonstram que o decocto das folhas de J. gossypiifolia apresenta potencial atividade antiof?dica, inclusive atuando sobre os efeitos locais da picada, sugerindo que esta esp?cie pode ser utilizada como uma nova fonte de mol?culas bioativas contra venenos botr?picos. / Antiophidic activity from decoct of Jatropha gossypiifolia L. leaves against Bothrops jararaca venom. Snakebites are a serious worldwide public health problem. In Latin America, about 90 % of accidents are attributed to snakes from Bothrops genus. Currently, the main available treatment is the antivenom serum therapy, which has some disadvantages such as inability to neutralize local effects, risk of immunological reactions, high cost and difficult access in some regions. In this context, the search for alternative therapies to treat snakebites is relevant. Jatropha gossypiifolia L., a medicinal plant popularly known in Brazil as ?pinh?o-roxo?, is very used in folk medicine as antiophidic. So, the aim of this study is to evaluate the antiophidic properties of this species against enzymatic and biological activities from Bothrops jararaca snake venom. The aqueous leaf extract of J. gossypiifolia was prepared by decoction. The inhibition studies were performed in vitro, by pre-incubation of a fixed amount of venom with different amounts of extract from J. gossypiifolia for 60 min at 37 ?C, and in vivo, through oral or intraperitoneal treatment of animals, in different doses, 60 min before venom injection. The proteolytic activity upon azocasein was efficiently inhibited, indicating inhibitory action upon metalloproteinases (SVMPs) and/or serine proteases (SVSPs). The extract inhibited the fibrinogenolytic activity, which was also confirmed by zymography, where it was possible to observe that the extract preferentially inhibits fibrinogenolytic enzymes of 26 and 28 kDa. The coagulant activity upon fibrinogen and plasma were significantly inhibited, suggesting an inhibitory action upon thrombin-like enzymes (SVTLEs), as well as upon clotting factor activators toxins. The extract prolonged the activated partial thromboplastin time (aPTT), suggesting an inhibitory action toward not only to SVTLEs, but also against endogenous thrombin. The defibrinogenating activity in vivo was efficiently inhibited by the extract on oral route, confirming the previous results. The local hemorrhagic activity was also significantly inhibited by oral route, indicating an inhibitory action upon SVMPs. The phospholipase activity in vitro was not inhibited. Nevertheless, the edematogenic and myotoxic activities were efficiently inhibited, by oral and intraperitoneal route, which may indicate an inhibitory effect of the extract upon Lys49 phospholipase (PLA2) and/ or SVMPs, or also an anti-inflammatory action against endogenous chemical mediators. Regarding the possible action mechanism, was observed that the extract did not presented proteolytic activity, however, presented protein precipitating action. In addition, the extract showed significant antioxidant activity in different models, which could justify, at least partially, the antiophidic activity presented. The metal chelating action presented by extract could be correlated with SVMPs inhibition, once these enzymes are metal-dependent. The phytochemical analysis revealed the presence of sugars, alkaloids, flavonoids, tannins, terpenes and/or steroids and proteins, from which the flavonoids could be pointed as major compounds, based on chromatographic profile obtained by thin layer chromatography (TLC). In conclusion, the results demonstrate that the J. gossypiifolia leaves decoct present potential antiophidic activity, including action upon snakebite local effects, suggesting that this species may be used as a new source of bioactive molecules against bothropic venom.

Com o objetivo de avaliar dois tipos de sutura e três tipos de material de síntese, foram ambientadas 16 serpentes da espécie Bothropoides jararaca em um recinto em anexo ao bloco cirúrgico de ensino e pesquisa da Faculdade de Veterinária da UFRGS. Após a adaptação os animais foram submetidos à neuro-leptoanalgesia e foram feitas cinco incisões de cinco cm ao longo da serpente. Cada incisão foi suturada de maneira diferente usando as combinações aposição-mononáilon, aposição-ácido-poliglicólico, aposição-octil-2-cianoacrilato, eversão-mononáilon e eversão-ácido-poliglicólico. Foram feitas duas biópsias e a cicatrização cirúrgica foi avaliada clínica e histologicamente. Cada amostra foi analisada individualmente, recebendo escore relativo à presença de heterófilos, macrófagos, linfócitos e fibroblastos e esses resultados foram submetidos análise estatística. Além disso, foi avaliado o conjunto de reações celulares e sua evolução no tempo. Clinicamente houve diferença significativa entre os tipos de suturas,onde o padrão aposicional cicatrizou de maneira mais efetiva e desejável comparado ao de eversão, que dificultou as ecdises e fez uma cicatriz menos estética. Histologicamente não houve significância na reação aos diferentes tipos de materiais testados, porém em três semanas foi encontrada uma quantidade de linfócitos e heterófilos superior comparado às amostras em seis semanas. / Wondering how the skin of snakes healing comparing two different kinds of closure and three different kinds of materials, sixteen snakes Bothropoides jararaca were housing in a room at the Veterinary College of the Federal University of Rio Grande do Sul. After adaptation period the surgeries were performed. Under anesthesia, five incisions along the snake, five centimeters long, were made and then sutured with five different combinations: aposicion-mononylon, apocision-poliglicolic acid, aposicion-octil-2-cianoacrilate, eversion-mononylon and eversion-poliglicolic acid. Two biopsies were made, three and six weeks after surgery. The snakes were clinically checked to evaluate the evolution of healing. All the samples were individually evaluated quantitatively observing macrophages, heterophiles, lymphocyts and fibroblasts and received a score. These result were submitted to the statistic analyses. There was a clinical relevance comparing the aposicional suture over the eversion suture, wich means that the aposicional suture healed much better than the evertion suture, facilitating the ecdise and even giving much better esthetic appearance to the wound. Unlike the eversion suture, wich made the ecdise more difficult and gave to the wound a non-plastic appearance. Comparing materials there were no significant difference between them, despite the octil-2-cianoacrilate that gave to the wound a great appearance. The histology did not shown any significant difference, exception to the time of the wound, where the lymphocyts and heterophiles had a higher presence in the thirty week compared to the sixth week. In three weeks the fibloblasts were dispersed in the tissue, unlike in six weeks, they were much more organized.

INTRODUÇÃO: Desde 1930, quando o primeiro caso de sensibilização alérgica a um veneno ofídico foi descrito na literatura, os venenos de todas as principais famílias de serpentes têm sido implicados como causadores de reações alérgicas. O desenvolvimento deste tipo de hipersensibilidade tem sido descrito após recorrentes exposições aos venenos através de picadas e, presumivelmente, de repetidas inalações ou contato desses venenos com a pele ou membranas mucosas. Esta condição tem sido observada entre os profissionais que manuseiam as serpentes e/ou os seus venenos. Entretanto, pouco se conhece a respeito da prevalência dessa doença entre esses trabalhadores, seus determinantes, e natureza molecular dos alérgenos envolvidos. Os objetivos deste estudo foram avaliar a prevalência da alergia ao veneno de Bothrops jararaca, apontando os fatores preditores para o seu desenvolvimento, entre trabalhadores expostos à serpente e/ou ao seu veneno, e demonstrar o envolvimento de um mecanismo IgE-mediado neste tipo de doença ocupacional. MÉTODOS: Sessenta e sete herpetologistas de um instituto de pesquisa, expostos à serpente Bothrops jararaca e/ou ao seu veneno, foram submetidos a um questionário e a testes imunológicos, para avaliar a presença de alergia ao veneno. A sensibilização ao veneno foi determinada pela quantificação de anticorpos da classe IgG e IgE, específicos ao veneno de Bothrops jararaca, através dos testes sorológicos ImmunoCAP e ELISA. Os alérgenos foram caracterizados através de Western blotting e de ensaios de inibição do ImmunoCAP. RESULTADOS: Doze dos 67 trabalhadores reportaram sintomas alérgicos variando desde urticária, rinoconjuntivite e asma, até anafilaxia. Sete indivíduos apresentaram anticorpos IgE específicos ao veneno de Bothrops jararaca (prevalência = 10,4%). Destes, seis apresentavam sintomas clássicos de reações alérgicas IgE-mediadas, quando expostos ao veneno botrópico. A presença de anticorpos IgG específicos também foi observada nos indivíduos com sensibilização alérgica ao veneno. O nível sérico elevado de IgE total (p=0,034), o tempo de exposição ocupacional (p=0,042), o manuseio de veneno em pó (p=0,014) e, possívelmente, a história pessoal de atopia (p=0,051), se constituíram em fatores preditores associados à sensibilização. Um componente do veneno de aproximadamente 32 kDa, que apresentou intensa ligação à IgE sérica de dois trabalhadores sensibilizados, pode ser um dos alérgenos principais desse veneno. Os ensaios de inibição do ImmunoCAP sugeriram a possibilidade de reações cruzadas ente os venenos de Bothrops jararaca e Crotalus durissus durissus. CONCLUSÕES: O veneno de Bothrops jararaca pode ser considerado uma importante fonte de alérgenos responsável pelo desenvolvimento de alergia ocupacional em trabalhadores que manuseiam as serpentes e/ou os seus venenos, através de mecanismo IgE-mediado. A prevalência da sensibilização alérgica a este veneno, neste grupo de trabalhadores, é da ordem de 10,4%, e o nível sérico elevado de IgE total, o tempo de exposição à serpente ou ao seu veneno, o manuseio do veneno em pó e, possívelmente, a história pessoal de atopia, são importantes fatores preditores. / BACKGROUND: Allergic sensitization to snake venom was first reported in 1930 and since that time, venoms from the major snake families have been implicated as cause of allergic reactions. The development of hypersensitivity to snake venom has been described after recurrent exposure through bites and, presumably, through repeated inhalations or repeated contact of the venom with skin or mucous membranes. This condition has been observed in amateur and professional snake handlers. However, only limited information is available on the prevalence of the disease among those workers, their determinants and the molecular nature of these allergens. The aim of this study was to evaluate the prevalence and the predictors of snake venom allergy among workers exposed to Bothrops jararaca venom and to demonstrate the involvement of IgE-mediated mechanisms in this occupational disease. METHODS: Sixty seven workers exposed to Bothrops jararaca snakes and/or their venoms in a research institute were assessed for snake venom-related allergy using questionnaires and immunological tests. Presence of snake venom sensitization was determined by quantification of specific IgE and IgG to Bothrops jararaca venom using the UniCAP® system and ELISA. Allergens were characterized by Western blotting and ImmunoCAP inhibition assays. RESULTS: Twelve of the 67 workers experienced symptoms ranging from urticaria, rhinoconjuctivitis and asthma to anaphylaxis. Seven individuals had specific IgE antibodies to Bothrops jararaca snake venom (prevalence = 10,4%). Six of them had typical symptoms of an IgE-mediated allergic reaction when exposed to Bothrops venom. Specific IgG antibodies could also be observed in sensitized individuals. High levels of total IgE (p=0,034), exposure level (p=0,042), handling of dried venom (p=0,014) and personal history of atopy (p=0,051) could be demonstrated as predictors for sensitization. A component of approximately 32 kDa which strongly bound to specific-IgE may be the major allergen present in this venom. Cross-reactivity between Bothrops jararaca snake venom and Crotalus durissus durissus snake venom was demonstrated using ImmunoCAP inhibition. CONCLUSIONS: Bothrops jararaca snake venom can be considered a potential source of allergens which may result in occupational allergy in snake handlers though IgE-mediated mechanisms. The prevalence rate of this condition is 10,4% among these workers and the handling of dried venom, high levels of total IgE, exposure level and probably personal history of atopy are important predictors.

Com o objetivo de avaliar dois tipos de sutura e três tipos de material de síntese, foram ambientadas 16 serpentes da espécie Bothropoides jararaca em um recinto em anexo ao bloco cirúrgico de ensino e pesquisa da Faculdade de Veterinária da UFRGS. Após a adaptação os animais foram submetidos à neuro-leptoanalgesia e foram feitas cinco incisões de cinco cm ao longo da serpente. Cada incisão foi suturada de maneira diferente usando as combinações aposição-mononáilon, aposição-ácido-poliglicólico, aposição-octil-2-cianoacrilato, eversão-mononáilon e eversão-ácido-poliglicólico. Foram feitas duas biópsias e a cicatrização cirúrgica foi avaliada clínica e histologicamente. Cada amostra foi analisada individualmente, recebendo escore relativo à presença de heterófilos, macrófagos, linfócitos e fibroblastos e esses resultados foram submetidos análise estatística. Além disso, foi avaliado o conjunto de reações celulares e sua evolução no tempo. Clinicamente houve diferença significativa entre os tipos de suturas,onde o padrão aposicional cicatrizou de maneira mais efetiva e desejável comparado ao de eversão, que dificultou as ecdises e fez uma cicatriz menos estética. Histologicamente não houve significância na reação aos diferentes tipos de materiais testados, porém em três semanas foi encontrada uma quantidade de linfócitos e heterófilos superior comparado às amostras em seis semanas. / Wondering how the skin of snakes healing comparing two different kinds of closure and three different kinds of materials, sixteen snakes Bothropoides jararaca were housing in a room at the Veterinary College of the Federal University of Rio Grande do Sul. After adaptation period the surgeries were performed. Under anesthesia, five incisions along the snake, five centimeters long, were made and then sutured with five different combinations: aposicion-mononylon, apocision-poliglicolic acid, aposicion-octil-2-cianoacrilate, eversion-mononylon and eversion-poliglicolic acid. Two biopsies were made, three and six weeks after surgery. The snakes were clinically checked to evaluate the evolution of healing. All the samples were individually evaluated quantitatively observing macrophages, heterophiles, lymphocyts and fibroblasts and received a score. These result were submitted to the statistic analyses. There was a clinical relevance comparing the aposicional suture over the eversion suture, wich means that the aposicional suture healed much better than the evertion suture, facilitating the ecdise and even giving much better esthetic appearance to the wound. Unlike the eversion suture, wich made the ecdise more difficult and gave to the wound a non-plastic appearance. Comparing materials there were no significant difference between them, despite the octil-2-cianoacrilate that gave to the wound a great appearance. The histology did not shown any significant difference, exception to the time of the wound, where the lymphocyts and heterophiles had a higher presence in the thirty week compared to the sixth week. In three weeks the fibloblasts were dispersed in the tissue, unlike in six weeks, they were much more organized.

Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-04T19:45:56Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-MarceloRabello.pdf: 28475883 bytes, checksum: a9615b2d4a3b20d9263dba3af92c324c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-04T19:45:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-MarceloRabello.pdf: 28475883 bytes, checksum: a9615b2d4a3b20d9263dba3af92c324c (MD5) Previous issue date: 2012 / Este projeto pode ser resumido como uma comparação metodológica de abordagens in silico, mais precisamente de docking molecular. Foram utilizadas como alvos biológicos as fosfolipases A2 (PLA2), sendo estas um grupo de toxinas presentes abundantemente em venenos de serpentes. Foram utilizadas, como ligantes (potenciais inibidores), um total de 103 moléculas conhecidas na literatura. Um banco de dados com os ligantes e alvos foi construído, agregando-se informações sobre a atividade biológica e também suas respectivas estruturas tridimensionais. Os programas AUTODOCK, AUTODOCK VINA, GOLD, DOCK, SURFLEX e PLANTS foram utilizados para gerar os resultados de docking. O programa BINANA foi utilizado na análise das interações intermoleculares presentes nos complexos ligante-receptor, obtidos como resultados dos cálculos. Os dados gerados foram analisados com métodos multivariados, como por exemplo, a Análise de Componentes Principais (PCA) e a Análise Hierárquica de Clusters (HCA). Resíduos de aminoácidos, importantes para a estabilidade do complexo ligantereceptor, também foram identificados através de uma análise detalhada dos melhores resultados. Adicionalmente, foi reportado um artigo publicado, envolvendo PLA2s, com foco especial na molécula Quercetina como inibidor dos efeitos de veneno de serpente. Foi possível identificar os programas que apresentaram menor demanda computacional na análise comparativa de seus tempos de processamento, o que pode vir a ser muito útil em futuros estudos de docking, até mesmo com um número ainda maior de ligantes e alvos que podem ser submetidos ao procedimento de docking molecular, no intuito de aumentar o banco de dados de inibidores potenciais de PLA2s. As abordagens analíticas multivariadas utilizadas foram capazes de revelar aspectos interessantes sobre as semelhanças e diferenças entre os resultados de docking obtidos. Com a aplicação destas análises, pôde-se estabelecer uma metodologia de análise para a interpretação dos resultados nas escalas visual, numérica e gráfica, através, respectivamente, da geração das imagens para visualização molecular, das análises estatísticas (multivariadas) e da elaboração dos gráficos provenientes destas análises. Este estudo foi importante para aumentar a base de conhecimento do nosso grupo de pesquisa, e da comunidade científica como um todo, a respeito dos cálculos de modelagem molecular que envolvem os métodos de docking, e certamente serão úteis em estudos futuros com PLA2s ou outros alvos farmacológicos. / This project can be summarized as a methodological comparison of in silico approaches, more precisely between docking methods. Several phospholipase A2 (PLA2), a group of toxins abundantly present in snake venoms, were used as targets. A total number of 103 molecules were used for the definition of the ligands. It was built a database with all these ligands, adding information about their activity and also their three-dimensional structures. The programs AUTODOCK, AUTODOCK VINA, GOLD, DOCK, SURFLEX and PLANTS were used in docking calculations. The program BINANA was used to analyze the intermolecular interactions present in the ligand-receptor complexes obtained as poses from docking results. The data generated by BINANA was statistically analyzed by applying multivariate analysis methods, such as principal component analysis (PCA) and hierarchical cluster analysis (HCA). Important aminoacids residues for the stability of the complex ligandreceptor were indetified through a detailed analysis of the best results. Additionally, an article was reported, involving PLA2s, with special focus on the Quercetin molecule as an inhibitor of snake venom. In a comparative analysis of the docking calculation’s time, it was possible to identify the programs that present low computational demands. This performance analysis can be very useful in future studies of docking, even with a much larger number of ligands and targets, increasing the database of potential PLA2s inhibitors. By applying these tests, we could establish a methodological analysis for the results interpretation on visual, numerical and graphic scales, means, respectively by the generation of images for molecular visualization, statistical analysis (multivariates) and graphing from these tests. This study was important to increase the knowledge of our research group and also of the scientific community, about the molecular modeling calculations that involves docking methods, and will certainly be useful in future studies with PLA2 or other pharmacological targets.

A jararaca-ilhoa (Bothrops insularis) é uma serpente criticamente ameaçada, endêmica da Ilha da Queimada Grande (IQG), litoral sul de São Paulo. Com a sua população em declínio, foi estabelecido um programa de reprodução em cativeiro, porém o conhecimento da sua biologia reprodutiva ainda é incipiente. Até o momento considera-se essa espécie como sazonal, com período de espermatogênese e cópulas associado, ocorrendo do outono até início da primavera, porém não existem estudos a cerca da endocrinologia reprodutiva. O objetivo desse trabalho foi validar um método de avaliação hormonal não invasiva por meio das fezes e realizar o monitoramento dos metabólitos fecais de testosterona em conjunto com avaliação plasmática de testosterona. Ao longo de 36 meses foram coletadas 156 amostras de fezes e 30 amostras de sangue de oito machos cativos. As concentrações de metabólitos fecais de testosterona variaram entre 10,9 à 249,3 ng/g de fezes, enquanto as concentrações de testosterona plasmática variaram de 0,07 à 0,30 ng/mL de plasma. Não houve diferença significativa entre as concentrações plasmáticas de testosterona e de metabólitos fecais de testosterona ao longo do ano, apesar dos machos demonstrarem comportamento reprodutivo durante esse período. Os dados corroboram com outros estudos de estocagem espermática, qualidade seminal e volume gonadal, porém vão de encontro à resultados de histologia testicular. São discutidas a possibilidade da espécie ser assazonal ou desses resultados serem uma consequência das condições do cativeiro. Esse estudo contribui com a validação de um novo método de avaliação longitudinal de esteroides sexuais em B. insularis, com o conhecimento da biologia reprodutiva de serpentes tropicais e com a conservação de animais ameaçados de extinção / The golden lancehead pitviper (Bothrops insularis) is a critically endangered snake, endemic of the Queimada Grande Island, southeastern Brazil. With its declining population, a captive breeding program was established, but the knowledge of its reproductive biology is incipient. By the time this species is considered as seasonal, with spermatogenesis period and matting associated, occurring from autumn until early spring, but there are no studies about their reproductive endocrinology. The aim of this study was to validate a noninvasively hormonal evaluation method through feces and carry out the monitoring of androgens in conjunction with plasma testosterone evaluation. Over 36 months 156 stool samples and 30 blood samples were collected from eight captive males. The fecal androgen concentrations ranged from 10.9 to 249.3 ng / g of feces and the plasma testosterone concentrations ranged from 0.07 to 0.30 ng / mL of plasma. There was no significant difference between the concentrations of fecal androgens and plasma throughout the year, although the males had shown successfully reproductive behavior during this period. The data corroborate whith other studies of sperm storage, sperm quality and gonadal volume, but disagreeded of the results of testicular histology. We discuss the possibility of the species be assazonal or these results are a consequence of the captivity conditions. This study contributes to the validation of a new longitudinal evaluation method of sex steroids in B. insularis, with the knowledge of the reproductive biology of tropical snakes and the conservation of endangered animals

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-06T10:54:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Pedro F. Gonçalves Bisneto.pdf: 590268 bytes, checksum: 127fb4c1ce5ee0a96122243aa6b75a0a (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-06T10:54:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Pedro F. Gonçalves Bisneto.pdf: 590268 bytes, checksum: 127fb4c1ce5ee0a96122243aa6b75a0a (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-06T10:55:00Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Pedro F. Gonçalves Bisneto.pdf: 590268 bytes, checksum: 127fb4c1ce5ee0a96122243aa6b75a0a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-06T10:55:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Pedro F. Gonçalves Bisneto.pdf: 590268 bytes, checksum: 127fb4c1ce5ee0a96122243aa6b75a0a (MD5) Previous issue date: 2016-08-11 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The pit viper Bothrops atrox is a widely distributed and locally abundant snake in Amazonia. Given that the reproductive and feeding biology of snakes varies geographically, we aimed to characterize the natural history of individuals from the central and southwestern portions of the biome. For this, we analyzed museum-preserved specimens collected in the region between the metropolitan areas of the Brazilian cities of Manaus and Porto Velho. We took morphometric measurements and performed the analysis of gonads and digestive tracts of 109 individuals. Females attain sexual maturity with larger body sizes. Adults of the species show a pronounced sexual dimorphism in body size being females, on average, larger. The reproductive cycle seems to be synchronized with regional rainfall, which differs from that found in other portions of the biome. The species has a generalist diet with the consumption of a wide range of prey such as centipedes, frogs, lizards, snakes and mammals. This study first recorded the predation of the snake Imantodes cenchoa (Dipsadidae) by B. atrox. There is an ontogenetic shift in the diet: smaller individuals feed mainly on ectothermic prey (centipedes, frogs, lizards and snakes), and adults tend to incorporate endothermic items (mammals) to their food repertoire. / A jararaca Bothrops atrox é uma serpente de ampla distribuição e localmente abundante na Amazônia. Visto que a biologia reprodutiva e alimentar de serpentes varia geograficamente, objetivamos caracterizar a história natural de indivíduos provenientes das porções central e sudoeste do bioma. Para isso, analisamos espécimes preservados coletados na área compreendida entre as regiões metropolitanas dos municípios brasileiros de Manaus e Porto Velho. Foram aferidas medidas morfométricas e realizadas análises gonadais e do trato digestório de 109 exemplares. Fêmeas atingem a maturação sexual com tamanhos corporais maiores. Adultos da espécie apresentam marcado dimorfismo sexual em tamanho, sendo que fêmeas são, em média, maiores. O ciclo reprodutivo parece estar sincronizado com o regime de chuvas regional, o qual difere daquele encontrado em outras porções do bioma. A espécie possui dieta generalista, com a ingestão de uma ampla gama de presas tais como lacraias, anuros, lagartos, serpentes e mamíferos. Neste estudo foi registrada pela primeira vez a predação da serpente Imantodes cenchoa (Dipsadidae) por B. atrox. Há mudança ontogenética na dieta: indivíduos menores se alimentam principalmente de presas ectotérmicas (lacraias, anuros, lagartos e serpentes) e adultos tendem a incorporar itens endotérmicos (mamíferos) ao repertório alimentar.