Esta pesquisa propõe uma análise discursiva de sentidos de bilinguismo, educação bilíngue e currículo em escolas bilíngues português-inglês no sistema educacional brasileiro. Os percursos da análise se fizeram a partir de uma entrada, teoricamente orientada pela análise de discurso pecheutiana, num complexo de discursividades heterogêneas configuradas sobre o real da expansão dessas escolas, frequentemente justificado por uma demanda crescente pela aquisição da língua inglesa cada vez mais cedo. Tendo em vista esse complexo de discursividades, o corpus de pesquisa foi configurado a partir da construção de quatro arquivos: a) arquivo do discurso científico sobre bilinguismo, constituído de um levantamento das pesquisas e publicações acadêmicas sobre esse tema; b) arquivo do discurso político-educacional, constituído de documentos legislativos, normativos e curriculares; c) arquivo do discurso institucional, constituído de textos disponibilizados nos sites das escolas e na mídia jornalística/publicitária; d) arquivo do discurso profissional, constituído de entrevistas com professores e coordenadores do Ensino Fundamental de três escolas bilíngues na cidade de São Paulo. Na primeira parte da pesquisa, são analisadas a formação de conceitos, as condições de produção e a circulação de sentidos de bilinguismo e educação bilíngue nos três primeiros arquivos (científico, político-educacional e institucional). Na segunda parte da pesquisa, focaliza-se a análise discursiva de sentidos do currículo da escola bilíngue português-inglês nos dizeres do discurso profissional, considerando possibilidades de seu atravessamento pelas discursividades analisadas na primeira parte. Uma das questões iniciais que mobilizou a investigação foi assim formulada: como se constituem e se organizam os saberes sobre a(s) língua(s) nessas instituições, considerando que essa modalidade de ensino não é contemplada por uma regulamentação específica? A análise indicou que os sentidos dessa ausência funcionam diferentemente, num processo discursivo que hipotetizamos como uma tensão entre o silêncio e o dizível produzida pela (des)regulação do discurso político-educacional. Formulou-se a hipótese inicial de que os sentidos sobre o ensino de inglês na modalidade bilíngue são produzidos por um pré-construído, um já-dito, que funciona a partir de uma memória de deslegitimação do ensino da língua inglesa na educação básica brasileira. No decorrer da pesquisa, entretanto, essa hipótese foi apenas parcialmente confirmada, pois se constatou a incidência de outros sentidos nesse processo discursivo, em que ganhou destaque a representação da língua como mediação, configurando um imaginário de tensão entre o aprender em inglês e o aprender inglês. A partir da análise, concluímos que um olhar sobre o currículo como instrumento linguístico poderia constituir um caminho fértil de interpretação desses sentidos, uma tomada de posição que demandou deslocamentos teóricos na busca por possibilidades de entremeio. / This research proposes a discursive analysis of meanings of bilingualism, bilingual education and curriculum in Portuguese-English bilingual schools in the Brazilian educational system. Drawing on the materialist discourse analysis framework proposed by Michel Pêcheux in the 1970s, it examines a complex of heterogeneous discursivities shaping the real of the fast increasing number of those schools, which is often justified by a growing demand for the acquisition of the English language at an earlier age. In view of that complex of discursivities, research data comprises texts from four archives: a) scientific discourse on bilingualism, consisting of a bibliographic survey of academic research and publications on bilingualism; b) political-educational discourse, consisting of national/state language policies and curriculum guidelines; c) institutional discourse, consisting of texts available on bilingual schools websites and news/advertising media; d) professional discourse, consisting of interviews with teachers and coordinators of three bilingual schools in the city of São Paulo. The first part of the research analyzes the formation of concepts, the conditions of production and circulation of meanings of bilingualism and bilingual education in the first three archives (scientific, political-educational and institutional). The second part of the research focuses on a discursive analysis of meanings of Portuguese-English bilingual schools curricula in professional discourse, considering possibilities of its imbrications with the discourses analyzed in the first part. The main research question was formulated as follows: how is knowledge about language(s) constituted and organized in those school institutions, considering that Portuguese-English bilingual education is not regulated by law? The analysis indicates that the meanings of this lack of regulation function differently in a discursive process interpreted as a tension between the silenced and the sayable which is produced by the (de)regulation of political-educational discourse. The initial hypothesis predicted that meanings of English language teaching in bilingual education provision were produced by the preconstructed (the already said of other discourses) evoked by a social-historical memory of delegitimation of English language teaching in the Brazilian educational system. However, that hypothesis was only partially confirmed, as an incidence of other meanings was found in this discursive process, such as the representation of language as mediation, which has configured an imaginary of tension between learning in English and learning English We concluded that these meanings could be better understood if the curriculum were interpreted as a linguistic tool.

Made available in DSpace on 2017-07-21T14:53:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Heliton Diego Lau.pdf: 2253651 bytes, checksum: fcff21591beed28ee6f7308bad25eab3 (MD5) Previous issue date: 2016-04-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The studies and discussions about the community of asexual, lesbian, gay, bisexual, transvestites, transgender, queer, intersex and more – ALGBTQI+ – raise questions about the cis-heteronormativy position of/in the society, bringing discussions about the history of the (a)sexualities and identities of gender, aiming to (de)construct the imposed binarism. Through these (de)constructions, conservative sectors of the Brazilian society launch bills in order to (protect) the heteronormativity. The corpus of this paper is based on two bills. The bill 294/2005, authored by alderman Carlos Apolinário, and the bill 1672/2011, authored by congressman Eduardo Cunha. They both justify them by establishing the third Sunday of December as the “Heterosexual Pride Day”. When analyzing the discourse in both justifications, it is possible to notice how the homosexual and heterosexual identities are built in the citizenship dimension. This paper makes, through a discursive bias, a historical course of the (homo)sexualities in some periods and historical civilizations, such as: China, Egypt, Greece, Rome, Middle Ages, Modern and Post-modern Ages, as well as in the scientific and social spheres. The theoretical base of this paper is based in authors that discuss the French line of the Speech Analysis, as Courtine (2014), Charaudeau & Maingueneau (2008), Pêcheux (1993, 1995, 1999, 2006, 2012), and authors that discuss this philosophical-linguistic chain in Brazil, highlighted: Brandão (1998, 2004, 2013), Mariani (1988, 1996, 1998), Orlandi (1984, 1993, 1994, 1996a, 1996b, 1999, 2012), among others. The subject identity discussion is proposed, based on Bauman (2005), S. Hall (2000, 2006), T. Silva (2000), Woodward (2000), among others, along with the discursive bias in order to discuss the issue of the Other. The methodology used in this paper is based on the evidential paradigm of Ginzburg (1989), the qualitative research, even using quantitative data in some moments of the research, in the light of the Speech Analysis, according to Ferreira (2000). / Os estudos e discussões acerca da comunidade de assexuais, lésbicas, gays, bissexuais, travestis, transgêneros, transexuais, queer, intersexo e mais – ALGBTQI+ – levantam questionamentos a respeito do posicionamento cis-heteronormativo da/na sociedade, trazendo discussões a respeito da história das (a)sexualidades e identidades de gêneros a fim de (des)construir o binarismo imposto. Como resposta a essas (des)construções, setores conservadores da sociedade brasileira lançam projetos de lei a fim de “proteger” a heteronormatividade. O corpus deste trabalho é composto por duas justificativas de dois projetos de lei. O projeto de lei 294/2005, de autoria do vereador Carlos Apolinário, e o projeto de lei 1672/2011, do deputado federal Eduardo Cunha. O objetivo de ambos é estabelecer o terceiro domingo de dezembro como o “Dia do Orgulho Heterossexual”. Ao se analisar as sequências discursivas das justificativas de cada projeto de lei, observa-se como são construídas, através das formações discursivas, as identidades homossexuais e heterossexuais na dimensão da cidadania. Neste trabalho, é feito um percurso histórico acerca da(s) (homo)sexualidade(s) em alguns períodos e civilizações históricas, tais como: China, Egito, Grécia, Roma, Idade Média, Idade Moderna e Pós-Moderna, bem como nas esferas científicas e sociais. Para a sustentação teórica deste trabalho, mobilizaram-se autories que discutem a análise do discurso de linha francesa, como Courtine (2014), Charaudeau & Maingueneau (2008), Pêcheux (1993, 1995, 1999, 2006, 2012) e autories que discutem essa corrente filosófico-linguística no Brasil, em maior destaque: Brandão (1998, 2004, 2013), Mariani (1988, 1996, 1998), Orlandi (1984, 1993, 1994, 1996a, 1996b, 1999, 2012), entre outres. A discussão sobre a identidade do sujeito é sustentada em Bauman (2005), S. Hall (2000, 2006), T. Silva (2000), Woodward (2000), entre outres, em diálogo com o viés discursivo, a fim de situar a questão du Outre. A metodologia utilizada neste trabalho é a qualitativa, baseada no paradigma indiciário de Ginzburg (1989).

Made available in DSpace on 2017-07-25T19:30:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leticia Reis.pdf: 8581445 bytes, checksum: 82298b67980249e52bd02781fd0c08df (MD5) Previous issue date: 2014-02-05 / significant world production. The true fruits of the strawberry are dry and called achenes while the fleshy and edible portion actually it is the floral receptacle developed. This set of achene and receptacle features the non-climacteric fruit pattern ripening, characterized by not show a peak respiration and ethylene production during the ripening process and also for this fruits not being able to complete the ripening after harvesting. Due to the small size of the plant, rapid propagation and production of fruit, the strawberry became the model plant in studies of non- climacteric fruit ripening, particularly with regard to the ethylene role in this process. Fruit ripening the focused studies have revealed the existence of a family of protein receptors responsible for the plant ethylene perception. In strawberry, have been identified so far three ethylene receptors genes sequences, divided into two subfamilies (FaETR1 and FaERS1 - subfamily I and FaERS2 - subfamily II). Among these genes, based on the literature, we believe that FaETR1 gene, a member of the ethylene receptors subfamily I, can develop a greater role to the other receptors in the control of perception and ethylene signal transduction. To assess the involvement of FaETR1 ethylene receptor in the strawberry ripening and toward an understanding of the relationship between ethylene and nonclimacteric fruits ripening, we seek the silencing of this particular gene. Thus, the objective of this work was the construction of a binary plasmid structure in hairpin format (hpRNA) that induces the activation of RNA interference system (RNAi) on the translation of FaETR1 gene in ethylene receptor protein. Also, knowing the importance of an appropriate regeneration an plant transformed selection method, we seek also develop a proper in vitro regeneration protocol of Camino Real and Festival strawberries cultivar, as well as to assess the sensitivity of these plants to kanamycin (antibiotic) and glufosinate ammonium (herbicide) selective agents, whose genes are present in pCAMBIA 3301 and pCAMBIA2301 cloning vectors used in this study. / O morangueiro (Fragaria x ananassa Duch.) é uma cultura de elevado valor comercial e de expressiva produção mundial. Os frutos verdadeiros do morangueiro são secos e chamados de aquênios enquanto que a porção carnosa e comestível na verdade se trata do receptáculo floral desenvolvido. Este conjunto de aquênio e receptáculo apresenta padrão de maturação de frutos não-climatéricos, caracterizado por não apresentar um pico de respiração e produção de etileno durante o processo de maturação e também, por não serem capazes de completar a maturação após a colheita. Devido o pequeno tamanho da planta, rápida propagação e produção de frutos, o morangueiro se tornou planta modelo nos estudos sobre a maturação de frutos não-climatéricos, principalmente no que se refere ao papel do etileno neste processo.Estudos voltados à maturação de frutos revelaram a existência de uma família de receptores proteicos responsável pela percepção do etileno em plantas. Em morangueiro, foram identificadas até o momento três sequencias de genes de receptores de etileno, divididos em duas subfamílias (FaETR1 e FaERS1 – Subfamília I e FaERS2 – Subfamília II). Dentre estes genes, baseados na literatura, acreditamos que o gene FaETR1, membro da subfamília I dos receptores de etileno, possa desenvolver um papel superior aos demais no controle da percepção e transdução de sinal do etileno. No intuito de avaliar o envolvimento do receptor de etileno FaETR1 na maturação do morangueiro e visando o entendimento da relação entre etileno e maturação de frutos não-climatéricos, buscamos o silenciamento deste gene em específico. Para tanto, o objetivo deste trabalho foi a construção em plasmídeo binário de uma estrutura em formato de grampo (hpRNA) que induza a ativação do sistema de RNA de interferência (RNAi) sobre a tradução do gene FaETR1 em proteína receptora de etileno. Além disso, sabendo da importância de um apropriado método de regeneração e seleção de plantas transformadas, buscamos também desenvolver protocolo de regeneração in vitro de plantas de morangueiro das cultivares Camiño Real e Festival, bem como, avaliar a sensibilidade destas plantas aos agentes seletivos canamicina (antibiótico) e glufosinato de amônia (herbicida) cujos genes estão presentes nos vetores de clonagem pCAMBIA3301 e pCAMBIA2301 utilizados neste trabalho.

O programa federal de transferência de renda Bolsa-Família foi estudado nesta pesquisa com o objetivo de analisar a identidade local no processo de fortalecimento comunitário dos sujeitos que residem na periferia do município de São Paulo, utilizando como referência o bairro de São Miguel Paulista. Observou-se que na busca pelos direitos sociais básicos, esses sujeitos reagem a outras ações do Estado, as quais lhes negam e até mesmo silenciam a plenitude de experiências sociais e políticas no território. Neste viés, em um processo de gestão social, a renda confere condições básicas para a sobrevivência das famílias ao passo que pode sofisticar a tentativa de tutela e controle sobre as mesmas, levando-as ao silenciamento político e/ou a compactuar com a luta política dentro de limites institucionais nos quais as relações de poder encontram-se consolidadas. Para escutarmos a produção de sentidos a partir das interfaces entre o Bolsa Família e a identidade periférica em uma realidade dialética realizamos entrevistas com bolsistas. Por meio de seus discursos identificamos dispositivos cotidianos de resistência e de sociabilidade. No limite, a transferência de renda associada ao processo de pertencimento ao cotidiano da vizinhança podem impulsionar sentidos relacionados à emancipação individual e coletiva, favorecendo a construção de pontes à participação política / The federal program Bolsa Familia cash transfer was studied in this research in order to analyze the local identity in the community strengthening process of the individuals residing in the outskirts of São Paulo, using as reference the São Miguel Paulista neighborhood. It was observed that in the search for basic social rights, these guys react to other state actions, which they deny and even silence the fullness of social and political experiences in the territory. In this bias, in a social management process, income gives basic conditions for the survival of families while can sophisticate attempting to protection and control over them, leading them to the political silencing and / or condoning the political struggle within institutional boundaries in which power relations are consolidated. To listen to the production of meaning from the interfaces between the Bolsa Família and peripheral identity in a dialectic reality we conducted interviews with bolsistas. Through his speeches we identify everyday devices resistance and sociability. Ultimately, the transfer of income associated with the process of belonging to the neighborhood daily can boost meanings related to individual and collective emancipation, favoring the construction of bridges to political participation

Submitted by Noeme Timbo (noeme.timbo@metodista.br) on 2017-10-03T17:05:45Z No. of bitstreams: 1 Marcelo Moreira Ramiro.pdf: 2832334 bytes, checksum: 14920fecd7e73a1f50e964fb5bd4192b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-03T17:05:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcelo Moreira Ramiro.pdf: 2832334 bytes, checksum: 14920fecd7e73a1f50e964fb5bd4192b (MD5) Previous issue date: 2017-03-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of the present essay is to investigate how the newspaper Expositor Cristão approached, politically and ideologically during the civil-military dictatorship years, cases of violation of human rights against the Methodists. As such, this study aims at identifying and looking into precursory influences of silenced memories in the light of new revelations about the facts of that time, which were made possible in particular by the National Truth Commission. The theoretical reference seeks interaction between studies on Brazilian Protestantism and local Christian media to what concerns memory, silencing and how structures of feeling are built, making use of contributions from cultural studies. The methodological path to the objective is based on bibliographical and documentary research, besides the Discourse Analysis by the French School. This paper uses as the analysis core 146 issues of the referred newspaper published between 1968 and 1974, focusing on what was said or left implicit about the Theology College of the Methodist Church closed down in 1968, constraints on church members who were sent to prison, tortured, disappeared or killed, and ultimately the dawning of the democratic era brought in by the protestant president Ernesto Geisel in 1974. The research evidenced that the approach of protestant publications, particularly the Expositor Cristão, was in favor of the military government. Moved by the sentiment of anticommunism and religious moralistic ethics, there was support and assistance from leaders of the Methodist Church and their own newspaper so that crimes could be committed throughout the dictatorship years / Este trabalho tem o objetivo de investigar como o jornal Expositor Cristão se posicionou política e ideologicamente no período da ditadura civil-militar, tendo em vista os casos de violação de direitos humanos do regime contra metodistas. Para isto, buscou-se identificar e analisar as influências precursoras de uma memória silenciada, à luz das novas revelações sobre a época, tornadas possíveis, em especial, pela Comissão Nacional da Verdade. O referencial teórico busca o diálogo entre os estudos sobre o protestantismo brasileiro e as mídias cristãs no Brasil com abordagens em torno de memória e silenciamento e a constituição de estruturas de sentimento, valendo-se das contribuições dos Estudos Culturais. O trajeto metodológico para o alcance do objetivo toma por base pesquisas bibliográficas e documental e a Análise do Discurso da Escola Francesa. A delimitação do corpus de análise tem como amostra o referido jornal em 146 edições publicadas entre 1968 e 1974, tendo como foco os ditos e os não-ditos sobre o fechamento da Faculdade de Teologia da Igreja Metodista em 1968, repressão a membros da igreja com prisão, tortura, desaparecimento e mortes, além do início da abertura democrática com a presidência do evangélico Ernesto Geisel, em 1974. A pesquisa mostrou que o posicionamento de jornais protestantes, em particular o Expositor Cristão, foi de apoio ao regime militar. Movidos pelo sentimento do anticomunismo e pela ética moralista religiosa, houve aval e auxílio por parte de lideranças da Igreja Metodista e seu informativo para que crimes fossem cometidos durante a ditadura.

This research has the aim of understanding the meanings effects from the Jornal da Assembleia (JA) discourse a newspaper produced by Legislative Assembly of Alagoas during 2007 and 2008, the same period of Taturana operation. This operation was done by the Federal Police, that investigated the deviation of 300 million from the Legislative, which the main accused were the state legislator. The Taturana operation is taken as discursive event silenced by the Jornal da Assembleia . To analyze such discourse, the adopted theoretical reference is the discourse analysis (AD) by Pêcheux, considered as a critique discourse and language theory. The data is composed of discursive utterances taken from 16 ALE printed, but it also has some discursive sequences from others newspapers from Alagoas, such as Gazeta de Alagoas , Tribuna Independente and O Jornal , which were included to contrast the sayings presented in its evidence effect. We understand that there is no free press, because the spread of news serves to pressideological policy of the means of communication, the fragments taken from the spread were observed according to the interests involved. After the analysis, we could see that the Jornal da Assembleia discourse from 2007 to 2008 worked as an attempt to homogenize and to silence the sayings that could make fragile the meanings intended to be dominant. The silence policy shown in the way of domination interdicts the meaning and at the same time it goes beyond of the words limits . In this way, the discourse of the Jornal da Assembleia was done, and it worked to control the sayings in a space full of meanings. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / Esta pesquisa tem o intuito de compreender os efeitos de sentido provenientes do discurso do Jornal da Assembleia (JA) periódico impresso produzido pela Assembleia Legislativa de Alagoas (ALE) durante os anos 2007-2008, mesmo período de deflagração da Operação Taturana. Essa operação foi realizada pela Polícia Federal, que investigou o desvio de mais de 300 milhões do Poder Legislativo estadual, cujos principais acusados de envolvimento foram deputados estaduais. A Operação Taturana é, então, tomada como um acontecimento discursivo silenciado pelo Jornal da Assembleia. Para analisar o discurso do JA, o referencial teórico adotado é o da Análise do Discurso (AD) pecheutiana, considerada uma teoria crítica acerca da linguagem e do discurso. O corpus discursivo é composto, em sua maioria, por enunciados extraídos dos 16 jornais da ALE publicados, mas também constam sequências discursivas retiradas de outros periódicos alagoanos, como os jornais Gazeta de Alagoas, Tribuna Independente e O Jornal, os quais foram incluídos para contrastar os dizeres apresentados em seu efeito de evidência. Reconhecido o fato de não existir imprensa livre, já que a divulgação das informações atende à política editorial/ideológica dos veículos de comunicação, os recortes trazidos da imprensa foram observados conforme os interesses em jogo. A partir das análises, constatou-se que o discurso do Jornal da Assembleia no biênio 2007-2008 funcionou pela tentativa de homogeneizar dizeres e silenciar informações que pudessem fragilizar sentidos que se queriam dominantes. A política do silêncio manifestada na forma de dominação interdita sentidos e ao mesmo tempo vai além dos limites das palavras. Nesse passo caminhou o discurso do Jornal da Assembleia, cujo funcionamento apontou para tentativas de controlar dizeres num espaço que transborda significância.

Este trabalho objetiva desenvolver uma análise do funcionamento do discurso de docentes de matemática do 9° ano do ensino fundamental de escolas públicas e privadas de Maceió, materializado em textos escritos (Redação). Partindo de uma questão-temática (Como percebo a aprendizagem da matemática por parte de alunas e alunos?), a análise busca apreender como a posição sujeito docente repercute na relação das alunas com a matemática, tendo como suposto uma construção identitária gendrada do saber. A proposta é que a análise destes textos escritos aponte para as marcas discursivas sobre a visão de gênero dos sujeitos docentes de matemática. Situa-se o discurso docente sobre a aprendizagem da matemática na escola à luz dos conceitos de gênero, silenciamento discursivo e currículo oculto, respaldada nas teorias da Análise do Discurso e dos estudos de gênero. Sob um olhar de gênero, apresenta-se o percurso da análise do funcionamento discursivo, contemplando o procedimento investigativo e a análise das sequências discursivas; nestas, docentes funcionam como porta-vozes de um ideário historicamente construído pela Formação Ideológica patriarcado-capitalismo e materializada na Formação Discursiva da ciência androcêntrica que, neste estudo, corresponde ao ensino da matemática na escola. Assim funcionando, a posição de sujeito docente contribui para a manutenção de relações sociais de gênero, próprias da ordem capitalista e patriarcal.

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-12-01T14:42:08Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3030242 bytes, checksum: d145bff94d511f6d8353fbb00470328b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-01T14:42:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3030242 bytes, checksum: d145bff94d511f6d8353fbb00470328b (MD5) Previous issue date: 2015-05-08 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O silenciamento de RNA pode ser induzido em plantas como resultado da infecção por vírus, um processo denominado “silenciamento gênico induzido por vírus” (virus induced gene silencing) – VIGS. Vetores VIGS permitem de uma forma rápida e eficiente a análise funcional de genes de soja por genética reversa. A construção de um vetor de silenciamento viral para inativação de genes de soja foi baseado na modificação do genoma do DNA-A de SoCSV (Soybean chlorotic spot virus) de forma a deletar o gene da proteína do capsídeo, e incorporar sítios de enzimas de clonagem chaves que permitam a inserção de sequências para silenciamento específico de genes alvos. O vetor de silenciamento derivado do genoma de SoCSV poderá ser usado para permitir o entendimento entre as possíveis comunicações cruzadas entre a via UPR e a via de morte celular mediada por NRPs (DCD/NRP), já que a falta de conhecimento com relação aos transdutores de sinais da referida via UPR em soja tem limitado seu estudo. A via UPR (Unfolded Protein Response) é desencadeada pelo acúmulo de proteínas mal dobradas e, por sua vez, é induzida para garantir o dobramento adequado das proteínas atenuando o estresse no RE. Nos mamíferos, a via UPR muito bem caracterizada é regulada pelo chaperone molecular, BiP, e ativada por três receptores: PERK, IRE1 e ATF6. A caracterização da via UPR em Arabidopsis foi baseada em mamífero e é ativada por duas classes de receptores transmembranas do RE: bZIP28 e bZIP17 (homólogos de ATF6) e IRE homólogos, IRE1a e IRE1b. Apesar da importância do RE como uma organela chave envolvida em respostas adaptativas a estresse, a resposta ao estresse RE não tem sido caracterizada no genoma da soja. Portanto, por análise in silico, em comparação com Arabidopsis, e estudos funcionais foi gerado um painel com um completo cenário de resposta ao estresse no RE em soja. No genoma da soja foram também identificados fatores de transcrição induzidos por estresse no RE, um associado à membrana, ortólogo de AtNAC062 e um fator de transcrição ortólogo de AtNAC103. Além de genes envolvidos na via UPR, foi identificado um fator de transcrição associado à membrana do RE, ortólogo de AtNAC89, que contém um domínio NAC e up-regula vii genes associados a morte celular. Em soja foi demonstrado que o sinal de estresse no RE e estresse osmótico integra com outras repostas adaptativas, como a via de sinalização de morte celular programada mediada por DCD/NPRs, específica de planta e iniciada por GmERD15 que ativa o promotor alvo NRP. A expressão aumentada de NRP leva à indução de GmNAC81 e GmNAC30 que cooperam para ativação da expressão do gene VPE (vacuolar processing enzyme), que, por sua vez, executa o processo de morte celular programada. Ao contrário, por análise in silico mostramos que esta via de morte celular mediada por DCD/NRP também é conservada em Arabidopsis, com exceção para GmERD15, que aparententemente não possui ortólogo em Arabidopsis. Em nossa pesquisa fornecemos evidências que as respostas de estresse no RE funcionam de forma semelhante. Primeiramente uma alta conservação de estruturas primárias de soja com preditos ortólogos de Arabidopsis possuem domínios de localização e funcional comuns que podem ser associados com atividade bioquímica correta e localização subcelular. Em segundo, os dois ramos da UPR em soja foram analisados funcionalmente. Ortólogos bZIP17/28 (GmbZIP37 e GmbZIP38) e ortólogo ZIP60 (GmbZIP68) de soja possuem organização estrutural similar e assim como em Arabidopsis são induzidos por estresse no RE e o putativo substrato de GmIREs, transcrito GmbZIP68, possui sítio canônico para atividade endonuclease de IRE1 e sofre splicing sob condições de estresse no RE. A expressão de bZIP38, bZIP37 e bZIP68 suporta que a via UPR em plantas é funcionalmente conservada em soja. O amplo painel compreensivo de resposta a estresse do RE em soja gerado permite predições funcionais da sinalização de componentes de estresse no RE. Portanto, o vetor VIGS desenvolvido possibilitará um avanço na caracterização funcional dos componentes da via e possibilidade de conecções com respostas a múltiplos estresses em plantas. / The RNA silencing can be induced in plants as a result of virus infection, this process is called virus induced gene silencing – VIGS. VIGS vectors allow a fast and efficient functional analysis of soybean genes by reverse genetics. The construction of a VIGS vector for the soybean genes inactivation was based in the modification of the DNA-A of SoCSV (Soybean chlorotic spot virus) genome aiming to delete the protein gene of the capsid, and to incorporate enzyme sites of cloning keys that allow the insertion of sequences to the silencing of specific target genes. The silencing vector derived from the SoCSV genome can be used to enable a better understanding between the possible cross-communication between the UPR pathway and the pathway of cell death mediated by NRPs (DCD/NRP), since the lack of knowledge about transducers signals of the UPR via has limited its study. The UPR (Unfolded Protein Response) is triggers by the accumulation of unfolded proteins, and it is induced to guarantee the proper protein folding attenuating the stress on ER (endoplasmic reticulum). In mammals, a very well characterized UPR pathway is regulated by the molecular chaperone BiP, and it is activated by three receptors: PERK, IRE1 e ATF6. The UPR pathway characterization in Arabidopsis was based on mammals and it is activated by two classes of transmembrane receptors of ER: bZIP28 e bZIP17 (homologs of ATF6) and IRE homologs, IRE1a and IRE1b. Despite the importance of the RE as a key organelle involved in adaptative responses to stress, the ER stress response has not been characterized in the soybean genome. Therefore, by in silico analysis, in comparison with Arabidopsis and functional studies, a panel was created with a complete scenario of ER stress response in soybean. In the soybean genome were also identified transcription factors induced by stress in the ER, one of them associated to the membrane, orthologs of AtNAC062, and a transcription factor ortholog of AtNAC103. Besides the genes involved on the UPR pathway, a transcription factor associated with the ER membrane, orthologs of AtNAC89, that contains a NAC domain and up regulates genes associated to the cell death was identified. In soybean, it was demonstrated that the ER stress and osmotic ix stress-signal integrates with other adaptive responses, as the plant-specific cell death signaling pathways mediated by DCD/NPRs and initiated by GmERD15, that activates the target promoter NPR. The increased expression of NPR leads to the induction of GmNAC81 and GmNAC30 that cooperate to the activation of the expression of the VPE gene (vacuolar processing enzyme), that executes the process of programmed cell death. In a reverse approach, by in silico analysis we also examined the Arabidopsis genome for components of a previously characterized ER stress-induced cell death signaling response in soybean. With the exception of GmERD15, which apparently does not possess an Arabidopsis ortholog, the Arabidopsis genome harbors conserved GmNRP, GmNAC81, GmNAC30 and GmVPE sequences that share significant structural and sequence similarities with their soybean counterparts. In our research we showed evidences that the stress response in the ER operates in a similar fashion in both soybean and Arabidopsis. Firstly, a high conservation of primary structures of soybean with predicted Arabidopsis orthologs have functional common domains that can be associated to the biochemistral activity and subcellular localization. Secondly, both branches of UPR in soybean were analysed functionally. The bZIP17/bZI28 orthologs (GmbZIP37 and GmbZIP38) and ZIP60 ortholog (GmbZIP68) from soybean have a similar structural organization and as in Arabidopsis they are induced by stress in ER and the putative substrate of GmIREs, transcript GmbZIP68, have canonical site to endonuclease activity of IRE1 and undergoes alternatively spliced under stress conditions in ER. The expression of bZIP38, bZIP37 and bZIP68 supports that the UPR pathway in plants is functionally conserved in soybean. Our in silico analyses, along with functional data, have generated a comprehensive overview of the ER stress response in soybean as a framework for functional prediction of ER stress signaling components. Therefore, the development of VIGS vector enables an advance in the functional characterization of the pathway components and the possible connections with multiple stress responses in plants.

Submitted by Daniele Amaral (daniee_ni@hotmail.com) on 2016-10-06T19:17:32Z No. of bitstreams: 1 DissCPP.pdf: 3587784 bytes, checksum: 38e18e70b6c78d140d46b17a57600689 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-21T13:32:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissCPP.pdf: 3587784 bytes, checksum: 38e18e70b6c78d140d46b17a57600689 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-21T13:33:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissCPP.pdf: 3587784 bytes, checksum: 38e18e70b6c78d140d46b17a57600689 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-21T13:33:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissCPP.pdf: 3587784 bytes, checksum: 38e18e70b6c78d140d46b17a57600689 (MD5) Previous issue date: 2015-10-14 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Reactive oxygen species (ROS) are products naturally generated by the cell metabolism and at low levels play an important physiological role in intracellular regulation, whereas in excess can cause damage to cells. To combat this damage, cells present a complex defense mechanism including different enzymes which act as antioxidants. Among these enzymes, and especially in cells such as erythrocytes, which are exposed to high levels of molecular oxygen, the Peroxiredoxins (Prxs), stand out for the abundance and great reactivity with its substrates. In this cell type, when occurs hemolytic diseases such as sickle cell anemia and beta thalassemia, increased production of ROS and consequently oxidative damage are observed, greatly aggravating the clinical picture of patients affected by these diseases. In these diseases, the PRDX2 appears to be a major line of antioxidant defense, as it is the third most present protein in the cytosol of the erythrocyte. Therefore, this study aimed to assess the role of PRDX2 in differentiated K562 cells for the expression of erythroid characteristics, through gene silencing using shRNA_PRDX2. It was possible to obtain a 70% of the PRDX2 expression inhibition, which caused a decrease in the proliferation, cell viability and interaction, showing the importance of PRDX2 in oxidative protection on this cell type. In order to evaluate the modulation of antioxidant system in these cells, we also analyzed the pattern of gene and protein expression of all other PRDXs beyond the gene expression of other antioxidant enzymes during the process of differentiation. We found that inhibition of PRDX2 expression adversely affects the expression of PRDX5 and causes increased expression of their biological reducing agents, which increase the recycling PRDX2, compensating for their lack the cell. These data are not get described in the literature and additional analysis is needed to better understand this interaction beyond the molecular mechanisms involved in the expression of related enzymes in protection against ROS. Understanding these mechanisms seems important to work with a better insight of the pathophysiology of hemolytic diseases by identifying possible targets to assist in the management and can mitigate the effects of the disease in these patients. / Espécies reativas de oxigênio (EROs) são produtos gerados naturalmente pelo metabolismo celular e em baixos níveis fisiológicos desempenham importante papel na regulação intracelular, enquanto que em excesso podem causar diversos danos às células. Para combater esses danos, as células apresentam um complexo mecanismo de defesa incluindo diferentes enzimas que atuam como antioxidantes. Dentre estas enzimas e, principalmente em células como os eritrócitos, que são expostas a altos teores de oxigênio molecular, as Peroxirredoxinas (Prxs), se destacam pela abundância e grande reatividade com os seus substratos. Neste tipo celular, quando ocorrem doenças hemolíticas como a anemia falciforme e a beta talassemia, uma maior produção de EROs e consequentemente de danos oxidativos são observados, agravando sobremaneira o quadro clínico dos pacientes acometidos por estas doenças. Nessas doenças, a PRDX2 aparenta ser uma importante linha de defesa antioxidante, já que é a terceira proteína mais presente no citosol do eritrócito. Diante disso, esse trabalho teve como objetivo a avaliação do papel de PRDX2 em células K562 diferenciadas para a expressão de características eritróides, através do silenciamento gênico de PRDX2 utilizando shRNA. Foi possível a obtenção de uma inibição de 70% da expressão de PRDX2, a qual causou diminuição na proliferação, viabilidade e interação celular, mostrando a importância da PRDX2 na proteção oxidativa nesse tipo celular. Com o objetivo de avaliar a modulação do sistema antioxidante nestas células, analisamos também, o padrão de expressão gênica e proteica de todas as outras PRDXs além da expressão gênica de outras enzimas antioxidantes durante o processo de diferenciação. Verificamos que a inibição da expressão de PRDX2 afeta negativamente a expressão de PRDX5 e causa o aumento da expressão de seus redutores biológicos, o que aumentaria a reciclagem de PRDX2 compensando sua falta na célula. Esse dado é inédito na literatura e análises adicionais são necessárias para melhor compreender essa interação além dos mecanismos moleculares envolvidos na expressão de enzimas relacionadas na proteção contra EROS. A compreensão destes mecanismos parece importante para colaborar com o melhor entendimento da fisiopatologia de doenças hemolíticas, identificando possíveis alvos que auxiliem no manejo e que possam amenizar os efeitos da doença desses pacientes.

A comunicação de massa através do seu aparato técnico e de sua onipresença tem o poder de atribuição de significado à realidade. O jornal impresso é o agente comunicacional de maior credibilidade no Brasil. As questões ambientais são compostas pelos mais diversos temas - incluindo aqueles vinculados à agricultura - e comumente são pauta na mídia. A soja é a commodity responsável pela positividade da balança comercial brasileira e a bacia do Alto Xingu é um dos seus principais polos produtores. O objetivo da tese é verificar se os jornais impressos Folha de São Paulo e Conexão Xingu Araguaia promovem (ou não) a pluralidade da informação socioambiental no Brasil. O foco é o espaço geográfico do Alto Xingu, no que se refere aos problemas socioambientais que dali se desdobram em virtude da soja. Por meio da análise de conteúdo, constatou-se que as notícias publicadas por ambos enunciadores no ano de 2015 possuem uniformidade temática: todas elas apresentam viés estritamente econômico sobre a soja proveniente de Mato Grosso. O contexto de sua produção local (Alto Xingu) não foi noticiado. Isso é resultado de um mecanismo comunicacional metonímico, o qual projeta uma parte da realidade como sendo a totalidade. A partir do reconhecimento de parte da realidade local, verificou-se a existência de problemas socioambientais decorrentes daquela agricultura na bacia. Característica do modelo agrícola neoliberal, relações de dependência do mercado, desmatamento, alteração de precipitação e contaminação do solo, água e ar são produzidos como inexistentes, pois são silenciados por aqueles jornais. Isso é resultado da existência de filtros que moldam aquilo que é ou não publicado e pela atuação de um sistema brasileiro ruralista, formado pelo pacto entre os setores midiático, político e econômico. Esse modelo comunicacional sonega o direito à informação, comprometendo a atuação cidadã, no qual a população, por falta de conhecimento sobre a realidade, é impedida de se engajar e agir no seu ambiente rumo a uma sociedade equitativa e ambientalmente equilibrada. / Mass communication through its technical apparatus and its omnipresence has the power to signify reality. The printed newspaper is the most credible communicational agent in Brazil. Environmental issues are comprised of a wide range of subjects - including those linked to agriculture - and commonly are the media\'s agenda. Soybean is the commodity responsible for the Brazilian trade balance and the Alto Xingu basin is one of its main producing poles. The purpose of the thesis is to verify whether the printed newspapers Folha de Sao Paulo and Conexao Xingu Araguaia promote (or not) the plurality of socioenvironmental information in Brazil. The focus is the geographic space of the Alto Xingu, in relation to the socio-environmental problems that unfold because of soybean. Through the analysis of content, it was found that the news published by both enunciators in the year 2015 have thematic uniformity: all of them have a strictly economic bias about the soybean from Mato Grosso. The context of its local production (Alto Xingu) was not reported. This is the result of a metonymic communicational mechanism, which projects a part of reality as being the whole. From the recognition of part of the local reality, it was verified the existence of socio-environmental problems arising from this agriculture in the basin. Feature of the neoliberal agricultural model, relations of market dependence, deforestation, alteration of precipitation and contamination of soil, water and air are produced as nonexistent, because they are silenced by those newspapers. This is the result of the existence of filters that shape what is or not published and by the performance of a Brazilian ruralist system, formed by the pact between media, political and economic sectors. This communication model deprives the right to information, compromising citizenship, in which the population, that for lack of knowledge about reality, is prevented from engage and act in its environment towards an equitable and balanced environmentally society.