The present study evaluated the frequency of major risk factors for atherothrombosis in patients with Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) in oxygen in both gender. The sample consisted of 62 individuals, 28 men and 34 women, mean age 71.8 ± 8.7 years, all members of the Home Care Program, Hospital de Clinicas, Universidade Federal de Uberlândia. COPD was diagnosed when there were clinical signs and symptoms with changes in spirometry [(Forced Expiratory Volume in one second by forced vital capacity (FEV1/FVC) &#8804; 0.7 boncodilatador post (BD)]. All subjects received regular treatment with inhaled corticosteroids, Tiotropium and ß-2 agonist with long duration. We evaluated the following risk factors for atherothrombosis: body composition [(body weight, body mass index (BMI) and waist to hip index (WHI)], fasting plasma glucose, plasma lipid profile [(Total Cholesterol (TC), HDL-cholesterol (HDL-C) and triglycerides (TG)], smoking and tobacco intake, sedentary lifestyle, blood pressure at rest, C-reactive protein highly sensitive (hsCRP), forced expiratory volume in first second (FEV1), heart rate (HR), hypoxemia and calculation of Framingham risk score (FRS). The statistical analysis used SPSS 13.0 for Windows and BioEstat 5.0. Mean comparisons were made using T test and U test of Mann-Whitney, adopting, as significant, p values <0.05. At final evaluation, it was observed that all subjects were sedentary, the rate of type 2 diabetes mellitus (T2DM) was 11.3%, the rate of hypertension (HBP) was 41.9% and 19.4% of the subjects smoked actively. The mean HR was 82.8 ± 13.9 bpm; partial pressure of oxygen in the blood (PO2) found the average was 48.4 ± 8.8 mmHg, the mean FEV1 was 35 ± 15%, median hsCRP was found to be 6.5 ± 13.6 mg / l. The average weight (kg) was 59, 3 ± 15.3, BMI 24.4 ± 5.5 and ICQ 1.0 ± 0.1. The ERF was below average in this population, probably by correcting hypoxemia and oxygen provided by the appropriate treatment of COPD . The elevated serum levels of TG, TC, LDL-C and fasting glucose, and presence of high levels of blood pressure and smoking were equally distributed in both gender. Serum HDL-C were significantly lower in men. Variables such as hsCRP, FC, and PO2 were also equally distributed between men and women, except for the FEV1, lower in men. Men had higher ERF (higher risk for MI or death in 10 years) and low HDL-C in men contributed decisively to this finding. FEV1 reduced CRP levels and hypoxemia characteristics were found across the sample, and these items are included in the risk factors for atherothrombosis. / O presente estudo investigou a frequência dos principais fatores de risco para aterotrombose em pacientes com Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica (DPOC) em oxigenoterapia em ambos os sexos. A amostra foi constituída por 62 indivíduos, 28 homens e 34 mulheres, com idade média de 71,8 ± 8,7 anos, todos integrantes do Programa de Assistência Domiciliar do Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia. A DPOC foi diagnosticada quando havia sinais e sintomas clínicos com alteração na espirometria [(Volume Expiratório Forçado no primeiro segundo pela Capacidade Vital Forçada (VEF1/CVF) &#8804; 0.7 pós broncodilatador (BD)]. Todos os indivíduos recebiam tratamento regular com corticóide inalatório, Tiotrópio e ß-2 agonista de longa duração. Foram avaliados os seguintes fatores de risco para aterotrombose: composição corporal [(peso corporal, Índice de Massa Corpórea (IMC) e Índice Cintura Quadril (ICQ)], glicemia de jejum, perfil lipídico plasmático [(Colesterol Total (CT), HDL-Colesterol (HDL-C) e triglicérides (TG)], tabagismo e carga tabágica, sedentarismo, pressão arterial sistêmica de repouso, Proteína C reativa ultra-sensível (PCRus), volume expiratório forçado no primeiro segundo (VEF1), frequência cardíaca de repouso (FC), hipoxemia e cálculo do Escore de Risco de Framingham (ERF). Para análise estatística foram utilizados os programas SPSS 13.0 for Windows e BioEstat 5.0. Foram feitas comparações de médias utilizando-se o teste T e o teste U de Mann-Whitney, adotando-se, como significantes, valores de p < 0,05. Ao final da avaliação foi observado que todos os indivíduos eram sedentários, a taxa de diabete melito tipo 2 (DM2) foi 11,3%, a taxa de Hipertensão Arterial Sistêmica (HAS) foi 41,9% e 19,4% dos indivíduos fumavam ativamente. A FC média foi 82,8 ± 13,9 bpm; a pressão parcial de oxigênio no sangue (PO2) média encontrada era 48,4 ± 8,8 mmHg; o VEF1 médio foi 35 ± 15%; a mediana do PCRus encontrada foi 6,5 ± 13,6 mg/l. A média de peso (kg) foi 59,3 ± 15,3 com IMC de 24,4 ± 5,5 e ICQ de 1,0 ± 0,1. O ERF em média foi baixo na população estudada, provavelmente por correção da hipoxemia proporcionada pela oxigenoterapia e pelo adequado tratamento da DPOC. Os valores séricos elevados de TG, CT, LDL-C e glicose de jejum, e presença de níveis altos da pressão arterial sistêmica e tabagismo estavam igualmente distribuídos em ambos os sexos. Níveis séricos de HDL-C foram significantemente mais baixos no homem. As variáveis como PCRus, FC e PO2 também estavam igualmente distribuídas entre homens e mulheres, exceto quanto ao VEF1, mais baixo nos homens. Os homens apresentaram ERF mais elevado (maior risco para IAM ou morte em 10 anos) e a redução do HDL-C em homens contribuiu de forma determinante para este achado. O VEF1 reduzido, PCR aumentada e hipoxemia foram características encontradas em toda a amostra estudada e estes itens estão incluídos nos fatores de risco para aterotrombose. / Mestre em Ciências da Saúde

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000385077-Texto+Completo-0.pdf: 420922 bytes, checksum: 0e0a5b00bb03f3c41dbc7f262cf35a36 (MD5) Previous issue date: 2006 / Introduction: Venous thromboembolism (VTE) is a multigenic and multifactor disease and main clinical presentations include deep venous thrombosis and pulmonary thromboembolism. More than 60% of VTE cases are related to genetic predisposition and hyperhomocysteinemia is an established risk factor for VTE. Methilenetetrahydrofolate redutase (MTHFR) is a key enzyme in the homocysteine (Hcy) and folate metabolism. It catalyses the reduction of 5,10-metilenethetrahydrofolate to 5-metilthetrahydrofolate, a derivative form of folate which acts as a co-factor for remethylation of homocysteine to methyonine. A C ! T base transition at the nucleotide 677 of the MTHFR gene results in an alanine to valine substitution, generating a thermolabile variant of MTHFR. This thermolabile variant presents a decreased enzymatic activity, resulting in elevated plasma homocysteine levels. Materials and Methods: We studied 70 patients with thromboembolic disease (case group) and 74 individuals with no history of thromboembolism (control group). C677T MTHFR polymorphism was analyzed by polymerase chain reaction, followed by HinfI restriction enzyme digestion (PCR-RFLP).Results: T allele frequency was 46. 0% in patients and 38. 0% in controls (P=0. 92; OR 0. 72; 95%CI=0. 45-1. 15). MTHFR genotypes distribution for case and control groups, respectively, was: 40. 0% and 41. 9% normal homozygous (CC) (P=0. 87; OR 0. 92; 95% CI=0. 47-1. 79); 28. 3% and 40. 5% heterozygous (CT) (P=0. 16; OR 0. 58; 95%CI=0. 29-1. 17); 31. 4% and 17. 6% mutant homozygous (TT) (P=0. 08; OR 2. 15; 95% CI=0. 98-4. 70). Discussion and Conclusions: frequencies of C and T alleles were similar in both groups; presence of T allele did not represent a higher risk for TVE. The higher prevalence of the TT genotype in case group, although not statistically significant, suggests an association between the MTHFR C677T polymorphism and a higher risk for thromboembolic disease. The results presented herein represent the first report on the frequency of this polymorphism in the study population, since no data was available in the literature. These results are also a contribution for the understanding of the relationship between the MTHFR C677T polymorphism and VTE. / Introdução: O tromboembolismo venoso (TEV) tem como manifestações clínicas a trombose venosa profunda e o tromboembolismo pulmonar. Trata-se de uma doença multigênica e multifatorial. Mais de 60% dos casos estão relacionados com predisposição genética e a hiperhomocisteinemia é considerada um fator de risco estabelecido. A enzima metilenotetraidrofolato redutase (MTHFR) está envolvida no metabolismo da homocisteína (Hcy) e do ácido fólico. Esta enzima catalisa a redução do 5,10-metilenotetraidrofolato em 5-metiltetraidrofolato, derivado do ácido fólico que atua como co-fator para remetilação da homocisteína em metionina. A transição de uma citosina para uma timina no nucleotídeo 677 do gene da MTHFR resulta na substituição de uma alanina por uma valina, gerando uma variante termolábil da MTHFR. Esta variante termolábil apresenta uma atividade enzimática diminuída, o que resulta em um aumento nos níveis plasmáticos de Hcy. Materiais e Métodos: Foram avaliados 70 indivíduos com episódio de tromboembolismo venoso (grupo caso) e 74 indivíduos sem histórico de doença tromboembólica (grupo controle). O genótipo da MTHFR foi determinado por reação em cadeia da polimerase, seguida de digestão enzimática com a enzima HinfI (PCR-RFLP).Resultados: A freqüência do alelo T foi 46,0% entre os pacientes e 38,0% entre os controles (P=0,92; OR 0,72; 95%CI=0,45-1,15). O genótipo CC (homozigoto normal) foi encontrado em 40,0% dos pacientes e 41,9% dos controles (P=0,87; OR 0,92; 95%CI=0,47-1,79). O genótipo CT estava presente em 28,3% dos casos e 40,5% dos controles (P=0,16; OR 0,58; 95%CI=0,29-1,17). Os homozigotos para a variante termolábil da enzima (genótipo TT) representaram 31,4% dos indivíduos do grupo caso e 17,6% dos indivíduos do grupo controle (P=0,08; OR 2,15; 95%CI=0,98-4,70). Discussão e Conclusões: A freqüência dos alelos C e T foi semelhante entre os grupos estudados e a presença do alelo T não representou aumento no risco para TEV. Entre os genótipos, não houve diferença estatisticamente significativa entre os indivíduos com e sem histórico de trombose. No entanto, o genótipo TT foi mais freqüente no grupo caso que no grupo controle, indicando uma tendência de associação entre o genótipo TT da MTHFR e o desenvolvimento de doenças tromboembólicas. Estes resultados representam o primeiro relato indicativo da freqüência deste polimorfismo na população da região estudada, uma vez que não foram encontrados dados na literatura sobre estas freqüências, contribuindo para a pesquisa da relação entre este polimorfismo e o TEV.

Base teórica: A obesidade, especialmente a de tronco, está associada com um aumento do risco de doenças cardiovasculares; embora seja controverso se esta associação se deva a outros fatores de risco. Conseqüências conhecidas do sobrepeso, como hipertensão, dislipidemia e diabete, explicam apenas de parte do risco decorrente da obesidade. Um número crescente de evidências sugere que a associação entre obesidade e fatores hemostáticos possa se constituir em um mecanismo adicional pelo qual obesidade confere risco cardiovascular. Nesta tese analisou-se a associação da obesidade, aferida pelo índice de massa corporal (IMC), distribuição de gordura, aferida pela razão cintura quadril (C/Q) com fatores hemostáticos. Métodos: Estudou-se 3230 indivíduos (55% mulheres) com média de 54 anos de idade sem história de doença cardiovascular arrolados no quinto ciclo do Estudo dos Descendentes de Framingham. Amostras de sangue emjejum foram coletadas entre 8 e 9 horas da manhã para a determinação de fibrinogênio, fator VII, fator de von Willebrand (vW), fator ativador do plasminogêriio (tPA), inibidor do ativador do plasminogênio (PAI-I) e viscosidade sangüínea, além de dos níveis de lipídeos e glicose. Resultados: Fibrinogênio, fator VII, fator de von Willebrand, tPA e PAI-l associaram-se com IMC tanto em homens quanto em mulheres (p=0,02 para fator de vW e p<O,OOOI para os demais). A viscosidade plasmática associou-se com IMC em mulheres (p<O,OOOI), mas não em homens (P=O,14). Fibrinogênio, fator VII, fator de von Willebrand, tPA, PAI-1 e viscosidade plasmática associaram-se com W/C tanto em homens quanto em mulheres (p=0,0005 em homens e p=0,01 em mulheres para a viscosidade plasmática e p<O,OOOI para os demais). Todas as associações verificadas para fibrinogênio, fator VII, tPA e PAI-I persistiram após regressão linear múltipl~ controlando-se para as covariáveis idade, tabagismo, uso de antihipertensivos, pressão arterial sistólica, colesterol total e HDL, triglicerídeos e glicose. As associações para o fator de vW permaneceram para o C/Q em homens e para IMC em mulheres. As associações para a viscosidade sangüínea tanto para IMC quanto C/Q persistiram em mulheres mas não em homens. Conclusão: O sobrepeso e o acúmulo de gordura abdominal estão fortemente associados com fatores hemostáticos. Estas associações são independentes de idade, tabagismo e fatores de risco decorrentes da obesidade. Como a associação entre obesidade e doenças vasculares não pode ser completamente explicada por fatores de risco tradicionais, alterações da hemostasia como aumento de fibrinogênio e fatores de coagulação, juntamente com redução do potencial fibrinolítico poderiam se constituir em mecanismos adicionais para explicar o excesso de eventos cardiovasculares em indivíduos obesos. / Background: Obesity, specially truncaI obesity, has been associated with an increased risk for cardiovascuIar disease, aIthough the mechanism ofthe risk has not been fully explained. The consequences of heavy weight, such as hypertension, hyperlipidimia and diabetes, account only for part of the risk attributed to obesity. Since thrombosis is a criticaI component of cardiovascular events, we determined the relationship between obesity, as assessed by body mass index (BMI), fat distribution as assessed by waist-to-hip ratio (W/H) and hemostatic factors. Methods: We studied 3230subjects (55% females) of average age of 54 years without history of cardiovascular disease enrolled in cycle 5 of the Framingham Offspring Study. Fasting bIood samples were obtained between 8-9 am for determination of fibrinogen, plasminogen activator inhibitor (PAI-I) antigen, tissue pIasminogen activator (tPA) antigen, von Willebrand (vW) factor, factor VII antigen and plasma viscosity, as well as lipid and glucose leveIs. Results: Fibrinogen, factor VII, von Willebrand factor, tPA and PAI-1 were associated with body mass index in both men and women.(p<O.OOOI for all except vWfactor in men, p=O.02). Plasma viscosity was associated with body mass index in women (p<O.OOOI) but not in men (p=O.I4). Fibrinogen, viscosity, factor VII, von Willebrand factor, tPA and PAI-1 were associated with waist-to-hip ratio in both men and women (p<O.OOOI for all, except for viscosity, p=O.OOS in men and p=O.OI in women). All the associations found for fibrinogen, PAI-I, tPA, and factor VII persisted afier multiple linear regression, controlling for the covariates of age, smoking, total and HDL cholesterol, triglycerides, blood pressure and glucose level. The associations ofwW fador persisted significant for BMI in women but not for men and for WIH in men but not in women. The association between viscosity and BMI or WIH persisted in women but not in men. Conclusion: Heavy weight and abdominal accumulation of fat are strongly associated with hemostatic factors. These associations are independent of age, smoking and cardiovascuIar risk factors linked to obesity. Since the link between vascular disease and obesity cannot be fully expIained by traditional risk factors, a hypercoaguIabIe state could be one of the mechanisms Ieading to an excess of cardiovascuIar events in obese individuals.

Embora pacientes em terapia dupla antiplaquetária, composta de aspirina e um antagonista do receptor purinérgico P2Y12, tenham melhor prognóstico, eles ainda sofrem eventos trombóticos. Frequentemente, relaciona-se o nível de inibição plaquetária destes pacientes à ineficácia do tratamento. A reatividade plaquetária destes pacientes é uma função do nível do bloqueio do receptor P2Y12 e dos níveis de óxido nítrico e prostaciclina, importantes mediadores endoteliais, os quais agem em sinergia tripla aumentando o nível dos nucleotídeos cíclicos intraplaquetários mantendo a plaqueta em estado quiescente. Pacientes com disfunção endotelial têm menor disponibilidade destes mediadores e, consequentemente, menor inibição plaquetária in vivo. Propõe-se uma nova estratégia terapêutica composta de um inibidor do receptor purinérgico P2Y12, um ativador da enzima guanilato ciclase e um inibidor da fosfodiesterase, visando aumento dos nucleotídeos cíclicos, resultando em um forte efeito antiplaquetário localizado e tendo aplicação direta à pacientes com disfunção endotelial. / Disorders on the cardiovascular (CV) system are responsible for 31% of deaths worldwide. When inappropriately activated, platelets can cause myocardial infarction and stroke. Dual anti-platelet therapy (DAPT), composed of acetylsalicylic acid and a P2Y12 receptor blocker (clopidogrel, prasugrel, etc) is recommended for the prevention of recurrent CV events. Whilst DAPT is associated with an improvement in patient outcomes, thrombotic events do still occur. Platelet reactivity of patients under DAPT is a function of the level of P2Y12 receptor blockade and the levels of nitric oxide (NO) and prostacyclin (PGI2), two important endothelium-derived autacoids. Therefore, a new antithrombotic therapy is proposed using soluble guanylate cyclase (sGC) allosteric modulators independent of NO and phosphodiesterase (PDE) inhibitors. Based on the results observed, the combination of a sGC activator and a PDE inhibitor given at low doses, in the presence of P2Y12 receptor blocker, could produce enhanced and localized platelet inhibition.

Base teórica: A obesidade, especialmente a de tronco, está associada com um aumento do risco de doenças cardiovasculares; embora seja controverso se esta associação se deva a outros fatores de risco. Conseqüências conhecidas do sobrepeso, como hipertensão, dislipidemia e diabete, explicam apenas de parte do risco decorrente da obesidade. Um número crescente de evidências sugere que a associação entre obesidade e fatores hemostáticos possa se constituir em um mecanismo adicional pelo qual obesidade confere risco cardiovascular. Nesta tese analisou-se a associação da obesidade, aferida pelo índice de massa corporal (IMC), distribuição de gordura, aferida pela razão cintura quadril (C/Q) com fatores hemostáticos. Métodos: Estudou-se 3230 indivíduos (55% mulheres) com média de 54 anos de idade sem história de doença cardiovascular arrolados no quinto ciclo do Estudo dos Descendentes de Framingham. Amostras de sangue emjejum foram coletadas entre 8 e 9 horas da manhã para a determinação de fibrinogênio, fator VII, fator de von Willebrand (vW), fator ativador do plasminogêriio (tPA), inibidor do ativador do plasminogênio (PAI-I) e viscosidade sangüínea, além de dos níveis de lipídeos e glicose. Resultados: Fibrinogênio, fator VII, fator de von Willebrand, tPA e PAI-l associaram-se com IMC tanto em homens quanto em mulheres (p=0,02 para fator de vW e p<O,OOOI para os demais). A viscosidade plasmática associou-se com IMC em mulheres (p<O,OOOI), mas não em homens (P=O,14). Fibrinogênio, fator VII, fator de von Willebrand, tPA, PAI-1 e viscosidade plasmática associaram-se com W/C tanto em homens quanto em mulheres (p=0,0005 em homens e p=0,01 em mulheres para a viscosidade plasmática e p<O,OOOI para os demais). Todas as associações verificadas para fibrinogênio, fator VII, tPA e PAI-I persistiram após regressão linear múltipl~ controlando-se para as covariáveis idade, tabagismo, uso de antihipertensivos, pressão arterial sistólica, colesterol total e HDL, triglicerídeos e glicose. As associações para o fator de vW permaneceram para o C/Q em homens e para IMC em mulheres. As associações para a viscosidade sangüínea tanto para IMC quanto C/Q persistiram em mulheres mas não em homens. Conclusão: O sobrepeso e o acúmulo de gordura abdominal estão fortemente associados com fatores hemostáticos. Estas associações são independentes de idade, tabagismo e fatores de risco decorrentes da obesidade. Como a associação entre obesidade e doenças vasculares não pode ser completamente explicada por fatores de risco tradicionais, alterações da hemostasia como aumento de fibrinogênio e fatores de coagulação, juntamente com redução do potencial fibrinolítico poderiam se constituir em mecanismos adicionais para explicar o excesso de eventos cardiovasculares em indivíduos obesos. / Background: Obesity, specially truncaI obesity, has been associated with an increased risk for cardiovascuIar disease, aIthough the mechanism ofthe risk has not been fully explained. The consequences of heavy weight, such as hypertension, hyperlipidimia and diabetes, account only for part of the risk attributed to obesity. Since thrombosis is a criticaI component of cardiovascular events, we determined the relationship between obesity, as assessed by body mass index (BMI), fat distribution as assessed by waist-to-hip ratio (W/H) and hemostatic factors. Methods: We studied 3230subjects (55% females) of average age of 54 years without history of cardiovascular disease enrolled in cycle 5 of the Framingham Offspring Study. Fasting bIood samples were obtained between 8-9 am for determination of fibrinogen, plasminogen activator inhibitor (PAI-I) antigen, tissue pIasminogen activator (tPA) antigen, von Willebrand (vW) factor, factor VII antigen and plasma viscosity, as well as lipid and glucose leveIs. Results: Fibrinogen, factor VII, von Willebrand factor, tPA and PAI-1 were associated with body mass index in both men and women.(p<O.OOOI for all except vWfactor in men, p=O.02). Plasma viscosity was associated with body mass index in women (p<O.OOOI) but not in men (p=O.I4). Fibrinogen, viscosity, factor VII, von Willebrand factor, tPA and PAI-1 were associated with waist-to-hip ratio in both men and women (p<O.OOOI for all, except for viscosity, p=O.OOS in men and p=O.OI in women). All the associations found for fibrinogen, PAI-I, tPA, and factor VII persisted afier multiple linear regression, controlling for the covariates of age, smoking, total and HDL cholesterol, triglycerides, blood pressure and glucose level. The associations ofwW fador persisted significant for BMI in women but not for men and for WIH in men but not in women. The association between viscosity and BMI or WIH persisted in women but not in men. Conclusion: Heavy weight and abdominal accumulation of fat are strongly associated with hemostatic factors. These associations are independent of age, smoking and cardiovascuIar risk factors linked to obesity. Since the link between vascular disease and obesity cannot be fully expIained by traditional risk factors, a hypercoaguIabIe state could be one of the mechanisms Ieading to an excess of cardiovascuIar events in obese individuals.

Resumo não disponível.

Orientador: Cláudio Chrysóstomo Werneck / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T09:01:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Machado_Denise_M.pdf: 1404386 bytes, checksum: e811cae8e94f35d5b473fe2881261fd8 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Nos últimos anos, o principal objetivo de nosso laboratório é esclarecer a participação da GlicoProteína Associada a Microfibrila-1 (MAGP-1) na formação de trombos no modelo de trombose arterial fotoquímica. Dados indicam que a MAGP-1 não interage diretamente com as plaquetas, importante componente na trombose arterial, mas que, provavelmente, a MAGP-1 esteja interagindo com uma molécula que tenha participação neste processo. Neste sentido, a interação da MAGP-1 com moléculas importantes na formação do trombo foi estudada. A MAGP-1 tem a capacidade de interagir com o fator de von Willebrand, bem como com fibrinogênio e fibronectina. Além disto, foi verificado que a injeção da MAGP-1 recombinante em camundongos deficientes em MAGP-1 é capaz de reestabelecer o tempo normal de formação de trombos nestes animais. Considerando a ausência da MAGP-1 e seu efeito na formação de trombos, foi questionado se a morfologia dos trombos obtidos em camundongos deficientes em MAGP-1 era diferente dos trombos obtidos em camundongos selvagens. Dados iniciais sugeriam que os trombos de camundongos deficientes em MAGP-1 apresentavam ultraestrutura diferente, onde um número maior de plaquetas apresentavam aparentemente, os seus grânulos e corpos densos intactos, sugerindo uma ativação ineficiente na ausência de MAGP-1. No presente trabalho, além de análise ultraestrutural mais detalhada, foram feitos estudos para determinar qual a região da MAGP-1 é responsável pela atividade trombogênica. Neste sentido, proteínas mutadas, truncadas e peptídeos derivados da MAGP-1 foram obtidos e então injetados nos camundongos selvagens e deficientes em MAGP-1. Como resultados, pudemos observar que os trombos dos camundongos selvagens bem como dos camundongos deficientes em MAGP-1 apresentam basicamente a mesma morfologia, levando em consideração as técnicas utilizadas, microscopia eletrônica de transmissão e varredura. Em relação ao mapeamento dos domínios, quando utilizada a molécula inteira, seja de camundongo, seja bovina, o tempo normal de oclusão foi reestabelecido. A injeção da forma truncada da região carboxiterminal foi suficiente para obter este mesmo resultado que está principalmente relacionado a um peptídeo também determinado. O mecanismo pelo qual este peptídeo atua normalizando o tempo de oclusão normal ainda não é conhecido e será objeto de estudos futuros / Abstract: In the last years, the main purpose of our laboratory has been to clarify the participation of the Microfibril-Associated GlycoProtein-1 (MAGP-1) in forming thrombus in photochemically-induced artery thrombosis model. It was considered that MAGP-1 does not interact directly with platelets, important component in artery thrombosis and probably MAGP-1 is interacting with a molecule which has participation in this process. In this sense, the interaction of the MAGP-1 with important molecules in the thrombus formation was studied. The MAGP-1 has the ability to interact with von Willebrand factor, as well as with fibrinogen and fibronectin. In addition, it was verified that the injection of recombinant MAGP-1 in MAGP-1-deficient mice was able to restores normal time of thrombus formation in these animals. Considering the MAGP-1 absence and its effect on the thrombi formation, it was questioned whether thrombi morphology obtained from MAGP-1-deficient mice was different from thrombi obtained from wild-type mice. Initial data suggested that the thrombi from MAGP-1-deficient mice had different structure, where platelets apparently showed their intact granules and dense bodies, suggesting an inefficient activation in the MAGP-1 absence. In this work, besides the ultra-structural analysis, more detailed studies have been made to determine which region of the MAGP-1 is responsible for the thrombogenic activity. In this sense, truncated proteins, mutated proteins and peptides, were obtained and then injected into MAGP-1-deficient mice to verify their activities. As result, we noticed that the thrombi have similar structure taking into consideration used techniques, scanning electron microscopy and transmission electron microscopy. Furthermore, in relation to MAGP-1 mapping domains studies when we inject recombinant full-length molecule either mice or bovine, the normal time occlusion was restored. The injection of carboxy-terminal region was enough to get this same result what is mainly related to an also determined peptide. Mechanisms involved in this process are unknown and will be our aim in the future studies / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Joyce Maria Anichino-Baizzacchi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T00:05:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alessio_AlineMorandi_D.pdf: 8973520 bytes, checksum: 3a7a6ff893220f5bdd3d1d52da276f91 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: As células endoteliais participam da hemostasia com efeitos pró e antitrombóticos, que podem ser estimulados por uma lesão endotelial. A presença de células endoteliais na circulação pode ser considerada um novo marcador de integridade vascular, como já descrito em várias patologias tais como: doenças cardiovasculares, doenças infecciosas, doenças imunes, transplantes, anemia falciforme. Os objetivos do nosso estudo foram: padronizar a identificação e quantificação das células endoteliais circulantes (CECs) e das células endoteliais progenitoras (CEPs) em um grupo de pacientes com trombose venosa profunda (TVP) ao diagnóstico (aguda, 1ª coleta) e após no mínimo 6 meses (2ª coleta), em um grupo de TVP crônica e em um grupo controle; padronizar um modelo animal de TVP induzida por lesão endotelial para avaliar as CECs e CEPs no sangue periférico e no trombo venoso. O grupo de TVP aguda foi composto por 9 pacientes [F: 7; M: 2; 45 anos (26 - 54 anos)], sendo recrutados 6 indivíduos para uma 2ª coleta [F: 5; M: 1; 47,5 anos (27 - 55 anos)], no grupo de TVP crônica foram incluídos 10 pacientes [F: 6; M: 4; 44,5 anos (28 - 56 anos)] e no grupo controle 11 voluntários [F: 9; M: 2; 29 anos (21 - 52 anos)]. A identificação das CECs e CEPs no sangue periférico foi realizada por citometria de fluxo. No modelo animal, a TVP foi induzida por lesão endotelial com uma solução de FeCl3 a 15%. Após a indução da TVP as CECs e CEPs foram avaliadas no sangue periférico nos tempos: 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 24 horas, 48 horas e 72 horas. O trombo venoso formado na veia cava inferior (VCI) foi avaliado pela coloração de Verhoff van Gienson e a presença de CECs e CEPs por imunofluorescência. Houve uma diferença estatística no número das CECs (P=0.001, CD31+CD144+CD45dimCD133-; P<0.001, CD31+CD146+CD45dimCD133-; P=0.002, CD31+VEGFR2+CD45dimCD133-) entre os grupos estudados, com um aumento importante nos pacientes com TVP aguda. Os grupos de TVP crônica e TVP 2ª coleta mostraram um aumento significativo de CECs em relação aos controles. Não houve diferença estatística no número das CEPs (CD34+VEGFR2+CD45dimCD133-) entre os grupos estudados, porém observou-se um aumento no grupo de TVP aguda. No modelo animal, a oclusão total da VCI foi verificada entre 15 minutos e 1 hora. Após 24 horas ocorreu uma diminuição progressiva da área do trombo formado [85,4% (24h); 65,4% (48h); 51,3% (72h)], e não foram observadas CECs e CEPs no mesmo. No sangue periférico, no tempo de 48 horas houve um aumento importante de CECs e CEPs quando comparado com os outros tempos estudados (P=0.001, Sca1-VEGFR2+CD45dim; P=0.004, CD34-VEGFR2+CD45dim; P<0.001,Sca1+VEGFR2+CD45dim; P<0.001, CD34+VEGFR2+CD45dim). Os resultados observados em camundongos e humanos sugerem que as CEPs podem ser recrutadas da medula óssea para a circulação, participando do processo de reparo endotelial. O aumento de CECs na fase em que se inicia o processo de recanalização no modelo animal, sugere que apesar da lesão endotelial inicial, as mesmas somente são liberadas quando o fluxo começa a ser restabelecido. Neste estudo concluímos que as CECs podem constituir um marcador de dano vascular. / Abstract: Endothelial cells participate in hemostasia and have pro and anti -thrombotic effects which can be stimulated by an endothelial lesion. The presence of endothelial cells in circulation can be considered a novel marker of vascular integrity, as described in several pathologies, such as: cardiovascular disease, infectious disease, immune diseases, transplants, and sickle cell anemia. The aims of our study were to: standardize the identification and quantification of circulating endothelial cells (CECs) and progenitor endothelial cells (EPCs) in a group of patients with Deep Vein Thrombosis (DVT) at diagnosis (acute, 1st collection) and after a minimum of six months (2nd collection), in a group with chronic DVT and in a control group; standardize an animal model with DVT induced by endothelial lesion in order to evaluate CECs and EPCs in peripheral blood and in venous thrombosis. The group of DVT was composed of 9 patients [F: 7; M: 2; 45 years old (y.o.) (26 - 54 y.o.)], of which six individuals were recruited for the 2nd collection [F: 5; M: 1; 47.5 y.o. (27 - 55 y.o.)]; in the chronic DVT group 10 patients were included [F: 6; M: 4; 44.5 y.o. (28 - 56 y.o.)]; and in the control group 11 volunteers were included [F: 9; M: 2; 29 y.o. (21 - 52 y.o.)]. The identification of CECs and EPCs in peripheral blood was carried out by flow cytometry. DVT was induced in the animal model by endothelial lesion using a FeCl3 solution at 15%. After DVT induction, CECs and EPCs were evaluated in peripheral blood at: 15 minutes, 30 minutes, 45 minutes, 1 hour, 24 hours, 48 hours and 72 hours. The venous thrombus formed in the inferior cava vein (ICV) was evaluated using Verhoff van Gienson stain and the presence of CECs and EPCs was evaluated using immunofluorescence. There was a statistical difference in the number of CECs (P=0.001, CD31+CD144+CD45dimCD133-; P<0.001, CD31+CD146+CD45dimCD133-; P=0.002, CD31+VEGFR2+CD45dimCD133-) between the groups studied, with a significant increase in acute DVT patients. The chronic DVT and 2nd collection DVT groups demonstrated a significant increase in CECs in relation to the controls. There was no statistical difference in the number of EPCs (CD34+VEGFR2+CD45dimCD133-) among the groups studied, however an increase in the acute DVT group was observed. In the animal model, total ICV occlusion was observed between 15 minutes and 1 hour. After 24 hours a progressive decrease in the area of the formed thrombus occurred [85.4% (24h); 65.4% (48h); 51.3% (72h)], and no CECs or CEPs were observed. After 48hours, there was a significant increase in CECs and EPCs in peripheral blood when compared to other periods studied (P=0.001, Sca1-VEGFR2+ CD45dim; P=0.004, CD34-VEGFR2+CD45dim; P<0.001, Sca1+VEGFR2+CD45dim; P<0.001, CD34+VEGFR2+CD45dim). The results observed in mice and human beings suggest that EPCs can be recruited to circulation from the bone marrow, participating in a process of endothelial repair. The increase of CECs during the phase when the re-channeling process begins in the animal model, suggests that despite the initial endothelial lesion, CECs are liberated when the flow is reestablished. In the present study we concluded that CECs can represent a vascular damage marker. / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Ciências

Orientador: Nelci Fenalti Hoehr, Joyce M. Anichino-Baizzacchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T11:11:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alessio_AlineMorandi_M.pdf: 5240817 bytes, checksum: f759b9c995ffcb5198175f672d2a40aa (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: o estrógeno atua na hemostasia promovendo efeitos pró e antitrombóticos, sua ação ocorre através de sua ligação a receptores nucleares específicos, denominados receptores 'alfa' e 'beta' do estrógeno (RE). A presença de polimorfismos nos genes que codificam o RE poderia modular a resposta do estrógeno, assim como a transcrição de genes e conseqüentemente a expressão. Existem fatores de risco adquiridos para a trombose venosa profunda (TVP) que estão associados a alterações do nível de estrógeno como: gravidez, puerpério, uso de anticoncepcional oral (ACO) e a terapia de reposição hormonal. Os objetivos deste estudo foram de associar polimorfismos nos genes dos RE 'alfa' e 'beta' em controles e mulheres e homens com TVP e avaliar a influência deles na atividade da proteína C (PC), proteína S (PS), antitrombina e concentração de fibrinogênio. Nas mulheres sob o uso de ACO, o genótipo AA do polimorfismo G1730A e, nas mulheres grávidas, os genótipos AA e GA do polimorfismo G1082A, ambos no gene do RE-~, podem ter um efeito protetor para o risco de TVP. Porém, o genótipo GG do polimorfismo G1730A tem uma influência no aumento da atividade da PS nas mulheres do grupo controle total e nas mulheres sob o uso de ACO; e os genótipos AA e AG do polimorfismo A351G no gene do RE-'alfa' , e o genótipo GG do polimorfismo G1082A tem um efeito no aumento da concentração de fibrinogênio nas mulheres grávidas. Contudo, a mutação G20210A no gene da protrombina, o fator V de Leiden e os polimorfismos do RE- foram fatores preditores de trombose venosa. Apesar da miscigenação brasileira, a PC apresentou diminuída em mulheres AITo-descendente. Nossos resultados sugerem que polimorfismos no gene dos RE-'beta' têm uma influência maior no risco para TVP. A contribuição deste trabalho é de grande importância, pois nenhum estudo associou o risco de TVP com os polimorfismos dos RE-'beta' / Abstract: Estrogen acts in haemostasis promoting pro and antithrombotic effects. Its action occurs through linking the specific nuclear receptors called 'alfa' and 'beta' estrogen receptor (ER). Polymorphisms in the genes that codify the ER a and ~could modulate estrogen response, as well as gene transcription and expression. There are acquired risk factors for deep venous thrombosis (DVT) that can alter the estrogen levels. These factors are oral contraceptives (OC), hormonal replacement therapy, pregnancy, and puerperium. The objectives of this study were to associate the polymorphisms in the genes of the a and ~ER in controls, women and rnen with DVT, and to evaluate the influence of these polyrnorphisms in protein C, protein S (PS), in antithrombin activity and fibrinogen concentration. Women under OC use with the AA genotype ofthe G1730A polyrnorphism, and pregnant women with the AA and GA genotypes of the G1082A polymorphism, both in the ER-~ gene, could have a protective effect for DVT risk. However, GG genotype of the G1730A polymorphisrn has an influence in the increase of the PS activity in women of the total control group and women under OC use; and the AA and AG genotypes of the A351G polymorphism in the ER-a gene, and the GG genotype of the G1O82A polymorphism have an effect in the increase of the fibrinogen leveI in pregnant women. However, the G20210A rnutation in the prothrombin gene, the Leiden V factor and the polymorphisms in the ER-'alfa' gene were predictor factors of venous thrombosis. Despite Brazilian miscegenation, PC activity was lower in Afro-descendent women. Our results suggest that the polymorphisrns in the ER-'beta' gene have a higher influence for DVT risk. The contribution of this study is of great importance, as no study has associated DVT risk with the ER polymorphisms yet / Mestrado / Patologia Clinica / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Ana Terezinha Guillaumon / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T00:25:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paschoa_AdilsonFerraz_D.pdf: 1209751 bytes, checksum: 841d1a79e90d1ef1c6bb14b58b807236 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O tromboembolismo venoso (TEV) afeta de 1 a 3 indivíduos por mil habitantes/ano. O conhecimento atual das trombofilias permite a associação com cerca de 40% dos casos de TEV. Há controvérsias quanto ao valor da pesquisa laboratorial de trombofilia para o benefício dos doentes com tromboembolismo venoso. Procuraram-se as variáveis preditivas para a pesquisa positiva de trombofilia e avaliar o impacto desses resultados nas decisões clínicas. Foram avaliados 84 doentes consecutivos com TEV confirmado por métodos de imagem no período entre janeiro de 2001 e novembro de 2003. Após o período previsto de anticoagulação definido por critérios clínicos, os doentes foram submetidos à pesquisa das principais causas de trombofilia. Os resultados laboratoriais permitiram a dois examinadores independentes reavaliar caso-a-caso a indicação de ¿mudança de conduta¿, caracterizada pela interferência no tempo de profilaxia secundária ou ¿atenção especial¿ para medidas de maior vigilância diante de situações de risco ou para a extensão da pesquisa aos familiares assintomáticos. A trombofilia foi encontrada em 35 dos 84 casos (41,66%), sendo que em 27 (32,12%) havia uma causa genética. O fator V Leiden foi a alteração mais freqüente (15,47%), seguida do conjunto de deficiência dos anticoagulantes naturais (11,9%). Não houve diferença significativa da freqüência de trombofilia relacionada à faixa etária nem diferença de idade de aparecimento do primeiro evento trombótico entre doentes trombofílicos e não trombofílicos. Houve significância estatística para ocorrência de trombofilia nos doentes com tromboflebite superficial, recorrência e na associação com fatores de risco não cirúrgicos. A ¿mudança de conduta¿ foi atribuída a 6 dos 84 doentes (7,14%), estatisticamente significativa para aqueles com recorrência em relação aos que tiveram apenas um episódio de TEV. A ¿atenção especial¿ foi atribuída a 34 dos 84 casos (40,47%).A tromboflebite superficial de aparecimento espontâneo, a ocorrência de TEV relacionada a causas não cirúrgicas e a recorrência foram os principais achados preditivos de trombofilia. A ¿mudança de conduta¿ aplicou-se a uma pequena porcentagem de doentes, e refletiu predominantemente a confirmação da necessidade de prolongamento da profilaxia secundária. A ¿atenção especial¿ diante de situações de risco e a extensão da profilaxia primária a familiares de primeiro grau assintomáticos expostos a situações de risco parecem-nos a melhor indicação para a pesquisa laboratorial da trombofilia. Palavras-chave: trombofilia, fator V Leiden, mutação G20210A, proteína S, proteína C, antitrombina, hiperhomocisteinemia, anticorpos antifosfolípides, tromboembolismo venoso / Abstract: The venous thromboembolism (VTE) affects 1 to 3 individuals per a thousand habitants/year. Nowadays its possible to associated VTE with a cause of thrombophilia in about 40% of patients. There are some inconclusive points about the real benefit of the laboratorial investigation on thrombophilia for patients with VTE. We tried to identify the variables that point to the positive test results and the impact of these results on clinical decisions.The screening for the more common causes of thrombophilia was applied to 84 consecutive patients with VTE confirmed by image examination between January 2001 and November 2003. After test results, two independent observers evaluated, in a case by case basis, the indication of a ¿change on prophylaxis¿, in order to modify the period of anticoagulant intake (secondary prophylaxis), or ¿special attention¿ when considering to have a higher medical surveillance before risk situations or for the extension of the research to the first degree asymptomatic relatives.Thrombophilia was found in 41.66% (35/84), and in 32.12% (27/84) it involved agenetic cause. The factor V Leiden was the more prevalent alteration, identified in 15.47% of the cases, followed by the natural anticoagulants disfunction (11.9%). There was no significative difference of thrombophilia frequency between ages, nor a difference of age in the onset of the first thrombotic event between thrombophilic and non-thrombophilic patients. There was a higher prevalence of thrombophilia in patients with superficial thrombophlebitis of spontaneous onset, in cases of recurrence and when associated with non-surgical predisponent factors. The ¿change on prophylaxis¿ resulted in 7.14% (6/84), and there was statistically significance for patients with recurrent episodes when compared to patients with just one. The ¿special attention¿ was applied in 40.47% (34/84). Spontaneous superficial thrombophlebitis, occurrence of VTE related to nonsurgical causes and recurrence, were the main findings which suggested thrombophilia. The ¿change of prophylaxis¿ was applied to a small percentage of patients. The ¿special attention¿ for risk situations and the extension of the primary prophylaxis to the asymptomatic family members seem to be the best indication for the laboratorial research on thrombophilia. Key words: thrombophilia, factor V Leiden, G20210A mutation, protein C, protein S, antithrombin, hyperhomocysteinaemia, antiphospholipids antibodies, venous thromboembolism / Doutorado / Cirurgia / Doutor em Cirurgia