A persistência de células T de memória funcionais é importante para garantir uma imunidade protetora na infecção pelo Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV). As células T de memória têm sido subdivididas em memória central (TCM), memória efetora (TEM) e memória efetora altamente diferenciada (TEMRA) com base na expressão de moléculas de superfície como CCR7 e CD45RA, e na capacidade de produzir citocinas e proliferar. Recentemente, identificamos 18 peptídeos derivados de seqüências do consenso B do HIV-1, ligadores de múltiplas moléculas HLA-DR e amplamente reconhecidos por linfócitos T de sangue periférico de pacientes infectados pelo HIV. Diante disso e considerando a importância das células T de memória na manutenção da resposta imune específica, nosso objetivo foi caracterizar fenotípica e funcionalmente as subpopulações de células T de memória de indivíduos infectados pelo HIV envolvidas no reconhecimento in vitro desses epitopos. Foram incluídos 14 indivíduos controles sadios e 61 pacientes HIV+ com contagem de linfócitos T CD4+ maior que 250 células/mm3. Os pacientes HIV+ foram divididos em seis diferentes grupos clínicos de acordo com o estágio da infecção, carga viral (CV) plasmática e uso de terapia anti-retroviral (ART): não progressores por longo tempo (LTNP), avirêmicos em uso de ART (AV-ART), virêmicos em uso de ART (VI-ART), virêmicos sem uso de ART (VI sem ART), virêmicos recéminfectados sem uso de ART (VI-RI) e controladores. Células mononucleares do sangue periférico dos indivíduos do estudo foram estimuladas com o conjunto de peptídeos do HIV-1 e com um conjunto de peptídeos do Citomegalovírus (CMV). A freqüência de células de memória produtoras de IFN- e IL-2 e a proliferação celular antígeno-específica foram detectadas por citometria de fluxo de multiparâmetros. Nossos resultados mostraram que o conjunto de peptídeos do HIV-1 foi capaz de ativar subpopulações funcionais de memória TCM, TEM e TEMRA secretoras de IFN- e IL-2 em 100% dos pacientes HIV+ dos diferentes grupos clínicos. O conjunto de peptídeos do HIV-1 também induziu proliferação das subpopulações de linfócitos T de memória. As freqüências de TEMRA CD4+IFN-+, TEMRA CD4+IFN-+ total, TCM CD8+IFN-+, TCM CD8+IFN-+ total, TEM CD8+IFN-+, TEM CD8+IFN-+ total e TEMRA CD8+IFN-+ correlacionaram-se negativamente com a carga viral do HIV em pacientes virêmicos. Esses dados sugerem que essas subpopulações de memória funcionais são importantes no controle da viremia. Comparando as respostas HIV e CMVespecíficas observamos freqüências mais elevadas de células T de memória produtoras de IL-2, IFN-/IL-2 e IFN- em respostas ao pool de peptídeos do HIV. Esses dados sugerem que esse conjunto de peptídeos derivados de seqüências do HIV-1 ativa respostas polifuncionais de subpopulações de linfócitos T de memória. Nossos resultados mostraram que o conjunto de peptídeos do HIV-1 foi capaz de estimular diferentes subpopulações distintas de linfócitos T de memória produtores de IFN-, IFN-,/IL-2 e IL-2 de indivíduos em diferentes estágios da infecção pelo HIV e sugerem o envolvimento de subpopulações de memória funcionais no controle da viremia. Estes achados fortalecem a possibilidade de uso desses peptídeos em uma formulação vacinal bem-sucedida em humanos / The persistence of functional memory T cell is important to ensure a protective immunity to Human Immunodeficiency Virus (HIV) infection. Memory T cells have been subdivided into central memory (TCM), effector memory (TEM) and highly differentiated effector memory (TEMRA) based on the expression of surface molecules such as CCR7 and CD45RA, and the ability to produce cytokines and proliferate. Recently, we identified 18 peptides derived from B consensus sequences of HIV-1 that bind to multiple HLA-DR molecules and are widely recognized by peripheral blood T lymphocytes from HIV-infected patients. Given this and considering the importance of memory T cells in the maintenance of specific immune response, our objective was to characterize phenotypic and functionally memory T cell subsets from HIV-infected individuals involved in the recognition of these epitopes in vitro. The study included 14 healthy control subjects and 61 HIV+ patients with CD4+ lymphocytes counts higher than 250 cells/mm3. The HIV+ patients were divided into six different clinical groups according to the stage of infection, plasma viral load (VL) and antiretroviral therapy use (ART): long-term non-progressors (LTNP), aviremic under ART (AV-ART), viremic under ART (VI-ART), viremic without using ART (VI without ART), recently infected viremic without using ART (VI-RI) and controllers. Peripheral blood mononuclear cells from study subjects were stimulated with HIV-1 peptide pool and with a cytomegalovirus (CMV) peptide pool. The frequencies of IFN- and IL-2 producing memory cells and antigenspecific cell proliferation were detected by multiparametric flow cytometry. Our results showed that the HIV-1 set of peptides was able to activate TCM, TEM and TEMRA functional memory subsets that secrete IFN- and IL-2 in 100% of the HIV patients from the different clinical groups. The HIV-1 set of peptides also induced memory T lymphocyte subsets proliferation. TEMRA CD4+IFN-+, total TEMRA CD4+IFN-+, TCM CD8+IFN-+, total TCM CD8+IFN-+, total TEM CD8+IFN-+, TEM CD8+IFN-+ and TEMRA CD8+IFN- + frequencies negatively correlated with HIV viral load in viremic patients. These data suggest that these functional memory subsets are important to control the viremia. When comparing the HIV and CMV-specific responses we observed higher frequencies of IL-2, IFN-/IL-2 and IFN- producing memory T cells in response to HIV peptide pool. These data suggest that this set of HIV sequence derived peptides activates polyfunctional response of memory T lymphocyte subsets. Our results showed that the HIV-1 peptide set was able to stimulate different IFN-, IFN-/IL-2 e IL-2 producing memory T lymphocytes from individuals in different stages of HIV infection and suggest the involvement of functional memory subsets in the control of viremia. These findings strengthen the possibility of using these peptides in a successful vaccine formulation in humans

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2014-10-21T12:18:38Z No. of bitstreams: 3 Tese Karlla Antonieta Amorim Caetano - 2014.pdf: 3924004 bytes, checksum: d7ba7c1ee906d0c858ef16bd5981e6f6 (MD5) Anexos - Tese Karlla Antonieta Amorim Caetano - 2014.pdf: 6385883 bytes, checksum: fb90963b122614948d1d35bfe7554d6e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Rejected by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com), reason: Cássia, o nome do arquivo, segundo as instruções deve ser: : Dissertação - Maria Flores Silva - 2014”, “Tese - Maria Flores Silva - 2014. Você está esquecendo de colocar o traço após Tese ou Dissertação. Na citação está faltando a data final. ex. PIMENTEL, Tatiane Dias. Entre a televisão e a internet: o jornalismo e o exercício da cidadania. 2012. 150 f. Dissertação (Mestrado em Comunicação) - Universidade Federal de Goiás, Goiânia, 2012. on 2014-10-23T11:29:29Z (GMT) / Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2014-11-06T11:25:56Z No. of bitstreams: 3 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese Karlla Antonieta Amorim Caetano - 2014.pdf: 3924004 bytes, checksum: d7ba7c1ee906d0c858ef16bd5981e6f6 (MD5) Anexos - Tese Karlla Antonieta Amorim Caetano - 2014.pdf: 6385883 bytes, checksum: fb90963b122614948d1d35bfe7554d6e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-06T11:36:06Z (GMT) No. of bitstreams: 3 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese Karlla Antonieta Amorim Caetano - 2014.pdf: 3924004 bytes, checksum: d7ba7c1ee906d0c858ef16bd5981e6f6 (MD5) Anexos - Tese Karlla Antonieta Amorim Caetano - 2014.pdf: 6385883 bytes, checksum: fb90963b122614948d1d35bfe7554d6e (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-06T11:36:06Z (GMT). No. of bitstreams: 3 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese Karlla Antonieta Amorim Caetano - 2014.pdf: 3924004 bytes, checksum: d7ba7c1ee906d0c858ef16bd5981e6f6 (MD5) Anexos - Tese Karlla Antonieta Amorim Caetano - 2014.pdf: 6385883 bytes, checksum: fb90963b122614948d1d35bfe7554d6e (MD5) Previous issue date: 2014-07-22 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Estimates indicate a total of 240 million chronic hepatitis B carriers worldwide. In Brazil, rural settlements present adverse life conditions that favor the acquisition of health problems, such as the hepatitis B virus (HBV). The objective of the present study was to investigate the epidemiology of the infections caused by the hepatitis B and D viruses in people living in settlements in the southwest region of the state of Goiás. This is an observational, analytical, cross-sectional study, with a subsequent cohort of susceptible subjects for vaccination against HBV, assessment of adherence and vaccine response. In the period from May to July of 2011, 467 subjects were selected from seven settlements in the southwest of Goiás. All subjects were interviewed and tested for the detection of the serological markers HBsAg, anti-HBc and anti-HBs, by means of the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Reactive HBsAg samples were tested for total anti-HDV and IgM, by means of the ELISA, submitted to the detection of the HBV DNA by semi-nested PCR and genotyped by sequencing. Chemiluminescent microparticle immunoassay was used for the quantitative determination of anti-HBs. The research proposal was approved by the Research Ethics Committee of the Federal University of Goiás. Of the total sample, 52.2% were men, 57.8% were married and 49% had less than five years of education. Most subjects were from cities in the midwest region (81.6%) and were older than 19 years of age (73.7%). Overall prevalence for infection by the HBV was 10.9% (51/467), being 0.8% (4/467) for HBsAg, 7.9% (37/467) for anti-HBc and anti- HBs, and 2.1% (10/467) for anti-HBc. Moreover, 19.3% of the people living in settlements presented isolated positivity for the anti-HBs marker, which indicates they were previously vaccinated against hepatitis B. The four reactive HBV DNA samples were classified as subgenotype A1 (3/4) and D3 (1/4). The male gender (adjusted OR: 2.65; p= 0.007), age (adjusted OR: 1.07; p= 0.000), history of transfusion (adjusted OR: 2.52; p= 0.025) and greater period of time living in the settlements (adjusted OR: 1.10; p= 0.026) were variables associated with the HBV. A total of 181 subjects susceptible to the infection started vaccine against hepatitis B, but only 106 (58.6%; 106/181) completed the vaccine scheme. Of these, it was possible to assess the vaccine response in 77 subjects, and 68.8% (53/77) presented protective titers of anti-HBs. Of those subjects living in the settlements who did not respond to the vaccine, a greater proportion was male, had more than 40 years and was smokers (p< 0.001). No subject presented positivity for the anti-HDV marker. The results of this study evidence the need for effective strategies to prevent hepatitis B in the studied settlements, emphasizing vaccine against hepatitis. In light of the low vaccine response against this infection in older subjects, more immunogenic schemes are suggested, so as to induce a protective vaccine response. / Estima-se em 240 milhões o número de portadores crônicos de hepatite B. No Brasil, as comunidades rurais de assentamentos apresentam condições de vida adversas que favorecem a aquisição de agravos, como do HBV. O objetivo do presente estudo foi investigar a epidemiologia das infecções pelos vírus das hepatites B e D em assentados do sudoeste de Goiás. Trata-se de um estudo observacional, analítico, de corte transversal, em que posteriormente foi formada uma coorte de indivíduos suscetíveis para a vacinação contra HBV, avaliação da adesão e resposta vacinal. No período de maio a julho de 2011, foram recrutados 467 indivíduos de sete assentamentos do sudoeste goiano. Todos foram entrevistados e testados para a detecção dos marcadores sorológicos HBsAg, anti- HBc e anti-HBs pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). As amostras HBsAg reagentes foram testadas para o anti-HDV total e IgM, pelo ELISA, submetidas à detecção do HBV DNA por semi-nested PCR e genotipadas por sequenciamento. Para a determinação quantitativa do anti-HBs empregou-se o imunoensaio de micropartículas por quimioluminescência. O presente estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Federal de Goiás. Do total, 52,2% eram do sexo masculino, 57,8% casados e 49% possuía menos de cinco anos de estudo. A maioria era natural de municípios da Região Centro-Oeste (81,6%) e possuía mais de 19 anos de idade (73,7%). A prevalência global para a infecção pelo HBV foi de 10,9% (51/467), sendo 0,8% (4/467) para HBsAg, 7,9% (37/467) para anti-HBc e anti-HBs, e 2,1% (10/467) para anti-HBc. Também, 19,3% dos assentados apresentaram positividade isolada para o marcador anti-HBs, indicando vacinação prévia contra hepatite B. As quatro amostras HBV DNA reagentes foram classificadas como subgenótipo A1 (3/4) e D3 (1/4). Observou-se que sexo masculino (OR ajustado: 2,65; p= 0,007), idade (OR ajustado: 1,07; p= 0.000), história de transfusão (OR ajustado: 2,52; p= 0,025) e maior tempo de moradia nos assentamentos (OR ajustado: 1,10; p= 0,026) foram variáveis associadas ao HBV. Um total de 181 assentados suscetíveis à infecção iniciaram a vacinação contra hepatite B, mas apenas 106 (58,6%; 106/181) completaram o esquema vacinal. Desses, em 77 foi possível avaliar a resposta vacinal, sendo que 68,8% (53/77) apresentaram títulos protetores de anti-HBs. Verificou-se uma proporção maior de não respondedores nos assentados do sexo masculino, com mais de 40 anos e tabagistas (p< 0,001). Nenhum indivíduo apresentou positividade para o marcador anti-HDV. Os resultados evidenciam a necessidade de estratégias efetivas de prevenção da hepatite B nos assentamentos estudados, com ênfase na vacinação contra hepatite. Ainda, diante da baixa resposta vacinal contra esta infecção em indivíduos mais velhos, sugere-se esquemas mais imunogênicos, que induzam uma resposta vacinal protetora.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-17T15:40:10Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Wider Carlos Bernardes de Moura - 2016.pdf: 1656116 bytes, checksum: 507ddc7778f24f76d1103d1aefc0d664 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-17T15:43:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Wider Carlos Bernardes de Moura - 2016.pdf: 1656116 bytes, checksum: 507ddc7778f24f76d1103d1aefc0d664 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-17T15:43:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Wider Carlos Bernardes de Moura - 2016.pdf: 1656116 bytes, checksum: 507ddc7778f24f76d1103d1aefc0d664 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-06-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Introduction: vaccines are important technologies in health and have been used for decades to prevent a series of high morbidity diseases through vaccination of children, adolescents, adults and seniors. Knowledge of the immunization program costs is important for health managers in strategic planning, decision making and incremental costs estimates the introduction of new vaccines and budgetary impact of the same, supporting cost-effectiveness studies. Objectives: estimate the cost of the National Immunization Program (NIP) in Brazil, the federal considering the 2013 base year and analyze the acquisition of immunobiologics used in Brazil considering quantitative and cost in the 2004-2015 period. Methods: two studies were carried out. A retrospective descriptive study program cost for the NIP cost analysis at the federal level, and the period considered from January to December 2013. A restrospective study ecological descriptive type, historical series of quantity and immunobiologics costs purchased by NIP between the periods of 2004-2015. For both analyzes were considered the SUS perspective. The following cost components were considered: inputs (immunobiologics, syringes and needles), human resources, transportation, building infrastructure and services, office equipment, transfers to the Cold Chain and other (social mobilization, training, publications and research). For historical trend analysis, vaccines and serums /Immunoglobulins were considered. The analysis was stratified by national and international production; purchasing mechanism; and conventional routine schedule vaccines and vaccines introduced from 2006. Results: the total NIP costs at federal level in 2013 was R$1,467,100,454.81, of which R$1,304,032,414.00 (88.9%) to inputs for the routine and campaigns R$78,282,799.95 (5.3%) and transport R$3,210,769.92 (0.2%) with human resources and R$81,574,470.94 (5.6%) with the other components (building infrastructure, equipment, financial transfers and others). A total of 2,910,669,114 doses of immunobiologics was acquired by the NIP in the 2004-2015 period, at a cost of R$15,473,789,880. Conclusion: Federal costs of the NIP are significant, mainly due to costs of vaccine purchase and transportation. With the introduction of new vaccines in the immunization schedule, the PNI costs increase significantly, justifying the adoption of transfer strategy technologies for production of new vaccines and self-sufficiency in the production of immunobiologics adopted by MS. / Introdução: as vacinas são importantes tecnologias em saúde e vem sendo utilizadas há várias décadas em crianças, adolescentes, gestantes adultos e idosos para prevenir uma série de doenças de alta morbidade. O conhecimento dos custos de programa de imunizações é importante para os gestores de saúde no planejamento de estratégias, na tomada de decisões e para estimativas de custos incrementais na introdução de novas vacinas e de impacto orçamentário das mesmas, subsidiando estudos de custo-efetividade. Objetivos: estimar o custo do Programa Nacional de Imunizações (PNI) no Brasil, na esfera federal considerando o ano base de 2013 e analisar as aquisições de imunobiológicos utilizadas no Brasil considerando quantitativo e custos no período de 2004-2015. Métodos: foram realizados dois estudos. Um estudo descritivo retrospectivo de custo de programa para a análise de custos do PNI no nível federal, sendo o período considerado de janeiro a dezembro de 2013; e um estudo retrospectivo do tipo ecológico descritivo de série histórica da quantidade e custos de imunobiológicos comprados pelo PNI entre o período de 2004-2015. Para ambas as análises, foi considerada a perspectiva do SUS. Foram considerados os seguintes componentes de custo: insumos (imunobiológicos, seringas e agulhas), recursos humanos, transporte, infraestrutura predial e serviços, equipamentos de escritório, repasses para a rede de frio e outros (mobilização social, treinamento, publicações e pesquisas). A análise de série temporal considerou vacinas e soros/imunoglobulinas e foi estratificada por produção nacional e internacional; mecanismo de compra; e vacinas convencionais do calendário de rotina e vacinas introduzidas a partir de 2006. Resultados: o total de custos do PNI pelo nível federal em 2013 foi de R$1.467.100.454,81, sendo R$1.304.032.414,00 (88,9%) para insumos (imunobiológicos, seringas e agulhas) R$78.282.799,95 (5,3%) com transportes, R$3.210.769,92 (0,2%) com recursos humanos e R$81.574.470,94 (5,6%) com os demais componentes (infraestrutura predial, equipamentos, repasses para a rede de frio e outros). Um total de 2.910.669.114 doses de imunobiológicos foi adquirido pelo PNI no período de 2004-2015, a um custo de R$15.473.789.880. Conclusão: os custos federais do PNI são significativos, sobretudo em função de custos com compra e transporte de vacinas. Com a introdução de novas vacinas no calendário vacinal, os custos do PNI aumentaram significativamente, justificando a adoção de estratégia de transferência de tecnologias para produção de novas vacinas e promovendo a autossuficiência nacional na produção de imunobiológicos.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-24T13:09:38Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fabricia Oliveira Saraiva - 2014.pdf: 5793430 bytes, checksum: 3be7faa66b91207424f429a13894dddc (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-24T14:16:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fabricia Oliveira Saraiva - 2014.pdf: 5793430 bytes, checksum: 3be7faa66b91207424f429a13894dddc (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-24T14:16:10Z (GMT). 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Methods: A household survey was conducted between December 2010 and February 2011 in Goiania, GO, where the PCV10 vaccination started on June, 2010. Systematic sampling was used to recruit 1,237 children. A sociodemographic questionnaire was applied during the home visits; dates of vaccination were obtained from the vaccination card. The child's age at vaccine introduction was calculated for July 14th, 2010 (30 days after the introduction of the vaccine on routine immunization) and the child was retrospectively classified into one of three age groups: ≤6 months, 7-11 months; 12-15 months. Vaccination coverage (percentage of children who received the number of recommended doses) and compliance with schedules (percentage of children who received all valid doses at the recommended time interval) were calculated for all children and for each of the three age groups; prevalence ratios were compared by chi-square test. Log binomial regression (prevalence ratio / PR) was used to identify variables independently associated with vaccination coverage and compliance with recommended schedules. Results: The overall vaccination coverage was 53.4% (95% CI: 50.8-56.2%), varying from 88.3% (12-15 months / single dose) to 39.3% (7-11 months / 2 doses). Compliance to vaccination schedules was 16.6% (95% CI: 14.5 to 18.7%), ranging from 35.6% (≥12 months / single dose) to 6.0% (7-11 months / 2 doses). Having a private health insurance was independently associated with both vaccination coverage (PR = 1.22; 95% CI: 1.04-1.43, p=0.013) and compliance with the vaccination schedule (PR = 1.08; 95% CI: 1.01-1.15, p=0.019). Conclusions: Vaccination coverage achieved high percentages before the first year of introduction of PCV10 on routine immunization. Compliance with PCV10 recommended schedules was low, being important gap in the program. Having private health insurance was associated with compliance and vaccination coverage, which may reflect an attitude of seeking health care frequently and not only on emergencies. Initiatives to increase rates of vaccination coverage and compliance should be pursued targeting children aged 7-11 months, who are under the highest risk of acquiring pneumococcal disease. / Contexto: A vacina pneumocócica conjugada 10-valente (PCV10) foi introduzida no calendário básico de vacinação do Brasil em 2010. No ano da introdução, três esquemas vacinais foram utilizados: (i) crianças ≤6 meses: 3 doses + 1 reforço; (ii) crianças entre 7-11 meses: 2 doses + 1 reforço (2p+1), e (iii) crianças 12-15 meses: dose única (sem reforço). O objetivo deste estudo foi avaliar a cobertura vacinal e a adesão aos referidos esquemas logo após a introdução da PCV10 e identificar os fatores associados à maior cobertura e adesão. Métodos: Um inquérito domiciliar foi realizado entre dezembro de 2010 e fevereiro de 2011 em Goiânia, GO. Uma amostragem sistemática foi utilizada para recrutar 1.237 crianças. Um questionário sociodemográfico foi aplicado; as datas de vacinação foram obtidas da caderneta de vacina. A idade da criança no momento da introdução da vacina foi calculada em relação à data de 14 de julho de 2010 (30 dias após a introdução da vacina no calendário básico local) e a criança foi classificada em uma das três faixas etárias (≤6 meses; 7-11 meses; 12-15 meses). A cobertura vacinal (porcentagem de crianças que receberam o número de doses recomendadas) e a adesão aos esquemas vacinais (porcentagem de crianças que receberam todas as doses válidas e no intervalo recomendado) foram calculadas para todas as crianças e para cada uma das três faixas etárias. As razões das prevalências de cobertura e adesão foram comparadas pelo teste do qui-quadrado. Regressão log foi utilizada para a análise de regressão múltipla, a fim de identificar as variáveis independentemente associadas à cobertura vacinal e à adesão aos esquemas vacinais. Resultados: A cobertura vacinal foi de 53,4% (IC 95%: 50,8-56,2%), variando de 88,3% (12-15 meses / dose única) a 39,3% (7-11 meses / 2 doses). A adesão aos esquemas vacinais foi de 16,6% (IC 95%: 14,5-18,7%), variando de 35,6% (12-15 meses / dose única) a 6,0% (7-11 meses / 2 doses). Ter um plano de saúde privado apresentou associação independente tanto com a cobertura vacinal (RP = 1,22; IC 95%: 1,04-1,43; p = 0,013) quanto com a adesão aos esquemas vacinais (RP = 1,08; IC 95%: 1,01-1,15; p = 0,019). Conclusões Durante o primeiro ano de introdução da PCV10 no calendário básico, a cobertura vacinal alcançou porcentagens expressivas. A adesão aos esquemas recomendados para PCV10 foi baixa, sendo importante lacuna no programa. Ter plano de saúde privado esteve associado à adesão e à cobertura vacinal, o que pode refletir uma atitude de procurar assistência à saúde com maior frequência e não apenas em situações de emergência. Iniciativas para aumentar as taxas de cobertura vacinal e de adesão devem ser implantadas, especialmente entre crianças no segundo semestre de vida, as quais estão no grupo de maior risco para doenças pneumocócicas.

Este estudo buscou avaliar o grau de qualidade da conservação de vacina nas Unidades de Atenção Primária à Saúde - UAPS da região Centro-Oeste do Estado de Minas Gerais. Para tal foi realizada uma pesquisa avaliativa em duas etapas. Na primeira foram utilizados critérios das dimensões, estrutura e processo para mensurar o grau de qualidade das 261 salas de vacina distribuídas nos 55 municípios da região e analisar a relação com o porte populacional e a adesão ao Sistema Único de Saúde. O grau de qualidade foi definido por meio de um sistema de escores, com pesos diferenciados para indicadores em cada dimensão avaliada. Foram definidas as categorias para o grau de qualidade: \"adequado\", \"não adequado\" e \"crítico\". Para verificar a relação entre o grau de qualidade e o porte populacional e adesão ao SUS utilizou-se o teste do qui-quadrado de Pearson. Na segunda etapa do trabalho foram selecionadas as salas de vacina que obtiveram 100% dos critérios selecionados na dimensão estrutura. Assim, foram eleitas 12 salas de vacina para a realização de entrevista semiestruturada com o enfermeiro, técnico/auxiliar de enfermagem e referência técnica em imunização com o propósito de compreender os fatores que dificultam o processo de conservação de vacinas nas UAPS. Na análise dos resultados observou-se que o grau de qualidade de conservação de vacina não está adequado em 59,3% e 26,9% apresentaram grau crítico de qualidade. Os municípios de pequeno porte habilitados na Gestão Plena da Atenção Básica concentraram as piores salas de vacina. A inexistência de profissional atualizado em sala de vacina foi um dos principais achados do estudo na dimensão estrutura o que compromete uma assistência de qualidade em sala de vacina. Na dimensão do processo de conservação de vacinas, o componente organização do refrigerador, principalmente na organização das vacinas quanto à termoestabilidade, apresentou pior escore de qualidade. O estudo apontou um desconhecimento dos enfermeiros e técnicos/auxiliares de enfermagem sobre os efeitos da baixa temperatura sobre as vacinas. O componente condutas frente à alteração de temperatura não foi bem avaliado, grande parte dos trabalhadores em sala de vacina não cumpre as orientações em caso do imunobiológico sofrer alterações de temperatura. Limitações também foram encontradas em relação à supervisão das atividades nas salas de vacina. O excesso de demanda para o enfermeiro e a deficiência na organização do processo de trabalho acabam prejudicando o cumprimento da função primeira do enfermeiro que é o gerenciamento do cuidar, aqui representado pelo cuidar em sala de vacina. O cuidado com a conservação de vacinas, que perpassa por uma série de atividades presente na práxis da enfermagem, aponta para a necessidade de capacitação dos recursos humanos, de monitoramento e avaliação do processo de trabalho e de novos estudos na área. / This study sought to assess the quality of vaccine storage in Primary Healthcare Centers - PHC in the mid-west area of the state of Minas Gerais. To this end a two- stage assessment study was carried out. In the first stage, dimensions, structures and processes were the criteria used to measure quality grades in 261 vaccine rooms distributed over 55 municipalities in the area and to analyze its relation to population size and adherence to the Unified Health System. Quality grades were defined by means of a scoring system, with different weighted scores attributed to indicators for each dimension being rated. Categories for quality grades were then defined as: \"adequate\", \"inadequate\" and \"critical\". Pearson\'s chi-square test was used to verify the correlation between quality grade and population size and adherence to the UHS. In the second stage of the investigation, vaccine rooms meeting 100% of the selected criteria in the structure dimension were selected. Thus, 12 vaccine rooms were selected for the conduction of semi-structured interviews with nurses, nursing assistants and technical immunization coordinators with the aim of shedding light on the factors which render vaccine storage in PHCs difficult. On analysis of the results, it was observed that vaccine storage quality grades are inadequate in 59.3% of these centers, and critical in 26.9%. Small-sized municipalities qualified for Full Basic Healthcare Management aggregated the worst vaccine rooms. With respect to the structure dimension, one of the main findings was absence of professionals with up-to-date knowledge on immunization in the vaccine rooms, which jeopardizes the delivery of quality healthcare assistance in vaccine rooms. With reference to the vaccine storage process dimension, the refrigerator organization component achieved the worst quality evaluation, chiefly concerning the organization of the vaccines in a manner in which they are maintained at stabilized temperatures. The study points to an absence of knowledge on the parts of the nurses and nursing assistants as to the effects of low temperatures on vaccines. Additionally, breached cold chains did not score well; most vaccine room staff fail to follow guidelines when the immunobiologicals are subjected to temperature breaks. Limitations were also encountered in relation to vaccine-room task supervision. Excessive demands on the nurse\'s time and inadequate organization of work processes ultimately hamper the nurse\'s ability to exercise his/her primary role of healthcare management, represented here by vaccine room supervision. Vaccine storage supervision, which spans a series of activities present in nursing praxis, indicates the need to train human resources, monitor and assess work processes and conduct new studies in the field.

O controle da eficiência de bacterinas antileptospirose de uso animal é o teste de potência com desafio em hamsters, contudo, na atualidade, tem sido estimulada a busca de alternativas que dispensem o uso de animais de laboratório. O teste de inibição de crescimento de leptospiras in vitro (ICLIV) tem sido proposto como possível alternativa. O presente trabalho empregou os testes de ICLIV, soroaglutinação microscópica (SAM) e ELISA anti IgG para avaliar a intensidade e a duração da imunidade passiva em leitões em aleitamento e ativa em matrizes suínas e leitões desmamados imunizados com bacterina experimental antileptospirose aprovada no teste de potência em hamster. Foi produzida uma bacterina experimental antileptospirose com estirpe patogênica de Leptospira interrogans, sorovar Kennewicki, estirpe Pomona Fromm (LPF), padronizada para conter 109 leptospiras por mL e associada ao adjuvante de hidróxido de alumínio na proporção de 10% do volume da dose final. Para a avaliação da eficácia da concentração mínima de leptospiras a ser utilizada na bacterina, diluições seriadas de razão dez de cultivo de leptospiras variando de 105 a 109 leptospiras/mL, foram submetidas ao teste de potência com desafio em hamsters (Experimento A), apenas a bacterina produzida na concentração de 109 leptospiras/mL foi capaz de proteger os hamsters contra a infecção induzida pela estirpe LPF, quando a vacina foi testada na diluição de 1:800, critério internacional de aprovação. A bacterina na concentração de 109 leptospiras/mL foi submetida ao teste de potência em hamsters (Experimento B), imunizados com a vacina pura e em diluições seriadas de razão dois (200 a 25600). A bacterina foi aprovada no teste de desafio em hamster até a diluição de 1:6400. O controle do inóculo de desafio foi constituído por 100 DL50. Fêmeas suínas que nunca haviam sido vacinadas contra a leptospirose e que foram não reagentes no teste de soroaglutinação microscópica aplicado a leptospirose efetuado com 24 estirpes de referência e no teste ICLIV com a estirpe LPF (Experimento 1), receberam duas aplicações intervaladas de 30 dias e um reforço aos 210 da primeira dose da bacterina pura e em diluições seriadas de razão dois (400 a 3200). Estes animais foram 16 monitorados com colheitas de sangue efetuadas a cada 30 dias. Os picos máximos de anticorpos avaliados pelos testes de SAM e de ICLIV foram observados aos 30 dias da segunda aplicação da vacina, com maior magnitude para a vacina pura, contudo aos 120 dias da segunda aplicação da vacina houve um declínio acentuado nos níveis de anticorpos. Para encontrar um melhor intervalo entre as imunizações (Experimento 2), fêmeas suínas receberam duas aplicações da bacterina pura intervaladas de 30 dias e o reforço aos 150 da primeira dose. A redução do intervalo de revacinação após as duas doses iniciais determinou a persistência dos títulos de aglutininas e de anticorpos neutralizantes com níveis sempre superiores a 0,4 log. Nos leitões em aleitamento filhos das matrizes imunizadas com bacterina na concentração de 109 leptospiras/mL foi constatada a transferência de imunidade passiva, confirmada pelos títulos de anticorpos aglutinantes detectáveis no quinto dia de vida e de neutralizantes no quinto e décimo dia de vida. Nos ensaios realizados em leitões desmamados imunizados com uma série de diluições de razão dez variando de a 109 leptospiras/mL os picos máximos de anticorpos foram observados aos 30 dias da segunda imunização, com maior magnitude para a bacterina testada na concentração de 109 leptospiras/mL. Os parâmetros finalmente obtidos foram que matrizes suínas e leitões desmamados, primovacinados com duas aplicações intervaladas de 30 dias da bacterina aprovada no teste de potência com desafio em hamster, apresentaram no teste de ICLIV efetuado aos 60 dias da primo-vacinação, intervalos de títulos de anticorpos (95%) expressos em log variando, respectivamente de (0,87 a 1,35) e de (1,22 a 1,58). Os valores máximos (12.800) para o teste de ELISA anti IgG das matrizes suínas foram obtidos após o reforço efetuado aos 210 dias. / The potency of antileptospirosis bacterins is controlled by in vivo experimental assay performed in hamsters; however, nowadays the search for in vitro methodologies that could replace the use of laboratory animals has been stimulated. For this purpose, the In vitro leptospiral growth inhibition test (IVLGIT) has been proposed as an alternative test. In this work, the intensity and duration of the passive immunity in suckling piglets and active immunity in weaned piglets and adult sows were evaluated, after vaccination with an experimental leptospirosis bacterin, which had been approved previously on the potency test in hamsters. The in vitro tests applied to swine sera were the growth inhibition test (IVLGIT), microscopic agglutination (MAT) and anti-IgG ELISA. The bacterin was produced with a pathogenic Leptospira interrogans serovar Kennewicki strain identified as Pomona Fromm (LPF), and added with aluminum hydroxide as adjuvant at a concentration of 10% of the final volume dose. In order to evaluate the efficacy of the minimum concentration of the leptospires to be used in the bacterin, ten-fold serial dilutions of a culture of leptospira varying from 105 to 109 leptospires/mL were submitted to potency-challenge test in hamsters (Trial A). Only the bacterin produced at the concentration of 109 leptospires/mL protected the hamsters against the infection by LPF strain, when the vaccine was tested at the dilution of 1:800, which is the international criterion for the approval. The bacterin at the concentration of 109 leptospires/mL was submitted to the potency test in hamsters (Trial B), which had been immunized with an undiluted and with two-fold serially diluted bacterin (from 1:200 to 1:25,600). In the challenge test in hamsters, the bacterin has passed till the dilution of 1:6,400. The control of the challenge inoculum presented a titer of 100 LD50. Adult sows, never been vaccinated against leptospirosis, and that showed negative MAT results using 24 reference serovars and with negative IVLGIT with the LPF strain (Trial 1) had administered two doses of bacterin with 30 day interval and a booster dose at 210th day after the first application of the undiluted bacterin and the two-fold diluted ones (1:400 to :3,200). The animals were 18 monitored with bleeding performed each 30 days. The levels of antibodies evaluated by MAT and IVLGIT showed the maximum peak at the 30th day after the second vaccination of the bacterin, with high magnitude found with the undiluted bacterin, however, at the 120th day after the second vaccination there were found a marked decline in antibodies levels. To find a better immunization scheme (Trial 2), the sows received two doses of undiluted bacterin with 30 day interval and the booster dose at the 150th day after the first dose. The reduction on the interval of revaccination after the two initial doses determined the persistence of a higher levels agglutinins and neutralizing antibodies with titers 0.4 log. In suckling piglets born from sows immunized with the bacterin at the concentration of 109 leptospires/mL, the passive transference of antibodies was confirmed by MAT titers detected on the fifth day, and by IVLGIT titers, at the fifth and tenth days after birth. In the study of weaned piglets immunized with the bacterin at the concentrations of 106, 107, 108 and 109 leptospires/mL (Trial 3), the highest antibodies levels were observed at the 30th day after the second immunization, with greater magnitude for the bacterin tested at the concentration of 109 leptospires/mL. The final results indicate that sows and weaned piglets, primo-vaccinated and revaccinated with 30 day interval with bacterin that had passed in the potency-challenge test in hamsters, presented the IVLGIT results varying (95% CI) from 0.87 log to 1.35 log for sows and 1.22 to 1.58 log for weaned piglets, at the 60th day after the first vaccination. In adult sows the highest anti-IgG ELISA titer reached 12,800, obtained after the booster vaccine dose performed at 210th day from the first vaccination.

No presente trabalho, desenvolvemos uma estratégia vacinal baseada em vacinas de DNA que codificam proteínas do HPV-16, o tipo viral de maior relevância epidemiológica, fusionadas à glicoproteína D (gD) do vírus herpes simplex tipo 1 (HSV-1). A vacina que contêm o gene da E7 de HPV-16 fusionada à gD de HSV-1 (pgDE7), administrada em regime vacinal de quatro doses, foi capaz de gerar significativa ativação de células T CD8+ E7-específicas e apresentar 40% de efeito protetor anti-tumoral terapêutico em camundongos desafiados com células transformadas que expressam as proteínas E6 e E7 do HPV-16 (células TC-1). A partir das evidências geradas, desenvolvemos um novo vetor vacinal que codifica as proteínas E7, E6 e E5 do HPV-16 (pgD-E7E6E5). Em ensaios em modelo murino, apenas uma dose da vacina foi capaz de gerar ativação de células T CD8+ específicas e 70% dos camundongos previamente desafiados com células TC-1 e inoculados com 3 doses da vacina mantiveram-se livres de tumores. Como tentativa de potencializar o efeito protetor terapêutico encontrado, adotamos duas medidas: a co-administração de plasmídeos que codificam citocinas e a otimização de códons da sequência gênica que codifica a proteína quimérica. A combinação das vacinas pgDE7 ou pgD-E7E6E5 com plasmídeos que carregam os genes das citocinas IL-2, IL-12 ou GM-CSF foi capaz de aumentar a proteção terapêutica para 100% em regime vacinal de dose única. A adequação da sequência antigênica ao sistema de expressão humano, aumentou em cerca de 5 vezes o potencial terapêutico do vetor vacinal pgDE7. Em conjunto, os dados apresentados nesta tese demonstram a evolução do desenvolvimento de uma estratégia vacinal contra tumores induzidos por HPV-16 e encorajam seu potencial para uso em futuros ensaios clínicos. / The development of immunotherapeutic strategies against human papillomavirus (HPV) is a priority for the control of HPV-induced lesions and cervical cancer. In this study, we developed DNA vaccines encoding HPV-16 proteins fused to glycoprotein D (gD) of herpes simplex virus type 1 (HSV-1) as an approach to control HPV-16 induced tumors. The vaccine encoding HPV-16 E7 fused to HSV-1 gD (pgDE7), when administered in a four doses vaccine regimen, was able to generate significant activation of E7-specific CD8+ T cells and showed 40% of therapeutic anti-tumor effect in mice previously challenged with tumor cells expressing HPV-16 E6 and E7 proteins (TC-1 cells). Following these evidences, we developed a new vaccine vector encoding HPV-16 E7, E6, E5 proteins fused to HSV-1 gD (pgD-E7E6E5). Only one vaccine dose generated antigen-specific CD8+ T cell responses and three doses conferred 70% protection to mice previously challenged with TC-1 cells. As an attempt to enhance the observed therapeutic anti-tumor effects, we tested two approaches: co-administration of cytokine-expressing plasmids and codon optimization of the gene encoding the chimeric protein. The combination of the vaccines pgDE7 or pgD-E7E6E5 with plasmids encoding the cytokines IL-2, IL-12 or GM-CSF increased the therapeutic protection to 100% of the vaccinated animals following a single dose. The gene sequence adaptation increased by a factor of 5 the therapeutic potential of the pgDE7 vaccine. In summary, the data presented in this thesis demonstrated the development of a vaccine strategy against HPV-16 induced tumors and reinforces its potential use in future clinical trials.

A leishmaniose tegumentar é uma doença infecciosa, amplamente disseminada, sendo L. (V.) braziliensis e L. (L.) amazonensis, no Brasil, as espécies de maior importância médico-epidemiológica. Devido ao impacto epidemiológico da leishmaniose, medidas profiláticas devem ser desenvolvidas para o controle da doença, tal como vacinas. Portanto, o presente trabalho objetivou avaliar a imunogenicidade e potencial protetor de dois imunógenos denominados como ferro superóxido dismutase (FSD) e serino peptidase (SP). Os genes codificadores dos antígenos foram sintetizados e clonados no plasmídeo pVAX1 (pVAX1-FSD e pVAX1-SP). Camundongos BALB/c foram imunizados com ambos os alvos na concentração de 1,0 ug/uL, por três vezes, a intervalos regulares de 15 dias, e desafiados ou não com formas promastigotas de L. (L.) amazonensis. Os animais foram avaliados clínica, parasitológica e imunologicamente nos estudos de imunogenicidade e proteção. Os resultados obtidos demonstraram que ambas os imunógenos foram pouco imunogênicos, não apresentando alterações em linfócito T CD4; por outro lado, detectaram-se frequências diminuídas de linfócito TCD8 produtores de IFN-y e TNF-alfa. Entretanto, nos experimentos de desafio, verificou-se que os animais imunizados com pVAX1-FSD apresentaram uma resposta mista Th1 e Th2, devido ao aumento de linfócitos T produtores de IFN-y e IL-4, o que se associou a níveis altos de IgG1 e IgG2a, levando a uma diminuição da carga parasitária. O alvo pVAX1-SP também induziu resposta imunológica mista nos animais, todavia foi detectado frequências elevadas de linfócitos T CD8 produtores IL-10, e esta resposta foi associada a ausência de proteção nesses animais / American tegumentar leishmaniasis is an infectious disease, widespread, and in Brazil the species L. (V.) braziliensis and L. (L.) amazonensis are the most relevant in medical-epidemiological studies. Due to the epidemiological impact of leishmaniasis, prophylactic measures should be developed to control this disease, such as vaccines. Therefore, the present study aimed to evaluate the immunogenicity and the protective potential of two vaccine candidates known as iron superoxide dismutase (FSD) and serine peptidase (SP). FSD- and SP-coding genes were synthesized and cloned into plasmid pVAX1 (pVAX1-FSD and pVAX1-SP). BALB/c mice were immunized with both candidates at a concentration of 1.0 ug/uL, three times at intervals of 15 days and challenged or not with L. (L.) amazonensis promastigotes. Animals were evaluated clinically, immunologically and parasitologically in the studies of immunogenicity and protection. The results showed that both vaccines presented low immunogenicity, and after immunization BALB/c mice did not show significant changes in CD4 T lymphocytes, by the other side, the frequency of IFN-y and TNF-alfa producing cells were low. However, after challenge pVAX1-FSD-immunized mice presented a mixed Th1 and Th2 immune response, due to the high frequencies of IFN-ye IL-4-producing T lymphocytes, with association to high levels of IgG1 and IgG2a isotypes, leading to parasite burden decreasing. pVAX1-SP vaccine candidate also induced mixed immune response in animals, however high frequencies of IL-10-producing CD8 T lymphocytes was found, justifying the absence of protection in these animals

O Objetivo deste trabalho foi desenvolver uma estratégia vacinal de utilizando linhagens de salmonellas capazes de expressar uma forma atoxica da principal toxina associada a linhagens de EHEC que causa a síndrome hemolítica urémica. Estas linhagens de salmonellas diferem na expressão de flagelina, a principal unidade estrutural do flagelo. As linhagens foram capazes de expressar uma forma atóxica da proteína \"Shiga-like\" no interior da bactéria e no espaço extracelular, apresentaram alta estabilidade plasmidial in vitro e in vivo e foram capazes de aumentar o grau de colonização intestinal. Além disso, avaliamos o potencial imunogênico de estas linhagens e encontramos que a imunização com três doses de salmonelas foram capazes de gerar anticorpos sistêmicos (IgG) e locais (IgA) com propriedades neutralizantes in vitro e proteção parcial em condições in vivo frente a ensaios de desafios com a toxina nativa. Não fomos capazes de encontrar diferencias significativas em lãs propriedades imunogênicas entre as linhagens que diferem na expressão de flagelina. Nossos resultados indicam que formas atóxicas da proteína Stx2 expressadas em vetores biológicos podem ser uma alternativa de estratégia vacinal para controlar a SHU. / The goal of this study was to develop a vaccine strategy of using Salmonella strains capable of expressing a nontoxic form of the main toxin associated with EHEC strains that cause hemolytic uremic syndrome. These strains of Salmonella differ in flagellin expression, the main structural unit of the flagellum. The strains were capable of expressing a nontoxic form of the protein \"Shiga-like\" within the bacteria and the extracellular space, showed high plasmid stability in vitro and in vivo and were able to increase the degree of intestinal colonization. Furthermore, we evaluated the immunogenic potential of these strains and found that immunization with three doses of salmonella were able to generate (IgA) humoral and (IgG) systemic antibodies with neutralizing properties in vitro and partial protection in vivo conditions facing trials challenges with the native toxin. We were unable to find significant differences in the immunogenic properties between these strains that differ in flagellin expression. Our results indicate that nontoxic forms of Stx2 expressed in biological vectors can be an alternative vaccine strategy to control the SHU.

O Vírus Respiratório Sincicial Humano (HRSV) é um dos patógenos mais importantes do trato respiratório. Analisamos as interações das proteínas virais nucleoproteína (N), fosfoproteína (P) e matriz (M) em células HEK-293T. N interage com as proteínas celulares Hsp70, PRMT5 e WDR77; P com Hsp70 e Tropomiosina; e M com Nucleofosmina e Tropomiosina. Cada gene celular foi co-expresso em bactérias com um gene viral possibilitando a co-precipitação das proteínas. Analisamos a interação entre Hsp70 e N ou P, confirmando sua ocorrência em bactérias. Com um conjunto de proteínas mutantes, definimos que as interações são através dos amino terminais de N e P, ou do carboxi terminal de P, e do domínio amino terminal de Hsp70. Superexpressão de Hsp70 por transfecção provocou efeito de estímulo sobre a replicação de HRSV. Imunizações em camundongos com vacinas de DNA para N e P mostraram a indução de resposta celular e humoral. Ensaios de desafio resultaram em redução da carga viral após imunização com N, indicando potencial para sua aplicação em formulação vacinal. / Human respiratory syncytial virus (HRSV) is one of the most important pathogens of the respiratory tract. We analyzed the interactions of viral nucleoprotein (N), phosphoprotein (P) and matrix (M) in HEK-293T. N interacts with the cellular proteins Hsp70, PRMT5 and WDR77; P interacts with Hsp70 and Tropomyosin; and M with Nucleophosmin and Tropomyosin. Each cellular gene was co-expressed with a viral gene in bacteria allowing co-precipitation of proteins. Hsp70 co-expression with N or P proteins confirmed that these interactions also occur in bacteria. Using a set of mutants we found that the N and P amino terminus, P carboxy terminus, and Hsp70 amino terminal domain participate in the interactions. The overexpression of Hsp70 by transfection resulted in stimulation of HRSV replication. Mice immunization with N and P showed that DNA vaccines were capable of inducing humoral and cellular response. In challenge assays it was possible to detect significant virus titer reduction in animals immunized with N, indicating its potential for a vaccine formulation.