Orientador: Cláudio Casanova / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-26T11:03:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CollaJacques_FernandaElisa_D.pdf: 17373999 bytes, checksum: 18adb4b65dc2639da145a80ed8b6f4e2 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Flebotomíneos (Diptera: Psychodidae) são insetos de importância médico-veterinária pois participam do ciclo de doenças tais como leishmanioses, que acometem milhares de pessoas ao redor do mundo. O conhecimento sobre a ecologia e biologia desses dípteros é de fundamental importância para determinar a capacidade e competência vetorial de suas populações, e portanto, relevantes do ponto de vista da saúde pública. Este trabalho buscou esclarecer alguns pontos com informações deficientes sobre a biologia e ecologia das espécies vetoras de Leishmania (Leishmania) infantum chagasi e Leishmania (Viannia) braziliensis, respectivamente, Lutzomyia longipalpis e Nyssomyia neivai, no estado de São Paulo. Para a leishmaniose visceral americana (LVA), objetivou-se esclarecer questões a respeito de criadouros urbanos preferenciais de Lu. longipalpis e sobre sua expansão geográfica no estado de São Paulo. Em referências às lacunas no conhecimento da ecoepidemiologia da leishmaniose tegumentar americana, a competência vetorial de Nyssomyia neivai para L. (V.) braziliensis e o estudo da composição da comunidade flebotomínica em área endêmica no nordeste do estado, bem como sua variação mensal. Criadouros de Lu. longipalpis foram encontrados predominantemente em ambientes sombreados com grande quantidade de matéria orgânica, com maior concentração de larvas associadas a galinheiros. Quanto à sua dispersão, esta parece ter seguido uma rota a partir de Mato Grosso do Sul, seguindo em direção oeste-leste e também para norte e para sul a partir dessa linha central. A ocorrência de casos de LVA em humanos frequentemente é precedida pela detecção de Lu. longipalpis e casos caninos. Nyssomyia neivai, bastante frequente em áreas endêmicas para LTA no vale do Rio Mogi Guaçu, mostrou-se competente para adquirir, manter e transmitir o parasito em condições laboratoriais, cumprindo assim mais uma etapa necessária para a sua incriminação como espécie-vetora. Ainda no vale do rio Mogi Guaçu, a comunidade de flebotomíneos mostrou-se bastante diversa, com 17 espécies, das quais cinco são importantes para o ciclo da LTA. A fauna flebotomínica encontrada era composta majoritariamente por Nyssomyia whitmani, Migonemyia migonei e Expapillata firmatoi e, mais uma vez, abrigos para animais, tais como galinheiros, foi o local preferido para estes insetos, onde a sua maioria foi capturada. Desta forma, este trabalho apresenta dados relevantes para o conhecimento a respeito desses insetos vetores, que podem ser usados como base para futuros projetos ou no desenvolvimento de novas estratégias de controle dessas doenças / Abstract: Phlebotomine sandflies (Diptera: Psychodidae) are insects of medical and veterinary importance because they take part in the cicle of diseases, such as leishmaniasis which affect thousands of people around the world. Learning about these dipteras¿s ecology and biology is fundamentaly important to define the vectorial capacity and competence of their populations, and therefore, relevant for the public health perspective. This study aimed at adressing some issues with deficiente information on the biology and ecology of vector species of Leishmania (Leishmania) infantum chagasi and Leishmania (Viannia) braziliensis, respectively, Lutzomyia longipalpis and Nyssomyia neivai, in São Paulo State. For the American visceral leishmaniasis (AVL), this paper tried to answer questions on the preferencial breeding site of Lu. longipalpis and its geographical expantion in São Paulo State. In relation to the knowledge of the ecoepidemiology of American cutaneous leishmaniasis (ACL), the vectorial competence of Nyssomyia neivai to L. (V.) braziliensis and the analysis of the sandfly community in and endemic area in the Northeast of the state were studied. Lutzomyia longipalpis breeding sites were found predominantly in shaded environments with great amount of organic matter, and the greatest concentration of larvae associated to chicken sheds. Considering its dispersion, Lu. longipalpis seemed to follow a route from Mato Grosso do Sul to São Paulo city, in a west to east direction and from that central line, an expansion to the north and south. The occurance of human AVL is generally preceded by the detection of Lu. longipalpis and canine cases. Nyssomyia neivai, frequently found in endemic áreas for ACL in the Mogi Gauçu River Valley, was shown to be competente to aquire, host and transmit the parasite under laboratory conditions, thus fulfilling another requirement to be recognized as a vector species. Still in Mogi Guaçu River Valley, the sandfly community was greatly diverse, comprised of 17 species, of which five are considered important for the ACL cicle. The sandfly fauna was mainly comprised of Nyssomyia whitmani, Migonemyia migonei and Expapillata firmatoi and, once again, animal shelters, such as chicken sheds, were the preferred site for these insects, where the greatest amount was collected. Therefore, this work presents relevant data for the knowledge on these vector insects, which can be used as basis for future projects or in the development of new control strategies against these diseases / Doutorado / Relações Antrópicas, Meio Ambiente e Parasitologia / Doutora em Biologia Animal

Orientador: Erich Vinícius de Paula / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T18:53:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Faiotto_VanessaBoury_M.pdf: 2777980 bytes, checksum: 26068f6f5813665c531b744d7a8c8f60 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A sepse representa uma condição potencialmente fatal em que a resposta do organismo a uma infecção resulta em lesão em seus próprios tecidos. A terapia gênica (TG) consiste na modificação do repertório de células somáticas com fins terapêuticos, substituindo genes defeituosos que causam doenças. Na sepse, vetores não virais podem representar uma estratégia excelente para a transferência do gene terapêutico, uma vez que não provoca resposta imune significativa e são expressos apenas transitoriamente. Além disso, a sua produção é mais simples. Métodos: O estudo foi dividido em três etapas. Em primeiro lugar, dois genes repórter (lacZ e F9) foram testados em dois modelos experimentais de sepse (endotoxemia e ligadura e punção cecal, CLP) para confirmar a viabilidade da transferência gênica no contexto da sepse. A expressão foi avaliada por métodos qualitativos (histoquímica) e quantitativos (avaliação funcional; métodos coagulométricos). Em seguida avaliou-se a eficácia terapêutica da transferência do gene de sFlt-1, um antagonista de VEGF natural, no modelo de endotoxemia. A expressão foi avaliada por ELISA, e a eficácia foi avaliada através de uma curva de sobrevida. Os camundongos foram tratados com o plasmídeo DNA (pDNA) contendo o cDNA do gene Flt1 (tratamento) lacZ (controle), 6 horas após o desafio com LPS. A propósito, sFlt-1 foi capaz de proteger da sepse experimental murina em outros estudos, devido a sua propriedade estabilizadora da barreira endotelial (BE). Na última etapa, avaliamos os níveis séricos de quatro proteínas envolvidas na modulação da integridade BE, utilizando amostras de soro de indivíduos diagnosticados com sepse grave e choque séptico (n = 53), através de um kit Multiplex comercial. Resultados: No primeiro passo, a transferência gênica por vetores não virais foi demonstrada no modelo de endotoxemia, pois tanto a expressão de ?-galactosidase quanto de F IX mostraram-se aumentadas nos animais tratados neste modelo. A expressão não foi confirmada no modelo CLP, embora o número reduzido de animais por grupo não permita uma conclusão definitiva sobre o assunto. Em relação à segunda etapa, apenas 4/14 animais tratados apresentaram níveis detectáveis de sFlt-1 por Elisa. Além disso, não houve diferença na sobrevida entre os animais tratados e controles. Juntos, estes resultados confirmam que a transferência gênica com vetores não virais é possível no contexto de uma inflamação grave, mas apresenta baixa eficiência e previsibilidade. Por fim, observamos diferenças significativas nos níveis séricos de endoglina (maior expressão) e HB-EGF (menor expressão) em pacientes com choque séptico, em comparação ao grupo controle. Os níveis de BMP-9 e FGF-2 não foram significativamente diferentes no choque séptico. Conclusões: Nosso estudo nos permite concluir que, apesar de factível, a utilização de vetores não-virais não parece representar uma estratégia terapêutica eficaz na sepse experimental. Maiores estudos são necessários para validar o uso de endoglina e HB-EGF como biomarcadores de sepse grave / Abstract: Sepsis represents a potentially fatal condition that occurs when the body's response to infection results in injury to its own tissues. Gene therapy (GT) consists in modification of the repertory of somatic cells with therapeutic purposes, replacing defective genes that cause diseases. In sepsis, non-viral vectors, could represent an excellent strategy for therapeutic gene transfer, since they do not elicit intense immune responses in the individual and are expressed only transiently. Besides, their production is easy and inexpensive. Methods: The study was divided in 3 steps. First, two reporter genes (lacZ and F9) were tested in two experimental models of sepsis (endotoxemia and cecal ligation and puncture, CLP) to confirm the feasibility of gene transfer in the context of sepsis. We assessed expression by qualitative (histochemistry) and quantitative methods (functional evaluation, through coagulometric methods). Next we evaluated the efficacy of the therapeutic gene transfer of sFlt-1, a natural VEGF antagonist, in the endotoxemia model. Expression was evaluated by ELISA, and efficacy was evaluated by a survival curve. Mice were treated with pDNA containing the Flt1 (treatment) or lacZ (control) cDNA, 6 hours after challenge with LPS. Of note, sFlt-1 has been previously shown to protect from experimental sepsis due to its endothelial barrier (EB) stabilizing properties. In the last step, we evaluated serum levels of 4 proteins involved in the modulation of EB integrity, using serum samples of subjects diagnosed with severe sepsis and septic shock (n=53), through a commercial Multiplex kit. Results: In the first step, we could confirm the expression of both reporter genes by non-viral vectors in the endotoxemia model. Of note, expression of ?-galactosidase showed a notable increase when compared with control group. Similarly, we noted increased expression of factor IX in the mice which were submitted to gene transfer with pDNA, when compared with the controls that received the lacZ pDNA (111,4 ± 16,10 vs 64,73 ± 12,34; p<0,001) in the endotoxemia model, and similar result in the group without sepsis induction by endotoxemia (163,4± 73,46 vs 79,88 ± 9,39; p=0,0006). Expression was not confirmed in the CLP model, although the limited number of animals per group does not allow a definite conclusion on this matter. In relation to the second step, only 4/14 treated animals presented detectable levels of sFlt-1 by Elisa. In addition, no difference could be observed in the survival between treated and control animals. Together, these results confirme that gene transfer with non-viral vectors is feasible in the context of severe inflammation, but with a low efficiency and predictability. Finally, we demonstrated significant differences in serum levels of endoglin (higher expression) and HB-EGF (lower expression) in patients with septic shock, compared to controls. BMP-9 and FGF-2 levels were not significantly different in septic shock. Conclusions: Our study allows us to conclude that although feasible, the use of non-viral vectors does not seem to represent an effective therapeutic strategy in experimental sepsis. Larger studies are needed to validate the use of endoglin and HB-EGF as biomarkers of severe sepsis / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Ciências

Objectives: To evaluate the efficacy of commercially used insect repellents against Aedes aegypti stings. Material and Methods: Was used method standard the World Health Organization to evaluate the sensitivity of the mosquito by estimating the total protection time (TPT) of the repellent. The test consists of application of the product and introduction of the volunteer arm into cages containing 50 female mosquitoes, aged between five and seven days. The initial product was 10% technical grade N, N diethylbenzamine (DEET) and four formulations with different concentrations of DEET, OFF Family (7,125%), Baruel (9,5%), Expert Total : 1612043 and 16144314, Super Repelex Aerosol (11%), product based on IR3535 (Repeden Spray 12%, Jonsons Baby Lotion 12.5%), and the ICARIDINE base (Exposis Extreme Tetra 25%), by the median of each product in 6 volunteers, being three men and three women. Results: The OFF Family brand (DEET 7,125%), Baruel (DEET 9,5) and analytical DEET (10%) demonstrated a median of 30 minutes, even presenting different concentrations; Super Repelex Aerosol (DEET 11%) among the products containing DEET was the one that presented a higher median, with a TPT of 90 minutes; Expert Total (DEET 15%) (1st batch) and Expert Total (DEET 15%) (2nd batch) are shown with medians equal with a time of 60 minutes; Repeden Spray (IR3535 12%) and Johnsons baby (IR3535 12.5%) presented a median TPT of 60 and 30 minutes respectively, differing only in the degree of concentration of the active principle; Exposis Extreme (25% Icaridina) presented a median of 120 minutes, showing a superiority in relation to the other products. Conclusion: The products had a complete protection time lower than the one specified in their labels, and may leave the population that use them as a control measure against several unprotected diseases, requiring a greater number of reapplications of the products. / Objetivos: Avaliar a eficácia de repelentes utilizados comercialmente contra picadas de Aedes aegypti. Material e Métodos: Foi utilizado o método padrão da Organização Mundial da Saúde para avaliar a sensibilidade do mosquito através da estimativa de tempo de proteção completa (TPC) do repelente. O teste consiste na aplicação do produto e introdução do braço de voluntário em gaiolas contendo 50 mosquitos fêmeas, com idade entre cinco a sete dias. Foi avaliado inicialmente produto a base de N,N dietilbenzamina (DEET) grau técnico a 10% e quatro formulações com diferentes concentrações de DEET, OFF Family (7,125%), Baruel (9,5%), Expert Total (15%) lotes: 1612043 e 16144314, Super Repelex Aerossol (11%), produto a base de IR3535 (Repeden Spray 12%, Loção Jonsons Baby 12,5%,) e a base de ICARIDINA (Exposis Extreme Tetra 25%), e estimado o TPC pela mediana de cada produto em 6 voluntários, sendo três homens e três mulheres. Resultados: A marca OFF Family (DEET 7,125%), Baruel (DEET 9,5) e DEET analítico (10%) demostraram uma mediana de 30 minutos, mesmo apresentando diferentes concentrações; Super Repelex Aerossol (DEET a 11%), dentre os produtos contendo DEET, foi o que apresentou uma maior mediana, com TPC de 90 minutos; Expert total (DEET 15%) (1º lote) e o Expert Total (DEET 15%) (2º lote) mostram-se com medianas iguais com um tempo de 60 minutos; Repeden Spray (IR3535 12%) e Johnsons baby (IR3535 12,5%) apresentaram uma mediana com TPC de 60 e 30 minutos respectivamente, diferindo apenas no grau da concentração do princípio ativo; Exposis Extreme (Icaridina a 25%) apresentou uma mediana de 120 minutos, mostrando uma superioridade em relação aos outros produtos. Conclusão: Os produtos apresentaram tempo de proteção completa inferior a especificada em seus rótulos, podendo deixar a população que os utilizam como medida de controle contra diversas doenças desprotegida, sendo necessário maior número de reaplicações dos produtos para atingir a o período de proteção desejado. / São Cristóvão, SE

A integridade do DNA é ameaçada pelos efeitos lesivos de inúmeros agentes físicos e químicos que podem vir a comprometer sua função. Um dos mais versáteis e estudados mecanismos de reparo de DNA é o reparo por excisão de nucleotídeos (NER). Este mecanismo remove lesões que causam distorções na dupla fita de DNA, incluindo dímeros de pirimidina ciclobutano (CPDs) e 6-4 fotoprodutos (6-4 PPs), provocados pela radiação de luz ultravioleta (UV). Em humanos, a síndrome genética xeroderma pigmentosum (XP) apresenta uma alta sensibilidade à luz solar, resultando em um grande aumento na incidência de tumores em regiões expostas da pele e degeneração neurológica progressiva. O gene xpa parece estar envolvido diretamente no reconhecimento de lesões produzidas pela luz UV, atuando tanto no reparo global (GGR) como no reparo acoplado à transcrição (TCR). A modulação da expressão deste gene deve alterar as taxas de reparo no genoma celular, fornecendo valiosa contribuição para o estudo do reparo de DNA no NER e em outras vias distintas. No entanto, não foi possível a atenuação ou inativação total do transcrito XPA, provavelmente devido ao baixo número de moléculas de mRNA nas células e da relativa estabilidade da proteína XPA. A expressão controlada do cDNA xpa em células deficientes XP12RO foi conseguida através da transfecção do vetor indutível por muristerona A, pINXA. O clone INXA15M mostrou-se eficiente na indução da proteína XPA, complementando células XP12RO. Quantidades reduzidas de XPA foram suficientes para a complementação total de células XP12RO na sobrevivência frente à luz UV, ou para a atividade de reparo de DNA no genoma global. Entretanto, observou-se uma maior incidência de células apoptóticas em períodos de tempo curtos após a UV, quando comparamos com células proficientes para o reparo de DNA (HeLa). O vetor adenoviral portando o cDNA xpa (AdyXPA) mostrou-se eficiente na complementação de fibroblastos derivados de pacientes XPA. Apesar do curto período de expressão do transgene e da conhecida reação imunológica produzida pelos adenovirus, este vetor representa uma potencial ferramenta para testes de complementação, identificação de mutações e busca de sistemas de correção gênica de pacientes XP. / The DNA integrity is always threatened by the damage effects of physical and chemical agents that could jeopardy its function. The nucleotide excision repair (NER) is one of the most known and flexible mechanisms of DNA repair. This mechanism can recognize and remove DNA double-helix distortion, including the cyclobutane pyrimidine dimers (CPDs) and the pyrimidine-pyrimidone (6-4) photoproduct, promoted by ultraviolet light (UV). The human syndrome xeroderma pigmentosum (XP) is clinically characterized chiefly by the early onset of severe photosensitivity of the exposed regions of the skin, a very high incidence of skin cancers and frequent neurological abnormalities. The xpa gene seems to be involved during the UV damage recognition, in both global genome repair (GGR) and transcription-coupled repair (TCR). This gene modulation may modify the DNA repair rate in the cell genome, providing valuable contribution to the NER understanding and other DNA repair pathways. However, the complete inactivation or even the attenuation of the XPA transcript was not possible, mainly because of the low abundance mRNA per cell and the high stability of the XPA protein. The controlled expression of the cDNA xpa in XP12RO deficient cells was achieved through the transfection of a muristerone-A inducible vector, pINXA. The INXA15M clone shows good induction of the XPA protein and total complementation of XP12RO cells deficiency. Small quantities of the XPA protein do not interfere in the cellular UV sensitivity and the DNA repair activity in the global genome. Nevertheless, a higher number of cells in the apoptotic process were detected in short periods of time after UV light when compared to normal cells (HeLa). The adenovirus vector carrying the cDNA xpa (AdyXPA) can efficiently complement XPA patients’ fibroblast cells. In spite of the short period of the transgene expression and the known imunological reaction caused by adenovirus, this vector represents a potential tool for gene complementation diagnostic and gene correction in XP patients.

O diptero Culex quinquefasciatus, devido ao seu interesse médico, tem sido alvo de diversas tentativas de controle populacional que acabam enfrentando como fator limitante a microevolução. Para verificar a presença de variação populacional indicativa de microevolução, foram coletadas e comparadas amostras de dois locais dentro do Estado de São Paulo: O Parque Ecológico do Tietê, no município de São Paulo e em Pariquera-Açú, no Vale do Ribeira. A análise morfométrica das asas revelou que há diferença de forma e tamanho entre as populações e que o dimorfismo sexual é evidente e a assimetria bilateral alar é pouco pronunciada nas duas populações. A micrografia de ovos mostrou diferenças interpopulacionais quanto à altura dos tubérculos do exocórion. O padrão de bandas observado na análise do DNA ribossômico foi homogêneo. O fluxo gênico entre essas populações parece reduzido, fato que reflete diretamente a dinâmica dispersional desses mosquitos, fenômeno que pode ter implicações diretas na transmissão de eventuais doenças veiculadas por esses insetos. / Culex quinquefasciatus is a pantropical synanthropic species of great medical interest. Several attempts to control this species have fail due to its microvelution of resistance to insecticides. In order to detect populational variation indicative of microevolution, two populational samples from State of São Paulo were compared: São Paulo municipality (Park Ecológico do Tietê) and Pariquera-Açú municipality. Biological parameters were wing morphometrics, exochorion micrography and ribosomal DNA. Wings characters revealed shape and size divergencies between populations. Exochorion were also interpopulationally different. Polymorphisms observed may be a result of genetic differentiation. rDNA was homogeneous intra and interpopulationally. Gene flow between populations appears to be reduced, which may be closely related to the dispersional dynamics of these mosquitoes. Such interpretation is relevant to a better understanding of transmission of diseases by these insects.

A espécie Aedes scapularis é um dos culicídeos de grande importância médica. Está distribuída nas Américas e tem grande competência vetora para diversos arbovírus. No estado de São Paulo, há ocorrência de Ae. scapularis em vários municípios, como em Pariquera-Açu e São Paulo. O objetivo desse trabalho foi testar se há diferenciação genética - morfológica entre essas populações, podendo diagnosticar existência de espécies crípticas em Aedes scapularis. As populações estudadas foram Pariquera-Açu (PAR), Parque Ecológico do Tietê em São Paulo (PET) e Butantã (BUT). Os parâmetros utilizados foram: Morfometria geométrica da asa (forma e tamanho), estudo do gene mitocondrial COI, análise dos espaçadores internos transcritos ITS2 e análise morfológica de ovos. Com os resultados obtidos, podemos concluir que a divergência populacional é atestada por padrões geográficos de forma alar, gene mitocondrial COI e razão comprimento e largura dos ovos, mas extensões de estudos em outras áreas precisam ser feitos para poder atestar espécies crípticas em Aedes scapularis. / The species Aedes scapularis is a culicidae of medical importance. It is distributed in the Americas and has a high vector competence for many arboviruses. In state of São Paulo, have occurrence of Ae. scapularis in many cities, such as Pariquera-Acu and the city of São Paulo. The aim of this study was to determine differentiation genetic- morphology among these populations, being able to diagnose the existence of cryptic species in Aedes scapularis. The populations studied were Pariquera-Acu (PAR), the Tietê Ecological Park in Sao Paulo (PET) and Butantã (BUT). The parameters used were: wing geometric morphometry (shape and size), study of mitochondrial gene COI, analysis of internal transcribed spacers ITS2 and morphological analysis of eggs. With these results, we conclude that divergence population is attested by the geographical patterns of wing shape, and COI mitochondrial gene length and width ratio of eggs, but extensions of studies in other areas need to be made in order to attest cryptic species in Aedes scapularis.

Estudos populacionais de Aedes aegypti são de grande importância para o desenvolvimento de estratégias de controle, mas infelizmente o Estado de São Paulo carece desse tipo de estudo. Devido a esse contexto, o objetivo do trabalho foi avaliar a variabilidade genética e fenotípica de 4 populações de Ae. aegypti na área metropolitana de São Paulo. As análises interpopulacionais de forma em ambos os sexos mostraram variabilidade morfológica alar que, no entanto não indica estruturação populacional. Não foi observada correlação entre valores de distância fenética alar e distância geográfica para machos (r =-0,03) e fêmeas (r=0,34). Estruturação populacional foi detectada (Fst global=0,062) e baixo fluxo gênico (Nm=0,47) foi presumido nas quatro localidades. Foi observada correlação entre as distâncias genética e geográfica (r=0,76). Os dois marcadores populacionais aqui empregados aparentemente têm graus de resolução distintos para eventos microevolutivos, tendo sido DNA microssatélite ligeiramente mais sensível para acusar estruturação populacional. / Populational studies of Ae. aegypti are important to develop control strategies, but unfortunately the State of São Paulo lacks such studies. Despite this context, the objective of this work was to evaluate genetic and phenotypic variability of population samples of Ae. aegypti from four collecting sites in the metropolitan area of São Paulo city. The interpopulational analysis of shape for females and males showed morphological variability in wings, but did not indicate population structure. Pairwise fenetic distances among populations were not correlated to the geographic distances for males (r=-0.03) and females (r =0.34). Populational structure was detected (global Fst= 0.062) and low gene flow (Nm= 0.41) was presumed among four locations. Pairwise genetic distances among populations were correlated to the geographic distances (r = 0.76). The two populational markers used here apparently have different degrees of resolution for microevolutionary events, being that microsatellite DNA were slightly more sensitive in revealing populational structure.

Introdução: Várias espécies de culicídeos são vetores de patógenos que causam graves doenças em humanos e outros animais. Objetivos: Investigar a presença e distribuição espacial de insetos vetores na Cidade Universitária, zona Oeste - São Paulo e os fatores ambientais associados a sua ocorrência. Metodologia: A área de estudo foi a Cidade Universitária Armando de Salles Oliveira (CUASO), que foi dividido em quatro partes. As coletas com ovitrampas e adultraps foram realizadas de dezembro de 2013 a novembro de 2014, mensalmente foram sorteados dez pontos de coleta por área, em cada área foram instaladas dez ovitrampas e dez adultraps. As coletas com aspirador ocorreram de janeiro a dezembro de 2014 e mensalmente foram sorteados dois pontos por área para realização das aspirações, totalizando oito pontos de coletas por mês, resultando em 120 minutos/mensal. Todo material coletado foi levado ao Laboratório de Entomologia em Saúde Pública da Faculdade de Saúde Pública da USP para análise. Resultados: De maneira geral as variáveis ambientais influenciaram na presença dos culicídeos coletados. O índice de densidade de ovos sofreu influência significativa da temperatura, enquanto que a pluviosidade afetou mais significativamente a presença do adulto. Em relação à aspiração Culex quinquefasciatus foi a espécie predominante em todas as coletas, seguida de Aedes albopictus e Aedes aegypti. Porém apenas Aedes albopictus e Aedes aegypti apresentaram correlação significativa com as variáveis climáticas. Conclusão: a presença de culicídeos vetores na Cidade universitária foi expressiva praticamente o ano inteiro, tornando esse local um meio propício para propagação de várias arboviroses, necessitando um monitoramento constante da presença desses vetores. / Introduction: Several species of culicidae are vectors of pathogens that cause serious diseases in humans and other animals. Objectives: To investigate the presence and spatial distribution of vector insects in Cidade Universitária, Oeste - São Paulo and the environmental factors associated with its ocurrence. Methodology: The study area was the University City Armando de Salles Oliveira (CUASO), which was divided into four parts. The collections with ovitraps and adultraps were carried out from December 2013 to November 2014, monthly there were drawn ten collection points per area, in each area were installed ten ovitraps and ten adultraps. The collections with eletric aspirators (12V battery) occurred from January to December 2014 and monthly there were drawn two points per area to make the aspirations, totaling eight collection points per month, resulting in 120 minutes / month. All collected material was taken to the Laboratory of Entomology in Public Health of the Faculty of Public Health of USP for analysis. Results: In general the environmental variables influenced the presence of culicids collected. The egg density index was significantly influenced by temperature, while rainfall affected the adult presence more significantly. Regarding aspiration Culex quinquefasciatus was the predominant species in all collections, followed by Aedes albopictus and Aedes aegypti. However, only Aedes albopictus and Aedes aegypti showed a significant correlation with climatic variables. Conclusion: the presence of culicids insects in the University City was expressive practically all year round, making this place a propitious medium for the propagation of several arboviruses, necessitating a constant monitoring of the presence of these vectors.

Vetores lentivirais são ferramentas fundamentais para modificação celular. Sua utilização ganhou destaque devido à capacidade desses em integrar ao genoma de células que estão ou não em divisão. Grande parte dos vetores desenvolvidos são derivados do genoma do Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV-1), portanto, modificações foram necessárias a fim de evitar a formação de Partículas Competentes em Replicação (RCLs) e garantir uma utilização segura. Com as modificações, foram produzidos os vetores lentivirais de terceira geração utilizados atualmente. Esses vetores podem ser usados para expressão constitutiva de genes, produção de proteínas recombinantes, produção de animais transgênicos e terapia gênica. Com isso, torna-se necessário o desenvolvimento de vetores lentivirais para aplicação em pesquisa básica e ensaios clínicos. Dessa forma, o presente estudo teve por objetivo a construção de vetores de expressão lentivirais aplicáveis à: 1- expressão constitutiva de genes de interesse e 2-vetores com promotores específicos para expressão de proteínas em megacariócitos. Esse trabalho descreve a construção desses vetores, sua importância e discute suas possíveis aplicações. As sequências selecionadas para produção dos vetores foram: os genes Runx1C e VkorC1 e os promotores proPF4 e proITGA2b. Todas as sequências encontram-se clonadas em vetor de clonagem e estoques de bactérias com esses vetores congeladas em glicerol foram confeccionados. Para a confecção dos vetores lentivirais, o gene Runx1C foi subclonado no vetor lentiviral base p1054-CIGWS sob controle do promotor forte CMV, enquanto o promotor proITGA2b foi subclonado no vetor base p1054-FVIII, em substituição ao promotor CMV, de forma a controlar a expressão de FVIII. Os dois vetores produzidos apresentam ainda o gene para proteína verde GFP precedida do sítio de ligação do ribossomo IRES, com expressão controlada pelo mesmo promotor interno do vetor. O trabalho possibilitou, portanto, a produção de dois vetores lentivirais bi-cistrônicos: p1054-Runx1C e pL-proITGA2b-FVIII. A construção p1054-Runx1C ainda não foi sequenciada, mas foi confirmada por restrição enzimática e apresenta potencial para aplicação em estudos de diferenciação hematopoética. Já a construção pL-proITGA2b-FVIII foi sequenciada, porém sem confirmação da região de ligação do proITGA2b ao vetor. Reações de PCR e de restrição enzimática confirmaram a ligação e sequenciamento mostrou 67% de similaridade entre a região sequenciada e o promotor ITGA2b depositado no banco de dados. Análise funcional foi realizada através da transfecção desse vetor em células HEK-293T. As células transfectadas apresentaram expressão positiva para GFP e secreção de FVIII no sobrenadante celular, evidenciando que o promotor proITGA2b clonado no vetor encontra-se ativo. Esse vetor apresenta potencial para aplicação em terapia gênica para hemofilias, pois apresenta expressão do fator de coagulação direcionado a megacariócitos e plaquetas, células que estão diretamente relacionadas ao processo de coagulação, representando grandes veículos para secreção desses fatores. Ainda, os dois vetores lentivirais gerados apresentam segurança e eficiência elevadas, pois são vetores de terceira geração auto-inativantes (SIN) e apresentam elementos regulatórios que melhoram o transporte e integração do DNA ao genoma hospedeiro. / Lentiviral vectors are fundamental tools for cell modification that gained prominence due to their ability to integrate the genome of non-dividing cells. Most of developed lentiviral vectors are derived from the genome of Human Immunodeficiency Virus (HIV-1), so modifications were necessary in order to avoid the formation of Competent Replication Particles (RCLs) and ensure safer operations. The modifications led to development of third generation lentiviral vectors currently used. These vectors can be used for constitutive gene expression, production of recombinant protein, production of transgenic animals and gene therapy. It\'s evident the need to develop lentiviral vectors for application in basic research and clinical trials. Thus this study aimed to construct lentiviral expression vectors applicable to: 1- constitutive expression of genes of interest and 2-vectors with specific promoters for expression of proteins in megakaryocytes and platelets. This paper describes the construction of these vectors, their importance and discuss their possible applications. Sequences were selected for production of the vectors: genes Runx1C and VkorC1 and proPF4 and proITGA2b promoters. All four sequences are cloned into cloning vectors and stocks of bacteria with these vectors frozen in glycerol were prepared. Lentiviral vectors were engineered from subcloning the sequence Runx1C into the basic lentiviral vector p1054- CIGWS under control of the strong CMV promoter, and from subcloning proITGA2b promoter into p1054-FVIII basic vector, replacing the CMV promoter in order to control the expression of FVIII. Both vectors exhibit the green fluorescence protein GFP gene preceded by a ribosome binding site IRES under control of vector\'s internal promoter. Therefore, this work resulted in the production of two bi-cistronic lentiviral vectors: p1054-Runx1C and pLproITGA2b-FVIII. The p1054-Runx1C construction has not yet been sequenced, but it was confirmed by digestion and has potential for use in hematopoietic differentiation studies. Though, pL-proITGA2b-FVIII construct was sequenced, but the technique didn\'t allow to confirm the binding region between proITGA2b and the vector. Although PCR reaction and digestion confirmed the construction. Sequence analysis showed 67% similarity between the sequenced region and ITGA2b promoter deposited in the database. Functional analysis was performed by transfection of this vector in HEK-293T cells. The transfected cells showed positive expression of GFP and FVIII secretion in cell supernatant, indicating that the proITGA2b promoter cloned into the vector is active. This vector has potential usage in gene therapy for hemophilia, since it can be used to express coagulation factors in megakaryocytes and platelets and these cells are directly related to the clotting process, representing great vehicles for secretion of these factors. Even more, the two lentiviral vectors generated have higher safety and efficiency, as they are self-inactivating (SIN) third-generation vectors and have regulatory elements that enhance transport and integration of DNA into the host genome.

Introdução: Conhecer e monitorar fatores associados a transmissão de arboviroses são um grande desafio para os gestores de saúde pública e também uma necessidade para regiões onde há registro da circulação de arbovírus e a presença de vetores. Objetivos: Identificar os principais grupos de recipientes que podem se tornar ou são criadouros de mosquitos vetores no Município de São Paulo e verificar se os mesmos sofrem influências de fatores sazonais e socioeconômicos em sua distribuição. Método: Foram levantados dados das inspeções realizadas nas atividades de vigilância e controle de Aedes aegypti no período de 2012-2016, por Supervisão Técnica de Saúde e para o município. Em seguida foram construídos grupos de recipientes para avaliar predominância nas diferentes condições de encontro (existente, com água, com larva). Os indicadores gerados foram utilizados para testar diferenças significativas das frequências entre as estações do ano e analisar correspondência entre incidência de casos dengue e predominância de grupos de criadouros. Posteriormente, foi realizada análise de agrupamento por fatores socioeconômicos para identificar diferenças na distribuição dos grupos de recipientes. Para as análises de variância foi utilizado o teste não paramétrico de Kruskal-Wallis. Resultados: O grupo de recipientes móveis foi o potencial criadouro mais frequente em todos os anos, seguido dos grupos planta e pneus. Móvel e planta foram os criadouros mais frequentes para o município. O grupo móveis, apesar de numeroso, não foi o mais colonizado. Por outro lado, os depósitos para armazenamento de água tiveram baixa frequência, porém alta proporção de colonização. A sazonalidade influenciou na distribuição de recipientes com água e com larva, sendo que as maiores frequências ocorreram no verão e outono. A proporção de imóveis tendo recipientes com água aumentou de acordo com o tempo, principalmente em 2015. O grupo que teve maior incremento do índice nesse período foi o de depósito não ligado à rede. Foram gerados cinco grupos de STS por condições socioeconômicas, nos quais houve diferenças no padrão de distribuição de potenciais criadouros e criadouros. Regiões com melhor condição socioeconômica apresentaram menor frequência dos indicadores, mas não necessariamente menor risco de transmissão de dengue no período avaliado. Conclusões: Os principais grupos de criadouros mais frequentes no Município de São Paulo dentro do período analisado foram os de menor tamanho, principalmente os do tipo móvel. Reservatórios de maior tamanho e destinados ao armazenamento de água demonstraram importância na proporção de colonização e tiveram sua frequência aumentada no período da crise hídrica do abastecimento. Fatores sazonais e condições socioeconômicas influenciaram a distribuição de criadouros em São Paulo. Para melhor direcionamento das ações de prevenção e controle de vetores, analises sistemáticas e continuas por regiões devem ser realizadas. / Introduction: Knowing and controlling factors associated with arbovirus transmission is a major challenge for public health managers, but it is necessary for regions where arbovirus circulation and the presence of vectors are present. Objectives: To identify the main groups of containers that can become or are breeding sites of mosquito vectors in the São Paulo Municipality and verify if their distribution are influenced by seasonal and socioeconomic factors. Method: Data were collected from the inspections carried out in the surveillance and control activities of Ae. aegypti in the period 2012-2016, by Health Technical Supervision and county. Groups of containers were then created to evaluate predominance in the different checked conditions (existing, with water, with larvae). The generated indicators were used to test significant differences of the frequencies between the seasons of the year and to analyze correspondence between incidence of dengue cases and predominance of breeding sites groups. After, a socioeconomic grouping analysis was performed to identify differences in the distribution of groups of recipients. The Kruskal-Wallis non-parametric test was used for the variance analysis. Results: The group of mobile containers was the most frequent potential breeding site in all the years, followed by container plants and tires groups. Mobile and plant were the most frequent breeding sites for the county. The mobile group, although numerous, was not the most colonized. On the other hand, deposits for water storage had a low frequency, but a high proportion of colonization. Seasonality influenced the distribution of water and larvae containers, with the highest frequencies occurring in summer and fall. The proportion of buildings having containers with water increased over time, especially in 2015. The group that had the largest increase in the index in this period was the deposit not connected to the water supply network. Five Health Technical Supervision groups were generated by socioeconomic conditions, in which there were differences in the pattern of distribution of potential breeding sites and breeding sites for mosquitoes. Regions with better socioeconomic status had lower frequency of indicators, but not necessarily a lower risk of dengue transmission in the period evaluated. Conclusions: The main breeding sites groups most frequent in the city of São Paulo during the analyzed period were the smaller groups, mainly those of the mobile type. Larger reservoirs destined to water storage showed importance in the proportion of colonization and had their frequency increased in the period of the water supply crisis. Seasonal factors and socioeconomic conditions influenced the distribution of breeding sites in. To better target vector prevention and control actions, systematic and continuous analyzes by regions should be performed.