Recentemente, tem se percebido um interesse maior da área de computação pela pesquisa em análise de gestos. Parte dessas pesquisas visa dar suporte aos pesquisadores da área de \"estudos dos gestos\", que estuda o uso de partes do corpo para fins comunicativos. Pesquisadores dessa área analisam gestos a partir de transcrições de conversas ou discursos gravados em vídeo. Para a transcrição dos gestos, geralmente realiza-se a sua segmentação em unidades gestuais e fases. O presente trabalho tem por objetivo desenvolver estratégias para segmentação automatizada das unidades gestuais e das fases dos gestos contidos em um vídeo no contexto de contação de histórias, formulando o problema como uma tarefa de classificação supervisionada. As Máquinas de Vetores Suporte foram escolhidas como método de classificação, devido à sua capacidade de generalização e aos bons resultados obtidos para diversos problemas complexos. Máquinas de Vetores Suporte, porém, não consideram os aspectos temporais dos dados, características que são importantes na análise dos gestos. Por esse motivo, este trabalho investiga métodos de representação temporal e variações das Máquinas de Vetores Suporte que consideram raciocínio temporal. Vários experimentos foram executados neste contexto para segmentação de unidades gestuais. Os melhores resultados foram obtidos com Máquinas de Vetores Suporte tradicionais aplicadas a dados janelados. Além disso, três estratégias de classificação multiclasse foram aplicadas ao problema de segmentação das fases dos gestos. Os resultados indicam que um bom desempenho para a segmentação de gestos pode ser obtido ao realizar o treinamento da estratégia com um trecho inicial do vídeo para obter uma segmentação automatizada do restante do vídeo. Assim, os pesquisadores da área de \"estudos dos gestos\" poderiam segmentar manualmente apenas um trecho do vídeo, reduzindo o tempo necessário para realizar a análise dos gestos presentes em gravações longas. / Recently, it has been noted an increasing interest from computer science for research on gesture analysis. Some of these researches aims at supporting researchers from \"gesture studies\", which studies the use of several body parts for communicative purposes. Researchers of \"gesture studies\" analyze gestures from transcriptions of conversations and discourses recorded in video. For gesture transcriptions, gesture unit segmentation and gesture phase segmentation are usually employed. This study aims to develop strategies for automated segmentation of gestural units and phases of gestures contained in a video in the context of storytelling, formulating the problem as a supervised classification task. Support Vector Machines were selected as classification method, because of its ability to generalize and good results obtained for many complex problems. Support Vector Machines, however, do not consider the temporal aspects of data, characteristics that are important for gesture analysis. Therefore, this paper investigates methods of temporal representation and variations of the Support Vector machines that consider temporal reasoning. Several experiments were performed in this context for gesture units segmentation. The best results were obtained with traditional Support Vector Machines applied to windowed data. In addition, three strategies of multiclass classification were applied to the problem of gesture phase segmentation. The results indicate that a good performance for gesture segmentation can be obtained by training the strategy with an initial part of the video to get an automated segmentation of the rest of the video. Thus, researchers in \"gesture studies\" could manually segment only part of the video, reducing the time needed to perform the analysis of gestures contained in long recordings.

Os afídeos são importantes pragas na agricultura, principalmente por serem vetores de fitovírus, os quais são transmitidos geralmente no momento da picada de prova. Além disso, os afídeos também removem os aminoácidos nitrogenados das plantas ao se alimentarem no floema e injetam substâncias presentes na saliva, que interferem na fisiologia da planta. Entre as táticas de controle para o manejo integrado desses insetos, pode-se citar o emprego de inseticidas químicos ou botânicos e o uso de produtos repelentes que tornam as plantas pulverizadas não atrativas, evitando que pulgões pousem e se alimentem normalmente da planta. Nesse contexto, objetivou-se estudar a bioatividade de extratos orgânicos das Meliaceae Trichilia pallida, Trichillia claussenii,Trichilia catigua, Toona ciliata e Guarea guidonia e dos óleos essenciais das Piperaceae Piper amalago, Piper umbellatum, Piper claussenianum e Piper sp. em relação a pulgões, utilizando como espécie-modelo R. maidis. Os extratos orgânicos das Meliaceae foram obtidos, por maceração, com o uso dos solventes hexano, diclorometano e etanol, nessa sequência de extração. O extrato hexânico de T. pallida foi o que apresentou a maior atividade aficida, sendo então selecionado para fracionamento por cromatografia de coluna rápida utilizando, sequencialmente, os solventes hexano, acetato de etila e metanol. Entre as frações, a hexânica causou a maior mortalidade, sendo selecionada para a determinação dos modos de ação sobre R. maidis. A referida fração não apresentou ação de contato e nem ação neurotóxica; entretanto, foi constatada ação translaminar. No ensaio com Electrical Penetration Graph - EPG, os insetos apresentaram maior dificuldade para se alimentar. Entre as Piperaceae, a maior repelência e mortalidade a R. maidis foi causada por P. claussenianum, cujo óleo essencial foi então selecionado para os testes subsequentes. Sua atividade inseticida ocorreu por contato, causando rápida mortalidade, acreditandose, assim, tratar-se de um efeito neurotóxico; não foi constatado, entretanto, efeito fumigante. Quanto às alterações comportamentais, constatou-se efeito repelente sobre alados por meio de teste com olfatômetro e o efeito fagodeterrente com uso do EPG. Com base nos resultados, conclui-se que entre os extratos orgânicos e óleos essenciais testados, a fração hexânica do extrato hexânico de T. pallida apresenta substâncias com atividade inseticida sobre R. maidis, sendo uma possível fonte para síntese de novos inseticidas e que o óleo essencial de P. claussenianum pode ser utilizado diretamente no controle de pulgões ou servir de fonte para a identificação de moléculas inseticidas para a síntese. / Aphids are important pests in agriculture mainly because they are vectors of phytovíruses, which are normally transmitted during the aphids probe. In addition, aphids not only remove amino-nitrogen from the plants while feeding in the phloem but also inject substances present in their saliva, which interfere in plant physiology. Among the strategies for the integrated management of these insects, we can state the use of chemical or botanical insecticides as well as repellents which turn the plants into nonattractive ones, thus avoiding that aphids land and feed normally from the plant. Therefore, we studied the bioactivity of organic extracts from the Meliaceae plants Trichilia pallida, Trichilia claussenii, Trichilia catigua, Toona ciliata and Guarea guidonia and essential oils from the Piperaceae plants Piper amalago, Piper umbellatum, Piper claussenianum and Piper sp. against aphids, using R. maidis as a model species. Organic extracts from Meliaceae were obtained by maceration technique using hexane, dichloromethane and ethanol solvents, in this sequence of extraction. Hexanic extract from T. pallida provoked the highest activity against aphids being chosen for the fractionation using a chromatographic column with fast flow and using hexane, ethyl acetate and methanol solvents, in this sequence. Hexanic fraction provoked the highest mortality among the fractions evaluated being chosen in order to understand its modes of action on R. maidis. This fraction had neither mode of action by contact nor neurotoxic action; however, its translaminar action was proved. Using the Electrical Penetration Graph - EPG, we observed that most of the insects had difficulty to feed themselves. Among the Piperaceae plants, the highest repellency and mortality of R. maidis was caused by P. claussenianum which was selected for the subsequent assays. Its insecticidal activity occurred through contact causing a fast mortality perhaps due to a neurotoxic effect. Nevertheless, a fumigant effect was not observed. With regard to behavioral changes, a repellent effect was proven on alates through olfactometer assay and a phagodeterrent effect was proven using EPG assay. According to the results, we concluded that among the organic extracts and essential oils evaluated, the hexanic fraction from hexanic extract from T. pallida contains substances with insecticidal activity against R. maidis being a potential source for synthesis of new insecticides while the essential oil from P. claussenianum may be used both to control aphids and to be a source for identification of insecticidal molecules aiming their synthesis.

Diversos problemas envolvem a classificação de dados em categorias, também denominadas classes. A partir de um conjunto de dados cujas classes são conhecidas, algoritmos de Aprendizado de Máquina (AM) podem ser utilizados na indução de um classificador capaz de predizer a classe de novos dados do mesmo domínio, realizando assim a discriminação desejada. Dentre as diversas técnicas de AM utilizadas em problemas de classificação, as Máquinas de Vetores de Suporte (Support Vector Machines - SVMs) se destacam por sua boa capacidade de generalização. Elas são originalmente concebidas para a solução de problemas com apenas duas classes, também denominados binários. Entretanto, diversos problemas requerem a discriminação dos dados em mais que duas categorias ou classes. Nesta Tese são investigadas e propostas estratégias para a generalização das SVMs para problemas com mais que duas classes, intitulados multiclasses. O foco deste trabalho é em estratégias que decompõem o problema multiclasses original em múltiplos subproblemas binários, cujas saídas são então combinadas na obtenção da classificação final. As estratégias propostas visam investigar a adaptação das decomposições a cada aplicação considerada, a partir de informações do desempenho obtido em sua solução ou extraídas de seus dados. Os algoritmos implementados foram avaliados em conjuntos de dados gerais e em aplicações reais da área de Bioinformática. Os resultados obtidos abrem várias possibilidades de pesquisas futuras. Entre os benefícios verificados tem-se a obtenção de decomposições mais simples, que requerem menos classificadores binários na solução multiclasses. / Several problems involve the classification of data into categories, also called classes. Given a dataset containing data whose classes are known, Machine Learning (ML) algorithms can be employed for the induction of a classifier able to predict the class of new data from the same domain, thus performing the desired discrimination. Among the several ML techniques applied to classification problems, the Support Vector Machines (SVMs) are known by their high generalization ability. They are originally conceived for the solution of problems with only two classes, also named binary problems. However, several problems require the discrimination of examples into more than two categories or classes. This thesis investigates and proposes strategies for the generalization of SVMs to problems with more than two classes, known as multiclass problems. The focus of this work is on strategies that decompose the original multiclass problem into multiple binary subtasks, whose outputs are then combined to obtain the final classification. The proposed strategies aim to investigate the adaptation of the decompositions for each multiclass application considered, using information of the performance obtained for its solution or extracted from its examples. The implemented algorithms were evaluated on general datasets and on real applications from the Bioinformatics domain. The results obtained open possibilities of many future work. Among the benefits observed is the obtainment of simpler decompositions, which require less binary classifiers in the multiclass solution.

A cultura do tomateiro (Solanum lycopersicum L.) é importante mundialmente devido ao alto consumo de seus frutos. Nos últimos anos surgiram nesta cultura no Brasil alguns vírus emergentes com altas taxas de disseminação, como begomovírus e crinivírus, transmitidos pela Bemisia tabaci biótipo B, que podem causar danos à produção do tomateiro. A espécie de begomovírus atualmente mais encontrada no Brasil, em plantios de tomateiro, é o Tomato severe rugose virus (ToSRV). De 2002 a 2004, pesquisadores relataram incidências desse vírus em mais da metade das amostras com sintomas de geminiviroses coletadas em vários estados brasileiros e sua presença continua sendo verificada frequentemente. No ano de 2006, um crinivírus, o Tomato chlorosis virus (ToCV), foi relatado no Brasil, infectando plantas de tomate no Estado de São Paulo e atualmente encontra-se presente em diveros estados brasileiros. Os objetivos desse trabalho foram: determinar os períodos mínimos de acesso à aquisição e à inoculação do ToSRV e do ToCV pela B. tabaci biótipo B; identificar o período de retenção do ToSRV no inseto e a interação do ToSRV e do ToCV na aquisição e na transmissão por esse aleirodídeo. Também foi avaliada a eficiência do inseticida cloridrato de cartape no controle da disseminação primária e secundária do ToSRV pela B. tabaci biótipo B em tomateiros em gaiolas em casa de vegetação. Finalmente avaliou-se a eficiência do aleirodídeo Trialeurodes vaporariorum na transmissão de um isolado brasileiro do ToCV. Os períodos mínimos de acesso à aquisição e à inoculação de ambos os vírus pela B. tabaci biótipo B foram de cinco minutos. O tempo de retenção do ToSRV em B. tabaci biótipo B foi de 25 dias. A eficiência de um único adulto de B. tabaci na transmissão simultânea do ToSRV e do ToCV para tomateiros foi de 44,7%, similar àquela da transmissão isolada do ToRSV (47,4%) e do ToCV (44,7%). A eficiência de T. vaporariorum na transmissão do ToCV foi inferior à da B. tabaci biótipo B. Usando 40 insetos por vaso com duas plantas as eficiências de transmissão foram 57,7% e 100%, respectivamente. O inseticida cloridrato de cartape reduziu a infecção secundária do ToSRV pela B. tabaci biótipo B, mas não foi eficiente para reduzir a infecção primária em tomateiros. / Tomato (Solanum lycopersicum) is one of the leading vegetables grown and consumed in Brazil and in the world, after potato. The importance of tomato is related to its high consumption worldwide and also its nutritive value. Presently the most important virus diseases responsible for yield losses on tomato crops in Brazil are those caused by begomovirus and crinivirus, both transmitted by Bemisia tabaci biotype B. At the moment the prevalent species of begomovirus is Tomato severe rugose virus (ToSRV). From 2002 to 2004, researchers reported incidence of this virus in more than half of the symptomatic tomato samples collected in several Brazilian states. In 2006, a crinivirus, Tomato chlorosis virus (ToCV), was reported for the first time in Brazil, infecting tomato plants in the State of São Paulo and at present the virus occurs in several Brazilian states. The objectives of this study were to determine the minimum acquisition and inoculation access periods of ToSRV and ToCV by B. tabaci biotype B; identify the retention period of ToSRV in the insect; and the interaction of ToSRV and ToCV on the transmission by this aleyrodidae. It was also evaluated the effectiveness of the insecticide cartap hydrochloride in controlling the primary and secondary spread of ToSRV by B. tabaci biotype B on tomato plants in a greenhouse. Finally, it was evaluated the efficiency of Trialeurodes vaporariorum in the transmission of a Brazilian isolate of ToCV. The minimum acquisition and inoculation access periods for both viruses by B. tabaci biotype B were five minutes. The maximum retention time of ToSRV in B. tabaci biotype B was 25 days. The efficiency of a single adult of B. tabaci to simultaneously transmit ToSRV and ToCV to tomato plants was 44.7%, similar to the transmission of ToRSV (47.4%), and ToCV (44.7%) separately. T. vaporariorum was less efficient than B. tabaci on the transmission of ToCV. Using 40 insects per pot with two plants, transmission efficiencies were 57.7% and 100%, respectively. The insecticide cartap hydrochloride reduced secondary infection of ToSRV transmitted by B. tabaci biotype B, but was not effective in reducing the primary infection in tomato.

O psilídeo Diaphorina citri é vetor das bactérias Candidatus Liberibacter asiaticus e Ca. L. americanus, associadas ao Huanglongbing (HLB) dos citros. Apesar da grande importância desta doença no mundo, sabe-se pouco sobre a atividade alimentar deste vetor, o que seria fundamental para entender o processo de transmissão desses patógenos e aprimorar estratégias de manejo da doença. Assim, esta pesquisa teve por objetivos: a) examinar aspectos morfológicos do aparato bucal de D. citri; b) caracterizar o seu comportamento alimentar em mudas de laranja doce (Citrus sinensis) através da técnica de Electrical Penetration Graph (EPG)-sistema DC; e c) avaliar o efeito da idade de folhas cítricas na penetração estiletar deste inseto e na eficiência de aquisição de Ca. L. asiaticus. Adultos de D. citri apresentam um rostro que se projeta logo após o par de coxas protoráxicas. Verificou-se que na extremidade distal desta estrutura há quatro pares de sensilas em simetria bilateral. O rostro abriga um feixe de quatro estiletes (2 mandíbulas e 2 maxilas) com comprimento médio de 512 µm. Os estiletes maxilares se acoplam formando os canais alimentar e salivar com diâmetros de 0,90 µm e 0,47 µm, respectivamente; esses dois canais se fundem próximo à extremidade distal de uma das maxilas para formar um canal comum, que se estende por, aproximadamente, 4,1 µm. No estudo de EPG, as formas de onda foram descritas quanto à amplitude, frequência, nível de voltagem e origem elétrica, sendo correlacionadas com atividades estiletares baseando-se em análises histológicas da posição da extremidade distal da bainha salivar no tecido vegetal e semelhanças com outras formas de onda descritas para afídeos. Cinco formas de onda foram descritas: (C) penetração intercelular no parênquima; (D) contato com o floema; (E1) salivação no floema; (E2) ingestão no floema; e (G) ingestão no xilema. Com um tempo médio de 206,1 min em 8 h de registro, a ingestão no floema (E2) é a principal atividade observada em D. citri. O tempo médio para atingir o floema desde a primeira prova é de 154 min, após 20,3 provas. D. citri mostra nítida preferência por folhas novas da porção superior da planta (71,3% dos indivíduos), e pela nervura principal na face abaxial das folhas (87,1%). Cortes histológicos revelam que folhas maduras apresentam lignificação nas paredes de células que compõem a camada de fibras, tecido que antecede o feixe floemático; já as folhas novas não apresentam esse espessamento, favorecendo o caminhamento estiletar rumo ao floema. Adultos de D. citri adquirem Ca. L. asiaticus com maior eficiência em folhas novas (assintomáticas) do que em folhas maduras (sintomáticas) de plantas infectadas. Aplicando-se a técnica de EPG, verificou-se que as folhas novas favorecem a alimentação floemática de D. citri; quase que a totalidade dos indivíduos avaliados sobre folhas novas assintomáticas encontraram o floema e permaneceram por mais tempo neste tecido, o que não foi constatado sobre folhas maduras sintomáticas. Esta pesquisa mostra que o comportamento alimentar de D. citri é influenciado pela idade das folhas cítricas, com implicações sobre a eficiência de aquisição da bactéria. / The Asian citrus psyllid, Diaphorina citri, is the vector of the phloem-limited bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus and Ca. L. americanus, which are associated to the serious disease known as Citrus Huanglongbing (HLB). Despite the importance of this disease worldwide, little is known about the feeding activities of the vector, which is essential to understand transmission mechanisms and establish disease management strategies. Thus, the goals of this research were to examine the morphology of D. citri mouth apparatus, to characterize its probing behavior on sweet orange (Citrus sinensis) seedlings by using the Electrical Penetration Graph (EPG)-DC technique, and to assess the effect of citrus leaf age on the stylet penetration and efficiency of acquisition of Ca. L. asiaticus. D. citri shows a coneshaped rostrum that extends itself to behind the prothoracic pair of thighs. By electron microscopy, we found four pairs of sensilla symmetrically distributed on the distal end of the rostrum. The rostrum houses a stylet bundle comprised of two mandibulae and two maxillae with mean length of 512 µm. The two maxillary stylets are hold together and have internal grooves that form the food and salivary duct, with mean diameters of 0.9 and 0.47 µm, respectively. These two canals merge at a distance of 4.1 µm from the distal tip of the stylets, forming a common duct. In the EPG study, waveforms were described according to characteristics of amplitude, frequency, voltage level and electrical origin, and correlated with stylet activities based on histological analysis of salivary sheath termini in the plant tissue and similarities with EPG waveforms previously described for aphids. Five distinct waveform types were described: (C) intercellular stylet pathway through parenchyma, (D) phloem contact, (E1) salivation in the phloem sieve tubes, (E2) phloem sap ingestion, and (G) in xylem sap ingestion. Phloem sap ingestion (E2) is the main activity observed for D. citri, with an average time of 206.1 min in 8 h of recordings. Mean time to reach sieve tubes from the first probe is 154 min, after 20.3 probes. This insect shows a clear preference for young leaves of the upper portion of the plant (71.3% of the individuals), and main vein on the abaxial leaf surface (87.1%). Mature leaves show lignification in cell walls of the fiber layer adjacent to the phloem. In contrast, young leaves do not show cell wall thickening in this fiber layer, favoring stylet pathway towards the phloem. Adults of D. citri acquired L. Ca asiaticus with greater efficiency on young (asymptomatic) leaves than in mature (symptomatic) leaves from infected plants. Applying the EPG technique, it was found that young asymptomatic leaves favor phloem feeding by D. citri, since most individuals reached phloem sieve tubes and remained longer in this tissue; this was not the case for individuals confined on mature symptomatic leaves. This study shows that feeding behavior of D. citri is influenced by citrus leaf age, with implication on efficiency of bacterial acquisition from infected plants.

Introdução: Assentamentos rurais são recorrentes arranjos sociais em expansão na Região Amazônica, que geram perturbações no ambiente natural e na respectiva ecologia de mosquitos vetores envolvidos na transmissão de malária. Objetivos: Elaborar revisão das espécies do gênero Anopheles que foram registradas na Região Amazônica. Para a pesquisa quantitativa, estabelecer potenciais fatores dos ambientes e das características das águas de diversos habitats larvais que possam estar associadas com a presença de espécies de anofelíneos, através de coletas em criadouros de diferentes graus de perturbação ambiental. Métodos: para a revisão das espécies que foram registradas na Amazônia, foram empregados termos de busca, utilizando sete bases bibliográficas de referência. Para os estudos em campo, foram realizadas capturas de larvas juntamente com estimação e mensuração de algumas condições dos habitats larvais, para comparação dos parâmetros analisados entre ambientes naturais e artificiais. Resultados: a revisão mostrou maior quantidade de artigos que notificaram a ocorrência do subgênero Nyssorhynchus, seguido pelos subgêneros: Anopheles, Stethomyia, Kerteszia e Lophopodomyia. O Anopheles darlingi se mostrou a espécie com maior ocorrência nos artigos levantados, muito pelo seu caráter epidemiológico. Importantes vetores auxiliares pertencentes ao subgênero 6 Nyssorhynchus também foram registrados em grande quantidade. Os resultados das análises conduzidas com os dados das capturas em campo demonstraram que as forças de transformação do ambiente natural favorecem o desenvolvimento de habitats larvais de espécies do subgênero Nyssorhynchus, incluindo o An. darlingi, além de um importante vetor secundário, o An. triannulatus. Discussão e Conclusão: projetos de assentamentos na Amazônia brasileira registram índices significativos de casos de malária, devido à ocupação de áreas naturais pelo homem. Este estudo mostrou que o subgênero Nyssorhynchus possui amplo registro na literatura de inquéritos entomológicos do gênero na floresta tropical equatorial, indicando que o agrupamento pode ser considerado endêmico às fronteiras de transformação na região, tendo assim importante papel na manutenção da transmissão da malária. Os estudos de campo apresentaram evidências de que formação de habitats artificiais favorecem formas iniciais de vida dos mosquitos com histórico vetorial para a região. Esses habitats larvais podem ser respostas ao uso do solo e das consequentes alterações provocadas no ambiente natural pelas atividades humanas. As modificações do ambiente natural selecionam e propiciam a formação de habitats para as espécies do Nyssorhynchus. Este agrupamento taxonômico engloba espécies que são consideradas vetores para a malária na região Neotropical. / Introduction: Rural settlements are recurrent social arrangements expanding in the Amazon region, which generate disturbances in the natural environment, affecting the mosquitoes ecology involved in malaria transmission. Objective: A systematic review of Anopheles species were recorded in the Amazon region. For the qualitative research, were establish potential factors of the environment and the characteristics of the waters of several larval habitats that may be associated with the presence of species of Anopheles mosquitoes, by surveys of the samples presents in larval habitats within environmental disturbance gradient. Methods: for the review of the species, were used search terms, in seven bibliographic databases of reference. For studies in the field, larvae were trapped along estimation and measurement of some conditions of the larval habitats, to compare the parameters analyzed between natural and artificial environments. Results: The review showed greater amount of articles that reported the occurrence of Nyssorhynchus subgenre, followed by: Anopheles, Stethomyia, Kerteszia and Lophopodomyia. The Anopheles darlingi proved the species with the highest occurrence in the papers showed, due to its epidemiological importance. Important auxiliary vectors belonging to the subgenus Nyssorhynchus were also recorded in large scale. The results of the qualitative shown that the natural 8 environment transformation forces favor the development of larval habitats of the species of subgenus Nyssorhynchus, including An. darlingi and an important secondary vector, An. Triannulatus. Discussion and Conclusion: settlement projects in the Brazilian Amazon recorded significant rates of malaria cases. This study showed that, the Amazon basin an important determinant of this phenomenon is the formation of artificial habitats that are occupied by early forms of life of mosquito vectors. These larval habitats may be answers to land use and consequent changes in the natural environment caused by human activities. Modifications to the natural environment select and provide the formation of habitats for species in Nyssorhynchus. This taxonomic group includes species that are considered vectors for malaria in the Neotropics. Discussion and Conclusion: settlement projects in the brazilian Amazon recorded significant rates of malaria cases. This study showed that the review of the literature shows Nyssorhynchus subgenre ample record in entomological surveys in the equatorial rainforest, indicating that the group may be considered endemic to the borders of transformation in the region, and thus important role in the maintenance of malaria transmission. Field studies showed evidence that formation of artificial habitats favor early forms of the mosquito vector, with history for malaria in the region. These larval habitats may be answers to land use and consequent changes in the natural environment caused by human activities. Modifications to the natural environment select and provide the formation of habitats for species in Nyssorhynchus.

Os agroecossistemas consistem em complexas relações tróficas entre plantas, herbívoros, e seus inimigos naturais. Sabe-se que a maioria das plantas é capaz de produzir compostos voláteis, utilizados como sinais químicos por diferentes grupos de insetos. Esses voláteis podem ser produzidos de forma constitutiva em plantas sadias, ou seja, sem indução. Por outro lado, a produção de voláteis induzidos se dá a partir do contato de secreções liberadas pelo fitófago com injurias ocasionadas pela alimentação ou oviposição no tecido vegetal. Para os fitófagos esses voláteis podem sinalizar a presença da planta hospedeira, bem como a presença de coespecíficos e do parceiro sexual. Já para os inimigos naturais, predadores e parasitóides, os voláteis induzidos podem sinalizar a presença do inseto fitófago (presa/ hospedeiro) na planta. Nesse contexto as respostas comportamentais de Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae), aos voláteis de plantas de murta, Murraya paniculata (L.) Jack (Rutaceae), infestadas ou não por coespecíficos, foram estudadas. Também foram investigadas as respostas dos psilídeos aos voláteis de plantas de Citrus sinensis (L.) Osbeck (Rutaceae) infectadas por bactérias causadoras do Huanglongbing ou HLB, uma das mais sérias doenças dos citros. Nos bioensaios visando compostos repelentes a D. citri, foram testados os voláteis de plantas de goiaba, Psidium guajava L.(Myrtaceae) e sua interferência na localização de plantas de Citrus limonia (L.) Osbeck (Rutaceae) pelos psilídeos. As respostas comportamentais foram mensuradas em olfatômetro Y e de quatro vias. Antes de estabelecer os bioensaios de olfatometria foram realizados estudos do comportamento sexual de D. citri. Os resultados obtidos evidenciaram que o início da atividade sexual de D. citri ocorreu entre o segundo e terceiro dia após a emergência, e que os psilídeos foram mais ativos durante a fotofase. Quanto às influências dos voláteis de plantas, machos e fêmeas de D. citri responderam diferentemente aos mesmos estímulos olfativos. Assim, os machos foram atraídos apenas aos odores associados às fêmeas. Já as fêmeas, foram atraídas aos odores das plantas, porém, evitando os odores associados aos machos, inclusive de plantas previamente infestadas por estes. Verificou-se também, que os adultos de D. citri distinguiram os voláteis de citros com HLB dos voláteis de plantas saudáveis. Sendo assim, ficou nítida a atratividade dos voláteis de plantas infectadas, tanto aos psilídeos machos quanto às fêmeas. Na busca por compostos repelentes, também foi possível demonstrar que os voláteis de P. guajava não somente dificultou à localização de plantas de C. limonia por D. citri, como também repeliram os psilídeos. As descobertas aqui apresentadas poderão auxiliar a elaboração de novas táticas para o manejo comportamental de D. citri. / The agro-ecosystems consist of complex trophic relationships between plants, herbivores and their natural enemies. It is known that the majority of plants can produce volatiles compounds used as chemical signals by different groups of insects. These compounds can be produced constitutively in healthy plants, i.e., without induction. In other hand, the production of induced volatiles occurs from the contact of secretions released by phytophagous with injuries caused by feeding or oviposition in plant tissue. For phytophagous, these volatile compounds may signal the presence of the host plant, as well as the presence of conspecifics and the sexual partner. Although, natural enemies, predators and parasitoids, the induced volatiles can signal the presence of phytophagous insects (prey / host) in the plant. In this context, the behavioral responses of Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae) to plant volatiles of jasmine, Murraya paniculata (L.) Jack (Rutaceae) infested or not by conspecifics, were studied. It was also investigated the responses of psyllids to volatiles of Citrus sinensis infected by bacteria that cause the huanglongbing or HLB, one of the most serious diseases of citrus. Given the studies that aim to identify repellent compounds to D. citri, it was tested plant volatiles of guava, Psidium guajava L. (Myrtaceae) and their impact on plant location of Citrus limonia (L.) Osbeck (Rutaceae) by psyllids. Behavioral responses were measured by Y-tube and four-way olfactometers. Before establishing the olfactometry assays, studies of D. citri sexual behavior were performed. The obtained results showed that the beginning of D. citri sexual activities occurred between the second and third days after emergence, and the psyllids were more active during the photophase. In regard to the effects of plant volatiles, males and females of D. citri differently responded to the same olfactory stimuli. Thus, males were attracted only to odors associated with females. Females were attracted to plant odors, although they avoided odors associated with males, including plants previously infested by them. It was also verified that D. citri adults distinguished volatiles citrus with HLB from volatiles released by healthy plants. Given that, it was clear that volatiles from infected plants were attractive to both males and females psyllids. In search of repellent compounds, also was possible demonstrated that P. guajava volatiles not only hindered the location of plants of C. limonia by D. citri, but also provided repellent effect to psyllids. The findings presented here may help the development of new tactics for the behavioral management of D. citri.

A imunoterapia utilizando linfócitos T modificados com receptor quimérico de antígenos (CAR) tem se mostrado eficaz no tratamento de leucemia e linfomas resistentes à quimioterapia. A proteína CD19 é considerada um alvo ideal porque é expressa na maioria dos tumores de linfócitos B e linfócitos B normais, mas não em outras células. Estudos clínicos recentes mostraram excelentes respostas de linfócitos T-CAR em uma variedade de tumores de células B. Os vetores lentivirais são o método mais comumente utilizado para modificação genética em ensaios clínicos. Este estudo teve como objetivo desenvolver uma plataforma eficiente para a produção de lentivírus e testar a funcionalidade desses vetores para que possam ser usados para modificar geneticamente linfócitos T. A transfecção transiente de céulas HEK293T com plasmídeos na proporção de 3:1:1:1 (transgene:gag-pol:VSV-G:rev) utilizando lipossomos catiônicos e 5 mM de butirato de sódio resultou nos títulos virais mais elevados. Isso representa um aumento de 17 vezes no título viral da transfecção com polietilenoimina (PEI). Três métodos para concentracao lentiviral foram utilzados nesse trabalho, ultracentrifugação, filtração tangencial e ultrafiltração. A ultrafiltração sobre membrana com corte de peso molecular (MWCO) de 100 kDa resultou na maior taxa de recuperação de partículas virais viáveis, aproximadamente 82%. As partículas virais produzidas por este processo demonstraram ser funcionais para a transdução de linfócitos T. Além disso, o receptor quimérico (CAR) se mostrou específico contra o antígeno CD19 de células B, resultando na ativação dos linfócitos T-CAR e gerando citotoxicidade contra células CD19+ in vitro. Houve uma redução de aproximadamente 87% das células alvo, quando analisado por citometria de fluxo e uma citotoxicidade média de 50% foi observada por ensaios colorimétricos. / Immunotherapy using T cells modified with chimeric antigen receptor (CAR) has been proven effective in the treatment of leukemia and lymphomas resistant to chemotherapy. CD19 protein has been shown to be an ideal target because it is expressed on most B-cell tumors and normal B cells, but not in other cells. Recent clinical studies have shown excellent responses of CAR T-cells in a variety of B-cell tumors. Lentiviral vectors are the most commonly used method for genetic modification in clinical trials. This study aimed to develop an efficient platform for lentiviral production and to test the functionality of those vectors so that they can be used in to genetically modify T cells. Transient transfection of HEK293T cells with plasmids in a 3:1:1:1 ratio (transgene:gag-pol:VSV-G:rev) using cationic liposomes and 5 mM sodium butyrate resulted in the highest viral titers. That represents a 17-fold increase in viral titer from polyethylenimine (PEI) transfection. Three methods for lentiviral concentration were used in this work, ultracentrifugation, tangential filtration and ultrafiltration. Membrane ultrafiltration with 100 kDa molecular weight cutoff (MWCO) resulted in the highest recovery rate of viable viral particles, approximately 82%. The viral particles produced by this process have been shown to be functional for the transduction of T cells. In addition, the chimeric receptor (CAR) was shown to be specific against the B cell antigen CD19, resulting in the activation of CAR-T cells and generating cytotoxicity against CD19+ cells in vitro. There was a reduction of approximately 87% of the target cells when analyzed by flow cytometry and an average cytotoxicity of 50% was observed by colorimetric assays.

A Clorose Variegada dos Citros (CVC), doença que causa graves prejuízos à citricultura no estado de São Paulo, é causada pela bactéria Xylella fastidiosa que é transmitida pelas cigarrinhas Bucephalogonia xanthophis (Berg), Dilobopterus costalimai (Young), Acrogonia citrina (Marucci & Cavichioli) e Oncometopia facialis (Signoret). Durante a alimentação em plantas afetadas, esses insetos adquirem a bactéria, que coloniza o pré-cibário e o cibário, e depois são capazes de transmitir a doença para plantas sadias. Colonizando o xilema das plantas de citros encontram-se também bactérias endofíticas, que são microrganismos capazes de colonizar internamente tecidos de plantas sem causar dano aparente, e que podem interagir com patógenos no interior do hospedeiro. Este trabalho teve como objetivo avaliar a comunidade bacteriana associada as cigarrinhas vetoras de CVC, e observar as possíveis interações que ocorrem entre insetos vetores de X. fastidiosa e bactérias endofíticas de citros. Primeiramente foi feito um isolamento das bactérias da cabeça de cigarrinhas coletadas em pomares de citros afetados com CVC. Foram isoladas um total de 17230 bactérias de três espécies de cigarrinhas (O. facialis, D. costalimai e A. citrina) em três datas diferentes (22/março, 05/maio e 14/junho de 2002), que foram primeiramente classificadas em 9 grupos morfológicos. Do total, 120 bactérias representantes foram avaliadas por ARDRA e classificadas em 16 haplótipos, dos quais alguns foram identificados, por seqüenciamento da região 16S do rDNA, como Methylobacterium sp. e Curtobacterium sp., que são bactérias endofíticas de citros já descritas e que interagem com X. fastidiosa em citros. Primers específicos para estas bactérias foram utilizados para PCRs com o DNA total da cabeça de cigarrinhas e variou de 39,1% a 89,6% nas diferentes espécies. A comunidade bacteriana associada às cigarrinhas foi também avaliada por DGGE e apresentou variações quanto ao inseto hospedeiro e quanto à época das avaliações. Um isolado de M. mesophilicum expressando o gene da proteína verde fluorescente (GFP ? Green Fluorescent Protein) foi utilizado para experimento de transmissão deste endófito por B. xanthophis. Os insetos se alimentaram em membrana contendo a solução da bactéria e depois foram colocados em plantas de Catharanthus roseus. Das plantas, 13% apresentaram a bactéria fluorescente colonizando tecidos endofiticamente, o que indica que a cigarrinha é capaz de transmitir o endófito. Testes para a avaliação da produção de moléculas de quorum sensing (AHLs - Acil Homocerina Lactonas) foram feitos para M. mesophilicum e M. extorquens. Foram ainda desenvolvidos mutantes de M. extorquens, defectivos para a produção de biofilme e AHLs. / The Citrus Variegated Chlorosis (CVC), a very important disease which attacks citrus trees in the state of São Paulo, is caused by the xylem-limited bacteria, Xylella fastidiosa, which is transmitted by four species of sharpshooters (Cicadellidae) Bucephalogonia xanthophis (Berg), Dilobopterus costalimai (Young), Acrogonia citrina (Marucci & Cavichioli) and Oncometopia facialis (Signoret) which are capable of acquiring X. fastidiosa from the xylem while feeding. In plants, endophytic bacteria, which inhabit the interior of aerial plant parts developing an asymptomatic infection and show potential benefits as biocontrol agents of pests and diseases, may colonize the same niche of pathogens, such as X. fastidiosa, what could allow endophytes to interact with the pathogen. Bacteria were isolated from head of insect vectors, collected on affected citrus plants. From 17230 bacteria isolated from the heads of three insect species (O. facialis, D. costalimai and A. citrina) in three different days (22/march, 05/may and 14/june of 2002), 120 bacteria were tested with ARDRA and classified into 16 different haplotypes. The most frequent strains had their 16S rDNA fragment sequenced and they were identified as Methylobacterium sp. and Curtobacterium sp., bacteria which have been described as citrus endophytes which interact with X. fastidiosa. Total DNA of insect heads was used in Nested PCRs for detection of these citrus endophytes in insects. The frequencies of detection ranged from 39,1% to 89,6%. The bacterial community associated to sharpshooters was also evaluated by DGGE and presented variations due to insect host and time of the evaluations. One M. mesophilicum isolate, expressing the GFP (Green Fluorescent Protein), was used to test the transmission of endophytes by B. xanthophis. Insects fed on membranes containing a bacterial solution and after were trapped on Catharanthus roseus. From the evaluated plants, 13% presented the fluorescent protein colonizing endophytically, indicating that the insect is able to transmit the endophytic bacteria. Biofilm and quorum sensing molecules (AHLs - Acyl Homocerine Lactones) production by Methylobacterium sp. were tested, and M. extorquens mutants for both features were produced.

As nanopartículas são consideradas promissores vetores para a liberação eficaz e segura de ácidos nucléicos para tipos específicos de célula ou tecido, proporcionando uma alternativa aos vetores virais para terapia gênica. No entanto, com a maioria destes sistemas não torna possível a entrega de oligonucleotídeos nas células in vivo de forma especifica. O uso de uma nanoemulsão funcionalmente semelhante à lipoproteina de baixa densidade poderia resolver esse problema, pois esta particula é capaz de direcionar o transporte das moléculas para a internalização celular através de receptores de LDL. Aqui, descreve-se um sistema lipidico semelhante à lipoproteína de baixa densidade, LDE, capaz de direcionar e liberar RNA de interferência (RNAi) para as células tumorais in vitro e in vivo em um modelo celular que expressa resistência a múltiplas drogas (células de sarcoma uterino; MESSA/ Dx5). Estudou-se também as caracteristicas de captação do complexo LDE-RNAi e a regulação especifica do gene mdr-1. Os resultados sugerem que a LDE é estavel e liga-se com alta afinidade aos RNAis permitindo que eles entrem nas células tumorais, com localização citoplasmática. Em conclusão, a LDE, por direcionar o RNAi a receptores de LDL favorece o silenciamento do gene mdr-1 por RNAi nas células MES-SA/Dx5 aumentando sua sensibilidade a quimioterápicos / Nanoparticles are considered promising vectors for efficient and safe delivery of nucleic acids to specific types of cell or tissue, providing an alternative to viral vectors for gene therapy. However, most of these systems cannot target and deliver oligonucleotides to specific cells in vivo. The use of nanoemulsion functionally resemble low density emulsion could solve this problem, once particle is capable of direct the molecules transport to the cell through internalization in LDL receptors. Here, we describe a lipid system similar to low density lipoprotein, LDE, capable of targeting and release small interfering RNA (siRNA) to tumor cells in vitro and in vivo in a cell model that expresses multidrug resistance (sarcoma uterine cell line; MES-SA/Dx5). Were also studied the characteristics of uptake of the complex LDE-siRNA, as well as the downregulation of mdr-1 gene. The results suggest that LDE is stable and bind with high affinity to siRNAs allowing them to enter tumor cells, with cytoplasmic localization enhanced. In conclusion, LDE, binds to siRNA through LDL receptors, and promotes mdr-1 silenciament by RNAi in MES-sa/Dx5 cells, increasing their sensitivity to chemotherapeutics agents