Orientador: Marileda Boanfim Carvalho / Banca: Alessandre Hataka / Banca: Marcia Mery Kogika / Banca: Fábio Nelson Gava / Banca: Andrigo Barboza De Nardi / Resumo: O objetivo do presente estudo foi padronizar a metodologia de citologia de lavado vesical preparado pelo método de citocentrifugação, avaliar o padrão das células epiteliais de transição em cães e aplicabilidade clínica da citopatologia esfoliativa como método complementar de diagnóstico de doenças vesicais em cães. O estudo foi realizado em duas fases. A primeira incluiu 34 pacientes sem anormalidade ou doença vesical (cães adultos, machos e fêmeas), para padronização da metodologia e caracterização da celularidade normal. Na segunda fase foram avaliados 95 pacientes (cães adultos, machos e fêmeas), com ou sem sinais do trato urinário inferior. Em ambas as fases os cães foram avaliados por meio de exames de rotina, com destaque para sedimentoscopia de urina, urocultura e exame ultrassonográfico da bexiga, além da citologia de lavado vesical preparada pelo método de citocentrifugação (colorações de Papanicolaou, Giemsa, Rosenfeld modificado e Gram - somente na segunda fase). Os resultados obtidos indicaram que a técnica empregada no estudo para recuperação celular realizada com barbotagens de três ciclos utilizando 1mL/kg de solução salina, se mostrou eficaz para avaliação de células uroteliais de cães sadios. Com o segundo estudo, que incluiu pacientes com doença vesical, concluiu-se que o conjunto de avaliações para o diagnóstico de doença vesical empregado são complementares e as contribuições de cada exame variam de acordo com o tipo de enfermidade a ser diagnosticada. A ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to standardize the methodology for cytology bladder washing prepared by cytospin method to evaluate the pattern of epithelial transition cells in dogs and the clinical applicability of exfoliative cytology as a complementary method for of bladder diseases diagnosis in dogs. The study was conducted in two phases. The first one included 34 patients without bladder abnormality or disease (adult dogs, male and female), for standardization of the methodology and characterization of the typical cellularity. In the second phase it was evaluated a group of 95 patients (adult dogs, male and female), with or without lower urinary tract signs. In both phases the dogs were evaluated by routine tests, especially sediment of urine, urine culture and ultrasound bladder examination, as well as cytology of bladder washing prepared by cytospin (stains of Papanicolaou, Giemsa, Rosenfeld modified and Gram - only in the second phase). The results indicated that the technique used in the study for cell recovery, performed with three barbotage cycles using 1 mL/kg of saline, was effective for urothelial cells evaluation from healthy dogs. In the second study, which included patients with bladder disease, it is concluded that the employed set of evaluations for bladder disease diagnosis are complementary and the contributions of each test vary with the type of disease to be diagnosed. The cytology of bladder washing showed was as relevant as the sediment, considering the sensitivity and specificity to detect healthy and sick patients, but with the advantages of giving refinement to enable diagnosis or the diagnosis not completed by previous tests / Doutor

Orientador: Ana Lúcia dos Anjos Ferreira / Resumo: Introdução: É desconhecido o papel do estresse oxidativo durante a evolução dacardiotoxicidade crônica induzida por múltiplas doses de doxorrubicina (DOX).Objetivo: Avaliar a evolução da cardiotoxicidade induzida por doxorrubicina pormeio da avaliação clínica, necropsia; análise morfológica, capacidade antioxidantetotal e lesão do DNA miocárdica. Primeiramente, foi estudado o efeito agudo deuma única dose de DOX e, posteriormente, avaliamos o efeito evolutivo de múltiplasdoses.Materiais e métodos: Utilizamos ratos Wistar machos (n=66) que foramrandomizados em 2 protocolos experimentais: 1) ratos foram sacrificados antes (-24h, n=8) e após (+24h, n=8) dose única de DOX (4mg/kg) a fim de determinar oefeito agudo da DOX; 2) ratos (n=58) receberam 4 injeções semanais de DOX(4mg/kg/semana) e foram sacrificados antes da primeira injeção (M0) e 1 semanadepois de cada administração (M1, M2, M3, M4) para determinar o efeito evolutivode cada uma das quatro doses da DOX. As avaliações realizadas foram: clínica,necropsia, estudo miocárdico morfológico (microscopia óptica), capacidadeantioxidante total (TAP, capacidade antioxidante) e lesão oxidativa do DNA (ensaiocometa).Resultados: No modelo agudo, não houve alteração no peso e nem nascaracterísticas clínicas ou de necropsia. Contudo, foi verificado aumento danecrose, desarranjo miofibrilar, diminuição da TAP e aumento da lesão oxidativado DNA após 24h da dose única de DOX (p<0,05). O estudo evolu... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

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Orientador: João Aristeu da Rosa / Banca: Marlene Tiduko Ueta / Banca: Elenice Messias do Nascimento Gonçalves / Banca: Silmara Marques Allegretti / Banca: Mara Cristina Pinto / Resumo: A estrongiloidíase é uma doença parasitária que tem distribuição mundial heterogênea, cuja prevalência é dividida em três categorias: esporádica (<1%), endêmica (1-5%) e hiperendêmica (>5%). Na região de Araraquara, estudos de frequência de enteroparasitoses vêm sendo conduzidos desde 1970 e mostram que a estrongiloidíase é endêmica na região. Com o intuito de realizar caracterização morfométrica de diferentes isolados humanos desse helminto, provenientes dos municípios de Araraquara, Américo Brasiliense, Gavião Peixoto, Motuca e Rincão foi feita a mensuração de larvas rabditóides e filarióides e sequenciamento da região ITS-1 do rDNA das larvas filarióides. Com o auxilio do programa de captura e mensuração de imagens Motic Images Advanced 3.2., os parâmetros das larvas rabditóides e filarióides propostos por TEIXEIRA, 1996, foram mensurados após fixação das mesmas em TAF. A extração do DNA genômico foi realizada segundo protocolo descrito por NILFOROUSHAN et al., 2007 e em seguida realizou-se a amplificação do ITS-1 por meio de NESTED-PCR. Os fragmentos de aproximadamente 680 pb obtidos foram purificados, sequenciados e a comparação de sequências foi realizada pelo programa ClustalW. Apenas com os resultados da análise morfométrica, não foi possível caracterizar diferentes cepas de S. stercoralis, uma vez que... (REsumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Strongyloidiasis is a parasitic disease that occurs worldwide heterogeneous, whose prevalence is divided into three categories: sporadic (<1%), endemic (1-5%) and hyperendemic (> 5%). In the region of Araraquara, studies the frequency of intestinal parasites have been conducted since 1970 and show that strongyloidiasis is endemic in the region. In order to perform morphometric characterization of different isolates of human intestinal worms, from the municipalities of Araraquara, Américo Brasiliense, Gavião Peixoto, Motuca and Rincão the measurement was made of rhabditiforms and filariforms larvae and sequencing of the ITS-1 rDNA filariform larvae. With the help of the program capture and measurement of images Motic Images Advanced 3.2., the rhabditiforms and filariforms larvae parameters proposed by TEIXEIRA, 1997, were measured after fixed on the TAF. The extraction of genomic DNA was performed according to protocol described by NILFOROUSHAN et al., 2007 and then held the amplification of ITS-1 by nested-PCR. Fragments of about 680 bp obtained were purified, sequenced and the sequence comparison was performed by the program ClustalW. Only the results of the morphometric analysis was not possible to characterize different S. stercoralis strains, since the values of the parameters measured were quite homogeneous in larvae... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Carlos Frederico Wilcken / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar o uso do TaV (Thyrinteina arnobia vírus) no controle de lagartas de Thyrinteina arnobia (Stoll, 1782) (Lepidoptera: Geometridae), em condições de laboratório e de semi-campo. Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Entomologia Florestal do Departamento de Produção Vegetal, Setor de Defesa Fitossanitária, e em área experimental de floresta de Eucalyptus grandis, na Faculdade de Ciências Agronômicas (FCA), Universidade Estadual Paulista (UNESP), em Botucatu - SP. No laboratório, o TaV foi multiplicado, purificado e quantificado. Diferentes concentrações de TaV, obtidas a partir do purificado concentrado, foram submetidas a testes de controle de lagartas de T. arnobia, em condições de laboratório e de semi-campo. No laboratório, a patogenicidade do TaV foi avaliada sobre diferentes ínstares larvais de T. arnobia. Experimentos de semi-campo foram instalados no inverno de 2000 e no verão de 2001, sendo o TaV pulverizado em plantas de E. grandis. As folhas pulverizadas foram coletadas em dias diferentes, e oferecidas a lagartas de T. arnobia no laboratório. Verificou-se que o TaV foi capaz de infectar e matar lagartas de T. arnobia de 2º, 3º, 4º e 5º ínstares, em condições de laboratório (temperatura de 25+0,5 oC, umidade relativa de 70+10% e fotofase de 13 horas). Os sintomas de contaminação foram observados em 100 % das lagartas que ingeriram folhas de E. grandis contaminadas com vírus. Também foi constatada uma alta mortalidade para as lagartas infectadas, apresentando taxas que variaram de 90 a 100 %. O efeito do TaV foi mais intenso sobre lagartas de 2º e 3º ínstares, contaminando-as e matando-as mais rapidamente, quando comparadas às de 4º e 5º ínstares. Nos experimentos de semi-campo, os resultados demonstraram que o TaV foi capaz de infectar... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The present work aimed to evaluate the use of TaV (Thyrinteina arnobia virus) in control of Thyrinteina arnobia caterpillars (Stoll, 1782) (Lepidoptera: Geometridae), in laboratory conditions and field. The experiments were conducted in the Forest Entomology Laboratory of Plant Production Department, and in an experimental area with Eucalyptus grandis, in the São Paulo State University (UNESP), in Botucatu - SP. In laboratory, the TaV was multiplied, purified and quantified. Different concentrations of TaV, obtained from the concentrated purified, were submitted to T. arnobia caterpillars test controls, in laboratorial conditions and field. In the laboratory, the pathogenicity of TaV was evaluated over different larval instars of T. arnobia. Field experiments were installed in winter (2000) and summer (2001), spraying TaV in E. grandis plants. The sprayed leaves were collected in different days and offered to the T. arnobia caterpillars in the laboratory. It was observed that TaV was able to infect and kill 2nd, 3rd, 4th and 5th instars T. arnobia caterpillars, in laboratory conditions (temperature of 25+0,5 oC, relative humidity of 70+10% and 13 hours photo phase). The contamination symptoms were observed in 100 % of caterpillars that had ingested the leaves of E. grandis contaminated by virus. It was observed a high mortality to the infected caterpillars, varying from 90 to 100 %. The effect of TaV was stronger to the 2nd and 3rd instars caterpillars, contaminating and killing them faster, when compared to 4th and 5th instars. In field experiments, the results demonstrated that TaV was able to infect and kill 4th instar T. arnobia caterpillars, but the LT50 was considered extended. The increase of lethal time (LT50) was directly proportional to the increase of period between the virus application and the leaves collects in the field. / Mestre

Orientador: Hélio José Montassier / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Banca: Ricardo Luiz Moro de Souza / Resumo: A nucleoproteína (NP) do Vírus da Influenza Aviária (VIA) é um importante alvo antigênico no imunodiagnóstico desta doença, devido à sua baixa variabilidade entre as diferentes estirpes do VIA, resultando em uma elevada reatividade cruzada, e por ser também uma proteína altamente imunogênica para hospedeiros vertebrados. Neste estudo, o gene codificador da NP do VIA foi parcialmente clonado e expresso em Escherichia coli como uma proteína recombinante fusionada ao polipeptídeo SUMO e uma etiqueta de poli-histidina para seu uso no desenvolvimento de um ensaio de ELISA indireto para a detecção de anticorpos específicos contra o VIA. A NP recombinante foi expressada na fração solúvel e foi mais facilmente purificada. Após análise em relação aos seus principais sítios de antigenicidade e caracterização por meio de Western blotting, a NP recombinante foi utilizada como uma preparação antigênica no ELISA indireto para detecção de anticorpos contra o VIA presentes em amostras de soro de galinha. A análise comparativa do teste desenvolvido no presente estudo com um ELISA comercial apresentou valores de 95%, 97% e 96,7% de sensibilidade, especificidade e acurácia, respectivamente e um índice κappa de 0,88. Os resultados permitem concluir que a NP recombinante do VIA desenvolvida neste estudo possui características favoráveis para ser aplicada como antígeno no ELISA indireto, constituindo-se em um método sensível e específico para o imunodiagnóstico da Influenza Aviária em galinhas / Abstract: The nucleoprotein (NP) of Avian Influenza Virus (AIV) is an important antigenic target for immunodiagnosis of this disease, due to its low variability among different AIV strains, resulting in high cross-reactivity, and the also highly immunogenic for vertebrate hosts. In this study, the gene enconding NP of AIV was cloned and expressed in Escherichia coli as a recombinant protein fused to SUMO polypeptide with a polyhistidine tag and used to develop an indirect ELISA for the detection of AIV-specific antibodies. The recombinant NP was expressed in the soluble fraction and easily purified. After Analysis of the main sites of antigenicity and characterization in Western-Blotting, the recombinant NP was optimized as an antigen preparation for indirect ELISA to detect anti-AIV antibodies in chicken serum samples. The comparative analysis of this ELISA with a commercial ELISA showed values of 95%, 97%, 96.7% of sensitivity, specificity and accuracy, respectively, and an agreement of k=0.88. In conclusion, the results indicated that the recombinant NP of AIV produced in this study is a good source of antigen for indirect ELISA and provides a sensitive and specific method for the immunodiagnosis of Avian Influenza in chickens / Mestre

Forest stand delineation is an essential task of forest management planning which can be time consuming and exposed to subjectivity. The increasing availability of LiDAR data and multispectral imagery offers an opportunity to improve stand delineation by means of remotely-sensed data. Under these premises, ASTER imagery and low-density LiDAR data have been used to automatically delineate forest stands in several forests of Navarra (Spain) through Object-Based Image Analysis (OBIA). Canopy cover, mean height and the canopy model have been extracted from LiDAR data and, along with VNIR ASTER bands, introduced in OBIA for forest segmentation. The outcome of segmentation has been contrasted, on the one hand, assessing segments’ inner heterogeneity. On the other, OBIA’s segments and existing stand delineations have been compared with a new method of geometrical fitting which has been ad hoc designed for this study. Results suggest that low-density LiDAR and multispectral data, along with OBIA, are a powerful tool for stand delineation. Multispectral images have a limited predicting utility for species differentiation and, in practical terms, they help to discriminate between broad-leaved, conifer and mixed stands. The performance of ASTER data, though, could be improved with higher spatial resolution VNIR imagery, specifically sub-metric VNIR orthophotos. LiDAR data, in contrast, offers a great potential for forest structure depiction. This perspective is connected with the increasingly higher resolution datasets which are to be provided by public institutions and the rapid development of drone technology. Complexity of OBIA may limit the use of this technique for small consulting firms but it is an advisable instrument for companies and institutions involved in major forestry projects. / No

Orientador: Valdecir Farias Ximenes / O Programa de Pós Gaduação em Ciência e Tecnologia de Materiais, PosMat, tem caráter institucional e integra as atividades de pesquisa em materiais de diversos campi / Resumo: O óxido de zinco (ZnO) é um semicondutor muito utilizado na área tecnológica, principalmente em dispositivos fotovoltaicos e mais recentemente, vem sendo utilizado em aplicações biomédicas. Porém, citotóxicos, principalmente quando em tramanho nanométrico, associados ao seu uso, não devem ser descartados. Assim, este trabalho teve por objetivo estudar o efeito tempo de sonicação na morfologia de nanopartículas de ZnO e como estas diferenças poderiam afetar a estrutura da albumina, provocar a hemólise de eritrócitos e a ativação de neutrófilos humanos, quando em contato com este material. Amostras de ZnO foi obtido através do método de síntese ultrassônica, caracterizada por métodos ópticos e suas morfologias observadas em microscópio de varredura eletrônica. Foram obtidas duas morfologias distintas: nanoflores e nanoagulhas. Em todo os testes biológicos a concentração final de ZnO foi 0,1mg/mL em todos os experimentos, onde incubou-se o mesmo com albumina humana e com células sanguíneas (eritrócitos e neutrófilos). Não se observou alterações significativas na estrutura da albumina quando incubada com ZnO, como evidencido por estudo de fluorescência intrínseca e extrínseca. Uma exceção foi uma pequena agregação de proteína quando incubada com o ZnO (nanoflor) avaliado por espalhamento de luz (Rayleigh). Embora pouco efetiva, esta morfologia do ZnO também foi mais eficaz na indução de hemólise de eritrócitos (22%), se comparado às nonoagulhas (11%), após 48 horas de reação (controle negativo=3,7%). A mesma tendência foi observada para estimulação de neutrófilos avaliada por luminol (nanoflores 26,9%, nanoagulhas 8,9% e controle negativo=8,7%). Em conclusão, podemos afirmar que ZnO nanoestruturado apresentou baixa toxicidade nos modelos aqui estudados, o que reforça a sua potencial aplicação in vivo / Abstract: Zinc oxide (ZnO) is a semiconductor that has been highly explored in multiple areas of science, especially in photovoltaic devices and, more recently, in biomedical aplications. However, the cytotoxic effects, especially in nanosize, associated with its use cannot be ruled out. Therefore, this work aimed to study how the sonication time can influence the morphology obtained for the zinc oxide and how these diferrences could affect the structure of albumin, cause hemolysis of erythocytes and activation of human neutrophils. ZnO was obtained by ultrasonic synthesis method and characterized by optical methods and their morphologies observed in scanning electron microscope. Two differents morphologies were obtained: nanoflowers and nanoneedle. ZnO was incubated with human serum albumin and blood cells (erytrocytes and neutrophils) in final concentration of 0.1mg/ml. The results showed no significant modification in albumin structure when incubated with ZnO, evidenced by intrisic and extrinsic fluorescence studies. One exception was a small protein aggregation observed in light scattering (Rayleigh). Although somewhat effective, this morphology of ZnO was also more effective at inducing hemolysis of erythrocytes (22%) compared to nanoagulhas (11%), after 48 hours of reaction (negative control = 3.7%). The same trend was observed for stimulation of neutrophils measured by luminol (nanoflowers 26.9% and nanoneedle 8.9%) (negative control = 8.7%). In conclusion. It can be said that ZnO nanostructured showed low toxicity in the models studied, which reinforces the in vivo applications / Mestre

Orientador: Maria Emilia Franco Oliveira / Resumo: O presente estudo testou a hipótese de que a hCG e pFSH estimulam o desenvolvimento folicular e de corpos lúteos, equivalente aos induzidos pela eCG em fêmeas caprinas. Cento e quinze cabras Toggenburg foram dividas e submetidas ao protocolo de curta duração (60 mg MAP, 6 dias; Dia - 8) durante o período sazonal de transição. Cada grupo recebeu 24 hs antes da remoção da esponja 22.5 µg d – cloprostenol e 200 UI eCG, ou 300 UI hCG ou 30 UI pFSH. A dinâmica folicular (n = 85 cabras) foi realizada desde o momento da aplicação da gonadotrofina (Dia – 3) até a detecção da ovulação. O início do estro (Dia 0) foi monitorada para avalição do comportamento estral. As variáveis biométricas e vasculares do corpo lúteo (CL: área, diâmetro, volume, ecogeneidade, heterogeneidade, escore de vascularização e número de pixels coloridos) entre cabras prenhes e não prenhes foram avaliadas em momentos específicos (Dia 5, 8, 13, 18, 23 e 28) pela ultrassonografia bidimensional (Modo B) e Doppler Colorido. O diagnóstico de gestação foi confirmado pela detecção da vesícula embrionária, realizada sobre o Dia 28. O diâmetro do maior folículo no dia da aplicação da gonadotrofina e o tempo para o alcance do diâmetro máximo do folículo dominante foi maior e mais precoce no grupo eCG (P = 0,024 e P = 0,002; respectivamente). Cabras tratadas com eCG e pFSH apresentaram maiores dimensões foliculares (P = 0,003) e hCG, maior número de folículos ovulatórios (P = 0,004) e corpos lúteos (P = 0,0001). A ovulaçã... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study tested the hypothesis that hCG and pFSH stimulate follicular and corpora lutea growth, equivalent to those induced by the eCG in goat females. Toggenburg goats (n = 115) were divided and submitted to the short duration protocol (60 mg MAP, 6 days; Day – 8) during the seasonal transition period. Each group received 22.5 µg d – cloprostenol and 200 IU eCG, or 300 IU hCG or 30 UI pFSH, 24 hours before the sponge removal. The follicular dynamics (n = 85 goats) were performed from the moment of the application of gonadotropin (Day - 3) until the detection of ovulation. The onset of estrus (Day 0) was monitored for evaluation of estrus behavior. The biometric and vascular variables of the corpus luteum (CL: area, diameter, volume, ecogeneity, heterogeneity, vascularization score and number of colored pixels) between pregnant and non-pregnant goats were evaluated at specific times (Day 5, 8, 13, 18, 23 and 28) by two-dimensional ultrasound (Mode B) and Color Doppler. The pregnancy diagnosis was confirmed by detection of the embryonic vesicle performed on Day 28. The diameter of the largest follicle on the day of application of gonadotrophin and the time to reach the maximum diameter of the dominant follicle was higher and earlier in the eCG group (P = 0.024 and P = 0.002, respectively). Goats treated with eCG and pFSH presented greater follicular dimensions (P = 0.003) and hCG, greater number of ovulatory follicles (P = 0.004) and corpora lutea (P = 0.0001). Ovulat... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Advancements of antiretroviral therapies (ART) have made significant strides in reducing human immunodeficiency virus (HIV) viral loads in patients to undetectable levels. Upon interruption of ART, viral load rebounds and AIDS symptoms return. Latent reservoirs of virus are responsible for this phenomenon because they contain integrated provirus, which is transcriptionally silent, thus unaffected by ART and hidden from host immune surveillance. A commonly proposed mechanism for HIV latency is the presence of host cell transcription factors that lead to transcriptional silencing. CD4+ T cells and other immune cells, whether due to their subset phenotype, activation state, or stage in development, will vary in their battery of transcription factors. Of particular interest is Bcl11b, a critical transcription factor involved in the commitment to a T-cell fate during thymocyte development that has recently been shown to play a role in silencing HIV-1 transcription. Bcl11b is required for inhibiting the development of natural killer cell-like traits during the early development of T cells. The repressive role of this zinc-finger transcription factor has recently been shown to inhibit HIV-1 transcription in the context of microglial cells via recruitment of chromatin remodeling factors. Also, Bcl11b has been shown to interact with other HIV-1 transcriptional silencing factors such as NuRD and NCoR. Preliminary mass spectrophotometry results have pointed to a physical interaction of Bcl11b with NELF, another proven repressive factor of HIV transcription. We hypothesize that Bcl11b represses HIV transcription and is recruited to the HIV-1 long terminal repeat (LTR) through a paused RNA polymerase II complex, contributing to the establishment and maintenance of latency. Our studies confirm Bcl11b's repressive role in T cells, and investigate the mechanism with NELF. Transfection of HEK293T cells with HIV-LUC shows nearly 50% reduction in HIV transcription in the presence of Bcl11b, and analysis of viral protein output by p24 ELISA confirms this result. Furthermore, when co-transfected with NELF-B, the two transcription factors lead to nearly 90% reduction in HIV transcription. Results suggest that these factors cooperate to repress HIV transcriptional elongation. Protein and chromatin immunoprecipitations (ChIP) were also performed to see a direct interaction between the two transcription factors and the HIV LTR. Physical interaction of the two factors was not witnessed, while ChIP analysis shows enrichment of RNA polymerase II at the transcriptional start site suggesting Bcl11b increasing RNA polymerase II pausing. We conclude that Bcl11b plays a repressive role in HIV transcription through promoter-proximal pausing with a synergistic effect with NELF, but a yet to be identified factor is responsible for the coordination of the two factors. As an important T-cell commitment factor, Bcl11b may play an important role in establishing and maintaining cellular latency through transcriptional repression via a complex with NELF. Confirming Bcl11b's role as a repressive transcription factor and providing further support for a synergistic role with NELF, could highlight a new target for therapeutic strategies against the elusive latent reservoir.