Orientador: Humberto Santo Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:11:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luz_MarcusAlexandreMendes_D.pdf: 10697442 bytes, checksum: 222db13a72b848e524a1daccb1c17b92 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A distrofia muscular de Duchenne (DMD) é uma miopatia ligada ao cromossomo X, provocada pela ausência de distrofina, uma proteína da membrana da fibra muscular esquelética, cuja função está relacionada à manutenção da estab11idade do sarcolema. A ausência de distrofina, abera a integridade estrutural do sarcolema fazendo com que a fibra muscular sofra necrose e posterior regeneração. Com o surgimento de uma linhagem de camundongos mutantes (mdx) cujas fibras musculares à semelhança dos pacientes humanos são deficientes em distrofina, diversos trabalhos vêm sendo desenvolvidos com estes animais. Até o início da senilidade, os camundongos não apresentam fraqueza muscular e não vão a óbito. Outra diferença fenotipica fundamenta} entre a DMD humana e a dos camundongos é o fato de que, nestes últimos, as fibras musculares mantém a capacidade de regeneração. É certo que a ausência de distrofina seja a responsável direta pela necrose das fibras musculares, entretanto, é possível que a perda da capacidade regenerativa esteja relacionada a outros fatores. Um desses fatores, fundamental no presente trabalho, refere-se às células satélites das fibras musculares precursoras dos mioMastos e que originam novas fibras musculares. Estudos in vitro com células satélites de pacientes com DMD, demonstram que elas perdem, com o avançar da idade, a capacidade de se dividir. Dessa forma o presente traba1ho procura demonstrar experimenta1mente a capacidade regenerativa das fibras do músculo tibial anterior através de uma série de injeções de doridrato de lidocaína 2%. Os animaís de ambos os grupos (Grupo A - mdx; Grupo B -Black 10) foram submetidos a 20 e 55 aplicações de cloridrato de lidocaína, induzindo-se ciclos de degeneração e regeneração das fibras musculares. Os músculos coletados foram incluídos em historresina e corados pelos métodos da Hematoxilina-Eosina e Picrosirius-hematoxilina (para análise de tecido conjuntivo). Após a quantificação das populações das fibras musculares, os resu1tados mostraram que ao final 55 aplicações, a população de fibras regeneradas nos animais mdx sofreu uma redução de 48% em relação ao grupo controle, sendo que, ao final de 20 aplicações a redução da população de fibras foi de 0.2%. Não foi constatado o desenvolvimento de fibrose, o que exclui a tese sustentada por a1guns pesquisadores, de que este fator 100... seria o responsáve{ pe{a redução da capacidade regenerativa das fibras. De acordo com nossos resultados, podemos concluir que a redução da capacidade regenerativa das fibras está diretamente ligada a exaustão da capacidade miogênica das células satélites, não se encontrando qualquer evidência de que a redução desta atividade esteja associada ao aparecimento de fibrose intersticial / Abstract: The Duchenne (Dl / Doutorado / Histologia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Marta Helena Krieger / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T14:03:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_Leandrodos_M.pdf: 960822 bytes, checksum: 9255ee8c26bde6d271eafcb384a31cef (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Objetivos: Várias vias inflamatórias têm participação no processo aterosclerótico. Diferentes marcadores do processo inflamatório e da disfunção endotelial têm sido utilizados para predizer o risco de futuro desenvolvimento ou complicação das doenças cardiovasculares. Atualmente, marcadores como o CD40L tem se mostrado importante no prognóstico de risco clínico. Os efeitos antiinflamatórios do nitrosotiol, doador de ¿NO, S-nitroso-N-acetilcisteína (SNAC) foram verificados em camundongos LDLr-/-, com objetivo de testá-lo na prevenção precoce do desenvolvimento da placa aterosclerótica, bem como nas mudanças de pressão arterial e de expressão das ¿NO sintases. Métodos e Resultados: Camundongos LDLr-/- alimentados com dieta enriquecida com 0,5% de ácido cólico e 1,25% de colesterol apresentaram aumento na expressão aórtica de CD40L, tanto nas fases iniciais (HC15d) quanto nas fases mais avançadas da aterosclerose (HC60d) e em uma relação inversa com a expressão de a-actina. Camundongos LDLr-/- alimentados com dieta comercial (CT) apresentaram aumento na expressão de eNOS e nNOS em relação aos camundongos selvagens (C57BL6). Foi também verificado aumento na expressão das 3 isoformas de NOS nos camundongos alimentados com dieta hipercolesterolêmica em relação ao CT. Pressão arterial aumentada foi determinada em camundongos LDLr-/- em relação aos selvagens. A administração de SNAC (0,51 mmol/Kg/dia i.p. por 15 dias) promoveu uma redução de 49% na área de lesão aterosclerótica, associada a uma diminuição na expressão aórtica das NOS e de CD40L, mas sem alteração no aumento pressórico. Conclusão: Concluímos que a deleção gênica do receptor de LDL nos camundongos produziu alteração nos marcadores propostos para inflamação e disfunção endotelial, mostrando-se responsável pela hipertensão, sendo que ambas foram caracterizadas neste modelo animal. O tratamento com SNAC mostrou-se eficaz na prevenção do estabelecimento do ateroma, por meio de processo antiinflamatório. Entretanto, a administração de SNAC não foi capaz de promover alterações no aumento pressórico verificado nos camundongos LDLr-/- / Abstract: Background: Several inflammatory pathways have been shown to participate in the atherosclerotic process. Different markers for inflammation and endothelial dysfunction have been found to predict the future risk for developing cardiovascular disease. Newer markers such as CD40 ligand appear to provide important information regarding clinical risk. In hypercholesterolemic LDLr-/- mice, we addressed anti-inflammatory effects of the nitrosothiol ¿NO donor S-nitroso-N-acetylcysteine (SNAC) in the early prevention of plaque development as well as changes in blood pressure and ¿NO synthase expression. Methods and Results: LDLr-/- mice fed with 0.5 % colic acid and 1.25 % cholesterol-enriched diet showed increased aortic expression of CD40L that was related to initial (HC 15d) and advanced (HC 60d) phases and inversely related with a-actin expression. Expression of eNOS and nNOS was higher in the LDLr-/- than Wild Type (C57BL6) mice, as well as, there was a larger expression of three isoforms of NOS in LDLr-/- mice fed with HC diet. Increase in the blood pressure was present in LDLr-/- in relation to Wild Type mice. SNAC administration (0.51 mmol/Kg/day i.p. for 15 days) promoted 49% of reduction in atherosclerotic lesion area associated with the prevention of this increased NOS and CD40L expression but without alterations in the increased blood pressure. Conclusion: We concluded that the genetic deletion of LDL receptor in mice produced alterations on the markers proposed to the inflammation and endothelial dysfunction, and showed to be responsible for hypertension, both characterized in this animal model. The SNAC treatment showed efficacy in the prevention of atheroma establishment by anti-inflammatory process. Nevertheless, the SNAC treatment was not capable to promote alterations in the increased blood pressure, which was verified in these ko mice / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La osteoartritis es la enfermedad articular más común en la especie equina, que provoca dolor y disminución de la movilidad articular, cuya consecuencia es la disminución del desempeño deportivo. La osteoartritis se caracteriza por la destrucción del cartílago articular, que se manifiesta por úlceras focales y fragmentación. El óxido nítrico (NO) participaría como un importante mediador biológico en la patología articular, que podría alterar la homeostasis del cartílago conduciendo a su destrucción. El NO es un radical libre, gaseoso, sintetizado a partir del aminoácido L-arginina, por una familia de isoenzimas conocidas como óxido nítrico sintasas (NOS). Se ha descrito que el NO participaría en una amplia variedad de procesos biológicos, siendo oxidado en el medio biológico a nitrito y nitrato, los que se han utilizado como marcadores de su biosíntesis. En las articulaciones diartrodiales los condrocitos son la principal fuente de NO. Para desarrollar el presente trabajo, se obtuvo líquido sinovial de 110 articulaciones metacarpofalángicas de equinos mestizos de matadero, cuya selección se realizó de acuerdo al aspecto macroscópico (normal o alterado) del cartílago articular y de la membrana sinovial, generándose cuatro grupos de articulaciones: NN = cartílago y membrana normales (n = 47); NA = cartílago normal y membrana alterada (n= 25); AN = cartílago alterado y membrana normal (n = 23); AA = cartílago y membrana alterados (n = 15). Se determinaron las concentraciones de proteína y de nitrito por los métodos de Lowry y de Griess, respectivamente. Además, se determinó la edad de los animales por cronometría dentaria. Se aplicó análisis de varianza y una posterior prueba de Tukey para observar diferencias entre grupos articulares. El promedio de edad de los equinos fue de 5.3  3.6 años en el grupo NN, 4.4  3.1 años en el grupo NA, 9.9  4.2 años en el grupo AN y 10.7  3.8 años en el grupo AA. Los grupos NN y NA presentaron una edad significativamente menor (p = 0.001) que los grupos AN y AA. La concentación de proteína en el líquido sinovial fue de 15.2  6.3 mg/mL en las articulaciones NN, 13.4  8.4 mg/mL en las articulaciones NA, 14.4  7.4 mg/mL en las articulaciones AN y 10.8  5.4 mg/mL en las articulaciones AA. No se encontró diferencias significativas (p  0.05) de concentración de proteínas entre los grupos. La concentración de nitrito en el líquido sinovial fue de 29.4  27.9 M en las articulaciones NN, 44.4  32.6 M en las articulaciones NA, 32.6  27 M en las articulaciones AN y 26.3  26.1M en las articulaciones AA. No se encontró diferencias significativas (p  0.05) en la concentración de nitritos entre los grupos de articulaciones. Estos datos sugieren que las articulaciones normales (NN) especialmente en su cartílago son más frecuentes en equinos jóvenes, presentando una leve tendencia a tener un promedio de concentración de proteínas mayor y nitritos detectables en baja concentración, pero si la membrana sinovial se encuentra alterada (AN) se produce un aumento del promedio de los nitritos probablemente por la estimulación de la membrana sinovial al cartílago articular a través de citoquinas. Las articulaciones con mayor alteración (AA) fueron aquellas pertenecientes al grupo de mayor edad promedio y que presentó menor concentración promedio de proteínas y de nitritos, lo que se explicaría por la destrucción tanto de la membrana como del cartílago y por ende, menor cantidad y funcionalidad de los sinoviocitos y condrocitos

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-05T15:19:50Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1256591 bytes, checksum: 7fb1f90875c23ff0319fba481041b6af (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-05T15:19:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1256591 bytes, checksum: 7fb1f90875c23ff0319fba481041b6af (MD5) Previous issue date: 2013-08-21 / A aplicação de ON em sementes tem se mostrado promissora, uma vez que as sementes em contato com a solução de nitroprussiato de sódio (SNP), doador de ON, em geral, germinam mais e com maior velocidade, tolerando melhor tanto estresses abióticos como a deterioração natural ocasionada pelo armazenamento. Assim, na presente pesquisa, teve-se como objetivo avaliar as principais alterações que ocorrem na durante a germinação de sementes de ervilha devido à aplicação do ON. Para tanto, foram conduzidos dois experimentos. No primeiro experimento, três lotes de sementes de ervilha com diferentes níveis de qualidade fisiológica foram semeados em substrato umedecido com água (controle) ou com solução de SNP (50 μM). Adotou-se o delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetições. Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias foram analisadas pelo teste F a 5% de probabilidade. No segundo experimento, sementes de ervilha foram semeadas em substrato umedecido com água (controle), solução de polietilenoglicol [PEG 6000 (-0,15 MPa)] e solução de PEG 6000 + SNP (-0,15 MPa; 50 μM). O delineamento estatístico adotado foi inteiramente casualizado com quatro repetições. Os dados foram submetidos a análise de variância e as médias foram analisadas pelo teste Tukey a 5% de probabilidade. Conclui-se que o ON não aumenta a germinação das sementes de ervilha, entretanto há aumento no vigor. Sementes com menor potencial fisiológico respondem melhor à aplicação do ON. O estresse hídrico diminui a germinação e o vigor das sementes de ervilha e causa desbalanço das espécies reativas de oxigênio. A aplicação do SNP promoveu maior germinação e maior velocidade de germinação em sementes sob estresse hídrico. Houve maior atividade das amilases, das enzimas antioxidativas e menor conteúdo de H 2 O 2 , menor liberação de O 2- e menor peroxidação de lipídeos em sementes tratadas com doadores de ON. / The NO application in seeds has shown promising, because the seeds in contact with the sodium nitroprusside (SNP) solution, NO donor, usually germinates more and faster and are more tolerant to abiotic stresses such as natural deterioration caused by storage. Thus, it is interesting to know how the NO acts on the seeds germination to improve the early seedling development. Therefore, the research aimed to evaluate the main changes that occur during the germination of pea seeds due the NO application. Therefore, two experiments were conducted. In the first one, three lots of pea seeds with different physiological potential levels were sown in a substrate with water (control) or with SNP solution (50 μM). It was adopted the completely randomized design with four replications. The data were subjected to variance analysis and the means were analyzed by F test at 5% of probability. In the second experiment, pea seeds were sown in a substrate with water (control), polietilenoglicol [PEG 6000 solution (-0,15 MPa)] and PEG 6000 + SNP solution (-0,15 MPa; 50 μM). It was adopted the completely randomized design with four replications. The data were subjected to variance analysis and the means were analyzed by Tukey test at 5% of probability. To conclude, the NO does not increase the germination of pea seeds, but increase the seeds vigor. Seeds with lower physiological potential gives a better response to the NO application. Water stress decrease the germination and vigor of pea seeds and cause reactive oxygen species imbalance. The SNP application promoted a higher and faster germination in seeds under water stress. There were higher activity of the amylases, higher activity of the antioxidative enzymes, less H 2 O 2 content, less O 2- liberation and consequently less lipid peroxidation in seeds treated with NO.

Orientador: Stephen Hyslo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-07T09:47:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tarsitano_ChristianeAparecidaBadin_D.pdf: 24957423 bytes, checksum: 94d8809a19e27ce5d2957100482d3d27 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: óxido nítrico (NO), um co-produto do metabolismo do aminoácido Larginina para L-citrulina pela NO sintase (NOS), exerce importantes funções no controle do tôno vascular, no processo inflamatório, e na modulação da expressão gênica e atividade enzimática de diversas enzimas, tais como citocromos P-450 e NOS. A inibição crônica da biossíntese de NO por NW-nitro-L-argininemetil éster (L-NAME) leva à hipertensão e produz alterações morfológicas que incluem hipertrofia e remodelamento vascular, efeitos estes que são revertidos por inibidores da enzima conversora de angiotensina I (ECA) e antagonistas dos receptores AT1 de angiotensina 11. O NO exerce papel fundamental na hemodinâmica e função celular do fígado, e pode regular a atividade dos citocromos P450 monooxigenases que são importantes na biotransformação de substâncias endógenas e exógenas. Neste trabalho, examinamos a influência do tratamento com L-NAME sobre a morfologia hepática, o conteúdo de glicogênio, colesterole triglicérides,e a atividadee expressãodas isoformasCYP1A1/2, CYP 281/2, CYP2C11 e CYP2E1de citocromoP450.No tratamentoagudo estudamos também a expressão de duas metaloproteinases de matriz (MMP-2 e MPP-9). Ratos Wistar machos foram tratados com L-NAME (20 mg/rato/dia, administrado na água de beber) por quarto e oito dias (tratamento agudo) e duas, quatro e oito semanas (tratamento crônico) e os fígados foram removidos para análise. A indução enzimática foi realizada tratando-se os ratos com fenobarbital (para induzir CYP2B1/2), p-naphthoflavone (para induzir CYP1A1/2) (80 mg/kg/dia, Lp., 4 d) ou pirazole (200 mg/kg/dia, Lp., 2 d) (para induzir CYP2E1). O tratamento com L-NAME elevou significativamente a pressão sangüínea e esta foi revertida pelo tratamento concomitante com enalapril (25 mg/kg/dia, p.o., inibidor da ECA) ou losartan (30 mg/kg/dia, p.O.,antagonista dos receptores AT1). L-NAME causou hipertrofia vascular em artérias hepáticas, com depósito de colágeno perivascular e fibrose intersticial. Houve também um aumento significativo no conteúdo de glicogênio hepático. Todas estas alterações foram completamente revertidas por enalapril ou losartan. O tratamento com L-NAME não alterou o conteúdo de colesterol e triglicérides hepáticos, e não afetou as atividades basais e induzidas ou a expressão das isoformas de citocromo P450. O tratamento agudo com LNAME aumentou a expressão de MMP-2 e MMP-9 na parede vascular e em células inflamatórias (Ieucócitos, macrófagos). Esses resultados mostram que o tratamento agudo e crônico com L-NAME produz alterações morfológicas na vasculatura hepática e aumenta o conteúdo hepático de glicogênio, sem porém alterar o metabolismo de lípides ou a atividade e expressão de citocromos P450. A ausência de um efeito sobre os citocromos P450 indica que estas enzimas, não são influenciadas por níveis baixos de NO. Já a capacidade do enalapril e losartan em proteger contra as alterações morfológicas e o aumento de glicogênio indica um papel importante para o sistema renina-angiotensina nestas respostas / Abstract: Nitric oxide (NO), a co-product of the metabolism of L-arginine to L-citrulline by NO synthases (NOS), has an important role in regulating vascular tone, inflammatory responses, and the gene expression and enzymatic activity of various proteins, including cytochrome P450 and NOS. The chronic inhibition of NOS by Nffi-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) produces sustained arterial hypertension and morphological alterations that include arterial wall hypertrophy and vascular remodeling. These changes can be prevented by concomitant treatment with angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibitors and angiotensin 11 AT1 receptor antagonists. NO is an important modulator in the hepatic vasculature and of hepatic cell function, and may regulate the activity of cytochrome P450 monooxygenases involved in the biotransformation of endogenous and exogeous substances. In this work, we examined the influence of L-NAME on rat liver morphology, hepatic glycogen, cholesterol and triglyceride content, and the activities and expression of the cytochrome P450 isoforms CYP1A1/2, CYP2B1/2, CYP2C11 and CYP2E1. We also examined the expression of two matrix metalloproteinases (MMP-2 and MPP-9) after short-term treament with L-NAME. Male Wistar rats were treated with L-NAME (20 mg/ratlday, administered in the drinking water) for four and eight days (short-term treatment) and two, four and eight weeks (chronic treatment) and the livers were then removed for analysis. Enzymatic induction was produced by treating rats with phenobarbital (to induce CYP2B1/2), ~-naphthoflavone (to induce CYP1A1/2) (80 mg/kg/day each, i.p., 4 d) or pyrazole (200 mg/kg/day, i.p., 2 d) (to induce CYP2E1). Treatment with LNAME significantly elevated the blood pressure and this was reversed by concomitant treatment with enalapril (25 mg/kg/day, p.o., ACE inhibitor) or losartan (30 mg/kg/day, p.o., angiotensin II AT1 receptor antagonist). L-NAME caused vascular hypertrophy in hepatic arteries, with perivascular and interstitial fibrosis involving collagen deposition. There was also a significant increase in the hepatic glycogen content. Ali of these changes were completely reversed by concomitant treatment with enalapril or losartan. L-NAME had no effect on the hepatic cholesterol and triglyceride content, nor did it affect the basal or drug-induced activities and protein expression of the cytochrome P450 isoforms. Short-term treatment with L-NAME enhanced the expression of MMP-2 and MMP-9 in vessel walls and inflammatory cells (mast cells, macrophages). These results show that acute or chronic treatment with L-NAME produces morphological alterations in the hepatic vasculature and increases the hepatic glycogen content without affecting lipid metabolism or the activity or expression of cytochrome P450 isoforms. The lack of effect on cytochrome P450 activities and expression indicates that these enzymes are not significantly influenced by low levels of NO. In contrast, the ability of enalapril and losartan to prevent the morphological alterations and the increase in hepatic glycogen indicates an important role for the renin-antiogensin system in these responses / Doutorado / Histologia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Gilberto de Nucci / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T12:13:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Baracat_JulianaSignori_D.pdf: 5461737 bytes, checksum: 0ff83b88634432535b68af4042a52fff (MD5) Previous issue date: 2006 / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Gilberto de Nucci / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T17:06:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Okuyama_CristinaEunice_D.pdf: 791888 bytes, checksum: 44bf756719cf0cdc26ab70b220532e28 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Compostos farmacológicos que liberam óxido nítrico (NO) têm sido utilizados para avaliar o amplo papel do NO na fisiopatologia e terapêutica de diversas doenças. Estudos demonstram que a deficiência de NO está envolvida com a gênese e evolução de diversos estágios de doenças como, por exemplo, a hipertensão. Deste modo, a adição de uma molécula de NO em drogas previamente estudadas vem sendo praticada por diversos pesquisadores na última década. Estes pesquisadores buscam associar as propriedades farmacológicas de cada droga com as atividades proporcionadas pelo NO exógeno. No presente trabalho, comparamos a farmacocinética e a farmacodinâmica do enalapril com as de um nitro-derivado do enalapril (NCX899), em Beagles machos não anestesiados. Os efeitos do enalapril e NCX899 na hipertensão arterial, bradicardia e vasoconstrição periférica induzida pela inibição aguda da síntese de NO em cães anestesiados também foram investigados. Na avaliação farmacocinética, os cães receberam NCX899 (4 µmol/Kg) ou Enalapril (4 µmol/Kg) pela via intravenosa. Em seguida, as concentrações plasmáticas dos analitos e metabólitos foram quantificadas pelo método de cromatografia líquida de alta eficiência, acoplada à espectrometria de massa (LCMS- MS). No grupo NCX899, a área sob a curva (ASC0-24h) foi 29,18 ± 4,72, 229,37 ± 51,32 e 5159,23 ± 514,88 µgh/l para os analitos nitro-enalapril, enalapril e enalaprilato, respectivamente. No grupo Enalapril, a ASC0-24h foi de 704,53 ± 158,86 e 4149,27 ± 847,30 µgh/l para os analitos enalapril e enalaprilato, respectivamente. As análises estatísticas entre os grupos demonstraram uma diferença significativa para o analito enalapril, mas não para o analito enalaprilato, o metabólito ativo. Entretanto, o NCX899 e o Enalapril foram efetivos de maneira semelhante na inibição da atividade da enzima conversora de angiotensina sérica. Em cães anestesiados, a administração intravenosa do inibidor da síntese de NO, o N?-nitro-L-arginina metil éster (L-NAME; 0,1-10 mg/kg), elevou significativamente a pressão arterial e causou bradicardia. O composto NCX899 atenuou significativamente a hipertensão arterial, bradicardia e vasoconstrição periférica, enquanto o Enalapril não apresentou efeito significativo. Além disso, nossos estudos também demonstraram que o NCX899 pode atuar não só como anti-hipertensivo, mas também auxiliar na inibição da agregação plaquetária. Assim, concluímos que o nitro-derivado do enalapril (NCX899) apresenta uma relação farmacocinética/farmacodinâmica similar ao composto enalapril. No entanto, ao contrário do Enalapril, o NCX899 apresenta um efeito protetor nas alterações cardiovasculares induzidas pela inibição aguda de NO / Abstract: Pharmacological compounds that release nitric oxide (NO) have been useful tools for evaluating the broad role of NO in physiopathology and therapeutics of several diseases. Studies show that lack of NO can cause several diseases such as hypertension. Thus, the addition of a NO molecule in drugs previously studied has been reported by some researchers in the last decade. They look for the combination of the pharmacologic properties of each drug, plus exogenous NO properties. This work has compared the pharmacokinetics and pharmacodynamics of enalapril and a NO-releasing enalapril molecule (NCX899) in conscious male Beagles. The effects of both enalapril and NCX899 in the arterial hypertension, bradycardia and peripheral vasoconstriction induced by acute NO inhibition in anesthetized dogs have also been investigated. In the pharmacokinetic evaluation, dogs received either NCX899 (4 µmol/Kg) or Enalapril (4 µmol/Kg) intravenously. Later, the plasma concentrations of the analytes and metabolites were quantified by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS-MS). In the NCX899 group, the area under time-course curve (AUC0-24h) was 29.18 ± 4.72, 229.37 ± 51.32 and 5159.23 ± 514.88 µgh/l for the nitro-enalapril, enalapril and enalaprilat analytes, respectively. In the Enalapril group, the AUC0-24h was 704.53 ± 158.86 and 4149.27 ± 847.30 µgh/l for the enalapril and enalaprilat analytes, respectively. The statistical analysis between both groups showed a significant difference for the enalapril analyte, but not for enalaprilat, the active metabolite. Moreover, NCX899 and Enalapril were equally effective on inhibiting the activity of serum angiotensin-converting enzyme. In anesthetized dogs, intravenous administration of the NO synthase (NOS) inhibitor N?-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME; 0.1-10 mg/kg) significantly elevated arterial blood pressure with concomitant bradycardia. The compound NCX899 significantly attenuated arterial hypertension, bradycardia and peripheral vasoconstriction, whereas Enalapril had no significant effect. In addition, our work showed that NCX899 also has properties of inhibiting the activity of platelets aggregation. In conclusion, our results showed that the NO-releasing derivative of enalapril NCX899 presents a pharmacokinetic / pharmacodynamic relationship similar to the enalapril compound. Moreover, different from Enalapril, NCX899 presented protective effect in the cardiovascular alterations induced by acute NOS inhibition / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientadores: Mario Jose Abdalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T12:18:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarvalhoFilho_MarcoAntoniode_D.pdf: 1466096 bytes, checksum: 1f931970ba1d622a7bfb3430a68142f0 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Evidências recentes implicam a indução da NO-sintase induzível (iNOS) no desenvolvimento de resistência à insulina associada à obesidade e endotoxemia. A induçãoda iNOS está associada ao aumento da produção de NO, que vem se mostrando um importante sinalizador intra-celular, modificando a função protéica por diversos mecanismos, incluindo Nitrosilação, Nitração e S-nitrosação. A S-nitrosação ocorre pela adição de um grupamento NO ao radical tiol (S-H) de um resíduo de cisteína, formando um nitrosotiol (S-NO). Neste estudo, investigamos se drogas doadoras de NO, Nitrosogluatationa (GSNO) ou Nitrosocisteína (CISNO), e a própria indução da iNOS seriam capazes de provocar S-nitrosação e com isso modificar a função de proteínas envolvidas na via de sinalização insulínica. A insulina inicia suas ações intra-celulares após a ligação à subunidade a do seu receptor transmembrana, o que provoca mudança conformacional e conseqüente auto-fosforilação da subunidade ß, o que ativa sua capacidade tirosina-quinase. Ocorre, então, associação e fosforilação do substrato 1 do receptor de insulina (IRS-1), que uma vez fosforilado, se associa e ativa a fosfatidil inositol 3 quinase (PI 3 quinase), passo fundamental para a ativação da Akt, serina-quinase que modula tanto ações metabólicas quanto de crescimento desencadeadas pela insulina. Neste estudo demonstramos que tanto GSNO quanto CISNO foram capazes de provocar resistência à insulina, tanto em músculo isolado, quanto em animais intactos. Esta resistência foi associada a menor sinalização de insulina pela via IRß/IRS-1/Akt. Após o tratamento com GSNO ou CISNO de músculo isolado ou de animais intactos, observamos S-nitrosação da subunidade ß do receptor de insuilna, o que provocou menor auto-fosforilação e menor atividade tirosina-quinase após estímulo com insulina. Observamos também S-nitrosação do IRS-1, e após o tratamento crônico com droga doadora, os níveis teciduais desta proteína estavam diminuídos. A Akt também foi alvo de S-nitrosação, que aconteceu em paralelo com a perda de sua capacidade serina-quinase, tanto basal , quanto estimulada por insulina. Observamos indução da iNOS em três modelos de resistência à insulina, na obesidade induzida por dieta hiperlipídica, no camundongo diabético ob/ob e na endotoxemia induzida pela infusão de LPS. Nestes três modelos, a sinalização de insulina pela via IRß/IRS-1/Akt estava diminuída, e os níveis de S-nitrosação destas proteínas estava aumentado. Os níveis teciduais de IRS-1 também estavam diminuídos nos três modelos. O bloqueio da indução da iNOS por rosiglitazona no animal com obesidade induzida por dieta, ou por interferência na transcrição da iNOS no camundongo ob/ob, ou pela anulação do gene codificador da iNOS na endotoxemia induzida por LPS, diminuiu o desenvolvimento de resistência à insulina nestes modelos, e impediu a S-nitrosação destas proteínas. Portanto, a S-nitrosação de proteínas envolvidas na transmissão do sinal de insulina é um novo mecanismo molecular de resistência à insulina associado a indução da iNOS / Abstract: Evidence demonstrates that exogenous nitric oxide (NO) and the NO produced by inducible nitric oxide synthase (iNOS) can induce insulin resistance in muscle. Here, we investigated whether this insulin resistance could be mediated by S-nitrosation of proteins involved in early steps of the insulin signal transduction pathway. Exogenous NO donated by S-nitrosoglutathione (GSNO) or by Nitrosocysteine (CYSNO) induced in vitro and in vivo S-nitrosation of the insulin receptor ß subunit (IRß) and protein kinase B/Akt (Akt), and reduced their kinase activity in muscle. Insulin receptor substrate (IRS)-1 was also rapidly S-nitrosated, and its expression was reduced after chronic GSNO treatment. In tree animal models of insulin resistance associated with enhanced iNOS expression ¿ diet-induced obesity, the ob/ob diabetic mice and endotoxemia induced by LPS infusion ¿ we observed enhanced S-nitrosation or IRß/IRS-1 and Akt in muscle. Blocking iNOS induction in muscle by Rosiglitazone in diet-induced obesity, by iNOS anti-sense in ob/ob mice or by genetic knockout in endotoxemia reversed S-nitrosation of these proteins yielding an improvement in insulin action through this pathway. Thus, S-nitrosation of proteins related to insulin signal transduction is a novel molecular mechanism of iNOS-induced insulin resistance / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Francesco Langone / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-07T20:21:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pelagio_FernandaCampos_M.pdf: 2325912 bytes, checksum: b882bbc6cb8bd3261f16270af154e45f (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A atividade física contribui positivamente para a plasticidade cerebral facilitando processos neuroadaptativos e neuroprotetores. Diversos estudos relatam os efeitos positivos da prática de atividade física sobre os processos de aprendizado e memória. Indução de status epilepticus (SE) por pilocarpina provoca lesão na formação hipocampal e distúrbios de memória. O óxido nítrico (NO) tem participação nos processos neurais de aprendizado e memória. Recentemente, evidências apontam para uma provável participação do NO nos mecanismos intracelulares de pró-sobrevivência ativados pela atividade física. Por outro lado, diversos estudos sugerem um possível envolvimento do NO na fisiopatologia da epilepsia. Entretanto, estes estudos são controversos e não esclarecem o papel do NO nas crises epiléticas. Assim, o presente trabalho investigou a participação do óxido nítrico no modelo experimental de epilepsia induzida por pilocarpina e sua relação com o efeito da atividade física voluntária sobre a memória espacial. Camundongos Swiss adultos foram submetidos à indução SE por pilocarpina (P) e então sacrificados: 1 dia (1d), 7 dias (7d), 21 dias (21d) e 35 dias (35d) após SE. Os animais controles (Ct) foram tratados com salina e sacrificados nos mesmos tempos. Os animais anestesiados e em seguida sacrificados 35d após SE foram denominados: controle corredor (CtC), pilo corredor (PC), controle sedentário (CtS) e pilo sedentário (PS). Dois dias após SE, os animais do grupo PC e CtC tiveram acesso livre à roda de corrida durante 28 dias. Após este período, os animais dos grupos CtS, CtR, PS e PR foram testados no labirinto aquático (LA) para avaliação da memória de referência espacial. Quatro animais dos grupos CtS, CtC, PS e PC foram perfundidos com paraformaldeído e os cérebros removidos e processados histologicamente. Cortes frontais do cérebro (5µm) foram obtidos para avaliar a lesão tecidual (coloração de Nissl) e analisar a distribuição dos neurônios nitrérgicos (nNOS) na formação hipocampal dorsal. Outros cinco animais de cada grupo foram decapitados, o hipocampo rapidamente dissecado e congelado em nitrogênio líquido. Homogenato de hipocampo foi utilizado para a avaliação da atividade da NOS dependentes (dNOS) e independente de Ca2+ (iNOS), pela técnica da [3H]-L-Arginina e para a análise da expressão protéica da nNOS por Western blotting. Os animais dos grupos PS e PC apresentaram lesão neuronal e neurodegeneração que não diferiram entre sedentários e corredores. Os animais do grupo PC apresentaram desempenho no teste do LA superior ao registrado no PS e similar ao registrado nos CtS e CtC. Os grupos que sofreram indução de SE apresentaram redução da atividade da dNOS 1 dia após SE que se acentuou com o tempo. A expressão da nNOS reduziu 1 e 7 dias após o SE quando comparado ao grupo controle. A atividade da iNOS não se alterou 1 dia e 7 dias após SE, mas exibiu significativo aumento no grupo P21d quando comparado com respectivo controle. A atividade da dNOS nos grupos PS e PC não diferiram e foram inferiores às observadas nos CtS e CtC. A expressão da nNOS não diferiu entre os grupos CtS, CtC, PS e PC, contudo o grupo PC apresentou uma tendência à redução da expressão da nNOS. Por fim, nossos resultados mostraram que os efeitos positivos da atividade física sobre a memória dos animais PC resultou da ativação de mecanismos moleculares talvez não diretamente mediados por NO. Além disso, nossos dados confirmam a importante participação do NO nos mecanismos fisiopatológicos da epilepsia e mostraram que as isoformas da NOS responsáveis pela sua produção são diferentemente afetadas pelo SE / Abstract: Physical activity contributes to brain plasticity, facilitating neuroadaptive and neuroprotective processes. Many studies show the positive effects of physical activitypractice in process of learning and memory. Pilocarpine-induced status epilepticus (SE) causes injury in hippocampal formation and disturbance in memory. Nitric oxide (NO) participates in neural processes of learning and memory. Recently, evidences showed a probable involvement of NO in pro-survival intracellular mechanisms activated by physical activity. On the other hand, several studies have suggested a possible role of NO in epilepsy pathophysiology. However, these studies have produced controversial results and do not explain the role of NO in epileptic seizures. Therefore, the present work investigated NO participation in experimental model of epilepsy induced by pilocarpine in mice and its relationship with voluntary physical activity effects on spatial memory. Swiss adult mice were submitted to pilocarpine-induced SE (P) and sacrificed after 1day (1d), 7 days (7d), 21 days (21d) or 35 days (35d). Control animals (Ct) were treated with saline and sacrificed in the same time point. The animals sacrificed 35d after SE were named as control runner (CtR), pilo runner (PR), control sedentary (CtS) and pilo sedentary (PS). Two days after SE, the animals of PR and CtR group had access to a running wheel for 28 days. After that, CtS, CtR, PS and PR group¿s animals were tested in water maze (WM) for the referential spatial memory evaluation. Four animals of CtS, CtR, PS and PR groups were perfused with paraformaldehyde and their brains were removed and processed for paraffin embedding. Frontal sections of brains (5µm) were obtained for analysis of tissue damage (Nissl staining) and nitrergic neurons distribution (nNOS) in dorsal hippocampal formation. Moreover, hippocampus from five animals of each group were rapidly dissected and frozen in liquid nitrogen. Homogenates of hippocampus were used to evaluate the activity of calcium-dependent (dNOS) and calcium-independent (iNOS) NOS isoforms by [3H]-Larginine 's technique and the neuronal NOS (nNOS) expression by Western blotting. Animals of PS and PR groups showed neuronal damage and neurodegeneration that did not differ between sedentaries and runners. In WM test, animals of PR group had better performance than PS and similar performance to the registered in CtS and CtR. Pilo's group showed a reduction of dNOS activity 1 day after SE, this reduction increased along the time. Moreover, nNOS expression reduced 1 day and to 7 days after SE when compared to control groups. iNOS activity did not change at 1 day and 7 days after SE, but it increased in P21d group when compared with respective control group. dNOS activity results were similar between PS e PR groups and these were lower than CtS and CtR. nNOS expression was similar in the CtS, CtR, PS and PR groups. However, PR group showed a shift to reduction of nNOS expression. Finally, our data showed that positive effects of physical activity on memory in PR group resulted from molecular mechanisms activation that maybe are not directly mediated by NO. Moreover, our work confirm the important of NO participation in epilepsy pathophysiological mechanisms and also showed that NOS isoforms responsible for NO production are differently affected by SE / Mestrado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Marta Helena Krieger / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-07T20:20:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wanschel_AmarylisClaudineBonitoAzeredo_M.pdf: 1512032 bytes, checksum: 92d5d4fda32e196e08b7ee261c365152 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A incidência de riscos de doença aterosclerótica cardiovascular é maior em homens do que em mulheres na fase reprodutiva, essa diferença diminui quando diminui a produção de estrógenos após a menopausa. Uma série de estudos sugere que essa diferença em ambos os sexos pode ser causada em parte, pela ação pró-aterogênica dos andrógenos. O objetivo deste estudo foi verificar a participação do dimorfismo sexual em camundongos adultos LDLr-/- no efeito vasculoprotetor promovido pelo tratamento com a S-nitrosotiol-N-acetilcisteína (SNAC) na fase inicial da aterogênese por meio dos seguintes avaliações : a) expressão fenotípica da hipertensão; b) desenvolvimento de ateroma; c) perfil lipídico; d) imunorreatividade das isoformas das NOS vasculares. Camundongos machos e fêmeas com 3 meses de idade foram avaliados nos seguintes grupos experimentais: selvagens C57BL/6 (WT) sob dieta comercial; LDLr-/- sob dieta comercial com os controles (CT);LDLr-/-sob dieta hipercolesterolêmica (HC); LDLr-/- sob diet hiperlipidêmica associado ao tratamento com SNAC 0,51µm ip/dia ( HC+SNAC). Após 2 semanas de tratamento com administração de dieta hipercolesterolêmica, verificou-se que as fêmeas desenvolveram lesões ateroscleróticas na aorta proximal ascendente 50% menores em relação aos machos. Tais evidências sugerem o papel protetor do estrógeno presente nas fêmeas adultas no estágio inicial da aterosclerose. O tratamento com SNAC promoveu a redução em 50% na instalação do ateroma em ambos sexos, evidenciando não haver relação com o dimorfismo sexual. Contudo, o perfil lipídico das fêmeas mostrou valores mais elevados que os encontrados em machos, tanto de colesterol (COL), como de triglicérides (TG) plasmáticos nos camundongos sob dieta hipercolesterolêmica. Assim, o tratamento com SNAC não impediu o aumento dos teores lipidêmicos induzidos pela dieta hipercolesterolêmica em fêmeas, inferindo que a condição não está correlacionada ao tamanho da área de lesão desenvolvida. Camundongos fêmeas LDLr-/- sob dieta aterogênica evidenciaram aumento de cerca de 10% na pressão arterial, quando comparados aos respectivos camundongos selvagens (WT). O tratamento com SNAC preveniu totalmente a hipertensão induzida pela dieta hipercolesterolêmica. Contudo, nos machos tal hipertensão foi verificada ocorrer em camundongos LDLr-/- sem dieta hipercolesterolêmica, e o tratamento com SNAC não produziu efeito preventivo na hipertensão. Tais resultados indicam que a gênese da hipertensão é diferente nos dois sexos, sugerindo a participação das vias androgênicas. As fêmeas não apresentaram hipertrofia ventricular esquerda ou redução na frequência cardíaca associada à hipertensão, a qual foi evidenciada nos machos sob as mesmas condições. Assim o conjunto de alterações hemodinâmicas indica que as fêmeas sofreram um menor impacto do que camundongos machos nas alterações cardiovasculares estudadas. A expressão de NOS foi evidenciada na aorta das fêmeas LDLr-/- sob dieta comercial (CT), contudo ausente nas WT e, sob dieta hipercolesterolêmica (HC) a sua imunorreatividade foi menor que no animal controle porém expressiva e difusa , as expressões tanto no controle como no animal HC foram reduzidas pelo tratamento com a SNAC. Estas alterações indicaram a sua participação na disfunção endotelial presente neste modelo e o fato de que o efeito protetor promovido pela SNAC está associado às vias NO/NOS / Abstract: The incidence of risk of coronary artery disease (CAD) is greater in men than in woman during the reproducible years, and this gender difference diminishes after cessation of estrogen production after menopause (Kannel et al, 1976). Many studies have ben suggested also that this gender difference may be caused in part by proaterogenic actions of androgens. The aim this study was verify the role of the sexual dimorphism in LDLr-/- mice in the vasculoprotector effect treatment promoted by S-nitroso-N-acetilcisteína (SNAC) in the initial phase of atherogenesis valuation following:1- phenotypic expression of the hypertension; 2- lesion area development; 3- plasma lipid levels; 4- localization of NOS using immunohistochemistry; Male and female mice 3 months old were evaluated in experimental groups following: C57Bl/6 wild type (WT) chow diet; LDLr-/- control group (CT) chow diet; LDLr-/- hypercholesterolemic diet(HC); LDLr-/- hypercholesterolemic diet plus SNAC 0.51 µmol/Kg ip/daily (SNAC). After treatment for 2 weeks the female developed a 50% decrease lesion area in the proximal aortic as compared to males. This evidence indicated the protector role of the estrogen in female in the initial stage of atherosclerosis. The treatment with SNAC promoted a 50% reduction in installation of atherosclerosis in both sexes with no sexual dimorphism. In female the lesion area was not correlated with the average plasma cholesterol levels. Female mice LDLr-/- under a hypercholesterolemic diet showed an increase of 10% in blood pressure compared whith the background (WT). The treatment with SNAC prevented the hypertension induced by the hypercholesterolemic diet. Nevertheless male hypertension is associated with mice LDLr-/- and chow diet treatment does not prevent hypertension. These results showed that hypertension genesis is different in both sexes suggesting the participation of androgenic pathways. The males showed left ventricular hypertrophy and decreased heart rate associated with hypertension, but the female in the same conditions did not show. Thus is hemodynamic alteration set indicate that female have a less impact than male mice in the studied cardiovascular alterations. The expression of the three types of NOS was evident in aorta of the female LDLr-/- chow diet, although absent in WT. In female LDLr-/- hypercholesterolemic diet there was enhanced immunoreactivity. This overexpression was decreased by treatment with the SNAC. These alterations participated in endothelial dysfunction present in this model and the protector effect promoved by SNAC is associated with the NO/NOS pathways / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular