Orientador: Eros Antonio de Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T12:06:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ozaki_MichikoRegina_D.pdf: 2408149 bytes, checksum: 859e32381ddd8c14c86054feca0e96a2 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A regressão da aterosclerose é ainda um campo muito amplo a ser pesquisado, com mecanismos a serem desvendados, sendo o coelho um animal utilizado internacionalmente para fins de pesquisa, nesta área. Este trabalho foi realizado com objetivo de verificar a evolução e involução da aterosclerose em coelhos hipercolesterolêmicos e sua relação com a função endotelial, lípides plasmáticos, colesterol e peroxidação tecidual e quantificação de aterosclerose. Foram utilizados 30 coelhos da raça Nova Zelândia, com peso inicial de 3,0 a 3,5 kg e divididos em 6 grupos (n=5): G1 - animais não hipercolesterolêmicos; G2 - animais hipercolesterolêmicos; G3 - animais hipercolesterolêmicos, seguidos por 4 meses de dieta não hipercolesterolêmica; G4 - animais hipercolesterolêmicos, seguidos por 1 mês de dieta não hipercolesterolêmica e tratamento com rosuvastatina (5,0mg/animal/dia); G5 - animais hipercolesterolêmicos, seguidos por 2 meses de dieta não hipercolesterolêmica e tratamento com rosuvastatina (5,0mg/animal/dia); G6 - animais hipercolesterolêmicos, seguidos por 4 meses de dieta não hipercolesterolêmica e tratamento com rosuvastatina. (5,0mg/animal/dia). Sendo que os animais dos grupos G2 a G6 foram alimentados com dieta hipercolesterolêmica composta de colesterol a 0,5% e 10% de gordura de coco por um período de 4 meses. Ao final do experimento foram dosados no plasma: colesterol total, triglicérides e HDL-c. A LDL-c foi estimada através da formula de Friedwald. Em segmentos de aorta, dosou-se colesterol e MDA, assim como foi medida a função endotelial utilizando-se de curvas de concentração/efeito com acetilcolina. A quantificação de aterosclerose foi verificada macroscopicamente na aorta corada pelo sudam IV, e microscopicamente em fragmentos corados com hematoxilina-eosina e estudados por microscopia óptica. A quantificação foi realizada por software especifico. Os valores do colesterol total, LDL-c, HDL-c, triglicérides, colesterol e peroxidação teciduais, nos diferentes grupos de animais, foram examinados por teste estatístico não paramétrico de Kruskall-Walls, seguido do teste de comparação múltipla de Dunn. As curvas que expressam a função endotelial foram comparadas por analise de variância (ANOVA) para medidas repetidas. Considerando-se valores significativos "p"<0,05. Os parâmetros, tanto bioquímicos, quanto teciduais estiveram aumentados no G2 em relação ao G1. A suspensão da dieta hipercolesterolêmica não foi suficiente para retornar os parâmetros teciduais aos do grupo G1. Os grupos tratados com rosuvastatina G4, G5 e G6, tiveram os lípides plasmáticos diminuídos significativamente; porem, em relação ao colesterol e peroxidação teciduais apenas nos animais do G6 ocorreu diminuição significativa. Em relação a função endotelial, somente, os animais do grupo G6 apresentaram melhora significativa. Apenas a suspensão da dieta não foi eficiente para melhorar os valores teciduais do colesterol, peroxidação lipídica, função endotelial e involuir a aterosclerose. O tratamento prolongado com rosuvastatina alem da suspensão da dieta hipercolesterolêmica, diminuiu o colesterol e peroxidação lipídica teciduais, melhorou a função endotelial e produziu involução da aterosclerose / Abstract: Regression of atherosclerosis is still a very broad field to be searched, with mechanisms to be explored, the rabbit is an animal used internationally for research in this area. This work was carried out aiming at checking the progress and regression of atherosclerosis in hypercholesterolemic rabbits and its relation to endothelial function, lipid peroxidation and plasma and tissue. We used 30 New Zealand white rabbits initially weighing 3.0 to 3.5 kg and divided into six groups (n=5): G1: not hypercholesterolemic animals, G2: hypercholesterolemic animals, G3: hypercholesterolemic animals, followed by four months of not hypercholesterolemic diet; G4: hypercholesterolemic rats, followed by a month of not hypercholesterolemic diet and treatment with rosuvastatin (5.0mg/animal/day), G5: hypercholesterolemic rabbits, followed by two months of diet does not hypercholesterolemic and treatment with rosuvastatin (5.0mg/animal/day) G6: hypercholesterolemic animals, followed by four months of diet does not hypercholesterolemic and treatment with rosuvastatin. (5.0mg/animal/day). The animals in groups G2 to G6 were fed a hypercholesterolemic diet composed by 0.5% cholesterol and 10% coconut oil for a period of four months. At the end of the experiment were measured in plasma: total cholesterol, triglycerides and HDL-C. The LDL-C was estimated by the Friedwald formula. In aortic segments dosed 0cholesterol and MDA, as well as measured endothelial function through curves of concentration-effect with acetylcholine. Quantification of atherosclerosis in the aorta was observed macroscopically stained sudam IV, and microscopic fragments stained with hematoxylin-eosin and studied by light microscopy. Quantification was performed by specific software. The values of total cholesterol, LDL-C, HDL-C, triglycerides, cholesterol and tissue peroxidation in different groups of animals were examined by nonparametric statistical test Kruskal-Walls, followed by multiple comparison test of Dunn. The curves expressing endothelial function were compared by analysis of variance (ANOVA) for repeated measures. Considering the significant values "p"<0.05. The parameters, both biochemical and tissue were increased for G2 compared to G1. The suspension of the hypercholesterolemic diet was not enough parameters to return the tissue to the G1. The groups treated with rosuvastatin G4, G5 and G6, plasma lipids were significantly decreased, but in relation to cholesterol peroxidation and tissue in animals only significant decrease in the G6. Regarding the endothelial function, only the animals of the G6 group showed significant improvement. Only the suspension of the diet was not effective for improving the tissue values of cholesterol, lipid peroxidation, endothelial function and regress atherosclerosis. Prolonged treatment with rosuvastatin, besides the suspension of hypercholesterolemic diet decreased cholesterol and tissue lipid peroxidation, improved endothelial function and produced regression of atherosclerosis / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientadores: Jacqueline Mendonça Lópes de Faria, José Butori Lopes de Faria / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T10:41:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosales_MarianaAparecidaBrunini_D.pdf: 28953374 bytes, checksum: e9a2824bad639c7cbd3628c24c4308ad (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A patogênese da retinopatia diabética (RD) está associada ao estresse nitrosativo. Alterações na barreira hemato-retiniana (BHR) externa, formada pelas células do epitélio pigmentar da retina (EPR), estão associadas às fases precoces da RD e podem acarretar no desequilíbrio da manutenção dos fotorreceptores e consequentemente promoverem mudanças nas células neuronais da retina. O estresse nitrosativo como conseqüência do aumento da produção de óxido nítrico (NO¿) produzido pela super expressão da óxido nítrico sintetase induzida (iNOS) esteve presente em todas as camadas da retina, inclusive no EPR em condições de RD experimental in vivo precoce ou na linhagem celular humana do EPR (ARPE-19) expostas à alta concentração de glicose. O tratamento com agentes químicos como a S-nitrosoglutationa (GSNO), ou naturais (cacau enriquecido com polifenol) atuaram em diferentes vias de inibição da iNOS, prevenindo o estresse nitrosativo. Para o estudo in vivo com o colírio de GSNO (artigo I) foram utilizados animais espontaneamente hipertensos (SHR) com 4 semanas de idade. O diabetes (DM) foi induzido por STZ. Após a confirmação do DM (48 horas), os animais foram divididos em 6 grupos: controles (CTs) veículo; GSNO 900nm e GSNO 10?m ou DMs veículo; GSNO 900nm e GSNO 10?m. O efeito do tratamento com colírio de GSNO foi dependente da presença ou ausência da condição do DM. Nos animais CT, o GSNO atuou como um agente nitrosativo e nos animais DM preveniu o aumento da expressão da iNOS, preservando a retina funcional. Os estudos in vitro, demonstraram que o efeito do GSNO foi deletério ou protetor dependente da concentração de glicose. Nas células ARPE-19 expostas a condições normais de glicose, o tratamento promoveu um aumento na produção de NO¿ sem aumentar a expressão de iNOS e nas células sob alta glicose induziu uma modificação pós-translacional de proteína, a S-glutationilação da iNOS prevenindo o estresse nitrosativo. No estudo do cacau (artigo II), foi avaliado in vitro (ARPE-19 exposta a alta concentração de glicose) o seu efeito protetor dependente da concentração de polifenóis. Para isso foram testadas duas formulações de cacau que diferiram somente na concentração de polifenol: 0,5% para o cacau com baixo teor de polifenol e 60,5% para o cacau com alto teor de polifenol. A epicatequina (EC), encontrada na concentração de 12% no cacau com alto teor de polifenol foi tão eficaz quanto o próprio e esteve envolvida no controle da expressão da iNOS através da estimulação do receptor ?-opióide (DOR) diminuindo os níveis de TNF-?. A modulação da iNOS, preveniu a S-nitrosilação da caveolina-1 (CAV-1) e diminuição da expressão das junções intercelulares claudina-1 e ocludina através da prevenção da interação CAV-1?junções. Em ambos os estudos, o alvo terapêutico foi a iNOS em duas diferentes modalidades: modificação pós-translacional de proteína e modulação do TNF-? via DOR no EPR em modelos experimentais de RD. Os tratamentos apresentados neste trabalho demonstraram a iNOS como alvo terapêutico e mostraram-se eficaz em conter danos funcionais e morfológicos promovidas pela situação de mimetismo do DM no EPR demonstrando o importante papel da iNOS no desenvolvimento da RD / Abstract: The pathogenesis of diabetic retinopathy (DR) is associated with nitrosative stress. Changes in outer blood-retinal barrier (BRB), formed by retinal pigment epithelium cells (RPE) are associated in the early stages of DR and can cause imbalance in the maintenance of photoreceptors and thereby cause changes on retinal neuronal cells. The nitrosative stress as a result of increased production of nitric oxide (NO) produced by overexpression of nitric oxide synthase (iNOS) was present in all layers of the retina and mainly in RPE cells in early in vivo experimental DR or in human RPE cell line (ARPE-19) exposed to high glucose condition. Therapy with chemical agents such as S-Nitrosoglutathione (GSNO) or natural compounds (enriched cocoa polyphenol) acted in different pathways of iNOS inhibition, preventing nitrosative stress. For the in vivo study with GSNO eye drops (article I), it were used spontaneously hypertensive rats (SHR) rats with 4 week old. Diabetes (DM) was induced by streptozotocin (STZ). After DM confirmation (48 hours), the animals were divided into 6 groups: controls (CTs) vehicle; GSNO 900nm and GSNO 10?m or DMs vehicle; GSNO 900nm e GSNO 10?m. The effects of treatments were dependent on glucose concentration. In CT animals, GSNO acted as a nitrosative agent and in DM rats prevented iNOS overexpression, preserving the retina function. In vitro study showed that GSNO protective or deleterious effects were dependent on the glucose concentration. In ARPE-19 cells exposed to normal glucose, the treatment promoted an increase of NO¿ production without increase iNOS expression and in cells under high glucose (HG) condition induced post-translational protein modification, S-glutationylation of iNOS, preventing nitrosative stress. In the study with cocoa (article II), it was evaluated its protective effect dependent on concentration of polyphenols in ARPE-19 cells under HG condition. For this study, the composition of cocoa was the same in both preparations with the only difference in the amounts of polyphenol, 0.5% for low polyphenol cocoa (LPC) and 60.5% for high polyphenol cocoa (HPC). Epicatechin (EC), found in 12% of HPC was similarly protective compare to HPC and it was involved in controlling iNOS expression by stimulation of the delta opioid receptor decreasing TNF- ? levels. The modulation of iNOS prevented S-nitrosylation of caveolin-1 (CAV-1) and decreased expression of claudin-1 and occluding tight junctions by preventing CAV-1/junctions interactions. The treatments presented here showed iNOS as a therapeutic target containing functional and morphological changes promoted by DM milieu in RPE showing the important role of iNOS in the development of DR / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Clínica Médica

Orientadores: Carlos Arturo Levi D'Ancona, Edson Antunes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T14:53:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_RicardoRegesMaiade_D.pdf: 1519142 bytes, checksum: f2835a2052000035eb2c8fe2d199ca7b (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Sintomas do trato urinário inferior (STUI) estão associados com a piora da Qualidade de Vida dos pacientes e geram custos substanciais para a sociedade. Nos últimos anos houve aumento no conhecimento da fisiopatologia e história natural do STUI e obstrução benigna da próstata (OBP). O óxido nítrico (NO) tem sido implicado como neurotransmissor em vários sítios do sistema nervoso de mamíferos, incluindo as sinapses periféricas do trato urogenital em homens. Estudos recentes avaliaram os efeitos dos inibidores da enzima fosfodiesterase tipo 5 (PDE5) em pacientes com STUI secundário à OBP e observou-se melhora dos sintomas. Como, atualmente, não se sabe o exato papel da sildenafila no tratamento da disfunção miccional associado à OBP foi sugerido em um desses estudos que novas bases fisiopatológicas seriam necessárias para avaliar o efeito do inibidor da fosfodiesterase no trato urinário inferior. Objetivos: Os objetivos deste estudo foram determinar os efeitos urodinâmicos da inibição da síntese de óxido nítrico pela N-nitro-L-arginina metil éster (L-NAME), bem como a ação da sildenafila no trato urinário inferior de ratos com deficiência crônica de NO. Materiais e Métodos: No estudo foram utilizados 27 ratos da espécie Wistar que foram submetidos a estudo urodinâmico, sendo nove controles (Grupo 1), oito tratado com L-NAME (60mk/Kg/dia dissolvido em água) por 30 dias (Grupo 2), quatro tratados somente com sildenafila (100µg/Kg intravenoso) (Grupo 3) e seis tratados com L-NAME por 30 dias seguidos de administração aguda de sildenafila intravenoso(100µg/Kg) (Grupo 4). Resultados: A administração crônica e sistêmica de L-NAME resultou em aumento significativo no número de contrações não associado à micção (0,98 ±0,75 versus 2,71 ±0,89), limiar de volume (1,26 ±0,38 versus 2,8 ±1,64) e frequência dos ciclos de micção (1,2 ±0,65 versus 1,79 ±0,78), comparando Grupos 1 e 2, respectivamente. A administração intravenosa de sildenafila para os animais do Grupo 3 não alterou a frequência (pré-sildenafila 1,23 ±0,37 versus pós-sildenafila 1,3 ±0,15) e a amplitude dos ciclos de micção (pré-sildenafila 8,5 ±3,16 versus pós-sildenafila 9,0 ±2,99). Foi encontrada diferença significativa entre os Grupos 3 e 4 em relação a frequência dos ciclos de micção após administração da sildenafila (1,3 ±0,15 versus 0,35 ±0,25). A amplitude, antes da administração da sildenafila foi maior no Grupo 4 (8,50 ±3,16 versus 27,0 ±8,73; Grupos 3 e 4, respectivamente), porém tornou-se semelhante aos animais do Grupo 3 após a sildenafila (9,0 ±2,99 versus 7,5 ±6,6; Grupos 3 e 4, respectivamente). Conclusões: A redução sistêmica de óxido nítrico promove contrações involuntárias do detrusor e ciclos de micção de menor intervalo. A administração da sildenafila, em animais com deficiência crônica de óxido nítrico, promove diminuição do número de ciclos de micção e da amplitude das contrações. / Abstract: The lower urinary tract symptoms (LUTS) are associated with a worsening in patients' Quality of Life and lead to substantial costs for society. There is a special interest in the development of effective treatment options, with low morbidity, for detrusor overactivity (DO) secondary to benign prostatic obstruction (BPO). Nitric oxide (NO) has been involved as a neurotransmitter in several sites of the nervous system of mammals, including peripheral synapses of the urogenital tract. Sildenafil has been used in the clinical treatment of men with LUTS associated with BPO, with improvement in symptoms. However, this is just one assumption as it has not been proven by experimental studies and the precise role of sildenafil in the treatment of voiding dysfunction associated with BPO is not known. Objective: The aims of this study were evaluate the urodynamic effects of nitric oxide inhibition synthesis by N-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME), as well the action of sildenafil in the lower urinary tract of rats with chronic deficiency of nitric oxide.Materials and Methods: Twenty-seven adult Wistar rats underwent anesthetized cystometrograms: nine controls (Group 1), eight treated with oral L-NAME (60mg/kg/day dissolved in drinking water) for 30 days (Group 2), four treated with sildenafil only (100µg/kg intravenously, IV) (Group 3) and six treated with oral L-NAME for 30 days followed by acute IV sildenafil (100µg/Kg ) (Group 4). Results: The chronic and systemic administration of L-NAME resulted in a significant increase in non voiding contractions (0,98 ±0,75 versus 2,71 ±0,89), volume threshold (1,26 ±0,38 versus 2,8 ±1,64) and frequency of micturition cycles (1,2 ±0,65 versus 1,79 ±0,78), comparing Groups 1 e 2, respectively. The others parameters were not differences. The intravenous administration of sildenafil to Group 3 animals did not significantly alter the frequency (pre-sildenafil 1,23 ±0,37 versus post-sildenafil 1,3 ±0,15) or amplitude of micturition cycles (pre-sildenafil 8,5 ±3,16 versus post-sildenafila 9,0 ±2,99). A significant difference was found between the groups in relation to: void cycles after administration of sildenafil (1,3 ±0,15 versus 0,35 ±0,25). The amplitude before administration was large in Group 4 (8,50 ±3,16 versus 27,0 ±8,73; Groups 3 e 4, respectively), however become similar to that of the Group 3 animals after sildenafil (9,0 ±2,99 versus 7,5 ±6,6; Groups 3 e 4, respectively). Conclusion: The systemic reduction of nitric oxide increase non voiding contractions and frequency of micturition cycles. The administration of sildenafil in animals with chronic deficiency of nitric oxide decreases the number of micturition cycles as well as the contractions amplitude. / Doutorado / Cirurgia / Doutor em Cirurgia

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-01-11T13:37:44Z No. of bitstreams: 1 henriquetavieiravankeulen.pdf: 2640042 bytes, checksum: d345a0bc1ee637ebbc9b770acd474c42 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-01-25T17:08:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 henriquetavieiravankeulen.pdf: 2640042 bytes, checksum: d345a0bc1ee637ebbc9b770acd474c42 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-25T17:08:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 henriquetavieiravankeulen.pdf: 2640042 bytes, checksum: d345a0bc1ee637ebbc9b770acd474c42 (MD5) Previous issue date: 2015-03-20 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A presente dissertação foi apresentada em dois artigos que contemplaram os seguintes objetivos: (i) avaliar a concentração sérica do metabólito de óxido nítrico (NO) em mulheres tabagistas e não tabagistas com excesso de peso e correlacionar o NO com variáveis antropométricas e com o número de cigarros/dia (artigo 1), e (ii) comparar a concentração sérica de NO em tabagistas no início e após 4 meses de tratamento para abstinência tabágica e correlacionar o NO com os marcadores inflamatórios (artigo 2). Foi realizado um estudo de intervenção, que avaliou os participantes do Centro Interdisciplinar de Pesquisa e Intervenção em Tabagismo do Hospital Universitário da Universidade Federal de Juiz de Fora (CIPIT-HU/UFJF) no início do tratamento para abstinência e aqueles que se mantiveram até o término da pesquisa após 4 meses, tanto homens quanto mulheres. Dos 159 indivíduos que iniciaram o tratamento, 86 foram incluídos no estudo. Artigo1: Para a realização da 1a fase da pesquisa, foram avaliados os exames bioquímicos, dados antropométricos e número de cigarros/dia de 20 mulheres tabagistas com sobrepeso, entre 20 e 72 anos que utilizaram o tratamento de reposição de nicotina (TRN) e foram convidadas 18 mulheres também com sobrepeso, não tabagistas, pareadas por idade, de outro projeto denominado Saúde na Balança que funcionava no mesmo local. Foram avaliados os exames bioquímicos e dados antropométricos dessas mulheres para serem comparadas às mulheres tabagistas. Os resultados apresentaram diminuição dos níveis séricos de NO em todas as participantes da pesquisa indicando que ambos os grupos podem estar sofrendo diminuição de biodisponibilidade de NO, o que pode estar relacionado com o aumento de fatores de risco para doenças relacionadas com o tabagismo e com o sobrepeso. Portanto, parece que a associação do tabagismo com o sobrepeso interfere nos níveis finais de nitrito. Artigo 2: Para a continuidade da pesquisa foram analisados os níveis séricos de NO, citocinas (IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 e TNF-α) e índice HOMA-IR no início e ao final do tratamento daqueles indivíduos que se mantiveram após 4 meses de tratamento (30 sujeitos, do sexo feminino e masculino – 25 abstinentes e 5 ainda fumantes). Foi observada uma redução significativa (p=0,001) do valor mediano de NO inicial de 18,80 (3,55 – 80,01) μmol/L para o NO final 8,10 (2,85 – 14,97) μmol/L após 4 meses de tratamento. Na comparação entre os dados do NO no início e no final do tratamento, os participantes que não conseguiram se manter abstinentes (9,18 ± 3,85 μmol/L) e os abstinentes (7,58 ± 3,03 μmol/L) não apresentaram diferença estatisticamente significativa (p= 0,304). Ainda considerando o status tabágico após 4 meses de tratamento (abstinente x fumante), não foram encontradas diferenças estatísticas dos valores das citocinas analisadas, mas acredita-se que essa resposta faça parte de um processo adaptativo do organismo pela redução do uso da nicotina. Dos 86 sujeitos que iniciaram o tratamento e foram incluídos nesta pesquisa, somente 25 indivíduos conseguiram se manter abstinentes, mas os 5 sujeitos que não conseguiram se abster, diminuíram o consumo de cigarros/dia. O IMC que no início já era, em média, indicativo de sobrepeso (27,84 ± 5,58Kg/m2), teve um acréscimo no seu valor final (28,63 ± 5,70Kg/m2), apresentando um aumento estatisticamente significativo (p= 0,018), potencializando o risco de sobrepeso e obesidade. Além disso, o tempo determinado para o tratamento pode ter sido insuficiente para se perceber uma melhora no estado geral dos participantes e, ainda, a utilização da TRN durante todo o tratamento pode ter sido determinante para os resultados encontrados. / This work was presented in two articles which contemplated the following objectives: (i) to evaluate the serum concentration of nitric oxide metabolites (NO) in smokers and nonsmokers overweight women and correlate with anthropometric variables NO and the number of cigarettes / day (Article 1), and (ii) to compare the serum concentration of NO in smokers at baseline and after 4 months of treatment for smoking cessation and correlate NO with inflammatory markers (Article 2). We conducted an intervention study which evaluated the participants of the Interdisciplinary Center for Research and Intervention in University Hospital Tobacco, Federal University of Juiz de Fora (CIPIT-HU/UFJF) at the beginning of treatment for abstinence and those who remained until the end of the study after four months, both men and women. Of the 159 individuals who began treatment, 86 were included in the study. Article1: To carry out the first phase of the study, we evaluated the biochemical, anthropometric data and number of cigarettes/day of 20 women smokers overweight, ranging from 20 to 72 who used the treatment of nicotine replacement therapy (NRT) and 18 also overweight women, nonsmokers and matched by age, were invited to another project called Health in the Balance that worked in the same place. We evaluated the biochemical and anthropometric data of these women to be compared to female smokers. The results showed decreased serum levels of NO in all study participants indicating that both groups may be experiencing decreased bioavailability of NO, which may be associated with increased risk factors for diseases related to smoking and the overweight. Therefore, it seems that the association of smoking with overweight interferes in the final levels of nitrite. Article 2: To continue the research we analyzed the serum levels of NO, cytokines (IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 and TNF-α) and HOMA-IR index at the beginning and the end of the treatment of those individuals who remained after 4 months of treatment (30 subjects, female and male - 25 abstinent and 5 still smoking). A significant reduction was observed (p = 0.001) of the initial NO median value of 18.80 (3.55 to 80.01) μmol/L for NO end 8.10 (2.85 to 14.97) μmol/L after 4 months of treatment. Comparing the data of NO at the beginning and end of treatment, participants who failed to keep abstinent (9.18 ± 3.85 μmol/L) and abstinent (7.58 ± 3.03 μmol/L) do not show statistical significant difference (p = 0.304). Still considering the smoking status after 4 months of treatment (abstinent x smokers), there were no statistical differences of the values of the analyzed cytokines, but it is believed that this response is part of an adaptive process in the body by reducing the use of nicotine. Of the 86 patients who started treatment and were included in this survey, only 25 individuals managed to remain abstinent but the 5 subjects who could not refrain decreased consumption of cigarettes/ day. BMI which earlier was already on average overweight sign (27.84 ± 5,58Kg/m2), had an increase in its final value (28.63 ± 5,70Kg/m2), with a statistically significant increase (p = 0.018), enhancing the risk of overweight and obesity. In addition, the time allotted for the treatment may have been insufficient to realize an improvement in the general condition of the participants and also the use of NRT during the treatment may have been decisive for the results.

A atividade dos receptores ativados por proliferadores de peroxissoma (PPAR) e receptor X hepático (LXR) são regulados por ácidos graxos. Entretanto, o papel do LNO2, um produto endógeno da nitração do ácido linoléico por espécies reativas derivadas de óxido nítrico (&#8226;NO), na via de sinalização que regula a ativação destes receptores ainda não está elucidada. Assim, considerando a propriedade do LNO2 como doador de &#8226;NO, nós investigamos a participação da via de sinalização p21Ras/Raf/ERK na ativação de PPAR e LXR por LNO2. Os resultados obtidos demonstraram que LNO2, na concentração de 0.01&#181;M, foi um potente ativador de PPAR quando comparado ao ligante natural ácido linoléico, o qual apresentou ativação equivalente do PPAR na concentração de 10&#181;M. O LNO2, contudo não teve efeito na ativação de LXR. LNO2 foi um potente ativador de p21Ras quando comparado ao ácido linoléico. A ativação de Ras ocorreu após 5 minutos de incubação com LNO2 em células parentais. Entretanto, em células transfectadas com p21RasC118S, o LNO2 não foi capaz de ativar Ras. A ativação de Ras e PPAR foi dependente da liberação de &#8226;NO a partir de LNO2, o que foi evidenciado na presença de C-PTIO, um seqüestrador de &#8226;NO. LNO2 ativou ERK, mas não demonstrou efeito relevante na ativação de p38 MAP kinase. A utilização de um inibidor específico de MEK, PD09895, inibiu a ativação de ERK induzida por LNO2, sugerindo que existe uma conexão entre ERK e a ativação de PPAR. Nós concluímos que a ativação do receptor nuclear PPAR por LNO2 é dependente de &#8226;NO e da via de sinalização p21Ras/Raf/ERK, a qual é capaz de ativar os subtipos &#945;, &$946; e &#947; do PPAR, modulando, desse modo, a expressão de genes responsivos a este fator de transcrição. / Fatty acids bind to and regulate the activity of peroxissome proliferator-activated (PPAR) and liver X receptors (LXR). However, the role of LNO2, an endogenous product of the nitration of linoleic acid by nitric oxide (&#8226;NO)-derived reactive species, on signalling pathways regulating these nuclear receptors is poorly understood. Thus, considering the properties of LNO2 as &#8226;NO donor, we investigated the role of p21RasMAP kinases signaling pathway in the activation of PPARs and LXR by LNO2. LNO2 at physiologically relevant concentrations (0.01 &#181;M) activates PPAR. By contrast, linoleic acid, a natural ligand for PPAR, only activated the receptor at much higher concentrations (10&#181;M). However, it did not affect LXR activation. LNO2 is a more potent activator of p21 Ras than linoleic acid at the same conditions. Ras activation occurred within the first 5 minutes after LNO2 addition to parental cells. However, in p21RasC118s transfected cells, were unable to detect activation of Ras. Ras and PPAR activation depends on &#8226;NO released from LNO2 as evidenced by the inhibitory effect of C-PTIO, a &#8226;NO scavenger. LNO2 activated ERK but displayed no effects relevant on p38 MAP kinase. In addition, the use of specific inhibitors to MEK, PD09895, blocked PPAR activation and ERK phosphorylation by LNO2, suggesting a connection between ERK and the activation of PPAR. We conclude that LNO2 induced THP-1 cells activating Ras by S-nitrosation and recruiting the MAP kinase ERK, a downstream element of this signalling cascade and activated PPAR (&#945;, &#946; and &#947;).

A redução da biodisponibilidade óxido nítrico (&#8226;NO) tem sido responsável por complicações vasculares em algumas doenças, incluindo Diabetes Mellitus tipo 2 (DMII). A disfunção endotelial (DE) pode ser ocasionada pela baixa biodisponibilidade do &#8226;NO e estudos indicam que a hiperglicemia pode estar contribuindo para esse evento. Outro fato importante é que grande parte dos indivíduos que apresentam Intolerância à Glicose (IG) evolui para DMII. Portanto, o objetivo desse trabalho foi avaliar de que forma o estado hiperglicêmico poderia interferir sobre os metabólitos do &#8226;NO (S-nitrosotióis, nitrato + nitrito e nitrotirosina), inibidores endógenos da &#8226;NO sintase (ADMA e SDMA), homocisteína e a DE através da medida da atividade da n-acetil-&#946;-glicosaminidase (NAG). Neste estudo participaram 140 voluntários: 12 controles (C), 32 IG e 96 DMII. A concentração de glicose foi superior nos grupos IG (109&#177;10mg/dL) e DMII (165&#177;66mg/dL) em relação ao grupo C (88&#177;11mg/dL) (p<0.05). Somente o grupo DMII (8,5&#177;1,9%; 4,57&#177;2,78mg/dL) apresentou níveis elevados de hemoglobina glicada e frutosamina em relação ao grupo C (6,0&#177;0,9%; 2,31&#177;0,27mg/dL). Entretanto, os metabólitos do &#8226;NO (nitrato+nitrito, S-nitrosotióis e nitrotirosina) apresentaram concentrações elevadas nos grupos IG (35,1&#177;12,9&#181;M; 137&#177;45nM; 352&#177;104nM) e DMII (39,2&#177;18,0&#181;M; 143&#177;73nM 472&#177;231nM) em relação ao grupo C (26,6&#177;6,2&#181;M; 78&#177;46nM; 260&#177;74nM). A função endotelial também esteve alterada nos grupos IG (28,0&#177;7,3U/L) e DMII (29,4&#177;8,7U/L) em relação ao grupo C (21,7&#177;3,9U/L), como indicado pela atividade da NAG. O mesmo comportamento foi observado com os inibidores endógenos de &#8226;NO (ADMA e SDMA). A concentração de homocisteína plasmática não apresentou diferença significativa entre os grupos. Os dados demonstraram que os indivíduos IG apresentaram alterações bioquímicas, relacionadas ao estresse oxidativo e à disfunção endotelial, semelhantes aos pacientes com DMII, as quais poderiam contribuir para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares. / The nitric oxide (NO) has been responsible for vascular complications in some diseases, including Diabetes Mellitus type 2 (DMII). Endothelial dysfunction (ED) may be caused by NO low bioavailability and studies indicate that the hyperglycemia may be contributing to this event. Other important fact is that a large number of individuals who present Glucose Intolerance (GI) develop DMII. Therefore, the objective of this study was to evaluate the way the hyperglycemic state could interfere upon the NO metabolites (S-nitrosotiois, nitrate + nitrite and nitrotirosine), endogen inhibitors of NO synthase (ADMA, and SDMA) and the DE using n-acetyl-&#946;-glicosaminidase (NAG) activity measure. In this study, 140 volunteers participated: 12 as controls (C), 32 GI and 96 DMII. Glucose concentration was superior in GI group (109&#177;10 mg/dL) and DMII group (165&#177;66mg/dL) in relation to group C (88&#177;11mg/dL) (p<0.05). Only DMII group (8,5&#177;1.9%; 4,57&#177;2,78mg/dL) showed high leveIs of glicade hemoglobin and frutosamine in relation to group C (6,0&#177;0,9%; 2,31&#177;0,27mg/dL). However, NO metabolites (nitrate + nitrite, S-nitrosotiois and nitrotirosine) showed high concentrations in groups GI (35,1&#177;12,9&#181;M; 137&#177;45nM; 352&#177;104nM) and DMII (39,2&#177;18,O&#181;M; 143&#177;73nM; 472&#177;231nM) in relation to group C (26,6&#177;6,2&#181;M; 78&#177;46nM; 260&#177;74nM). The endothelial function was aIso altered in groups GI (28,0&#177;7,3U/L) and DMII (29,4&#177;8,7U/L) in relation to group C (21,7&#177;3,9U/L), as indicated by NAG activity. The same behavior was observed with endogen inhibitors of NO (ADMA and SDMA). Plasmatic homocystein concentration has not shown significant difference between the groups. Data has shown that the individuaIs IG presented biochemistry alterations, related to the oxidative stress and the endothelial dysfunction, similar to the patients with DMII, which could contribute to the development of cardiovascular diseases.

A fisiopatologia da sepse se caracteriza por hipotensão acompanhada de aumento da secreção de vasopressina (AVP) na fase inicial e diminuição numa fase mais tardia. Essa hipotensão é em parte devido ao aumento da quantidade de óxido nítrico, que juntamente com outros mediadores tem sua produção aumentada durante a sepse. A óxido nítrico sintase (NOS) é responsável pela síntese deste mediador, e sua isoforma neuronal (nNOS) está presente no músculo esquelético, pulmões, testículos, próstata, pele e também nos neurônios vasopressinérgicos do hipotálamo. O presente trabalho avaliou a participação do óxido nítrico produzido pela isoforma neuronal de NOS sobre a secreção temporal de AVP durante a sepse experimental. Ratos Wistar receberam injeção i.p. de 7-nitroindazol (50mg/kg ou 80mg/kg), inibidor específico da NOS neuronal, ou DMSO 10% + óleo de gergelim na proporção 1:9 (veículo) e após 30 minutos foram submetidos ao estímulo séptico por ligadura e perfuração cecal (CLP) ou à operação fictícia (OF). Em um grupo de animais, a sobrevida foi avaliada durante 5 dias. Em outro grupo, os animais foram decapitados 0, 4, 6, 18 e 24 horas após a cirurgia e o sangue processado para determinação do hematócrito, sódio sérico, osmolalidade, proteínas, glicose, creatinina, nitrato sérico e AVP plasmática. A neurohipófise foi removida para a determinação do conteúdo de AVP, e o hipotálamo dissecado para a determinação da atividade da NOS total. A mortalidade observada após CLP não foi modificada com o pré-tratamento com 7-NI (50mg/kg), assim como os aumentos temporais de hematócrito, glicose e nitrato sérico observados. As proteínas plasmáticas e o sódio sérico apresentaram diminuição após CLP e o pré-tratamento com 7-NI antecipou a perda proteica e postergou a diminuição do sódio sérico. Os animais após CLP não apresentaram alterações de creatinina e osmolalidade, entretanto quando prétratados com 7-NI, apresentaram aumento em 6 e 18 horas e diminuição a partir de 4hs, respectivamente. A atividade da NOS total no hipotálamo aumentou nos tempos determinados de 4 e 24 horas após CLP e este aumento foi reduzido com o prétratamento com o 7-NI nas doses de 50 e 80mg/kg, respectivamente. O conteúdo neurohipofisário de AVP diminuiu em 4, 6 e 18 horas após CLP e o pré-tratamento com 7-NI reduziu os estoques apenas em 0 e 6 horas. As concentrações plasmáticas de vasopressina apresentaram-se aumentadas sómente 6 horas após CLP e o pré-tratamento não alterou essas concentrações. Esses resultados permitem concluir que o NO produzido pela NOS neuronal não teria uma tarefa substancial na secreção de vasopressina durante sepse experimental. / The pathophysiology of sepsis is caracterized by hypotension accompanied by increase of vasopressin secretion (AVP) in early phase and decrease during late phase. This hypotension is due, in part, to the increase of nitric oxide (NO) production, that, like other mediators, shows high production during sepsis. Nitric oxide synthase (NOS) is responsible by synthesis of NO. The neuronal isoform of NOS is present in skeletic muscle, testicles, prostate, skin and vasopressinergics neurons of hypothalamus. The present work evaluated the participation of nitric oxide produced by neuronal NOS in temporal vasopressin secretion during experimental sepsis. Rats Wistar received intraperitoneal injection of 7-nitroindazole (50 or 80 mg/kg), an inhibitor of neuronal nitric oxide synthase activity, or DMSO 10% + sesame oil in the proportion 1:9 (vehicle) and after 30 minutes, they were submited to septic stimulus by cecal ligation and puncture (CLP) or to sham operation. In one of the groups, the survival rate was evaluated during 5 days. In other group, the animals were decapited 0, 4, 6, 18 and 24 hours after CLP and the blood was processed to determinate haematocrit, serum sodium, osmolality, proteins, glucose, creatinine, serum nitrate, and plasma AVP. Neurohypophysis was removed to determination of vasopressin content, and hypotalamus was dissected to determinate total NOS activity. Mortality observed after CLP was not affected by periferal injection of 7-nitroindazole (50 mg/kg) as well as haematocrit, glucose and nitrate increase. Serum sodium and plasma protein decreased after CLP and the treatment antecipated the loss protein, and delayed serum sodium decrease. CLP animals didn\'t show creatinine and osmolality alterations, but when treated with 7-nitroindazole, showed increase 6 and 18 hours, and decrease 4 hours, respectively. NOS activity in hypothalamus increased 4 and 24 hours after CLP, and was reduced with 7-NI pretreatment (50 and 80 mg/kg respectively). AVP neurohypophysis content diminished 4, 6 and 18 hours after CLP and 7-NI reduced the content just at 0 and 6 hours. Vasopressin plasma concentration increased just 6 hours after CLP and 7-NI pretreatment didn\'t alter this parameter. We concluded that NO produced by neuronal NOS doesn\'t have a substantial role in vasopressin secretion during experimental sepsis.

O presente estudo avaliou o efeito do exercício físico aeróbico na função vasomotora dependente do endotélio em aorta de ratos bem como os mecanismos envolvidos na regulação da biodisponibilidade do NO. Para tanto, um grupo de animais foi submetido a uma sessão de exercício (EX, n=17) enquanto o outro grupo permaneceu em repouso (CT, n=18). Imediatamente após o exercício, os ratos de ambos os grupos foram eutanasiados para a retirada da aorta torácica para análises funcionais e bioquímicas. Resultados: observamos que o grupo exercitado apresentou uma melhora no relaxamento dependente do endotélio com um efeito máximo de 12%, sendo esse efeito relacionado a um aumento na ativação da eNOS. Apesar de aumentar o NO, os animais do grupo EX apresentaram níveis aumentados de superóxido (28%), efeito que foi associado à maior ativação do complexo enzimático NAD(P)H oxidase. Além do superóxido, o peróxido de hidrogênio também foi aumentado nos animais exercitados porém a maior produção de espécies reativas de oxigênio não foi suficiente para causar um estresse oxidativo vascular. Esses resultados demonstram que uma única sessão de exercício físico aeróbico é capaz de melhorar a vasodilatação dependente do endotélio por aumentar a biodisponibilidade de NO e que a produção de espécies reativas oxigênio também aumenta porém em níveis controlados . / The present study evaluated the effect of aerobic physical exercise on endothelium-dependent vasomotor function of rat aorta as well the mechanisms involved in nitric oxide bioavalability control. One group of rats was submitted to one bout of exercise (EX, n=17) while the other one was placed on the treadmill without running (CT, n=18). Immediately after exercise both group were sacrificed and the thoracic aorta was removed for functional and biochemical analysis. Results: we observed that EX group showed an improvement on endothelium-dependent relaxation (12%) and it was related to increase on eNOS activation. Despite increased nitric oxide levels, EX group demonstrated higher superoxide production (28%) that was associated to NAD(P)H oxidase activation. Additionally, hydrogen peroxide also increased in EX group but the increase in reactive oxygen species was not enough to cause oxidative stress. Theses results demonstrate that one bout of aerobic exercise can improve endothelium-dependent vasodilation by increasing NO bioavalability, and that reactive oxygen species also increases but in a controlled fashion

O óxido nítrico (NO) é um mensageiro químico gerado pela atividade da enzima óxido nítrico sintase (NOS) a qual foi detectada em vários órgãos incluído o sistema reprodutor. O sistema NOS/NO parece desempenhar papel importante na maturação oocitária entre outras funções. No entanto, apesar das evidências, há poucos estudos sobre o papel desse sistema em oócitos da espécie bovina. Sabe-se que o NO atua pela via da guanilato ciclase (GC) estimulando a produção do nucleotídeo GMPc, que por sua vez é capaz de influenciar os níveis de outro nucleotídeo, o AMPc, que é um importante elemento da via de sinalização das gonadotrofinas nos oócitos e no controle da maturação oocitária. O objetivo do presente estudo foi de investigar o envolvimento da via do GMPc na ação do sistema NOS/NO na maturação in vitro (MIV) de oócitos bovinos e seu efeito sobre a via do AMPc. Com a maior concentração estudada do doador de NO (10-7M de SNAP), apenas 36% dos oócitos conseguiram alcançar o estágio de RVG (P< 0,05), após 9 horas de maturação. Esse atraso também foi observado com diferentes concentrações do estimulador de GC (5, 10 ou 50&mu;M de Proptoporfirina IX) e pelo análogo de GMPc (1, 2 e 4mM de 8-Br-GMPc ), que apresentaram uma taxa média de RVG de 50% para os tratamentos e 70% para os grupos controles sem as drogas (P<0,05). No início da maturação (0h), os níveis de GMPc foram de 5,29 pmol/oócito sofrendo uma queda logo na primeira hora de cultivo para 2,97 pmol nos oócitos do grupo controle e 1,54 pmol nos cultivados com associação de 10-7M de SNAP (doador de NO) e 100&mu;M de OQD (inibidor de GC (P<0,05). No grupo de oócitos cultivados apenas com SNAP, os níveis de GMPc se mantiveram em 4,51 pmol/oócito, semelhante ao grupo imaturo (0h de cultivo, P>0,05). O doador de NO manteve estável o nível de GMPc somente na primeira hora de maturação. Após 3 e 6 h de MIV, os níveis de GMPc permaneceram baixos e similares (0,07 a 2,46 pmol/oócito, P>0,05) nos grupos controle (sem drogas), tratado com doador de NO (10-7M de SNAP) associado ou não ao inibidor de guanilato ciclase (100&mu;M de OQD). Também foi observada uma queda nos níveis de AMPc em relação ao grupo imaturo (32,42 fmol de AMPc/oócito) para os demais grupos (P<0,05), que apresentaram aproximadamente, 12,0 a 16,0 fmol de AMPc/oócito durante a primeira hora, 3,3 a 8,0 fmol/oócito durante a terceira hora e 7,4 a 18,3 durante a sexta hora de maturação (P>0,05). O NO afetou os níveis de GMPc no início da maturação, mas não os níveis de AMPc. O NO e o GMPc podem atuar no controle da expressão gênica de uma série de proteínas envolvidas no controles dos níveis de AMPc e GMPc ou suas funções. Esse controle pode ser efeito direto do NO (PKG2, PDE3A, PDE4D e PDE8A), do GMPc (ADCY6) ou do NO via GMPc (PKA1) e varia com o compartimento considerado (oócito ou células do cumulus). Esses resultados demonstraram a inter-relação das vias NO/GMPc/AMPc e toda a sua complexidade dependendo do tipo celular e da fase da maturação de oócitos bovinos. / The NOS/NO system seems to play an important role in oocyte maturation besides other functions. However, despite the evidence, there are few studies on the possible role of this system in bovine oocytes. It is known that NO acts via guanylate cyclase (GC) by stimulating the production of the nucleotide cGMP, which in turn can influence the levels of another nucleotide, cAMP, which is an important element of the signaling pathway of gonadotropins in oocytes and in the control of oocyte maturation. The aim of the present study was to investigate the involvement of the cGMP pathway in the action of the NOS/NO system on the in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes and its effect on the cAMP pathway. The highest studied concentration of the NO donor (10-7M SNAP), only 36% of oocytes were able to undergo GVBD (P<0.05) after 9 hours of maturation. This delay was also observed with different concentrations of the GC stimulator (5, 10 or 50&mu;M Proptoporfirin IX) and the cGMP analogue (1, 2 and 4 mM 8-Br-cGMP), which had an average of 50% GVBD for treatment groups and 70% for control groups without drugs (P<0.05). At the beginning of maturation (0 h) cGMP levels were 5.29 pmol/oocyte and decreased within the first hour of culture to 2.97 pmol and 1.54 pmol in the control group and in oocytes cultured in 10-7M SNAP (NO donor) associated with 100&mu;M OQD (GC inhibitor; P<0.05). In the group of oocytes cultured only with SNAP, cGMP levels remained at 4.51 pmol/oocyte similar to the immature group (0 h culture, P> 0.05). The increase of NO maintained cGMP levels stable only during the first hours of maturation. After 3 and 6 h IVM, cGMP levels remained low and similar (0.01 to 2.5 pmol/ ocyte, P>0.05) in control (without drugs), treated with NO donor (SNAP 10-7M) with or without the guanylate cyclase inhibitor (100&mu;M OQD). A decrease in cAMP levels was also observed when compared with the immature group (32.42 fmol cAMP/oocyte) for the other groups (P <0.05), which showed 12.0 to 16.0 fmol cAMP/oocyte after the first hour, 3.3 to 8.0 fmol/oocyte after the third hour and 7.4 to 18.3 after the sixth hour of IVM (P>0.05). NO and cGMP may act to control gene expression in a series of proteins involved in control of the levels of cAMP and cGMP or their functions. The control may be a direct effect of NO (PKG2, PDE3, PDE4D and PDE8A), cGMP (ADCY6) or NO via cGMP (PKA1) and varies with the compartment considered (oocyte or cumulus cells). The results showed the interrelationship of the NO/cGMP/cAMP pathway and all its complexity depending on the cell type and the stage of maturation in bovine oocytes.

Óxido nítrico (NO) é um segundo mensageiro biosintetizado a partir de L-Arginina e envolvido em sinalização celular por diferentes mecanismos: ativação da produção de cGMP pela Guanilil Ciclase; regulação de enzimas pela interação com seus centros metálicos; ou pela S-nitrosilação de cisteína e nitração de tirosina, modificações pós-traducionais, capazes de modular a atividade de diversas proteínas. Neste trabalho buscou-se investigar se a interação de Trypanosoma cruzi, o agente etiológico da doença de Chagas, com a matriz extracelular (ECM) era capaz de modular a sinalização por NO em T. cruzi. Tripomastigotas de T. cruzi incubados com ECM apresentaram diminuição na atividade de NOS e menor produção de NO. Da mesma maneira, observou-se, por imunofluorescência indireta e imunoblotting, uma diminuição no padrão geral de S-nitrosilação e nitração de proteínas do parasita incubado com ECM. Além disto, os perfis de proteínas S-nitrosiladas e nitradas foram modificados, predominando a denitrosilação e denitração (de 40 para 22 proteínas nitradas após a adesão a ECM), embora em alguns casos tenha sido observado um aumento de nitração, como em proteínas de citoesqueleto (de 2,5% para 9,1% após adesão). O mesmo padrão foi observado em relação a proteínas nitradas, com diminuição de 48 para 20 proteínas após adesão a ECM e novamente com modificação no percentual de proteínas nitradas pertencentes a processos biológicos distintos, como proteínas relacionadas à síntese proteica (35,4% das proteínas nitradas no grupo controle e apenas 5,0% no grupo incubado com ECM). Apesar do perfil de denitração, algumas classes de proteínas têm aumento no número de alvos nitrados, como proteínas relacionadas a metabolismo (de 18,8% para 35,0%), além de alguns alvos específicos que têm aumento na nitração, como enolase. Em suma, os resultados sugerem que a sinalização intracelular por NO em tripomastigotas de T. cruzi é modulada durante a adesão do parasita a componentes da matrix extracelular, tanto através da via clássica de produção de óxido nítrico, quanto por modificações pós-traducionais induzidas por NO. / Nitric oxide (NO) is a second messenger biosynthesized from L-Arginine and involved in cell signaling by different mechanisms: activation of cGMP production by guanilyl cyclase; regulation of enzymes by interaction with their metallic centers; or by S-nitrosylation of cysteine and nitration of tyrosine, posttranslational modifications capable of modulating the activity of several proteins. In this work, we sought to investigate whether the interaction between extracellular matrix (ECM) and Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas\' disease, was capable of modulating NO signaling in the parasite. Trypomastigotes incubated with ECM presented a decrease in NOS activity and NO production. Accordingly, a decrease in S-nitrosylation and tyrosine nitration of proteins from ECM-incubated parasites was also observed, as evidenced by indirect immunofluorescence and immunoblotting. In addition, S-nitrosylated and tyrosine nitrated proteins profiles were modified in ECM-incubated parasites, with an enhancement in protein denytrosylation and denitration. A decrease from 40 to 22 of S-nitrosylated proteins was detected after parasite adhesion to ECM, more evident in some protein groups (as for example 52.5% hypothetical proteins modified in the control group against 36.4% after adhesion). On the other hand, an increase of S-nitrosylation was detected in other groups of proteins, such as cytoskeleton proteins (from 2.5% of total S-nitrosylated proteins to 9.1% after adhesion). The same general pattern was observed in relation to tyrosine-nitrated proteins, with a decrease in the number of modified proteins from 48 to 20 after incubation with ECM, exemplified by those related to protein synthesis, with a contribution of 35.4% in the control group versus 5.0% after treatment with ECM. Despite this general denitration profile, some protein classes have an increase in nitration, such as metabolic proteins (from 18.8% to 35.0%), in addition to some specific targets, such as enolase. Taken together, the results suggest that NO signaling is modulated during adhesion of T. cruzi to components of the extracellular matrix, probably by the classical nitric oxide pathway and by NO-induced post translational modifications.