A dengue é uma doença que afeta milhões de pessoas e possui um número significativo de mortes. Não há nenhum tratamento vacinal legalizado para uso. As estratégias vacinais contra a dengue baseadas em proteínas não estruturais têm demonstrado serem mais seguras do que as baseadas em proteínas estruturais. A proteína não estrutural 5 (NS5) do vírus dengue é a proteína mais conservada entre os quatro sorotipos e desempenha um papel crucial na replicação viral. Neste estudo, foi gerada uma forma recombinante da NS5 expressa em E. coli com propriedades antigênicas preservados. As condições de cultura foram optimizadas, o que permitiu a expressão dessa proteína na forma solúvel. A imunização de camundongos Balb/c com a NS5 sozinha ou em combinação com um adjuvante (poli (I:C)) promoveu o aumento da sobrevida de camundongos após desafio letal com DENV2. A combinação da NS5 com poli (I:C) emulsionado em Montanide 720 levou a expansão de linfócitos T CD8+ específicos. Os resultados indicam que a proteína NS5 obtida preserva determinantes antigênicos da proteína nativa e pode ser uma ferramenta útil para estudos sobre a biologia do DENV, busca de drogas antivirais e desenvolvimento de vacinas. / Dengue fever is a disease affecting millions of people worldwide and causing a significant number of deaths. There are no effective treatments or vaccine approaches capable of preventing such infection. Anti-DENV vaccine strategies based on nonstructural proteins as antigens have been shown to be safer than those based on structural proteins. The DENV nonstructural protein 5 (NS5), plays a crucial role in viral replication. In this study, we generated a recombinant form of DENV2 NS5 expressed in E. coli in high amounts and with preserved antigenic properties with regard to the native protein. Culture conditions were optimized in order to allow expression of NS5 as a soluble protein. The immunization of Balb/c mice using this protein alone or in combination with poly (I:C) led to increased survival after intracranial challenge with the DENV2 JHA1 strain. The combination of the protein with poly (I:C) emulsified in Montanide 720 led to the activation of NS5-specific CD8+ T lymphocytes. Altogether, the results indicate that the recombinant NS5 protein preserves antigenic determinants of the native protein and may be a useful tool for studies dealing with the DENV\'s biology, search for anti-viral drugs and vaccine development.

A dengue é uma doença causada por um dos quatro sorotipos de vírus da dengue (DENV 1-4), e representa a principal arbovirose que atualmente atinge seres humanos. Dentre as maiores dificuldades para o desenvolvimento de uma vacina eficaz contra o DENV, correlaciona-se a falta de conhecimento mais preciso sobre os epítopos presentes na superfície do vírus, responsáveis para indução de anticorpos neutralizantes sem promoverem a exacerbação da infecção viral. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi identificar epítopos presentes na superfície do DENV2 capazes de gerar anticorpos neutralizantes sem promover a amplificação viral frente a células que expressem receptores FcR. Avaliamos também a influência dos adjuvantes (LT, LT-K63 e LTB), na modulação da resposta de anticorpos para epítopos presentes nos domínios I, II e III da proteína de envelope do DENV2. Observamos que a administração das LTs como adjuvantes proporcionaram a potencialização da resposta de anticorpos IgG EDI/II ou EDIII-específicos nos animais imunizados, em relação aos outros grupos vacinais. Em relação à qualidade da resposta humoral proporcionada pelas imunizações, os anticorpos antígeno-específicos gerados com LT, LT-K63 ou LTB apresentaram maior capacidade de neutralização viral em comparação com aqueles obtidos dos demais grupos vacinais. Demonstramos de forma inédita através da análise de imunoassinatura dos anticorpos IgG EDIII-específicos, que a administração de LT e LTB como adjuvante vacinal, permitiu a identificação de um epítopo localizado na alça EF e FG da proteína EDIII de DENV2. Além disso, por meio da utilização de um peptídeo 47 contendo a sequência correspondente ao epítopo identificado, foi capaz de inibir a infecção do DENV2, tão bem quanto, a proteína EDIII em ensaios in vitro. Podemos perceber, que a utilização do adjuvante LT e seu derivado atóxico LTB em formulações vacinais, possibilitaram a modulação de anticorpos capazes de reconhecer epítopos presentes no EDIII, importantes para a neutralização viral. Esses resultados, permitem o desenvolvimento de novos antígenos alvos para estratégias vacinas voltadas para o controle dos DENV. / Dengue is a disease caused by one of four dengue virus serotypes (DENV 1-4), represents the main arbovirose that currently affects humans. Among the greatest difficulties for the development of effective vaccine against DENV is the lack of more precise knowledge about the epitopes present at the surface of the virus, responsible for the induction of neutralizing antibodies without promoting the exacerbation of viral infection. Thus, the objective of the present work was to identify epitopes present on the surface of DENV2 capable of generating neutralizing antibodies without promoting viral amplification against cells expressing the FcR receptors. We also evaluated the influence of adjuvants (LT, LT-K63 and LTB) on the modulation of the antibody response to epitopes present in domains I, II and III in envelope protein of DENV2. We have observed that administration of LTs as adjuvants provided potentialization of the antibodies response IgG EDI/II or EDIII-specific in the immunized animals, relative to the other vaccine groups. Regarding the quality of the humoral response provided by the immunizations, the antigen-specific antibodies generated with LT, LT-K63 or LTB presented higher viral neutralization capacity compared to those obtained from the other vaccine groups. We demonstrated through the immunoassay analysis of EDIII-specific IgG antibodies that the administration of LT and LTB as a vaccine adjuvant allowed the identification of an epitope located in the EF and FG loop of the EDIII protein of DENV2. Furthermore, by using a peptide 47 containing the sequence corresponding to the identified epitope, was able to inhibit DENV2 infection as well as the EDIII protein in vitro assays. It can be seen that the use of the LT adjuvant and its non-toxic derivative LTB in vaccine formulations enabled the modulation of antibodies capable of recognizing epitopes present in EDIII, which are important for viral neutralization. These results allow the development of new target antigens for vaccine strategies aimed at the control of DENV.

O Monometoxi-polietilenoglicol succinimidil ácido propiônico (mPEG-SPA 5 e 20 kDa) foi analisado como adjuvante e inibidor da atividade neurotóxica da toxina tetânica (TxT) adsorvida ou não em Al(OH)3, à qual o polímero foi conjugado. Avaliou-se a toxicidade das amostras por DL50, demonstrando que a atividade neurotóxica da TxT foi inibida. A via subcutânea foi mais efetiva na indução de resposta à TxT tratada pelo mPEG-SPA e o efeito adjuvante do Al(OH)3 se deu pela intramuscular. Trinta cavalos foram submetidos a esquema de imunização seletiva, dividindo-se os dezoito escolhidos em grupos para imunização com TxT conjugada ao mPEG-SPA 5.000 e 5.000(2X) e TxT adsorvida ou não. Os soros dos cavalos foram analisados por ToBI Teste, que avaliou a evolução da resposta imune. Os soros também foram analisados por imunodifusão, eletroforese e immunoblotting, tendo este indicado uma provável superioridade antigênica da TxT Fluida relativamente aos adjuvantes. A conjugação mPEG-SPA provou ser efetiva na produção do soro antitetânico terapêutico para uso humano. / Monometoxypolyethylene glycol succinimidyl propionic acid (SPA-mPEG 5 and 20 kDa) was analyzed as adjuvant and inhibitor of tetanus toxin neurotoxic activity (TxT) adsorbed or not by Al(OH)3, to which the polymer was conjugated. The samples toxicity was evaluated by DL50, disclosing that TxT neurotoxic activity was inhibited. The subcutaneous inoculation was more effective in induction of response to TxT treated with SPA-mPEG and the adjuvant effect of Al(OH)3 was evidenced by the intramuscular. Thirty horses were submitted to a selective scheme of immunization and eighteen were divided in groups to be immunized with TxT conjugated to SPA-mPEG 5,000 and 5,000(2X) and TxT adsorbed or not. The horses sera were analysed by ToBI Test, which evaluated the immune response development. The sera were also analysed through immunodifusion, electrophoresis and immunoblotting and the last one indicates a probable antigenic superiority of TxT fluid relatively to the adjuvants. The SPA-mPEG conjugation proved to be effective for anti-tetanus human therapeutic serum production.

O intumescimento é um dos fatores decisivos que influenciam o comportamento de desintegração de formas farmac6uticas compactadas e, consequentemente, o perfil biofarmacêutico de substancias ativas. Entre os diversos adjuvantes empregados para promover a desagregação daquelas formas farmac6uticas nas suas partículas primarias originais, são utilizadas varias substancias, abrangidas pelo conceito de desintegrantes intumescedores. A escolha do adjuvante mais adequado nestes casos pode ser vista como uma atividade que exige o gasto considerável de tempo e de custos elevados. Além disto deve ser levada em consideração a existência de vários produtos similares no mercado. A questão da equival6ncia representa portanto um desafio importante na fase de formulação. Com o objetivo de aumentar os conhecimentos nesta área, foi desenvolvido equipamento para a avaliação dinâmica do intumescimento de pês. Inicialmente foram considerados fatores de construção do aparelho, tais como a porosidade, espessura e área do filtro de vidro sintetizado. Foram tamb6m avaliadas variações metodológicas, entre as quais a temperatura de realização do teste e o meio liquido empregado. Croscarmelose, um superdesintegrante, foi utilizada como adjuvante-modelo no teste do equipamento. A alteração do meio liquido de ensaio foi o fator que causou a maior influ6ncia sobre os resultados, embora a espessura dos filtros de vidro sintetizado tenha causado alguma alteração quer no tempo como no volume final de intumescimento. intumescimento. Já a mudança de temperatura não provocou diferenças significativas nas observações. Numa segunda fase foi investigada a influência deste desintegrante sobre as características de intumescimento de quatro celuloses microcristalinas (CMCr) isoladas ou adicionadas com um lubrificante. Para tanto elaborou-se um planejamento fatorial 4 X 2 X 2. A presença do desintegrante, como esperado, provocou aumento do volume final de intumescimento das CMCr, que apresentaram, no entanto, comportamentos diferenciados frente ao adjuvante. Já a presença do lubrificante conduziu a resultados totalmente dependentes do tipo de CMCr testada. A análise comparativa entre estes produtos demonstrou que somente num caso houve simitaridade de comportamento. / Swelling is one of the decisive factors influencing the disintegrant behavior of compacted pharmaceutical dosage forms and consequently the biopharmaceutical profile of drug substances. Among the various excipients used to promote the disintegration of such dosage forms in its originally primary particles, several substances, classified as swelling disintegrants, are employed. The choice of the most appropriate excipient in this case can be a time and cost consuming enterprise. Additionally it must be considered that the same substance can be delivered in the market by different producers. The question of equivalence represents also an important challenge in the formulation phase. In order to provide more knowledge in this area an apparatus to analyze the dynamic swelling of powder admixtures was developed. Construction factors such as filter porosity, thickness and area were considered. Methodological variants including essay temperature and liquid medium were also evaluated. Croscarmelose, a superdisintegrant, was used as model excipient to test the self built equipment. The change of the test fluid was the determinant factor on the results, although the thickness of the sintered glass filter showed some influence on both swelling volume and swelling time of this adjuvant. As a second step, the influence of this disintegrant on the swelling behavior of four microcrystalline celluloses (MCC) alone or added with a lubricant were investigated by using a 4 X 2 X 2 factorial design. The presence of the disintegrant was able to increase the swelling volume. Both final swelling volume and time were dependent of the MCC type. The lubricant showed different influences on the four tested MCC. A comparative study demonstrated that only in one case these products presented similarly swelling behavior.

As toxinas LT são expressas por linhagens de Escherichia coli enterotoxigênicas e possuem marcantes efeitos adjuvantes. No entanto, não se conhece se a exposição prévia à toxina afeta sua atividade adjuvante durante imunizações subsequentes. Assim, o presente estudo avaliou o impacto da imunidade pré-existente nas propriedades inflamatórias e adjuvantes da LT quando inoculada pela via subcutânea. Como antígeno modelo, empregou-se a proteína NS1 do vírus dengue e duas abordagens experimentais distintas: (i) incubação in vitro de LT com anticorpos anti-LT e com o receptor gangliosídio (GM1) antes da administração em camundongos não imunizados em conjunto com a proteína NS1 do vírus dengue; (ii) imunização com NS1 coadministrada à LT em camundongos previamente expostos à LT. Foram avaliados os efeitos inflamatórios locais e os efeitos adjuvantes por meio da resposta imunológica humoral anti-NS1. Nossos resultados indicam que a imunidade prévia contra a LT não afeta seu potencial inflamatório e atividade adjuvante. Além disto, a exposição ao receptor GM1 reduziu as reações inflamatórias locais sem, no entanto, reduzir os efeitos adjuvantes de LT. / LT toxins are expressed by enterotoxigenic Escherichia coli strains and display strong adjuvant effects. Nonetheless, the impact of preexisting immunity on the on LT adjuvant activities is still unknown. Thus, the present study evaluated the impact of pre-existing immunity in the inflammatory and adjuvant properties of LT after subcutaneous administration. the NS1 of dengue virus was employed as a model antigen and two experimental approaches were evaluated: (i) in vitro incubation of LT with LT-specific antibodies and the ganglyoside receptor (GM1) before administration to naïve mice in combination with NS1; (ii) immunization with NS1 co-administered with LT in mice previously exposed to LT. The local inflammatory effects induced by LT were evaluated as wel as the adjuvant effects by means of NS1-specific humoral response. Our results indicate that the LT pre-existing immunity does not affect the inflammatory and adjuvant activities of the toxin. In addition, exposure to GM1 reduced the local inflammatory reactions without affecting the toxin adjuvant effects.

Paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença sistêmica granulomatosa causada pelo fungo termo-dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. A gp43 é o principal antígeno diagnóstico que contém o peptídeo de 15 aminoácidos designado como P10, que desenvolve a resposta imune do tipo Th1 dependente de IFN-<font face=\"Symbol\">g. No presente trabalho, comparamos a efetividade de diferentes adjuvantes em camundongos BALB/c infectados intratraquealmente com o isolado virulento Pb18. Alúmen, Adjuvante Completo e Incompleto de Freund, FliC flagelina e o lipídeo catiônico, foram testados em associação ou não com P10. Após 52 dias de infecção, o lipídeo catiônico mostrou os melhores resultados, com o menor número de UFCs, redução de fibrose e baixo número de células fúngicas no tecido pulmonar, além do incremento significativo de IFN-<font face=\"Symbol\">g e TNF-<font face=\"Symbol\">a e a redução dos níveis de IL-4 e IL-10. Estes resultados sugerem que a interação do peptídeo P10 com o lipídeo catiônico pode gerar uma melhor resposta imune mediada por células do tipo Th1, evitando a rápida disseminação da PCM experimental. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic granulomatous disease caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. The gp43 is the major diagnostic antigen that contains the peptide P10. This peptide has 15 amino acids and develops a Th1- dependent IFN-<font face=\"Symbol\">g immune response. In this work, we compare the effectiveness of different adjuvants in BALB/c mice infected intratracheally with virulent isolate Pb18. Alum, Complete Adjuvant and Incomplete Freund\'s adjuvant, fliC flagellin from Salmonella enterica and cationic lipid were tested in combination or not with P10. After 52 days of infection, the cationic lipid showed the best results with the least number of colony forming units, reduction of fibrosis, low number of fungal cells in lung tissue and the significant increase of IFN-<font face=\"Symbol\">g and TNF-<font face=\"Symbol\">a with reduced levels of IL-4 and IL-10. These results suggest that, the interaction of peptide P10 with cationic lipids can lead to a better immune response mediated by Th1 type cells by avoiding the rapid spread of experimental PCM.

A hialuronidase é uma enzima que vem sendo utilizada como adjuvante anestésico na oftalmologia há décadas para melhorar a eficácia anestésica, por aumentar a difusão do anestésico para o nervo. Na odontologia, quando foi injetada concomitantemente ao anestésico local em bloqueio pterigomandibular, reduziu a duração da anestesia e causou trismo, pois no momento inicial da anestesia ainda havia provavelmente muito anestésico no sítio da injeção, dispersando-o para tecidos adjacentes. Entretanto, em outro protocolo, a enzima foi injetada em outro momento, antes do término do efeito anestésico e, não induziu efeitos adversos e ainda aumentou a duração de ação, provavelmente, por difundir apenas o anestésico remanescente para o nervo. A fim de evitar uma nova puntura para injetar a hialuronidase, a enzima poderia ser incorporada a um carreador, que modularia a sua liberação tardiamente, simulando o protocolo anterior. O desenvolvimento desse sistema de liberação controlada da enzima, a ser futuramente associada aos anestésicos locais visa ainda diminuir a dose necessária para o bloqueio completo, diminuindo assim o risco de toxicidade sistêmica. Este estudo laboratorial teve por objetivo desenvolver o complexo de inclusão utilizando a como carreador da hialuronidase, uma ciclodextrina, a hidroxipropil--xtrina, formando o complexo de inclusão hialuronidase:hidroxipropil--ciclodextrina, em duas proporções molares, 1:1 e 2:1. Neste estudo ainda foram avaliadas as características físico-químicas dos componentes a fim de verificar se havia interação entre as moléculas. Após o preparo, a análise físico-química das substâncias foi realizada utilizando os seguintes métodos: espectroscopia na região do Infravermelho com transformada de Fourier, análise térmica, ressonância magnética nuclear, além da análise morfológica (por MEV). Mudanças observadas na espectroscopia na região do infravermelho e na calorimetria diferencial exploratória indicam interação molecular entre a hialuronidase e a hidroxipropil --ciclodextrina, em ambas razões molares, como sugerem o aspecto morfológico do complexo. / Hyaluronidase is an enzyme that has been used as an adjuvant anesthetic in ophthalmology for decades to improve the effectiveness of anesthesia by increasing the diffusion of the anesthetic to the nerve. In dentistry, when it was injected concomitantly with local anesthetic in inferior alveolar nerve blockade, reduced the duration of anesthesia and caused trismus, because in the initial moment of anesthesia there was probably a lot of anesthetic in the injection site, spreading it to adjacent tissues. However, in another protocol, the enzyme was injected later, before the regression of the anesthetic effect and did not induce adverse effects, and also increased the duration of action, probably by spreading only the remaining anesthetic to the nerve. In order to avoid another puncture to inject hyaluronidase, the enzyme could be incorporated into a carrier, which modulates its release later, simulating the previous protocol, while maintaining its benefits. The development of such controlled release system of the enzyme, to be in the future associated to local anesthetics, also designed to decrease the dose required to obtain the complete block, thus reducing the risk of systemic toxicity. This laboratory study aimed to develop the inclusion complex using as carrier to hyaluronidase, a cyclodextrin, the hydroxypropyl--cyclodextrin forming hyaluronidase : hydroxypropyl--cyclodextrin inclusion complex, in both molar ratios 1:1 and 2:1. This study also evaluated the physico-chemical characteristics in order to ascertain whether there was interaction between the molecules. After being prepared, the physical-chemical analysis of the substances was performed using the following methods: Fourier transform infrared spectroscopy, thermal analysis, nuclear magnetic resonance (RMR), besides the morphological analysis by scanning electronic microscopy (SEM). Changes observed in infrared spectroscopy and differential scanning calorimetry indicate molecular interaction between hyaluronidase and hydroxypropyl-beta-cyclodextrin, in both molar ratios, as suggested by the morphological aspect of the complex.

Para conseguirem se alimentar com sucesso, os mosquitos hematófagos possuem componentes em sua saliva capazes de regular a hemostasia e modular a imunidade dos hospedeiros. Entretanto, a avaliação das atividades biológicas dessas moléculas no hospedeiro ainda carece de estudos mais aprofundados. No presente projeto, propomos caracterizar as atividades biológicas do produto do transcrito AET-7393, uma serpina presente nas glândulas salivares de fêmeas do mosquito Aedes aegypti. Nossos dados mostram que a serpina AET-7393 recombinante provoca um aumento no sangramento quando inoculada em camundongos, mas aparentemente esse efeito não está ligado à interferência com a cascata de coagulação. Mostramos ainda que a AET-7393 é capaz de inibir a proteinase 3 e aumentar a produção de IL-1b. Por fim, observamos a ausência de capacidade moduladora sobre a ativação de macrófagos ou sobre a inflamação, e que presença de anticorpos específicos contra a serpina no hospedeiro não interfere no ciclo de vida do mosquito. / In order to successfully feed, hematophagous mosquitoes possess salivary components capable of regulating hemostasis and modulate the host immunity. However, the evaluation of the biological activities of the salivary molecules in the host still needs further investigation. In this study, we intend to characterize the biological activities of the AET-7393, a serpin that is present in the saliva of the females Aedes aegypti mosquitoes. Our data show that the recombinant AET-7393 serpin increases bleeding when inoculated in mice, but apparently this effect is not due to its interference on the coagulation cascade. In addition, AET-7393 is able to inhibit proteinase 3 and enhance the production of IL-1b. Finally, we observed the absence of modulatory effect on macrophage activation or inflammation, and that the presence of host anti-AET-7393 antibodies does not interfere in the life cycle of the mosquitoes.

Investigamos o agonista de Guanilato Ciclase solúvel, BAY 41-2272, como alternativa para compensar falhas nas funções de monócitos. Avaliamos in vitro o efeito do fármaco em células humanas de linhagem e de sangue periférico. O BAY, em células THP-1 e monócitos, aumentou a expressão de CD11b, CD18, CD14, TLR4, TLR2 e CD163 e induziu a produção de TNF-<font face=\"Symbol\">a, IL-1<font face=\"Symbol\">b, IL-6 e IL-12p70. Além disso, o fármaco aumentou a expressão gênica (CYBB, CYBA e NCF2) e protéica (p67PHOX e gp91PHOX) da NADPH oxidase. Ainda, o BAY ativa a via do NF-kB (p65) (dependente de PKG). Mais importante, o fármaco aumentou a atividade microbicida de monócitos de pacientes com DGC e deficiência de MPO a S. aureus e C. albicans. Em animais, o BAY 41-2272 induziu intenso influxo de macrófagos para o peritônio e inflamação. Ainda, potencializou o espraiamento, atividade fagocítica, atividade microbicida, produção espontânea de óxido nítrico e de peróxido de hidrogênio induzida por PMA, em macrófagos peritoneais, aumentando a proteção dos animais desafiados com C. albicans. Em conjunto, nossos resultados confirmam o potencial do BAY 41-2272, ou sua via (GCs/PKG), como alternativa para o desenvolvimento de terapias contra infecções. / We investigated the soluble guanylate cyclase agonist, BAY 41-2272, as an alternative to compensate for failures in of monocytes function. We evaluated the in vitro effect of the drug on human cells lines and peripheral blood cells. The BAY increased expression of CD11b, CD18, CD14, TLR4, TLR2 and CD163 and induce the production of TNF-<font face=\"Symbol\">a, IL-1<font face=\"Symbol\">b, IL-6 and IL-12p70 in THP-1 cells and monocytes. Furthermore, the drug increased NADPH oxidase gene (CYBB, CYBA and NCF2) and protein (gp91phox and p67phox) expression. Also, BAY activates the PKG-dependent NF-kB pathway (p65). More importantly, the drug increased microbicidal activity against S. aureus and C. albicans of monocytes from patients with CGD and MPO deficiency. In animals, BAY 41-2272 induced intense influx of macrophages to the peritoneum and inflammation. BAY potentiated the spreading, phagocytic activity, microbicidal activity, spontaneous production of nitric oxide and PMA-induced hydrogen peroxide release by peritoneal macrophages, increasing host protection against C. albicans. Taken together, our results confirm the potential of BAY 41-2272, or its pathway (sGC / PKG), as an alternative for the development of therapies against infections.

O desenvolvimento da alergia pode ter início precoce, durante os primeiros meses de vida ou ainda durante a gestação. Em camundongos, é descrita uma predisposição ao desenvolvimento de resposta Th2 no período neonatal, contribuindo para o desenvolvimento da resposta alérgica. A maturação das funções relacionadas à resposta Th1 pelo uso de adjuvantes imunológicos no período pós-natal pode contribuir na profilaxia da asma e outras doenças alérgicas. Neste trabalho, investigamos o efeito dos oligodeoxinucleotídeos CpG na imunização com ovalbumina (OVA) e extrato do ácaro Blomia tropicalis (Bt) em camundongos nos períodos neonatal e adulto. Os resultados obtidos mostram que o ODN-CpG é capaz de diminuir a produção de anticorpos IgE, um isótipo dependente de citocinas Th2, e aumentar os níveis de anticorpos IgG2a nas imunização com OVA e Bt, inclusive na imunização com os dois alérgenos associados. Além disso, a associação do ODN-CpG na imunização neonatal com OVA promove um aumento da produção in vitro de IFN-<font face=\"symbol\">g e diminuiu a produção de IL-10. Ao compararmos a eficiência modulatória do CpG nas imunizações com OVA em camundongos adultos e neonatos, observamos um maior efeito modulatório na produção de anticorpos em adultos. Os resultados mostraram que linfócitos B de camundongos jovens não aumentam a expressão do TLR-9 mesmo após 72 horas de estímulo com CpG, enquanto nos linfócitos de adultos já é possível observar um aumento em 48 horas. Além da menor ativação dos linfócitos B, evidenciamos uma produção de IL-10 e MCP-1 significantemente aumentada na cultura de células de neonatos após estímulo in vitro com CpG. Ao avaliarmos a influência do CpG na ativação antígeno específica dos linfócitos T CD4+, mostramos que linfócitos T CD4+ de neonatos expressam mais intensamente moléculas B7 do que células de adultos após estímulo antigênico in vitro, o que sugere uma característica supressora nestas células. Esse aumento foi inibido pela adição de CpG na cultura. A indução de células Treg (CD4+CD25+Foxp3+) in vitro também foi suprimida pela adição de CpG. Nossos resultados mostram um potencial modulatório do CpG no período neonatal e adulto nas respostas a OVA e Bt. Evidenciamos, também, diferenças qualitativas e quantitativas no efeito do CpG em relação às imunizações neonatal e adulta. Considerando a suscetibilidade dos neonatos às infecções e ao desenvolvimento de alergia, torna-se importante estabelecer estratégias imunomodulatórias que potencializem as respostas inata e adaptativa e possam ser profiláticas no desenvolvimento de doenças alérgicas. / The allergy development may occur in the early life, during the pregnancy or postnatally at the first months of life. In mice, it is described a predisposition to Th2 biased response in the neonatal period, favoring the development of allergic response. The maturation of functions related to Th1 response by the use of immune adjuvants may be beneficial to the allergy prophylaxis. In this work, we evaluated the effect of CpGcontaining oligodeoxynucleotides (CpG-ODN) in the neonatal and adult immunization with ovalbumin (OVA) or the extract of house dust mite Blomia tropicalis (Bt). The results show CpG-ODN is able to decrease IgE antibody production, an isotype related to Th2 response, and increase IgG2a antibody levels in OVA or Bt immunization of A/Sn mice, even when mice were co-immunized with both allergens. Moreover, CpG-ODN association in neonate immunization with OVA increases in vitro IFN-<font face=\"symbol\">g production and decreases IL-10. Comparing the modulatory efficiency of CpG in OVA immunization of neonate and adult mice, we observed a stronger effect on antibody production in adults. Results show that B cells from young mice do not increase the TLR-9 expression upon CpG stimulation for 72 hours whereas the increase of TLR-9 in adult B cells occurs within 48 hours. Besides the lower B cell activation, we found a significant increase of IL-10 and MCP-1 secretion levels by the neonatal cells stimulated by CpG. When we evaluated the influence of CpG on CD4+ T cell activation upon antigenic stimulation, we verified an upregulation of B7 molecules expression on neonate cells than adult cells. This high expression was inhibited by the addition of CpG in the culture. The induction of regulatory T cells (CD4+CD25+Foxp3+) in vitro was also suppressed by CpG. Our results show a modulatory potential of CpG in the immune response to OVA and Bt in both neonatal and adult periods. We also evidenced qualitative and quantitative differences in the CpG effect between neonates and adults. Considering the susceptibility to infections and allergy development in newborns, it becomes important to establish immunomodulatory strategies that enhance innate and adaptive responses and are prophylactic to the development of allergic disorders.