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Ação do óleo essencial de gengibre (Zingiber officinale) encapsulado em fibras ultrafinas de proteína isolada de soja, poli (óxido de etileno) e zeína no controle antimicrobiano in situ / Action of ginger essential oil (Zingiber officinale) encapsulated in ultrafine fiber of isolated soybean protein, poly (ethylene oxide) and zein in the antimicrobial control in situ.

Silva, Francine Tavares 26 February 2018 (has links)
Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2018-07-18T19:16:18Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO CORRGIDA BANCA-PDF.pdf: 1443908 bytes, checksum: 6572a3e5fc8336f513dc30069108bfa7 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-07-30T21:21:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO CORRGIDA BANCA-PDF.pdf: 1443908 bytes, checksum: 6572a3e5fc8336f513dc30069108bfa7 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-07-30T21:25:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO CORRGIDA BANCA-PDF.pdf: 1443908 bytes, checksum: 6572a3e5fc8336f513dc30069108bfa7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-30T21:25:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO CORRGIDA BANCA-PDF.pdf: 1443908 bytes, checksum: 6572a3e5fc8336f513dc30069108bfa7 (MD5) Previous issue date: 2018-02-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / O controle do crescimento microbiano é de fundamental importância na indústria de alimentos, uma vez que assim pode-se preservar a qualidade do produto e/ou garantir a segurança do alimento. Muitos óleos essenciais foram relatados por possuírem forte atividade antimicrobiana e quando encapsulados podem ser aplicados em embalagens ativas antimicrobianas para alimentos. Embalagens ativas interagem com o alimento diretamente ou pelo espaço livre que com a finalidade de assegurar a qualidade e a segurança durante a vida útil do alimento. O estudo teve como objetivo produzir e caracterizar fibras ultrafinas de proteína isolada de soja (PIS), poli (óxido de etileno) (POE) e zeína, com diferentes concentrações de óleo essencial de gengibre (OEG) (Zingiber Officinale Roscoe), pela técnica de electrospinning, bem como aplicá-las em embalagem para controle de Listeria monocytogenes em queijo minas frescal. A atividade antimicrobiana foi avaliada contra cinco bactérias (Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Escherichia coli 0157:H7, Salmonella Typhimurium e Pseudomonas aeruginosa). O OEG, em diferentes concentrações (0, 3, 6, 9 e 12%, v / v) foi encapsulado em fibras ultrafinas utilizando uma mistura polimérica de proteína isolada de soja, poli (óxido de etileno) e zeína em uma proporção de 1:1:1 (v/v/v) pela técnica de eletrospinning. As fibras foram avaliadas quanto à sua morfologia, propriedades térmicas, grupos funcionais, cristalinidade relativa e atividade antimicrobiana por micro-atmosfera. A partir de testes preliminares da análise antimicrobiana a fibra com 12% de OEG foi selecionada para aplicação in situ (queijo minas frescal) contra L. monocytogenes. O óleo essencial de gengibre teve um rendimento de 3,7% em base úmida, e foi um antimicrobiano efetivo contra todas as bactérias em teste. As fibras produzidas, independentemente da concentração do óleo essencial encapsulado, apresentaram atividade antimicrobiana contra L.monocytogenes, e demonstraram morfologia homogênea sem a presença de beads. A adição do OEG alterou ligeiramente as propriedades térmicas das fibras e diminuiu a cristalinidade relativa. O OEG encapsulado em fibras ultrafinas foi eficaz no controle de L. monocytogenes em queijo minas frescal por micro-atmosfera durante o armazenamento refrigerado de 12 dias, demonstrando grande potencial de aplicação embalagem ativa de alimentos. / The growth control of pathogenic and deteriorating microorganisms is important in the food industry. This control can preserve the quality of the product and / or guarantee the food safety Several essential oils have been reported for its high antimicrobial activity and,can be applied in active antimicrobial food packaging when encapsulated in fibers. Active packaging interacts with food to ensure the quality and safety during the food shelf life. The objective of this study was to produce and characterize ultrafine fibers from soy protein isolate, poly (ethylene oxide) and zein, with different concentrations of ginger essential oil (GEO (Zingiber Officinale Roscoe), by electrospinning, as well as apply the fibers in the packaging of Minas Frescal cheese for the control of Listeria monocytogenes. The antimicrobial activity was evaluated against five bacteria (Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Escherichia coli 01571H7, Salmonella Typhimurium and Pseudomonas aeruginosa). The OEG, in different concentrations (0, 3, 6, 9 and 12%, v/v) was encapsulated in ultrafine fibers using a polymer blend of soy protein isolate, poly (ethylene oxide) and zein in a ratio of 1 : 1: 1 (v/v/v) by electrospinning. The ultrafine fibers were evaluated for its morphology, thermal properties, functional groups, relative crystallinity and micro-atmosphere antimicrobial activity. The fiber selected for application in situ (fresh Minas cheese) against L. monocytogenes by preliminary tests of the antimicrobial analysis was the fiber with 12% of GEO. The GEO presented yield of 3.7% on wet basis, and showed antimicrobial activity against all bacteria under test. The ultrafine fibers produced, regardless of the concentration of the encapsulated GEO, presented homogeneous morphology without beads. The addition of GEO slightly altered the thermal properties of the fibers and decreased relative crystallinity. Ultrafine fibers encapsulated OEG were effective in Listeria monocytogenes control in fresh Minas cheese by micro-atmosphere during refrigerated storage of 12 days, demonstrating great potential to be applied in active food packaging.
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Atividade antimicrobiana e antioxidante de terpenoides

Toscan, Cristiane Menegotto 09 December 2010 (has links)
Terpenos são compostos que fazem parte da constituição de óleos essenciais. Estes compostos são formados pela condensação de unidades de isopreno e quando contêm oxigênio são denominados terpenoides. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana e antioxidante dos terpenoides citral, citronelal, citronelol, 1,8-cineol, geraniol, α-terpineol e do sesquiterpeno β-cariofileno. Para tanto, as concentrações inibitórias mínimas (CIM) e as doses inibitórias 50% (DI50) foram determinadas através do método de diluição seriada (0 a 10 μL/mL v/v) em microplacas. A viabilidade celular, na concentração inibitória mínima, foi avaliada por plaqueamento e contagem. Foi avaliado também o efeito dos terpenoides sobre a respiração de bactérias e leveduras. Além disso, testes específicos envolvendo citral, citronelal, citronelol e geraniol foram realizados com as leveduras Saccharomyces cerevisiae e Candida albicans, sendo eles: avaliação da sobrevivência, lise celular e perda de componentes celulares. A atividade antioxidante in vitro dos terpenoides foi determinada pelo método DPPH(1,1-difenil 2-picrilhidrazil)A atividade antioxidante in vivo de citral e citronelal foi realizada utilizando S. cerevisiae como organismo modelo. Os resultados mostraram que os seis terpenoides e sesquiterpeno têm atividade antimicrobiana, com variação entre as concentrações destes isolados e o tipo de microrganismo avaliado. De um modo geral, o citral foi o terpenoide que exibiu ação antimicrobiana mais expressiva, enquanto o β-cariofileno afetou um número restrito de microganismos. A presença de citral e citronelal, nas concentrações inibitórias mínimas correspondentes, reduziu a respiração de Salmonella typhinmurium e Staphylococcus aureus. C. albicans e S. cerevisiae, quando tratadas com CIM de citral, citronelal, citronelol e geraniol, tiveram a respiração inibida. Geraniol foi o terpenoide com maior atividade microcida sobre C. albicans. Citral, citronelol, citronelal e geraniol induziram a perda de componentes celulares tanto em C. albicans quanto em S. cerevisiae. Todos os compostos mostraram atividade antioxidante in vitro, particularmente o citral. Por outro lado, citronelal foi o único terpenoide que apresentou atividade antioxidante in vivo, sobre células eucarióticas. De uma maneira geral, o presente trabalho mostrou que o citral apresenta importante atividade antioxidante e antimicrobiana, induzindo a perda de componentes celulares e inibindo a respiração. Estas informações são importantes para aplicações farmacológicas deste composto ou óleos essenciais com elevada concentração de citral. / Terpenes are the main constituents of plant essential oils. These compounds are formed by the condensation of isoprene units, and when contain oxygen are named terpenoids. The present work aimed to evaluate the antimicrobial and antioxidant activity of terpenoids citral, citronellal, citronellol, 1,8-cineole, geraniol, α- terpineole and sesquiterpene β-caryophyllene. Thus for, the minimal inhibitory concentrations (MIC), and the inhibitory dosage 50% (ID50) were determined using the microplate serial dilution method (0 to 10 μL/mL v/v). Cell viability at the MIC concentration was evaluated by plating and counting. The effect of terpenoids on bacterial and yeast respiration was evaluated. Moreover, the following specific tests were developed on Saccharomyces cerevisiae and Candida albicans using citral, citronellal, citronellol and geraniol: cell viability, cellular lysis, and loss of cellular components. The in vitro antioxidant activity of the terpenoids was determined by the DPPH (1,1-difenil 2-picrilhidrazil)essay. In vivo antioxidant activity of citral and citronellal was evaluated using S. cerevisiae as model organism. The results showed that all the six terpenoids and one sesquiterpene have antimicrobial activity, with variation among terpenoids and microrganisms. In general, citral exhibited the highest antimicrobial activity, where β-cariophyllene affects a restricted number of organisms. The presence of citral and citronellal at their MICs reduced respiration of Salmonella typhimurium and Staphylococcus aureus. Respiration inhibitory activity of citral, citronellol, citronellal and geraniol was also evidenced on C. albicans and S. cerevisiae. Geraniol was the terpenoid with the highest microcide activity on C. albicans and S. cerevisiae, as determined by the methylene blue staining method. Citronellal and citronellol exhibited low lytic activity on S. cerevisiae, but not on C. albicans. Citral, citronellol, citronellal and geraniol induced the loss of cellular components in both C. albicans and S. cerevisiae. All the compounds showed in vitro antioxidant activity, particularly citral. Conversely, citronellal was the only terpenoid with in vivo antioxidant activity on eukaryotic cells. In general, the present work showed that citral has an important antioxidant and antimicrobial activity, inducing the loss of cellular components and inhibiting cell respiration. These informations are important for the pharmacological application of this compound or essential oils with high concentration of citral.
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Erythrina velutina Willd : avaliação fitoquímica, farmacológica e biológica / ERYTHRINA VELUTINA WILLD: phytochemical evaluation, pharmacological and biological

Lopes, Clara Raissa de França Rocha e 30 April 2010 (has links)
Erythrina plant species, botanical family Fabaceae, are the main source for the tetracyclic erythrina-type alkaloids, and other chemical classes such as flavonoids. The Erythrina velutina Willd specie is popularly known as "Mulungu" and used by the population of the northeastern region of Brazil for its sudorific, soothing, emollient, pectoral, and local anesthetic properties. The objective of this study was to isolate and identify the constituents present in the leaves methanol extract of Erythrina velutina, and to investigate the antimicrobial activity of the crude extract and organic phases as well as contribute to the chemotaxonomy of the genus Erythrina. The leaves were collected in the city of Simão Dias, Sergipe, Brazil. The phytochemical screening performed with the crude methanol extract showed the presence of the following secondary metabolites: alkaloids, tannins, and flavonoids. The crude methanol extract was obtained by maceration and fractionated into hexane, ethyl acetate and n-butanol phase. From the crude methanol extract was extracted alkaloids that resulted on basic chloroform and nbutanol phase. Nicotinic acid was isolated from basic n-butanol phase. The structure identification involved analysis of spectral data of NMR of 1H and 13C and comparison with literature data. The behavior pharmacological screening showed that administration of the organic phases and crude extract promoted discrete behavioral changes at the level of central nervous system, suggesting that the extract of Erythrina velutina contains psychoactive compounds. In addition, antimicrobial screening showed that the crude methanol extract and hexane fraction present a weak inhibition or in part without inhibition zone defined for the fungus Trichophyton rubrum T544. / O gênero Erythrina, família Fabaceae, é muito conhecido pela presença de alcalóides tetracíclicos tipo eritrina e outras classes químicas como flavonóides. A espécie Erythrina velutina Willd, conhecida popularmente como Mulungu , é utilizada pela população do nordeste brasileiro por suas propriedades sudoríficas, calmante, emoliente, peitoral e anestésica local. O objetivo deste trabalho foi isolar e identificar os constituintes químicos presentes no extrato metanólico das folhas de Erythrina velutina, bem como investigar a atividade farmacológica e antimicrobiana do extrato bruto e das fases orgânicas, além de contribuir com a quimiotaxonomia do gênero Erythrina. As folhas foram coletadas no município de Simão Dias, Sergipe, Brasil. O extrato metanólico bruto, obtido por maceração, foi submetido a prospecção fitoquímica que indicou a presença dos seguintes metabólitos secundários: alcalóides, taninos e flavonóides. O particionamento deste extrato foi realizado com hexano, acetato de etila e n-butanol. A partir do extrato metanólico bruto foi feita uma marcha para alcalóide obtendo as fases clorofórmica e n-butanólica básica. Da fase n-butanólica básica isolou-se o ácido nicotínico. A identificação estrutural do composto foi realizada a partir dos dados espectrais de RMN de 1H e 13C e em comparação com dados da literatura. Na realização da triagem farmacológica comportamental, foi observado que administrações das fases orgânicas e do extrato bruto promoveram discretas alterações comportamentais ao nível de sistema nervoso central, sugerindo que o extrato de Erythrina velutina contém substâncias psicoativas. O extrato metanólico bruto e a fração hexânica promoveram uma inibição de crescimento fraco ou parcial, sem halo de inibição definido, para o fungo Trichophyton rubrum T544.
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Potencial farmacolÃgico do extrato seco de matricaria recutita (Chamomilla) e do Alfa-Bisabolol / GASTROPROTECTIVE AND ANTIMICROBIAL ACTIVITIES OF MATRICARIA RECUTITA (CAMOMILA) FLOWER EXTRACT AND ALPHA-BISABOLOL: POSSIBLE MECHANISMS OF ACTION

Suzana Barbosa Bezerra 20 August 2009 (has links)
FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Matricaria recutita, conhecida popularmente como camomila, à uma espÃcie vegetal utilizada na medicina devido Ãs suas propriedades sedativa, antiinflamatÃria e cicatrizante, entre outros. O alfa-bisabolol, um sesquiterpeno presente em seu Ãleo essencial, tambÃm possui vÃrias atividades farmacolÃgicas reconhecidas. Neste trabalho foram avaliadas as atividades gastroprotetora, antioxidante, antimicrobiana e citotÃxica do extrato seco das flores de camomila (ESFC) e do alfa-bisabolol (BISA). Na atividade gastroprotetora, o ESFC nas doses 100, 200 e 400 mg/Kg, via oral, reduziu significativamente em 78, 68 e 89 %, respectivamente (p<0,001) as lesÃes gÃstricas induzidas por etanol (1,0 mL/animal) em ratos. BISA tambÃm inibiu a formaÃÃo de Ãlceras induzidas por etanol, mas somente nas doses 50 e 100 mg/Kg (87% e 96%, respectivamente). O mecanismo de gastroproteÃÃo do BISA nas lesÃes gÃstrica induzidas por etanol em ratos foi avaliado na dose de 100 mg/Kg. O prÃ-tratamento com o antagonista do Ãxido nÃtrico (L-NAME) e com um inibidor das prostaglandinas (indometacina) nÃo bloqueou efetivamente o efeito gastroprotetor do BISA, mas o prÃ-tratamento com glibenclamida, um inibidor dos canais K +ATP, reduziu significativamente (p<0,05) o efeito gastroprotetor de BISA. Esses resultados mostram que BISA pode reduzir os danos da mucosa gÃstrica induzidos por etanol atravÃs do mecanismo de ativaÃÃo dos canais K+ATP. Na avaliaÃÃo do potencial antioxidante mensurado atravÃs do teste do DPPH, tanto ESFC quanto BISA nÃo apresentaram atividade seqÃestradora de radicais livres. O mÃtodo de difusÃo em Ãgar foi usado para determinar o potencial antimicrobiano do ESFC e do BISA sobre cepas microbianas originÃrias da ATCC e de origem hospitalar. O ESFC nÃo foi capaz de inibir o crescimento de nenhuma das cepas de bactÃrias testadas e determinou apenas uma pequena inibiÃÃo para a levedura C. albicans na concentraÃÃo de 5mg/mL. BISA inibiu o crescimento de S. aureus ATCC 6538, C. albicans ATCC 10231, Klebsiella pneumoniae e Acinetobacter balmanii atà nas concentraÃÃes de 0,0625, 0,0625, 4 e 4 mg/mL, respectivamente. A maior atividade antimicrobiana de BISA foi demonstrada sobre a bactÃria Gram-positiva S. aureus ATCC 6538, com uma CIM de 1mg/mL e CLM maior que 1mg/mL. Para as demais cepas testadas, as CIM e CLM de ESFC e de BISA foram maiores que 1mg/mL. A partir dos resultados obtidos, foi realizada a avaliaÃÃo da citotoxicidade do ESFC e do BISA. NeutrÃfilos humano foram isolados e receberam ESFC e BISA (1,5,10,50 e 100 Âg/mL), onde ESFC se mostrou citotÃxico em todas as doses testadas, enquanto que o BISA sà nÃo apresentou atividade citotÃxica na dose de 5 Âg/mL.Os resultados obtidos nesse trabalho sugerem que ESFC e BISA possuem atividade gastroprotetora em lesÃes gÃstricas induzidas por etanol, onde o mecanismo de aÃÃo do BISA parece estar relacionado com a ativaÃÃo dos canais K+ATP. Entretanto, nÃo foi possÃvel determinar a atividade antioxidante das duas drogas teste atravÃs do teste do DPPH. O melhor resultado para a atividade antimicrobiana do BISA foi demonstrada para a bactÃria S. aureus ATCC 6538, com CIM de 1mg/mL, tambÃm sendo demonstrada atividade citotÃxica para essa mesma substÃncia. / Matricaria recutita, commonly known as chamomile, is a plant species used in medicine due to its sedative properties, anti-inflammatory and healing, among others. Alpha-bisabolol, a sesquiterpene present in essential oil, also has several pharmacological activities recognized. This work evaluated the gastroprotective activity, antioxidant, antimicrobial and cytotoxic activities from chamomile dried flowers extract (CDFE) and alpha-bisabolol (BISA). Gastroprotective activity for ESFC at doses 100, 200 and 400 mg / kg, orally, significantly reduced in 78, 68 and 89% respectively (p <0.001) gastric lesions induced by ethanol (1.0 mL / animal). BISA also inhibited the formation of ulcers induced by ethanol, but only at doses 50 and 100 mg / kg (87% and 96%, respectively). The mechanism of gastroprotective the BISA in gastric lesions induced by ethanol in rats was evaluated at a dose of 100 mg / kg. The pre-treatment with the antagonist of nitric oxide (L-NAME) or antagonist of prostaglandins (indomethacin) did not blocked effectively of BISA, but the pretreatment with glibenclamide, an inhibitor of K+ATP channels, reduced significantly (p <0.05) the gastroprotective effect of BISA. These results indicate that BISA can reduce the damage of gastric mucosa induced by ethanol through the mechanism of activation of K+ATP channels. To evaluate the antioxidant potential measured by the DPPH test, both as ESFC and BISA showed no scavenging activity of free radicals. The method of agar diffusion was used to determine the antimicrobial potential of ESFC and BISA on microbial strains originating from ATCC and hospital origin. The ESFC was not able to inhibit the growth of any of the bacterial strains tested and required only a small inhibition for the yeast C. albicans at a concentration of 5 mg / mL. BISA inhibited the growth of S. aureus ATCC 6538, C. albicans ATCC 10231, Klebsiella pneumoniae and Acinetobacter balmanii at concentrations of 0,0625, 0.0625, 4 and 4 mg / mL, respectively. The highest antimicrobial activity of BISA was demonstrated against Gram-positive S. aureus ATCC 6538, with an MIC of 1mg/mL and MLC greater than 1mg/mL. For the other strains tested, the MIC and the CLM ESFC and BISA were greater than 1mg per mL. From the results obtained was performed to evaluate the cytotoxicity of ESFC and BISA. Human neutrophils were isolated and were ESFC and BISA (1,5,10,50 and 100 mg / mL), where ESFC proved cytotoxic at all doses tested, while the BISA not only showed cytotoxic activity at dose of 5 mg / mL. The results of this study suggest that ESFC and BISA have gastroprotective activity in gastric lesions induced by ethanol, where the mechanism of action of BISA seems to be related to activation of K+ATP channels. However, it was not possible to determine the antioxidant activity of two drugs test by the DPPH test. The best result for the antimicrobial activity of BISA was demonstrated for the bacteria S. aureus ATCC 6538, with MIC 1mg/mL also being demonstrated cytotoxic activity for that substance.
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Atividade antimicrobiana de extratos vegetais de plantas do estado do tocantins. / Antimicrobial Activity of Plant Extracts from the Tocantins State - Brazil.

Hebert Lima Batista 07 November 2008 (has links)
A busca de novos medicamentos eficases para o combate das infecÃÃes por bactÃrias multiresistentes à uma das grandes preocupaÃÃes da Ãrea cientÃfica mundial, desde o relato de existÃncia de cepas resistentes a penicilina observada por Kirby em 1966. A preocupaÃÃo à crescente devido à disseminaÃÃo destas estirpes resistentes, tanto em ambito ambulatorial quanto hospitalar e a diminuiÃÃo de registro nos Ãltimos anos de novas drogas com potencial de controle das infecÃÃes. No intuito de contribuir com o desenvolvimento de novos fÃrmacos atravÃs de isolamento de molÃculas provenientes de plantas com potencial antimicrobiano, foi proposto o screening dos extratos hexÃnicos, alcoÃlicos 95ÂGL e a 70% de seis plantas - Jenipapo (Genipa americana L.), - Folha da Fortuna (Bryophyllum pinnatum (Lam.) Oken), - Meracilina (Alternanthera cf. brasiliana (L.) Kuntze), - Mangabeira (Lafoensia pacari St. Hil), - Mesocarpo do BabaÃu (Orbignya spp.), - Bacuri (Attalea phalerata Mart.); contra oito estirpes de bactÃrias, cinco Gram-positivas e trÃs Gram-negativas. Os referidos extratos secos de cada planta foram obtidos por masceraÃÃo, seguido de evaporaÃÃo do solvente e liofilizaÃÃo. Estes extratos foram solubilizados em DMSO:H20 â 1:1 atà concentraÃÃes que variaram de 1000 a 1mg/mL para avaliaÃÃo microbiolÃgica, pela tÃcnica de difusÃo em agar, com deposito de 50ÂL do extrato em poÃos de 6x8mm. As bactÃrias ensaiadas demonstraram-se resistentes a todos os extratos hexÃnicos das plantas experimentadas, alÃm dos extratos alcoÃlicos das folhas de A. brasiliana. Os extratos alcoÃlicos 95ÂGL e 70% de folhas de L. pacari e folhas de B. pinnatum inibiram o crescimento de todas as espÃcies de bactÃrias apresentando halos de inibiÃÃo superiores a 15mm e concentraÃÃo mÃnima inibitÃria - CMI entre 250 a 1mg/mL. Os extratos alcoÃlicos 95ÂGL e 70% Mesocarpo de Orbignya spp inibiu o crescimento de bactÃrias gram positivas, com halos de inibiÃÃo maiores que 10 mm e menores de 20 mm e CMI entre 250 a 100mg/mL. Jà o fruto de G. americana e o mesocarpo e epicarpo de A. phalerata inibiram tanto bactÃrias gram positivas como Gram negativas, mas com resistÃncia a vÃrias estirpes para os extratos alcoÃlicos 95ÂGL e 70% com halos de inibiÃÃo superior a 10mm e inferor a 20mm e CMI de 1000 a 500mg/mL. Os resultados da entrecasca da G. americana obtiveram halos de inibiÃÃo entre 10 e 15mm com CMI variando entre 1000 a 250 mg/mL. Posteriorente, o extrato alcoÃlico 70% do Mesocarpo de Orbignya spp foi submetido fracionamento bioguiado por tÃcnicas quÃmicas, cromatograficas e Bioautografia, obtendo 24 fraÃÃes com potencial para atividade antimicrobiana. Assim, a maioria dos extratos ensaiados mostrou-se eficazes contra microrganismos patogÃnicos, compreendendo ser uma fonte promissora de fÃrmacos antimicrobianos. / The research for new drugs efficient to combat of multiresistant bacteria infections is a great concern of the scientific world, since the report of the existence of strains resistant to penicillin followed by Kirby in 1966. Because to spread of resistant strains in hospital and outpatient and lessen records in recent years of new drugs with potential for control these infections. Thought to contribute to development of new drugs and isolament of molecules from plants with antimicrobial potential, was proposed screening of the hexane extract, 95  GL alcohol and 70% of six plants - Jenipapo (Genipa americana L.), -Folha da Fortuna (Bryophyllum pinnatum (Lam.) Oken), -Meracilina (Alternanthera cf. brasiliana (L.) Kuntze ), -Mangabeira (Lafoensia pacari St. Hil), - Mesocarpo do BabaÃu (Orbignya spp.), - Bacuri (Attalea phalerata Mart.); against eight strains of bacteria, five Gram-positive and three Gram-negative strains. All dried extracts of each plant were obtained by masceraÃÃo, followed by evaporation of the solvent and lyophilization. These extracts were solubilized in DMSO: H20 - 1:1 up to concentrations ranging from 1000 to 1mg/ml for microbiological evaluation, the technique of diffusion in agar, with deposit of 50&#956;L of extract in wells of 6x8mm.The bacterias tested showed resistant for hexane extract of all plants, and addition of alcoholic extracts of leaves of A. brasiliana. The extracts alcoholic 95ÂGL and 70% of leaves of L. pacari and leaves of B. pinnatum inhibited growth of all species of bacterias, and showing halos of inhibition greater than 15mm and minimum inhibitory concentration - MIC of 250 to 1mg/ml. The alcoholic extracts and 95ÂGL 70% of mesocarp Orbignya spp inhibited the growth of gram positive bacteria, with halos of inhibition larger than 10 mm and less than 20 mm and MIC of 250 to 100mg/mL. The alcohol extracts 95ÂGL and 70% of G. americana fruit and the A. phalerata mesocarp and epicarp inhibited gram positive and gram-negative bacteria, but with resistance to some strains and demonstrate inhibition halos with 10 to 20mm and MIC of 1000 to 500mg/mL. The results of extracts of sap of G. American show inhibition halos between 10 and 15mm with MIC ranging from 1000 to 250 mg/mL. The alcoholic extract 70% form mesocarp of Orbignya spp was fractionated by chemical techniques guided by biological activity, followed by chromatography and bioautography, were obtained 24 fractions with antimicrobial activity potential. Thus, the most of extracts tested showed to be effective against pathogenic microorganisms, comprising a promising source of antimicrobial agents.
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Atividade antimicrobiana e produção de enzimas de interesse biotecnológico de bactérias isoladas de diferentes habitats. / Antimicrobial activity and production of enzymes with biotechnological interest of bacteria isolated from different habitats.

RODRIGUES, Ariana Alves 17 March 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2014-07-29T15:29:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Lorena de Almeida Ribeiro Prudente.pdf: 339298 bytes, checksum: 85271945cc6981d1e0a7a1803021dcad (MD5) Previous issue date: 2009-03-17 / The microorganisms are essential for the environment and contribute to stabilize the environments, playing a hole in the basic ecologic process such as biogeochemistry cycles and food chains, and sometimes responsible for the maintenance of the ecologic relationship between the organisms. So we have a diversity of microorganism and in consequence bioactive molecules that they produce as a result of primary and secondary metabolism, and are used by humans in many important social-economic activities, which includes the search for new medicines and new enzymes with biotechnology interest. This study analyzed different microorganisms isolated from different habitats, and the objective was select microorganisms with the capacity of inhibit the growing of pathogenic microorganisms and that produces enzymes with biotechnological applications. The isolates antimicrobial and enzymatic activities were evaluated, bioactive substances extracted and the cytotoxic activity with Artemia salina determined. The biggest part of the isolates produces substances with antimicrobial activity for the evaluated gram-positives, and none are toxic in low levels. The isolates are great producers of esterases and &#946;-glucosidades. The isolates described in this study are from four different environments: Cerrado soil, Mata Atlântica, Azadirachta indica A. JUSS (Nim) e cave environment and are related to unique environmental conditions, the majority part of the isolates are able to produce molecules with biotechnology activity, this suggests a great microbial potential for the production of bioactive molecules that can be used in industries and medicine. Key Words: Antimicrobial activity, microorganisms, enzymes, bioactive. / Os microrganismos são essenciais para o meio ambiente e contribuem para a estabilidade de ecossistemas, participando de processos ecológicos básicos como os ciclos biogeoquímicos e cadeias alimentares, muitas vezes mantendo relações ecológicas com outros organismos. Desta forma há uma diversidade de microrganismos e conseqüentemente de moléculas bioativas que eles produzem como resultado do metabolismo primário e secundário, que têm sido amplamente utilizadas pelo homem em diversas atividades de importância sócio-econômica, que incluem a busca por novos fármacos e por enzimas de interesse biotecnológico. Este estudo analisou microrganismos isolados de diferentes habitats com o objetivo de selecionar microrganismos com habilidade de inibir o crescimento de microrganismos patogênicos e que sejam produtores de enzimas com importância biotecnológica. Os isolados tiveram sua atividade antimicrobiana e enzimática avaliadas, substâncias biotivas extraídas e a atividade citotóxica frente à Artemia salina determinada. Dos isolados avaliados a maior parte demonstrou ser produtora de substâncias com atividade antimicrobiana frente as bactérias gram-positivas avaliadas, sendo que nenhum isolado demonstrou ser tóxico em baixas concentrações. Os isolados demonstraram predomínio na produção de esterases e &#946;-glucosidases. Embora os isolados descritos neste estudo pertençam a quatro ambientes distintos: solo de Cerrado e Mata Atlântica, Azadirachta indica A. JUSS (Nim) e ambiente cavernícola e estejam sujeitos a condições ambientais distintas, a maior parte dos isolados obtidos mostrou-se capaz de produzir substâncias com aplicações biotecnológicas, fato que sugere um grande potencial por parte dos microrganismos em produzir moléculas bioativas que possam ser empregadas na indústria e medicina.
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Estudo Farmacognóstico, Investigação das Atividades Antimicrobiana, Leishmanicida e Toxicidade Aguda de Rhamnidium elaeocarpum Reissek RHAMNACEAE (Cafezinho) / Pharmacognostic study, investigation of antimicrobial activities, leishmanicidal and toxicity of Rhamnidium elaeocarpum Reissek - Rhamnaceae (little coffee)

OLIVEIRA, Tiago Branquinho 27 August 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2014-07-29T16:11:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao tiago oliveira.pdf: 60590 bytes, checksum: 2becac23a5f99abe922b4af561c0a7d1 (MD5) Previous issue date: 2009-08-27 / In the last years the treatment with medicines made from medicinal plants has increased. A concern about the useful of these natural products is the quality control pharmacobotanical, phytochemical and purity tests, which make up the technical specifications of a particular plant species. Moreover, pharmacological and toxicological studies must be conducted in order to effectiveness and safety. This study aimed to carry out the assessment pharmacognostic, acute toxicity and evaluation of antimicrobial and leishmanicidal of the ethanol extract of the leaves, fruit, stem bark and root bark of R. elaeocarpum Reissek. Samples of R. elaeocarpum were collected in the municipality of Campestre-GO, a description of the macroscopic aspects of the leaves, stem bark and root bark was carried to the naked eye by observing the macroscopic general of vegetal drugs; the microscopical analysis was performed by observing the histological stained. The qualitative analysis of the major classes of secondary metabolites present in the sprayed sample. The tests for water content, total ashes and acid insoluble ashes had been carried through according to the brazilian pharmacopoeia IV. The rude ethanol extract was obtained by maceration and the fractions were obtained by partition, liquid-liquid, successive with hexane, dichloromethane and ethyl acetate. Minimum inhibitory concentration (MIC) was determined by agar dilution. The procedure was performed according to NCCLS standards 2004 (M7-A7). The evaluation of acute toxicity of ethanol extracts had reference to the Guidelines of 423 Organization for Economic Co-Operation and Development (OECD). The leishmanicidal activity was tested for the promastigotes forms of Leishmania (L) chagasi. Most of the morphological and anatomical characteristics observed are consistent with the typical family. In phytochemical screening of leaf, root bark, stem bark and fruit of R. elaeocarpum verified the presence of flavonoids and alkaloids. It was also the presence of heterosides saponins and tannins in leaf, root bark, stem bark and is absent in the fruit. The extracts and fractions that had obtained the lowest value of minimum inhibitory concentration (0,390 mg.mL-1) against microorganisms tested showed moderate inhibitory activity. None of the extracts and fractions showed good inhibitory activity. As is said about the toxicological research, throughout the period of observation of animals during the evaluation of acute toxicity was not death. Through behavioral observations made through the hippocratic screening is assigned a zero score for all evaluated items. The necropsy of the animals did not evidence any macroscopic alterations to justify the histopathology of the organs (kidney, spleen and liver) selected for analysis. This study demonstrated that the use of rude extract and fractions of leaves of R. elaeocarpum induced death of promastigotes forms of L. (L) chagasi in vitro. The presented results open perspectives for the future isolation, purification and identification of bioactive substances of R. elaeocarpum / Nos últimos anos o tratamento com medicamentos à base de plantas medicinais tem aumentado. Uma preocupação em relação à utilização desses produtos naturais consiste no controle de qualidade farmacobotânico, fitoquímico e ensaios de pureza, que compõem as especificações técnicas de uma determinada espécie vegetal. Além disso, estudos farmacológicos e toxicológicos devem ser realizados, visando a sua eficácia e segurança. Este trabalho teve por objetivo realizar a avaliação farmacognóstica, toxicidade aguda e avaliação das atividades antimicrobiana e leishmanicida do extrato etanólico das folhas, frutos, cascas do caule e cascas da raiz de R. elaeocarpum Reissek. Amostras da R. elaeocarpum foram coletadas no município de Campestre-GO, a descrição dos aspectos macroscópicos das folhas, casca do caule e casca da raiz foi realizada à vista desarmada observando as características macroscópicas gerais de drogas vegetais; a análise microscópica foi realizada através da observação de cortes histológicos submetidos à coloração. A análise qualitativa das principais classes de metabólitos secundários presentes foi realizada na amostra pulverizada. Os ensaios para determinação do teor de água, cinzas totais e cinzas insolúveis em ácido foram realizados segundo a Farmacopéia Brasileira IV. O extrato etanólico bruto foi obtido por maceração e as frações foram obtidas por partições, líquido-líquido, sucessivas com hexano, diclorometano e acetato de etila. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi determinada pelo método de diluição em ágar. O procedimento foi realizado segundo normas do NCCLS 2004 (M7-A7). A avaliação da toxicidade aguda dos extratos etanólico brutos teve como referência as Diretrizes 423 da Organisation for Economic Co-Operation and Development (OECD). A atividade leishmanicida foi testada para as formas promastigotas de Leishmania (L) chagasi. A maior parte das características morfoanatômicas observadas está de acordo com o padrão típico da família. Na prospecção fitoquímica da folha, cascas da raiz, cascas do caule e fruto de R. elaeocarpum verificou-se a presença de flavonóides e alcalóides. Verificou-se, também, a presença de heterosídeos saponínicos e taninos na folha, cascas da raiz, cascas do caule sendo ausente no fruto. Os extratos e as frações que obtiveram o menor valor de Concentração Inibitória Mínima (0,390 mg.mL-1) frente aos microrganismos testados apresentaram atividade inibitória moderada. Nenhum dos extratos e frações apresentou boa atividade inibitória. No que se diz a respeito à investigação toxicológica, durante todo o período de observação dos animais durante a avaliação de toxicidade aguda não ocorreu morte. Através das observações comportamentais feitas por meio do screening hipocrático atribuiu-se pontuação zero para todos os itens avaliados. A necropsia dos animais não evidenciou nenhuma alteração macroscópica que justificasse o estudo histopatológico dos órgãos (rins, baço e fígado) selecionados para análise. Neste estudo foi demonstrado ainda que a utilização do extrato bruto e as frações de folhas de R. elaeocarpum induziu a morte das formas promastigotas de L. (L) chagasi in vitro. Os resultados apresentados abrem perspectivas para o futuro isolamento, purificação e identificação das substâncias bioativas de R. elaeocarpum
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ProteÃÂnas de tintas de moluscos marinhos composiÃÂÃÂo, funÃÂÃÂo e mecanismo de aÃÂÃÂo / Proteins of marine mollusks ink composition, function and mechanism of action

Tallita Cruz Lopes Tavares 11 October 2010 (has links)
Nos moluscos sem concha ou naqueles em que a mesma estÃÂ presente na forma vestigial, como cefalÃÂpedes e gastrÃÂpodes opistobrÃÂnquios, a falta dessa proteÃÂÃÂo externa conduziu ÃÂ evoluÃÂÃÂo de mecanismos de defesa dominados pela secreÃÂÃÂo ou incorporaÃÂÃÂo de substÃÂncias quÃÂmicas bioativas. ProteÃÂnas sintetizadas de novo sÃÂo bons exemplos dessas molÃÂculas, tendo sido encontradas nas tintas de vÃÂrias espÃÂcies de lesmas do mar, particularmente do gÃÂnero Aplysia. Muitas jÃÂ revelaram pertencer a famÃÂlias de proteÃÂnas com atividade oxidÃÂstica de L-aminoÃÂcidos (LAAOs), grupo do qual fazem parte tambÃÂm proteÃÂnas bioativas encontradas nos venenos de serpentes. A caracterizaÃÂÃÂo, portanto, das atividades biolÃÂgicas e do perfil bioquÃÂmico dessas proteÃÂnas ÃÂ muito ÃÂtil para que possamos entender como se dÃÂo os mecanismos defensivos desses animais e quÃÂo difundidos esses sÃÂo, alÃÂm de proporcionar subsÃÂdios para sua aplicaÃÂÃÂo biomedicinal. Esse estudo visou a elucidaÃÂÃÂo dos mecanismos de aÃÂÃÂo da dactilomelina-P, proteÃÂna antibacteriana purificada da tinta de Aplysia dactylomela, e a comparaÃÂÃÂo da composiÃÂÃÂo protÃÂica e das atividades antimicrobianas das tintas liberadas por dois gastrÃÂpodes, A. dactylomela e Bursatella leachii, e por um cefalÃÂpode, Octopus sp.. O estudo revelou que a dactilomelina-P ÃÂ uma L-aminoÃÂcido oxidase capaz de oxidar L-lisina e L-arginina, com maior afinidade por L- arginina, com Km de 0,22 +- 0,16 mM/L para a L-lys e de 0,015 +- 0,01 Mm/L para a L-arg. Demonstrou tambÃÂm que sua atividade antibacteriana ÃÂ medida por esta propriedade, tendo o perÃÂxido de hidrogÃÂnio, gerado na oxidaÃÂÃÂo enzimÃÂticca, grande aprtipaÃÂÃÂo na inibiÃÂÃÂo bacteriana. A proteÃÂna se comporta de maneira bacteriostÃÂtica quando em meio nÃÂo suplementado com L-lisina e L-angilina, sendo bactericida na presenÃÂa destes. AlÃÂm disso, a atividade antibacteriana mostrou ser dependente da concentraÃÂÃÂo de aminoÃÂcidos disponibilizados para oxidaÃÂÃÂo pela proteÃÂna. A atividade Staphylococcus aureus deve ocorrer por meio de mecanismos que nÃÂo induzam danoso na morfologia celular, uma vez que nÃÂo foi observada qualquer alteraÃÂÃÂo morfolÃÂgica por microscopia de forÃÂa atÃÂmica. JÃÂ a anÃÂlise das trÃÂs tintas pro PAGE-SDS revelou a presenÃÂa, em todas elas, de bandas protÃÂicas de cerca de 60 kDa, alÃÂm de bandas de peso moleculares mais baixos. Por Western blot pode-se observar a existÃÂncia de identidade imunolÃÂgica entre proteinas das trÃÂs tintas, visto que anticorpos policlonais produzidos contra a dactilomelina-P reconheceram proteÃÂna(s) de cerca de 60 kDa na tinta de B. leachii e de cerca de 30 kDa na tinta de Octopus sp. Dentre as trÃÂs tintas, somente a tinta de A. dactylomela apresentou atividades antibacterianas e antifÃÂngica / In shelled molluscs or those in which it is present as vestigial as cephalopods and gastropods opistobrÃÂnquios, the lack of external protection led to the evolution of defense mechanisms dominated by the secretion or incorporation of bioactive chemicals. Proteins synthesized again are good examples of these molecules, were found in paints of various species of sea slugs, particularly the genus Aplysia. Many have already revealed belong to protein families with oxidÃÂstica activity of L-amino acids (LAAOs), a group which comprises also bioactive proteins found in snake venoms. The characterization therefore biological activities and biochemical profile of these proteins is very useful for us to understand how to give the defense mechanisms of animals and how widespread they are, in addition to providing subsidies to its application biomedicinal. This study aimed to elucidate the mechanisms of action of P-dactilomelina, antibacterial protein purified from Aplysia ink dactylomela, and comparison of protein composition and antimicrobial activities of paint released by two gastropods, A. dactylomela and Bursatella leachii, and a cephalopod, Octopus sp .. The study revealed that dactilomelina-P is an L-amino acid oxidase capable of oxidizing L-lysine and L-arginine, with a higher affinity for L-arginine, with a Km of 0.22 + - 0.16 mM / L for L -lys and 0.015 + - 0.01 mM / L L-arg. It also demonstrated that its antibacterial activity is measured by this property, with the hydrogen peroxide generated in the oxidation enzimÃÂticca, great aprtipaÃÂÃÂo in bacterial inhibition. The protein behaves in a non-bacteriostatic when supplemented with L-lysine and L-angilina, being in the presence of bactericidal. In addition, the antibacterial activity was shown to be dependent on the concentration of amino acids available for oxidation by the protein. Staphylococcus aureus activity must occur through mechanisms that do not induce damage to cell morphology, since we did not observe any morphological change by atomic force microscopy. The analysis of the three pro paint SDS-PAGE revealed the presence in them all, protein bands of about 60 kDa, and bands of lower molecular weight. For Western blot can observe the existence of immunologic identity between proteins of the three dyes, since polyclonal antibodies produced against P-dactilomelina recognized protein (s) of about 60 kDa in ink B. leachii and approximately 30 kDa in ink Octopus sp. Among the three dyes, only the ink of A. dactylomela showed antibacterial and antifungal activities
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Desenvolvimento de novos peptídeos antimicrobianos a partir de proteínas dos venenos das serpentes peruana Bothrops pictus e Bothriopsis oligolepis / Development of new antimicrobial peptides based on the structures of proteins found in the venoms of the Peruvian snakes B. pictus e B. oligolepis

Marcos Alejandro Sulca López 21 November 2016 (has links)
A resistência aos antibióticos adquirida por micro-organismos patogênicos é um problema de saúde mundial e, por isso, o desenvolvimento de novos agentes antimicrobianos vem sendo amplamente estimulado. Sabendo que muitos peptídeos bioativos correspondem a fragmentos peptídicos de proteínas e/ou seus análogos, este trabalho teve o objetivo de desenvolver novos peptídeos antimicrobianos (AMPs) a partir das sequências aminoacídicas e das estruturas 3D de proteínas possivelmente envolvidas na atividade antimicrobiana de venenos de serpentes pouco estudados. As etapas iniciais seguidas foram: a) escolher uma fosfolipase A2 (PLA2) de veneno de serpente peruana do gênero Bothrops da família Viperidae com sequência de aminoácidos conhecida e modelar por homologia a sua estrutura 3D; b) verificar atividade antimicrobiana em venenos de serpentes peruanas dos gêneros Bothrops e Bothriopsis da família Viperidae, selecionar um veneno ativo, fracioná-lo para isolar proteínas provavelmente envolvidas nessa atividade, tripsinizar as proteínas isoladas, sequenciar os fragmentos trípticos para identificá-las, localizar esses fragmentos em sequências aminoacídicas de proteínas com estruturas 3D disponíveis correlatas às proteínas isoladas/identificadas em classe, função e fonte natural. Em seguida, foram escolhidos fragmentos peptídicos da PLA2 (item a) e das proteínas isoladas do veneno ativo (item b) e/ou desenhados análogos que apresentassem características exibidas por AMPs conhecidos. Os peptídeos desenhados foram sintetizados, purificados, caracterizados e testados em suas atividades antimicrobianas. Os modelos estruturais 3D da PLA2 de Bothrops pictus e quatro peptídeos (PLA2-1 a -4) amidados derivados dela foram obtidos, sendo o PLA2-1 ativo frente a Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Candida krusei e Candida parapsilosis (MICs de 6,25-200 &#181;mol.mL-1). Dos três venenos de serpentes peruanas testados, Bothrops taeniatta, Bothrops barnetti e Bothriopsis oligolepis, os dois últimos inibiram o crescimento de S. aureus (MICs 0,78-50 &#181;mol.mL-1), mas apenas B. oligolepis demonstrou espectro de ação amplo. O seu fracionamento sequencial, acompanhado de ensaios de inibição do crescimento de S. aureus, gerou frações ativas relativamente homogêneas que, tripsinizadas e os fragmentos trípticos sequenciados, continham metalo-peptidases do tipo III, serino-peptidase ou lectinas do tipo C. A verificação de atividade enzimática e de coagulação sanguínea nessas frações confirmaram as naturezas das proteínas isoladas. Dos três peptídeos amidados (Bo-Ser1, Bo-Met1 e Bo-Lec1) desenhados a partir de suas estruturas, um deles foi ativo frente às leveduras C. albicans, C. krusei e C. parapsilosis (Bo-Met1; MIC de 6,25 - 200 &#181;mol.mL-1). Pela primeira vez, foi demonstrado que: a) os venenos das serpentes peruanas B. barnetti e B. oligolepis apresentam ação antimicrobiana, sendo o último de espectro amplo; b) que as proteínas acima citadas, que incluem uma serino-peptidase, estão envolvidas com essa propriedade do veneno de B. oligolepis; c) que as sequências aminoacídicas e modelo 3D de uma PLA2 ácida e de proteínas presentes nos venenos das serpentes peruanas B. pictus e Bothriopsis oligolepis podem funcionar como fontes naturais para o desenvolvimento de novos AMPs de ação potente em micro-organismos de interesse clínico e científico. / Resistance to antibiotics obtained by pathogenic microorganisms is a global health problem, so the search for new antimicrobial agents has been encouraged. Knowing that many protein fragments and analogues are bioactive peptides, the aim of this work was to develop new antimicrobial peptides (AMPs) based on the amino acid sequences and 3D structures of proteins apparently involved in the antimicrobial activity of snake venoms very little or not studied so far. The first steps taken were: a) selection of a phospholipase A2 (PLA2) present in the venom from a Peruvian Bothrops sp. belonging to the family Viperidae, whose amino acid sequence was known, to model by homology its 3D structure; b) detection of antimicrobial activity in venoms from other Peruvian Viperidae Bothrops and Bothriopsis snakes, selection of an active venom, fractionation of it for isolation of proteins possibly involved in the antimicrobial activity, trypsinization of the isolated proteins, sequencing of the tryptic fragments for protein identification, location of such fragments in the amino acid sequences and 3D structures of proteins directly related in class, function and natural source to the isolated proteins. Then, peptide fragments from the chosen PLA2 (item a) and from the isolated proteins (item b) that presented structural features found in the known AMPs were selected and/or their analogues were designed. Finally, synthesis, purification and characterization of the peptides with AMP potential, (viii) verification on whether or not they display antimicrobial activity. The 3D-structure models of Bothrops pictus PLA2 and four amidated peptides (PLA2-1 to -4) derived from it were obtained, being PLA2-1 active against Gram negative bacteria Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa as well as the yeasts Candida albicans, Candida krusei and Candida parapsilosis (MICs de 6.25-200 &#181;mol.mL-1). Among the three Peruvian snake venoms tested Bothrops taeniatta, Bothrops barnetti and Bothriopsis oligolepis, the last two inhibited the growth of S. aureus (MICs 0.78-50 &#181;mol.mL-1) and B. oligolepis presented a wide spectrum of bacterial action. Sequential fractionation followed by S. aureus growth inhibition assays of the main fractions led to active relatively homogeneous ones. Their trypsinization and sequencing of the tryptic fragments indicated that they contained metalloproteinases type III, serine-proteinase or lectins type CTL. Enzymatic activity and blood coagulation assays confirmed the nature of the isolated proteins. From the three amidated peptides (Bo-Ser1, Bo-Met1 e Bo-Lec1) derived from them, Bo-Met1 showed to be active against C. albicans, C. krusei e C. parapsilosis (MIC 6,25 - 200 &#181;mol.mL-1). In summary, for the first time, it was demonstrated that: a) the venoms of the Peruvian snakes B. barnetti and B. oligolepis display antimicrobial activity, being the last of wide spectrum of action, b) the proteins isolated from B. oligolepis snake venom, including a serine-peptidase, are involved in the antimicrobial activity of the B. oligolepis snake venom, c) the amino acid sequences and 3D structures of acidic PLA2 and of other proteins found in the venoms of the Peruvian B. pictus e Bothriopsis oligolepis snakes can be used as safe and natural sources for the development of new AMPs potent against microorganisms of clinical and scientific interest.
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Extratos de algas marinhas como agentes antioxidantes e antimicrobianos e seus efeitos na qualidade de Minced de tilápia (Oreochromis niloticus) / Seaweeds extracts as antioxidants and antimicrobial agents and their effects on quality of tilapia Minced (Oreochromis niloticus)

Ingridy Simone Ribeiro Cabral 04 May 2012 (has links)
A extração de Carne Mecanicamente Separada de tilápia tem se destacado como um processo atraente pela possibilidade de maior recuperação da carne após a filetagem. Porém, a separação mecânica aumenta a superfície de exposição, levando à incorporação de oxigênio e consequentemente ao \"off flavor\" devido à rancidez, tornando necessário o uso de aditivos para sua conservação. A tendência é utilizar produtos naturais como alternativas aos aditivos químicos. Entre os produtos naturais, as algas marinhas apresentam, em sua composição, metabólitos secundários com alta atividade antioxidante e antimicrobiana. Esta pesquisa teve como objetivo avaliar a composição química e a atividade biológica de quatro algas marinhas e seus efeitos, quando aplicados em Minced de tilápia. As algas Nori, Kombu, Hijiki e Wakame foram extraídas por 2 e 7 dias, em temperatura ambiente, com etanol 60, 80 e 100%. O teor de compostos fenólicos, a atividade antioxidante e a antimicrobiana in vitro foram determinados. A atividade antioxidante por métodos acelerados, Rancimat e Oxipres, também foi avaliada. As algas bioativas tiveram seu perfil químico elucidado por cromatografia líquida e gasosa. Essas algas foram aplicadas em Minced de tilápia, que, em seguida, foi armazenado a -18ºC por 180 dias. No Minced foram analisadas a composição centesimal, características de frescor por pH, BNVT e TBARS; cor instrumental, cor e aroma (de ranço) pela análise sensorial, padrões microbiológicos e composição de ácidos graxos, nos tempos 0, 60, 120 e 180 dias de armazenamento. Observou-se que a extração de 2 dias, com etanol 60%, foi a mais eficiente para extrair os compostos fenólicos. As algas Nori e Hijiki apresentaram os maiores teores desses compostos e, consequentemente, maior atividade antioxidante in vitro. Os extratos de algas não apresentaram atividade antimicrobiana contra Salmonella Enteritidis, Escherichia coli e Staphylococcus aureus. Para Klebsiella pneumoniae e Listeria monocytogenes, os extratos mais eficientes foram os extraídos com etanol 100%. As algas Nori e Hijiki foram selecionadas como as mais bioativas e submetidas aos testes de oxidação acelerada. Quando aplicadas em óleo de soja, no Rancimat, e em Minced de tilápia, no Oxipres, estas algas demonstraram efetiva atividade antioxidante. Pela cromatografia, os principais compostos identificados foram, na Nori, os ácidos clorogênico, vanílico e caféico, além dos aminoácidos alanina, glicina, valina e prolina; bem como, glicose e sorbitol. Na alga Hijiki foram detectados os ácidos clorogênico, caféico e cinâmico; alanina e prolina, bem como, xilitol e ribitol, frutose e ácido linoléico. No teste de armazenamento congelado do Minced, por 180 dias, a aplicação dos extratos de Nori e Hijiki não infuenciou na composição centesimal e pH. As algas mostraram-se eficientes no controle da produção das BNVT. No entanto, por TBARS, apesar de estarem dentro dos limites aceitáveis, as algas apresentaram comportamento pró-oxidante. Sob os aspectos microbiológicos, os minceds atenderam à legislação vigente. Sensorialmente, os provadores não detectaram diferença no \"aroma de ranço\", apenas mínimas diferenças na cor do produto. Pode-se concluir que o Minced de tilápia, adicionado de algas marinhas, manteve-se dentro dos padrões de qualidade durante o armazenamento congelado. Ressalta-se, ainda, a diferença na resposta antioxidante de acordo com o método utilizado / The extraction of minced tilapia has emerged as an attractive process due to the possibility of greater recovery of the tissue after filleting. However, mechanical separation increases the surface exposure, leading to incorporation of oxygen and consequently to the \"off-flavor\" due to rancidity, making necessary the use of additives for its preservation. The tendency is to use natural products as alternatives to chemical additives. Among the natural products, seaweeds present in its composition secondary metabolites with high antioxidant and antimicrobial activities. This research aimed to evaluate the chemical composition and biological activities of four seaweeds varieties and their effects when applied to the tilapia Minced. Nori, Kombu, Hijiki and Wakame seaweeds were extracted by 2 and 7 days, at room temperature, with ethanol 60, 80 and 100%. The phenolic content, antioxidant and antimicrobial activities in vitro were determined. The antioxidant activity by accelerated methods, Oxipres and Rancimat, were also evaluated. Seaweeds bioactive profiles were elucidated by liquid and gas chromatography. These seaweeds were applied to the tilapia Minced, that was stored at -18 °C for 180 days. The Minced were analyzed as to their composition, freshness characteristics by pH, TBARS and TVB-N, instrumental color, color and rancidity aroma by sensory analysis, microbiological standards, and fatty acid composition, at 0, 60, 120 and 180 days of storage. It was observed that the extraction after two days, with 60% ethanol, was the most efficient way to extract the phenolic compounds. Hijiki and Nori showed the highest levels of these compounds and therefore higher antioxidant activity in vitro. The extracts showed no antimicrobial activity against Salmonella Enteritidis, Escherichia coli and Staphylococcus aureus. For Klebsiella pneumoniae and Listeria monocytogenes, more efficient extracts were extracted with ethanol 100%. Hijiki and Nori seaweeds were selected as the most bioactive and submitted to accelerated oxidation tests. When applied in soy oil in the Rancimat, and tilapia Minced, in the Oxipres, these seaweeds have demonstrated effective antioxidant activity. By chromatography, the most important compounds identified were, in Nori, chlorogenic, caffeic and vanillic acids, besides the amino acids alanine, glycine, proline and valine, glucose and sorbitol. In the Hijiki seaweed, it was detected chlorogenic, caffeic and cinnamic acids, alanine and proline, as well as, ribitol and xylitol, fructose, and linoleic acid. In the test of frozen Minced storage, for 180 days, the application of Nori and Hijiki extracts did not modify neither the composition nor the pH. Seaweeds were effective in controlling the TVB-N production, but, for TBARS, although they were within acceptable limits, the seaweeds showed pro-oxidant activities. As to the microbiological aspects, the minceds complied with legal requirements. Sensorially, the tasters detected no difference in the \"rancid aroma\", only small differences in the product color. It can be concluded that the Minced tilapia, seaweed added, remained within the standards of quality during frozen storage. It should be noted, moreover, the difference in the antioxidant response, according to the method used.

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