O uso inadequado de antimicrobianos é fator determinante para disseminação da resistência bacteriana. Vários países têm usado como estratégias políticas de restrição para tornar o uso mais racional. Principalmente em hospitais, onde a utilização é mais prevalente. Embora o uso empírico seja a opção de tratamento em muitas condições clínicas, sabe-se que exames microbiológicos de cultura e teste de sensibilidade antimicrobiana (TSA), podem orientar uma prescrição mais racional. Para se avaliar a adequação de prescrições de antimicrobianos de uso restrito no Hospital São Vicente de Paulo de Passo Fundo, considerando resultados de exames microbiológicos e protocolos clínicos da instituição, foram analisadas 372 prescrições de pacientes internados. O tipo de infecção foi a única justificativa apresentada para o uso de antimicrobianos, sendo a maior freqüência para infecções do trato respiratório inferior (59,4%) seguido das do trato urinário (10,8%). O tratamento inicial empírico ocorreu em 89% dos casos. Dos pacientes com uso empírico (331/372), 66,7% apresentaram pneumonia. Nesta situação, devido à dificuldade de coleta de material, o tratamento é baseado nos prováveis agentes causadores e o uso empírico é aceitável. O exame de cultura foi solicitado em menos da metade das prescrições 48,7%(181/372), e o TSA foi realizado nos casos de cultura positiva (121/181). O resultado do TSA apontou que o tratamento inicial prescrito estava adequado em 76% dos casos (92/121). A necessidade de troca do esquema terapêutico inicial foi identificada em 12,7% (23/181) dos casos que realizaram cultura e TSA. A troca de esquema ocorreu em 65,2% (15/23) dos casos, nos demais o médico optou por não alterar devido à resposta clínica do paciente. Das prescrições avaliadas conforme protocolos, 71,9% (192/267) demonstraram indicação terapêutica de acordo com a recomendação. De acordo com os protocolos, observou-se uma freqüência maior de adequação das prescrições e das condutas laboratoriais quando comparada com outros estudos. Estes resultados podem estar associados às políticas de restrição de uso adotadas pela instituição. / The inadequated use of antimicrobials is the determinant fact to the dissemination of the resistance of the bacteria. Many countries have used as a strategy the politics of the restriction to become this use more rational, mainly in the hospitals, where the utilization is more prevalent. Although the empiricist use is the option of the treatment in many clinical conditions, we know that microbiological exams of culture and the test of antimicrobial sensibility (TSA) can conduct to a more rational prescription. To evaluate the adjustment of the prescriptions of antimicrobials in restrict use at São Vicente de Paulo Hospital, in Passo Fundo, and considering the results of the microbiological exams and clinical protocols of the institution, 372 interned patients prescriptions were analyzed. The type of the infection was the unique justify showed to the use of the antimicrobials, being the biggest frequency to the infections in the lower respiratory tract (59.4%), followed by the urinary tract (10.8%). The initial empiricist treatment occurred in 89% of the cases. Within the patients with the empiricist use (331/372), 66.7% showed pneumonia. In this situation, due to the difficulty of the material collecting, the treatment is based in the probable causer agents and the empiricist use is acceptable. The exam of the culture was required in the less of the half prescriptions (48.7%) (181/372) and TSA was executed in the cases of the positive culture (121/181). The results of TSA showed that the initial treatment prescribed was adjusted in 76% of the cases (92/121). The necessity of the changing of the initial therapeutic scheme was identified in 12.7% (23/181) of the cases where the culture and TSA were found. In the others, the doctor opted to not to modify it due to the clinical answer of the patient. According protocols, evaluated prescriptions 71.9% (192/267) showed therapeutic indication according the recommendation. According with the protocols, it was observed a major frequency of adaptation of the prescriptions and of the lab behaviors when it is compared with other studies. These results can be associated with the restriction policies of adopted using for the institution.

The research aimed to evaluate the antimicrobial potential and healing of wounds of the ethanol extract of leaves of Tabebuia aurea. The government stimulus to scientific research to seek new treatment options based on medicinal plants; the need for proof of efficacy and safety for the use of plant material by the population; and Tabebuia genus plants have scientifically proven biological activities and in addition, are present in large numbers on Brazilian soil justify this study. To achieve the proposed objectives was carried out the preparation of the ethanol extract of leaves of Tabebuia aurea (EETA), and then held its fractionation, obtaining the fractions hexane, chloroform, ethyl acetate and methanol. Phytochemical tests were conducted assessing cell viability in vitro by Methyl tetrazolium method of determining the minimum inhibitory concentration (MIC) for bacteria and fungi and evaluation of the healing activity of skin wounds in rats from topical application of EETA 5%. The phytochemical screening was positive for some secondary metabolites of the class of phenolic compounds and steroids. The cytotoxicity test J774.A1 lineage cells showed cytotoxicity at concentrations of 500, 100 and 10 µg/mL and cell viability at the concentration of 1 µg/mL. In assessing the MIC, the EETA did not inhibit the growth of microorganisms tested, although the hexane fractions and chloroform the EETA showed activity at 1000 µg/mL for Escherichia coli bacteria. None of the fractions inhibited the fungus Candida albicans. In the study of healing activity healing, the macroscopic assessment of wounds, the EETA group had lower redness close to the lesion and inflammation in the initial process of wound healing and formation of a thick crust adhering to the wound, which interfere with the retraction of the edges, with the percentage of negative contraction until the 11th day of treatment (-35.40%, -8.85% and -1.18%) and positive in 14th (22.71%). The positive and negative control groups showed similarity in the evolution of healing, with the percentage of contraction of 85.54% and 80.23%, respectively, on the 14th day. The histopathology of the wounds showed no statistical significance in healing between groups at 3 and 7 days, and significance to the EETA group on the 14th day, showing reepitelization below the positive and negative groups, related to the formation of crust. Macroscopic and histopathological evaluation of liver and kidney, showed no signs of toxicity and no change in biochemical evaluation, indicating that the EETA used topically for 14 days does not promote damage to the animal model used. Concludes that the EETA not have antimicrobial activity and hexane fractions and chloroform have weak activity to the bacterium E. coli; demonstrated cytotoxicity in vitro at concentrations from 10 µg/mL and no in vivo toxicity; his healing activity was not superior to controls in this study. It is suggested invest in studies evaluating the anti-inflammatory activity EETA. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A pesquisa objetivou avaliar o potencial antimicrobiano e cicatrizante de feridas do extrato etanólico de folhas de Tabebuia aurea. O estímulo governamental às pesquisas científicas que busquem novas opções de tratamento à base de plantas medicinais, a necessidade de comprovação de eficácia e segurança terapêutica para a utilização do material vegetal pela população e que plantas do gênero Tabebuia, que possuem atividades biológicas cientificamente comprovadas e ademais, estão presentes em grande número em solo brasileiro justificam este estudo. Para a concretização dos objetivos propostos, foi realizado o preparo do extrato etanólico de folhas de Tabebuia aurea (EETA), em seguida, realizou-se seu fracionamento obtendo as frações hexânica, clorofórmica, acetato de etila e metanólica. Foram realizados testes de prospecção fitoquímica, avaliação da viabilidade celular in vitro pelo método de Metiltetrazólio, determinação da concentração inibitória mínima (CIM) para bactérias e fungos e avaliação da atividade cicatrizante de feridas cutâneas em ratos a partir da aplicação tópica do EETA a 5%. A prospecção fitoquímica foi positiva para alguns metabólitos secundários da classe dos compostos fenólicos e esteroides. O teste de citotoxidade em células da linhagem J774.A1 demonstrou citotoxidade nas concentrações de 500, 100 e 10 µg/mL e viabilidade celular na concentração de 1 µg/mL. Na avaliação da CIM, o EETA não inibiu o crescimento dos microrganismos testados, muito embora as frações hexânica e clorofórmica do EETA demonstraram atividade na concentração de 1000 µg/mL para a bactéria Escherichia coli. Nenhuma das frações inibiu o fungo Candida albicans. No estudo da atividade cicatrizante de feridas na avaliação macroscópica das feridas, o grupo EETA apresentou menor rubor perilesional e inflamação no processo inicial da cicatrização e formação de crosta espessa aderida à ferida, o que interferiu na retração das bordas apresentando percentual de contração negativo até o 11º dia de tratamento (-35,40%, -8,85% e - 1,18%) e positivo no 14º (22,71%). Os grupos controles positivo e negativo demonstraram semelhança na evolução da cicatrização, apresentando percentual de contração de 85,54% e 80,23%, respectivamente, no 14º dia. A análise histopatológica das feridas não demonstrou significância estatística na cicatrização entre os grupos no 3º e 7º dias, e significância para o grupo EETA no 14º dia, mostrando reepitelização inferior aos grupos positivo e negativo relacionado à formação de crosta. A avaliação macroscópica e histopatológica do fígado e dos rins não apresentou sinais de toxicidade assim como não houve alteração na avaliação bioquímica, indicando que o EETA utilizado topicamente por 14 dias não promove danos no modelo animal utilizado. Conclui-se que o EETA não possui atividade antimicrobiana e as frações hexânica e clorofórmica possuem fraca atividade para a bactéria E. coli; demonstrou citotoxicidade in vitro em concentração a partir de 10 µg/mL e ausência de toxicidade in vivo; sua atividade cicatrizante não foi superior aos controles avaliados neste estudo. Sugere-se investir em estudos que avaliem a atividade anti-inflamatória do EETA.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Por serem organismos filtradores, os mexilhões devem ser extraídos para consumo somente de águas com padrões microbiológicos regulamentados pelo Conselho Nacional do Meio Ambiente, uma vez que intoxicações alimentares de origem bacteriana são as consequências mais comuns relacionadas ao consumo destes moluscos. Após a retirada dos costões, estes organismos passam por processos de fervura, lavagem, acondicionamento em sacos plásticos e transporte até a chegada ao mercado onde são comercializados; etapas estas, realizadas sem cuidados assépticos. Objetivando avaliar a qualidade microbiológica de mexilhões Perna perna coletados na praia de Itaipu, Niterói, RJ; após a sua fervura; e comercializados no Mercado São Pedro, foram realizadas contagens de coliformes totais e termotolerantes e pesquisa de Escherichia coli, Salmonella spp. e Vibrio spp. por metodologia convencional e molecular em amostras obtidas destes locais. Pelo teste de disco-difusão foi observado o perfil de resistência das cepas isoladas. Do total de amostras analisadas (27) apenas 3 dos mexilhões que sofreram processo de aferventação, 1 do comercializado e 3 do in natura, se encontravam dentro dos padrões aceitáveis pela legislação. Não houve diferença significativa entre as contagens de coliformes termotolerantes dos diferentes mexilhões analisados, mas sim entre os períodos seco e chuvoso. Somente uma das nove coletas de água mostrou-se própria para o cultivo de mexilhões (até 14 CF/mL). Foram isoladas e caracterizadas fisiológicamente, 77 estirpes da espécie E. coli, sendo confirmadas molecularmente por PCR os sorotipos EPEC, STEC e EAEC; 4 cepas Salmonella spp. sendo apenas uma confirmada por PCR; e das 57 cepas caracterizadas como Vibrio spp., 51 foram confirmadas por PCR, sendo 46 Vibrio spp., 2 V. cholerae, 1 V. vulnificus, 1 V. parahaemolyticus e 1 V. mimicus. Entre as estirpes de E. coli, 13% apresentaram multirresistência e 15,6% apresentaram resistência múltipla. A estirpe de Salmonella spp. se mostrou sensível a todos os antimicrobiados testados. Das estirpes de Vibrio spp. testadas, 68,6% apresentaram multirresistência e 72,5% apresentaram resistência múltipla. A partir da pesquisa de genes direto do caldo de enriquecimento foi possível detectar todos os genes pesquisados, com exceção para os sorotipos de Salmonella e V. cholerae. Baseado nos resultados do presente trabalho pode-se inferir que os mexilhões, amplamente comercializados no município de Itaipú, podem se constituir em risco para a saúde pública dos consumidores no Rio de Janeiro, necessitando dos órgãos competentes uma eficiente fiscalização nos pontos de venda e cultivo destes moluscos. / Mussels (Perna perna) feed by filtering large quantities of water, enabling the retention of environmental bacteria and virus in their bodies. For this reason bacterial foodborne intoxications associated with these bivalves are common therefore mussels used for human consumption have to come from coastal areas where the microbiological quality of the water complies with current legislation laid down by the Conselho Nacional do Meio Ambiente. Following harvest these mussels go through a process of washing, boiling, packing and then transported to the fish markets for retail. During these processes and techniques normally no food hygiene plan is followed which may enable microorganisms growth and cross-contamination. The aim of this study was to determine the microbiological quality of Perna perna growing in Itaipu beach, Niterói, RJ from direct harvest (boiled and raw) and retailed at the São Pedro fish market. By using the MPN test it was possible to determine the total and faecal coliforms and by conventional and molecular techniques it was detected and identified the Escherichia coli, Salmonella spp. and Vibrio spp. present in the samples. The antimicrobial susceptibility test was also performed to determine the antimicrobial resistance profile of the isolated strains. From all the samples studied (27) only 7 samples had results complying with the legislation, 3 which suffered boiling process in the laboratory, 3 raw samples and 1 samples from the fish market. There were no significant differences between samples regarding the faecal coliforms count, however there was significant differences between samples collected in different seasons (dry and rainy). From all the nine water samples collected only one demonstrated to be proper for the production and harvest of mussels (lower than 14 CF/mL). There were 77 E. coli strains who were isolated and physiologically characterized and those results confirmed by PCR the sorotypo EPEC, STEC and EAEC; 4 strains of Salmonella spp. only one confirmed by PCR; and from the 57 strains identified as Vibrio spp., 51 were confirmed by PCR, where 46 were Vibrio spp., 2 V. cholerae, 1 V. vulnificus, 1 V. parahaemolyticus and 1 V. mimicus. From all the E. coli strains 13% were multi-resistant and 15.6% showed multiple resistance. All the Salmonella spp. strains demonstrated sensitivity to all tested antimicrobials. In the Vibrio spp. strains 68.6% were multi-resistant and 72.5% had multiple resistance Targeted genes were all possible to detect directly from the analysis of the enrichment broth with the exception for Salmonella and V. cholera genes. The present study provided results that demonstrate the poor microbiological quality of the mussels retailed in Itaipú borough which can represent a public health risk for all local and tourist population. These outcome brings to light how inspections in all food chain of the product are paramount for public health.

Submitted by MIRIAN MARCOLAN DE MELLO null (marcolanmirian@yahoo.com.br) on 2016-02-16T08:13:42Z No. of bitstreams: 1 TESE Doutorado Mirian14_02_2016REPOSITÓRIO.pdf: 1649527 bytes, checksum: c26e5ed45e88f8a3889873caa917015a (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-02-17T13:45:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 mello_mm_dr_sjc.pdf: 1649527 bytes, checksum: c26e5ed45e88f8a3889873caa917015a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-17T13:45:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 mello_mm_dr_sjc.pdf: 1649527 bytes, checksum: c26e5ed45e88f8a3889873caa917015a (MD5) Previous issue date: 2015-12-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Devido ao rápido aumento dos micro-organismos resistentes aos antibióticos e ao desenvolvimento limitado de novos agentes antimicrobianos, as infecções por bactérias Gram-negativas estão se tornando um desafio para os profissionais da saúde e uma ameaça para a saúde pública internacional. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito sinérgico dos antibióticos convencionais associados a terapia fotodinâmica antimicrobiana (PDT) no controle de Acinetobacter baumannii. Para realização desse trabalho, foram obtidos isolados clínicos de A. baumannii do Laboratório de Análises Clínicas Valeclin da cidade de São José dos Campos/SP, identificados pelo método de bioquimismo e submetidos ao teste de difusão em disco para verificar a sensibilidade antimicrobiana. Os isolados selecionados foram transferidos para o ICT/UNESP, onde foi realizado testes para determinação da Concentração Inibitória Mínima aos antibióticos Imipenem e Meropenem seguindo as normas da CLSI. Cepas sensíveis e resistentes aos antibióticos foram avaliadas quanto a sensibilidade in vitro à terapia fotodinâmica antimicrobiana. Além disso, foram testados os efeitos dos antibióticos convencionais, da PDT e da terapia combinada de antibióticos e PDT nas infecções experimentais induzidas em G. mellonella por isolados clínicos de A. baumannii resistentes aos antibióticos. Os resultados das terapias na infecção experimental foram avaliados por meio da curva de sobrevivência das lagartas de G. mellonella. Os dados dos testes in vitro foram submetidos à Análise de Variância e teste de Tukey. Os dados obtidos na curva de sobrevivência de G. mellonella foram analisados pelo método de Log-rank. Em todos os testes, foi considerado nível de significância de 5%. Nos resultados desse estudo, observou-se que o Laboratório Valeclin identificou 1,54% de amostras positivas para A. baumannii entre as 13.715 amostras clínicas analisadas em um período de 8 meses. Entre os isolados de A. baumannii, 58% demonstraram resistência aos antibióticos imipenem e meropenem por meio de teste de difusão em disco. A seguir 3 isolados clínicos sensíveis e 18 isolados resistentes a esses antibióticos foram selecionados para o presente estudo. O valor de CIM para os isolados sensíveis variou de ˂ 0,5 a 1µg/mL e para os isolados resistentes de 64 a >128µg/mL. A PDT in vitro reduziu o número de células de A. baumannii em todos os isolados testados, mas o percentual de redução foi dependente dos isolados analisados. Além disso, verificou-se nos testes in vivo, que o tratamento com PDT, antibióticos (Imipenem e Meropenem) e associação de PDT+Antibióticos resultaram na sobrevivência das lagartas de G. mellonella, porém sem efeito sinérgico. Conclui-se que a PDT teve ação antimicrobiana contra isolados clínicos de A. baumannii sensíveis e resistentes aos carbapenêmicos, mas não apresentou efeito sinérgico quando associada com antibióticos. / Due to the rapid growth of microorganisms resistant to antibiotics and the limited development of new antimicrobial agents, infections by Gram-negative bacteria are becoming a challenge for health professionals and a threat to international public health. The aim of this study was to evaluate the synergistic effect of conventional antibiotics associated with antimicrobial photodynamic therapy (PDT) in control of Acinetobacter baumannii. In order to conduct this project were obtained clinical isolates of A. baumannii at the Clinical Laboratory Valeclin situated in the city of São José dos Campos / SP, identified by bioquimismo method and submitted to disk diffusion test to verify the antimicrobial sensitivity. The selected isolates were transferred to the ICT / UNESP, which were conducted tests to determine the Minimum Inhibitory Concentration to Imipenem and Meropenem antibiotics following the rules of the CLSI. Sensitive and resistant strains to antibiotics were evaluated in vitro sensitivity to antimicrobial photodynamic therapy. Besides, the effects of conventional antibiotics, and combined PDT, and PDT of antibiotics in experimental infections induced in G. mellonella by clinical isolates of A. baumannii resistant to antibiotic therapy were tested. The results of therapies in experimental infection were evaluated by survival curve of worms G. mellonella. Data from in vitro tests were submitted to ANOVA and Tukey test. The data obtained in G. mellonella survival curve were analyzed by log-rank method. In all tests it was considered 5% significance level. The results of this study, it was observed that the Valeclin Laboratory identified 1.54% of positive samples for A. baumannii between the 13,715 clinical specimens analyzed in a period of 8 months. Among the isolates of A. baumannii, 58% were resistant to antibiotic imipenem and meropenem by disk diffusion test. Next, 3 isolates clinical sensitive and 18 isolates resistant to those antibiotics were selected for this study. The MIC value for sensitive isolates ranged from 0.5 to ˂ 1μg / mL and resistant isolates from 64 to> 128μg / mL. The PDT in vitro reduced the number of A. baumannii cells in all isolates tested, but the percentage of reduction was dependent on the analyzed isolates. Furthermore, it was found in in vivo tests, treatment with PDT, antibiotic (Imipenem and Meropenem) and PDT + Antibiotics association resulted in the survival of G. mellonella caterpillars, but no synergistic effect. It was concluded that PDT has antimicrobial activity against clinical isolates of A. baumannii sensitive and resistant to carbapenems, but it had no synergistic effect when combined with antibiotics.

O uso inadequado de antimicrobianos é fator determinante para disseminação da resistência bacteriana. Vários países têm usado como estratégias políticas de restrição para tornar o uso mais racional. Principalmente em hospitais, onde a utilização é mais prevalente. Embora o uso empírico seja a opção de tratamento em muitas condições clínicas, sabe-se que exames microbiológicos de cultura e teste de sensibilidade antimicrobiana (TSA), podem orientar uma prescrição mais racional. Para se avaliar a adequação de prescrições de antimicrobianos de uso restrito no Hospital São Vicente de Paulo de Passo Fundo, considerando resultados de exames microbiológicos e protocolos clínicos da instituição, foram analisadas 372 prescrições de pacientes internados. O tipo de infecção foi a única justificativa apresentada para o uso de antimicrobianos, sendo a maior freqüência para infecções do trato respiratório inferior (59,4%) seguido das do trato urinário (10,8%). O tratamento inicial empírico ocorreu em 89% dos casos. Dos pacientes com uso empírico (331/372), 66,7% apresentaram pneumonia. Nesta situação, devido à dificuldade de coleta de material, o tratamento é baseado nos prováveis agentes causadores e o uso empírico é aceitável. O exame de cultura foi solicitado em menos da metade das prescrições 48,7%(181/372), e o TSA foi realizado nos casos de cultura positiva (121/181). O resultado do TSA apontou que o tratamento inicial prescrito estava adequado em 76% dos casos (92/121). A necessidade de troca do esquema terapêutico inicial foi identificada em 12,7% (23/181) dos casos que realizaram cultura e TSA. A troca de esquema ocorreu em 65,2% (15/23) dos casos, nos demais o médico optou por não alterar devido à resposta clínica do paciente. Das prescrições avaliadas conforme protocolos, 71,9% (192/267) demonstraram indicação terapêutica de acordo com a recomendação. De acordo com os protocolos, observou-se uma freqüência maior de adequação das prescrições e das condutas laboratoriais quando comparada com outros estudos. Estes resultados podem estar associados às políticas de restrição de uso adotadas pela instituição. / The inadequated use of antimicrobials is the determinant fact to the dissemination of the resistance of the bacteria. Many countries have used as a strategy the politics of the restriction to become this use more rational, mainly in the hospitals, where the utilization is more prevalent. Although the empiricist use is the option of the treatment in many clinical conditions, we know that microbiological exams of culture and the test of antimicrobial sensibility (TSA) can conduct to a more rational prescription. To evaluate the adjustment of the prescriptions of antimicrobials in restrict use at São Vicente de Paulo Hospital, in Passo Fundo, and considering the results of the microbiological exams and clinical protocols of the institution, 372 interned patients prescriptions were analyzed. The type of the infection was the unique justify showed to the use of the antimicrobials, being the biggest frequency to the infections in the lower respiratory tract (59.4%), followed by the urinary tract (10.8%). The initial empiricist treatment occurred in 89% of the cases. Within the patients with the empiricist use (331/372), 66.7% showed pneumonia. In this situation, due to the difficulty of the material collecting, the treatment is based in the probable causer agents and the empiricist use is acceptable. The exam of the culture was required in the less of the half prescriptions (48.7%) (181/372) and TSA was executed in the cases of the positive culture (121/181). The results of TSA showed that the initial treatment prescribed was adjusted in 76% of the cases (92/121). The necessity of the changing of the initial therapeutic scheme was identified in 12.7% (23/181) of the cases where the culture and TSA were found. In the others, the doctor opted to not to modify it due to the clinical answer of the patient. According protocols, evaluated prescriptions 71.9% (192/267) showed therapeutic indication according the recommendation. According with the protocols, it was observed a major frequency of adaptation of the prescriptions and of the lab behaviors when it is compared with other studies. These results can be associated with the restriction policies of adopted using for the institution.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Solanaceae family is one of the largest and most complex, especially the Solanum genus, with about 1500 species. Solanum guaraniticum is a shrub found in Paraguay, Argentina and Brazil, popularly known as jurubeba or false jurubeba. This study aimed to quantify the main classes of secondary metabolites and determine the antimicrobial and antioxidant activities of the leaves of S. guaraniticum. The plant material was collected in the city of Guaporé, RS, Brazil, and is registered in the herbarium of the Biology Department at the Federal University of Santa Maria under number SMDB13158. The leaves of the plant were dried, triturated and macerated with ethanol (70%) for seven days. After this period, the material was filtered and the extract concentrated in rotary evaporator to obtain the aqueous extract. Part of this was taken to complete dryness yielding the crude extract (CE), another part was successively fractionated with chloroform (CHCl3), ethyl acetate (AcOEt) and butanol (BuOH), yielding the respective fractions. In the antioxidant and phytochemical analysis, the AcOEt fraction showed the highest amount of polyphenols (546.57 ± 2.35 mg of gallic acid equivalents/g) and the best antioxidant capacity by DPPH method (IC50 = 9.11 ± 0.75 μg/ mL). The CHCl3 fraction showed the highest contents of tannins (56.03 ± 0.68 mg of catechin equivalents/g), flavonoids (75.73 ± 0.34 mg rutin equivalents/g) and alkaloids (10.79 ± 0.06 mg/g), being more effective in scavenging reactive species, by inhibition of dichlorofluorescein oxidation (DCFH-DA), also showing the best activity of inhibition of lipid peroxidation by the TBARS method, as well as inhibition of protein oxidation, by the protein carbonyl method. HPLC analysis of CE and fractions revealed the presence of caffeic, chlorogenic and rosmarinic acids, very active phenolic acids that may be involved in the activities described. Regarding antimicrobial activity, assessed by broth microdilution, good activities were observed against Gram-positive bacteria, especially for CE (MIC of 32 μg/mL for M. luteus) and the AcOEt fraction (MIC of 64 μg/mL for S. intermedius and L. monocytogenes). The extracts were practically inactive against Gram-negative bacteria and inactive against fungi. It was also verified promising antimycobacterial activity, mainly to the CHCl3 fraction against M. smegmatis (MIC = 156 μg/mL). The results contributed to reveal some phytochemical characteristics of this species, and show that S. guaraniticum possesses considerable antimicrobial and antioxidant potential. / A família Solanaceae é uma das maiores e mais complexas, destacando-se o gênero Solanum, com cerca de 1500 espécies. Solanum guaraniticum é um arbusto encontrado no Paraguai, Argentina e Brasil, conhecido popularmente como jurubeba ou falsa jurubeba. Este estudo teve como objetivo quantificar as principais classes de metabólitos secundários e determinar as atividades antioxidantes e antimicrobianas das folhas de S. guaraniticum. O material vegetal foi coletado no município de Guaporé, RS, Brasil, e está registrado no herbário do Departamento de Biologia da Universidade Federal de Santa Maria sob o número SMDB 13158. As folhas da planta foram secas, trituradas, e maceradas com etanol (70%) por sete dias. Após este período, o material foi filtrado e o extrato concentrado em evaporador rotatório a fim de obter o extrato aquoso. Parte deste foi levado à secura total originando o extrato bruto (EB), outra parte foi fracionado sucessivamente com clorofórmio (CHCl3), acetato de etila (AcOEt) e butanol (BuOH), originando as respectivas frações. Na análise fitoquímica e antioxidante, a fração AcOEt apresentou a maior quantidade de polifenóis (546.57 ± 2,35 mg de equivalentes de ácido gálico/g) e a melhor capacidade antioxidante através do método do DPPH (IC50 = 9.11 ± 0,75 μg/mL). Já a fração CHCl3 apresentou os maiores teores de taninos (56,03 ± 0,68 mg de equivalentes de catequina/g), flavonoides (75,73 ± 0,34 mg de equivalentes de rutina/g) e alcaloides (10,79 ± 0,06 mg/g), sendo a fração mais eficaz na remoção de espécies reativas, por inibição da oxidação da diclorofluoresceína (DCFH-DA), apresentando também a melhor atividade de inibição da peroxidação lipídica, avaliada através do método do TBARS, bem como de inibição da oxidação de proteínas, pelo método da proteína carbonil. A análise do EB e frações por CLAE revelou a presença dos ácidos cafeico, clorogênico e rosmarínico, ácidos fenólicos bastante ativos e que podem estar envolvidos nas atividades descritas. No que diz respeito à atividade antimicrobiana, avaliada através de microdiluição em caldo, boas atividades foram verificadas frente a bactérias Gram-positivas, principalmente para o EB (CIM de 32 μg/mL para M. luteus) e para a fração AcOEt (CIM de 64 μg/mL para S. intermedius e L. monocytogenes). Os extratos foram praticamente inativos contra bactérias Gram-negativas e inativos contra fungos. Verificou-se também atividade antimicobacteriana promissora, principalmente para a fração CHCl3 contra M. smegmatis (CIM = 156 μg/mL). Os resultados ajudam a elucidar algumas características fitoquímicas da espécie e mostram que S. guaraniticum possui potenciais antioxidante e antimicrobiano consideráveis.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The phenotypic characteristics [morphology, biochemical fermentation, antimicrobial susceptibility, index of multiple resistances to antimicrobials (MAR), minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of benzilpenicilin] of 38 Streptococcus equi isolates were evaluated in this study. The phenotypic analyses demonstrated three colony patterns, three carbohydrate fermentation patterns and variation from 0 to 0.4 in the index of multiple resistances to antimicrobials. All the isolates of S. equi demonstrated sensitivity to penicillin, both by the disc diffusion method and microdilution method. The average MIC and MBC for benzilpenincillin were of 0,0095 μg/mL and 0.0267 μg/mL for S. equi subsp. equi and of 0.0128 μg/mL and 0.0380 μg/mL for S. equi subsp. zooepidemicus. The samples of S. equi differed in the values of MIC and MBC (p<0,05). The size of the penicillin inhibition halo demonstrated a relation with the MIC and MBC for S. equi subsp. equi, however for the samples of S. equi subsp. zooepidemicus this relation was only verified with the MBC. The MIC of benzilpenincillin of the samples isolated from the Central, Planalto and South regions of Rio Grande do Sul were statistically similar, although different from the Paraná state sample, suggesting the atypical character of this strain. All S. equi isolates are sensitive to penicillin and sulfazotrim, confirming these as antibiotics of choice for the treatment of infections caused by this agent in the clinical veterinary practice. Genotypic characteristics were also analyzed (hsp60 gene partial sequencing and analysis) in 20 isolates of Streptococcus equi from clinical samples of horses with strangles. The phylogenetic analysis showed a politomy among the isolates, suggesting that the hsp60 gene does not allow the differentiation between S. equi subspecies. New studies are suggested with expansion of territory sampled or even with the application of other markers, in order to clarify the evolutionary patterns not resolved and to confirm or not the real genetic differences between subspecies. / As características fenotípicas [morfológicas, bioquímicas, susceptibilidade aos antimicrobianos, índice de resistência múltipla aos antimicrobianos - IRMA, concentração inibitória mínima (CIM), concentração bactericida mínina (CBM) da benzilpenicilina] de 38 isolados de Streptococcus equi foram avaliadas neste estudo. A fenotipia demonstrou três padrões de colônias, três perfis de fermentação de carboidratos e variação de 0 a 0,4 no índice de resistência múltipla aos antimicrobianos. Todos os isolados de S. equi demonstraram sensibilidade à penicilina, tanto pelo método de disco difusão quanto pelo método de microdiluição. A CIM e CBM média de benzilpenicilina foi de 0,0095 μg/mL e 0,0267 μg/mL para S. equi subesp. equi e de 0,0128 μg/mL e 0,0380 μg/mL para S. equi subesp. zooepidemicus. As amostras de S. equi diferiram para valores de CIM e CBM (p<0,05). O diâmetro do halo de inibição de penicilina demonstrou relação com a CIM e a CBM para S. equi subesp. equi, entretanto para as amostras de S. equi subesp. zooepidemicus esta relação somente foi verificada para a CBM. A CIM de benzilpenicilina frente às amostras isoladas da região Central, Planalto e Sul do estado do Rio Grande do Sul foram estatisticamente semelhantes, mas diferiram do isolado do estado do Paraná, sugerindo o caráter atípico desta cepa. Todos os isolados de S. equi são sensíveis à penicilina e sulfazotrim, antimicrobianos de eleição para as afecções por este agente na clínica veterinária. Também foram analisadas as características genotípicas (sequenciamento parcial e análise do gene hsp60) de 20 isolados de Streptococcus equi oriundos de amostras clínicas de animais com adenite equina. A filogenia mostrou uma politomia entre os isolados, e indicou que este marcador (gene hsp60) não permite a diferenciação das subespécies de S. equi. Sugere-se a realização de novos estudos com a ampliação da região amostrada ou mesmo com a aplicação de outros marcadores, a fim de esclarecer os padrões evolutivos não-resolvidos e confirmar ou não a diferenciação genética real entre as subespécies.

Submitted by Cristhiane Guerra (cristhiane.guerra@gmail.com) on 2017-02-01T13:46:41Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2056832 bytes, checksum: dd1f04e5a02bdef6bb3220514f057563 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-01T13:46:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2056832 bytes, checksum: dd1f04e5a02bdef6bb3220514f057563 (MD5) Previous issue date: 2016-10-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The incidence of vulvovaginal fungal infections has increased dramatically over the last decades, therefore being the second most common cause of vulvovaginal candidiasis (VVC) placed after bacterial vaginosis diagnosed in 40% of the women with vaginal discharge. The increasing resistance of micro-oganismos pathogens to existing antimicrobial market has driven the search for new therapeutic alternatives, such as natural herbal products belonging to various families of the plant kingdom, such as Poaceae and Myrtaceae, which are presented as a viable solution due to the low cost and easy access of the population. Highlighted, the genus Cymbopogon and the Eucalyptus plants is one of the main sources of biologically active molecules, among them the monoterpenes holds a huge biological potential of human interest. However, the research of plant-derived compounds with pharmacological properties must always be attached to toxicity studies in order to show the absence of these substances harm to the human body. Given this context, it has studied the biological activity of enantiomers (R)-(+)- and (S)-(-)-citronellal against C. albicans and C. tropicalis strains derived from in vitro vulvovaginal secretions, as well as the parameters toxicological to predict the theoretical oral toxicity in silico. To achieve the antimicrobial in vitro studies; determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum fungicidal concentration (MFC) was used microdilution test. Also it was applied to disk diffusion technique on solid medium for comparative study of antifungal resistance/sensitivity profile used in the treatment of vulvovaginal candidiasis isolated and associated with monoterpenes studieds. The MIC's and MFC's of the (R)-(+)- and (S)-(-)-citronellal to 90% of fungal strains were respectively (R)MIC90% 16μg/mL and (R)MFC90% 32μg/mL; (S)MIC90% 64μg/mL and (S)MFC90% 128μg/mL (Strong antifungal activity against C. albicans and C. tropicalis). Were observed high resistance of C. albicans to fluconazole and itraconazole 12 (92.30%) strains. However, this resistance was reversed in 9 (75%) and 7 (58.33%) respectively, when combined with (R)-(+)-citronellal and 6 (50%) in combination with (S)-(-)-citronellal. Furthermore, it was also observed C. tropicalis high resistance to amphotericin B, itraconazole and miconazole. However, the resistance was reversed to amphotericin B and itraconazole, as a result of the synergistic effect in 2 (66.65%) of yeast. For miconazole resistance was reversed in 3 (100%) of the strains for both enantiomers. In the in silico analysis, both enantiomers have good oral bioavailability theoretically, however, a potential irritant was observed as possible toxic effect on these monoterpenes. In conclusion, these results suggest that the (R)-(+)- and (S)-(-)-citronellal have antimicrobial effect, and which also exert effect modifier activity when antifungal agents in combination. However, although presenting good oral bioavailability theoretically, the varied toxicological profile suggests the need to assess the risk-benefit of this compound in the production of a new antifungal drug, by conducting in vivo trials. / A incidência de infecções fúngicas vulvovaginais aumentou dramaticamente ao longo das últimas décadas, constituindo assim a segunda causa mais comum de candidíase vulvovaginal (CVV) após a vaginose bacteriana diagnosticada em 40% das mulheres com corrimento vaginal. O aumento da resistência dos micro-organismos patógenos aos antimicrobianos existentes no mercado tem impulsionado a busca de novas alternativas terapêuticas, como os produtos naturais a base de plantas pertencentes a várias famílias do reino vegetal, como por exemplo a Poaceae e a Myrtaceae, que se apresentam como uma solução viável devido ao baixo custo e fácil acesso da população. Em destaque, as plantas do gênero Cymbopogon e Eucalyptus constitui uma das principais fontes de moléculas biologicamente ativas, dentre elas os monoterpenos são detentores de um enorme potencial biológico de interesse humano. No entanto, as pesquisas de compostos derivados de plantas com propriedades farmacológicas devem sempre ser unida aos estudos toxicológicos, afim de se comprovar a ausência de malefícios destas substâncias ao organismo humano. Diante deste contexto, foi estudado a atividade biológica dos enantiômeros (R)-(+)- e (S)-(-)-citronelal contra cepas de C. albicans e C. tropicalis oriundas de secreções vulvovaginais in vitro, bem como os parâmetros toxicológicos para a previsão da toxicidade oral teórica in silico. Para a realização dos estudos antimicrobianos in vitro; determinação da concentração inibitória mínima (CIM) bem como da concentração fungicida mínima (CFM), utilizou-se o teste de microdiluição. Também foi aplicada a técnica de disco-difusão em meio sólido para estudo comparativo do perfil de resistência/sensibilidade a antifúngicos utilizados na terapêutica da candidíase vulvovaginal isolados e associados aos monoterpenos em estudo. As CIM’s e as CFM’s dos enantiômeros (R)-(+)- e (S)-(-)-citronelal para 90% das cepas fúngicas foram respectivamente (R)CIM90% 16μg/mL e (R)CFM90% 32 μg/mL; (S)CIM90% 64μg/mL e (S)CFM90% 128 μg/mL (forte atividade antifúngica contra C. albicans e C. tropicalis). Foram constatados alta resistência de C. albicans ao fluconazol e ao itraconazol 12 (92.30%) das cepas testadas. Mas, essa resistência foi revertida em 9 (75%) e 7 (58.33%) respectivamente, quando em associação com o (R)-(+)-citronelal e em 6 (50%) em combinação com o (S)-(-)-citronelal. Além disso, também foi observado alta resistência de C. tropicalis a anfotericina B, itraconazol e miconazol. Porém a resistência foi revertida para a anfotericina B e para o itraconazol, resultado do efeito sinérgico em 2 (66.65%) das leveduras. Para o miconazol a resistência foi revertida em 3 (100%) das cepas para ambos os enantiômeros. Na análise in silico, ambos os enantiômeros apresentaram boa biodisponibilidade oral teórica, no entanto, um potencial irritante foi observado como possível efeito tóxico para estes monoterpenos. Em conclusão, estes resultados sugerem que os enantiômeros (R)-(+)- e (S)-(-)-citronelal apresentam efeito antimicrobiano, e que também exercem efeito modificador de atividade aos agentes antifúngicos quando em combinação. No entanto, embora tenha apresentado boa biodisponibilidade oral teórica, o perfil toxicológico variado sugere a necessidade em avaliar o risco-benefício desse composto na produção de um novo medicamento antifúngico, por realização de ensaios in vivo.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCV07MA015.pdf: 339377 bytes, checksum: 37d2cbc43f84287e330748d93f9878a8 (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / To know the enteropathogenic bacteria present in the production system of swine can be an important tool to understand the sanitary challenges and to establish with success sanitary programs. The objective of this study was to diagnose effectivy enteropathogenic (s) bacterial (s) associate the pathogenese of the enteritis in newborn piglets, postweaning, growing and finish and to do the phenotypic characterization and of resistance the antimicrobials of the isolated of Escherichia coli. The main species of diagnosed bacterial enteropatógenos were Escherichia coli, Clostridium sp., Salmonella sp, Brachyspira hyodysenteriae, Brachyspira pilosicoli and Lawsonia intracellularis. The E. coli it was the bacteria more frequently isolated as primary agent or in an associated, of the diarrhea between second and 81st days of life of the pigs. Analyze the phenotypic of isolated of E. coli, considering the age group, its revealed that the serotypes of E. coli potentially pathogenic, prevalence more until the third week of age, were F5 (K99) 29%, F41 10%, F42 11% and F6 (987P) 23%, already in pigs with more than 21 days, stumps prevailed with fimbrials F4 (K88) 27%. Using the test of CIM, the largest resistance indexes were observed for oxytetracycline (84%), gentamicin (76%), and smaller resistance index for ceftiofur (37%) and enrofloxacin (39%). In the resistance test the antimicrobials, for disk - diffusion, the samples of Salmonella sp., they presented high sensibility to the gentamicin (3,5%) amoxicillin (4,8%) and larger resistance the oxytetracycline (77%), tetracycline (42,1%) / Conhecer as bactérias enteropatogênicas presentes no sistema de produção de suínos é uma importante ferramenta para compreender os desafios sanitários e estabelecer com sucesso programas sanitários voltados ao tratamento, controle e profilaxia. O objetivo deste estudo foi diagnosticar efetivamente o (s) enteropatógeno (s) bacteriano (s) associado (s) a patogênese da enterite nas fases de maternidade, creche, recria e terminação e fazer a caracterização fenotipica e de resistência a antimicrobianos dos isolados de Escherichia coli. Os principais gêneros / espécies de enteropatógenos bacterianos diagnosticados foram Escherichia coli, Clostridium sp., Salmonella sp, Brachyspira hyodysenteriae, Brachyspira pilosicoli e Lawsonia intracellularis. A E. coli foi o enteropatógeno mais frequentemente isolado como agente primário ou de forma associada, dos quadros clínicos de diarréia entre segundo e 81º dias de vida dos leitões. A análise fenotípica dos isolados de E. coli, considerando a faixa etária, revelou que os sorotipos de E. coli potencialmente patogênicos, mais prevalentes até a terceira semana de idade, foram F5/K99 29%, F41 10%, F42 11% e F6/987P 23%, já em leitões com mais de 21 dias, predominaram cepas com fimbrias F4/K88 27%. Utilizando o teste da concentração inibitória mínima (CIM), os maiores índices de resistência foram observados para oxitetraciclina (84%), gentamicina (76,0 %), e menor índice de resistência para ceftiofur (37%) e enrofloxacina (39 %). No teste de resistência a antimicrobianos, por disco difusão, as amostras de Salmonella sp., apresentaram alta sensibilidade à gentamicina (3,5%) amoxicilina (4,8%) e maior resistência a oxitetraciclina (77%), tetraciclina (42,1%)

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Por serem organismos filtradores, os mexilhões devem ser extraídos para consumo somente de águas com padrões microbiológicos regulamentados pelo Conselho Nacional do Meio Ambiente, uma vez que intoxicações alimentares de origem bacteriana são as consequências mais comuns relacionadas ao consumo destes moluscos. Após a retirada dos costões, estes organismos passam por processos de fervura, lavagem, acondicionamento em sacos plásticos e transporte até a chegada ao mercado onde são comercializados; etapas estas, realizadas sem cuidados assépticos. Objetivando avaliar a qualidade microbiológica de mexilhões Perna perna coletados na praia de Itaipu, Niterói, RJ; após a sua fervura; e comercializados no Mercado São Pedro, foram realizadas contagens de coliformes totais e termotolerantes e pesquisa de Escherichia coli, Salmonella spp. e Vibrio spp. por metodologia convencional e molecular em amostras obtidas destes locais. Pelo teste de disco-difusão foi observado o perfil de resistência das cepas isoladas. Do total de amostras analisadas (27) apenas 3 dos mexilhões que sofreram processo de aferventação, 1 do comercializado e 3 do in natura, se encontravam dentro dos padrões aceitáveis pela legislação. Não houve diferença significativa entre as contagens de coliformes termotolerantes dos diferentes mexilhões analisados, mas sim entre os períodos seco e chuvoso. Somente uma das nove coletas de água mostrou-se própria para o cultivo de mexilhões (até 14 CF/mL). Foram isoladas e caracterizadas fisiológicamente, 77 estirpes da espécie E. coli, sendo confirmadas molecularmente por PCR os sorotipos EPEC, STEC e EAEC; 4 cepas Salmonella spp. sendo apenas uma confirmada por PCR; e das 57 cepas caracterizadas como Vibrio spp., 51 foram confirmadas por PCR, sendo 46 Vibrio spp., 2 V. cholerae, 1 V. vulnificus, 1 V. parahaemolyticus e 1 V. mimicus. Entre as estirpes de E. coli, 13% apresentaram multirresistência e 15,6% apresentaram resistência múltipla. A estirpe de Salmonella spp. se mostrou sensível a todos os antimicrobiados testados. Das estirpes de Vibrio spp. testadas, 68,6% apresentaram multirresistência e 72,5% apresentaram resistência múltipla. A partir da pesquisa de genes direto do caldo de enriquecimento foi possível detectar todos os genes pesquisados, com exceção para os sorotipos de Salmonella e V. cholerae. Baseado nos resultados do presente trabalho pode-se inferir que os mexilhões, amplamente comercializados no município de Itaipú, podem se constituir em risco para a saúde pública dos consumidores no Rio de Janeiro, necessitando dos órgãos competentes uma eficiente fiscalização nos pontos de venda e cultivo destes moluscos. / Mussels (Perna perna) feed by filtering large quantities of water, enabling the retention of environmental bacteria and virus in their bodies. For this reason bacterial foodborne intoxications associated with these bivalves are common therefore mussels used for human consumption have to come from coastal areas where the microbiological quality of the water complies with current legislation laid down by the Conselho Nacional do Meio Ambiente. Following harvest these mussels go through a process of washing, boiling, packing and then transported to the fish markets for retail. During these processes and techniques normally no food hygiene plan is followed which may enable microorganisms growth and cross-contamination. The aim of this study was to determine the microbiological quality of Perna perna growing in Itaipu beach, Niterói, RJ from direct harvest (boiled and raw) and retailed at the São Pedro fish market. By using the MPN test it was possible to determine the total and faecal coliforms and by conventional and molecular techniques it was detected and identified the Escherichia coli, Salmonella spp. and Vibrio spp. present in the samples. The antimicrobial susceptibility test was also performed to determine the antimicrobial resistance profile of the isolated strains. From all the samples studied (27) only 7 samples had results complying with the legislation, 3 which suffered boiling process in the laboratory, 3 raw samples and 1 samples from the fish market. There were no significant differences between samples regarding the faecal coliforms count, however there was significant differences between samples collected in different seasons (dry and rainy). From all the nine water samples collected only one demonstrated to be proper for the production and harvest of mussels (lower than 14 CF/mL). There were 77 E. coli strains who were isolated and physiologically characterized and those results confirmed by PCR the sorotypo EPEC, STEC and EAEC; 4 strains of Salmonella spp. only one confirmed by PCR; and from the 57 strains identified as Vibrio spp., 51 were confirmed by PCR, where 46 were Vibrio spp., 2 V. cholerae, 1 V. vulnificus, 1 V. parahaemolyticus and 1 V. mimicus. From all the E. coli strains 13% were multi-resistant and 15.6% showed multiple resistance. All the Salmonella spp. strains demonstrated sensitivity to all tested antimicrobials. In the Vibrio spp. strains 68.6% were multi-resistant and 72.5% had multiple resistance Targeted genes were all possible to detect directly from the analysis of the enrichment broth with the exception for Salmonella and V. cholera genes. The present study provided results that demonstrate the poor microbiological quality of the mussels retailed in Itaipú borough which can represent a public health risk for all local and tourist population. These outcome brings to light how inspections in all food chain of the product are paramount for public health.