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Estudo sobre a produção e a ação dos peptídeos antimicrobianos em camundongos submetidos à tolerância ao LPS e à sepse por ligadura e punção cecal / Study on the production and action of antimicrobial peptides in mice submitted to LPS tolerance and to sepsis by CLPJoleen Lopes Machado 09 March 2018 (has links)
Os peptídeos antimicrobianos são importantes ferramentas do sistema imune inato para controle das infecções e recentemente tem sido investigado seu potencial como estratégia terapêutica nas infecções e sepse. Estes peptídeos apresentam diversas atividades decorrentes de mecanismos de ação antimicrobianas e imuno estimuladoras. A indução de tolerância com a administração de pequenas doses de LPS reduz a mortalidade em modelos animais de sepse, modulando diversos aspectos do sistema imune. Nossa hipótese neste estudo foi que o efeito protetor da tolerância ao LPS está relacionado com a modulação da produção dos peptídeos antimicrobianos na sepse. A tolerância ao LPS foi induzida em camundongos C57bl/6 por injeção de lipopolissacarídeo de E. coli na dose de 1mg/kg por cinco dias. No oitavo dia os animais foram eutanasiados por overdose anestésica ou submetidos ao modelo de ligadura e punção cecal. Após seis horas os animais foram eutanasiados por overdose anestésica e o sangue, baço, intestino e pulmões foram coletados para determinação das concentrações de citocinas e peptídeos antimicrobianos. Nossos resultados mostram que o efeito da tolerância ao LPS sobre a produção de peptídeos antimicrobianos é tecido específica. Sistemicamente (plasma) a tolerância aumenta a concentração plasmática de beta defensina-3 e CRAMP somente em animais submetidos à CLP. No baço ocorre redução de beta defensinas 1 e 7 pela CLP e também pela tolerância. No pulmão há elevação de beta defensinas 1 e 3 pela CLP e esta é revertida pela tolerância. No intestino ocorre redução de defensinas pela tolerância tanto em animais controle quanto em animais submetidos à CLP. Observamos em nosso estudo um padrão invertido entre as concentrações de peptídeos antimicrobianos e citocinas no intestino e baço dos animais, principalmente nos submetidos à CLP. Quanto maior a concentração da citocina no tecido, menor a concentração da defensina em questão. No intestino podemos observar que a tolerância e a CLP aumentam a concentração de IL-6 e IL-10 e diminuem as concentrações de beta defensinas 1 e 7. No baço observamos esse padrão entre beta defensina-7 e IL-6 e entre beta defensina-1 e TNF-alfa. Não foi possível encontrar esse tipo de correlação no pulmão. Concluímos que os efeitos protetores da tolerância ao LPS estão relacionados com uma menor produção de defensinas no baço, pulmão e intestino de animais submetidos à sepse, e com maior concentração de peptídeos antimicrobianos no plasma / Antimicrobial peptides are important tools of the innate immune system to control infections and its potential as a therapeutic strategy in infections and sepsis has recently been investigated. These peptides present both antimicrobial and immuno-stimulatory activities. Lipopolysaccharide (LPS) tolerance is a defense mechanism against invading microorganisms also widely distributed in nature. Induction of tolerance with the administration of small doses of LPS reduces mortality in animal models of sepsis, modulating several immune system aspects. Our hypothesis was that the protective effect of LPS tolerance is related to the modulation of antimicrobial peptide production in sepsis. LPS tolerance was induced in C57bl / 6 mice by injection of E. coli LPS at 1mg / kg for five days. On the eighth day the animals were submitted to the sepsis model of cecal ligation and puncture. After six hours the animals were euthanized by anesthetic overdose and blood, spleen, intestine and lungs were collected for the determination of cytokines and antimicrobial peptides concentrations. Our results show that the effect of LPS tolerance on the production of antimicrobial peptides is tissue specific. LPS tolerance increases the plasma concentration of beta-defensin-3 and CRAMP only in animals undergoing CLP. In the spleen, there is reduction of ? defensins 1 and 7 by CLP and also by tolerance. In the lung, there is elevation of beta defensins 1 and 3 by PLC and this is reversed by tolerance. In the intestine, there is reduction of defensins by tolerance in both control and CLP animals. In our study, we observed an inverted pattern between the concentrations of antimicrobial peptides and cytokines in the intestine and spleen of animals, especially those submitted to CLP. The higher the cytokine concentration in the tissue, the lower the concentration of defensin in question. In the gut we can observe that tolerance and CLP increases IL-6 and IL-10 concentration and decreases ? defensins 1 and 7 concentrations. In the spleen, we observed this pattern between ?-defensin-7 and IL-6 and between alpha-defensin-1 and TNF-alpha. It was not possible to find this type of correlation in the lung. We conclude that the protective effects of LPS tolerance are related to a lower production of defensins in the spleen, lung and intestine of animals submitted to sepsis, and with a higher concentration of antimicrobial peptides in plasma
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Desorganização da polpa branca esplênica está associada com a apresentação clínica mais grave da leishmaniose visceral em cães naturalmente infectadosLima, Isadora dos Santos January 2013 (has links)
Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-11-07T16:47:38Z
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Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / O baço é o maior órgão linfoide secundário em seres humanos e em cães. Em
ambos, a ausência do baço está associada com um risco aumentado de
ocorrência de infecções localizadas e disseminadas, incluindo sepse
generalizada. A leishmaniose visceral e outras infecções podem alterar a
estrutura histológica do baço, o que leva a uma destruição dos microambientes
da polpa branca. Trabalhos anteriores mostraram que a ruptura da estrutura de
polpa branca é mais frequente em cães com marcadores laboratoriais de
suscetibilidade à leishmaniose visceral, como a cultura esplênica positiva e LST
negativo, do que nos animais em que estes marcadores de susceptibilidade
estavam ausentes. Neste estudo, o nosso objetivo é examinar a relação entre a
desorganização histológica da polpa branca esplênica e a gravidade da
leishmaniose visceral. As amostras e os dados utilizados neste estudo foram
coletados de 206 cães de rua provenientes de uma área endêmica para
leishmaniose visceral, a cidade de Jequié (Bahia, Brasil). Os animais foram
examinados clinicamente e foram realizados os testes ELISA e LST. Aspirados
de baço foram coletados para a cultura, e fragmentos de baço foram coletadas
para estudos de biologia molecular e de estudos morfológicos. Os animais foram
classificados de acordo com o grau de organização estrutural da polpa branca
esplênica em grupos com baço (a), bem organizado, (b) ligeiramente
desorganizado, (c) a moderadamente a extensivamente desorganizado. Em
relação à positividade no ELISA juntamente com a desorganização do baço,
conjuntivite ( P= 0,0116), hiperproteinemia (p= 0,021) foram mais frequentes no
grupo de animais com ELISA positivo e baço desorganizado, quando
comparado com os outros grupos. Os animais polissintomáticos são mais
frequentes no grupo com ELISA positivo e baço do tipo 3 (p= 0,004). Os scores
clínicos atribuídos à intensidade da conjuntivite (P <0,05), dermatite (P <0,05) e
linfadenopatia (P <0,01), alopecia (P <0,01), onicogrifose (P <0,05) foram mais
elevados nos animais com ELISA positivo e baço desorganizado do que outros
grupos, bem como o número de sinais clínicos atribuíveis à leishmaniose
visceral canina (p= 0,0014).Em relação à análise da positividade na cultura
esplênica juntamente com a desorganização do baço, a frequência de cães
polissintomáticos foi maior em animais com baço ligeiramente desorganizado (P
<0,05) e baço desorganizado (P <0,005), do que em animais com baço
organizado. Alopecia (P <0,01), conjuntivite (P <0,05), desidratação (P <0,001),
dermatite (P <0,05), onicogrifose (p <0,01), anemia (P <0,05), úlcera (P <0,001 )
e alto escore clínico (P <0,001) foram mais frequentes em animais com cultura
esplênica positiva e baço desorganizado, do que nos animais com cultura
negativa e baço organizado. Em conclusão, os cães com desorganização do
baço associada com leishmaniose visceral têm mais sinais clínicos e pior estado
clínico do que os animais com leishmaniose visceral, mas sem desorganização
do baço. / The spleen is the largest secondary lymphoid organ in human beings and in
dogs. In both in human beings and in dogs, the absence of the spleen is
associated with increased risk of localized and disseminated infection including
overwhelm sepsis. Visceral leishmaniasis and other infections alter the
histological structure of the spleen, leading to a disruption of the white pulp
microenvironments. Previous works have shown that the disruption of the white
pulp structure is more frequent in dogs with laboratorial markers of susceptibility
to visceral leishmaniasis such as positive spleen culture and negative leishmanin
skin test than in animals in which these susceptibility markers were absent. In
this study, our goal is to examine the relationship between the histological
disorganization of splenic white pulp and severity of visceral leishmaniasis.The
samples and data used in this study were collected from 206 stray dogs from an
endemic area for visceral leishmaniasis, the city of Jequie (Bahia, Brazil). The
animals were examined clinically and ELISA and LST were performed. Splenic
aspirates were collected for culture, and fragments of spleen were collected for
molecular and morphological studies. The animals were ranked according to the
degree of structural organization of splenic white pulp of the spleen in groups (a),
well-organized, (b) slightly disordered, (c) moderately extensively disorganized.
In relation to the positive in the ELISA with the disorganization of the spleen,
conjunctivitis (P = 0.0116) hyperproteinemia (p = 0.021) were more frequent in
the group of animals with positive ELISA and disorganized spleen when
compared to the other groups. Polisymptomatic animals are more frequent in the
group with positive ELISA and spleen type 3 (p = 0.004). Clinical scores
attributed to the intensity of conjunctivitis (P <0.05), dermatitis (P <0.05) and
lymphadenopathy (P <0.01), alopecia (P <0.01), onychogryphosis (P <0.05 )
were higher in animals with positive ELISA and disorganized spleen than other
groups, as well as the number of clinical signs attributable to canine visceral
leishmaniasis (p = 0.0014). Regarding the analysis of positive spleen culture
together with splenic disorganization, the frequency of polisymptomatic dogs was
higher in animals with slightly disordered spleen (P <0.05) and disorganized
spleen (P <0.005) than in animals with organized spleen. Alopecia (P <0.01),
conjunctivitis (P <0.05), dehydration (P <0.001), dermatitis (P <0.05),
onychogryphosis (p <0.01), anemia (P <0.05 ), ulcers (P <0.001) and high
clinical score (P <0.001 were more frequent in animals with positive spleen
culture and disorganized spleen than in animals with negative culture and
organized spleen . In conclusion, dogs with disorganization of the spleen
associated with visceral leishmaniasis have more clinical signs and worse clinical
status than animals with visceral leishmaniasis, but without disruption of the
spleen.
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Leishmaniose visceral caninacorrelação da resposta imunológica com a carga parasitária e a variabilidade genética do parasitaCavalcanti, Amanda dos Santos January 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A Leishmaniose Visceral causada pela Leishmania infantum é uma doença zoonótica no Novo Mundo em que o cão é o principal hospedeiro doméstico. O conhecimento prévio dos mecanismos imunopatogênicos associados à infecção por L. infantum é necessário para o desenvolvimento de vacinas e outras estratégias de controle. O objetivo geral desta tese foi correlacionar a expressão clínica, a carga parasitária, a resposta imunológica do hospedeiro e a diversidade genética dos parasitos em cães naturalmente infectados por L. infantum. O presente estudo é uma avaliação transversal de noventa e dois cães naturalmente infectados por L. infantum provenientes do estado do Mato Grosso. A infecção dos animais incluídos no estudo foi confirmada por sorologia, cultura e /ou PCR. O diagnóstico etiológico foi realizado por PCR-RFLP para o gene hsp70 e por eletroforese de enzimas nos parasitos isolados. Foram ainda analisados os sinais clínicos, a resposta imune pela expressão gênica de citocinas, a carga parasitária por qPCR, as alterações histológicas no baço e fígado e a as populações e genótipos de L. infantum circulantes por meio da análise do polimorfismo de microssatélites. Foram definidos grupos de acordo com a carga parasitária esplênica e hepática. Os animais com alta carga parasitária apresentaram altos títulos de anticorpos específicos anti-Leishmania e mais sinais clínicos da doença
A carga parasitária no baço foi maior do que no fígado e houve correlação com o rompimento da arquitetura esplênica, caracterizado principalmente pela desorganização da polpa branca. No fígado, a carga parasitária foi correlacionada positivamente à ocorrência de granulomas, à degeneração dos hepatócitos bem como à intensidade do infiltrado inflamatório. Mostramos que a maior carga parasitária promoveu menor expressão gênica de IL-12, IFN\03B3, TNF, IL-6, TGF\03B2 e IL-10 no baço e maior expressão de CCL2, CXCL8 e MAP4K4 no fígado. A análise genética dos parasitos é indicativa de que há infecção policlonal e tropismo tissular de alguns clones, mais evidente na análise das amostras pareadas (tecidos e isolados do tecido). Foi observada baixa variabilidade genética em que a maioria (96%, 49/51) das amostras foi caracterizada como pertencente a POP2, dentre as populações circulantes no Brasil previamente descritas pelo nosso grupo. Não houve associação entre a variabilidade genética dos parasitos e os parâmetros clínicos, parasitológicos ou imunológicos. Apesar disso, os dados gerados pelos ensaios in vitro com as cepas de diferentes populações sugerem que há sim diferenças na infectividade entre cepas com genótipos de microssatélites distintos. Foi reunida uma série de dados que, em conjunto, mostram que na região estudada a Leishmanise Canina é causada por população geneticamente homogênea não tendo sido observada nenhuma correlação entre genótipos específicos e o fenótipo da infecção canina / Visceral leishmaniasis is a zoonotic disease in the New World and the domestic dog
is the main host of
Leishmania infantum
. Prior knowledge of the immunopathogenic
mechanisms associated with infection by
L. infantum
is required for the development
of
vaccines and other control strategies. The overall aim of this thesis was to
compare the clinical expression, parasite load, the host immune response and
genetic diversity of parasites in dogs naturally infected with
L. infantum
. This study is
a cross
-
sect
ional assessment
of
ninety
-
two dogs naturally infected by
L. infantum
.
Infection was confirmed by serology, parasite culture and / or PCR. The etiology was
assessed by
hsp70
PCR
-
RFLP
and MLEE
.
We
further analyzed
clinical signs
,
immune response by cytokine
gene expression, molecular parasite
load
by qPCR,
histological changes in sple
nic
and
hepatic compartments
and
also
L. infantum
populations and genotypes through microsatellite
analysis.
Groups according to the
spleen and liver parasite load were defined.
Animals with high parasite load had high
titers of anti
-
Leishmania antibodies and more clinical signs. The paras
ite
load in the
spleen was higher than in liver and correlated with disruption of splenic architecture,
mainly characterized by white pulp diso
rganization.
Liver parasite
load
was
correlated with the occurrence of granulomas, degeneration and intensity of the
inflammatory infiltrate.
We show that the higher parasite load promoted lower gene
expression o
f IL
-
12, IFNγ, TNF, IL
-
6, IL
-
10 and TGFβ in the spleen and increased
expression of CCL2, CXCL8 MAP4K4
in the
liver. Genetic analysis of parasites is
indicative
of
polyclonal infection and tissue tropism of some clones, more evident in
the analysis of paire
d samples (
strain
isolated and tissue).
We also found l
ow genetic
variability
,
in which the majority (96%, 49/51) of the samples was characterized as
belonging to POP2,
among tree populations
previously described by our group.
There was no association betw
een the genetic variability of the parasites and the
clinical, parasitological and immunological parameters. Nevertheless, the data
generated by
in vitro
assays with strains from different populations suggest that there
are
differences in infectivity betwe
en strains with distinct m
icrosatellite genotypes.
Taken together, these results show that in the region studied Canine
Leishmaniasis
is caused by genetically homogeneous population
without any
correlation between
specific genotypes
and the
phenotype
of
ca
nine infection
.
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Efeito da desnutrição proteica no timo e baço de camundongos BALB/c infectados com Leishmania infantumLosada Barragán, Monica January 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A desnutrição proteica é considerada um fator de risco primário para o desenvolvimento da leishmaniose visceral (LV), contudo, as bases imunológicas desta associação são majoritariamente desconhecidas. Este trabalho pretendeu determinar os efeitos da desnutrição proteica no timo e baço de camundongos BALB/c infectados com L. infantum. Os animais foram submetidos à dieta controle (CP, 14% em proteína) ou baixa em proteína (LP, 4% em proteína). Após sete dias de dieta, cada grupo foi dividido em dois e cada um foi infectado com L. infantum (CPi, e LPi). As dietas foram mantidas após a infecção e os animais foram eutanasiados 14 dias pós-infecção. Os animais LPi mostraram uma desnutrição moderada e uma diminuição significativa no peso do timo e baço, acompanhado de níveis séricos reduzidos de IGF1 e Leptina e de IGF1 hepático obedecendo aos padrões esperados em um quadro de desnutrição proteica. Além disso, animais LPi apresentaram uma carga parasitaria significativamente maior que animais CPi. A desnutrição e infecção induziram danos na arquitetura tímica, gerando alterações na distribuição de laminina e fibronectina, e redução na secreção de varias citocinas e quimiocinas no fluido intersticial tímico tais como: IL-12, CCL5, CXCL12, IGF1, CXCL9 e CXCL10, sugerindo que a entrada de progenitores ao timo e sua maturação intratímica e migração pode estar comprometida nestes animais
A análise proteômica deste fluido permitiu gerar um perfil de proteínas secretadas tímicas e revelou a importância de proteínas exossomais na fisiologia do timo, assim como a participação de vias metabólicas como a fosforilação oxidativa e \03B2-oxidação de ácidos graxos na proliferação e diferenciação dos timócitos LPi. O baço, por sua vez, apresentou desorganização tecidual e diminuição no número de folículos, assim como uma redução significativa de moléculas pró-inflamatórias e de moléculas envolvidas na quimiotaxia no fluido intersticial esplênico de animais LPi (IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-12, IGF1, CCL5, CXCL12, CXCL9 e CXCL10). Esta diminuição se correlaciona positivamente com a carga parasitaria esplênica incrementada, e pode ser uma causa da mesma. A análise proteômica do fluido intersticial esplênico revelou um aumento na abundância de proteínas relacionadas com estresse oxidativo sugerindo um desequilibro no estado oxidante/anti-oxidante em animais LPi. Observou-se também uma diminuição na abundância de proteínas envolvidas na via das pentoses fosfato e na síntese de purinas indicando potenciais defeitos na proliferação de esplenócitos. A identificação de proteínas envolvidas na resposta pró-inflamatória e quimiotaxia, cuja abundância estava diminuída, reforça os resultados moleculares relatados no grupo LPi. Em síntese, identificaram-se novos elementos na patogênese da LV, tanto no timo quanto no baço, que contribuem ao entendimento do aumento da susceptibilidade a desenvolver LV quando há uma condição desnutrição pré-existente / Protein malnutrition is considered a primary risk factor for the development of visceral leishmaniasis (VL); however, the immunological bases of this association are mainly unknown. This thesis aims to determine the effects of protein malnutrition in the thymus and spleen of BALB/c mice infected with L. infantum. The animals were fed with control (CP, 14% protein) or low-protein (LP, 4% protein) diet. After seven days of diet, each group was divided in two and one of them was infected with L. infantum (CPi, and LPi). The diets were maintained after infection and animals were euthanized after 14 post-infection. LPi animals showed a moderate malnutrition and a significant decrease in thymus and spleen weight. This was accompanied by a reduced serum levels of IGF1 and Leptin, and hepatic IGF1, showing the expected patterns of protein malnutrition. In addition, malnutrition induced a significant increase in the splenic parasite load of infected animals. Malnutrition and infection induced damage to the thymic architecture, causing changes in the distribution of laminin and fibronectin, and a reduction in the secretion of various cytokines and chemokines such as IL-12, CCL5, CXCL12, IGF1, CXCL9 and CXCL10 into the thymic interstitial fluid, suggesting that the entrance of progenitors into the thymus and intrathymic maturation and migration can be compromised in these animals. Quantitative proteomic analysis of this fluid allowed the identification thymic secreted proteins and revealed the importance of exosomal proteins in the thymus physiology. Proteomics also revealed that metabolic pathways such as oxidative phosphorylation and β-oxidation of fatty acids are potentially involved in the proliferation and differentiation of LPi thymocytes. Malnutrition also induced a drastic disorganization of splenic architecture including a severe reduction in the number of follicles, as well as a significant decrease of pro-inflammatory and chemotactic molecules in the splenic interstitial fluid of LPi animals (IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-12, IGF1, CCL5, CXCL12, CXCL10 and CXCL9), which is related to the increased splenic parasitic load. Proteomic analysis of splenic interstitial fluid revealed increased abundance of proteins related to oxidative stress suggesting an imbalance in the oxidant/anti-oxidant state in LPi animals. On other hand, proteins with decreased abundance were mainly involved in the pentose phosphate pathway and purine synthesis suggesting potential defects on splenocytes proliferation. Also, a decreased abundance of proteins associated with proinflammatory response and chemotaxis was observed in the splenic interstitial fluid, supporting the molecular data obtained in the LPi group. In summary, we identified new elements in the pathogenesis of VL both in the thymus as the spleen that contribute to the understanding of the increased susceptibility to develop VL when a malnutrition condition pre-exists. / 2100-03-04
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Subpopulações linfocitárias em ratos submetidos a esplenectomia total isolada ou combinada com auto-implante esplênico e a suplementação dietética com L-glutamina / Lymphocyte subsets in rats subjected to total splenectomy isolated or combined with spleen tissue implantation and dietary supplementation with L-glutamineCristina Fajardo Diestel 26 May 2010 (has links)
A esplenectomia total (ET) acarreta alterações na resposta imune que aumentam o risco de desenvolvimento de infecções graves. Objetivou-se determinar as subpopulações linfocitárias no sangue, nos baços e nos auto-implantes esplênicos (AIE), em ratos submetidos a ET isolada ou combinada com AIE (ET+AIE) e a suplementação dietética com L-glutamina (GLN). Utilizou-se ratos Sprague-Dawley submetidos a operação simulada, ET e ET + AIE, com AIE recuperados após seis e 12 semanas do início do experimento, e com e sem GLN. A suplementação ocorreu diariamente, nos 15 dias que antecederam a coleta sangüínea realizada imediatamente antes dos procedimentos operatórios (D0), após 12 semanas da operação simulada e ET, e após seis e 12 semanas de ET+AIE. As avaliações foram realizadas por meio de hemograma e citometria de fluxo (CF). A análise estatística utilizou testes paramétricos e não-paramétricos, sendo p<0,05 considerado para a rejeição da hipótese nula. ET acarretou diminuição da contagem relativa de linfócitos T totais e T- CD4 no sangue, mas GLN evitou a diminuição do percentual de células T- CD4; AIE, após 12 semanas de experimento, propiciou a manutenção da contagem relativa de linfócitos T totais e T- CD4 no sangue, e dentre esses animais, aqueles que receberam GLN, apresentaram contagens relativas de linfócitos T- CD4 maiores que animais esplenectomizados sem suplementação; AIE, após seis semanas de experimento, associado a GLN, ocasionou contagens absoluta e relativa de linfócitos T- CD4 no sangue significativamente maiores que em animais submetidos ao mesmo procedimento cirúrgico, com o mesmo tempo de avaliação, mas sem GLN; GLN manteve o número de células brancas / g de tecido nos AIE, em comparação ao encontrado nos baços de animais saudáveis; após período de regeneração de 12 semanas, AIE apresentaram contagem relativa de linfócitos B de zona marginal do baço semelhante à encontrada nos baços de animais saudáveis, o que não ocorreu com período de regeneração de seis semanas. O auto-implante esplênico em ratos, após esplenectomia total, associado à suplementação dietética com L-glutamina, foi capaz de reverter alterações observadas em algumas das subpopulações linfocitárias, ocasionadas pela esplenectomia. / Total splenectomy (TS) causes changes in the immune response that increase the risk of development of severe infection. The objective of the present study was to determine the lymphocyte subpopulations in blood, spleen, and splenic auto-implants (SAI) of rats subjected to TS alone or in association with SAI (TS + SAI) and to dietary supplementation with L-glutamine (GLN). Sprague-Dawley rats were subjected to sham surgery, to TS, and to TS + SAI, with SAI retrieved six and 12 weeks after the beginning of the experiment, with and without GLN. Supplementation was provided daily for 15 days preceding the blood collection performed immediately before the surgical procedures (D0), 12 weeks after sham surgery and TS, and six and 12 weeks after TS + SAI. Blood count and flow cytometry were used for the evaluations. Data were analyzed statistically by parametric and nonparametric tests, with the level of significance set at p<0.05. TS caused a reduction in the relative counts of total T and T-CD4 lymphocytes in blood, but GLN prevented the reduction in the percentage of T- CD4. After 12 weeks of the experiment, SAI favored the maintenance of the relative count of total T and T-CD4 lymphocytes in blood, and the animals receiving GLN presented higher relative T-CD4 counts than unsupplemented splenectomized animals. After six weeks of the experiment, SAI combined with GLN caused significantly higher absolute and relative T-CD4 lymphocyte counts compared to animals subjected to the same surgical procedure but receiving no GLN. GLN maintained the number of white cells/g tissue in SAI animals compared to those detected in the spleen of healthy animals. After a 12 week period of regeneration, SAI presented a relative B lymphocyte of the marginal zone of the spleen count similar to that detected in the spleen of healthy animals, a fact that did not occur after period of regeneration of six weeks. Splenic auto-implant in rats after total splenectomy, associated with dietary supplementation with L-glutamine, in some of the lymphocyte subpopulations, was able to reverse the changes induced by splenectomy.
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Papel do baço na resposta inflamatória cerebral em modelo experimental de epilepsia em ratos tratados com células mononucleares de medula ósseaSilva, Daniele Vieira da January 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015 / Epilepsy comprehends a category of syndromes characterized by spontaneous and recurrent crises (SRCs), which are a result of intense electric activity, synchronized and rhythmic of neuronal populations of the central nervous system (CNS), and of excessive excitability in the absence of a toxic-metabolic condition or fever 1 2, 3. Experimental studies have shown that SE induction in rodents provokes pronounced inflammatory cerebral reaction involving endothelial cells, glia, and neurons4, 5. Our group has shown that intravenous bone marrow cells administration following lithium-pilocarpine SE induction reduces SRCs, improves cognitive function, and modulates the production of pro-inflammatory cytokines6, 7. The spleen is important to induce cerebral inflammatory response and also is an important target for stem cell intervention therapies8. Splenectomy before a cerebrovascular accident (CVA) significantly reduces the infarction size in the brain9. Moreover, it has been demonstrated that in the pilocarpine model splenectomy decreases the severity of crises, the time to SE onset, and the mortality rate caused by SE10. The aim of the present work was investigating the importance of the interaction between bone marrow mononuclear cells (BMC) and the spleen in epileptic rats. As a result, the animals treated with BMC presented a better capability of memory retrieval in the Morris aquatic maze (MAM) when compared to the treated animals without the spleen. Besides, the treatment did not present the potential of reducing the levels of IL-1 β or of increasing the levels of IL-10 in the serum and hippocampus of treated rats without the spleen. In conclusion, the work suggests that the spleen could be involved in the therapeutic effect promoted by BMC transplant. / A epilepsia compreende uma categoria de síndromes que se caracterizam por crises espontâneas e recorrentes (CERs), que são resultados de disparos elétricos intensos, sincronizados e rítmicos de populações neuronais no sistema nervoso central (SNC) e de excitabilidade excessiva, na ausência de condição tóxico-metabólica ou febril. 1 2, 3 Pesquisas experimentais mostram que a indução do Status Epilépticos (SE) em roedores provoca reação inflamatória cerebral pronunciada envolvendo as células endoteliais, glia e neurônios. 4, 5 Nosso grupo mostrou que a administração de células da medula óssea por via intravenosa depois da indução do SE por lítio-pilocarpina é capaz de reduzir as CERs, melhorar a função cognitiva e modular a produção de citocinas pró-inflamatórias. 6, 7 O baço é importante na indução da resposta inflamatória cerebral e também é um alvo importante para a intervenção de células-tronco. 8 A esplenectomia antes do acidente vascular cerebral (AVC) reduz significativamente o tamanho do infarto no cérebro. 9 Foi também demonstrado que no modelo da pilocarpina, a esplenectomia diminuiu a gravidade das crises, o tempo para o início do SE, e a taxa de mortalidade causada pelo SE. 10 O objetivo do presente trabalho é investigar a importância da interação entre células mononucleares da medula óssea (CMMO) e o baço em ratos epilépticos. Como resultado do trabalho nossos animais tratados com as CMMO apresentaram melhor capacidade de reter a memória no teste do LAM quando comparados aos animais tratados sem o baço. Além disso, nesses animais o tratamento não teve o potencial de reduzir as taxas de IL-1 β no soro e nem de aumentar os níveis de IL-10 no soro e no hipocampo de ratos tratados e sem o baço. Concluindo, o trabalho sugere que o baço possa estar envolvido modulando a cascata inflamatória no efeito terapêutico promovido pelo transplante de CMMO.
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Elastografia acoustic radiation force impulse (ARFI), doppler e ultrassonografia contrastada do baço canino /Maronezi, Marjury Cristina. January 2016 (has links)
Orientador: Marcus Antônio Rossi Feliciano / Coorientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Coorientador: Júlio Carlos Canola / Banca: Leandro Zuccolotto Crivellenti / Banca: Eliandra Antônia Pires Buttler / Resumo: O baço é um órgão que desenvolve inúmeras funções importantes no organismo e é um dos principais locais para o desenvolvimento de tumores primários, metastáticos e afecções do sistema hematopoiético, por isso realizar uma avaliação apurada neste órgão é de suma importância, em Medicina veterinária, particularmente em cães devido à importância econômica, afetiva e de similaridade cientifica para o homem. Todavia, a maioria dos métodos utilizados para o diagnóstico conclusivo de enfermidades esplênicas são métodos invasivos, sendo que os nãos invasivos perdem em sensibilidade e especificidade, dificultando que se proceda a um correto diagnóstico. Sendo assim, este estudo prospectivo visou avaliar a aplicabilidade das novas técnicas ultrassonográficas para avaliação esplênica de caninos, utilizando a elastografia ARFI (qualitativa e quantitativa), Doppler e ultrassonografia por contraste com microbolhas, com o intuito de determinar valores ainda não descritos na veterinária, as quais forneçam subsídios suficientes para se obter um diagnóstico conclusivo sobre a condição esplênica, nesta espécie. Os resultados obtidos nos cães saudáveis, por meio da ultrassonografia modo B apresentaram-se normais, sendo que na elastografia qualitativa, as porções esplênicas avaliadas apresentaram-se não deformáveis, com parênquima homogêneo de cor cinza escuro (hard). Na elastografia quantitativa os valores médios da velocidade de cisalhamento foram de 2,32 m/s para a cabeça, 2,16 m/s para o corp... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The spleen is an organ develops much important functions in the body and the spleen is one of the main organs prone to the development of primary tumors, metastasis and a broad range of diseases of the hematopoietic system perform assessment of spleen is important. In veterinary medicine, principally in dogs because of economic importance, affective and scientific similarity to humans. However, the most of the methods used for conclusive diagnosis of splenic diseases are invasive methods, noninvasive lose in sensitivity and specificity difficulting proceed to a correct diagnosis. Thus, this study aimed to perform the ultrasound scan of dogs spleen using the elastographic (qualitative and quantitative) Doppler and contrast enhanced ultrasonography. Determining values not described in veterinary, which provide sufficient subsidies to get a conclusive diagnosis of the splenic condition in this species. The results in healthy dogs showed, all splenic segments visualized with the B-mode ultrasonography appeared normal. Different splenic segments examined with qualitative elastography were free of any detectable malformations and the images appeared as homogeneous dark areas. The mean shear velocity values were 2.32 m/s for head, 2.16 m/s for body and 2.25 m/s for tail of the spleen, and they did not vary between the different age groups (P>0.05). In dogs with ehrlichiosis in subclinical phase showed, by B-mode examination, observed splenomegaly with presence of rounded borders and... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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Subpopulações linfocitárias em ratos submetidos a esplenectomia total isolada ou combinada com auto-implante esplênico e a suplementação dietética com L-glutamina / Lymphocyte subsets in rats subjected to total splenectomy isolated or combined with spleen tissue implantation and dietary supplementation with L-glutamineCristina Fajardo Diestel 26 May 2010 (has links)
A esplenectomia total (ET) acarreta alterações na resposta imune que aumentam o risco de desenvolvimento de infecções graves. Objetivou-se determinar as subpopulações linfocitárias no sangue, nos baços e nos auto-implantes esplênicos (AIE), em ratos submetidos a ET isolada ou combinada com AIE (ET+AIE) e a suplementação dietética com L-glutamina (GLN). Utilizou-se ratos Sprague-Dawley submetidos a operação simulada, ET e ET + AIE, com AIE recuperados após seis e 12 semanas do início do experimento, e com e sem GLN. A suplementação ocorreu diariamente, nos 15 dias que antecederam a coleta sangüínea realizada imediatamente antes dos procedimentos operatórios (D0), após 12 semanas da operação simulada e ET, e após seis e 12 semanas de ET+AIE. As avaliações foram realizadas por meio de hemograma e citometria de fluxo (CF). A análise estatística utilizou testes paramétricos e não-paramétricos, sendo p<0,05 considerado para a rejeição da hipótese nula. ET acarretou diminuição da contagem relativa de linfócitos T totais e T- CD4 no sangue, mas GLN evitou a diminuição do percentual de células T- CD4; AIE, após 12 semanas de experimento, propiciou a manutenção da contagem relativa de linfócitos T totais e T- CD4 no sangue, e dentre esses animais, aqueles que receberam GLN, apresentaram contagens relativas de linfócitos T- CD4 maiores que animais esplenectomizados sem suplementação; AIE, após seis semanas de experimento, associado a GLN, ocasionou contagens absoluta e relativa de linfócitos T- CD4 no sangue significativamente maiores que em animais submetidos ao mesmo procedimento cirúrgico, com o mesmo tempo de avaliação, mas sem GLN; GLN manteve o número de células brancas / g de tecido nos AIE, em comparação ao encontrado nos baços de animais saudáveis; após período de regeneração de 12 semanas, AIE apresentaram contagem relativa de linfócitos B de zona marginal do baço semelhante à encontrada nos baços de animais saudáveis, o que não ocorreu com período de regeneração de seis semanas. O auto-implante esplênico em ratos, após esplenectomia total, associado à suplementação dietética com L-glutamina, foi capaz de reverter alterações observadas em algumas das subpopulações linfocitárias, ocasionadas pela esplenectomia. / Total splenectomy (TS) causes changes in the immune response that increase the risk of development of severe infection. The objective of the present study was to determine the lymphocyte subpopulations in blood, spleen, and splenic auto-implants (SAI) of rats subjected to TS alone or in association with SAI (TS + SAI) and to dietary supplementation with L-glutamine (GLN). Sprague-Dawley rats were subjected to sham surgery, to TS, and to TS + SAI, with SAI retrieved six and 12 weeks after the beginning of the experiment, with and without GLN. Supplementation was provided daily for 15 days preceding the blood collection performed immediately before the surgical procedures (D0), 12 weeks after sham surgery and TS, and six and 12 weeks after TS + SAI. Blood count and flow cytometry were used for the evaluations. Data were analyzed statistically by parametric and nonparametric tests, with the level of significance set at p<0.05. TS caused a reduction in the relative counts of total T and T-CD4 lymphocytes in blood, but GLN prevented the reduction in the percentage of T- CD4. After 12 weeks of the experiment, SAI favored the maintenance of the relative count of total T and T-CD4 lymphocytes in blood, and the animals receiving GLN presented higher relative T-CD4 counts than unsupplemented splenectomized animals. After six weeks of the experiment, SAI combined with GLN caused significantly higher absolute and relative T-CD4 lymphocyte counts compared to animals subjected to the same surgical procedure but receiving no GLN. GLN maintained the number of white cells/g tissue in SAI animals compared to those detected in the spleen of healthy animals. After a 12 week period of regeneration, SAI presented a relative B lymphocyte of the marginal zone of the spleen count similar to that detected in the spleen of healthy animals, a fact that did not occur after period of regeneration of six weeks. Splenic auto-implant in rats after total splenectomy, associated with dietary supplementation with L-glutamine, in some of the lymphocyte subpopulations, was able to reverse the changes induced by splenectomy.
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Efeito da Suplementação com L-arginina em subpopulações linfocitárias de ratos submetidos a esplenectomia total isolada ou combinada com autoimplante esplênico / L-arginine supplementation on lymphocyte subpopulation in rats submited to total splenectomy alone or combine with a splenic auto-implantNara Limeira Horst 18 March 2011 (has links)
A L-arginina é reconhecida como um nutriente de fundamental importância na resposta imune, apesar de seus efeitos serem, por vezes, considerados inconstantes. O autoimplante esplênico tem sido proposto como alternativa à
esplenectomia total isolada, mas existem preocupações quanto à eficácia do restabelecimento da resposta imune, haja vista que o paciente pode permanecer com risco aumentado de desenvolvimento de infecção fulminante pós
esplenectomia, mesmo após a regeneração morfológica do órgão. O objetivo deste estudo foi avaliar a participação da suplementação dietética com L-arginina em subpopulações linfocitárias no sangue, no baço e nos autoimplantes esplênicos de ratos submetidos a esplenectomia isolada ou combinada com autoimplante esplênico. Foram utilizados 42 ratos Sprague-Dawley machos, randomicamente
distribuídos em seis grupos: 1 Controle operação simulada; 2 esplenectomia total; 3 esplenectomia total combinada com autoimplante esplênico; 4 Controle
operação simulada, com suplementação de L-arginina; 5 esplenectomia total, com suplementação de L-arginina; e 6 esplenectomia total combinada com autoimplante esplênico, com suplementação de L-arginina. Os animais dos grupos 4,
5 e 6 receberam suplementação de L-arginina, uma vez ao dia, durante 15 dias anteriores a coleta sangüínea realizada imediatamente antes dos procedimentos operatórios (semanas 0 e 12). A dose utilizada foi de 1,0 g/kg/dia, administrada por via intragástrica em bolus. As avaliações foram realizadas por meio de hemograma e citometria de fluxo. A análise estatística utilizou testes paramétricos e nãoparamétricos, sendo p<0,05 considerado para a rejeição da hipótese nula. A suplementação com L-arginina acarretou elevação da contagem relativa e absoluta de neutrófilos periféricos, 12 semanas após a realização de esplenectomia total combinada com autoimplante esplênico. A esplenectomia total ocasionou diminuição da contagem relativa de linfócitos T totais, T CD4+ e T CD8β no sangue, mas a suplementação dietética com L-arginina evitou a diminuição do percentual de células T totais e T CD8β no sangue dos animais submetidos a autoimplante esplênico.
Tanto a realização de autoimplante esplênico como a suplementação de L-arginina previnem a diminuição da subpopulação de linfócitos T CD4+ no sangue periférico,
fato que usualmente ocorre após realização de esplenectomia total. Houve maior proliferação de células brancas / g de tecido nos autoimplante esplênico dos animais
suplementados, porém a suplementação não influenciou a contagem de linfócitos T, T CD4+ e B de zona marginal de baço. A suplementação do aminoácido L-arginina
após a realização de esplenectomia total combinada com autoimplante esplênico em ratos foi capaz de reverter alterações observadas em algumas das subpopulações
linfocitárias, ocasionadas pela esplenectomia. / L-arginine is recognized as a nutrient of fundamental importance in immune response, although its effects are sometimes considered unstable. The splenic autoimplants
has been proposed as an alternative to total splenectomy isolated, but there are concerns about the effectiveness of the restoration of the immune response, considering that the patient can remain at increased risk of developing overwhelming postsplenectomy infection, even after morphological regeneration of the organ. The aim of this study was to determine the role of dietary supplementation with L-arginine in lymphocyte subsets in blood, spleen, and splenic auto-transplantation in rats subjected to total splenectomy alone or in combination with splenic autotransplantation. Forty two male Sprague-Dawley rats, were randomly divided into six groups: 1 - Control sham operation, 2 total splenectomy 3 total splenectomy
combined with splenic auto-implants, 4 - Control - sham operation, with L-arginine supplementation, 5 total splenectomy, supplemented with L-arginine, and 6 total
splenectomy combined with splenic auto-implants, supplemented with L-arginine. Animals in groups 4, 5 and 6 were supplemented with L-arginine, once daily for 15
days before blood sample was collected immediately before the operative procedures (weeks 0 and 12). The dose was 1.0 g / kg / day administered by intragastric bolus. The laboratory evaluations were made by blood count and flow
cytometry. Statistical analysis used parametric tests and nonparametric, p<0.05 was considered to reject the null hypothesis. Supplementation with L-arginine led to
increase in relative and absolute count of peripheral neutrophils, 12 weeks after completion of total splenectomy combined with splenic auto-implants. Total splenectomy caused a decrease in relative count of T lymphocytes, CD4+ and CD8β in blood, but dietary supplementation with L-arginine prevented the decrease in the percentage of total T cells and CD8β in the blood of animals subjected to splenic
auto-transplantation. Both the completion of splenic auto-implants and the L-arginine supplementation may prevent the decrease of the subpopulation of CD4+ T cells in
peripheral blood, a fact that usually occurs after completion of total splenectomy. There was a greater proliferation of white blood cells / g of tissue in the splenic autoimplants
supplemented animals, but supplementation did not influence the T lymphocyte counts, CD4+ T and B splenic marginal zone. Supplementation of Larginine after performing total splenectomy combined with splenic
autotransplantation in rats was able to reverse some of the changes observed in lymphocyte subsets, caused by splenectomy.
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Aspectos morfológicos, morfométricos e ultra-estruturais do baço de ratos após o clampeamento total do pedículo hepático / Morphologic, morphometric and ultrastructural aspects of the spleen of rats after total clamping of the hepatic pedicleFREITAS, Silvio Henrique de 05 December 2007 (has links)
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Previous issue date: 2007-12-05 / One of the complications of hepatic pedicle total clamping is the splanchnic congestion and consequently a splenic congestion. The aim of this study was to evaluate the macro and microscopic alterations that occurred in the spleen during an ischemia produced by the hepatic pedicle total clamping. Fourthy male rats were divided in four groups of ten animals each. The control group (C) was not submitted to ischemia and the experimental groups (E1, E2 and E3) were submitted to the clamping during 10, 20 and 30 minutes, respectively. After these periods, spleen fragments were collected and histological analyzed by the eosin-hematoxilin and ferric ferrocyanide staining technique. Based on the results it is possible to conclude that 10 minutes of hepatic pedicle total clamping is sufficient to show signs of splenic congestion and 20 and 30 minutes promote intense red bood cels digestion by the macrophages with the presence of iron granules (hemosiderin) at the splenic parenchyma. / Uma das complicações do clampeamento total do pedículo hepático é a congestão esplâncnica e, consequentemente, a congestão esplênica. Este trabalho teve como objetivo avaliar as alterações morfológicas, morfométricas e ultra-estruturais que ocorreram no baço frente à isquemia produzida pelo clampeamento total do pedículo hepático. Para tanto foram utilizados 40 ratos machos, divididos em quatro grupos de 10 animais. O grupo controle (C) não foi submetido à isquemia, já os grupos experimentais (E1, E2 e E3) foram submetidos ao clampeamento por 10, 20 e 30 minutos, respectivamente. Após esses períodos, fragmentos do baço foram retirados e analisados histologicamente pela técnica de Hematoxilina-Eosina, Ferrocianeto-Férrico e microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram alterações microscópicas nos grupos E1, E2 e E3 que permitem concluir que 10 minutos de clampeamento do pedículo hepático são suficiente para apresentar sinais de congestão esplênica e 20 e 30 minutos promovem intensa digestão de hemácias pelos macrófagos, com presença de grânulos de ferro (hemossiderina) no parênquima esplênico.
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