Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-09-11T18:14:41Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ImplicacoesPerfilCitocinico.pdf: 1731669 bytes, checksum: cbbed9496f5a422fbf02202fca3a506d (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-09-15T14:37:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ImplicacoesPerfilCitocinico.pdf: 1731669 bytes, checksum: cbbed9496f5a422fbf02202fca3a506d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-15T14:37:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_ImplicacoesPerfilCitocinico.pdf: 1731669 bytes, checksum: cbbed9496f5a422fbf02202fca3a506d (MD5) Previous issue date: 2016-08-29 / INTRODUÇÃO: A hanseníase é uma doença crônica granulomatosa causada pelo Mycobacterium leprae. Entre os aspectos imunopatológicos da hanseníase sabe-se a defesa é efetuada pela resposta imunológica celular, capaz de fagocitar e destruir os bacilos, mediada por citocinas e mediadores da oxidação. O conceito de longa data de uma dicotomia Th1-Th2 na hanseníase, com Th1 predominante tuberculóide e Th2 predominante hanseníase virchowiana, recentemente foi contestada. Além disso, a resposta Th22 foi identificada como moduladora de Th1-Th2 em doenças de pele inflamatórias, mas os seus papéis na hanseníase ainda não foram elucidados. OBJETIVO: Avaliar a expressão tecidual de citocinas que participam da resposta Th22 nas formas polares da hanseníase. MÉTODO: Foram pesquisados pacientes com diagnóstico dermatoimunológico de hanseníase. Foram selecionados 31 pacientes, sendo 16 com a forma tuberculóide (TT) e 15 com a virchowviana (VV). A imunoistoquímica para a imunomarcação do tecido com os anticorpos Anti-IL-13, IL-22, TNF-α e FGF-b, foi baseada no método envolvendo a formação do complexo biotina-estreptavidina peroxidase. A quantificação da imunomarcação foi feita a partir da seleção aleatória de 05 campos visualizados no microscópio em aumento de 400x. Na análise univariada, foram obtidas frequências, medidas de tendência central e de dispersão e para a investigação das hipóteses foram aplicados os testes de Mann-Whitney e a correlação de Pearson, considerando um nível de significância de 5% (p ≤ 0,05). RESULTADOS: Referente à imunomarcação para a IL-22 pode-se observar diferença estatística dentre os grupos estudados sendo que no polo VV a média encontrada foi de 241,3 ± 44,63 cells/mm2 enquanto que na forma TT a média foi de 90,39 ± 30,18 cells/mm2 com p<0,0001. Envolvendo a presença da IL-13, no polo VV a média de ocorrência foi de 85,76 ± 19,99 cells/mm2. Já no polo TT a média encontrada foi de 57,20 ± 14,73 cells/mm2 p = 0,0002. Em relação à imunoexpressão do FGF b, na forma VV, a média de ocorrência foi de 228,9 ± 45,13 cells/mm2 enquanto que na forma TT a média foi de 47,80 ± 14,29 cells/mm2 p < 0,0001. Para o TNF-α, a análise quantitativa mostrou-se estatisticamente significante na forma TT onde a média das células expressando a citocina foi de 99,74 ± 30,14 cells/mm2 quando comparada a forma VV 62,08 ± 13,67 cells/mm2 p = 0,0008. CONCLUSÃO: A resposta Th22, mediada pela IL-22, tem fundamental importância na patogênese da hanseníase, se relacionando diretamente com a forma clínica da doença e com outras citocinas. / BACKGROUND: Leprosy is a chronic granulomatous disease caused by Mycobacterium leprae. Among the immunopathological aspects of leprosy is known that the defense is done by the cellular immune response, able to phagocyte and destroy the bacilli, mediated by cytokines and mediators from oxidation. The long-standing concept of a Th1-Th2 dichotomy in leprosy, with predominant Th1 in tuberculoid lesions and Th2 predominant in virchowian pacients, has recently been challenged. Furthermore, the Th22 response was identified as modulating Th1-Th2 in inflammatory skin diseases, but their roles in leprosy have not yet been elucidated. OBJECTIVE: Evaluate the tissue expression of cytokines involved in Th22 response in the polar forms of leprosy. METHOD: Patients with dermato-immunological diagnosis of leprosy were included and selected 31 patients, 16 with the tuberculoid (TT) form and 15 with lepromatous (LL). Immunohistochemistry for tissue immunostaining with antibodies against IL-13, IL-22, TNF-α and FGF-b was based on the method involving the formation of biotin-streptavidin peroxidase complex. Quantitation of the immunostaining was taken randomly from 05 fields viewed at 400x magnification microscope. In univariate analysis, frequencies, measures of central tendency and dispersion were obtained and for investigation of the hypothesis were applied the Mann-Whitney test and the Pearson correlation, considering a significance level of 5% (p ≤ 0.05). RESULTS: Regarding the immunostaining for IL-22 can be observed statistical difference among the groups and in the LL pole the average was 241.3 ± 44.63 cells/mm2, while in the TT form the mean was 90.39 ± 30.18 cells/mm2 (p <0.0001). Engaging the presence of IL-13, LL pole average occurrence was 85.76 ± 19.99 cells/mm2. In the TT pole the mean was 57.20 ± 14.73 cells/mm2 (p = 0.0002). Regarding the immunostaining for FGF-b, in the LL lesions, the mean incidence was 228.9 ± 45.13 cells/mm2, while in the TT form the mean was 47.80 ± 14.29 cells/mm2 (p <0,0001). For TNF-α, quantitative analysis was statistically significant in TT form where the average of the cells expressing the cytokine was 99.74 ± 30.14 cells/mm2 when compared to the LL form where the results were 62.08 ± 13.67 cells/ mm2 (p = 0.0008). CONCLUSION: The Th-22 response, mediated by IL-22, has fundamental importance in the pathogenesis of leprosy, relating directly to the clinical form of the disease and other cytokines.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-09-11T18:23:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PadraoRespostaImunologica.pdf: 1375375 bytes, checksum: 23ce5566cb35397ecbe03996334dc56f (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-09-25T18:50:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PadraoRespostaImunologica.pdf: 1375375 bytes, checksum: 23ce5566cb35397ecbe03996334dc56f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-25T18:50:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PadraoRespostaImunologica.pdf: 1375375 bytes, checksum: 23ce5566cb35397ecbe03996334dc56f (MD5) Previous issue date: 2014 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O vírus linfotrópico de células T humanas do tipo 1 (HTLV-1) está associado principalmente a leucemia/linfoma de células T do adulto (LLcTA) e a paraparesia espástica tropical/mielopatia associado ao HTLV-1 (PET/MAH). A PET/MAH é uma doença inflamatória do sistema nervoso central (SNC), porém o mecanismo pelo qual o HTLV-1 induz a PET/MAH ainda não está totalmente esclarecido. Acredita-se que a interação vírus-hospedeiro pode levar ao desequilíbrio na resposta imunológica, com produção aumentada de citocinas inflamatórias, podendo estar relacionada ao desenvolvimento da PET/MAH. Assim, este trabalho visa analisar a resposta imunológica periférica dos pacientes portadores do HTLV-1 e correlacioná-la com as manifestações neurológicas funcionais dos pacientes com PET/MAH. Foram incluídos 69 pacientes neste estudo, sendo 43 portadores do HTLV-1 sem PET/MAH e 26 portadores do HTLV-1 com PET/MAH. Nos pacientes com PET/MAH as manifestações neurológicas funcionais avaliadas foram: força muscular, tônus muscular, equilíbrio e grau de auxílio da marcha. Cinco (05) mL de sangue foram coletados em tubo com EDTA de cada paciente e as células linfomononucleares foram separadas utilizando Ficoll-Paque. O RNA total foi extraído de 106 células utilizando o reagente Trizol. Após quantificação do RNA, 1 μg do mRNA foi submetido a transcrição reversa para obtenção do cDNA. A expressão gênica relativa das citocinas IFN-, TNF-, IL-4, IL-10 e TGF- foram realizadas através da PCR em tempo real utilizando o StepOnePlus (Applied Biosystem) com o reagente SybrGreen (Applied Biosystem). Para o cálculo da expressão gênica foi realizada através da fórmula 2-CT, onde CT é CTgene – CTgene constitutivo, sendo os genes constitutivos utilizados o GAPDH e β-actina. Os pacientes com e sem PET/MAH apresentaram predomínio de expressão gênica do perfil Th1, principalmente de IFN-. Foi observado também que nos pacientes com PET/MAH houve expressão aumentada de TNF-. O perfil Th2 (IL-4) apresentou-se diminuído, principalmente nos pacientes com PET/MAH. Quanto à resposta antiinflamatória, a expressão de IL-10 se mostrou prejudicada nos pacientes com PET/MAH e a expressão de TGF- inicialmente se mostrou elevada em ambos os grupos. Após análises da razão entre TGF-IL-10 pode-se observar que a expressão de TGF- se manteve quase que equiparada a expressão de IL-10, sugerindo a sua participação não como citocina antiinflamatória, mas como possível ação de reparação tecidual. O perfil inflamatório associou-se positivamente com o grau de auxílio na marcha e o equilíbrio, apresentando resultados significantes somente para a expressão de IFN-. Os pacientes infectados pelo HTLV-1 que desenvolvem PET/MAH apresentam aumento da resposta Th1 em relação aos pacientes que não desenvolveram PET/MAH, e esse aumento de expressão de IFN- está relacionado com o desenvolvimento e progressão da doença. / Human T-cell lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) is associated with adult T-cell leukemia/lymphoma (ATL) and HTLV-1-associated myelopathy/tropical spastic paraparesis (HAM/TSP). HAM/TSP is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS); however, the mechanism by which HTLV-1 induces HAM/TSP is not yet clear. The virus–host interaction may provoke changes in the immunological response, such as the enhanced production of inflammatory cytokines, which are implicated in the pathogenesis of HAM/TSP. This work aimed to analyze the peripheral immune response of patients infected with HTLV-1 and correlate it with functional neurological manifestations in patients with HAM/TSP. In the current study, 69 HTLV-1 infected patients were studied. 26 of them developed HAM/TSP and 43 didn’t develop HAM/TSP. In patients with HAM/TSP was evaluated the functional neurological manifestations like muscle strength, muscle tone, balance and walking aid. Five mL peripheral blood was collected into a tube with EDTA and lymphomononuclear cells were separated on a Ficoll-PaqueTM Plus density gradient (GE Healthcare). Total RNA was extracted from 106 cells with Trizol reagent. After RNA quantification, 1 μg of total RNA was submitted to reverse transcription for the generation of cDNA using the Superscript III kit (Invitrogen). IFN-, TNF-, IL-4, IL-10 and TGF- gene expression was measured quantitatively with the StepOnePlus Real-Time PCR System (Applied Biosystem) using SYBR Green reagent (Applied Biosystem). The amount of mRNA in the sample was expressed as the relative amount to the GAPDH and β-actin genes, according to the formula 2-Ct, where Ct is Ctgene – Cthousekeeping gene. The gene expression showed higher expression of Th1 cytokine in patients with and without HAM/TSP, principally IFN-. In HAM/TSP patients also showed higher TNF- expression. The gene expression showed lower expression of Th2 cytokine in patients with HAM/TSP. As regards the anti-inflammatory response, gene expression of IL-10 showed impaired in patients with HAM/TSP and expression of TGF- initially showed higher in both groups. After ratio analysis between TGF-andIL it was observed that the expression of TGF-wasequivalent to the expression of IL-10, suggesting its involvement as a non-inflammatory cytokine, but as possible repair action tissue. The inflammatory profile was positively associated with the walking aid and balance, showing significant results only for the expression of IFN-. The patients infected with HTLV-1 who developed HAM/TSP showed increased Th1 response compared to patients who did not develop HAM/TSP, and this increased expression of IFN- is related to the development and progression of the disease.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-10-24T21:35:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_ImunopatogeniaInteracaoMacrofagos.pdf: 5397575 bytes, checksum: 2c99e1a73897916e41a071df86efe34a (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-10-30T11:47:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_ImunopatogeniaInteracaoMacrofagos.pdf: 5397575 bytes, checksum: 2c99e1a73897916e41a071df86efe34a (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-30T11:47:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_ImunopatogeniaInteracaoMacrofagos.pdf: 5397575 bytes, checksum: 2c99e1a73897916e41a071df86efe34a (MD5) Previous issue date: 2014 / A lobomicose é uma infecção subcutânea crônica, granulomatosa, causada pela implantação traumática do fungo Lacazia loboi nos tecidos cutâneo e subcutâneo. Ocorre predominantemente na região Amazônica e atinge qualquer grupo populacional. Histologicamente, observa-se reação inflamatória crônica caracterizada por intensa histiocitose e fibroplasia, abundante número de macrófagos, células gigantes multinucleadas do tipo corpo estranho e presença de considerável número de células leveduriformes. Os macrófagos são células fagocíticas que participam do reconhecimento e da resposta a patógenos através da fagocitose, da apresentação de antígenos aos linfócitos T e da produção de citocinas. As células de Langerhans (LC) são um grupo de Células dendríticas (CD) derivadas da medula óssea situadas principalmente em uma camada suprabasal da epiderme. Estudos envolvendo a interação fungo-hospedeiro na doença de Jorge Lobo são escassos. Assim, Este estudo é um passo importante para o melhor entendimento da biologia e patogenia do L. loboi, e para o estudo da imunopatologia da interação patógeno versus hospedeiro desta doença emergente e pouco conhecida. O objetivo do presente trabalho foi analisar a interação in vitro entre macrófagos peritoneais não ativados e/ou LC, isolados de camundongos BALB/c, com L. loboi recém-isolado de pacientes com doença de Jorge Lobo, bem como determinar os índices de infecção, fagocitose e fusão, e medir a produção das citocinas TNF-α, IL-4, IL-6, IL-10 e IL-12. Os resultados demonstraram que L. loboi é fagocitado por macrófagos, mas não por LC. O índice de infecção na interação entre macrófagos e L. loboi foi semelhante à interação entre macrófagos, LC e L. loboi em todos os tempos analisados. A média do número de fungos por macrófago também foi praticamente igual entre as interações e ao longo do tempo, variando de 1,2 a 1,6 fungos/macrófagos. Não houve a formação de células gigantes em macrófagos cultivados ou LC cultivadas isoladamente e em nenhum dos co-cultivos. Não houve diferença significante na produção de IL-4, IL-2 e IL-10 nas interações estudadas. Os níveis de TNF-α diminuem ao longo do tempo na interação entre macrófagos e L. loboi, enquanto a adição de LC induz aumento da produção de TNF-α, principalmente após 48 horas. LC modulam negativamente a produção de IL-6 por macrófagos e L. loboi também inibem essa produção por macrófagos isoladamente ou em co-cultivo com LC. L. loboi estimulam significativamente a produção de IL-12 por macrófagos co-cultivados com LC, mas não em LC ou macrófagos isoladamente. / Lobomycosis is a chronic, granulomatous, fungal infection of the skin and subcutaneous caused by the fungus Lacazia loboi. This mycosis occurs predominantly in Amazon region and affect all populations groups. Histologically, there is a chronic inflammatory reaction characterized by the intense fibroplastia and histiocytosis, abundant number of macrophages, multinucleated giant cells and presence of large numbers of yeast. Macrophages are phagocytic cells that participate in the recognition and response to pathogens through phagocytosis, antigen presentation to T lymphocytes and cytokine production. Langerhans cells (LC) are a group of dendritic cells (DC) derived from bone marrow, which are located mainly in the suprabasal layer of the epidermis. Studies on hostfungal interaction in Jorge Lobo's disease are scarce. Therefore, this study constitutes an important step towards a better understanding of L. loboi biology and pathogenesis, enabling in vitro culture of this organism endemic in Amazon region and study of their antigenic properties, as well as new therapeutic approaches. The objective of this study was to analyze the in vitro interaction between non-activated peritoneal macrophages and/or Langerhans cells isolated from BALB/c mice and L. loboi, calculating infection, phagocytosis and cellular fusion rates; also measuring the production of TNF, IL-4, IL-6, IL-10 and IL-12. Results showed that L. loboi is phagocytosed by macrophages but not by LC. Phagocytosis and infection rates in the interaction between macrophages and L. loboi was similar to interaction between macrophages, Langerhans cells and L. loboi at all times analyzed. The mean number of yeast cell per macrophage was almost equal among interactions and over time, with mean variation from 1.2 to 1.6 yeast/macrophages. No giant cells formation in coculture studied. No significant difference occurred in IL-4, Il-2 and IL-10 production between interactions studied. TNF levels decrease in interaction between macrophages and L. loboi while adding LC induces increased production of TNF-α, especially after 48 hours. LC negatively modulate IL-6 production by macrophage and L. loboi also inhibits this production by macrophages alone or cocultured with LC. L. loboi stimulated significantly IL-12 production by macrophages co-cultured with LC, but not for LC alone or macrophages.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2015-01-21T20:50:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_EstudoMorfologicoImunologico.pdf: 6412438 bytes, checksum: 5197a96b4bdc735c52be042964a21efb (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2015-01-22T13:57:56Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_EstudoMorfologicoImunologico.pdf: 6412438 bytes, checksum: 5197a96b4bdc735c52be042964a21efb (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-22T13:57:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_EstudoMorfologicoImunologico.pdf: 6412438 bytes, checksum: 5197a96b4bdc735c52be042964a21efb (MD5) Previous issue date: 2013 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Muitos estudos têm sido realizados para o entendimento da neuropatogênese das encefalites virais a partir de trabalhos experimentais, porém, nenhum estudo experimental foi dedicado à compreensão da neuropatogênese de membros da família Picornaviridae isolados de morcegos na região amazônica. O vírus Juruaçá, um desses agentes, parcialmente caracterizado como membro da família Picornaviridae por Araújo e colaboradores (2006), causou lesões no encéfalo de camundongos neonatos com presença de gliose reativa, apesar de não provocar efeito citopático (ECP) em cultivos primários de células do sistema nervoso central (SNC), sugerindo que este agente viral seja responsável pela morte dos animais devido a uma intensa resposta imune. O objetivo desse trabalho foi investigar a resposta imune no SNC e alterações celulares causadas pelo vírus Juruaçá em camundongos albinos da linhagem BALB/c neonatos a partir de análises histopatológicas, de ativação microglial e da expressão de citocinas, óxido nítrico (NO) e espécies reativas de oxigênio (ROS). Para tanto, foram realizados processamento de amostras para histopatologia, ensaios imunoenzimáticos, imunohistoquímicos e de imunofluorescência, além de testes para quantificação de NO e ROS e análises estatísticas. Nossos resultados demonstraram que o vírus Juruaçá induz lesões por todo o encéfalo, com maior intensidade no parênquima cortical. Os testes imunohistoquímicos demonstraram a presença de antígenos virais e de micróglias reativas distribuídos por todo o encéfalo e região anterior da medula espinhal. Micróglias com aspecto ameboide, demonstrando intensa ativação, foram observadas principalmente no córtex cerebral, bulbo olfatório, núcleo olfatório anterior, prosencéfalo e diencéfalo próximo ao ventrículo lateral. A produção das citocinas anti-inflamatórias (IL-10, IL-4) diminuiu ao longo do tempo, enquanto que as pró-inflamatórias (IL-12, IL-6, IL-1β, TNF-α, IFN-γ) aumentaram significativamente a partir do 8º dia. Os ensaios para detecção de ROS demonstraram grande produção de radicais superóxido desde o 4º dia, já a produção de NO foi sempre menor nos animais infectados. Provavelmente, a ativação das células gliais, principalmente micróglias, e consequente produção de citocinas pró-inflamatórias e ROS promoveram uma ação devastadora sobre as células do SNC, que coincide com a intensificação dos sinais clínicos. Diante do exposto, ficou evidente que os nossos resultados indicam que o vírus Juruaçá é responsável por uma doença de cunho inflamatório que leva a óbito 100% de camundongos neonatos infectados. / Many studies have been conducted to understand the neuropathogenesis of viral encephalitis from experimental work, however, no experimental studies have been devoted to understanding the neuropathogenesis of members of the Picornaviridae family isolated from bats in the Amazon region. The Juruaçá virus, one of these agents, partially characterized as a member of the Picornaviridae family by Araujo et al. (2006), caused lesions in the brain of neonatal mice with reactive gliosis presence, although not cause cytopathic effect (CPE) in primary cultures of central nervous system (CNS) cells, suggesting that this viral agent is responsible for the death of animals due to an intense immune response. The aim of this study was to investigate the immune response in the CNS and cellular changes caused by Juruaçá virus in newborn albino mice of strain BALB/c from histopathological analysis, microglial activation, and expression of cytokines, nitric oxide (NO) and reactive oxygen species (ROS). Thus, we performed sample processing for histopathology, immunosorbent assay, immunohistochemical and immunofluorescence assays, tests to quantify NO and superoxide radicals, and statistical analysis. Our results demonstrated that the Juruaçá virus induces lesions throughout the brain, with greater intensity in the cortical parenchyma. Immunohistochemical tests showed the presence of viral antigens and reactive microglias distributed throughout the brain and anterior spinal cord. Microglias with amoeboid shape, demonstrating intense activation, were observed in the cerebral cortex, olfactory bulb, anterior olfactory nucleus, midbrain and forebrain near the lateral ventricle. The production of anti-inflammatory cytokines (IL-10 and IL-4) decreased over time, whereas pro-inflammatory cytokines (IL -12, IL- 6, IL- 1β, TNF-α and IFN-γ) increased significantly from the 8th day. Assays for ROS detection showed great superoxide radicals production from the 4th day, as NO production was always lower in the infected animals. Probably, activation of glial cells, especially microglias, and subsequent production of proinflammatory cytokines and ROS promoted a devastating action on the cells of the CNS, which coincides with the intensification of clinical signs. In accordance with what has been explained above, became evident that our results indicate that the Juruaçá virus is responsible for a imprint inflammatory disease that leads to death 100% of infected neonates mice.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-26T14:06:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ReplicacaoViralPadrao.pdf: 2703656 bytes, checksum: ccbaf5da11f1dbae865d35717cc46fc9 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-01-27T13:37:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ReplicacaoViralPadrao.pdf: 2703656 bytes, checksum: ccbaf5da11f1dbae865d35717cc46fc9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-27T13:37:12Z (GMT). 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Deste modo, o objetivo deste trabalho foi analisar o padrão de expressão gênica de citocinas em cultura primária de células neurais submetidas à infecção pelo vírus Rocio. Culturas primárias mistas (neurônio/glia), obtidas a partir de cérebros de camundongos isogênicos neonatos da linhagem BALB/c, foram inoculadas com o VROC (MOI igual a 2) no sétimo dia de cultivo, a confirmação da infecção foi feita por imunocitoquímica (anti-VROC). Quantificou-se a replicação viral nas culturas primárias infectadas, em função do período infeccioso, pelo método da titulação viral. O RNA celular total foi extraído e utilizado para a detecção de citocinas através da técnica de RT-qPCR em tempo real. O estudo demonstrou que cultura primária de células neurais constitui um bom modelo experimental para estudo de infecções do SNC pelo flavivírus Rocio. O VROC infectou eficientemente a cultura primária de células neurais gerando alterações citopatogênicas a partir do 2º dia p.i., momento em que se detectou maior título viral. A cultura primária infectada com o VROC sobreviveu até 7 dias p.i. e a quantificação da carga viral revelou uma cinética de replicação viral compatível com a cinética de morte celular da cultura infectada pelo VROC. Durante os cinco primeiros dias p.i. da cultura primária, houve redução da expressão gênica de INF-α, INF-β, INF-γ e IL-1β, não houve alteração na expressão de TNF-α e houve aumento na expressão de TGF-β no 1º, 3º e 5º dia p.i. Os achados deste estudo sugerem que o VROC tem a capacidade de regular negativamente a expressão de citocinas moduladoras das respostas imunes antivirais e inflamatórias e que, neste modelo experimental, a imunorregulação exercida pelo TGF-β predomina sobre a modulação das respostas imunes antivirais e inflamatórias, sendo necessários maiores estudos para elucidar a imunopatologia da infecção do SNC pelo VROC. / Arboviruses belonging to the genus Flavivirus (Flaviviridae family) are responsible for considerable morbidity and mortality, may cause severe cases of encephalitis, hemorrhagic fever, hepatitis and febrile disease in vertebrates, including humans. Rocio flavivirus (ROCV) is very important for public health in Brazil, as it represents a serious threat of occurrence of sudden encephalitis outbreaks. The immunopathology of encephalitis caused by flavivirus is not yet fully understood and many aspects involved in modulation of immune responses in the CNS need to be unraveled. Thus, the aim of this study was to analyze the pattern of gene expression of cytokines in primary culture of neural cells when exposed to infection with Rocio. Mixed primary cultures (neuron/glia), obtained from the brains of BALB/C lineage isogenic newborns mice were inoculated with ROCV (MOI equal to 2) on the seventh day of culture and confirmation of infection was made by immunocytochemistry (anti-VROC). Viral replication was quantified in infected primary cultures, depending on the infectious period, by viral titer method. Total cellular RNA was extracted and used for detection of cytokines by real time RT-qPCR techniques. The study showed that primary cultures of neural cells is a good experimental model for the study of CNS infections by Rocio flavivirus. ROCV efficiently infected the primary cultured neural cells leading to cytopathic changes from the 2nd day a.i., when it detected the higher viral titer. The ROCV-infected primary culture survived up to 7 days a.i. and quantification of viral load showed a viral replication kinetics compatible with cell death kinetics of culture infected by ROCV. During the first five days a.i. of the primary culture, there was reduction of IFN-α gene expression, IFN-β, IFN-γ and IL-1β, there was no change in TNF-α expression and there was an increase in TGF-β expression in the 1st, 3rd and 5th day a.i.. The findings of this study suggest that ROCV has the ability to downregulate modulators cytokines of antiviral and inflammatory immune responses and, in this experimental model, immunoregulation exerted by TGF-β predominates over the modulation of inflammatory and antiviral immune responses, larger studies are needed to elucidate immunopathology of CNS infection by ROCV.

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseImunologicaGenotoxica.pdf: 1336666 bytes, checksum: 4e5571e62941a2f1f595da14f8696549 (MD5) Previous issue date: 2016-08-11 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O desenvolvimento deste trabalho, deu-se devido a necessidade de se compreender melhor o sistema imune, levando-se em consideração a diversidade dos modelos experimentais de imunossupressão, bem como a variedade de respostas imunológicas e genotóxicas, diferenças estas, relacionadas às espécies, ao medicamento e doses utilizadas. Desta maneira, objetivo do presente estudo foi analisar os efeitos no sistema imunológico e os efeitos genotóxicos em Rattus norvegicus da linhagem Wistar, após a inoculação do agente alquilante Ciclofosfamida (CY). A administração de 50 mg/kg de CY nos roedores, possibilitou observar uma significativa diminuição dos parâmetros de celularidade e peso relativo dos órgãos linfóides. A imunidade humoral dos roedores sofreu supressão, visto que foi realizada a análise da titulação de anticorpos, o ensaio sobre as células formadoras de placa e o teste de hemólise. Foram realizadas quatro inoculações desse imunossupressor e a periodicidade entre as inoculações foi determinada pela recuperação dos níveis de normalidade dos parâmetros supracitados. Nas duas vezes que foi administrada a droga, houve redução no número de linfócitos e posteriormente diminuição de neutrófilos, porém somente no segundo contato com a CY foi observada a imunossupressão. A análise da genotoxicidade da ciclofosfamida (CY) foi analisada através do ensaio cometa e foi de suma importância, pois dectamos danos genômicos ocorridos no DNA , expostos às diferentes doses da ciclofosfamida (CY), que foram de 50 mg/kg nas duas primeiras fases e de 25 mg/kg nas duas últimas fases do experimento. Além disso, foi verificado que os efeitos genotóxicos são cumulativos a cada dose de CY aplicada, pois mesmo sendo administrado na terceira fase, a metade da concentração (25 mg/kg) das duas inoculações inicias CY, o índice de danos não correspondeu a metade dos índices de danos da primeira e da segunda administração. Entretanto, ao analisarmos imunologicamente e genotoxicamente os roedores, nosso trabalho possibilitará testar novos esquemas terapêuticos de imunossupressão. / The development of this work has given up due to the need to better understand the immune system, taking into account the diversity of experimental immunosuppression models as well as the variety of immunological responses and genotoxic differences these, related species, the drug and doses used. Thus, aim of this study was to analyze the effects on the immune system and genotoxic effects in Rattus norvegicus Wistar, after inoculation of the alkylating agent cyclophosphamide (CY). The administration of 50 mg / kg in rodents CY, possible to observe a significant decrease in the parameters of cellularity and relative weight of lymphoid organs. The humoral immunity of rodents has undergone deletion, since the analysis of the antibody titration was performed on the test plate forming cells and hemolysis testing. four inoculations that immunosuppressant and the intervals between the inoculations was determined by recovery of normal levels of the above parameters were performed. Both times the drug was administered, there was a reduction in the number of lymphocytes and neutrophils subsequently decreased, but only the second contact CY was observed immunosuppression. The analysis of the genotoxicity of cyclophosphamide (CY) was analyzed using the comet assay and was of paramount importance because dectamos genomic damage occurring in DNA exposed to different doses of cyclophosphamide (CY), which were 50 mg / kg in the first two phases and 25 mg / kg during the last two phases of the experiment. Furthermore, it was found that the genotoxic effects are cumulative with each CY dose applied, because even being administered in the third phase, the middle concentration (25 mg / kg) of the two inoculations initial CY the damage index does not correspond to half damage indices of the first and second vaccination. However, the analysis and immunologically genotoxicamente rodents, our work will enable testing new therapeutic immunosuppression regimens.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4594.pdf: 3287424 bytes, checksum: 45ec60b0a38c4b296ddba2d66d8cd69c (MD5) Previous issue date: 2011-10-27 / Universidade Federal de Minas Gerais / Schistosomiasis mansoni is a major problem affecting public health, according to World Health Organization (WHO), 210 million individuals worldwide. In the infected host, the disease is characterized by the presence of granuloma, immunopathological outcome of the cellular infiltrate and in many cases a consequence of tissue fibrosis. Thus, the host-parasite relationship may lead to morbidity from the disease result in hepatosplenomegaly, hepatic fibrosis and ascites. The granulomatous process in schistosomiasis is dependent on CD4 + and requires recruitment and accumulation of inflammatory cells at the site of deposition of eggs. Schistosomal fibrosis is the result of granulomatous reaction that develops in response to antigens released by eggs of Schistosoma mansoni retained in the portal veins of smaller caliber. A host of disease caused by S. mansoni is mediated by the immune response by T cells through the dissemination of eggs that are housed in the liver and intestine. Manipulation of the interaction between B7 molecules of antigen presenting cells (APC) and T cell receptors CD28/CTLA4 modulate, and in some circumstances block the immunological response in vivo. The CTLA4 is structurally homologous to CD28 but is expressed in CD4 + and CD8 + newly activated, and its function is to inhibit T cell activation by inhibiting the signals released by CD28. Thus, CTLA4 is involved in the completion of T cell responses The way in which the two receptors release opposite signs and recognize the same molecule B7 of APC is an intriguing question and a matter of research. Coestimulatory these signals may have different roles in various types of immune response. Thus the treatment strategy of using monoclonal antibodies (mAb) anti-CTLA4, anti-CD28 in murine schistosomiasis was to evaluate the modulation of inflammatory response and parasite-induced S. mansoni as CTLA4 and CD28 were blocked. Our results showed that treatment with (mAb) anti CD28 and CTLA4 molecules coestimulatory favored changes in the number of leukocytes, modulations in the levels of circulating antibodies, cytokines, and the response profile of T helper (Th) and change in the parasitic activity. Our data showed that the reduction of parasite burden was 21.3% in the group treated with anti-CTLA4 mAb and 46.2% in the group treated with anti-CD28. Suggesting that these treatments should be considered interesting candidates for immunotherapy and for further investigation, since it is necessary to better understand the response of these molecules in schistosomiasis mansoni that when blocked or did not show the hypothetical anti-parasitic and anti-inflammatory activity in this model. / A esquistossomose mansônica representa um dos grandes problemas de Saúde Pública acometendo, segundo a Organização Mundial de Saúde (OMS), 210 milhões de indivíduos no mundo todo. No hospedeiro infectado, a doença é caracterizada pela presença de granuloma, resultado imunopatológico do infiltrado celular e em muitos casos consequência de fibrose tecidual. Dessa forma, a relação parasito-hospedeiro pode levar a morbidade devido à doença resultar em hepatoesplenomegalia, fibrose hepática e ascite. O processo granulomatoso na esquistossomose é dependente de linfócitos T CD4+ e requer recrutamento e acumulo de células inflamatórias no sítio de deposição dos ovos. A fibrose esquistossomótica é resultado da reação granulomatosa que se desenvolve em resposta a antígenos liberados pelos ovos do Schistosoma mansoni retidos nas veias portais de menor calibre. A patologia causada em hospedeiros com S. mansoni é mediada pela resposta imune, por células T através da disseminação dos ovos que são alojados no fígado e intestino. Manipulações para a interação entre moléculas B7 de células apresentadoras de antígenos (APC) e receptores CD28/CTLA4 de células T modulam, e em algumas circunstâncias, bloqueiam a resposta imunopatológica in vivo. O CTLA4 é estruturalmente homólogo ao CD28, mas é expresso nas células T CD4+ e CD8+ recém ativadas, e sua função é inibir a ativação de células T pela inibição dos sinais liberados pelo CD28. Assim, o CTLA4 está envolvido na finalização das respostas das células T. A maneira pelos quais os dois receptores liberam sinais opostos e reconhecem a mesma molécula B7 das APC é uma intrigante questão e motivo de pesquisa. Esses sinais coestimulatórios podem ter diferentes papéis nos vários tipos de resposta imune. Dessa forma a estratégia de utilizar o tratamento com anticorpos monoclonais (mAb) anti-CTLA4 e anti-CD28 na esquistossomose mansônica murina foi de avaliar a modulação da resposta inflamatória e parasitária induzida pelo S. mansoni quando CTLA4 e CD28 fossem bloqueados. Nossos resultados mostraram que o tratamento com (mAb) anti moléculas coestimulatórias CTLA4 e CD28 favoreceram alterações no número de leucócitos, modulações nos níveis de anticorpos circulantes, citocinas, e do perfil da resposta T helper (Th) e alteração na atividade parasitária. Nossos dados demonstraram que, a redução da carga parasitária foi de 21,3% no grupo tratado com mAb anti- CTLA4 e 46,2% no grupo tratado com anti-CD28. Sugerindo que, estes tratamentos devem ser considerados interessantes candidatos para imunoterapia e para maiores investigações, uma vez que se faz necessário conhecer melhor a resposta destas moléculas na esquistossomose mansônica que quando bloqueadas ou não apresentaram a hipotética atividade antiparasitária e antiinflamatória nesse modelo.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Muitos microorganismos desenvolveram a habilidade de adquirir ferro a partir do seu hospedeiro para seu próprio metabolismo. Toxoplasma gondii, um parasito intracelular obrigatório, produz proteinas de roptrias que são capazes de ligar ao transportador de ferro. Além disso, quelante de ferro foi capaz de controlar o parasitismo em células intestinais de rato. Logo, este trabalho teve como objetivo investigar a relação do efeito da adição ou privação de ferro na multiplicação de T. gondii e resultado da infecção quando o parasito é administrado por via oral e em cultura celular. Camundongos C57BL/6 foram infectados oralmente com T. gondii e tratados com um quelante de ferro, deferoxamina ou suplementados com ferro e o parasitismo, parâmetros imunológicos e histológicos foram analisados. Observou-se que a infecção aumentou a deposição de ferro no intestino delgado, pulmão e fígado e também sistematicamente. O tratamento com deferoxamina foi capaz de diminuir os níveis de ferro nas amostras de soro. O tratamento com deferoxamina diminuiu a carga parasitária no intestino delgado e alterações inflamatórias no órgão, preservando seu comprimento e também diminuiu o parasitismo pulmonar. Além disso, a suplementação com ferro aumentou a carga parasitária no intestino delgado, pulmão e fígado, associado com alterações inflamatórias nesses órgãos, bem como houve aumento da proliferação parasitária em cultivo celular com células Caco-2. A infecção oral modulou o perfil de expressão de marcadores de absorção de ferro, aumentando os níveis de IL-6 sistêmicos. Juntos, nossos resultados sugerem que a quelação de ferro comumente usada para tratar a sobrecarga de ferro pode ser um medicamento promissor para controlar a proliferação de T. gondii e consequentemente a inflamação causada por infecção e que o ferro é um nutriente essencial para o metabolismo de T. gondii. / Many microorganisms have developed the ability to acquire iron from their host to their own metabolism. Toxoplasma gondii, an obligate intracellular parasite, produces rhoptry proteins that are capable of binding to the iron transporter. In addition, iron chelator was able to control parasitism in rat intestinal cells. Therefore, the objective of this work was to investigate the relationship of the effect of iron addition or deprivation on the multiplication of T. gondii and the result of infection when the parasite is administered orally and in cell culture. C57BL/6 mice were orally infected with T. gondii and treated with an iron chelator, deferoxamine or iron supplemented and parasitism, immunological and histological parameters were analyzed. It was observed that the infection increased the deposition of iron in the small intestine, lung and liver and also systematically. Treatment with deferoxamine was able to decrease iron levels in the serum samples. Treatment with deferoxamine reduced parasite burden in the small intestine and inflammatory changes in the organ, preserving its length and also decreased pulmonary parasitism. In addition, iron supplementation increased parasite burden in the small intestine, lung and liver, associated with inflammatory changes in these organs, as well as increased parasite proliferation in cell culture with Caco-2 cells. Oral infection modulated the expression profile of iron absorption markers, increasing systemic IL-6 levels. Together, our results suggest that iron chelation commonly used to treat iron overload may be a promising drug to control T. gondii proliferation and consequently inflammation caused by infection and that iron is an essential nutrient for the metabolism of T. gondii. / Tese (Doutorado)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The definitive diagnosis of strongyloidiasis is normally done by detection of larvae on faecal samples; however, the number of parasites is limited in most cases and the elimination of larvae is irregular. Thus, developing reliable serological methods for the diagnosis of strongyloidiasis becomes imperative. The aim of this study was to establish a coproantigen ,antigen, antibody and immune complex detection by enzyme-linked immunosorbent assay in serum and bronchoalveolar lavage fluid (BALF) samples of non immunosuppressed or immunosuppressed rats experimentally infected with Strongyloides venezuelensis. For kinetics of coproantigen detection (0 and 5, 8, 13 and 21 days post-infection (d.p.i)), we used an anti-L3 polyclonal antibody produced in rabbits. For antigen and immune complex detection in serum and BALF samples (0 and 2, 5, 8, 13 and 21d.p.i), the microtitre plates were coated with IgG anti-S. venezuelensis and with alkaline parasite extract for antibody detection. The statistical analysis were analyzed using Two Way ANOVA, followed by the Bonferroni test. The criterion for statistical significance was set at p<0,05. The number of eggs/g of faeces recovered at 8 d.p.i was significantly higher for non immunosuppressed and immunosuppressed animals (p<0.01). The coproantigen detection was significantly higher at 13° d.p.i in non immunosuppressed (p<0.05) and in immunosuppressed it was anticipated to the 5th d.p.i. It was observed that antigen detection in serum samples was not a good approache for evaluating the infection however in BALF samples it showed superior results. In immunosuppressed animals, IgG specific for S. venezuelensis was preferentially detected during the 5° and 13° d.p.i and in immunosuppressed animals, during the entire experimental kinetics. In BALF samples, antibodies detection was observed from the 8° to the 21° d.p.i in non immunosuppressed animals and in immunosuppressed animals it was anticipatedto the 2° d.p.i, with higher reactivity at 5° d.p.i (p<0.05). The immune complex detection in serum samples of the non immunosuppressed animals was observed from the 5° to the 13° d.p.i and in immunosuppressed animals, during the entire kinetics. In BALF samples, immune complex detection was higher in non immunosuppressed animals. In conclusion, coproantigen and immune complex detection in serum and BALF samples are alternatives for early strongyloidiasis diagnosis, mainly in immunocompromised cases. / O diagnóstico definitivo da estrongiloidíase normalmente é realizado mediante a detecção de larvas nas fezes; porém a quantidade de parasitos é limitada e a eliminação de larvas é reduzida e irregular. Sendo assim, o desenvolvimento de testes sorológicos confiáveis para o diagnóstico da estrongiloidíase torna-se uma alternativa necessária. O objetivo deste estudo foi demonstrar a cinética de detecção de coproantígenos e de antígenos, anticorpos e imunocomplexos circulantes em amostras de soro e de lavado bronco alveolar (LBA) de ratos imunossuprimidos e experimentalmente infectados por Strongyloides venezuelensis. Para a cinética (0 e 5, 8, 13 e 21 dias pós-infecção (d.p.i)) de coproantígenos utilizou-se anticorpo policlonal anti-L3 produzido em coelhos. Para a detecção de antígenos e de imunocomplexos em amostras de soro e de LBA (0 e 2, 5, 8, 13 e 21 d.p.i), placas de microtitulação foram sensibilizadas com IgG anti-S. venezuelensis e com extrato alcalino de larvas para a detecção de anticorpos. A análise estatística foi realizada por Two Way ANOVA, seguida pela teste de Bonferroni, considerando p<0,05 significativo. A cinética de eliminação de ovos/g de fezes mostrou que o pico ocorre no 8° d.p.i sendo significativamente maior nos animais imunossuprimidos (p<0,01). O pico de detecção de coproantígenos nos animais não imunossuprimidos foi no 13° d.p.i (p<0,05), sendo que nos animais imunossuprimidos a detecção foi antecipada para o 5° d.p.i. A detecção de antígeno em amostras de soro não foi uma boa ferramenta diagnóstica para avaliar a infecção enquanto que em amostras de LBA mostrou ser ferramenta auxiliar. A detecção de IgG específica para S. venezuelensis em amostras de soro de animais não imunossuprimidos foi preferencialmente durante o 5° e o 8° d.p.i. e em animais imunossuprimidos, durante toda a cinética experimental. Nas amostras de LBA, a detecção de anticorpos ocorreu do 8° ao 21° d.p.i em animais não imunossuprimidos e em animais imunossuprimidos, foi antecipada para o 2° d.p.i, como pico de reatividade no 5° d.p.i (p<0,05). A detecção de imunocomplexos em amostras de soro de animais não imunossuprimidos foi possível do 5° aos 13° d.p.i e em animais imunossuprimidos, durante toda a cinética. Em amostras de LBA, a detecção de imunocomplexo foi maior em animais não imunossuprimidos. Concluiu-se que a detecção de coproantígeno e de imunocomplexos circulantes em amostra de soro e em amostras de LBA são uma alternativa para o diagnóstico precoce da estrongiloidíase principalmente nos casos de imunossupressão. / Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Several immunological mechanisms are responsible for the control of Toxoplasma gondii infection. The immune response occurs initially because of the participation of innate immune cells, in which macrophages play an important role. The existence of atypical strains of T. gondii with a genetic pattern different from clonal strains lead concern worldwide, principally because these strains cause severe symptoms especially in immunocompromised individuals and congenitally infected newborn. In this sense, we investigated the in vitro polarization of human macrophages to M1 or M2 profile after the infection with RH, ME49 clonal strains and TgChBrUD2 Brazilian strain. THP-1 cells were treated with PMA to induce their differentiation into macrophages. The cells were plated and infected with T. gondii tachyzoites from TgChBrUD2, RH or ME49 strains at a 2:1 (parasites: host cell) ratio or incubated only with medium (control uninfected cells). The supernatant was collected for cytokine analysis and measurement of nitrite. The macrophages were used for quantification of urea, evaluation of parasitism, analysis of morphology and surface markers. Our results showed an up-regulation of MIF during infection by TgChBrUD2, RH and ME49, and low levels of IL-10 compared to control. In addition, TgChBrUD2-infected macrophages show high levels of IL-6 production compared to non-infected macrophages and RH infection. Regarding secretion of nitrite, the infection by TgChBrUD2 exhibited high levels of nitrite compared to control and RH infection. The urea production showed a down-regulation in macrophages infected with TgChBrUD2 and ME49 in comparison to control. The analysis of morphology revealed that TgChBrUD2-infected macrophages induced the cells to change their morphology to spindle shaped. On the other hand, PCR analysis showed an increased amount of T. gondii DNA in RH-infected macrophages compared to infection with TgChBrUD2 and ME49. Thus, our results showed that RH strain produced an insuficient pro-inflamatory response that influenced the proliferation of parasite, in contrast, TgChBrUD2 and ME49 induced characteristic factors of polarization to M1 macrophages, in which the atypical strain showed high production of pro-inflamatory mediators that helped to countain the replication of this strain. / Vários mecanismos imunológicos são responsáveis pelo controle da infecção por Toxoplasma gondii. A resposta imune a este patógeno ocorre inicialmente pela participação de células da imunidade inata, na qual macrófagos têm papel importante. A existência de cepas atípicas de T. gondii com padrão genético diferente das clonais desperta grande preocupação mundial, uma vez que, geralmente, causam sintomas graves particularmente em indivíduos imunocomprometidos e naqueles infectados congenitamente. O objetivo deste estudo foi comparar, in vitro, a polarização de macrófagos humanos derivados da linhagem THP-1 para um perfil M1 ou M2 após infecção com as cepas clonais RH, ME49 e a cepa atípica TgChBrUD2. Células THP-1 foram tratadas com PMA para induzir sua diferenciação em macrófagos funcionais. Após a diferenciação, esses macrófagos foram plaqueados e infectados com as cepas TgChBrUD2, RH ou ME49 de T. gondii em diferentes abordagens experimentais. Como controle foram utilizados macrófagos não infectados. Os sobrenadantes de cultura de macrófagos nas diferentes condições experimentais foram coletados para análise de citocinas pelo teste ELISA e dosagem de nitrito pela reação de Griess. As células foram utilizadas para avaliação da morfologia, quantificação da ureia por espectrofotometria, dos marcadores expressos na superfície celular por citometria de fluxo e do parasitismo por PCR. Nossos resultados mostraram um aumento das citocinas MIF durante infecção pelas cepas TgChBrUD2, RH e ME49, bem como uma diminuição de IL-10 quando comparado aos macrófagos não infectados. Além disso, macrófagos infectados pela cepa atípica apresentaram altos níveis de secreção de IL-6 em relação ao controle. Em relação a produção de nitrito, apenas os macrófagos infectados por TgChBrUD2 apresentaram aumento em relação aos macrófagos controle e aos infectados por RH. A dosagem de ureia revelou uma redução da atividade de arginase na infecção por TgChBrUD2 e ME49 comparado aos macrófagos não infectados. A análise da morfologia celular mostrou que a infecção por TgChBrUD2 induziu os macrófagos a mudarem seu formato de circulares para fusiformes. Por outro lado, a análise de PCR mostrou que a cepa RH proliferou significativamente mais nos macrófagos em comparação com as cepas TgChBrUD2 e ME49. Desse modo, nossos resultados mostraram que a cepa RH induziu resposta pró-inflamatória insuficiente que influenciou na proliferação do parasito, por outro lado, TgChBrUD2 e ME49 induziram fatores característicos da polarização para macrófagos M1, de modo que a cepa atípica mostrou maior liberação de mediadores pró-inflamatórios que auxiliaram a conter a replicação desta cepa. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas