Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2017-07-05T16:00:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Otavia_Martins.pdf: 1248532 bytes, checksum: 732a038ac2a908e98da415247668b37e (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-07-05T19:22:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Otavia_Martins.pdf: 1248532 bytes, checksum: 732a038ac2a908e98da415247668b37e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-05T19:22:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Otavia_Martins.pdf: 1248532 bytes, checksum: 732a038ac2a908e98da415247668b37e (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Sem bolsa / Os fungos presentes no ar atmosférico são denominados anemófilos, sendo este habitat o meio de dispersão mais utilizado por esses microrganismos, que possuem a capacidade de colonizar diferentes substratos de forma singular e eficiente. Assim, dificilmente pode existir ambiente livre de contaminação fúngica. As concentrações de fungos no ambiente sofrem influências de diversos fatores, incluindo variáveis ambientais e fatores físicos que podem aumentar a quantidade de propágulos no ambiente. Os fungos anemófilos podem causar problemas como a deterioração de materiais, alergias, intoxicações e infecções. Assim, a presença desses microrganismos em laboratórios de microbiologia pode causar grandes problemas econômicos, de qualidade diagnóstica e relacionados à pesquisa, além das possibilidades de causar prejuízo à saúde das pessoas que trabalham no local. Ao fazer-se uso das normas de biossegurança, o monitoramento de fungos torna-se, então, necessário para um adequado controle ambiental, evitando assim contaminações e infecções. O objetivo deste trabalho foi realizar o isolamento e identificação da microbiota fúngica ambiental presente em nove laboratórios de ensino, pesquisa e extensão da Universidade Federal de Pelotas (UFPel) durante o período de fevereiro a novembro de 2015, abrangendo as quatro estações. A técnica utilizada foi de sedimentação em placa de Petri contendo meio Ágar Sabouraud dextrose com adição de cloranfenical. Durante o estudo foram coletadas 228 placas mensais provenientes de coletas semanais dos nove laboratórios totalizando 912 placas no final do experimento, das quais foram isoladas um total de 5101 Unidades Formadoras de Colônias (UFC). Conforme a sazonalidade, o outono foi a estação que apresentou maior número de UFC, correspondendo a 35% (1808/5101) do total encontrado, já no inverno obteve-se apenas 17,3% (884/5101). Em relação ao isolamento fúngico, o gênero Cladosporium representou 46,3% do total de UFC, seguido de Penicillium e de fungos não caracterizados quanto ao gênero, em decorrência da ausência de micélio reprodutivo, sendo então classificados como “micélio aéreo estéril”. Não houve diferença significativa entre o número de UFC encontradas nos distintos laboratórios, assim como também não houve diferença no número de UFC encontradas nos distintos ambientes pertencentes aos laboratórios. Os gêneros prevalentes foram Cladosporium e Penicillium. / The fungi present in atmospheric air are called airborne, which is the dispersion medium habitat most used by these microorganisms, which have the ability to colonize different natural substrates and efficiently. Thus, there can hardly fungal contamination-free environment. Fungal concentrations in the environment are influenced by several factors, including environmental factors and physical factors that can increase the number of propagules in the environment. The airborne fungi can cause problems such as deterioration of materials, allergies, poisoning and infections. Thus, the presence of these microorganisms in microbiology laboratories can cause major economic problems, diagnostic and research related to quality, and the potential to cause harm to the health of the people working on site. When making up the use of bio-security standards, monitoring of fungi becomes then necessary for proper environmental control, thus avoiding contamination and infections. The aim of this study was the isolation and identification of the fungal microbiota present in nine teaching laboratories, research and extension of the Federal University of Pelotas (UFPel) during the period from February to November 2015, covering the four seasons. The technique used was settling in Petri dishes containing Sabouraud dextrose agar medium with added cloranfenical. During the study were collected 228 monthly cards from weeks collection of nine laboratories totaling 912 cards at the end of the experiment, which were isolated from a total of 5101 Colony Forming Units (CFU). As the seasonal, autumn was the season that had the highest number of CFU, corresponding to 35% (1808/5101) of the total found, already in winter yielded only 17.3 % (884/5101). Compared to fungal isolation, Cladosporium genre represented 46.3 % of the CFU, followed by Penicillium fungi and not characterized as gender, due to the absence of reproductive mycelium, then being classified as "sterile aerial mycelium". There was no significant difference between the number of CFU found in different laboratories, as well as there was no difference in the number of CFUs in different environments belonging to the laboratories. The prevalent genera were Cladosporium and Penicillium.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:25:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarolinaRodriguesCosta-2009.pdf: 705821 bytes, checksum: 53ed28c3e9fdc5770d04b7c412384968 (MD5) Previous issue date: 2009-06-02 / Adhesion to host tissues, production of hydrolytic enzymes, the resistance to antifungals and ability to production hyphal interfere in the infectious process caused by Candida. Resistance to azole antifungal agents, used to treatment of candidiasis, has been observed to immunocompromised patients. Molecular typing based on RAPD-PCR has been used to discriminate between susceptible and resistant isolates to antifungal agents. In this work, were evaluated the virulence factors and molecular characteristics of Candida isolates obtained of samples from blood, catheter of nosocomial patients and from oral cavity of HIV positive patients. The isolates were identified as: Candida albicans (59) Candida parapsilosis (22), Candida tropicalis (14) Candida guilliermondii (07), Candida. famata (05), Candida krusei (03), Candid. lusitaniae (01) and Candida kefyr (01). The proteinase and phospholipase production and the adherence ability were determined for these yeasts. The effect of fluconazole and itraconazole antifungal agents on hyphal formation were studied to 5 isolates previously classified as either susceptible or resistant. The characterization genotypic of resistant and susceptible isolates to fluconazole was carried out for 13 isolates of C. albicans by RAPD-PCR method. The results showed that proteinase activity was detected in 88.1% of C. albicans isolates and in 69.8% of non C. albicans, while phospholipase was produced in 55.9% of C. albicans isolates and in 37.7% of non C. albicans. Isolates of blood were more proteolitic than catheter and oral cavity, while for phospholipase, there was more production of this enzyme in the oral cavity. The ability of adherence to buccal epithelial cell was higher in C. albicans than non C. albicans, however there was not behavior difference between the isolates from different sources studied. The hyphal formation was higher in resistant isolates than susceptible isolates when used the both drugs. In RAPD-PCR method the formation of two different groups was verified for susceptible and resistant isolates being that only one resistant isolate was clustered in the susceptible group. Thus, in this work, it was verified that the exoenzymes activity and adherence ability depend not only of the specie of Candida, but too of the source from host; the resistant isolates produced more hyphal than susceptible isolates under the antifungal action and the molecular characteristics of the resistant isolates did not suggest unique DNA fingerprints did not predicting their susceptibility to fluconazole / A capacidade de aderência ao tecido do hospedeiro, a produção de exoenzimas, a resistência aos antifúngicos e a formação de hifas são fatores que podem interferir no processo infeccioso causado por Candida. Resistência aos derivados azólicos utilizados no tratamento de candidíase, tem sido observada em pacientes imunocomprometidos. Tipagem molecular como o RAPD-PCR tem sido utilizada para discriminação entre isolados de Candida spp suscetíveis e resistentes aos antifúngicos. Neste trabalho foram avaliados fatores de virulência e características moleculares de leveduras do gênero Candida isoladas de amostras do sangue, de cateter de pacientes nosocomiais e da cavidade bucal de pacientes HIV positivos. Os isolados utilizados foram identificados como: Candida albicans (59) Candida parapsilosis (22), Candida tropicalis (14) Candida guilliermondii (07), Candida famata (05), Candida krusei (03), Candida lusitaniae (01) e Candida kefyr (01). Estas leveduras foram avaliadas quanto à atividade de proteinase, fosfolipase e à sua capacidade de aderência. A ação do fluconazol e itraconazol sobre a formação hifal, foi avaliada em 5 isolados previamente classificados como suscetíveis e resistentes ao fluconazol e ao itraconazol. A caracterização genotípica de 13 isolados de C albicans resistentes e suscetíveis ao fluconazol foi realizada por meio de RAPD-PCR. Os resultados mostraram que a atividade de proteinase foi detectada em 88,1% de isolados de C. albicans e em 69,8% de Candida não albicans, enquanto que a fosfolipase foi detectada em 55,9% de isolados de C. albicans e em 37,7% de Candida não albicans. Isolados do sangue foram mais proteolíticos do que os do cateter e os da cavidade bucal, enquanto para a fosfolipase foi observado maior produção desta enzima em isolados da cavidade bucal. A capacidade de aderência à célula epitelial foi maior em C. albicans que Candida não albicans, no entanto não houve diferença de comportamento entre isolados obtidos dos diferentes locais estudados. A formação de hifas foi maior nos isolados resistentes do que nos isolados suscetíveis quando sob a ação de qualquer um dos dois fármacos. Na análise do RAPD-PCR foi verificada a formação de dois grupos distintos para os isolados suscetíveis e resistentes ao fluconazol, sendo que apenas um isolado resistente foi agrupado com os suscetíveis. Neste trabalho, foi verificado que a atividade de exoenzimas e a habilidade de aderência dependem além da espécie de Candida como também do local onde foi isolada no hospedeiro, que isolados resistentes formaram mais hifas do que os suscetíveis sob a ação de antifúngico e que as características moleculares dos isolados resistentes em mais de um padrão fingerprinting não permitiram predizer a sua suscetibilidade ao fluconazol

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:26:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Sarah Veloso Nogueira.pdf: 4968384 bytes, checksum: 1a3070a4c2260fba10919cd4f6ccd4f4 (MD5) Previous issue date: 2010-03-11 / Paracoccidioides brasiliensis is the causative agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a human systemic mycosis, prevalent in Latin America. Extracellular matrix (ECM) is a complex net where collagens, laminin and fibronectin can be found and, when exposed, is the first site for the fungus adhesion. Our aim was to study genes involved in the adhesion process using Representational Difference Analysis (RDA). RDA is a PCR-coupled subtractive method that allows the isolation of genes differentially expressed in two different cDNA populations. Hence, cDNAs were synthesized from RNAs extracted from P. brasiliensis yeast cells adhered to collagen and fibronectin to identify overexpressed genes. Genes involved in a wide range of cellular process were found and PbCtr3 (cooper transporter) and enolase (PbEno) were chosen to further studies. A synthetic peptide (PbCTR3) and the recombinant enolase (rPbEno) were utilized together with the anti-rPbEno polyclonal antibody in functional analysis with ECM components and plasminogen. The studies suggest that P. brasiliensis enolase, in the surface, is able to generate plasmin from plasminogen by plasminogen activator. Therefore, it was also demonstrated that this protein is secreted and able to promote fungus adhesion and invasion to cells. These findings clearly establish the role of enolase in the patogenicity of P. brasiliensis. / Paraccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica, prevalente na América Latina. A matriz extracelular (MEC) é uma rede complexa formada por colágeno, laminina, fibronectina, entre outros componentes, que, quando exposta, é o local inicial de adesão do fungo. Nosso objetivo foi estudar genes envolvidos nesse processo de adesão utilizando Análise Diferencial Representacional (RDA). RDA é um método de subtração acoplado a PCR que permite o isolamento de genes diferencialmente expressos entre duas populações de cDNAs diferentes. Assim, cDNAs foram sintetizados a partir de RNAs extraídos de células leveduriformes de P. brasiliensis aderidos à colágeno e fibronectina para identificar genes super-expressos nestas condições. Genes envolvidos com vários processos celulares foram observados e PbCtr3 (transportador de cobre) e enolase (PbEno) foram escolhidos para análises adicionais. Um peptídeo sintético (PbCTR3) e a proteína recombinante (rPbEno) foram utilizados, juntamente com o anticorpo policlonal antirPbEno em análises funcionais com componentes da MEC e plasminogênio. Os estudos sugerem que a enolase de P. brasiliensis, localizada na parede celular, é capaz de gerar plasmina a partir do plasminogênio mediada pelo ativador de plasminôgenio. Além disso, foi também demonstrado que esta proteína é secretada sendo capaz de promover a adesão e invasão do fungo a células. Esses estudos claramente estabelecem o papel da enolase na patogenicidade de P. brasiliensis.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:26:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseCristyaneBenicio2010.pdf: 531193 bytes, checksum: 9a3d68036fe340ca60db84cb20f7066b (MD5) Previous issue date: 2010-02-18 / Objectives (i) Present review article focusing on pneumococcal vaccines and carriage; (ii) to validate sequential multiplex PCR for identifying pneumococcal capsular serotypes from children attending day-care centers; (iii) determine the multilocus sequence typing; (iv) to identify the capsular types of multiple colonies of S. pneumoniae isolates from a single sample of nasopharyngeal secretions of children attending day-care centers in Goiânia. Materials and Methods S. pneumoniae was obtained from health children less than 5 years old attending 62 day care centers of Goiânia. The laboratory procedures were performed according to WHO recommendations. Were selected 217 isolates (penicillin resistant and sensitive) for capsular typing by multiplex PCR technique. MLST was performed for 55 isolates representing the serotypes detected and the different susceptibility patterns for penicillin. Quellung reaction was used for typing isolates serotypes 6A, 6B, 18C and the isolates not typed by multiplex PCR. For 28 presumptive pneumococcal positive NP swabs, 3 colonies were picked to acess possible serotype diversity. Eighty four pneumococci were identified by conventionally procedure and multiplex PCR was performed. Results Serotypes were deduced for 177/217 (81.6%) of the pneumococcal. The most frequent serogroups/serotypes were 14, 6, 23F, 19F and 18. Multiple serotypes were detected in 13 specimens. Were found 19 MLST types and two new ST. Forty (18.4%) were not serotyped by the multiplex PCR and quellung reaction. The analysis of three colonies from the same NP permitted the detection of differente serotypes in 7/28 (25%) NP samples. Conclusion (i) The multiplex PCR is simple and cost-effective method for detecting multiple serotypes in nasopharyngeal isolates; (ii) and thus might be useful for the monitoring of pneumococcal colonization over time; (iii) the use of multiplex PCR can further broaden our understanding of the dynamics of pneumococcal carriage, including multiple serotypes, the effect of vaccination on carriage, and transmission, as well as surveillance of IPD and co-colonization. / Objetivos: (i) Apresentar uma revisão focando as vacinas pneumocócicas e o portador de S. pneumoniae na nasofaringe; (ii) realizar a tipagem capsular de pneumococos colonizadores de nasofaringe de crianças de creches pela técnica de multiplex PCR; (iii) identificar o perfil MLST dos pneumococos isolados na nasofaringe; (iv) identificar os tipos capsulares de múltiplas colônias de S. pneumoniae isolados de uma única amostra de secreção da nasofaringe de crianças que frequentam creches do município de Goiânia pela técnica de multiplex PCR. Material e Métodos: Um estudo de prevalência de portador de pneumococo foi conduzido de agosto a dezembro de 2005, em crianças de dois a 59 meses de idade, atendidas em 62 creches em Goiânia. Os procedimentos laboratoriais para isolamento e identificação dos pneumococos foram realizados de acordo com as técnicas recomendadas pela Organização Mundial de Saúde. Foram selecionados 217 isolados (resistentes e sensíveis à penicilina) para a tipagem capsular pela técnica de multiplex PCR. O perfil MLST foi realizado para 55 isolados, representando os sorotipos detectados e os diferentes perfis de suscetibilidade à penicilina. A reação de Quellung foi usada para tipar os sorotipos 6A, 6B e 18C e os isolados não tipados pelo multiplex PCR. Para a análise de múltiplas colônias de S. pneumoniae, utilizou-se 28 amostras positivas para pneumococo, das quais se recuperou 3 colônias de cada placa de ágar sangue, totalizando 84 colônias, que foram submetidas aos testes de tipagem fenotípica e caracterização capsular pela técnica de multiplex PCR. Resultados: Cento e setenta e sete sorotipos em duzentos e dezessete (177/217), totalizando 81,6% dos pneumococos foram tipados. Os sorotipos mais freqüentes foram 14, 6, 23F, 19F e 18. Foram identificadas múltiplas colônias em 13 amostras de nasofaringe. Foram observados 19 tipos MLST e dois novos tipos de seqüência (ST). Quarenta (18,4%) dos isolados não foram tipados pelo multiplex PCR e todos não tipados pela reação de Quellung. A análise de múltiplas colônias de S. pneumoniae pela técnica de multiplex PCR permitiu a detecção de mais de um tipo em 25% (7/28) das amostras. Conclusões: (i) O método de multiplex PCR mostrou-se seguro e simples na detecção de diferentes tipos capsulares incluídos na reação, além de mais barato; (ii) representou uma valiosa ferramenta em investigações de vigilância de pneumococos; (iii) Aplicação da técnica multiplex PCR permitiu o conhecimento da diversidade genética de pneumococos colonizadores da nasofaringe, detectando a dinâmica da colonização desta bactéria na população, incluindo a colonização por múltiplos sorotipos; a substituição ou mudança de sorotipo como resultado da vacinação; como também vigilância das doenças pneumocócicas invasivas.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008 - Ronaldo Leao Guimaraes.pdf: 352046 bytes, checksum: 7639df2176f027af3722d0b90e93a856 (MD5) Previous issue date: 2008-12-01 / The aim of this study was to evaluate the presence of Vibrio sp., Aeromonas sp. and Enterobacteriaceae in marine and farmer shrimp. For this, 20 samples of marine shrimp (Penaeus sp.) were collected from Itajuru channel, Cabo Frio, RJ, and other 20 samples of farmer shrimp were acquired in municipal market of Cabo Frio, RJ between January to August 2007. These samples were processed using standard methodology and inoculated in selective media for the research of these microorganisms. The isolates identification was performed by specific biochemical tests. 88 strains were isolated; 51.1% belonging to Vibrio sp., 28.5% to Aeromonas sp. and 20.4% to Plesiomonas shigelloides. It was not detected the presence of E. coli or Salmonella. Among the Vibrio sp., there was a prevalence of Vibrio alginolyticus with 45% and Vibrio parahaemolyticus with 10.5%. Aeromonas hydrophila contributed with 30% of the isolates of this genus and 83.3% of the isolates from Plesiomonas shigelloides were obtained from marine shrimp while 16.7% were obtained from farmer shrimp. The results show a high frequency of potentially pathogenic strains in these shrimps, emphasizing the importance of monitoring these organisms not only to shrimp industry but also to public health. / Este trabalho teve como objetivo pesquisar em camar?es de vida livre e criados em cativeiro a presen?a de microrganismos dos g?neros Vibrio, Aeromonas e representantes da fam?lia Enterobacteriaceae. Para tal, foram coletadas 20 amostras de camar?o de vida livre (Penaeus sp.) do canal de Itajuru, Cabo Frio, RJ; e outras 20 amostras de camar?o de cativeiro do com?rcio local deste munic?pio, no per?odo de Janeiro a Agosto de 2007. Estas amostras foram processadas seguindo metodologia padr?o e inoculadas em meios seletivos para a pesquisa dos microrganismos citados. A identifica??o dos isolados foi realizada atrav?s de testes bioqu?micos espec?ficos. 88 cepas foram isoladas, das quais, 51,1% pertencente ao g?nero Vibrio, 28,5% ao g?nero Aeromonas e 20,4% a Plesiomonas shigelloides. Em nenhuma amostra foi detectada a presen?a de E. coli ou Salmonella spp. Dentre os Vibrios, houve predomin?ncia de Vibrio alginolyticus com 45% e Vibrio parahaemolyticus com 10,5%. Aeromonas hydrophila contribuiu com 30% dos isolados deste g?nero e 83,3% dos isolados de Plesiomonas shigelloides foram obtidos de camar?o de vida livre enquanto 16,7% foram obtidos de camar?o de cativeiro. Os resultados apresentam uma grande freq??ncia de cepas potencialmente patog?nicas ao homem presentes nestes camar?es; ressaltando a import?ncia do monitoramento destes organismos n?o s? para a ind?stria de carcinicultura como tamb?m para a sa?de p?blica.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-06-30T17:21:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AnaliseMorfologicaInvitro.pdf: 1331306 bytes, checksum: 8d285129bae349ca9666416e0942f78a (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-07-31T15:12:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AnaliseMorfologicaInvitro.pdf: 1331306 bytes, checksum: 8d285129bae349ca9666416e0942f78a (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-31T15:12:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AnaliseMorfologicaInvitro.pdf: 1331306 bytes, checksum: 8d285129bae349ca9666416e0942f78a (MD5) Previous issue date: 2014 / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A cromoblatomicose (CBM) é uma doença causada por implantação transcutânea de várias espécies de fungos melanizados. O estado do Pará é a principal área endêmica do país, sendo Fonsecaea pedrosoi o principal agente etiológico. O tratamento desta doença não é padronizado e diversas formas de intervenção são relatadas na literatura. Por outro lado, os testes de susceptibilidade in vitro aos fármacos antifúngicos podem ajudar na escolha do esquema terapêutico e na identificação de cepas resistentes. Este trabalho tem como objetivo avaliar a susceptibilidade in vitro ao itraconazol (ITZ), ao cetoconazol, (CTZ), ao fluconazol (FCZ) e a terbinafina (TBF) em 20 isolados clínicos de Fonsecaea pedrosoi, bem como as possíveis alterações morfológicas induzidas por ITZ ou TBF na Concentração Inibitória Mínima (CIM) e em altas concentrações. Os testes de susceptibilidade foram conduzidos de acordo com as recomendações do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, documento M38-A2). As concentrações finais de ITZ, TBF e CTZ em cada teste variaram de 16 a 0.03 μg/mL e de 64 a 0.125 μg/mL para o FCZ. A CIM para cada fármaco utilizado foi obtida após cinco dias de incubação a 30°C, sendo definida como a mínima concentração do fármaco capaz de reduzir em 100% o crescimento visual do fungo quando comparado com o grupo controle. O ITZ demonstrou ser o fármaco mais efetivo in vitro contra conídios de F. pedrosoi (CIM 90= 1μg/mL). A TBF apresentou baixa atividade in vitro, com 70% das cepas apresentando CIM ≥ 0.5 μg/mL. Quando se analisa morfologicamente os conídios tratados com a CIM para ITZ observa-se um aumento no diâmetro celular, a presença de conídios em processo de divisão e formação de pequenas cadeias. Na maior concentração do teste de susceptibilidade (16 μg/mL) observou-se a irregularidade no contorno celular, o desprendimento de material pigmentado da parede celular e a vacuolização. Em 32 μg/mL e 64 μg/mL notou-se a ruptura da parede celular e conídos amorfos. Não foram observadas - em nenhuma das concentrações analisadas - alterações morfológicas significativas induzidas pela TBF. Além disso, a 5-Fluorocitosina (5-FC) e o FCZ não impediram o crescimento dos conídios, mesmo em altas concentrações. No entanto, alterações ultraestruturais foram notadas após tratamento com 5-FC 64 μg/mL. Portanto, sugere-se um comportamento morfológico diferente de conídios frente ao ITZ ou TBF durante os testes de susceptibilidade in vitro. Em síntese, dentre os fármacos estudados, ITZ apresentou a melhor atividade antifúngica in vitro, enquanto a 5-FC somente provocou alterações estruturais em hifas e conídios na mais alta concentração utilizada no estudo. / Choromoblastomycosis (CBM) is a disease caused by traumatic implantation of many species of melanized fungi. The State of Pará is the major endemic area in Brazil and Fonsecaea pedrosoi is the major etiological agent. The treatment is not standardized and many forms of interventions are related in the literature. In the other hand, the in vitro susceptibility test to antifungal drugs may help in the therapeutic choice and in the identification of resistant strains. The objective of this work is to evaluate the in vitro susceptibility of 20 F. pedrosoi clinical isolates to itraconazole (ITZ), ketoconazole (KCZ), fluconazole (FCZ) and terbinafine (TBF) as well as the possible morphological alterations induced by ITZ or TBF in the Minimal Inhibitory Concentration (MIC) and high concentrations. The tests were performed according to the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, M38-A2 document) recommendations. The final concentrations of ITZ, TBF and KCZ in each test were to 16 to 0.03 μg/mL. To FCZ the final concentrations were to 64 to 0.125 μg/mL. The MIC was defined as the lowest drug concentration that inhibit 100% the visual growth when compared to the non-treated group after five days of incubation at 30°C. ITZ proved to be the most effective drug in vitro against F. pedrosoi (CIM 90= 1μg/mL). TBF showed a low drug activity with 70% of the isolates with MIC ≥ 0.5 μg/mL. The conidia morphological analysis revealed an increasing in the diameter, an interruption of the cellular division and the formation of little chains after the treatment with ITZ in the MIC. At the high concentration used in the susceptibility test we noticed an irregular shape, a detachment of pigmented material from the cell wall and a vacuolization. Rupture in cell wall and amorphous conidia were observed at 32 μg/mL and 64 μg/mL. Significant alterations were not observed after treatment with TBF at the same concentrations. Moreover, the 5-fluorocytocise (5-FC) and FCZ do not stop the conidia growth at high concentrations. However, ultrastructure alterations were noticed after treatment with 5-FC 64 μg/mL. Thus, it is suggested a different morphological pattern after ITZ or TBF treatment during the in vitro susceptibility test. In synthesis, ITZ shown better in vitro antifungal activity while 5-FC only provoked structures alterations in the highest concentration tested.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-09-11T18:30:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_CaracterizacaoGenotipicaVirus.pdf: 758796 bytes, checksum: b0da38512afba739aff613a2497d7ba3 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-09-21T14:23:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_CaracterizacaoGenotipicaVirus.pdf: 758796 bytes, checksum: b0da38512afba739aff613a2497d7ba3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-21T14:23:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_CaracterizacaoGenotipicaVirus.pdf: 758796 bytes, checksum: b0da38512afba739aff613a2497d7ba3 (MD5) Previous issue date: 2013 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O vírus Varicela-zoster (VVZ) pode causar varicela durante a infecção primária, estabelecendo posteriormente uma infecção latente. Na ocorrência de reativação do vírus, pode surgir o herpes zoster. A análise da presença de anticorpos IgG e IgM é fundamental para verificar a prevalência deste vírus na Região Metropolitana de Belém. O estudo de polimorfismos nucleotídicos específicos é utilizado para definir os genótipos do VVZ. A análise das ORFs 22, 38 e 54 permitiu identificar os genótipos do VVZ de acordo com a classificação estabelecida na conferência de 25 de julho de 2008 em Whitechapel, Londres/Reino Unido, em que as cepas de VVZ detectadas e caracterizadas por sequenciamento dos SNPs foram agrupadas em classes de 1 a 5. Avaliar a prevalência de anticorpos e descrever os genótipos circulantes foi o objetivo deste estudo. A frequência de anticorpos IgG e IgM nos casos de varicela foi 68,2% e 48,2%, respectivamente. Os casos de herpes zoster apresentaram prevalência de anti- VVZ IgG e IgM de 87,5% e 12,5%, respectivamente. Os genótipos 1 ou 3 e 5 estavam presentes nas 13 amostras sequenciadas, sendo que a cepa Européia (classe 1 ou 3) foi encontrada em amostras de todos os municípios estudados. A identificação das cepas VVZ circulantes é de extrema importância em virtude da associação de determinados genótipos a quadros clínicos mais severos e para avaliar a implantação da vacina no Programa Nacional de Imunização. / Varicella zoster virus (VZV) can cause chickenpox during primary infection, subsequently establishing a latent infection. In case of reactivation of the virus, the herpes zoster may occur. Analysis of the presence of IgG and IgM is critical to determine the prevalence of this virus in the Metropolitan Region of Belém. The study of specific nucleotide polymorphisms is used to define the genotypes of VZV. Analysis of ORFs 22, 38 and 54 identified genotypes of VZV according to the classification established in conference July 25, 2008 in Whitechapel, London / UK, where the strains of VZV detected and characterized by sequencing of SNPs were grouped into classes 1 through 5. To evaluate the prevalence of antibodies and describe the circulating genotypes was the aim of this study. The frequency of IgM and IgG antibodies in cases of chickenpox was 68.2% and 48.2%, respectively. Cases of herpes zoster showed prevalence of anti-VZV IgG and IgM of 87.5% and 12.5%, respectively. The genotypes 1 or 3 and 5 were present in 13 samples sequenced, and the European strain (class 1 or 3) was found in samples from all the cities studied. The identification of strains circulating VZV is extremely important because of the association of specific genotypes with clinical harshest and to assess the implementation of the vaccine in the National Immunization Program.

Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-09-22T16:45:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CineticaInfeccaoArbovirus.pdf: 1663059 bytes, checksum: 7d2fa792bd8036013ffb7d0bf979223a (MD5) / Rejected by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br), reason: on 2017-10-10T17:01:00Z (GMT) / Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-10-17T18:43:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CineticaInfeccaoArbovirus.pdf: 1663059 bytes, checksum: 7d2fa792bd8036013ffb7d0bf979223a (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-11-24T15:23:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CineticaInfeccaoArbovirus.pdf: 1663059 bytes, checksum: 7d2fa792bd8036013ffb7d0bf979223a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-24T15:23:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CineticaInfeccaoArbovirus.pdf: 1663059 bytes, checksum: 7d2fa792bd8036013ffb7d0bf979223a (MD5) Previous issue date: 2011-09-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / No presente estudo, um membro do grupo das RNA viroses Sul Americanas encontrado no Brasil, que causa doença febril em humanos e encefalite em camundongos adultos e neonatos, foi selecionado como um modelo para estudar as consequências das encefalites por arbovírus. Em camundongos mantidos em condições padronizadas com acesso livre a água e comida, induziu-se encefalite por via intranasal empregando homogenado cerebral infectado pelo vírus Piry, correlacionando a resposta inflamatória celular quantitativa do hospedeiro na região septal, com os sinais clínicos e a neuroinvasão, utilizando como controle animais que receberam homogenado cerebral não infectado. Animais com três meses de idade receberam volume igual de homogenado cerebral infectante ou de homogenado cerebral normal nas narinas. Em cada um dos oito dias após a infecção, cinco sujeitos da colônia infectada foram sacrificados, perfundidos e processados para detecção dos antígenos virais e microglia. Sujeitos controle foram sacrificados no 5º dia após a inoculação do homogenado cerebral normal para os mesmos marcadores. A encefalite viral induziu ativação microglial e neuroinvasão das células gliais e neurônios, principalmente nas vias olfatórias nas fases iniciais (2 - 4 dpi), mas também incluiu o hipocampo, o cerebelo e núcleos do tronco cerebral mais tarde (5 - 8 dpi). A correlação das estimativas do número de microglias na área septal com os sinais clínicos e a neuroinvasão revelaram que o número e a morfologia daquelas mudou antes da neuroinvasão ter alcançado a região septal e os sinais clínicos aparecerem. Grande variabilidade na intensidade dos sintomas clínicos e na taxa de sobrevivência foi encontrada na variedade de camundongos albinos suíços quando comparados com o previamente descrito na variedade C57Bl6 sugerindo um background genético mais heterogêneo para aquela variedade. Tomados em conjunto nossos resultados prévios e atuais dedicados a investigar a progressão da encefalite induzida pelo vírus Piry no camundongo albino suiço pode abrir um novo campo de investigação das bases genéticas, anatômicas e imunes acerca das encefalites sub-letais tropicais. / In the present report, a member of a group of RNA South American viruses found in Brazil, that causes febrile disease in humans and encephalitis in neonate and adult murine models, was selected as a model to study encephalitis outcomes in adult albino Swiss mice. In mice housed under standard conditions with free access to water and food, we induced viral encephalitis by intranasal inoculation of Piry virus–infected brain homogenate and correlated neuropathological features. We quantified the cellular inflammatory response in the septal region using a stereologically based unbiased method with clinical signs and neuroinvasion, comparing the outcomes with those of animals inoculated with uninfected brain homogenate. Three-month-old female mice maintained in standard environment received an equal volume of Piry virus infected or normal brain homogenates into the nostrils. From the 1st to 8th days post-instillation (dpi), five subjects from the infected colony were fixed and processed to detect viral antigens and microglia. Control subjects were sacrificed in the 5th dpi and processed for the same markers. After Piry virus encephalitis induced microglial activation and neuroinvasion of glial cells and neurons mainly in the olfactory pathways early in the disease (2 – 4 dpi), but also included hippocampus, cerebellum and brain stem nuclei later on (5 - 8 dpi). The correlation of the host cellular inflammatory quantitative response in the septal area with clinical signs and neuroinvasion, revealed that the number and the morphology of microglias changed early in the disease before neuroinvasion had reached the septal region and clinical signs had appeared. Great variability in clinical symptoms intensity and survival rate were found in the outbred albino Swiss mice strain as compared with previous report in the inbred C57Bl6 strain suggesting less isogenic background. Taken together, our previous and present report dedicated to investigate Piry virus encephalitis progression in the outbred albino Swiss mice strain may open a new field of investigation of the genetics, anatomical and immune substrates of tropical sublethal arbovirus encepahlitis.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-26T14:13:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_OcorrenciaInibidoresGlicosidases.pdf: 1615955 bytes, checksum: e4e867ae51e2f86d8696bdefc6c32c14 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-01-27T13:39:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_OcorrenciaInibidoresGlicosidases.pdf: 1615955 bytes, checksum: e4e867ae51e2f86d8696bdefc6c32c14 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-27T13:39:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_OcorrenciaInibidoresGlicosidases.pdf: 1615955 bytes, checksum: e4e867ae51e2f86d8696bdefc6c32c14 (MD5) Previous issue date: 2015-08-13 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / As cianobactérias apresentam-se como uma nova fonte de metabólitos secundários para produção de bioprodutos em diversos setores industriais, sendo utilizadas, principalmente, devido ao seu fácil cultivo, com utilização de poucas fontes nutricionais, assim como uma grande produção de biomassa. Ainda não se tem muitos relatos na literatura de cianobactérias amazônicas, assim como de seus metabólitos e seu uso em bioprodutos. Glicosidases são enzimas de extrema importância como alvos para desenvolvimento de fármacos que são utilizados para o tratamento de diversas patologias assim como seus inibidores. O presente trabalho teve como objetivo identificar em 24 amostras de cianobactérias e microalgas provenientes dos estados do Tocantins e do Amapá, os isolados que produzem esses inibidores, assim como extrair, fracionar e identificar os mesmos. Inicialmente, o teste de detecção em placa de petri, com o substrato esculina, para inibidores de glicosidase foi padronizado, bem como a metodologia de extração. Como resultado observou-se atividade inibitória de glicosidase em extrato bruto e na fração metanólica de quatro culturas (Synechococcus sp, Monoraphydium, P29 e Limnotrix sp), não foi detectada atividade inibitória nas frações aquosas de nenhuma cultura. Duas frações metanólicas que apresentaram atividade foram selecionadas para a realização de ensaio de potencial inibitório frente α–glicosidase com o substrato p-nitrofenil α-D-glicopiranosídeo e β–glicosidase com o substrato p-nitrofenil β-D-glicopiranosídeo, onde ambas amostras apresentaram maior porcentagem de inibição para α-glicosidase em relação a β-glicosidase. / Cyanobacteria are presented as a new source of secondary metabolites for the production of bio-products in many industrial sectors and are used primarily because of its easy cultivation, using few nutritional sources, as well as a large biomass production. Until now we don't have many report in literature of cyanobacteria from amazon, as well as their metabolites and their use in bioproducts. Glycosidases are enzymes of extreme importance as targets for developing drugs that are used for the treatment of various diseases, as well as their inhibitors. This study aimed to identify 24 samples of cyanobacteria and microalgae from the states of Tocantins and Amapá, isolates that produce these inhibitors, as well as extract, fractionate and identify them. Initially, the detection test in petri dishes with esculin the substrate for glycosidase inhibitors has been standardized and the extraction methodology. As a result there was glucosidase inhibitory activity of crude extract and the methanol fraction of four samples (Synechococcus sp, Monoraphydium, P29 and Limnotrix sp), inhibitory activity was detected in the aqueous fractions of any culture. Two methanolic fractions that showed activity was selected for potential assay conducting inhibiting α-glycosidase face with the substrate p-nitrophenyl α-D-glucopyranoside and β-glucosidase to the substrate p-nitrophenyl β-D-glucopyranoside, where both samples had a higher percentage of inhibition for α-glucosidase compared to β-glucosidase.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 697140 bytes, checksum: a673ff7affad18149751f45b84127b29 (MD5) Previous issue date: 2009-02-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work is a contribution to the studies about the role of KlRox1p in fermentative metabolism of Kluyveromyces lactis. Rox1p is known in Saccharomyces cerevisiae by repressing in aerobic conditions genes that are expressed when oxygen is limited. The kinetics growth of lineages of Kluyveromyces lactis MW270-7B and its derivative mutant K. lactis MW270- 7B rox1Δ was carry out on YNB media (Yeast Nitrogen Base) containing fermentative carbon sources (glucose and lactose) or non fermentative carbon sources (glycerol and ethanol) to determine the growth profile on this sources. Besides both yeasts had its fermentative capacity researched in the presence of an inhibitor of electron chain carrier, antimicin A on YPD (yeast extract, peptone and glucose). The results indicated that the absence of KlROX1 didn't favor the growth in fermentative carbon sources, but it favored in non fermentative carbon sources. The more fermentative capacity of K. lactis rox1Δ was confirmed for the higher ethanol yield for biomass detected in the absence and presence of antimicin A (10 and 20 µM). The lineages rox1 mutant and control were also cultivated on YNB plus glucose under aerobic continuous culture (D = 0,01 h-1) and later they were submitted to a hypoxic condition for 9 hours. Samples were collected every 3 hours for analysis of the expression of putative target genes of KlRox1p as well as analysis of ethanol and of the enzymatic activity of the alcohol desidrogenase (ADH). For the analysis of gene expression, recognition sequences for KlRox1p were researched in silico in the promoters of the genes KlAAC3, KlCOX5B, KlHEM13, KlHAP1, KlRAG1 and KlADH1 and they were found diverging of two nucleotide of the consensus sequence YYYATTGTTCTC. KlRox1p showed to have negative effect on expression of KlAAC3 and KlHEM13, but it didn't seem to act on KlCOX5B. The ethanol concentration, the activity of ADH and the expression of KlADH1 evidenced the metabolism more fermentative of K. lactis rox1Δ on aerobic and hypoxic conditions. And in a way not known, KlRox1p acts on expression of KlHAP1 and KlRAG1. The influence of KlRox1p on expression of KlADH1, KlRAG1 and KlHAP1 suggests the participation of KlRox1p in the control of key points of the fermentative metabolism: entrance of the glucose that determine the flow for the maintenance of fermentative way, as well as in the reductive reaction end that culminates with the ethanol production. The existence of genes that showed to be regulated negatively by KlRox1p in aerobic condition, like KlAAC3 and KlHEM13, indicates the existence in K. lactis of mechanism of transcriptional regulation for oxygen that intends to better use the oxygen in a limit condition, similar to the function of Rox1p in Saccharomyces cerevisiae. However that mechanism seems not just to be related with the concentrations of oxygen, but also with the carbon sources used, fermentative sources or non fermentative sources. / Esse trabalho é uma contribuição aos estudos sobre a função de KlRox1p no metabolismo fermentativo de Kluyveromyces lactis. Rox1p é conhecida em Saccharomyces cerevisiae por reprimir, em aerobiose, genes que são expressos em condição limitante de oxigênio. A cinética de crescimento de linhagens de Kluyveromyces lactis MW270-7B e sua mutante derivativa K. lactis MW270-7B rox1Δ foi realizada em meio YNB (Yeast Nitrogen Base) contendo fontes de carbono fermentáveis (glicose e lactose) ou não fermentáveis (glicerol e etanol) para determinar o perfil de crescimento nessas fontes. Além disso, ambas as linhagens tiveram sua capacidade fermentativa avaliada na presença de um inibidor da cadeia transportadora de elétrons, antimicina A, em meio YPD (extrato de levedura, peptona e glicose). Os resultados indicaram que a ausência de KlROX1 não favoreceu o crescimento em fontes de carbono fermentáveis, mas favoreceu em fontes de carbono não fermentáveis. A maior capacidade fermentativa de K. lactis rox1Δ foi confirmada pelo maior rendimento de etanol por biomassa detectada, na ausência e presença de antimicina A (10 e 20 µM). As linhagens mutante rox1 e controle também foram cultivadas em YNB e glicose em regime contínuo (D= 0,1h-1) sob aerobiose e, em seguida, submetidas à hipoxia por 9 horas. Amostras foram coletadas a cada 3 horas para análise da expressão de possíveis genes alvos de KlRox1p, bem como de etanol e da atividade da álcool desidrogenase (ADH). Para análise da expressão gênica, sequências de reconhecimento por KlRox1p foram pesquisadas in silico nos promotores dos genes KlAAC3, KlCOX5B, KlHEM13, KlHAP1, KlRAG1 e KlADH1 e foram encontradas divergindo de dois nucleotídeos da sequência consenso YYYATTGTTCTC. KlRox1p mostrou ter efeito negativo sobre as expressões de KlAAC3 e KlHEM13 em aerobiose, mas não pareceu atuar sobre KlCOX5B. A concentração de etanol, a atividade da ADH e a expressão de KlADH1 evidenciaram o metabolismo mais fermentativo de K. lactis rox1Δ tanto em aerobiose quanto em hipoxia. E, por um mecanismo ainda desconhecido, KlRox1p atuou sobre as expressões de KlHAP1 e KlRAG1. A influência de KlRox1p na expressão de KlADH1, KlRAG1 e KlHAP1, sugere a participação de KlRox1p no controle de pontos chaves do metabolismo fermentativo: entrada da glicose, que determina o fluxo para a manutenção de uma via fermentativa, bem como na reação redutiva final, que culmina com a formação de etanol. A existência de genes que mostraram ser regulados negativamente por KlRox1p em aerobiose, como KlAAC3 e KlHEM13, indica a existência em K. lactis de mecanismo de regulação transcricional por oxigênio que visa melhor utilizar o oxigênio numa condição limitante, semelhante à função de Rox1p em Saccharomyces cerevisiae. Esse mecanismo, entretanto, parece não estar relacionado apenas com as concentrações de oxigênio, mas também com metabolismo de carbono fermentável ou não fermentável.