Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_debora_pedroso.pdf: 815380 bytes, checksum: db4c202243281a1794848721f2e3153e (MD5) Previous issue date: 2012-03-16 / Chagas Disease was discovered by Carlos Chagas in 1909. It is an hematological and tissue infection caused by flagellate protozoan Trypanosoma cruzi, which is transmitted by an hematophagous insect. In addition to transmission by the vector this parasitic infection can be acquired by humans in other ways, such as blood transfusion, laboratory accidents, organ transplants, oral transmission by penetration of trypomastigotes through oral mucosa or through placenta. Although blood transmission shows a decline after implementation of donor screening this is still present, and therefore needs constant vigilance. In view of this, the study aims to describe from a retrospective analysis a serological profile for Chagas disease in blood donors from the municipality of Santiago located in the northwestern state of Rio Grande do Sul, in which high levels of endemic disease appeared in past decades. The results of serological blood donors from the Blood Bank of municipality of Santiago were analyzed during the period 2001-2011. Of the 10,164 units of blood collected, with an average of 1,016 units per year, 2.68% were reactive to T. cruzi, being the main cause of discarding blood bags. The higher frequency of positive cases occurred in men, with mean age of 38.84 years old, coming from the urban area of the municipality of Santiago. Regarding the positive cases among women, 25% were younger than 31 years old. From these results, an expressive serum reactivity to T. cruziamong donors in this region could be noticed during the study period, more frequently in men over thirty years old. Although serological screening detects the majority of cases positive for Chagas disease, it does not make impossible transmission via transfusion. Therefore it is important to devise epidemiological strategies to determine the main form of infection that is occurring in the region. / A doença de Chagas, descoberta em 1909 por Carlos Chagas, é uma infecção tecidual e hematológica causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi, esse protozoário é transmitido por intermédio do inseto hematófago. Além da transmissão pelo vetor a infecção parasitária pode ser adquirida pelo homem por outras vias, tais como transfusões sanguíneas, acidentes de laboratório, transplantes de órgãos, transmissão oral através da penetração de tripomastigotas pela mucosa oral e por via placentária. Embora a transmissão transfusional mostre um declínio após a implementação da triagem de doadores, esta ainda permanece presente, necessitando, portanto, de constante vigilância. Em vista disso, o presente estudo visa descrever,a partir de uma análise retrospectiva, o perfil sorológico para doença de Chagas em doadores de sangue da cidade de Santiago, localizada na região noroeste do estado do Rio Grande do Sul, na qual a endemia figurava em índices elevados em décadas passadas.Para isso foram analisados os resultados sorológicos de doadores de sangue do Banco de sangue de Santiago durante o período de 2001-2011. Das 10.164 unidades de bolsas de sangue coletadas, com uma média de 1.016 bolsas de sangue por ano, destas 2,68% apresentaram reatividade para T. cruzi, sendo a primeira causa de descarte de bolsas de sangue. A maior frequência de casos positivos ocorreu em homens, com idade média de 38,84 anos, procedentes da zona urbana do município de Santiago. Com relação aos casos positivos do sexo feminino 25% delas tinham idade inferior a 31 anos. A partir destes resultados constatou-se a presença expressiva de soro-reatividade a T. cruzi entre os doadores da região, sendo mais frequente em homens acima de 30 anos. Embora a triagem sorológica detecte a maioria dos casos positivos para doença de Chagas, isso não inviabiliza totalmente a transmissão via transfusional, fazendo-se importante traçar estratégias epidemiológicas para determinar a principal forma de infecção que está ocorrendo na região.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_francine_sinnott.pdf: 966836 bytes, checksum: 31b75fbc3400564832438403aff0c6e0 (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / Neosporosis is a disease caused by the obligate intracellular parasite Neospora caninum, causing reproductive disorders, such abortions and sltillbirths in several animals, being considered a major cause of abortion in cattle worldwide. The serological standard diagnosis is indirect fluorescent-antibody test (IFAT), but due to morphological and antigenic similarities of N. caninum with other protozoa of the phylum Apicomplexa, such as Toxoplasma gondii and Sarcocystis spp., false positive results may occur. To improve the diagnosis of this disease and reduce cross-reactions with other coccidian, the use of specific recombinant proteins of N. caninum has been described. The Nc-p43 surface protein encoded by the gene NcSRS2 is specific of the parasite and is present in tachyzoites and bradyzoites of N. caninum. Indirect ELISA format assays have been developed for the diagnosis of neosporosis, however the blocking ELISA may present additional level of specificity. In this context, the objective of this study was develop and standardize a blocking ELISA (b-ELISA) for the diagnosis of bovine neosporosis. To this end, NcSRS2 gene, previously cloned into plasmid vector, was used to produce the recombinant protein (rNc-p43) in prokaryotic expression system Escherichia coli. The purified protein was used to produce a polyclonal antibody (pAb/rNc-p43) in rabbit and this was further purified and characterized by indirect ELISA. For the development of the b-ELISA were used a total of 152 cattle sera (71 negative and 81 positive) and 10 positive cattle sera for toxoplasmosis, all previously confirmed by IFI. As controls, a pool of all positive sera and a pool of all negative sera were used, in addition to a normal calf serum, confirmed by IFAT, used with negative reference sera. The percent inhibition for each sample was determined by comparing the optical density (OD) mean of test sera to the OD mean of negative reference sera. The cut-off value was determined as the percent inhibition of negative pool. The results suggest that the b-ELISA is a tool that can be used for diagnosis of bovine neosporosis, with a sensitivity of 98.7% and specificity of 88.7% when compared with the IFAT. Antibodies against T. gondii present in positive samples for toxoplasmosis were not able to recognize the rNc-p43. The b-ELISA showed that serum samples positive for N. caninum is able to prevent the binding of pAb/rNc-p43, enabling detect different class of antibodies in a single assay. This technique is / Neosporose é a doença causada pelo parasito intracelular obrigatório Neospora caninum, causando problemas reprodutivos, como abortos e mortalidade neonatal em diversos animais, sendo considerada uma das principais causas de abortos em bovinos em todo o mundo. O diagnóstico sorológico padrão é a imunofluorescência indireta (IFI), porém devido a semelhanças morfológicas e antigênicas de N. caninum com outros protozoários do filo Apicomplexa, como Toxoplasma gondii e Sarcocystis spp., pode ocorrer resultados falsos positivos. Para melhorar o diagnóstico desta parasitose e diminuir as reações cruzadas com outros coccídeos, à utilização de proteínas recombinantes específicas de N. caninum vem sendo descrita. A proteína de superfície Nc-p43 codificada pelo gene NcSRS2 é específica do parasito e está presente em taquizoítos e bradizoítos de N. caninum. Ensaios no formato ELISA indireto vêm sendo desenvolvidos para o diagnóstico da neosporose, no entanto os ELISAs de bloqueio podem apresentar nível adicional de especificidade. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e padronizar um ELISA no formato bloqueio (b-ELISA) para o diagnóstico da neosporose bovina. Para tal, o gene NcSRS2, previamente clonado em vetor plasmidial, foi utilizado para produzir a proteína recombinante (rNc-p43) em sistema de expressão procarioto Escherichia coli. A proteína purificada foi utilizada para produzir um anticorpo policlonal (pAb/rNc-p43) em coelho e este foi posteriormente purificado e caracterizado através de ELISA indireto. Para o desenvolvimento do b-ELISA foram utilizados um total de 152 soros bovinos (71 negativos e 81 positivos) e 10 soros bovinos positivos para toxoplasmose, todos previamente confirmados por IFI. Como controles, um pool de todos os soros positivos e um pool de todos os soros negativos foi utilizado, além de um soro normal de terneiro, confirmado através de IFI, utilizado como controle negativo referencial. O percentual de inibição de cada amostra foi determinado pela comparação da média da densidade óptica (DO) de cada soro teste com a média da DO do controle negativo referencial. O ponto de corte foi determinado pelo percentual de inibição do pool negativo. Os resultados obtidos sugerem que o b-ELISA é uma ferramenta que pode ser utilizada no diagnóstico da neosporose bovina, com sensibilidade de 98.7% e especificidade de 88.7%, quando comparado com a IFI. Os anticorpos contra T. gondii presentes nas amostras positivas para toxoplasmose não foram capazes de reconhecer a rNc-p43. O b-ELISA demonstrou que as amostras de soros positivas para N. caninum são capazes de impedir a ligação do pAb/rNc-p43, possibilitando a detecção de diferentes classes de anticorpos em um único ensaio. Esta técnica pode ser uma alternativa de triagem para a detecção de anticorpos contra N. caninum em populações de bovinos.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_diene_de_borba_pacheco.pdf: 1130271 bytes, checksum: e77a03d669b55e89749bb0d6922531eb (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Neosporosis is a disease caused by the apicomplexan parasite Neospora caninum, which is closely related to Toxoplasma gondii. N. caninum infection represents an important cause of reproductive failure in sheep, goats, horses, and cattle worldwide. The diagnosis of neosporosis is based on the detection of pathogen-specific antibodies in animal sera or the presence of tissue cysts. However, morphological similarities and serological cross-reactivity between N. caninum and T. gondii can result in the misdiagnosis. In this study, the N. caninum tachyzoite surface protein Ncp-43 was expressed in a recombinant form to elicit polyclonal antibodies (pAb) response. The pAb was purified and conjugated to horseradish peroxidase (HRP) or fluorescein isothiocyanate (FITC) to detect the recombinant and native Ncp-43 proteins, respectively. The pAb and pAb/HRP were able to recognize rNcp-43 by Dot blot and ELISA, and pAb/FITC immunolabeled the apical complex of tachyzoites. A blocking enzyme-linked immunosorbent assay (b-ELISA) was performed to evaluate pAb/HRP as a diagnostic tool. The mean percent inhibition for the positive and negative serum samples from cattle with neosporosis was significantly different (P < 0.0001). These results suggest that the pAb may bind to the same epitopes of Ncp-43 as anti-N. caninum antibodies in the positive samples tested. The b-ELISA using the pAb/HRP can facilitate diagnostic testing for neosporosis, since fewer steps are involved and cross-reactivity with secondary antibodies is avoided. In summary, this report describes the production of antibodies against N. caninum, and evaluates the potential of these tools for the development of new diagnostic tests for neosporosis. / Neosporose é a doença causada pelo parasito apicomplexa Neospora caninum, o qual é intimamente relacionado a Toxoplasma gondii. A infecção por N. caninum representa uma importante causa de falha reprodutiva em ovinos, caprinos, equinos e bovinos ao redor do mundo. O diagnóstico da neosporose é baseado na detecção de anticorpos específicos contra o patógeno em soros, ou a presença de cistos teciduais em animais. No entanto, as semelhanças morfológicas e a possível reatividade sorológica cruzada entre N. caninum e T. gondii pode resultar no diagnóstico errôneo. Neste estudo, a proteína de superfície Ncp-43 de taquizoítos de N. caninum, foi expressa de forma recombinante em Escherichia coli e utilizada para produção de anticorpos policlonais (pAb). O pAb foi purificado e conjugado a peroxidase (HRP) e isotiocianato de fluoresceína (FITC) para detectar as proteínas recombinantes e nativas Ncp-43, respectivamente. pAb e pAb/HRP foram capazes de reconhecer rNcp-43, o que foi avaliado pelas técnicas de Dot blot e ELISA enquanto pAb/FITC se mostrou eficiente na imunomarcação do complexo apical de taquizoítos. Um ensaio imunoenzimático de bloqueio (b-ELISA) foi realizado para avaliar a performance do pAb/HRP como ferramenta de diagnóstico. A porcentagem de inibição média para as amostras de pool de soros positivos e o pool de negativos de bovinos com neosporose foi significativamente diferente (P <0,0001). Estes resultados sugerem que o pAb pode ligar-se aos mesmos epítopos da Ncp-43 que os anticorpos anti-N. caninum de amostras positivas testadas. O b-ELISA utilizando o pAb/HRP representa uma opção interessante aos testes de diagnóstico disponíveis para a neosporose, uma vez que menos passos estão envolvidos na sua realização e seu formato evita a reatividade cruzada com anticorpos anti-espécie específicos. Em resumo, este trabalho descreve a produção de anticorpos contra N. caninum, e avalia o potencial dessas ferramentas para o desenvolvimento de novos testes diagnósticos para neosporose.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_beatris_cademartori.pdf: 636391 bytes, checksum: 43565196211ab5284ee321f2b82e0430 (MD5) Previous issue date: 2007-06-28 / The toxoplasmosis acquired during pregnancy of benign course in imunocompetentes patients and asymptomatic in 85% of the cases may infect the fetus and result in congenital infection. Although most of the newborns do not present symptoms or clinical signs, there may be sequelae during the childhood and adult life, being the corioretinitis the most frequent one. Among the strategies to prevent congenital toxoplasmosis we can find the education for health and the preconception trial, which aim is to reduce the exposition to the risk factors that may lead to an infection by T. gondii, to detect and to treat acute infection in pregnant woman. The aims of this study were to evaluate the prevalence and risk of congenital transmission by Toxoplasma gondii, through serological analysis of the pregnant women and also through their knowledge about the zoonose transmission routes, to check the possible association between the soropositivity of the pregnant women and their exposition to the infection risk factors, and also to compare the Chemiluminescence and Indirect Immunofluorescence techniques in the diagnosis of the toxoplasmosis in the studied sample. A transversal study was conducted, with 425 pregnant women who were attending prenatal care in public health centres of Pelotas (RS-Brazil), during the period of May to November 2006. It was verified a T. gondii soroprevalence of (IgG) 54,8% and it was not detected the presence of IgM antibodies. The analysis of the risk factors showed a significant association (p<0.05) between the soropositivity of the pregnant women and their age, the handle of raw meat, the intake of raw vegetables, raw or undercooked meat and raw or nonpasteurized milk and direct contact with the soil. The Logistic Regression Model confirmed the above associations to the intake of raw or undercooked meat (OR=1.85) and to the direct contact with the soil (OR=2.67). The interaction with cats did not present a significant association with the T. gondii soropositivity patients. It was observed that the pregnant women who were interviewed did not know much about the disease and its main sources of infection. The Chemiluminescence technique proved to be an adequate one in the routine diagnosis of the T. gondii infection as, besides being a practical technique, it showed results comparable to the ones of the Indirect Immunofluoresence, sensibility, specificity and accuracy. The results indicate the necessity of implementing T. gondii primary prevention programmes for the pregnant women who as a way of reducing the risks of congenital toxoplasmosis. / A toxoplasmose adquirida durante a gestação, de curso benigno em pacientes imunocompetentes e assintomática em 85% dos casos, pode ser transmitida para o feto e resultar em infecção congênita. Embora maioria dos recém- nascidos não apresente sintomas ou sinais clínicos, pode evoluir para seqüelas na infância e vida adulta, sendo que a coriorretinite é a lesão mais freqüente. Entre as estratégias de prevenção da toxoplasmose congênita incluem-se a educação em saúde e a triagem pré-natal, com o objetivo de reduzir a exposição aos fatores de risco para a infecção por Toxoplasma gondii, detectar e tratar a infecção aguda na gestante. Os objetivos foram avaliar a prevalência e o risco de transmissão congênita por T. gondii, através da análise do perfil sorológico das mesmas e do conhecimento sobre as formas de transmissão da zoonose, verificar possíveis associações entre soropositividade das gestantes e a exposição aos fatores de risco da infecção, além de comparar as técnicas de Quimioluminescência e Imunofluorescência Indireta para o diagnóstico sorológico da toxoplasmose na amostra estudada. Foi realizado um estudo transversal, com 425 gestantes que realizaram o pré-natal nos Postos de Saúde de Pelotas-RS, no período de maio a novembro de 2006. Constatou-se uma soroprevalência (IgG) de 54,8% para T. gondii e não foi detectado a presença de anticorpos IgM. Na análise dos fatores de risco foi verificada associação significativa (p<0,05) entre a soropositividade das gestantes e a idade, manuseio de carne crua, consumo de vegetais crus, de carnes cruas ou mal cozidas, de leite cru não pasteurizado e contato direto com o solo. Através do modelo de regressão logística, essa associação foi confirmada para o consumo de carnes cruas ou mal cozidas (OR=1,85) e o contato direto com o solo (OR=2,67). O convívio com gatos, não apresentou associação significativa com a soropositividade para T. gondii nas pacientes estudadas. Constatou-se elevado desconhecimento da doença e das principais fontes da infecção pelas gestantes entrevistadas. A técnica de Quimioluminescência mostrou-se adequada ao diagnóstico de rotina da infecção por T. gondii, pois, além da praticidade, apresentou de sensibilidade, especificidade e acurácia comparáveis aos da Imunofluorescência Indireta. Os resultados obtidos indicam a necessidade da implantação de programas de prevenção primária da infecção por T. gondii para gestantes, a fim de reduzir o risco da toxoplasmose congênita.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_carolina_mascarenhas.pdf: 23937030 bytes, checksum: 4ede460c8b3f9046c6af286984b4b306 (MD5) Previous issue date: 2008-07-22 / Paroaria coronata (red-crested cardinal) occurs only of South America. The species is not in danger of extinction, but it is appreciated by the illegal trade in wild animals. His parasite fauna is little known and has been recorded only one Nematoda and three Phthiraptera. The diet is mainly based greasses seeds, but can consume small fruit and insects. The study aimed to identify helminths and arthropods associated with red-crested cardinal and for that were examined wild birds, captives and of undetermined origin, totaling 40 specimes. The wild birds and undetermined origin were the most parasitized. The helminthfauna was composed of Aproctella carinii, Dispharynx nasuta, Capillaria sp. Diplotriaena sp. (Nematoda); Tanaisia oviaspera, Tanaisia valida, Tanaisia sp., Prosthogonimus ovatus (Trematoda); Orthoskrjabinia sp. (Cestoda); Mediorhynchus sp. (Acanthocephala). Tanaisia sp. was most prevalent (10%) and more abundant (0.48), D. nasuta and Orthoskrjabinia sp. occurred with greater mean intensity of parasitism (5 helminths/host). The arthropodfauna was represented by Myrsidea coronatae, Philopterus sp. and Brueelia sp. (Phthiraptera); Ptilonyssus sairae and Sternostoma pirangae (Gamasida), where M. coronatae and P. sairae were the most prevalent with 65% and 50%, respectively. All helminths are reported for the first time in P. coronata, Orthoskrjabinia sp. is recorded for the first time in Brazil; A. carinii, Diplotriaena sp., T. valida, T. oviaspera and Mediorhynchus sp. are cited for the first time in the Rio Grande do Sul state. The helminthfauna found in P. coronata, indicates that the species is omnivorous eating habits. Among the arthropods, Philopterus sp., Brueelia sp., P. sairae and S. pirangae have your first record infecting P. coronata; M. coronatae is recorded for the first time in Brazil, this report marks the first occurrence of S. pirangae in Brazil and the first of P. sairae in the Rio Grande do Sul state. / Paroaria coronata (cardeal) ocorre apenas na América do Sul. A espécie não está em perigo de extinção, mas é visada pelo comércio ilegal de animais silvestres. Sua fauna parasitária é pouco conhecida, tendo sido registrado somente um Nematoda e três Phthiraptera. A dieta desta ave baseia-se principalmente em sementes de gramíneas, mas pode consumir pequenos frutos e insetos. O estudo teve por objetivo identificar os helmintos e artrópodes associados à P. coronata e para tal foram examinadas aves silvestres, cativas e de origem indeterminada, totalizando 40 espécimes. As aves silvestres e de origem indeterminada foram as mais parasitadas. A helmintofauna esteve composta por Aproctella carinii, Dispharynx nasuta, Capillaria sp. Diplotriaena sp. (Nematoda); Tanaisia oviaspera, Tanaisia valida, Tanaisia sp., Prosthogonimus ovatus (Trematoda); Orthoskrjabinia sp. (Cestoda); Mediorhynchus sp. (Acanthocephala). Tanaisia sp. foi mais prevalente (10%) e mais abundante (0,48), D. nasuta e Orthoskrjabinia sp. ocorreram com maior intensidade média de parasitismo (5 helmintos/hospedeiro). A artropodofauna esteve representada por Myrsidea coronatae, Philopterus sp. e Brueelia sp. (Phthiraptera); Ptilonyssus sairae e Sternostoma pirangae (Gamasida), onde M. coronatae e P. sairae foram os mais prevalentes com 65% e 50%, respectivamente. Todos os helmintos são relatados pela primeira vez em P. coronata, Orthoskrjabinia sp. é registrado pela primeira vez no Brasil; Aproctella carinii, Diplotriaena sp., Tanaisia valida, Tanaisia oviaspera e Mediorhynchus sp. são citados pela primeira vez no Rio Grande do Sul. A helmintofauna encontrada em P. coronata, indica que a espécie tem hábito alimentar onívoro. Entre os artrópodes, Philopterus sp., Brueelia sp., P. sairae e S. pirangae são citados pela primeira vez parasitando P. coronata; M. coronatae é registrado pela primeira vez no Brasil; este relato caracteriza a primeira ocorrência de S. pirangae no Brasil e a primeira de P. sairae no Rio Grande do Sul.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_dani_araujo.pdf: 981441 bytes, checksum: 2de9e835165e500d623b9edd351edb76 (MD5) Previous issue date: 2011-06-08 / Synantropic flies frequently reach the status of plague in urban and rural areas, assuming an important role regarding its vectorial ability and nuisance to men and animals. Therefore, it is necessary to know their natural enemies in order to achieve a satisfactory control of these dipterans. The success of the biological control as an alternative to the Integrated Pest Management depends on the evaluation of enemies as potential control agents through the development of breeding techniques and laboratory evaluations. Considering that, this study had as objective to understand the phenology of Spalangia endius as well as the parasitoidism of this species using M. domestica, Muscina stabulans and Chrysomya megacephala as hosts, being the last two potential alternative hosts. Colonies of S. endius, M. domestica, M. stabulans e C. megacephala were kept in climatized chamber, at 26ºC ± 2, relative air humidity ≥70% and 12 hours photophase. In order to know the phenology of S. endius, 360 pupae of Musca domestica with ages ranging from 24 to 48 hours were exposed to 15 couples of S. endius for a period of 48 hours at 26ºC ± 2. These pupae were kept in B.O.D chambers at the same conditions of the climatized chamber, where 15 specimens were dissecated to observe the stage and the development time of the hymenopteran. The phenology allows concluding that S. endius presents a development cycle (egg-adult) of 19 to 31 days, with an incubation period of 24 hours, the development of the larvae of S. endius occurred in the 12 subsequent days, in which a series of morphological alterations were observed. The pre-pupae stage occurred in the tenth day where the movement ceased and the meconium elimination begun. The pupal stage occurred in at least 8 and at maximum 12 days, ending the cycle with the emergence of males and around 24 hours later, the emergence of females. The parasitoidism on thet host species was higher in M. domestica with 63%, followed by M. stabulans and C. megacephala with 27,5% and 16,5% respectively. The morphometrical measures confirmed the preference for M. domestica due to the higher size of the parasitoids that developed in this host. There was no significant difference regarding to the size of the parasitoids that developed in pupae of M. stabulans and C. megacephala as well as there was no influence of the sex in the size of the parasitoid. The data here obtained on the parasitoidism of S. endius in the different hosts show that under the studied conditions the best host is M. domestica. Based on the phenology of S. endius, further detailed studies can be carried out in order to optimize the breeding of this parasitoid in laboratory conditions, allowing the biological control of M. domestica as well as M. stabulans e C. megacephala. / Moscas sinantrópicas frequentemente atingem status de praga em áreas urbana e rural, assumindo um papel importante quanto ao incômodo e capacidade vetorial para o homem e animais.Portanto, para um controle satisfatório destes dípteros é necessário conhecer seus inimigos naturais. O sucesso do controle biológico como uma técnica inserida em um programa de Manejo Integrado de Pragas depende da avaliação de inimigos, como potenciais agentes para controle biológico, através do desenvolvimento de técnicas de criação e avaliações em laboratório. Por estas razões este estudo objetivou conhecer a fenologia de Spalangia endius bem como o parasitoidismo desta espécie utilizando como hospedeiros M. domestica, Muscina stabulans e Chrysomya megacephala, sendo as duas últimas potenciais hospedeiros alternativos. Para realização dos experimentos foram mantidas colônias de S. endius, M. domestica, M. stabulans e C. megacephala em câmara climatizada, 26ºC ± 2°C, umidade relativa ≥70% e fotofase de 12 horas. Para conhecer a fenologia de S. endius, 360 pupas de Musca domestica com idade de 24 a 48 horas foram expostas a 15 casais de S. endius por um período de 48 horas a 26ºC ± 2°C. Estas pupas foram mantidas em estufa B.O.D nas mesmas condições da câmara de criação, onde diariamente dissecava-se 15 espécimes para observar o estágio e tempo de desenvolvimento do himenóptero. A fenologia de S. endius em pupas de M. domestica apresentou um ciclo de desenvolvimento (ovo-adulto) de 19 a 31 dias, cujo período de incubação foi de 24 horas, o desenvolvimento de larvas de S. endius ocorreu nos 12 dias subsequentes nos quais, uma série de modificações morfológicas foi observada. O estágio de pré-pupa deu-se no décimo dia onde cessa a movimentação e inicia a eliminação de mecônio. O estágio pupal ocorreu em no mínimo oito e máximo 12 dias, finaliza o ciclo com a emergência de machos e cerca de vinte quatro horas após, há emergência das fêmeas. O parasitoidismo sobre as espécies hospedeiras foi maior em M. domestica com 63% seguido de M. stabulans e C. megacephala com 27,5% e 16,5%, respectivamente. As medidas morfométricas confirmaram a preferência por M. domestica devido ao maior tamanho dos espécimes desenvolvidos neste hospedeiro. Não houve diferença significativa quanto ao tamanho dos parasitóides que se desenvolveram em pupas de M. stabulans e C. megacephala bem como não houve influencia no tamanho do parasitóide em relação ao sexo. Os dados obtidos sobre o parasitismo de S. endius nos diferentes hospedeiros indicam que nas condições deste estudo o hospedeiro mais adequado é M. domestica. Com base na fenologia de S. endius estudos pormenorizados poderão ser conduzidos afim de aprimorar a criação deste parasitóide em condições de laboratório permitindo viabilizar o controle biológico de M. domestica bem como de M. stabulans e C. megacephala.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_luciano_avancini.pdf: 1128794 bytes, checksum: 84f53c68ac05e202ba01bcdff9c6d5cb (MD5) Previous issue date: 2009-12-23 / Vanellus chilensis is a bird species of the family Charadriidae distributed across Central and South America. Despite its high abundance and broad distribution, there are few records of parasites on this species. Aiming to identify the helminths and arthropods that parasitize V. chilensis in southern Brazil, twenty eight birds were necropsied. For collection of ectoparasites, the birds were individually washed in water containing detergent. After that, they were necropsied and their organs were examined for helminths under a stereomicroscope. The helminths found and its respective prevalence, mean abundance and mean intensity were: Brevithominx asperodorsus (Enoplida, Capilariidae) 53.6%, 4.5 and 8.4; Heterakis psophiae (Oxyurida, Heterakidae) 39.3%, 1.0 and 2.55; Dispharynx nasuta (Spirurida, Acuariidae) 28.6%, 4.11 and 14.38; Echinostoma aphylactum (Echinostomida, Echinostomatidae) 17.9%, 0.64 and 3.6; Stomylotrema vicarium (Plagiorchiida, Stomylotrematidae) 10.7%, 0.25 and 2.33; Neivaia cymbium (Cyclocoeloidea, Cyclocoelidae) 7.1%, 0.14 and 2.0; Gyrocoelia perversa (Cyclophyllidea, Dioecocestidae) 60.7%. The Phthiraptera found were Actornithopilus sp. (Amblycera, Menoponidae) and Quadraceps guimaraesi (Ischnocera, Philopteridae). Another arthropod collected was the nasal mite Rhinonyssus sp. (Acarina, Rhinonyssidae). H. psophiae is cited for the first time parasitizing the order Charadriiformes in RS. B. asperodorsus, E. aphylactum, N. cymbium represent new records for Charadiidae in the State. This is the first report of natural infection in Charadriidae by the parasite S. vicarium in the region of study. The cestode G. perversa and the nematode D. nasuta are cited for the first time parasitizing V. chilensis in RS. The lice Actornithopilus sp. and Quadraceps guimaraesi are new records in RS as parasites of V. chilensis, which is also reported as a new host for the nasal mite Rhinonyssus sp / Vanellus chilensis, quero-quero, tem distribuição na América do Sul e América Central, é uma ave muito comum na região sul do RS. Há poucos relatos a respeito de parasitos nesta espécie, o que incentivou o desenvolvimento deste trabalho. Com o objetivo de conhecer os helmintos e artrópodes que ocorrem em V. chilensis foram examinadas 28 aves, as quais foram lavadas, individualmente, em água com detergente para obtenção dos ectoparasitos e após necropsiadas para a coleta de helmintos. Os helmintos encontrados e respectivas prevalências, abundância média e intensidade média foram Brevithominx asperodorsus (Enoplida, Capilariidae) 53,6%, 4,5 e 8,4; Heterakis psophiae (Oxyurida, Heterakidae) 39,3%, 1,0 e 2,55; Dispharynx nasuta (Spirurida, Acuariidae) 28,6%, 4,11 e 14,38; Echinostoma aphylactum (Echinostomida, Echinostomatidae) 17,9%, 0,64 e 3.6; Stomylotrema vicarium (Plagiorchiida, Stomylotrematidae) 10,7%, 0,25 e 2,33; Neivaia cymbium (Cyclocoeloidea, Cyclocoelidae) 7,1%, 0,14 e 2,0; Gyrocoelia perversa (Cyclophyllidea, Dioecocestidae) 60,7%. Os Phthiraptera encontrados foram Actornithopilus sp. (Amblycera: Menoponidae) e Quadraceps guimaraesi (Ischnocera, Philopteridae), e o ácaro nasal Rhinonyssus sp. (Acarina: Rhinonyssidae). B. asperodorsus, E. aphylactum, N. cymbium, tem seu primeiro registro na família Charadriidae para o RS, H. psophiae tem seu primeiro registro na ordem Charadriiformes para o RS. Este é o primeiro registro de infecção natural por S. vicarium em Charadriidae para o RS. G. perversa e D. nasuta tem seu primeiro registro em V. chilensis no RS.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_vanusa_hora.pdf: 894481 bytes, checksum: 1cff4e13f238f761e9054b5864d2655e (MD5) Previous issue date: 2006-10-30 / Schistosomiasis, caused by Schistosoma mansoni, is the second most prevalent parasitic disease worldwide causing chronic disease in millions of people in developing countries. Similarly, fascioliasis, caused by the trematode Fasciola hepatica, represents a recognized unsolved agricultural problem responsible for economic losses as well as causing a significant number of human infections worldwide. Although chemotherapy for both parasites has been available, this approach has limitations, including high reinfection rates in endemic areas. Vaccines represent the most attractive long-term alternative to invert this scenario. Accordingly, the World Health Organization selected S. mansoni fatty acid-binding protein 14kDa (Sm14) as one out of two anti-schistosome vaccine priority candidates for human clinical trials. Furthermore, Sm14 is the only vaccine candidate to have been shown to afford significant immune protection against both of the above-mentioned helminthes. The objective of this study was to develop and evaluate in mice a recombinant subunit vaccine containing the Sm14 fused to the B subunit of the heat-labile enterotoxin of Escherichia coli (LTB), which is a potent immunoadjuvant; furthermore, was describe the production and characterization of monoclonal antibodies (MAbs) against the Sm14 for use as a tool to detect and characterize Sm14 and for development of future diagnostic test. The ltb and sm14 gene were obtained by PCR amplification from E. coli DNA and plasmid pAESm14, respectively, and fused by PCR. The recombinant chimera was expressed in E. coli and purified by nickel affinity chromatography. Groups of outbreed Swiss mice were immunized with three footpad doses of either rLTB/Sm14, rLTB/Sm14 plus aluminum hydroxide (Al(OH)3), rSm14 plus Al(OH)3, rLTB or Al(OH)3. Levels of protection were determined by number of worms recovered after S. mansoni cercarial challenge. The pooled sera of immunized mice were evaluated by ELISA and Western blot. The results showed that the chimera protein was able to elicit specific antibody production to rSm14 and rLTB, however the use of LTB as adjuvant to rSm14 immunization failed to enhance protection against challenge. Furthermore, seven MAbs were obtained after immunization of BALB/c mice with rLTB/Sm14. MAbs isotyping revealed that five were of the isotype IgG1, one belonged to the IgG2b isotype and another to the IgM isotype. These MAbs will be usefull for monitoring protein expression in recombinant systems, protein stability and may have potential for developing diagnostic test. / A esquistossomose, causada por Schistosoma mansoni, é a segunda doença parasitária mais prevalente no mundo causando doença crônica em milhões de pessoas em países em desenvolvimento. Semelhantemente, a fasciolose, causada pelo trematódeo Fasciola hepatica, representa um reconhecido problema agrícola responsável por perdas econômicas assim como causa um significante número de infecções em humanos por todo mundo. Embora a quimioterapia para ambos os parasitas esteja disponível, ela tem apresentado limitações, incluindo altas taxas de reinfecção em áreas endêmicas. Vacinas representam a alternativa mais atraente para inverter este cenário. Assim, a Organização Mundial da Saúde selecionou a proteína ligadora de ácidos graxos 14kDa de S. mansoni (Sm14) como uma de duas candidatas à vacina anti-esquistossomose prioritárias para triagem clínica em humanos. Além disso, a Sm14 é a única proteína candidata a vacina que induz imunidade protetora significativa contra ambos os helmintos acima mencionados. O objetivo deste estudo foi desenvolver e avaliar em camundongos uma vacina de subunidade contendo a Sm14 fusionada com a subunidade B da enterotoxina termolábil de Escherichia coli (LTB), a qual é um potente imunoadjuvante; além disso, foi descrever a produção e caracterização de anticorpos monoclonais (MAbs) contra a Sm14 para usa-los como uma ferramenta para detectar e caracterizar a Sm14 e para o desenvolvimento de futuro teste diagnóstico. Os genes ltb e sm14 foram amplificados por PCR a partir do DNA de E. coli e do plasmídeo pAESm14, respectivamente, e fusionados por PCR. A quimera recombinante foi expressa em E. coli e purificada por cromatografia de afinidade em coluna com níquel. Grupos de camundongos suíços não singênicos foram imunizados por via subcutânea com três doses de rLTB/Sm14, rLTB/Sm14 mais hidróxido de alumínio (Al(OH)3), rSm14 plus Al(OH)3, rLTB ou Al(OH)3. Os níveis de proteção foram determinados através do número de parasitas recuperados após desafio com cercárias de S. mansoni. O pool de soros dos camundongos imunizados foi avaliado por ELISA e Western blot. Os resultados mostraram que a proteína quimera foi capaz de estimular a produção de anticorpos específicos para Sm14 e LTB, contudo o uso de LTB como adjuvante para imunização de rSm14 falhou em aumentar a proteção contra o desafio. Além disso, sete MAbs foram obtidos após imunização de um camundongo BALB/c com rLTB/Sm14. A isotipagem dos MAbs revelou que cinco foram do isotipo IgG1, um pertencente ao isotipo IgG2b e outro ao isotipo IgM. Estes MAbs serão úteis para monitorar a expressão da proteína em sistemas recombinantes, a estabilidade protéica e pode ter potencial para desenvolver teste diagnóstico.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_flavia_vasconcellos.pdf: 444073 bytes, checksum: 28496ede24da5ffceb810c4c3dfa434f (MD5) Previous issue date: 2007-04-27 / Leptospirosis is an infectious disease caused by pathogenic spirochetes of the genus Leptospira that can affect vital organs such as lungs, liver and kidneys. The illness is characterized by an acute bacteremic phase of approximately one week, followed by an immune phase in which specific antibodies are found in blood and leptospires are eliminated in urine. Clinical signs in the initial phase of leptospirosis can be confused with other feverish diseases, making laboratory diagnosis of extreme importance to start antibiotic treatment. The existing laboratory tests for early diagnosis of leptospirosis are based on IgM detection and are of low sensitivity. Thus, there is an urgent need for development of new diagnostic strategies for use in the acute phase of leptospirosis. In the present work monoclonal antibodies (MAbs) and polyclonal IgY were used in the standardization of three different antigen capture ELISA formats for direct detection of leptospires in blood during the acute phase of the disease. Detection limit of leptospires in human sera experimentally contaminated ranged from 10 5 to 10 7 cells per millilitre in the different formats. The ELISA format with the best performance was able to detect 10 5 leptospires per millilitre of human sera, using as capture antibody a MAb against LipL32, the major outer membrane protein of pathogenic leptospires, and as detection antibody biotinilated policlonal IgY against a pathogenic serovar of Leptospira interrogans. Although this format did not present the adequate sensitivity for detection of circulating leptospires at the levels existing in blood in the initial phase of the disease, it can be improved in order to do so. / A leptospirose é uma doença infecciosa causada por espiroquetas do gênero Leptospira que pode afetar diversos órgãos vitais como pulmões, fígado e rins. A doença caracteriza-se por uma fase inicial bacterêmica de aproximadamente uma semana, seguida de uma fase imune na qual anticorpos específicos são detectados no sangue e leptospiras são eliminadas na urina. Os sinais clínicos da fase inicial da leptospirose podem ser confundidos com diversas doenças febris, o que torna o diagnóstico laboratorial extremamente importante para decidir sobre o início do tratamento com antibióticos. Os testes laboratoriais existentes para o diagnóstico na fase inicial da doença são todos baseados na detecção de IgM e apresentam baixa sensibilidade. Assim, há uma necessidade urgente de desenvolvimento de novas estratégias de diagnóstico precoce da leptospirose. Neste trabalho foram utilizados anticorpos monoclonais (MAbs) e anticorpo policlonal (IgY) para padronizar três formatos de ELISA de captura de antígeno para uso na detecção direta de leptospiras no sangue durante a fase aguda da doença. O limite de detecção de leptospiras em soro humano experimentalmente contaminado variou entre 10 5 e 10 7 células por mililitro nos diferentes formatos. O formato que apresentou melhor desempenho detectou 10 5 leptospiras por mililitro de soro, e utilizou como anticorpo de captura um MAb contra LipL32, a principal proteína de membrana externa de leptospiras patogênicas, e como anticorpo de detecção IgY biotinilada, produzida contra um sorovar patogênico de Leptospira interrogans. Embora este formato não apresente ainda a sensibilidade adequada para detectar o nível de leptospiras circulantes no sangue na fase inicial da doença, ele possui potencial para ser aperfeiçoado de forma a atingir aquele nível.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_cristiane_kruger.pdf: 1966216 bytes, checksum: 66de5146aa5816f5e065444215ce151b (MD5) Previous issue date: 2006-08-31 / Cavia aperea, or popularly preá (Brazilian guinea pig), it is a rodent of diurne habits, mainly in the first hours of the morning and in finish them of the afternoon. They are fed of herbaceous vegetables, they live in tunnels of grassy, being able many times to inhabit agricultural peridomiciliar regions, close to highways of the south region it Brazil, being many adopted times as animal of esteem. With the objective to know the diversity of parasites of this rodent, were examined 33 specimens of Cavia aperea that after abated according to Protective Association of the Animals, they had been brushed and washed for collection of ectoparasites, being after that necropsied and its organs examined in search of endoparasites. The ectoparasites after removed from the animal, were clarified in acetate of metila and mounted in slides with Canada balsam. For collection of the helminths it was examined and one washed separately each organ in sieve, nematodes had been clarified in lactofenol and the members of the Classes Trematoda and Cestoda were prepared according Amato s technique diaphaned in creosote and mounted in slides with Canada balsam. Of the total of examined animals, 100% were infested by lice of the species: Trimenopon hispidum, Gyropus ovalis, Gliricola lindolphoi and G. porcelli, with exception of this, all others are registered for the first time in the State Rio Grande do Sul. Of Siphonaptera, Polygenis (Neopolygenis) atopus it was registered prevalence of 6,1%. The helminthes were: of the Phylum Nematoda - Trichostrongylus sp., Paraspidodera uncinata, Vianella travassosi, Ackertia burgosi and Graphidioides subterraneus; Class Trematoda - Pseudoquinqueserialis caviae, Pseudohippocrepis suttonae n.g. n.sp., Taxorchis caviae and the Cestoda Monoecocestus parcitesticulatus, all cited for the first time in the state Rio Grande do Sul, with exception of Paraspidodera uncinata. / Cavia aperea, ou popularmente preá, é um roedor de hábito diurno, principalmente nas primeiras horas da manhã e nas ultimas da tarde. Alimentam-se de vegetais herbáceos, vivem em túneis de gramíneas, podendo muitas vezes habitar regiões peridomiciliares rurais, perto de rodovias da região sul do Brasil, sendo muitas vezes adotados como animais de estimação. Com o objetivo de conhecer a diversidade de parasitos deste roedor, examinou-se 33 exemplares de Cavia aperea que após eutanásiados segundo a Associação Protetora dos Animais, foram escovados e lavados para coleta de ectoparasitos, sendo em seguida necropsiado e seus órgãos examinados em busca de endoparasitos. Os ectoparasitos após removidos do animal foram clarificados em acetato de metila e montados em lâminas com bálsamo do Canadá. Para coleta dos helmintos examinou-se e lavou-se cada órgão em separado em tamis, os nematóides foram clarificados em lactofenol e os membros das classes Trematoda e Cestoda foram preparados segundo técnica de Amato e em seguida diafanizados em creosoto de Faia e montados em lâminas com bálsamo do Canadá. Dos dos animais examinados, 100% estavam infestados por piolhos das espécies: Trimenopon hispidum, Gyropus ovalis, Gliricola lindolphoi e G. porcelli, e com exceção deste último, todos os outros são registrados pela primeira vez no Rio Grande do Sul. De Siphonaptera encontrou-se Polygenis (Neopolygenis) atopus com prevalência de 6,1%. Os helmintos encontrados foram: do Filo Nematoda Trichostrongylus sp., Paraspidodera uncinata, Vianella travassosi, Ackertia burgosi e Graphidioides subterraneus; Classe Trematoda Pseudoquinqueserialis caviae, Pseudohippocrepis suttonae n.g. n.sp. e Taxorchis caviae e a Classe Cestoda - Monoecocestus parcitesticulatus, todos citados pela primeira vez no Rio Grande do Sul, com exceção de Paraspidodera uncinata.