Objetivo: Verificar o remodelamento da pele e produção de anticorpos em modelo experimental de esclerodermia em coelhos, após indução de tolerância nasal com colágeno tipo V. Métodos: Coelhas Nova Zelândia (N=12) foram imunizadas com 1mg/ml de colágeno V (Col V) em adjuvante completo de Freund e dois reforços com adjuvante incompleto de Freund. Seis coelhas imunizadas receberam uma dose diária de 25ug de Col V, iniciado via nasal (grupo tolerado) 150 dias do começo das imunizações e seis animais foram somente imunizadas (grupo imunizado). Um grupo imunizado com adjuvante de Freund serviu como controle. Biopsias de pele foram coletadas em 0, 75, 120, 150 e 210 dias e coradas pelo H&E, tricrômico de Masson e Sírius red para analise morfológica e morfométrica. Os colágenos I, III e V, além de TGFbeta e PDGF foram imunomarcados por imunofluorescência. Os soros dos animais foram coletados em 0, 150 e 210 dias para determinar anticorpos anti-colágenos I, III, IV e V e anti-nucleares. Resultados: Os animais imunizados mostraram progressivo decréscimo da derme papilar, atrofia de anexos, aumento no depósito dos colágenos I, III e V e aumento da expressão de TGFbeta e PDGF. Os tolerados apresentaram aumento dos anexos cutâneos e significante diminuição no depósito dos colágenos I, III e V, TGFbeta e PDGF. O grupo de imunizados e de tolerados apresentaram anticorpos anti-colágenos III e IV e antinucleares. Conclusões: A indução de tolerância nasal com Col V diminuiu o remodelamento da pele observado no modelo experimental de esclerodermia e inibiu a síntese de citocinas fibrogênicas. Portanto, a tolerância nasal com Col V pode ser uma opção terapêutica promissora para o controle do remodelamento cutâneo em pacientes com esclerodermia. / Objective: Our aim was to verify the skin remodeling and antibody production in experimental model of scleroderma in rabbits, after induction of tolerance by daily nasal administration of human type V collagen (Col V). Methods: Female New Zealand rabbits (N=12) were immunized with 1mg/ml of Col V in complete Freund\'s adjuvant, followed by more two boosters in incomplete Freund\'s adjuvant. Six immunized rabbits received daily nasal administrating of 25ug of Col V (tolerated group), started 150 days after the first immunization, and the others animals (N=6) were only immunized (immunized group). Finally a group of rabbits immunized with Freund\'s adjuvant served as control. Skin biopsies were collected at 0, 75, 120, 150 and 210 days, and stained with H&E, Masson\'s trichrome and Sirius red for morphological and morphometric analysis. Types I, III and V collagen, TGFbeta and PDGF were immunostained by immunofluorescence. The sera of animals were colleted at 0, 150 and 210 days to determine anti types I, III, IV and V collagen and antinuclear antibodies. Results: The immunized animals showed progressive decrease of papillary dermis, appendages atrophy, increase of types I, III and V collagen deposition and increased expression of TGF-beta and PDGF. The tolerated rabbits presented increase of cutaneous appendages and significant decrease of types I, III and V and TGF-beta and PDGF. Both immunized and tolerated rabbits presented anti types III and IV antibodies and antinuclear antibodies. Conclusions: Col V nasal tolerance reduced skin remodeling in experimental model of scleroderma and inhibited synthesis of fibrotic cytokines. Therefore, the nasal tolerance with type V collagen can be a promising therapeutic option to control the skin remodeling in patients with scleroderma.

Introdução: As células-tronco são células indiferenciadas que apresentam capacidade de auto renovação, ou seja, são capazes de se multiplicar, mantendo seu estado indiferenciado, o que proporciona uma reposição ativa de sua população de maneira constante nos tecidos; e, possui também, a capacidade de se diferenciar em diversos tipos celulares. Desta forma, acredita-se que células tronco presentes nos diferentes tecidos tenham papel regenerativo quando estes sofrem uma lesão ou injúria. Atualmente tem aumentado o número de estudos que envolvem a utilização de células tronco mesenquimais de tecido adiposo (ADSCs) na medicina regenerativa e curativa, estando o avanço desta terapia ligado à identificação de mecanismos e de moléculas que controlam e mediam a diferenciação de uma linhagem específica. Entre estas moléculas está o colágeno, proteína estrutural responsável pelas propriedades mecânicas, forma e organização tecidual. Dentre os 28 tipos de colágeno, o tipo V (Col V) e o XI são considerados nucleadores da fibrilogênese e modulam a adesão e proliferação celular. Além disso, o Col V é altamente expresso em tecido embrionário, sugerindo que ele possa atuar na interação célula-matriz no remodelamento e reparo de tecidos lesados, como a cartilagem. Dentre as doenças com acometimento articular, a osteoartrite (OA) é considerada a artropatia mais comum e, ainda, sem tratamento eficaz, culminando, em casos avançados, em intervenção cirúrgica. Estudos recentes mostram que as ADSCs seriam uma alternativa no restabelecimento do tecido cartilaginoso. Por esta razão a proposta do estudo foi avaliar a resposta das ADSCs, frente ao estímulo com Col V in vitro, e se o transplante autólogo dessas células poderia apresentar um efeito na regeneração da cartilagem articular na OA induzida em coelhos. Métodos: Foram cultivadas ADSCs, derivadas do tecido adiposo de coelhos (CEUA 123/14), estimuladas com Col V, para a avaliação da síntese dos principais componentes da matriz cartilaginosa: proteoglicanos e colágeno II. A preservação do fenótipo celular frente ao estímulo com Col V foi avaliada através da expressão do colágeno dos tipos I, II, III, CD34 e vimentina e dos genes COL2A1, ACAN e POU5F1. Os animais (n=24) foram submetidos à indução de OA, por meniscectomia parcial, e divididos nos grupos: OA (n=8), sem tratamento; OA/ADSCs (n=8), tratado com injeções mensais de ADSCs, e OA/ADSCs/V (n=8), tratado com injeções mensais de ADSCs, estimuladas previamente com Col V. As articulações foram coletadas após 22 semanas, descalcificadas e coradas com Hematoxilina e Eosina para histomorfometria da celularidade e espessura da cartilagem, perda de proteoglicanos pela Safranina O/Fast green e imunomarcação para colágeno II e Fas-L, usando o software Image Pro-Plus 6.0®. Resultados: As células estimuladas com Col V apresentaram-se negativas para colágeno I, III e CD34 e positivas para vimentina, colágeno total e proteoglicanos in vitro. Ainda, foi obtido um aumento significativo da expressão de colágeno II e dos genes COL2A1 e ACAN e a expressão de POU5F1 não foi significativa após estímulo. A análise morfológica da cartilagem indicou aumento da quantidade de condrócitos, da espessura da cartilagem e diminuição da perda de proteoglicanos nos grupos OA/ADSCs/V e OA/ADSCs, em relação ao grupo OA. Também foi observado um aumento da quantidade de colágeno II e diminuição de condrócitos apoptóticos no grupo OA/ADSCs/V. Conclusão: O Col V atua como mediador da condrogênese in vitro, estimulando colágeno II e proteoglicanos, além de aumentar a expressão dos genes COL2A1 e ACAN. A terapia com ADSCs estimuladas com Col V atenuou significativamente o processo osteoartrítico em coelhos, sugerindo uma nova perspectiva para o tratamento da OA / Introduction: Stem cells are undifferentiated cells that are capable of self-renewal, that is, they are capable of multiplying maintaining their undifferentiated state, which provides an active replacement of their population in a constant way in the tissues; stem cells also have the ability to differentiate into several cell types. Thus, it is believed that stem cells present in tissues have a regenerative role when they suffer an injury. The number of studies involving the use of adipose-derived stem cells (ADSCs) in regenerative medicine has increased and the progress of this therapy is link to the identification of mechanisms and molecules that control and mediate the specific lineage\'s differentiation. Collagen is among these molecules and it is a structural protein responsible for the mechanical properties, shape and tissue organization. Among 28 types of collagen, type V (Col V) and XI are considered nucleators of fibrillogenesis and they modulate cell adhesion and cell proliferation. In addition, Col V is highly expressed in embryonic tissue, suggesting that it may act on cell-matrix interaction in remodeling and repair of damaged tissues such as cartilage. Osteoarthritis (OA) is the most common arthropathy among the diseases with joint involvement and, it has no effective treatment that results in surgical intervention in advanced cases. Recent studies show that ADSCs would be an alternative in restoring cartilaginous tissue. Therefore, the aim of this study was to evaluate the response of ADSCs to the Col V stimulus in vitro and the effect of these autologous cells on the regeneration of articular cartilage of rabbits with OA. Methods: ADSCs from rabbit (CEUA 123/14) were cultured with Col V to evaluate the synthesis of the main components of the cartilaginous tissue as proteoglycans, collagen type II. The preservation of the cellular phenotype was evaluated through the collagen I, II, III, CD34 and vimentin expression and COL2A1, ACAN and POU5F1 genes. Rabbits (n=24) were submitted to OA induction though partial meniscectomy and divided into the following groups: OA (n=8), without treatment; OA/ADSCs (n=8), treated with monthly injections of ADSCs and OA/ADSCs/V (n=8), monthly injections of ADSCs previously treated with Col V. Joints were collected after 22 weeks, decalcified and stained with H&E for cellular histomorphometry and cartilage thickness. Safranin O/fast green staining was used for proteoglycan evaluation and immunostaining for collagen type II and Fas-L expression using Image Pro Plus 6.0 software. Results: ADSCs stimulated with Col V were negative for collagen I, III and CD34 and positive for vimentin, total collagen and proteoglycans in vitro. Furthermore, a significant increase in the expression of collagen II, COL2A1 and, ACAN genes was obtained, but the POU5F1 gene expression was not significant after stimulation. Morphological analysis of cartilage indicated increased in the number of chondrocytes, cartilage thickness, and decrease in loss of proteoglycans in the OA/ADSCs/V and OA/ADSCs groups, compared to the OA group. In addition, an increase in the amount of collagen II and decrease of apoptotic chondrocytes in the OA/ADSCs/V group was observed. Conclusion: Col V acts as a mediator of chondrogenesis in vitro stimulating collagen II, proteoglycans and COL2A1, ACAN genes expression. Therapy with Col V-stimulated ADSCs significantly attenuate the osteoarthritic process in rabbits, suggesting a new perspective for the treatment of OA

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:18:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008 - Michel Jose Sales Abdalla Helayel.pdf: 2764990 bytes, checksum: 2ef0f5307007bc87483b82ee19e1b257 (MD5) Previous issue date: 2008-09-17 / Natural poisoning by Pseudocalymma elegans is described in a cow in the county of Rio Bonito, RJ. Also decribed is the experimental reproduction of this poisoning in three calves (1.0, 0.5 and 0.25 g/kg of the fresh plant) and in five rabbits (0.5 0.25 0.125 0.0625 and 0.0312 g/kg of the dried and ground plant) with the plant collected in the area where the deaths had occurred. Post-mortem and histopathological examinations of the natural case in the cow did not reveal significant alterations. Oral administration of 1g/kg of the sprouts of P. elegans caused death of the calf 5hours and 30 minutes after beginning of the administration of the plant. The dose of 0.5 g/kg caused death of the animal after 76 hours and 36 minutes. The 0.25g/kg dose caused only clinical signs which consisted of heart palpitation and arrhythmia, increase of breathing frequency, reluctance in moving, positive vein pulse, ingurgitated jugular veins, mooing, falling down, peddling movements followed by death. At post-mortem examination the lesions were those of acute heart insufficiency, and histopatologic examination revealed the typical kidney lesion (hydropic degeneration in the distal convoluted tubules) seen in the poisoning by plants that cause "sudden death". In the experimentally poisoned rabbits the clinical course was from less than one to two minutes. The histopatological examination of the kidney of two rabbits also revealed that characteristic microscopic kidney lesion. This is the first description of a natural case of P. elegans poisoning in cattle with post-mortem and histopatological description. The occurrence of the plant in the county of Rio Bonito had not been known by the veterinarians. It is conluded that the plant has a higher toxicity as described before. / Descreve-se a intoxica??o natural por Pseudocalymma elegans em pelo menos um bovino em Rio Bonito, RJ e a reprodu??o experimental dessa intoxica??o em tr?s bovinos (1, 0,5 e 0,25 g/kg da planta fresca) e em 5 coelhos (0,5 - 0,25 - 0,125- 0,0625 e 0,0312 g/kg da planta dessecada e mo?da) com exemplares dessa planta colhida no local onde ocorreu o ?bito. A necropsia e a histopatologia do bovino intoxicado naturalmente, n?o revelaram altera??es significativas. A administra??o, por via oral, de 1g/kg da brota??o da planta causou o ?bito do bovino dentro de 5h e 30 minutos ap?s o in?cio da administra??o da planta, j? pela administra??o de 0,5 g/kg, o ?bito do animal ocorreu ap?s 76 horas e 36 minutos. A dose de 0,25g/kg foi capaz de causar sintomas, mas n?o levou ao ?bito. Os sintomas apresentados foram arritmia card?aca, taquicardia, aumento da freq??ncia respirat?ria, relut?ncia em se mover, pulso venoso positivo, jugulares e grandes vasos ingurgitados, mugidos, queda ao solo, movimentos de pedalagem seguido de ?bito. ? necropsia foram verificadas altera??es compat?veis com ?s observadas na insufici?ncia card?aca aguda, e o exame histopatol?gico revelou a les?o renal t?pica (degenera??o hidr?pica em t?bulos contornados distais) de intoxica??o por plantas que causam morte s?bita . Nos coelhos intoxicados experimentalmente a evolu??o variou entre menos de um minuto a dois minutos. O exame histopatol?gico do rim de dois coelhos tamb?m revelou a les?o microsc?pica caracter?stica. Trata-se do primeiro registro, com necropsia e histopatologia, de intoxica??o natural por P. elegans em bovinos. Essa planta ainda n?o havia sido mapeada nessa ?rea do Estado do Rio de Janeiro. Conclui-se que a planta pode ser mais t?xica do que anteriormente descrito.

INTRODUÇÃO: Este estudo tem como objetivo comparar os achados biomecânicos e anatomopatológicos de um modelo animal inédito de tendinopatia do tendão do calcâneo, induzido por injeções seriadas de baixa dose da enzima colagenase bacteriana, com o modelo mais comumente utilizado na literatura, induzido por injeção única de maior dose da enzima, e com os controles. A hipótese é que a utilização de injeções seriadas resultaria em alterações tendíneas mais progressivas e duradouras, similar à doença nos humanos. MÉTODOS: Quarenta e cinco (N=45) coelhos foram randomizados em três diferentes grupos de estudo (A, B e Controles). Animais do Grupo A (n=18) foram submetidos a três injeções seriadas de baixa dose de colagenase (0,1mg), em ambos os tendões do calcâneo, separadas por intervalo de duas semanas. Animais do Grupo B (n=18) foram injetados com dose única de maior dose (0,3mg). Já no Grupo Controle, animais (n=9) foram injetados bilateralmente com três doses seriadas de solução fisiológica 0,9%. Após a última injeção, foi realizada eutanásia do mesmo número de animais dos Grupos A e B (n=6), com 10 semanas (Subgrupos A1 e B1), 12 semanas (Subgrupos A2 e B2) e 16 semanas (Subgrupos A3 e B3). Todos os animais do Grupo controle foram eutanasiados após 16 semanas. Alterações anatomopatológicas, pelo escore de Bonar, e biomecânicas foram comparadas entre os grupos e dentro de cada grupo, para os diferentes momentos de eutanásia. Valores de p < 0,05 foram considerados estatisticamente significativos. RESULTADOS: Após 16 semanas, o escore anatomopatológico de Bonar foi significativamente maior para ambos os Grupos A (11,8±2,28) e B (5,6±2,51), quando comparados aos controles (2±0,76). Os valores para o grupo A também diferiram do Grupo B (p < 0,001). Para os desfechos biomecânicos, os grupos diferiram quanto à área de secção transversa do tendão (p=0,003), módulo de elasticidade (p=0,024), e tensões no limite da elasticidade (p=0,020) e na resistência máxima (p=0,022), com piores resultados encontrados nos animais do Grupo A. Na semana 12, também houve diferença entre os Grupos A e B para o escore anatomopatológico de Bonar (p=0,028) e para a tensão no limite da elasticidade(p=0,013), novamente com piores resultados no Grupo A. Já na 10a semana, foram os coelhos do Grupo B que demonstraram alterações mais pronunciadas quando comparados aos do Grupo A, com diferença significativa no Escore de Bonar (p=0,033), área de secção transversa do tendão (p=0,038), rigidez (p=0,048), módulo de elasticidade (p=0,024), força, tensão, energia e densidade de energia no limite da elasticidade (p=0,008, p=0,020, p=0,047 e p=0,0015, respectivamente) além de força e tensão no limite da resistência máxima (p=0,004 e p=0,008, respectivamente). A comparação dos desfechos dentro de cada grupo, entre os diferentes subgrupos, apresentou diferenças significativas no escore de Bonar em ambos os grupos A (p=0,012) e B (p < 0,001). Parâmetros biomecânicos não diferiram entre os subgrupos do Grupo A. Já os subgrupos do grupo B apresentaram diferenças na área de secção transversa do tendão (p=0,011), módulo de elasticidade (p=0,024), tensão no limite da elasticidade (p=0,023) e da resistência máxima (p=0,031), assim como na a densidade de energia no limite da elasticidade (p=0,017), com resultados mais pronunciados no subgrupo B1. CONCLUSÃO: O modelo animal de tendinopatia do tendão calcâneo induzida por injeções seriadas de colagenase apresentou alterações anatomopatológicas e biomecânicas mais avançadas na 16a semana, de caráter progressivo e duradouro, similar à doença dos humanos. Tal modelo experimental pode representar uma melhor opção na indução da tendinopatia do tendão do calcâneo, possibilitando a realização de estudos promissores no futuro / INTRODUCTION: This study aims to compare the biomechanical and histological findings of a new animal model of Achilles tendinopathy induced by serial low-dose injections of bacterial collagenase with the most commonly used high-dose single injection and to controls. The hypothesis of the study is that consecutive low-dose injections of collagenase would result in more progressive and long-lasting tendinopathic findings, reproducing better the disease in humans. METHODS: Forty-five (N=45) rabbits were randomly divided into three groups (A, B and Control). Animals in Group A (n=18) underwent three serial low-dose (0,1mg) injections of bacterial type I collagenase in both Achilles tendons, separated by a two-week interval. Animals in Group B (n=18) underwent bilateral single high dose injection (0,3mg) of the same enzyme. In the Control Group, animals (n=9) were injected bilaterally with three consecutive doses of saline solution, separated by a two-week interval. Following the last injection, the same number of rabbits from Groups A and B (n=6) were euthanized after 10 weeks (Subgroups A1 and B1), 12 weeks (Subgroups A2 and B2), and 16 weeks (Subgroups A3 and B3). Animals in the Control Group were all euthanized after 16 weeks. Histological findings, using the Bonar tendinopathy score, and biomechanical properties of the Achilles tendons were compared between the groups and inside each the group, in the different time-points of euthanasia. Findings at 16 weeks were considered primary outcomes. P-values < 0,05 were considered significant. RESULTS: After 16 weeks, the Bonar score was significantly increased for both Groups A (11,8±2,28) and B (5,6±2,51), when compared to controls (2±0,76). Group A has also differed from Group B (p < 0,001). Regarding biomechanical findings, groups differed in cross-sectional area of the Achilles tendon (p=0,003), Young\'s modulus (p=0,024), Yield stress (p=0,020) and ultimate tensile strength (p=0,022), with the worst results in animals from Group A. At 12 weeks, comparison between Groups A and B have shown significant differences for Bonar score (p=0,028) and Yield stress (p=0,013), again with worse results in Group A. Conversely, at 10 weeks, rabbits in Group B showed worse results when compared to Group A, with significant differences in the Bonar score (p=0,033), cross sectional area of the tendon (p=0,038), stiffness (p=0,048), Young\'s modulus (p=0,024), Yield tension (0,008), Yield stress (p=0,020), energy Yield (p=0,047), ultimate tension (p=0,004), ultimate stress (p=0,008) and yield strain energy density (p=0,015). The comparison of outcomes inside each group, in the different time-points of follow-up, demonstrated significant differences in the Bonar score for Group A (p=0,012) and Group B (p < 0,001). Regarding biomechanical properties, Group A showed no differences between the subgroups for any of the parameters evaluated. Subgroups in Group B differed for cross-sectional area of the tendon (p=0,011), Young\'s modulus (p=0,024), Yield stress (p=0,023), ultimate stress (p=0,031) and yield strain energy density (p=0,017), with worst results in the earliest follow-up (Subgroup B1). CONCLUSIONS: The animal model of Achilles tendinopathy induced by consecutive injections of collagenase showed worse histological and biomechanical properties after 16 weeks, demonstrating more progressive and long lasting tendinopathic findings, reproducing better the disease in humans. This novel experimental model can represent a better option to induce Achilles tendinopathy, allowing promising future research on the subject

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 399356.pdf: 4105847 bytes, checksum: 0c59a09fa1073f779a885d9635fec74e (MD5) Previous issue date: 2008-01-15 / Este trabalho in vivo controlado e com cegamento avaliou post mortem, atrav?s da an?lise histomorfom?trica, a influ?ncia do laser de baixa pot?ncia na forma??o ?ssea em implantes lisos e texturizados inseridos em t?bias de coelhos, submetidos ou n?o ? irradia??o com laser de GaAlAs com comprimento de onda de 830nm, de forma cont?nua por 10 segundos, com pot?ncia de 100mW. Para tanto foram utilizados seis coelhos da ra?a Nova Zel?ndia, distribu?dos igualmente de forma aleat?ria em grupo irradiado e grupo controle, onde cada coelho recebeu quatro implantes, sendo dois lisos na t?bia direita e dois texturizados na t?bia esquerda. Os animais do grupo experimental receberam irradia??o transcutaneamente em tr?s pontos ao redor dos implantes, durante 15 dias a cada 48 horas, sendo a primeira aplica??o no dia da cirurgia, com total de oito dias de irradia??o e dose total de 24J/cm2 em cada t?bia (3 pontos x 1J x 8 aplica??es = 24J). Os animais do grupo controle foram submetidos ? mesma rotina dos animais irradiados, por?m com equipamento laser desligado. Ap?s 30 dias todos os animais sofreram eutan?sia para obten??o de l?minas histol?gicas coradas com azul de toluidina a partir de cortes das t?bias com os implantes inseridos numa espessura final de 10 a 19&#956;m. Para avalia??o do percentual de contato osso-implante os dois cortes mais centrais de cada amostra, de forma cegada, foram fotomicrografados em microsc?pio ?ptico e analisados atrav?s de um programa digital de processamento de imagens. As m?dias obtidas a partir dos dois cortes de cada implante, ap?s desfeito o cegamento, foram comparadas de forma geral e dentro dos grupos utilizando-se o teste t-student. N?o houve diferen?a estatisticamente significativa (p>0,05) no percentual de contato osso-implante entre os grupos laser (77,048% ? 10,173) e controle (69,516% ? 19,284) de forma geral, nem entre os subgrupos texturizado com laser (81,530% ? 10,155), texturizado controle (72,190% ? 16,778), liso com laser (72,565% ? 8,737) e liso controle (66,842% ? 22,791). Estes resultados sugerem que o laser de baixa pot?ncia, com o protocolo de irradia??o utilizado neste modelo animal, n?o contribuiu significativamente para o aumento do percentual de contato osso-implante. N?o obstante, o osso novo formado submetido ? irradia??o com laser de GaAlAs durante o per?odo de ossoeintegra??o, parece apresentar uma maior vasculariza??o e organiza??o lamelar que o grupo controle, sugerindo uma maior matura??o. Por?m, s?o necess?rias novas pesquisas de modo a preencher as lacunas ainda existentes quanto ao entendimento dos mecanismos biol?gicos da a??o do laser de baixa pot?ncia na media??o dos processos necess?rios ? osseointegra??o de implantes de tit?nio, bem como dos par?metros dosim?tricos para obten??o da bioestimula??o ?ssea.

Introdução: A Variação da Pressão Sistólica (VPS) e da Pressão de Pulso (VPP) têm sido propostas como métodos efetivos para monitoração hemodinâmica, em predizer a resposta à reposição da volemia durante a ventilação mecânica. A primeira é calculada pela diferença entre a pressão sistólica máxima e mínima em um ciclo respiratório, e composta pela somatória dos componentes delta up e delta down; e a VPP obtida pela diferença entre a pressão sistólica e diastólica também em um ciclo respiratório. O objetivo deste estudo foi avaliar a VPS e seus componentes, e a VPP durante a ventilação com volume (VCV) e pressão (PCV) controlados, em coelhos normovolêmicos ou submetidos à hemorragia controlada. Método: Trinta e dois coelhos foram distribuídos de forma aleatória em quatro grupos: G1-ConPCV, G2-HemPCV, G3-ConVCV e G4-HemVCV. Foram ventilados em PCV ou VCV, com volume corrente entre 10 e 12 ml.kg-1 e freqüência respiratória para manter normocapnia. Nos grupos controle (G1-ConPCV e G3-ConVCV), sangue não foi retirado, e cada momento foi avaliado por 30 minutos (M0, M1 e M2); nos grupos com hemorragia (G2-HemPCV e G4-HemVCV), não houve perda sangüínea em M0, em M1 retirou-se 15% da volemia estimada, assim como em M2, de forma gradual. Os dados foram submetidos à análise de variância para medidas repetidas (ANOVA), sendo considerados significativos para um valor de p<0,05, e apresentados na forma de média e desvio-padrão. Resultados: Não houve diferença em M0 entre os grupos estudados. Em M1, os grupos com perda sanguínea apresentaram maiores variações na VPS, em seu componente delta down e na VPP, diferindo significativamente apenas dos grupos controle. Quando a volemia foi reduzida em 30% (M2), G4-HemVCV apresentou maior variação na pressão sistólica, no componente delta down e na pressão de pulso; bem como ambos grupos submetidos à hemorragia apresentaram valores significativamente maiores do que os grupos controle. O débito cardíaco não apresentou variação significativa (p>0,05) entre os momentos e grupos estudados. Conclusões: Em coelhos normovolêmicos ou com hipovolemia leve, ambos modos de ventilação se comportam de forma semelhante sobre as variáveis estudadas, ao passo que na hipovolemia moderada pôde-se observar menor comprometimento hemodinâmico durante a PCV / Rationale: Systolic pressure variation (SPV) and pulse pressure variation (PPV) indices have been proposed as effective methods of hemodynamic monitoring to predict fluid responsiveness during mechanical ventilation. SPV is calculated by the difference between the maximum and minimum values of systolic blood pressure following a single positive pressure breath, and it is made up of the sum of their components delta up and delta down; PPV is obtained by the difference between systolic and diastolic blood pressure also in a single positive pressure breath. The purpose of this study was to evaluate SPV and its components, and PPV during volume (VCV) and pressure (PCV) controlled ventilation in normovolemic rabbits or ones submitted to graded hemorrhage. Method: Thirty two rabbits were randomly allocated in four groups: G1- ConPCV, G2-HemPCV, G3-ConVCV and G4-HemVCV. They were ventilated in PCV or VCV; tidal volume was fixed between 10 to 12 mL.kg-1 and respiratory rate was monitored in order to maintain normocapnia. In control groups (G1- ConPCV and G3-ConVCV) blood was not withdrawn and each moment was evaluated for 30 minutes (M0, M1 and M2); in hemorrhage groups (G2-HemPCV and G4-HemVCV) there was no blood loss in M0; in M1 and M2 15% of estimated volemia was graded withdrawn. Data were submitted to analysis of variance for repeated measures (ANOVA); significance level was p<0,05 and results were expressed as mean ± standard deviation. Results: In M0, no significant differences were observed among all groups. Hemorrhagic groups (G2-HemPCV and G4-HemVCV) presented higher SPV, delta down and PPV in M1, differing significantly (p<0,05) only from control groups. When 30% of estimated blood volume was removed, higher SPV, delta down and PPV were observed mainly in G4-HemVCV. Cardiac output did not vary significantly (p>0,05) among groups and moments. Conclusions: In rabbits with normovolemia or slight hemorrhage, both modes of ventilation had similar behavior over studied parameters, while in the ones undergoing moderate hemorrhage PCV determined less hemodynamic compromising

Introdução: As células-tronco são células indiferenciadas que apresentam capacidade de auto renovação, ou seja, são capazes de se multiplicar, mantendo seu estado indiferenciado, o que proporciona uma reposição ativa de sua população de maneira constante nos tecidos; e, possui também, a capacidade de se diferenciar em diversos tipos celulares. Desta forma, acredita-se que células tronco presentes nos diferentes tecidos tenham papel regenerativo quando estes sofrem uma lesão ou injúria. Atualmente tem aumentado o número de estudos que envolvem a utilização de células tronco mesenquimais de tecido adiposo (ADSCs) na medicina regenerativa e curativa, estando o avanço desta terapia ligado à identificação de mecanismos e de moléculas que controlam e mediam a diferenciação de uma linhagem específica. Entre estas moléculas está o colágeno, proteína estrutural responsável pelas propriedades mecânicas, forma e organização tecidual. Dentre os 28 tipos de colágeno, o tipo V (Col V) e o XI são considerados nucleadores da fibrilogênese e modulam a adesão e proliferação celular. Além disso, o Col V é altamente expresso em tecido embrionário, sugerindo que ele possa atuar na interação célula-matriz no remodelamento e reparo de tecidos lesados, como a cartilagem. Dentre as doenças com acometimento articular, a osteoartrite (OA) é considerada a artropatia mais comum e, ainda, sem tratamento eficaz, culminando, em casos avançados, em intervenção cirúrgica. Estudos recentes mostram que as ADSCs seriam uma alternativa no restabelecimento do tecido cartilaginoso. Por esta razão a proposta do estudo foi avaliar a resposta das ADSCs, frente ao estímulo com Col V in vitro, e se o transplante autólogo dessas células poderia apresentar um efeito na regeneração da cartilagem articular na OA induzida em coelhos. Métodos: Foram cultivadas ADSCs, derivadas do tecido adiposo de coelhos (CEUA 123/14), estimuladas com Col V, para a avaliação da síntese dos principais componentes da matriz cartilaginosa: proteoglicanos e colágeno II. A preservação do fenótipo celular frente ao estímulo com Col V foi avaliada através da expressão do colágeno dos tipos I, II, III, CD34 e vimentina e dos genes COL2A1, ACAN e POU5F1. Os animais (n=24) foram submetidos à indução de OA, por meniscectomia parcial, e divididos nos grupos: OA (n=8), sem tratamento; OA/ADSCs (n=8), tratado com injeções mensais de ADSCs, e OA/ADSCs/V (n=8), tratado com injeções mensais de ADSCs, estimuladas previamente com Col V. As articulações foram coletadas após 22 semanas, descalcificadas e coradas com Hematoxilina e Eosina para histomorfometria da celularidade e espessura da cartilagem, perda de proteoglicanos pela Safranina O/Fast green e imunomarcação para colágeno II e Fas-L, usando o software Image Pro-Plus 6.0®. Resultados: As células estimuladas com Col V apresentaram-se negativas para colágeno I, III e CD34 e positivas para vimentina, colágeno total e proteoglicanos in vitro. Ainda, foi obtido um aumento significativo da expressão de colágeno II e dos genes COL2A1 e ACAN e a expressão de POU5F1 não foi significativa após estímulo. A análise morfológica da cartilagem indicou aumento da quantidade de condrócitos, da espessura da cartilagem e diminuição da perda de proteoglicanos nos grupos OA/ADSCs/V e OA/ADSCs, em relação ao grupo OA. Também foi observado um aumento da quantidade de colágeno II e diminuição de condrócitos apoptóticos no grupo OA/ADSCs/V. Conclusão: O Col V atua como mediador da condrogênese in vitro, estimulando colágeno II e proteoglicanos, além de aumentar a expressão dos genes COL2A1 e ACAN. A terapia com ADSCs estimuladas com Col V atenuou significativamente o processo osteoartrítico em coelhos, sugerindo uma nova perspectiva para o tratamento da OA / Introduction: Stem cells are undifferentiated cells that are capable of self-renewal, that is, they are capable of multiplying maintaining their undifferentiated state, which provides an active replacement of their population in a constant way in the tissues; stem cells also have the ability to differentiate into several cell types. Thus, it is believed that stem cells present in tissues have a regenerative role when they suffer an injury. The number of studies involving the use of adipose-derived stem cells (ADSCs) in regenerative medicine has increased and the progress of this therapy is link to the identification of mechanisms and molecules that control and mediate the specific lineage\'s differentiation. Collagen is among these molecules and it is a structural protein responsible for the mechanical properties, shape and tissue organization. Among 28 types of collagen, type V (Col V) and XI are considered nucleators of fibrillogenesis and they modulate cell adhesion and cell proliferation. In addition, Col V is highly expressed in embryonic tissue, suggesting that it may act on cell-matrix interaction in remodeling and repair of damaged tissues such as cartilage. Osteoarthritis (OA) is the most common arthropathy among the diseases with joint involvement and, it has no effective treatment that results in surgical intervention in advanced cases. Recent studies show that ADSCs would be an alternative in restoring cartilaginous tissue. Therefore, the aim of this study was to evaluate the response of ADSCs to the Col V stimulus in vitro and the effect of these autologous cells on the regeneration of articular cartilage of rabbits with OA. Methods: ADSCs from rabbit (CEUA 123/14) were cultured with Col V to evaluate the synthesis of the main components of the cartilaginous tissue as proteoglycans, collagen type II. The preservation of the cellular phenotype was evaluated through the collagen I, II, III, CD34 and vimentin expression and COL2A1, ACAN and POU5F1 genes. Rabbits (n=24) were submitted to OA induction though partial meniscectomy and divided into the following groups: OA (n=8), without treatment; OA/ADSCs (n=8), treated with monthly injections of ADSCs and OA/ADSCs/V (n=8), monthly injections of ADSCs previously treated with Col V. Joints were collected after 22 weeks, decalcified and stained with H&E for cellular histomorphometry and cartilage thickness. Safranin O/fast green staining was used for proteoglycan evaluation and immunostaining for collagen type II and Fas-L expression using Image Pro Plus 6.0 software. Results: ADSCs stimulated with Col V were negative for collagen I, III and CD34 and positive for vimentin, total collagen and proteoglycans in vitro. Furthermore, a significant increase in the expression of collagen II, COL2A1 and, ACAN genes was obtained, but the POU5F1 gene expression was not significant after stimulation. Morphological analysis of cartilage indicated increased in the number of chondrocytes, cartilage thickness, and decrease in loss of proteoglycans in the OA/ADSCs/V and OA/ADSCs groups, compared to the OA group. In addition, an increase in the amount of collagen II and decrease of apoptotic chondrocytes in the OA/ADSCs/V group was observed. Conclusion: Col V acts as a mediator of chondrogenesis in vitro stimulating collagen II, proteoglycans and COL2A1, ACAN genes expression. Therapy with Col V-stimulated ADSCs significantly attenuate the osteoarthritic process in rabbits, suggesting a new perspective for the treatment of OA

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The relationships between nutrition and health have been studied throughout recent years as a result of the growing concern about the population s health. Consumers are increasingly more demanding about the quality of food consumed, inclusively worrying about attributes that go beyond the presence of nutrients and food security, but also concerning about health benefits. The following research aimed to understand which consumer perceptions about the role of animal fats in health and attributes are valued in buying dairy products, determining the levels of conjugated linoleic acid in milk produced in the state of Rio Grande do Sul as well as assessing the antiatherogenic potential of conjugated linoleic acid. In the first chapter of the thesis it was analyzed the behavior of consumers before the purchase of milk, where it is observed that 83% of respondents consume milk and crucial aspects for the consumer is the relationship price and taste. There is a good perspective on buying products with higher levels of conjugated linoleic acid and bringing benefits to consumer s health. Due to the wide and varied range of dairy products, consumer was induced to become more demanding about the quality of the product offered. In Chapter 2, it was determined the fatty acid profile in dairy (milk, cheese, and butter) produced in the state of Rio Grande do Sul and it was found that the composition was similar in both types of milk products produced in Rio Grande do Sul, including as to the presence of conjugated linoleic acid. CLA levels varied according to regions and seasons studied, which showed higher levels in the southern portion of the state and in the spring and winter. The CLA content in milk products produced in southern Brazil have higher values than those reported for dairy products from other countries, including those of temperate climate, which show higher values of this constituent. In chapter, it was assessed the effect of different lipid sources and antiatherogenic potential of conjugated linoleic acid in rabbits fed a diet containing butter, margarine, soybean oil, and synthetic CLA. The results, through hierarchical cluster analysis, showed similar variables in animals that consumed butter and soybean oil + CLA and another group with margarine and soy oil. HDL levels were higher in the treatment that received diet with conjugated linoleic acid and LDL was reduced. The reasons TC:HDL and LDL:HDL significantly increased in the group that consumed margarine. The inclusion of CLA, even at low levels, such as 0.1% in the diet of rabbits exerts inhibitory effect on atherogenesis, since lower levels of LDL cholesterol and higher levels of HDL cholesterol are associated with decreased cardiovascular risk. / As relações entre nutrição e saúde vêm sendo estudadas nos últimos anos, como consequência da preocupação da população com a saúde. Os consumidores estão mais exigentes em relação à qualidade dos alimentos consumidos, preocupando-se com atributos que vão além da presença de nutrientes e segurança alimentar, mas que apresentam também benefícios à saúde. Objetivou-se com o trabalho, entender qual a percepção do consumidor sobre o papel da gordura animal na saúde e os atributos valorizados na compra de produtos lácteos, determinar o perfil de ácidos graxos com ênfase no ácido linoleico conjugado em lácteos produzidos no Rio Grande do Sul e avaliar o potencial antiaterogênico do ácido linoléico conjugado. No primeiro capítulo da tese analisou-se o comportamento dos consumidores frente à compra de lácteos, observa-se que 83% dos entrevistados consomem leite e os aspectos mais importantes são a relação preço e sabor. Existe uma boa perspectiva em relação à compra por produtos com teores mais elevados de ácido linoléico conjugado e que tragam benefícios a saúde do consumidor. Em função da grande e variada oferta de produtos lácteos, induziu o consumidor a tornar-se mais exigente em relação à qualidade do produto oferecido. No capítulo 2 determinou-se o perfil de ácidos graxos em lácteos (leite, queijo e manteiga) produzidos no Rio Grande do Sul e, verificou-se que a composição foi semelhante entre os tipos de produtos lácteos produzidos, inclusive quanto a presença do ácido linoléico conjugado. Os níveis de CLA variaram conforme as regiões e estações climáticas estudadas, onde apresentaram maiores teores na região Sul do Rio Grande do Sul e nas estações da primavera e inverno. O conteúdo em CLA de produtos lácteos produzidos na região Sul do Brasil possuem valores superiores aos relatados para produtos lácteos de outros países, inclusive naqueles de clima temperado, os quais demonstram maiores valores deste constituinte. No capítulo 3 avaliou-se o efeito de diferentes fontes lipídicas e o potencial antiaterogênico do ácido linoléico conjugado em coelhos alimentados com dietas contendo manteiga, margarina, óleo de soja e CLA sintético. Os resultados, através da análise de agrupamento hierárquico, acusaram semelhança nas variáveis dos animais que consumiram manteiga e óleo de soja+CLA e outro grupo pela margarina e óleo de soja. Os níveis de HDL foram maiores no tratamento que recebeu dieta com ácido linoléico conjugado e o LDL foi reduzido. As razões CT:HDL e LDL:HDL apresentaram aumento significativo no grupo que consumiu margarina. A inclusão de CLA, mesmo em níveis baixos, como 0,1% na dieta de coelhos exerce efeito inibitório sobre a aterogênese, pois como observado nesta pesquisa, os menores níveis de colesterol LDL e maiores níveis de colesterol HDL estão associados a diminuição de risco cardiovascular.

As habilidades psicomotoras são fundamentais para conduzir de forma adequada e segura um procedimento videocirúrgico. A cirurgia laparoscópica difere da cirurgia tradicional, pois o cirurgião deve guiar suas manobras em um ambiente tri-dimensional, através de imagem bi-dimensional, é privado da sensação táctil direta com os tecidos e necessita adquirir coordenação motora para a utilização de um novo tipo de instrumental cirúrgico. Faz-se necessário o desenvolvimento de modelos de treinamento factíveis para a formação de cirurgiões laparoscópicos, que simulem adequadamente as situações vivenciadas na sala de operação. Esta pesquisa objetivou desenvolver um modelo de cadáver de coelho embalsamado, utilizando a solução de Larssen modificada, para treinamento em quatro procedimentos laparoscópicos: colecistectomia, nefrectomia, esplenectomia e criptorquidectomia. Foram utilizados 17 coelhos de diferentes raças, submetidos a dois procedimentos cirúrgicos cada um. Destes, 15 foram eutanasiados, embalsamados e criopreservados. Após uma semana, os animais foram descongelados em caixa plástica com água aquecida a 40ºC e utilizados no treinamento de um cirurgião sem experiência prévia em videocirurgia. Dois coelhos foram operados vivos, sob anestesia geral inalatória, ao final da fase de treinamento, para verificar a capacidade do cirurgião em realizar as quatro técnicas laparoscópicas citadas, sem ocorrência de complicações significativas, sendo estes animais eutanasiados ao final dos procedimentos. Os cadáveres de coelhos mantiveram suas características teciduais semelhantes àquelas encontradas em um animal vivo. A coloração dos tecidos e órgãos abdominais foi bastante similar ao verificado in vivo, enquanto o odor variou entre leve e moderado e a textura variou entre normal e friável. A imersão dos cadáveres em água aquecida foi efetiva para alcançar o descongelamento completo, com mínima interferência da temperatura ambiente, tendo duração de quatro a cinco horas. O modelo experimental proposto neste estudo apresentou boas condições para execução e treinamento de colecistectomia laparoscópica, nefrectomia total laparoscópica e criptorquidectomia laparoscópica. As condições encontradas na cavidade abdominal dos coelhos embalsamados não foram satisfatórias para a prática adequada de esplenectomia laparoscópica, pela dificuldade em estabelecer boa visualização e manipulação do baço. / Psychomotor skills are essential to correctly and safely conduct endoscopic surgical procedures. Laparoscopic surgery differs from traditional surgery because the surgeon must guide his maneuvers in a tri-dimensional environment, through a bi-dimensional image, he’s deprived of direct tactile sensation with the tissues and needs to acquire motor coordination to use a new type of surgical instruments. Its necessary feasible experimental models to train laparoscopic surgeons, which properly simulates the situations experienced in the operation room. This research aims at proposing a embalmed rabbit cadaver model, prepared with the modified Larssen solution, for training in four laparoscopic procedures: cholecystectomy, nephrectomy, splenectomy, cryptorchidectomy. Seventeen rabbits from different breeds were used, each undergoing two surgical procedures. Of these, 15 were euthanized, embalmed and cryopreservated. After one week, they were thawed in a plastic box with water heated to 40ºC and used in the training of a surgeon with no previous experience with endoscopic surgery. Two rabbits underwent surgery under general anesthesia with a volatile agent, at the end of the training step, to check the surgeon’s ability to perform the four mentioned laparoscopic techniques, without the occurrence of major complications, both being euthanized at the end of the procedures. The rabbit cadavers kept tissues properties similar to those found in a living animal. The color of the abdominal tissues and organs was very close to that verified in vivo, although odor tended from slight to moderate and consistency tended from normal to friable. The cadavers immersion in heated water was effective to completely thaw then, with minimum interference of room temperature, within four to five hours. The experimental model proposed in this study presented valuable conditions to perform and train laparoscopic cholecystectomy, laparoscopic total nephrectomy and laparoscopic cryptorchidectomy. The state of the abdominal cavity found in the embalmed rabbits was unsatisfactory for suitable practice of laparoscopic splenectomy, because of the difficulty in establishing good visualization and manipulation of the spleen.

As técnicas de remoção de catarata evoluíram nas últimas décadas. Na tentativa de oclusão da córnea após incisão para remoção da catarata, diversas técnicas têm sido propostas. Objetivou-se avaliar experimentalmente a viabilidade do emprego do adesivo de fibrina na oclusão da incisão de córnea em coelhos. Além disso, comparar os efeitos do adesivo de fibrina e do fio de sutura na oclusão da incisão de córnea em coelhos, utilizando-se os aspectos clínicos, a microscopia eletrônica de varredura e a morfometria. Dezesseis coelhos (Oryctolagus cuniculus) da raça Nova Zelândia foram submetidos à incisão de córnea bilateral. Para a oclusão da incisão utilizou-se aleatoriamente em um bulbo do olho, adesivo de fibrina e no seu contralateral, fio de sutura. Os períodos de avaliação foram de 7 e 15 dias. As repercussões dos procedimentos foram avaliadas utilizando-se exame oftálmico. Ao final dos períodos determinados, procedeu-se à avaliação da área perincisional desprovida de células endoteliais por meio da microscopia eletrônica de varredura da morfometria e a análise estatística inferencial foi obtida pelo teste t de Student para amostrar pareadas. Clinicamente, observaram-se melhores resultados nas amostras ocluídas com fio de sutura. No que se refere à área perincisional desprovida de células endoteliais, comparando-se os dois tipos de oclusão, a área das amostras seladas com fibrina apresentou-se maior que a área ocluída com fio de sutura. Neste estudo, ambas as técnicas foram eficazes na oclusão da córnea de coelhos. Porém, a avaliação valendo-se da microscopia eletrônica de varredura e da morfometria das eletromicrografias das áreas perincisionais do endotélio da córnea desprovidas de células ocluídas com fio de sutura demonstrou maior nível de significância quando comparada ao adesivo de fibrina. / The techniques for cataract removal had developed in the last decades. As an attempt to repair the cornea after incision, different techniques are proposed for corneal sealing. The objective of this study was to evaluate experimentally the viability of the use of fibrin adhesive in occlusion of the incision of the cornea in rabbits. Also compare clinically and by scanning electron microscopy and morphometry the fibrin adhesive and the suture on the sealing the cornea incision in rabbits. In this study, 16 rabbits (Oryctolagus cuniculus) New Zealand breed were used. It was performed bilateral corneal incision. In one eye the incision was sealed with suture, in the other eye, with fibrin adhesive randomly. The periods of evaluation varied from 7 to 15 days. The repercussions at the eye were studied using the ophthalmic exam. At the end of the determinate period, it was performed the evaluation of the perincisional area without endothelial cell by means of scanning electron microscopy, morphometry and the inferential statistical analysis was made by Student t test for paired samples. Comparing the two types of sealing, the perincisional average area without endothelial cells was higher in the fibrin tissue than wired in both groups. In this study, both techniques had corneal sealing, however, the evaluation by scanning electron microscopy,and electromicrographs morphometry of the perinsional areas of the corneal endothelium without devoid cells occluded with suture wire has higher level significance when compared with fibrin adhesive.