Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-10-27T18:06:41Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Panmera Almeida Helrigel - 2017.pdf: 1036367 bytes, checksum: f89e2ff07a0f9cf65acb53458a14fe2d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Rejected by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com), reason: Observe como fica o nome do mestrado, na citação, nos que já estão na BDTD on 2017-10-30T11:01:19Z (GMT) / Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-10-30T15:47:57Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Panmera Almeida Helrigel - 2017.pdf: 1036367 bytes, checksum: f89e2ff07a0f9cf65acb53458a14fe2d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-10-31T09:47:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Panmera Almeida Helrigel - 2017.pdf: 1036367 bytes, checksum: f89e2ff07a0f9cf65acb53458a14fe2d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-31T09:47:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Panmera Almeida Helrigel - 2017.pdf: 1036367 bytes, checksum: f89e2ff07a0f9cf65acb53458a14fe2d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-07-21 / The present study was carried out to determine the effect of cellulase added to the silage process of the Mombaça grass, on the bromatological composition, cell wall digestibility and the minimum fermentation period to open the silo. The experimental design was completely randomized, with four replicates, in a 3 x 3 factorial scheme, three cellulase weight / weight (0, 3 and 6%) and three fermentation periods (30, 60 and 120 days), totaling 36 experimental silos. For silage, the mombaça grass was cut at an approximate height of 80 cm, at 20 cm from the ground level. The addition of the enzyme was efficient in improving the fermentative and bromatological parameters of the silages of the cultivar in question. The addition of cellulase promoted a reduction of 5.7% in the NDF contents in relation to the control, but there was also a reduction in the fiber digestibility of 6.6% in relation to the control. However, the digestibility reduction was lower in proportion to the reduction of NDF, which allowed to increase net lactation energy by 15% and NDT by 11%. The enzyme use also resulted in lower pH (4.74 vs 3.73 control and with cellulase) and higher titratable acidity (5.86 and 12.77 control and with cellulase), indicating that the cellulase allowed a fermentative process within the recommended standards. After 30 days of silage, the silages had already completed the anaerobic fermentation cycle and would be fit for consumption. After the 60 day period, the silage had a reduction of the quality parameters indicating that tropical grass silages should be used with up to 60 days of fermentation. / O presente estudo foi desenvolvido com objetivo de determinar a o efeito de celulase adicionada ao processo de ensilagem do capim Mombaça, na composição bromatológica, digestibilidade da parede celular e o período mínimo de fermentação para abertura do silo. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado, com quatro repetições, em esquema fatorial 3 x 3, sendo três doses de celulase peso/peso (0, 3 e 6%) e três períodos de fermentação (30, 60 e 120 dias), totalizando 36 silos experimentais. Para a ensilagem, o capim mombaça foi cortado em altura aproximada de 80 cm, a 20 cm do nível do solo. A adição da enzima foi eficiente em melhorar os parâmetros fermentativos e bromatológicos das silagens do cultivar em questão. A adição de celulase promoveu redução de 5,7% nos teores de FDN, em relação ao controle, mas também houve redução na digestibilidade da fibra de 6,6% em relação ao controle. No entanto, a redução de digestibilidade foi inferior proporcionalmente à redução de FDN, o que permitiu aumentar a energia líquida de lactaçãoe em 15% e o NDT em 11%. O uso de enzima resultou também em menor pH (4,74 vs 3,73 controle e com celulase) e maior acidez titulável (5,86 e 12,77 controle e com celulase), indicando que a celulase permitiu um processo fermentativo dentro dos padrões recomendados. Após 30 dias de ensiladas, as silagens já tinham completado o ciclo de fermentação anaeróbico e estariam aptas para o consumo. Após o período de 60 dias, a silagem teve redução dos parâmetros de qualidade indicando que silagens de capins tropicais deveriam ser utilizadas com até 60 dias de fermentação.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-03-31T17:47:17Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - André Luis Machado Carneiro - 2017.pdf: 930852 bytes, checksum: cf82f8587e94d0d2d10b45c2e242f65c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-04-03T11:55:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - André Luis Machado Carneiro - 2017.pdf: 930852 bytes, checksum: cf82f8587e94d0d2d10b45c2e242f65c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-03T11:55:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - André Luis Machado Carneiro - 2017.pdf: 930852 bytes, checksum: cf82f8587e94d0d2d10b45c2e242f65c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-01-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this study was to evaluate the effect of adding the protease enzyme 0.05% (Cibenza DP 100) in diets for broilers based on corn and soybean meal with two nutritional matrices. Two experiments were conducted with 5 treatments with a basal corn and soybean meal diet: T1 – basal diet with valued protease matrix twice without the enzyme, T2 – basal diet with valued protease nutritional matrix once without enzyme, T3 – basal diet, T4 – basal diet with valued protease nutritional matrix twice with enzyme and T5 – basal diet with valued protease nutritional matrix once with enzyme. The first experiment was carried out with 1280 chicks Cobb500 strain of 1 to 42 days and the second experiment was carried out with 120 chicks housed in the first experiment, and the chicks were housed in battery cages from 17 to 21 days for digestibility study. The experimental design of the experiments was a randomized block, being in the first experiment the row in the experimental industrial shed the criteria for distribution of the blocks, with 5 treatments and 8 repetitions each containing 32 broilers per box. In the second experiment the floor of the cage was the criteria distribution of the blocks, with 5 treatments and 6 repetitions each containing 4 broilers per cage. The analyzed variables were: digestibility, carcass yield, rest, thighs, wings, abdominal fat and performance variables. In all treatments the data were subjected to analysis of variance, evaluated by the R program, and the means were compared by Tukey test at 10% significance. In the first experiment, it was observed a statistical difference (P <0.10) in the final mean weight, weight gain and feed intake in the pre-initial phase with beneficial results with the enzyme supplementation with valued protease nutritional matrix once. In the period from 1 to 21 days, there was a statistical difference (P <0.10) in feed intake and feed conversion, but with positive results for the control treatment. In the cut yield, there was no statistical difference (P> 0.10) in the most used cuts, similar results between the treatments and the control. Statistically different result (P <0.10) was found with the lowest proportion of abdominal fat in the diet fed with diet supplemented with the enzyme and nutritional matrix valued at one time. In the second experiment, statistical difference (P <0.10) was observed for nitrogen balance, which was positive, resulting in higher retention of nitrogen with lower excretion in the environment. The dry matter retention also showed a statistically different result (P <0.10), with a positive result for the supplementation with the enzyme together with greater metabolizability of the dry matter. Based on this study, the protease enzyme supplementation is recommended along with a valued protease nutritional matrix once, in the pre-initial phase of life of the birds, in order to have a better final weight, better weight gain, lower feed intake, lower proportion of abdominal fat, positive nitrogen balance and higher dry matter retention. Based on this work, it is recommended to supplement the protease enzyme with a valued protease nutritional matrix, especially in the pre-initial phase, in order to have a better final weight, better weight gain, lower feed intake, lower abdominal fat ratio, positive nitrogen balance and higher dry matter retention. In the other stages of life of the birds (initial, growth and final) the enzyme supplementation with a valued protease nutritional matrix was also beneficial, since the results in performance, cut yield and metabolizability were equivalent to control. The treatment diets are reduced in nutritional levels if compared to control diet with ideal dietary level for the broilers, resulting in less expense with the nutrients and maintaining a high yield. / Objetivou-se com a presente pesquisa avaliar o efeito da adição da enzima protease 0,05% (Cibenza DP 100) em dietas para frangos de corte a base de milho e farelo de soja. Foram conduzidos dois experimentos com 5 tratamentos cada. Todas as rações foram elaboradas com milho e farelo de soja, diferenciando no seguinte: T1 - ração basal com a matriz da protease valorizada em duas vezes sem a enzima, T2 - ração basal com a matriz da protease valorizada em uma vez sem a enzima, T3 - ração basal, T4 - ração basal com a matriz da protease valorizada em duas vezes com a enzima e T5 – ração basal com a matriz da protease valorizada em uma vez com a enzima. O primeiro experimento foi realizado com 1280 pintos da linhagem Cobb500 de 1 a 42 dias e o segundo com 120 pintos alojados em baterias de gaiolas de 17 a 21 dias para ensaio de digestibilidade. O delineamento experimental foi em blocos casualizados, sendo no experimento 1 a localização da parcela experimental dentro do galpão, com cinco tratamentos e oito repetições cada, contendo 32 aves por box. No experimento 2 o andar da gaiola foi o critério de distribuição dos blocos, com 5 tratamentos e 6 repetições cada, contendo 4 aves por gaiola. As variáveis analisadas nos experimentos 1 e 2 foram: digestibilidade, rendimento de carcaça, peito, coxas, asas, gordura abdominal e variáveis de desempenho. Os dados foram submetidos a analise de variância, avaliados por meio do programa R, e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 10% de significância. No primeiro experimento, observou-se diferença estatística (P<0,10) no peso médio final, ganho de peso e consumo de ração na fase pré-inicial com resultados benéficos com a suplementação da enzima com valorização em uma vez da matriz nutricional. Já no período de 1 a 21 dias, houve diferença estatística (P<0,10) no consumo de ração e conversão alimentar, porém com resultados positivos para o tratamento controle. No rendimento de cortes, não houve nenhuma diferença estatística (P>0,10) nos cortes mais utilizados, resultados semelhantes entre os tratamentos e o controle. Resultado diferente estatisticamente (P<0,10) foi encontrado com a menor proporção de gordura abdominal na parcela alimentada com dieta suplementada com a enzima e matriz nutricional valorizada em uma vez. No segundo experimento, observou-se diferença estatística (P<0,10) para balanço de nitrogênio sendo este positivo, resultando em maior retenção de nitrogênio com menor excreção no ambiente. A retenção de matéria seca também mostrou um resultado diferente estatisticamente (P<0,10), com resultado positivo para a suplementação com a enzima juntamente com maior metabolizabilidade da matéria seca. Baseado nesse trabalho recomenda-se a suplementação da enzima protease juntamente com uma valorização da matriz nutricional, principalmente na fase pré-inicial, para que se tenha melhor peso médio final, melhor ganho de peso, menor consumo de ração, menor proporção de gordura abdominal, balanço positivo de nitrogênio e maior retenção de matéria seca. Nas outras fases de vida das aves (inicial, crescimento e final) a suplementação da enzima com a valorização da matriz nutricional também se mostrou benéfica, visto que os resultados em desempenho, rendimento de cortes e metabolizabilidade foram equivalentes ao do tratamento controle. As dietas tratamento são reduzidas em níveis nutricionais se comparadas com a dieta controle com o nível dietético ideal para as aves, isso acaba resultando em menor gasto com os nutrientes e mantendo uma alta produção.

Objetivou-se elaborar uma revisão sistemática da literatura das exigências de cálcio e fósforo com o uso da enzima fitase em ração para frangos de corte e avaliar altas doses de 6-fitase híbrida em rações, com ajuste na matriz nutricional, sobre o desempenho produtivo, aspectos econômicos, qualidade óssea e características de carcaça de frangos de corte. Para a revisão sistemática adotou-se a metodologia proposta por Lovatto et al. (2007), com a localização de artigos relacionados com o tema, coleta de dados, análise crítica dos artigos, interpretação e representação dos resultados encontrados. Para o desempenho, conduziu-se um experimento com 1200 pintos de um dia, Cobb500®, com peso médio de 47,94 &plusmn; 0,54 g, distribuídos em um delineamento em blocos casualizados com cinco tratamentos, com oito repetições de 30 aves cada. Os tratamentos utilizados foram: 1) Controle positivo de acordo com as exigências da Tabela Brasileira para Aves e Suínos; 2) Controle negativo (CN) com redução na matriz nutricional equivalente a dose de fitase de 750 FTU/kg, mas sem a inclusão da enzima; 3) CN com inclusão da fitase em 750 FTU/kg; 4) CN com inclusão da fitase em 1000 FTU/kg; e 5) CN com inclusão da fitase em 1500 FTU/kg. A redução dos nutrientes no controle negativo foi de 0,184% de fósforo disponível, 84,8 kcal/kg de energia metabolizável, 0,36% de proteína bruta, 0,206% de cálcio, 0,002% de sódio, 0,006% de lisina digestível e 0,019% de metionina+cistina digestível. A enzima utilizada foi Natuphos® E 10.000 FTU/g, nova 6-fitase de origem híbrida. Para o desempenho e o rendimento de carcaça foram observadas diferenças entre os tratamentos (p&lt;0,05), sendo que o controle negativo gerou resultados inferiores em relação aos demais tratamentos, enquanto que, para a análise econômica gerou resultados inferiores para as receitas brutas e superiores para os custos de produção (p&lt;0,05). Para a qualidade óssea, a suplementação de fitase nos níveis de 1000 e 1500 FTU/kg geraram resultados semelhantes aos encontrados para o controle o positivo (p&lt;0,05). Dessa maneira, concluiu-se que a suplementação da 6-fitase híbrida em níveis de 1000 e 1500 FTU/kg, com redução de nutrientes na matriz nutricional, melhora o desempenho, as características de carcaça, os aspectos econômicos e os parâmetros de qualidade óssea, conseguindo alcançar a mesma qualidade óssea do controle positivo, porém com um custo reduzido. / The objective of this study was to systematically review the literature on calcium and phosphorus requirements with the use of phytase enzyme in broiler feed and evaluate the levels of hybrid 6-phytase in diets, with an adjustment in the nutritional matrix, on the productive performance, bone quality, and carcass characteristics of broiler chickens. For the systematic review, the methodology proposed by Lovatto et al. (2007), for the localization of articles related to the theme, data collection, critical analysis of the articles, interpretation and representation of the results found. For broilers from 1 to 21 days, the enzyme phytase Natuphos is the most studied and levels above 500 FTU / kg can be used without compromising the performance of the animals, in addition to significantly improving the cost of. An experiment was carried out with 1200 day-old Cobb500® chickens, with a mean weight of 47.94 &plusmn; 0.54 g, distributed in a randomized block design with five treatments, with eight replicates of 30 birds each. The treatments used were: 1) Positive control according to the requirements of the Brazilian Poultry and Pork Table; 2) Negative control (CN) with reduction in nutritional matrix equivalent to phytase dose of 750 FTU / kg, but without inclusion of the enzyme; 3) CN with phytase inclusion at 750 FTU / kg; 4) CN with phytase inclusion at 1000 FTU / kg; and 5) CN with phytase inclusion at 1500 FTU / kg. The nutrient reduction in the negative control was 0.184% of available phosphorus, 84.8 kcal / kg of metabolizable energy, 0.36% crude protein, 0.206% calcium, 0.002% sodium, 0.006% digestible lysine and 0.019 % digestible methionine + cystine. The enzyme used was Natuphos® E 10,000 FTU / g, a novel 6-phytase of hybrid origin. For carcass performance and yield, differences between treatments (p &lt;0.05) were observed, and the negative control generated lower results in relation to the other treatments, whereas, for the economic analysis, lower results were obtained for gross and production costs (p &lt;0.05). For bone quality, phytase supplementation at 1000 and 1500 FTU / kg levels were found to be similar to the positive control results (p &lt;0.05). Thus, it is concluded that supplementation of hybrid 6-phytase at levels of 1000 and 1500 FTU / kg, with nutrient reduction in the nutritional matrix, improves performance, carcass characteristics, economic aspects and parameters of bone quality, achieving the same quality bone of the positive control, but with a reduced cost.

A Na,K-ATPase é uma proteína encontrada na membrana plasmática de praticamente todas as células animais, que utiliza a energia derivada da hidrólise do ATP para transportar 3 íons Na+ e 2 íons K+. É composta por duas subunidades denominadas e . Um aspecto que ainda gera controvérsias se refere à sua forma de associação nativa e funcional como um protômero ou ainda na forma de oligômeros ()2 ou ()4. Uma forma de estudar essa enzima é pela sua solubilização da membrana, e posteriormente reconstituição em lipossomos de DPPC:DPPE. A caracterização cinética e estrutural desse sistema mostra que a enzima se apresenta na forma oligomérica ()2. O objetivo desse trabalho foi avaliar os mecanismos de dissociação e de desnaturação da Na,K-ATPase solubilizada bem como da reconstituída em lipossomos de DPPC:DPPE, por agentes físicos (temperatura) e químicos (relação proteína:detergente, uso de agentes caotrópicos como a guanidina e mudanças de pH), para interpretar as suas formas de associação e regulação. Para isso, foram realizados experimentos de dicroísmo circular (CD), calorimetria (DSC), infravermelho (FTIR), fluorescência de emissão do triptofano, tensão superficial, elasticidade, atividade catalítica (ATPase e pNPPase). Os estudos de CD em função da variação de temperatura mostraram que ocorre uma transição na curva de elipticidade (222 nm) a 43,7°C para a enzima solubilizada e a 42,0°C para a enzima reconstituída em lipossomos. Estas transições foram também encontradas pela técnica de FTIR. Os experimentos por DSC para a enzima solubilizada revelaram a presença de três picos em 54,7; 64,7 e 67,8°C. Já para a enzima reconstituída observam-se transições em menores temperaturas entre 30 a 40ºC (referentes aos lipídios) e ainda a preservação do pico de transição para proteína em 68,0°C. A análise de fluorescência de triptofano para ambas formas de enzima revelou deslocamentos de pico máximo de emissão a partir de 60°C. Já a presença de guanidina mostrou dois pontos de transição em 3 e 5 mol.L-1 para a Na,K-ATPase solubilizada. O efeito de diferentes meios tamponantes revelou que a enzima apresenta maiores conteúdos em -hélice em pH 7,5, concomitante com um aumento na intensidade de emissão de fluorescência do triptofano na faixa de pH de 5,0 a 8,5. Analisando conjuntamente todas as técnicas podemos propor um mecanismo de dissociação/desnaturação da enzima em função da temperatura. Primeiramente a enzima passa do seu estado oligomérico ()2 e forma protômeros . A atividade ATPase é perdida completamente (acima de 60ºC) quando as subunidades são completamente separadas, ocorrendo então uma agregação das subunidades , através dos domínios citoplasmáticos. Finalmente, a análise da enzima em diferentes proporções de proteína:detergente revela que a Na,K-ATPase, na presença de concentrações abaixo da CMC, se encontra na forma ()2 ou ainda ()4 (dependendo da concentração de proteína). Já para concentrações acima da CMC ocorre a separação das subunidades e consequente perda de atividade catalítica. Devido à dependência da atividade ATPase com seu estado conformacional e seu estado de oligomerização, este estudo realizado por técnicas bioquímicas e biofísicas, resulta em novas informações acerca da compreensão dos mecanismos que controlam o processo de associação, o qual é importante para a função da enzima na membrana natural. / Na,K-ATPase is a protein found in the plasmatic membrane of almost all animal cells and it uses the energy from ATP hydrolysis to transport 3 Na+ ions and 2 K+ ions. It is formed by subunits called and. One controversial aspect refers to its native and functional association form as a protomer or still in ()2 or ()4 oligomers form. One way to study this protein in our laboratory is by its solubilization from membrane, and later reconstitution in liposome from DPPC:DPPE. The kinetic and structural characterization fo this system shows that the enzyme presents itself in the oligomeric form ()2. The aim of this work was to evaluate the dissociation and denaturation mechanisms of the solubilized NA,K-ATPase as well as the one reconstituted in DPPC:DPPE liposome, by physic (temperature) and chemical agents (relation protein:detergent, use of chaotropic agents as Guanidine chloride, or still by the pH changes, to interpret its association and regulation forms. To that end, experiments of circular dichroism (CD), calorimetry (DSC), superficial tension, elasticity , catalytic activity (ATPase an pNPPase) were done. The CD studies in function of temperature variation have shown that a transition occurs in the ellipticity curve (222 nm) at 43.7ºC for the solubilized enzyme and at 42.0ºC for the enzyme reconstituted in liposome. These transitions were also found by the FTIR technique. The experiments by DSC for the solubilized enzyme have shown the presence of three peaks at 54.7ºC, 64.7ºC and 67.8ºC. As for the reconstituted enzyme, transitions in lower temperatures between 30ºC and 40ºC (concerning the lipids) and also the preservation of the transition peak for the protein at 68.0ºC were observed. The Tryptophane fluorescence analysis for both enzyme forms has revealed emission maximum peak shifts starting from 60ºC. The Guaniddine presence has shown two transition points at 3 and 5 mol.L-1 for the solubilized Na,K-ATPase. The effect of different buffer media has shown that the enzyme presents higher contents in -helix at pH 7.5, concomitant with an increase of the intensity of tryptophane fluorescence emission in the pH range of 5.0 to 8.5. Analyzing all the techniques together we can propose a dissociation/denaturation mechanism in function of the temperature. First, the enzyme goes from its oligomeric ()2 state and forms protomers. The ATPase activity é totally lost ( over 60ºC) when the subunits are completely separated, when an subunits aggregation then occurs, through the cytoplasmatic domains. Finally, the analysis of the enzyme in different proportions of protein:detergent reveals that the NA,K-ATPase, in the presence of concentrations bellow CMS, is in the ()2 or yet in the ()4 form (Depending on protein concentration). Now for concentrations above CMS, the separation of the subunits occurs and consequent catalytic activity loss. Due to the ATPase activity dependence on its conformational form and oligomerization state, this study done with biophysical and biochemistry techniques, results in new information on the comprehension of the mechanisms that control the association processes, which is important to the enzyme function in the natural membrane.

Neste trabalho são apresentados resultados relacionados a estudos sobre o comportamento eletroquímico do lactato e do peróxido de hidrogênio em diversos eletrodos em meio de diferentes pHs utilizando voltametria cíclica. Também foi investigado o comportamento eletroquímico do peróxido de hidrogênio em eletrodos modificados com filmes de hexacianoferratos utilizando eletrodos de platina e carbono vítreo. A vantagem do uso do CTAB na modificação da superfície de carbono vítreo com Azul da Prússia foi confirmada no que se refere à melhora da sensibilidade e da estabilidade das medidas. Numa etapa posterior desenvolveu-se um biossensor para a determinação de lactato pelo monitoramento de peróxido de hidrogênio produzido na reação catalisada de lactato com oxigênio na presença da enzima lactato oxidase. Nessa etapa, o trabalho consistiu em imobilizar a enzima lactato oxidase na superfície do eletrodo, previamente, modificado com Azul da Prússia, com o auxílio de Nafion&#174;. Após a construção do biossensor e a otimização das condições de análise (pH, quantidade de enzima, volume da amostra e vazão) para obtenção de maior sinal analítico no desenvolvimento do método para a determinação de lactato por análise em fluxo, averiguou-se a repetibilidade das medidas (Clactato = 0,28 mmol L-1) obtendo-se um desvio padrão de 2,2% para 18 repetições. A freqüência analítica foi estimada em 160 injeções por hora com limite de detecção de 0,84 &#181;mol L-1 e linearidade até 0,28 mmol L-1 de lactato. O biossensor foi aplicado na quantificação de lactato em amostras alimentares (cervejas alcoólicas e não alcoólicas) e biológicas (sangue liofilizado e recém coletado). Por fim, realizaram-se estudos envolvendo a variação da concentração de lactato sanguíneo em função da intensidade de atividade esportiva. Os resultados obtidos pelo método proposto foram comparados com aqueles oriundos do uso de método de referência. / Results on the investigation of the electrochemical behavior of lactate and hydrogen peroxide at various electrodic surfaces at different pHs using cyclic voltammetry are presented. Experiments were also carried out with platinum and glassy carbon electrodes modified with hexacyanoferrate films. The advantage of using CTAB in the electrodeposition step of Prussian Blue films onto glassy carbon surfaces was confirmed taking into account both the stability and sensitivity of measurements. The immobilization of lactate oxidase onto glassy carbon electrodes modified with a Prussian Blue layer using Nafion® was performed to fabricate a biosensor for lactate. The biosensor was used in the development of a FIA amperometric method for the determination of lactate. Under optimal operating conditions (pH = 6.9, E = -0.1 V), the linear response of the method was extended up to 0.28 mmol L-1 lactate with a limit of detection of 0.84 &#181;mol L-1. The repeatability of the method for injections of a 0.28 mmol L-1 lactate solution was 2.2 % (n = 18). The analytical frequency was calculated as 160 injections h-1. The usefulness of the method was demonstrated by determining lactate in beer (alcoholic and nonalcoholic beers) and blood samples (lyophilized and freshly collected). Finally, the influence of physical exercise on the blood lactate level was studied. Results obtained by using the proposed amperometric detector compared well with the reference method.

A ocorrência de frutanos em espécies de Asteraceae foi amplamente documentada para a flora da região de cerrado da Reserva Biológica e Estação Experimental de Moji Guaçu. Dentre estas espécies destaca-se Vernonia herbacea, uma planta perene que apresenta órgãos subterrâneos de reserva, denominados rizóforos, que acumulam altos teores de frutanos do tipo inulina. Seu crescimento sazonal é caracterizado pela brotação das gemas existentes nos rizóforos, na primavera, seguida de floração e crescimento vegetativo intenso no verão e dormência no inverno. O conteúdo de frutanos diminui durante a brotação e floração, pois este carboidrato parece ser utilizado para a regeneração dos ramos aéreos que ocorre nesta fase. Estudos preliminares mostraram que a FEH, responsável pela mobilização dos frutanos, apresenta atividade elevada apenas durante a brotação; a despolimerização dos frutanos nos rizóforos de V. herbacea nesta fase foi evidenciada pelo aumento de açúcar redutor, especialmente frutose. O presente estudo teve como objetivo principal a análise da atividade das enzimas envolvidas no metabolismo de frutanos e análise do conteúdo e da composição de frutanos em rizóforos de V. herbacea induzidas à brotação. A brotação foi induzida pela remoção dos ramos aéreos e as atividades das enzimas FEH , SST, FFT e INV foram determinadas a cada quatro dias durante um mês após a poda. Um aumento na atividade da FEH foi observado entre os dias 13 e 20 após a poda, o que coincidiu com o início da brotação dos novos ramos que ocorreu no 13º dia. Este resultado sugere que a despolimerização de frutanos e a brotação são processos concomitantes em V. herbacea, que ocorrem naturalmente durante o ciclo fenológico, mas que também podem ser induzidos em outras fases do ciclo fenológico pela remoção dos ramos aéreos. A FFT parece atuar junto à FEH na diminuição do tamanho das cadeias de frutanos durante a rebrota, enquanto a SST é inibida devido, possivelmente, à interrupção do fornecimento de sacarose aos rizóforos pelos órgãos aéreos. Para a caracterização e purificação parcial da FEH de rizóforos de V. herbacea foram utilizados rizóforos de plantas induzidas à brotação através da remoção dos ramos aéreos. O extrato bruto apresentou, para atividade de FEH, pH ótimo de 4,5, temperatura ótima em 30 ºC e curva sigmoidal de concentração de substrato, sugerindo tratar-se de uma enzima alostérica. Esta enzima também apresentou maior especificidade por ligações do tipo b-2,1 do que sobre ligações b-2,6, e maior afinidade por frutanos de cadeias curtas quando comparadas com frutanos de cadeias longas. Utilizando precipitação com sulfato de amônia, cromatografia de afinidade e cromatografias de troca aniônica e catiônica, quatro frações com atividade de FEH foram purificadas. Destas quatro frações, duas foram submetidas à cromatografia de exclusão molecular, sendo que os pesos moleculares estimados para uma delas foi de 21 kDa e para outra, esta medida situou-se entre 155 e 39 kDa, devido à ampla faixa de exclusão da coluna utilizada. Os pesos moleculares das outras duas frações foram estimados por SDS-PAGE, sendo que as bandas visualizadas corresponderam a 81,3 e 57,5 kDa para uma e 57,5 kDa para a outra fração. / The occurrence of fructans has been reported in native species of a cerrado area of Reserva Biológica e Estação Experimental de Moji Guaçu. Vernonia herbacea, one of these species, presents underground organs named rhizophores which accumulate fructans of the inulin type as reserve carbohydrate. The seasonal growth pattern exhibited by plants of V. herbacea includes sprouting of buds from the rhizophores in spring, followed by a period of flower development and vegetative growth in summer, and dormancy in winter. The fructan content decreases during sprouting and flowering due to mobilization of this carbohydrate during the regeneration of the new shoots. Preliminary studies showed that FEH, the enzyme responsible for the mobilization of fructan, shows high activity only during sprouting. Fructan mobilization was detected by the increase in the amount of reducing sugar released, namely fructose. The aim of this work was to analyze the activities of the enzymes of fructan metabolism, FEH, SST, FFT and invertase and the fructan contents in rhizophores of plants induced to sprouting by defoliation. The enzyme activities were measured every 4 th day for a month after defoliation. Sprouting of new shoots started around the 13 th day, while an increase in FEH activity was detected between 13 and 20 days after defoliation. The results suggest that fructan depolimerization and sprouting are concomitant processes in V. herbacea that occur naturally during the phenological cycle; however, these processes can also be induced by defoliation during other stages of the phenological cycle. FFT seems to act together with FEH by catalyzing the decrease in fructan chain size during shoot regrowth, while SST was inhibited, possibly, due to interruption of sucrose supply to rhizophores from the aerial organs. The characterization and partial purification of FEH were done using rhizophores from plants which were induced to sprouting by defoliation. The optimal pH and temperature for FEH activity were pH4,5 and 30ºC, respectively. The substrate concentration curve exhibited a sigmoid shape, suggesting that FEH of V. herbacea is an alosteric enzyme. Additionally, this enzyme shows more specificity to b-2,1 than to b-2,6 linked fructan and higher affinity for short chain when compared to long chain fructans. Four fractions presenting FEH activity were partially purified by a combination of ammonium sulfate precipitation, affinity chromatography, and anion and cation exchange chromatographies. Two of these were submitted to size exclusion chromatography and the apparent molecular size for one of them was 21 kDa and for the other it was estimated to be between 39 and 155 kDa, due to the wide exclusion limit of the column used. The molecular size of the next two fractions were estimated by SDS- PAGE and the visualized bands corresponded to 81.3 and 57.5 kDa for the first fraction and to 57.5 kDa for the second one.

Periplaneta americana apresenta em seu tubo digestivo pelo menos oito atividades &#946;-glucanásicas distintas. Destas, cinco puderam ser purificadas até a homogeneidade e parcialmente caracterizadas. LAM (Mr=46.000) apresenta atividade exclusiva sobre laminarina, é inibida por altas concentrações de substrato e gera oligossacarídeos de baixo grau de polimerização (1 a 4) a partir de laminarina solúvel. LIQl (Mr=24.600) é capaz de hidrolisar laminarina e liquenana, produzindo oligossacarídeos de grau de polimerização 1, 2 e 4 a partir de laminarina solúvel e um único oligossacarídeo (grau de polimerização entre 3 e 4) a partir de liquenana. LIQ 2 (Mr= 22.300) é capaz de clivar laminarina e liquenana e é inibida por laminarina, clivando apenas ligações internas ao polímero. CELl e CEL2 (Mr=71.600 e 72.700) clivam liquenana e carboximetilcelulose, também atacando apenas ligações internas destes polissacarídeos. CELl e CEL2 também são capazes de atacar celulose cristalina. Todas as &#946;-glucanases purificadas apresentam um pH ótimo em torno de 6,0, próximo ao pH luminal, e são relativamente estáveis em condições fisiológicas. Estas enzimas são purificadas a partir da fração solúvel do tubo digestivo do inseto em quantidades muito pequenas (até 7&#181;g), o que inviabiliza sua caracterização estrutural refinada. Além destas proteínas, o sistema &#946;-glucanásico de P. americana conta com duas celulases de baixo peso molecular (Mr= 15.000 e 17.000), e uma atividade ainda não caracterizada. Aparentemente, estas enzimas estão envolvidas na digestão incompleta da celulose e hemiceluloses ingeridas pelo inseto. LIQ 1 possui capacidade lítica sobre células de Saccharomyces cerevisiae, podendo estar envolvida na defesa do epitélio contra agentes infecciosos. / P. americana midgut has at least eight &#946;-glucanases. Five were purified and partially characterized. LAM (Mr=46,000) is active only upon soluble laminarin, is inhibited by high amounts of substrate, and releases small oligosaccharides (1 to 4 glucoses). LIQ1 (Mr=24,600) is active upon laminarin and lichenan, releasing oligosaccharides with 1,2 and 4 glucosyl residues from soluble laminarin and only one oligossacharide, with a degree of polimerization between 3 and 4, from lichenan. LIQ2 (Mr=22,300) is active upon laminarin and lichenan and hydrolyzes only internal bond. CEL1 and CEL2 are active upon lichenan and carboxymethylcellulose, hydrolyzing internal bonds in these substrates. CEL1 and CEL2 also attack AVICEL. All &#946;-glucanase activities have an optimum pH around 6.0 (near luminal pH) and are stable under physiological conditions. These enzymes are purified in very low amounts (up to 7&#181;g from 10 animais). P. americana &#946,-glucanasic system also has two cellulases of low molecular weight (Mr= 15,000 and 17,000), and another not yet characterized. Probably these enzymes are involved in incomplete digestion of cellulose and hemicellulose ingested by the insect. LIQ 1 lyses Saccharomyces cerevisiae cells, and may be involved in epithelium defense against microorganisms.

Um experimento foi conduzido no Setor de Avicultura do Departamento de Nutrição e Produção Animal da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo para avaliar o efeito de rações contendo diferentes níveis de cálcio e suplementadas com fitase sobre o desempenho, a digestibilidade e a excreção de nutrientes pelas aves, determinar a energia metabolizável aparente corrigida e avaliar a mineralização óssea de frangos de corte nas fases inicial (1 a 21 dias), de crescimento (22 a 35 dias) e final (36 a 42 dias). No ensaio de desempenho foram utilizados 2.160 pintos de corte machos da linhagem AG Ross 308, de 1 a 42 dias de idade, distribuídos em 6 tratamentos, com 6 repetições cada. Foi utilizado um delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial 3 x 2, sendo 3 níveis de fitase (0, 600 e 1200 FTU/kg) e 2 níveis de cálcio (0,94% e 0,66%; 0,84% e 0,59%; e 0,78% e 0,54% para as fases inicial, de crescimento e final, respectivamente). As rações experimentais ainda tinham níveis reduzidos de fósforo disponível (Pd) e níveis mínimos de proteína bruta (PB). Ao final de cada fase avaliou-se o consumo de ração (CR), o ganho de peso (GP), a conversão alimentar (CA) e a mortalidade (Mort). Não houve interação entre os níveis de fitase e de cálcio estudados para CR em nenhuma das três fases avaliadas, entretanto foram observadas para GP (P<0,01 para a fase inicial e P<0,05 para as fases de crescimento e final) e para Mort (P<0,01 para as fases inicial e de crescimento e P<0,05 para a fase final) nas três fases. Foram observados efeitos de fitase para o CR (P<0,01 para ambas as fases) na fase inicial e de crescimento e os níveis de cálcio influenciaram o CR (P<0,05 para ambas as fases) nas fases inicial e final. Nenhum resultado significativo foi observado para CA. Desse modo pode-se concluir que os níveis nutricionais de cálcio podem ser reduzidos em 30% em dietas com níveis reduzidos de fósforo disponível e níveis mínimos de proteína bruta, sem afetar o desempenho, desde que às dietas sejam adicionadas 600 FTU/kg de fitase. Paralelamente foram conduzidos 3 ensaios de metabolismo utilizando-se 108 pintos de corte machos transferidos do galpão de alvenaria para as baterias metálicas aos 15, 29 e 36 dias, respeitando-se os tratamentos e as repetições, onde passaram por um período de 4 dias de adaptação, e 3 dias de coleta de excretas. Neste ensaio avaliou-se a energia metabolizável aparente corrigida (EMAn), o consumo, a excreção e o coeficiente de retenção de nitrogênio (N Ing, N Exc e CR N), fósforo (P Ing, P Exc e CR P) e cálcio (Ca Ing, Ca Exc e CR Ca). Nenhuma resposta significativa foi observada para EMAn na fase inicial. Interações entre os níveis de cálcio e de fitase foram observadas para EMAn nas fases de crescimento (P<0,01) e final (P<0,01), sendo os maiores valores observados para níveis de fitase próximos a 600 FTU/kg, para baixo e alto nível de cálcio, respectivamente. Para o metabolismo de nitrogênio foram observadas interações entre os níveis de cálcio e fitase para N Ing nas fases de crescimento (P<0,01) e final (P<0,01), N Exc na fase de crescimento (P<0,01) e CR N nas fases de crescimento (P<0,01) e final (P<0,05). Os níveis de fitase influenciaram o N Ing (P<0,01) e N Exc (P<0,05) na fase inicial, e os níveis de cálcio influenciaram o N Ing (P<0,05) na fase inicial. Nenhum resultado foi observado para N Exc na fase final e nem para CR N na fase inicial. De uma maneira geral, a redução do nível de cálcio associada a 600 FTU/kg de fitase na fase de crescimento, e alto nível de cálcio associado a 1200 FTU/kg de fitase para a fase final, apresentam os melhores resultados. Para o metabolismo de fósforo foram observadas interações entre os níveis de fitase e cálcio estudados para P Ing (P<0,01 e P<0,05, respectivamente) nas fases inicial e final, e para CR P (P<0,01 e P<0,05, respectivamente) nas fases inicial e de crescimento. Os níveis de fitase influenciaram o P Ing (P<0,01) na fase de crescimento e o CR P (P<0,05) na fase final; e os níveis de cálcio influenciaram o P Ing (P<0,01) na fase de crescimento. Nenhum resultado significativo foi observado para P Exc em nenhuma das três fases estudadas. A adição de 1200 FTU/kg de fitase à dieta melhora significativamente a retenção de P, seja na fase inicial, associada a um baixo nível de cálcio, ou na fase de crescimento. Para o metabolismo de cálcio foram observadas interações entre os níveis de fósforo e cálcio estudados para Ca Ing (P<0,01 para ambas as fases) nas fases de crescimento e final e para CR Ca (P<0,05) na fase de crescimento. Os níveis de fitase influenciaram o Ca Ing (P<0,01) e o CR Ca (P<0,01) na fase inicial; e os níveis de cálcio influenciaram o Ca Ing (P<0,01) e o CR Ca (P<0,01) na fase inicial, o CR Ca (P<0,01) na fase final e o Ca Exc (P<0,01) nas três fases estudadas. De uma maneira geral, os melhores resultados foram encontrados com a redução de 30% dos níveis de cálcio associados à adição de 600 FTU/kg de fitase na dieta. Dessa maneira conclui-se que nas fases inicial e de crescimento, a redução do nível de cálcio da ração em 30% utilizando baixos níveis de fósforo disponível e proteína bruta com adição de 600 FTU/kg de fitase na dieta é adequada para a melhora da EMAn, da retenção de nitrogênio, fósforo e de cálcio. Já, para a fase final, a redução do nível de cálcio não é aconselhada, porém a inclusão de 600 FTU/kg de fitase na dieta melhora a EMAn e a retenção de nitrogênio. Para o ensaio de mineralização óssea, foram utilizados 72 frangos de corte machos, que foram sacrificados e tiveram suas tíbias esquerdas retiradas ao final de cada fase. Foram avaliadas as quantidades (mg) e porcentagens de matéria mineral (MM T e %MM T), fósforo (P T e %P T) e cálcio (Ca T e %Ca T) das tíbias. Houve interação entre os níveis de cálcio e de fitase apenas para a %MM T na fase inicial (P<0,05), provavelmente devido à maior exigência de minerais para a formação óssea nessa fase. Os níveis de fitase influenciaram de maneira linear crescente o MM T (P<0,01) e a %P T (P<0,05) na fase inicial e o P T (P<0,05) e o Ca T (P<0,05) nas fases inicial e de crescimento; e de maneira quadrática o MM T (P<0,01) e a %MM T (P<0,01) nas fases de crescimento e final. Não foi observada nenhuma resposta significativa para %Ca T. Estes resultados permitem concluir que o nível de cálcio pode ser reduzido em 30% em dietas com níveis reduzidos de Pd e níveis mínimos de PB para frangos de corte de 1 a 42 dias, desde que às dietas sejam adicionadas 1200FTU/kg de fitase. / An experiment was carried on Poultry Sector of Animal Nutrition and Production Department of Veterinary Medicine and Animal Science School of São Paulo University to evaluate the effect of diets with different calcium levels and supplemented with phytase on the performance, digestibility and nutrient excretion, determine the corrected apparent metabolizable energy and evaluate bone mineralization of broiler chickens in initial (1 to 21 days of age), growing (22 to 35 days of age) and final (36 to 42 days of age) phases. In performance essay it was used 2,160 male broilers from AG Ross 308 line, from 1 to 42 days of age, distributed in 6 treatments, with 6 replicates each. A completely randomized design in a 3 X 2 factorial schedule was used, being 3 phytase levels (0, 600 or 1200 FTU/kg) and 2 calcium levels (0.94% and 0.66%; 0.84% and 0.59%; and 0.78% and 0.54% to initial, growing and final phases, respectively). The experimental diets had lower available phosphorus (AP) levels and minimum crude protein (CP) levels. At the end of each phase the feed intake (FI), weight gain (WG), feed conversion (FC) and death rate (DR) were evaluated. There was no interaction among phytase and calcium levels to FI on any of the three studied phases, however they were observed to WG (P<0.01 to initial phase and P<0.05 to growing and final phase) and to DR (P<0.01 to initial and growing phase and P<0.05 to final phase) on the three phases. It was observed effects of phytase to FI (P<0.01 to both phases) on initial and growing phases, and calcium levels influenced FI (P<0.05 to both phases) on initial and final phases. No significant results were observed to FC. Thus it can be concluded that nutritional calcium levels can be reduced in 30%, in diets with lower AP and minimum CP levels, without affecting performance, since to the diet is added 600 FTU/kg of phytase. At the same time were carried three metabolism trials using 108 male broilers transferred from experimental house to metal batteries at 15, 29 and 35 days of age, respecting both treatments and replicates, where they passed through a period of 4 days of adaptation and 3 days of excrete collection. In this essay were evaluated the corrected apparent metabolizable energy (AMEn), the consumption, excretion and the retention coefficient of nitrogen (N C, N E and N RC), phosphorus (P C, P E and P RC) and calcium (Ca C, Ca E and Ca RC). No significant response was observed to AMEn on initial phase (P<0.01). Interactions among calcium and phytase levels were observed to AMEn on growing (P<0.01) and final (P<0.01) phases, being the higher values observed to phytase levels near to 600 FTU/kg, to low and high calcium levels, respectively. To nitrogen metabolism, it were observed interactions among calcium and phytase levels to N C on growing (P<0.01) and final (P<0.01) phases, N E on growing (P<0.01) phase and N RC on growing (P<0.01) and final (P<0.05) phases. Phytase levels influenced N C (P<0.01) and N E (P<0.05) on initial phase, and calcium levels influenced N C (P<0.05) on initial phase. No significant results were observed to N E on final phase neither to N RC on initial phase. In a general way, the calcium level reduction associated to 600 FTU/kg of phytase on growing phase, and high clacium level associated to 1200 FTU/kg of phytase on final phase, show the best results. To phosphorus metabolism were observed interactions among calcium and phytase levels to P C (P<0.01 and P<0.05, respectively) on initial and final phases, and to P RC (P<0.01 and P<0.05, respectively) on initial and growing phases. Phytase levels influenced P C (P<0.01) on growing phase and P RC (P<0.05) on final phase; and calcium levels influenced P C (P<0.01) on growing phase. No significant results were observed to P E in any of the studied phases. Adding 1200 FTU/kg of phytase to the diet improves P retention on initial phase, associated to low calcium level, or on growing phase. To calcium metabolism were observed interactions among calcium and phytase levels to Ca C (P<0.01 to both phases) on growing and final phases and to Ca RC (P<0.05) on growing phase. Phytase levels influenced Ca C (P<0.01) and Ca RC on initial phase; and calcium levels influenced Ca C (P<0.01) and Ca RC (P<0.01) on initial phase, Ca RC on final phase and Ca E (P<0.01) on the three studied phases. In a general way, the better results were found reducting calcium levels in 30% associated to 600 FTU/kg of phytase on diet. So, it can be conclude that, on initial and growing phases, calcium levels reduction in 30%, using low AP and CP levels with 600 FTU/kg of phytase on diet is adequate to improve AMEn, N, P and Ca retention. However, to final phase reducting calcium level is not recommended, even so, adding 600 FTU/kg of phytase on diet improves AMEn and N retention. To bone mineralization essay were used 72 male broilers that were slaughtered and their left tibia removed at the end of each phase. It were evaluated tibia quantity (mg) and percentages of mineral matter (MM T and % MM T), phosphorus (P T and %P T) and calcium (Ca T and % Ca T).There was interaction among calcium and phytase levels only for %MM T on initial phase (P<0.05), probably due to higher mineral requirement to bone forming in this phase. Phytase levels influenced on a linear increasing way the MM T (P<0.01) and %P T (P<0.05) on initial phase, and P T (P<0.05) and Ca T (P<0.05) on initial and growing phase; and on a quadratic way the MM T (P<0.01) and %MM T (P<0.01) on growing and final phase. There was no significant response to %Ca T. These results allowed to conclude that calcium level can be reduced in 30% in diets with lower AP and minimum CP levels to broiler chickens from 1 to 42 days of age, since 1200 FTU/kg of phytase are added to the diet.

Este experimento foi realizado com o objetivo de avaliar a redução dos níveis de cálcio e fósforo disponível em dietas suplementadas com doses crescentes de fitase para frangos de corte. Foram utilizados pintinhos machos da linhagem Cobb (n = 1152) distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial 3 x4 (três níveis de cálcio e fósforo disponível e quatro níveis de fitase) com 12 tratamentos e oito repetições de 12 aves cada. Os tratamentos experimentais foram: T1 Dieta com níveis de cálcio e fósforo disponível de acordo com o proposto por Rostagno et al. (2011) para as diferentes fases; T2 Dieta com 90% dos níveis de cálcio e fósforo disponível proposto por Rostagno et al. (2011) para as diferentes fases; T3 Dieta com 80% dos níveis cálcio e fósforo disponível proposto por Rostagno et al. (2011) para as diferentes fases; T4 Dieta do T1 + fitase 500 FTU/Kg de ração; T5 Dieta do T2 + fitase 500 FTU/Kg de ração; T6 Dieta do T3 + fitase 500 FTU/Kg de ração; T7 Dieta do T1 + fitase 1.000 FTU/Kg de ração; T8 Dieta do T2 + fitase 1.000 FTU/Kg de ração; T9 Dieta do T3 + fitase 1.000 FTU/Kg de ração; T10 Dieta do T1 + fitase 1.500 FTU/Kg de ração; T11 Dieta do T2 + fitase 1.500 FTU/Kg de ração; T12 Dieta do T3 + fitase 1.500 FTU/Kg de ração. As dietas foram a base de milho e farelo de soja. As aves foram pesadas aos 7, 21 e 42 dias de idade. As características de desempenho foram avaliadas e, aos 42 dias de idade, foram avaliados o rendimento de carcaça e os cortes comerciais. O estudo da qualidade óssea, como a análise da densidade e resistência da tíbia, também foi realizado. Com o aumento das inclusões de fitase houve aumento linear de ganho de peso médio aos 7 dias e aos 21 dias. Da mesma forma, houve redução linear na conversão alimentar aos 21 dias, com o aumento dos níveis de fitase. Considerando o período de 1 a 42 dias, a dieta sem inclusão da enzima apresentou resultados inferiores ao uso das dietas contendo fitase, resultando em um índice de eficiência produtiva com melhores resultados em dietas contendo 500 e 1500 FTU/Kg de ração da enzima. Houve interação entre o nível de cálcio e fosforo na dieta e adição de fitase para os parâmetros de ganho de peso e resistência óssea que neste trabalho foi representada pela força máxima (N). / This trial was conducted with the objective of evaluating the reduction of calcium and phosphorus available for broilers fed diets containing increased levels of phytase. One thousand and one hundred and fifty-two male chicks Cobb-500 (n = 1152) were submitted to a completely randomized factorial 3 x 4 (three levels of calcium and phosphorus available and four levels of phytase and were distributed among 12 treatments and 8 replicates with 12 broilers each replicate. The experimental treatments were: T1 - diet containing calcium and phosphorus availableas proposed by Rostagno et al. (2011) for different phases; T2 diet containing 90% of calcium and phosphoru available in the diet as proposed by Rostagno et al. (2011) for different phases; T3 - diet containing 80% of calcium and available phosphorus in the diet as proposed by Rostagno et al. (2011) for different phases; T4 - T1 Diet + phytase 500 FTU/Kg diet; T5 - T2 Diet + phytase 500 FTU/Kg diet; T6 - T3 Diet + phytase 500 FTU/Kg diet; T7 - T1 Diet + phytase 1.000 FTU/Kg diet; T8 - T2 Diet + phytase 1.000 FTU/Kg diet; T9 - T3 Diet + phytase 1.000 FTU/Kg diet; T10 - T1 Diet + phytase 1.500 FTU/Kg diet; T11 - the T2 diet + phytase 1.500 FTU/Kg diet; T12 - T3 Diet + phytase 1.500 FTU/Kg diet. The diets were corn and soybean meal - based. The broilers were weighed at 7, 21 and 42 days of age. Performance traits s were evaluated and, at 42 days of age. Carcass yield and commercial cuts were also evaluated. Furthermore, a bone quality study, with the analysis of density and tibial resistance, were performed. The increased levels of phytase in the diets determined a linear increased in average weight gain at 7 and 21 days of age. Likewise, the increased levels of phytase in the diets reduced linearly the feed conversion at 21 days of age. Considering the period from day 1 to day 42 the diets without phytase determined inferior results than the diets with phytase inclusion. The better results were found when the diets have between 500 and 1500 FTU of phytase per kg of concentrate. There were an interaction between the calcium and phosphorus levels with phytase concentration for weight gain e bone resistance. In this work, those parameters were represented by the maximum strength (N).

Orientador: Carmen Veríssima Ferreira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T21:52:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_SarahAzoubel_M.pdf: 2437444 bytes, checksum: 4bc2e0c3075b4a6b06b01dee15a3fb45 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A resistência à quimioterápicos é um dos principais obstáculos para a terapia do câncer. Na leucemia mielóide crônica (CML) o tratamento é frequentemente ineficiente devido à aquisição de resistência aos quimioterápicos utilizados. Dessa forma, o estudo comparativo de linhagens celulares de CML resistentes e susceptíveis a drogas é de extrema importância para o entendimento dos mecanismos moleculares da resistência e para a evolução de novos protocolos terapêuticos. Um número cada vez maior de evidências indica que os microRNAs apresentam importante papel no processo de carcinogênese e na agressividade tumoral. Nesse trabalho o principal objetivo é melhor esclarecer o papel da maquinaria de processamento de microRNAs no fénotipo MDR (multi-drug resistance), utilizando principalmente as linhagens de CML K562 (susceptível) e Lucena (fenótipo MDR). Nossos resultados revelaram que as células Lucena apresentam altos níveis da endonuclease Dicer e que os microRNAs let-7a e miR-145 são intensamente regulados em relação à K562. Além disso, a linhagem Lucena se tornou mais sensível ao quimioterápico vincristina após o silenciamento de Dicer. Experimentos com outras linhagens celulares mostraram que a resistência frente à cisplatina e doxorrubicina possui correlação significativa com os níveis de Dicer. A identificação de ligantes dessa endonuclease nas linhagens de CML ressalta a possibilidade desta enzima estar cumprindo novos papéis no fenótipo MDR. Entre os ligantes exclusivos da linhagem resistente, estão proteínas envolvidas na promoção de defesa anti-oxidante, proliferação celular e metabolismo de lipídios e hormônios esteróides. De acordo, dados de proteoma das duas linhagens enfatizam a importância do metabolismo lipídico para aquisição da resistência, bem como de um intenso remodelamento do citoesqueleto. Nossos dados reforçam o caráter complexo e multifatorial da resistência à múltiplas drogas, contribuindo para o entendimento do ação de miRNAs e de Dicer nesse processo / Abstract: Drug resistance is one of the main obstacles in cancer therapy. Frequently, the treatment of chronic myelogenous leukemia (CML) becomes inefficient due to the emergence of a resistant population of cancer cells. Therefore, comparative studies of resistant and non-resistant CML cell lines is extremely important to the understanding of molecular mechanisms involved in the acquisition of resistance and also to the evolution of new therapeutic protocols. A growing number of evidence supports an important role for microRNAs in carcinogenesis and tumoral aggressiveness. This study aims to better understand the role of microRNAs and their biosynthetic pathway in the phenotype of multi-drug resistance (MDR) of CML cells. To this purpose we worked with the leukemic cell lines K562 (non-resistant) and Lucena (MDR phenotype). The results obtained revealed that Lucena expresses high levels of Dicer endonuclease and intensely regulates microRNAs let-7a and miR-145 when compared to K562. Also, Dicer silencing in MDR cells enhanced sensitivity to the chemotherapic drug vincristine. Experiments with different cells lines showed that resistance to cisplatin and doxorubicin are correlated to Dicer expression levels. In CML cell lines, the identification of Dicer ligands points to the possibility of alternative roles for this endonuclease in the MDR phenotype. Among the newly found interactors in the resistant cell line are proteins involved in antioxidant defense, proliferation and metabolism of fatty acids and steroids. Accordingly, proteome data from K562 and Lucena cells emphasizes the importance of lipid metabolism and structural remodeling to the resistant phenotype. Overall, our data contributes to the understanding of the role played by microRNAs and Dicer in the complex and multifactorial MDR phenotype / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular