Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T04:46:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 295333.pdf: 1281017 bytes, checksum: 8fbda3179374b21d9efd3874cd50fcb0 (MD5) / As doenças foliares podem causar importantes danos às plantas cultivadas, como a cercosporiose da beterraba (Cercospora beticola Sacc.) e a sarna da macieira (Venturia inaequalis Cke.). Neste trabalho, diferentes elicitores de defesa em plantas foram testados para o controle dessas doenças, buscando-se identificar mecanismos de ação envolvidos. Para isso, foram conduzidos ensaios em casa de vegetação e in vitro. No patossistema macieira-sarna, foram avaliados fosfito de potássio, quitosana, suspensão bruta de fermento à base de Saccharomyces cerevisiae (SBSC), filtrado da suspensão autoclavada de fermento à base de Saccharomyces cerevisiae (FASC) e suspensão da fração polissacarídica do parênquima de reserva de folhas de babosa (FPPRB) pulverizados em plantas de macieira, cv. Gala aos 3 ou 7 dias antes da inoculação do patógeno (d.a.i.). Amostras de plantas tratadas com alguns desses produtos foram coletadas para a determinação das atividades enzimáticas de peroxidases e ß-1,3 glucanases, e dos teores de flavonóides e compostos fenólicos totais. Constatou-se que o fosfito de potássio (2 µL.mL-1) reduziu a severidade da sarna nas mudas de macieira, em média de 73%. Em relação aos parâmetros bioquímicos, a aplicação de fosfito 7 d.a.i. reduziu o teor de flavonóides nas folhas suscetíveis à sarna, no momento da inoculação, enquanto a quitosana reduziu esse teor nas folhas resistentes à doença. Em geral, folhas suscetíveis à sarna apresentaram maior teor de flavonóides do que as resistentes. O teor de compostos fenólicos totais não foi alterado pela aplicação de fosfito ou quitosana, e foi similar entre folhas suscetíveis e resistentes à doença. Quanto à atividade enzimática, não houve diferença entre as plantas que receberam os produtos, porém as folhas resistentes à sarna apresentaram maior atividade de peroxidases em dois experimentos distintos. Apesar de apenas o fosfito ter reduzido a severidade da doença, ambos fosfito e quitosana reduziram a germinação de esporos do fungo in vitro. No caso do patossistema beterraba-cercosporiose, quitosana e o indutor de resistência acibenzolar-S-metílico (ASM) foram testados preventivamente, em diferentes doses e intervalos de tempo entre tratamento e inoculação. Em alguns bioensaios foram coletadas amostras de folhas para quantificar a atividade de peroxidases e ß-1,3 glucanases e também o teor de flavonóides, compostos fenólicos totais e betalaínas totais. A severidade da doença foi avaliada nas três folhas mais velhas 20 dias após a inoculação com o auxílio do programa computacional Quant v.1.0.2.. Ainda, foram conduzidos testes em lâminas de microscopia escavadas para verificar a germinação de esporos de C. beticola na presença de diferentes doses dos produtos testados. Quitosana e ASM reduziram a severidade da cercosporiose em folhas de beterraba, proporcionando maior efeito quando pulverizados 3 d.a.i. (1 mg.mL-1) para quitosana, e 7 d.a.i (50 mg.L-1) para o ASM. O polissacarídeo afetou diretamente o patógeno, inibindo significativamente o crescimento micelial e a germinação de esporos. Plantas que receberam uma aplicação de quitosana apresentaram maior atividade de enzimas oxidativas 3 dias depois, imediatamente antes da inoculação do patógeno. Em plantas tratadas por duas vezes com o polissacarídeo, as atividades de peroxidases e ß-1,3 glucanases foram maiores em relação à testemunha, antes e depois da inoculação. Esses resultados indicam que o controle da cercosporiose exercido pela quitosana pode ter sido tanto por seu efeito direto sobre o patógeno, como pela ativação de proteínas-RP. O ASM, por sua vez, apresentou pequeno efeito antimicrobiano contra C. beticola, mas promoveu os maiores aumentos nas atividades de peroxidases e ß-1,3 glucanases, indicando-se que o seu efeito na redução da severidade da doença esteja relacionado principalmente à ativação de mecanismos de defesa. Desta forma, a aplicação preventiva de fosfito de potássio é uma opção para o controle da sarna da macieira, enquanto que quitosana e o ASM podem auxiliar no manejo da cercosporiose da beterraba. / The foliar diseases such as Cercospora leaf spot (Cercospora beticola Sacc.) in beets and apple scab (Venturia inaequalis Cke.) can cause significant damage to crops. In this work, potential elicitors of plant defenses were evaluated for the control of these diseases. For this, trials were conducted inside the greenhouse and in vitro conditions. In the apple-scab pathosystem, potassium phosphite, chitosan, the crude suspension of commercial Saccharomyces cerevisiae (SBSC), the filtrate of S. cerevisiae obtained from autoclaved commercial yeast (FASC) and the suspension of polysaccharide from Aloe leaves (FPPRB) were sprayed on apple plants, cv. Gala, at 3 or 7 days before pathogen inoculation. Leaf samples from plants treated with some of these products were collected to determine the enzymatic activity of peroxidase and â-1,3 glucanases, and levels of phenolic compounds and flavonoids. Potassium phosphite (2 ìL.mL-1) reduced the severity of apple scab on seedlings, by around 73%. Regarding biochemical parameters, the application of phosphite 7 d.a.i. reduced the content of flavonoids in the scab suscetible leaves, at the time of inoculation, while the polysaccharide chitosan reduced the flavonoid content in the resistant leaves. Overall, scab suscetible leaves had higher content of flavonoids than resistant leaves. The content of phenolic compounds was not altered by application of phosphite or chitosan, and it was similar between suscetible and resistant leaves. There was not difference in the enzymatic activities among plants that received the different products, but the scab resistant leaves had higher peroxidase activity in two distinct experiments. Only the phosphite reduced the severity of the disease, but both phosphite and chitosan reduced the germination of V. inaequalis spores. In the case of Cercospora leaf spot, chitosan and the plant activator acibenzolar-S-methyl (ASM) were evaluated preventively at different doses and intervals between treatment and inoculation. In some bioassays leaf samples were collected to quantify the peroxidase and â-1,3 glucanase activities as well to determine the flavonoid, phenolic compound and betalain contents. Disease severity was assessed in the three oldest leaves 20 days after inoculation with the aid of software Quant v.1.0.2.. In addition, tests were conducted in glass slides to check the spore germination of C. beticola in the presence of different doses of the products. The polysaccharide chitosan and plant activator ASM reduced the severity of Cercospora leaf spot, and the effect was better when chitosan was sprayed 3 d.a.i. (1 mg.mL-1), or when ASM was sprayed 7 d.a.i. (50 mg.L-1). The polysaccharide affected the pathogen directly, both on the mycelial growth and spore germination. Plants that received an application of chitosan had higher oxidative enzyme activity 3 days later, just before the inoculation. In plants treated with chitosan twice, the peroxidase and â-1,3 glucanase activities were higher compared to the control, before and after the inoculation. These results indicate that the control of Cercospora leaf spot by chitosan has occurred by antibiosis and by the activation of PR-proteins. In turn, ASM had a little effect against C. beticola, but it promoted the highest levels in peroxidase and â-1,3 glucanase activities, indicating that its effect in reducing the severity of the disease is mainly related to the activation of defense mechanisms. Thus, the preventive application of potassium phosphite is an option for control of apple scab, while chitosan and ASM can help in the management of Cercospora leaf spot.

Resumo: Este trabalho teve como principais objetivos a detecção, isolamento e elucidação estrutural dos constituintes micromoleculares presentes em folhas e galhos de Garcinia gardneriana, uma espécie da família Clusiaceae com poucos relatos na literatura sobre a sua composição fitoquímica. A detecção das moléculas foi realizada através de abordagens in silico com o estabelecimento de perfis cromatográficos e espectrométricos dos constituintes majoritários dos extratos brutos e frações. A comparação desses dados foi realizada através de dados existentes na literatura. A partir dessa metodologia foi possível detectar 11 triterpenos por GC-FID nos extratos e frações apolares: campesterol (1), estigmasterol (2), β-sitosterol (3), β- amirenona (4), α- amirina (5), β-amirina (6), lupenona (7), lupeol (8), acetato de β-amirina (9), acetato de α-amirina (10), friedelina (11) e mais 9 biflavonóides nos extratos e frações mais polares: xantochimusídeo (12), GB2 (13), fukugisídeo (14), GB 1a glicosilado (15), GB2a (16), morelloflavona (17), volkensiflavona (18), amentoflavona (19), podocarpusflavona (20) e uma benzofenona: 7-epiclusianona (21) através da técnica HPLC-DAD-ESI-MSHRMS. Quanto aos bioensaios in vitro realizados (inibição da polimerização do heme, redução do radical DPPH (antioxidante), inibidor da enzima acetilcolinesterase, tripanocida, citotóxico, antifúngico contra fitopatógenos e patógenos humanos) em todos os extratos e frações preparados, alguns resultados merecem destaque tais como a redução do radical DPPH com IC50 de 9,5, 7,4 e 7,5 μg/mL respectivamente para o extrato etanólico dos galhos, a fração acetato de etila dos galhos e folhas, a inibição da polimerização do heme com valores de 95,7, 98,6 e 68,0 %, de inibição para o extrato etanólico das folhas, e frações acetato de etila das folhas e galhos respectivamente / Abstract: This work had as main objective the detection, isolation and structural elucidation of the micromolecular constituents from leaves and twigs of Garcinia gardneriana, a Clusiaceae species with few literature reports regarding its phytochemical composition. The detection of molecules was performed by in silico detection with the establishment of chromatographic and spectroscopic profiles of the major constituents present in the crude extracts and fractions as well as comparison of data from database and literature reports. Based on this methodology we were able to detect 11 triterpenes by GC-FID in the extracts and nonpolar fractions: campesterol (1), stigmasterol (2), β-sitosterol (3), β-amirenone (4), α- amyrin (5), β-amyrin (6), lupenone (7), lupeol (8), β-amyrin acetate (9), α-amyrin acetate (10), friedelin (11) and more 9 biflavonoids from extracts and fractions polar: xanthochymuside (12) and GB2 (13), fukugiside (14), GB1 glycosylated (15), GB2a (16), morelloflavone (17), volkensiflavone (18), amentoflavone (19) , podocarpusflavone (20), 7-epiclusianone (21) by HPLC-DAD-ESI-MS-HRMS. As for the performed in vitro bioassays (inhibition of heme polymerization, reduction of the DPPH radical (antioxidant), inhibition of the enzyme acetylcholinesterase, trypanocidal, cytotoxic antifungal activity against plant pathogens and human pathogens) in all extracts and fractions prepared in this work, some results are worthy of mentioning such as the reduction of the DPPH radical with IC50 values of 9.5, 7.4 and 7.5 μg/mL respectively for the ethanol extract from twigs, the ethyl acetate fraction from the branches and leaves, as well as the inhibition of heme polymerization with values of 95.7, 98.6 and 68.0% from the ethanol extract from the leaves, and the ethyl acetate fractions leaves and branches / Orientador: Ian Castro Gamboa / Coorientador: Márcia Nasser Lopes / Banca: Mario Sergio Palma / Banca: Carlos Alexandre Carollo / Mestre

Orientador: Fátima Pereira de Souza / Coorientador: Marcelo Andrés Fossey / Banca: Flavio Augusto Vicente Seixas / Banca: Fernanda Canduri / Banca: Karina Alves de Toledo / Banca: Fernando Alves de Melo / Resumo: O Vírus Respiratório Sincicial Humano (hRSV) é a principal causa de infecções respiratórias agudas em crianças, como bronquiolite e pneumonia. Este Paramyxovirus tem um RNA de fita simples, com 10 genes que codificam 11 proteínas. Um fator importante que contribui para o sucesso da replicação do hRSV é a evasão do sistema imune, processo no qual a proteína não estrutural 1 (NS1) está envolvida. Esta proteína pode atuar por meio da inibição ou neutralização das etapas da cascata do interferon do tipo I, bem como, pelo silenciamento do complexo ribonucleoproteico do hRSV. O conhecimento da interação da proteína NS1 com ligantes é importante na busca de moléculas que possam interferir na função da proteína e consequentemente resultar na redução da replicação do hRSV dentre os quais os flavonóides têm sido descritos como sendo supressores eficazes da replicação viral. Os objetivos deste estudo incluíram a expressão e purificação da proteína NS1, a caracterização da estrutura secundária e estabilidade térmica por dicroísmo circular e a realização do estudo de interação entre NS1 e quercetina por espectroscopia de fluorescência. Foi realizada a purificação da proteína NS1 em resina de afinidade utilizando cromatógrafo líquido ÄKTA (GE HEALTHCARE LIFE SCIENCES). As medidas de dicroísmo circular (CD) permitiram calcular a porcentagem de estruturas secundárias e a temperatura de melting da NS1. A partir das análises das titulações por fluorescência foram calculados a constante de Stern Volmer (Ksv), a constante de ligação (Kb) e o número de ligantes por sítio (n). Os resultados de CD mostraram que a composição da estrutura secundária de NS1 é de 75 % de alfa-hélice, 3% de folha-beta, 10% de voltas e 12% de outras estruturas e a temperatura de melting da NS1 é de cerca de 65°C. Os resultados de fluorescência mostraram que Ksv e Kb foram da ordem de 104 e 105-106M-1, ... / Abstract: Human Respiratory Syncytial Virus (hRSV) is the major cause of acute respiratory infections in children, like bronchiolitis and pneumonia. This Paramyxovirus has a single strand RNA with 10 genes that codify 11 proteins. An important factor that contributes for the success hRSV replication is the immune system evasion, process wich Non-Structural Protein 1 (NS1) is involved. This protein can act by inhibiting or neutralizing steps of interferon type I pathway, as well as, by silencing the ribonucleoproteic complex of hRSV. The knowledge of NS1 protein interaction with ligands is important in the search for molecules that could interfere with protein function and hence result in a reduction of hRSV replication among them the flavonoids have been reported to be effective in suppressing viral replication. The aim of this study includes expression and purification of NS1 protein, characterization of its secondary structure and thermal stability through circular dicroism and perform fluorescence spectroscopy interaction study between NS1 and Quercetin. NS1 purification was performed using affinity resin coupled to a liquid cromatograph ÄKTA (GE HEALTHCARE LIFE SCIENCES). Circular dicroism spectra and thermal denaturation were carried out to investigate NS1 secondary structure and stability. Through fluorescence spectroscopy titration results it has been calculated the Stern Volmer constant (Ksv), the binding (Kb) constant and number of ligands per site (n). CD analysis shown that secondary structure composition of NS1 is 75% alpha-helix; 3% beta-sheet; 10% turn and 12% others and, melting temperature of NS1 is around 65°C. Fluorescence results shown that Ksv and Kb were in order of 104 and 105-106M-1, respectively. Ksv dependence with temperature indicates that the interaction between NS1 and quercetin is dynamic. The results suggest that this interaction may potentially contribute to block the xiii protein function and thus quercetin may ... / Doutor

?rea de concentra??o: Ci?ncias fisiol?gicas. / Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2016-01-04T17:58:44Z No. of bitstreams: 2 val?ria_gomes_lmeida.pdf: 4026192 bytes, checksum: b5681abc4a430487b1ac936cd81615c3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2016-01-04T17:59:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 val?ria_gomes_lmeida.pdf: 4026192 bytes, checksum: b5681abc4a430487b1ac936cd81615c3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-04T17:59:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 val?ria_gomes_lmeida.pdf: 4026192 bytes, checksum: b5681abc4a430487b1ac936cd81615c3 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015 / A Pseudobrickellia brasiliensis (Spreng) R. M. King & H. Rob., (Asteraceae) ? nativa da flora brasileira, e sua prepara??o alco?lica tem sido utilizada de forma t?pica como anti-inflamat?rio na medicina popular. Tendo em vista a aus?ncia de estudos acerca da bioatividade e composi??o qu?mica dessa esp?cie, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito de prepara??es de partes a?reas de P.brasiliensis sobre par?metros inflamat?rios, in vitro, e realizar a an?lise dos seus constituintes qu?micos. A triagem fitoqu?mica dos caules, flores e folhas da planta foi realizada por meio de rea??es cromog?nicas, fluorog?nicas e de precipita??o e sugeriu a presen?a de saponinas, terpenos, taninos e flavonoides nas partes a?reas da planta. Os extratos etan?licos de caules (PBETca), flores (PBETfl) e folhas (PBETfo) foram avaliados por cromatografia l?quida de alta efici?ncia acoplada a detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD). Essa an?lise sugeriu a presen?a de flavonoides nos extratos, especialmente das classes das flavonas e flavon?is. Os ?leos essenciais de flores (PBOEfl) e de folhas (PBOEfo) foram analisados por Cromatografia Gasosa acoplada a Espectr?metro de Massas (CG-EM), sendo poss?vel a identifica??o de 22 compostos no PBOEfl e 27 no PBOEfo, dentre os quais, o ?-pineno, limoneno, ?-pineno, sabineno, ?xido de cariofileno e E-cariofileno est?o presentes em maior valor percentual. Foram confeccionadas culturas de 4h de sangue total para avaliar o efeito hemol?tico dos extratos, determinado pela densidade ?ptica do sobrenadante em 540 nm. Houve indu??o de hem?lise em culturas tratadas com PBETca ou PBETfo em concentra??es superiores a 100 ?g/mL. O extrato PBETfl induziu hem?lise em culturas na concentra??o final de 200 ?g/mL. A toxicidade dos produtos naturais ?s C?lulas Mononucleares do Sangue Perif?rico (PBMC) humano ap?s 24 h e 5 dias, foi avaliada por citometria de fluxo, utilizando Azul de Tripan ou Iodeto de Prop?deo. O efeito dos produtos naturais sobre a produ??o de TNF-?, IFN-? e IL-2 foi determinado por ELISA do sobrenadante de culturas de 24 h, ap?s est?mulo com Miristato Acetato de Forbol (PMA) + Ionomicina. Todos os extratos e ?leos essenciais reduziram a produ??o de TNF-?. A s?ntese de IFN-? foi inibida pelo extrato PBETfo e pelo ?leo essencial PBOEfl. Todos os extratos etan?licos e o PBOEfl, inibiram a produ??o de IL-2. O PBETfo foi fracionado por meio de parti??o em solventes com polaridade crescente e todas as fra??es foram eficientes em inibir a s?ntese de TNF-?, por PBMC, ap?s 24 h de cultura. Somente a fra??o hex?nica reduziu a s?ntese de IFN-? e IL-2. Foram confeccionadas culturas de sangue total estimuladas com lipopolissacar?deo (LPS) para investiga??o do efeito dos ?leos essenciais sobre a express?o de COX-2, por citometria de fluxo. Os ?leos essenciais n?o interferiram na express?o de COX-2. Nossos achados sugerem que o efeito anti-inflamat?rio atribu?do ? P.brasiliensis na medicina popular pode, pelo menos em parte, ser devido ? inibi??o da produ??o de citocinas pr?-inflamat?rias por linf?citos e mon?citos humanos. ? poss?vel que flavonoides das subclasses das flavonas e flavon?is possam contribuir para a atividade biol?gica dos extratos etan?licos de P. brasiliensis. Muitos monoterpenos e sesquiterpenos presentes nos ?leos essenciais de flores e folhas de P. brasiliensis j? tiveram a atividade anti-inflamat?ria descrita em outros trabalhos. / Tese (Doutorado) ? Programa Multic?ntrico de P?s-Gradua??o em Ci?ncias Fisiol?gicas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2015. / ABSTRACT The Pseudobrickellia brasiliensis (Spreng) R. M. King & H. Rob., (Asteraceae) is native from Brazilian flora, and its alcoholic preparation has been used topically as anti-inflammatory in folk medicine. Considering the lack of studies about the bioactivity and chemical composition of this specie, the aim of this study was to evaluate the effect of P. brasiliensis aerial parts preparations on in vitro inflammatory parameters, and perform analysis of its chemical constituents. The plant stems, flowers and leaves phytochemical screening was carried out by chromogenic, fluorogenic and precipitation reactions and suggested the presence of saponins, terpenes, tannins and flavonoids in the aerial parts of the plant. The ethanolic extracts of stems (PBETca), flowers (PBETfl) and leaves (PBETfo) were evaluated by high performance liquid chromatography coupled to diode array detector (HPLC-DAD). These analyses suggested the presence of flavonoids in the extracts, especially the flavones and flavonols subclasses. The flowers (PBOEfl) and leaves (PBOEfo) essential oils were analyzed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS), and it was possible to identify 22 and 27 compounds in PBOEfl and PBOEfo, respectively. Among the compounds the ?-pinene, limonene, ?-pinene, sabinene, caryophyllene oxide and E-caryophyllene were present in high porcentage. A 4h culture of whole blood was prepared to evaluate the hemolytic effect of the extracts, determined by supernatant optical density at 540 nm. There were hemolysis induction in cultures treated with PBETca or PBETfo at concentrations exceeding 100 ?g/mL. The extract PBETfl induced hemolysis in cultures at a final concentration of 200 ?g/mL. The natural products toxicity to human Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMCs) after 24 h and 5 days were assessed by flow cytometry using trypan blue or propidium iodide. The effect of non-toxic concentrations of the natural products on TNF-?, IFN-? and IL-2 production was determined by ELISA of 24h supernatants culture after stimulation with phorbol myristate acetate (PMA) + Ionomycin. All extracts and essential oils reduced the TNF-? production. The IFN-? synthesis was inhibited by PETfo extract and PBOEfl essential oil.The PBETfo and PBOEfl inhibited the IFN-? synthesis. The PBOEfl and all ethanolic extracts inhibited IL-2 production. The PBETfo was fractionated by solvent partitioning of increasing polarity and all fractions were effective in inhibiting the TNF-? synthesis by PBMC after 24 h culture. Only the hexane fraction reduced the IFN-? and IL-2 synthesis. Whole blood cultures stimulated with lipopolysaccharide (LPS) were prepared to investigate the effect of essential oils on COX-2 expression by flow cytometry. Essential oils did not affect the expression of COX-2. Our findings suggest that the anti-inflammatory effect attributed to P.brasiliensis in folk medicine can, at least in part, be due to the inhibition of proinflammatory cytokines production by human lymphocytes and monocytes. It is possible that flavonoids of flavones and flavonols subclasses may contribute to the biological activity of ethanolic extracts of P. brasiliensis. Many monoterpenes and sesquiterpenes present in essential oils of P. brasiliensis flowers and leaves already had the anti-inflammatory activity described in other studies.

Introdução: O chimarrão (mate) é um preparado com folhas secas de Ilex paraguariensis St. Hil (IP); é hábito milenar do sul do Brasil, Bolívia, Paraguai, Uruguai e Argentina. Os extratos da IP possuem compostos polifenóis, flavonóides, saponinas, metilxantinas. Estudos sugerem que os flavonóides presentes na dieta podem estar envolvidos na prevenção da aterosclerose, por inibirem a oxidação das LDL. Objetivo: Avaliar os efeitos da ingestão de chimarrão sobre a concentração plasmática de flavonóides, sobre os lipídios e sobre a circulação. Material e Métodos: Ensaio clínico experimental não-randomizado, realizado com 19 pacientes entre 50 a 80 anos, de ambos os sexos, acompanhados no Ambulatório de Cardiopatia Isquêmica do Hospital de Clínicas de Porto Alegre. O período de washout durou 4 dias, seguidos de mais 5 dias de intervenção com chimarrão. A dieta oferecida foi restrita de alimentos com flavonóides. A coleta de dados foi realizada entre 2003 a 2004. Foram avaliados concentração sangüínea de flavonóides, perfil lipídico, substância reativa de ácido tiobarbitúrico (TBARS) ingestão alimentar, Índice de Massa Corporal (IMC), pressão arterial sistólica (PAS), pressão arterial diastólica (PAD), freqüência cardíaca (FC) e história familiar de doença cardiovascular. As variáveis foram analisadas utilizando-se o teste t de Student, Exato de Fischer e ANOVA Resultados: Após 4 dias de washout, foi detectado aumento significativo do colesterol LDL-c (chimarrão: 26,7±30mg/dL e controle: 8,2±19mg/dL) e da relação CT/HDL (chimarrão: 0,4±0,8 e controle: 0,51±0,36), semelhante em ambos os grupos. Os efeitos do uso do chimarrão apresentaram uma diminuição significativa da relação CT/HDL (chimarrão: 0,2±0,2 e controle: 0,3±0,5, P=0,016) e para TG (chimarrão: 34±36 mg/dL e controle: 29±26 mg/dL, P= 0,001), semelhante em ambos os grupos. Após o uso do chimarrão, os valores de TBARS apresentaram diferença significativa (P=0,001) para o tempo. Em ambos os grupos, foram detectadas diferenças significativas em relação a uma diminuição para IMC (P=0,001) e para Ingestão de Energia (P=0,001). Conclusão: Após 12h do uso de chimarrão, não foram detectados dados significativos na concentração de flavonóides na corrente sangüínea. Ocorreram alterações na pressão arterial sistêmica e na freqüência cardíaca. / paraguariensis St. Hil (IP); drinking chimarrão is an old habit in southern Brazil, Bolivia, Paraguay, Uruguay and Argentina. The IP extracts contain polyphenol compounds, flavonoids, saponins and methylxanthines. Studies suggest that the flavonoids present in the diet may be related to the atherosclerosis prevention, by inhibiting the LDL oxidation. Objective: Evaluate the chimarrão intake effects on the plasmatic concentration of flavonoids, lipids and the circulation. Material and Methods: A non-randomized experimental clinical essay, performed with 19 patients between 50 and 80 years old, male and female, supervised at the Ischemic Cardiopathy Clinic of the Hospital de Clínicas de Porto Alegre. The washout period lasted 4 days, followed by 5 days with chimarrão intervention. The offered diet included only foods containing flavonoids. The data collection was performed between 2003 and 2004, and the following aspects were evaluated: flavonoid concentration in blood, lipid profile, thiobarbituric acid reactive substance (TBARS), food intake, Body Mass Index (BMI), systolic blood pressure (SBP), diastolic blood pressure (DBP), heart rate (HR) and family history of heart disease. The variables were analyzed using the Student’s t-test, Fisher’s Exact Test and the analysis of variance (ANOVA). Results: After a 4-day washout procedure, a significant increase in both LDL-c cholesterol (chimarrão: 26.7±30mg/dL and control: 8.2±19mg/dL) and TC/HDL ratio (chimarrão: 0.4±0.8 and control: 0.51±0.36) was detected, similar in both groups. The effects of using chimarrão presented a significant reduction in both TC/HDL ratio (chimarrão: 0.2±0.2 and control: 0.3±0.5, P=0.016) and TG (chimarrão: 34±36 mg/dL and control: 29±26 mg/dL, P= 0.001), similar in both groups. After using chimarrão, the TBARS values presented a significant difference (P=0.001), considering the application period. Both groups showed significant differences concerning a reduction in BMI (P=0.001) and Energy Intake (P=0.001). Conclusion: After the utilization of chimarrão for 12 hours, no significant data were detected regarding the flavonoid concentration in blood. Alterations were observed in the systemic blood pressure and heart rate.

203 f. / Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2013-09-19T13:05:20Z No. of bitstreams: 1 UFBA - IQ - Tese - Paulo Daniel Silva.pdf: 13955578 bytes, checksum: 5f9c22ad7cc2b63b83b624f9648290cf (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca(anahilda@ufba.br) on 2013-09-19T13:08:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 UFBA - IQ - Tese - Paulo Daniel Silva.pdf: 13955578 bytes, checksum: 5f9c22ad7cc2b63b83b624f9648290cf (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-19T13:08:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 UFBA - IQ - Tese - Paulo Daniel Silva.pdf: 13955578 bytes, checksum: 5f9c22ad7cc2b63b83b624f9648290cf (MD5) Previous issue date: 2012 / CNPq, FAPESB, FINEP e CAPES / Neste trabalho é descrita a investigação dos constituintes químicos não-voláteis das fases hexânica e diclorometânica obtidas das folhas de Myrcia hiemalis e da fase diclorometânica obtida das folhas de Myrcia myrtifolia. O fracionamento da fase diclorometânica de M. hiemalis resultou no isolamento de dez compostos: 7-hidróxi-6,8- dimetil-5-metóxi-isoflavona (1-h), 5-hidróxi-6,8-dimetil-7-metoxiflavanona (2-h), 6,8-dimetil- 5,7-dimetoxiflavanona (3-h), 2,7-di-hidróxi-6,8-dimetil-5-metoxiflavanona (4-h), 2’,4’-di- hidróxi-3’,5’-dimetil-4,6’-dimetoxichalcona (5-h), 2’-hidróxi-3’,5’-dimetil-4’,6’- dimetoxichalcona (6-h), 2’,6’-di-hidróxi-3’,5’-dimetil-4’-metoxichalcona (7-h), eudesm-4(15)- eno-7,11-diol (8-h), 2,3,21-tri-hidroxitaraxastan-28,20-olídeo (9-h) e ácido cinâmico (10-h). Da fase hexânica de M. hiemalis foram isoladas duas substâncias, -tocoferol (11- h) e acetato de geranilgeranila (12-h), enquanto que da fase diclorometânica de M. myrtifolia foram isoladas dez substâncias, quercetina (13-m), 2’-hidróxi-2,3’-dimetil-4’,6’- dimetoxipropiofenona (14-m), 2’-hidróxi-3’-metil-4’,6’-dimetoxibutirofenona (15-m), ácido betulínico (16-m), ácido betulônico (17-m), betulinaldeído (18-m), betulona (19-m), ácido oleanólico (20-m), ácido ursólico (21-m) e estigmasterol (22-m). Não foram encontrados relatos na literatura sobre o isolamento dos compostos 5-h, 7-h e 9-h. Os constituintes químicos das fases foram isolados e purificados por sucessivas colunas cromatográficas e cromatografia em camada delgada preparativa, bem como, foram utilizadas técnicas de filtração e recristalização. As estruturas das substâncias foram determinadas através das análises de diversas técnicas de RMN de 1H e 13C. / Salvador

Fabaceae family is one of the largest botanical families and of wide geographic distribution. Erythrina genus is among the several genus of this family. Erythrina mulungu, popularly known as mulungu, is a native tree of the southeast and northeast of Brazil. In the herbal medicine is considered an excellent sedative to treat anxiety, nervous coughs, agitation psicomotory and insomnia, besides asthma, bronchitis, hepatitis, gengivite, hepatic and esplenics inflammations and fevers. This work had as aim accomplishes the phytochemical investigation of the crude ethanolic extract of the root of E. mulungu, and the pharmacological evaluation of the ethanolic extracts of the root bark, root, stem bark and stem. As result, it has been isolated two substances of the root of E. mulungu, that were identified by infrared, 1H and 13C NMR analyses as Quercitrin and Luteollin, obtained from the chloroformic and Ethyl Acetate phases, respectively. These substances had never been isolated before from this species. All of the tested crude extracts, as well as the chloroformic and ethyl acetate phases of the root exhibited a significantly inhibition of the contortions induced by acetic acid. In the hot plate test, any extract and/or phase presented antinociceptive effect, indicating that the tested extracts and phases don t have central analgesic action. In the first phase of the formalin test, no sample presented significant statistic effect, and in the second phase, all of the extracts and phases induced reduction of the time of latency. In the peritonitis test all of the extracts and the chloroformic phase reduced the number of cells significantly in the peritoneal washed. Finally, we can conclude that the two identified substances are valuable for literature, once this is the first time they were isolated of this species; and the pharmacological tests were showed promising antiinflammatory potential for Erythrina mulungu. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A família Fabaceae é uma das maiores famílias botânicas e de ampla distribuição geográfica. O gênero Erythrina está dentre os vários gêneros desta família. Erythrina mulungu, popularmente conhecida como mulungu, é um arbusto nativo do sudeste e nordeste do Brasil. Na medicina herbária é considerada um excelente sedativo para tratar ansiedade, tosses nervosas, agitação psicomotora e insônia, além de asma, bronquite, hepatite, gengivite, inflamações hepáticas e esplênicas e febres. Este trabalho teve como objetivo realizar a investigação fitoquímica do extrato etanólico bruto da raiz de E. mulungu, com a avaliação farmacológica dos extratos etanólicos da casca da raiz, raiz, casca do caule e caule. Como resultado, foram isoladas duas substâncias da raiz de E. mulungu, que através de análises de infravermelho, RMN de 1H e 13C, e comparação com dados da literaura, foram identificadas como Quercitrina, proveniente da fase clorofórmica; e Luteolina, proveniente da fase Acetato de Etila, substâncias estas nunca relatadas antes na espécie. Todos os extratos brutos testados, assim como as fases clorofórmica e acetato de etila da raiz exibiram uma inibição significativa das contorções induzidas por ácido acético. Já no teste da placa quente, nenhum extrato e/ou fase apresentou efeito significante, indicando que as amostras testadas não têm ação analgésica central. Na primeira fase do ensaio de nocicepção induzida por formalina, nenhuma amostra apresentou resultado estatisticamente significante, e na segunda todos os extratos e fases induziram redução do tempo de latência. No ensaio de peritonite todos os extratos e a fase clorofórmica reduziram significativamente o número de células no lavado peritoneal. Sendo assim, pode-se concluir que as duas substâncias identificadas são de grande valia para literatura, uma vez que esta é a primeira vez em que foram isoladas desta espécie; e os testes farmacológicos se mostraram promissores no que diz respeito ao potencial anti-inflamatório para Erythrina mulungu.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-12-20T12:18:32Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2583076 bytes, checksum: dacaa0fd91859082d6c51b99f78336cf (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-20T12:18:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2583076 bytes, checksum: dacaa0fd91859082d6c51b99f78336cf (MD5) Previous issue date: 2017-08-01 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Juçara é um fruto da Mata Atlântica com elevado conteúdo fenólico. Fatores pré e pós- colheita podem afetar a composição do fruto. O objetivo deste trabalho foi estudar a composição fenólica dos frutos de juçara de diferentes microrregiões dos estados de Minas Gerais e Espírito Santo e investigar os efeitos da irradiação gama e da pasteurização na estabilidade das principais antocianinas do fruto. Os frutos foram coletados em 7 microrregiões (5 microrregiões do estado de Minas Gerais e 2 do Espírito Santo) e despolpado. A composição fenólica foi identificada e quantificada por HPLC-DAD-MS/MS. Os resultados foram analisados por ANOVA seguida pelo teste de Tukey. Tratamentos de conservação (pasteurização e irradiação) foram aplicados na polpa de uma das regiões para avaliar o efeito do processamento e tempo de armazenamento sobre as principais antocianinas da polpa de juçara (cianidina-3- glicosídeo e cianidina-3-rutinosídeo). Para isso, a polpa foi dividida em 6 porções: controle (polpa sem tratamento), polpa irradiada (2, 4, 6, 8 kGy) e, por ultimo, polpa pasteurizada. Os resultados foram analisados por análise de regressão simples e múltipla. As polpas de juçara de todas as regiões revelaram-se ricas em vários tipos de compostos fenólicos, tais como: antocianinas, flavonóis, flavan-3-óis e resveratrol. Foram identificados derivados antocianicos de cianidina, plargonidina e peonidina. Os flavonois foram do tipo quercetina, kaempferol e isoramnetina. Os flavan-3-óis catequina, epicatequina e procianidinas do tipo B foram detectados. Os glicosídeos de resveratrol apareceram em pequenas concentrações. A concentração desses compostos variou entre as regiões de cultivo. O elevado teor de antocianinas e flavonóis foi o principal responsável pela elevada capacidade antioxidante determinada pelos métodos DPPH, ABTS e ORAC. O processo de irradiação teve um efeito prejudicial sobre os as antocianinas e capacidade antioxidante da polpa de juçara durante todo o período de armazenamento a 4 oC. A pasteurização não alterou o teor de cianidina-3-rutinosídeo, cianidina-3-glicosídeo e capacidade antioxidante da polpa quando comparado com o controle, após os 60 dias de armazenamento refrigerado. Logo, os resultados sugerem que a polpa de juçara é uma boa fonte de compostos fenólicos de várias classes, principalmente antocianinas. O processo de pasteurização pode ser aplicado quando se deseja aumentar a vida útil do produto, com prejuízos mínimos à composição fenólica. / Juçara is a fruit from the Atlantic Forest with a high phenolic content. Pre and post factors can affect the fruit composition. The aim of this paper was to study the phenolic composition of the Juçara fruit from different microregions of Minas Gerais and Espírito Santo and investigate the effects of gamma radiation and pasteurization in the stability of the main anthocyanins of the fruit. The fruits were collected in 7 microregions (5 microregions of Minas Gerais and 2 of Espirito Santo) and pulped. The phenolic composition was identified and quantified by HPLC-DAD-MS/MS. The results were analyzed by ANOVA followed by the Tukey test. Conservation treatments (pasteurization and irradiation) were applied to the pulp of one of the regions to assess the effect of processing and storage time over the main anthocyanins of the juçara pulp (cyanidin-3-glycoside and cyanidin-3-rutinoside). For such, the pulp was divided into 6 portions: control (pulp without treatment), irradiated pulp (2, 4, 6, 8 kGy) and, finally, pasteurized pulp. The results were analyzed by simple and multiple regression analysis. Juçara pulps from all regions have been discovered to be rich in various types of phenolic compounds, such as anthocyanins, flavonols, flavan-3-óis, and resveratrol. It has been identified anthocyanic derivatives of cyanidin, plargonidine and peonidine. Flavonoids were quercetin, kaempferol and isoramnetin type. The flavan-3-óis catechin, epicatechin and procyanidins of B type were detected. Resveratrol glycosides appeared in small concentrations. The concentration of these compounds varied between the cultivation regions. The high level of anthocyanins and flavonols was mainly responsible for the high antioxidant capacity determined by the DPPH, ABTS and ORAC methods. The irradiation process had a negative effect on the anthocyanins and antioxidant activity of the juçara pulp throughout the storage period at 4°C. Pasteurization did not change the level of cyanidin-3-rutinoside, cyanidin-3-glycoside and antioxidant capacity of the pulp when compared to the control after 60 days of refrigerated storage. Thus, the results suggest that juçara pulp is a good source of phenolic compounds of several classes, mainly anthocyanins. The pasteurization process can be applied when it is desired to increase the life span of the product, with minimal damages to the phenolic composition.

O cultivo de plantas das espécies de Vitis (Vitaceae), conhecidas popularmente como videiras, representa uma das atividades econômicas mais proeminentes no Sul do Brasil. Figuram entre as espécies mais ricas em compostos polifenólicos, sendo os mesmos responsáveis por inúmeras atividades biológicas e farmacológicas importantes, dentre as quais, a antioxidante. Neste contexto, este trabalho objetivou analisar quali e quantitativamente os principais grupos polifenólicos encontrados em extratos de videiras, os antocianos e flavonóides, bem como realizar ensaio para avaliação da atividade antioxidante in vitro. Neste sentido foram desenvolvidos e validados dois métodos por cromatografia líquida de alta eficiência, com detector UV/VIS. A análise dos compostos fenólicos incluíram a utilização de duas colunas diferentes, sendo uma constituída por sílica C18 e outra RP-18 com partículas híbridas contendo ligações etano-silicone. Em ambos os métodos foram utilizados sistema de eluição em gradiente, cuja composição das fases móveis foram água e acetonitrila acificadas com ácido trifluoracético. Os métodos desenvolvidos foram validados segundo as normas vigentes e atenderam aos parâmetros de validação como especificidade, linearidade, precisão, sensibilidade, exatidão e robustez nas faixas de concentração avaliadas. O presente estudo também investigou a atividade antioxidante in vitro dos extratos de videira através do método potencial antioxidante reativo total (TRAP), o qual foi otimizado e validado segundo normas internacionais, utilizando Trolox como referência. A partir deste método também foi possível avaliar a reatividade total antioxidante (TAR). Todas as concentrações testadas apresentaram reatividade instantânea inferior ao composto de referência, entretanto, demonstraram atividade antioxidante superior ao Trolox 200 nM. / The cultivation of plants from Vitis species (Vitaceae), popularly known as grapevine, is one of the most prominent economic activities in southern Brazil. The Vitis species is one of the plants that is most rich in polyphenolic compounds, responsible for numerous important pharmacological and biological activities, such as antioxidant activity. In this context, this study aimed to analyze qualitatively and quantitatively the principal groups encountered in grapevine extracts, the anthocyans and flavonoids, and to assay their antioxidant activities in vitro. For this purpose, two methods were developed and validated using high-performance liquid chromatography, employing a UV/VIS detector. The analysis of phenolic compounds included the utilization of two different columns: a column constituted by silica C18 and other RP18 column with bridged ethane-silicon hybrid particles. In both methods, a gradient system was used, with water and acetonitrile acidified with trifluoroacetic acid as a mobile phase. The methods developed were validated according to ICH evaluating parameters such as specificity, linearity, precision, sensibility, accuracy and robustness in the concentration range evaluated. The present study also analyzed the antioxidant activity in vitro of grapevine extracts employing the Total Reactive Antioxidant Potencial (TRAP) method, which was optimized and validated according to international patterns, using Trolox as a reference substance. This method also allowed evaluation of the total instantaneous reactivity (TAR). In all concentrations, the samples presented lower instantaneous reactivity than that of the reference compound. In contrast, the samples presented higher antioxidant activity than Trolox 200 nM.

As plantas pertencentes à família das leguminosas apresentam um grande interesse econômico, sendo que o Brasil é um país com vasta utilização de plantas desta família. Neste contexto, destaca-se a leguminosa Phaseolus vulgaris L. popularmente conhecida como feijão, que contém uma boa fonte de constituintes bioativos. Espécie nativa da América Central e dos Andes peruanos possui grande importância econômica para o Brasil. Em sua composição química podemos encontrar os flavonóides. Inúmeros artigos científicos descrevem as atividades dos flavonóides como antioxidantes, antimutagêncio, anticarcinogênico e na captação de nitrogênio durante o desenvolvimento da planta. Sendo esta leguminosa um dos alimentos mais consumidos no mundo e de larga importância econômica, o presente trabalho visou avaliar o perfil cromatográfico do extrato metanólico de 47 cultivares de feijão através da técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e também a validação do seu método. O material vegetal, sementes, teve seu teor de umidade estabelecido pelo método gravimétrico. Através do perfil cromatográfico das sementes dos cultivares de feijão, foi possível identificar a presença de flavonóides como a astragalina, um heterosídeo do canferol. O método foi devidamente validado por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) de acordo com os métodos preconizados na literatura. Os cultivares TB 0224, TB0226, TB 0309, Rosinha Precoce e Amarelo Iolanda, foram os que apresentaram teor maior de astragalina, demonstrando que os feijões de cor possuem maior composição de deste composto. / Plants belonging to the legume family have a big economic interest, being Brazil is a country with extensive use of plants in this family. In this context, we highlight the legume Phaseolus vulgaris L. popularly known as beans, which are a good source of bioactive compounds. This species is native of southern Brazil and the main food consumed by the population. In its chemical composition can meet the flavonoids. Numerous scientific articles describing the activities of flavonoids as antioxidants, antimutagênic, anticarcinogenic and nitrogen uptake during plant development. Since this is a legume consumed more food in the world and of great economic importance, this study sought to evaluate the chromatographic profile of the methanol extract of 47 cultivars of beans through the technique of High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and also the validation of their method. The plant material, seeds, water content was established by gravimetric method. Through the chromatographic profile of the seeds of bean cultivars, it was possible to identify the presence of flavonoids and astragalin, a kaempferol heteroside. The method was validated for High Performance Liquid Chromatography (HPLC) according to the methods suggested in the literature. The cultivars with colored TB 0224, TB0226, TB 0309, Rosinha Precoce and Amarelo Iolanda, were those with a higher content of astragalin, demonstrating that colored beans have a higher composition of astragalin.