Orientador: Edivaldo Antônio Garcia / Resumo: O experimento foi realizado no setor de avicultura da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Câmpus de Botucatu, com o objetivo de avaliar os efeitos da inclusão de flavonóides juntamente com mananoligossacarídeos (mos) frente a outros aditivos sobre o desempenho, rendimento da carcaça e de partes e qualidade da carne de frangos de corte criados no período de 1 a 42 dias. Foram utilizados 1500 frangos de corte da linhagem Cobb, distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado com cinco tratamentos e seis repetições de 50 aves por parcela, para análise de desempenho nos períodos de 1 - 21, 22 - 42, 22 - 35, 36 - 42 e 1 - 42 dias. Os tratamentos consistiram em antibiótico, probiótico 1, probiótico 2, testemunha e flavonóide + mos. Aos 42 dias foram retiradas 24 aves por tratamento para as análises de rendimento de carcaça, de partes e qualidade de carne. A análise estatística dos dados foi realizada pelo SISVAR (Ferreira, 1998). Não houve diferença significativa entre os tratamentos para ganho de peso diário, consumo de ração, mortalidade, conversão alimentar e peso médio final nos períodos de 1 - 21, 22 - 42, 22 - 35, 36 - 42. No período de 1 - 42 dias também não houve diferença significativa entre os tratamentos para ganho de peso diário, consumo de ração, mortalidade e peso médio final mas houve diferença significativa para conversão alimentar, onde o tratamento flavonóide + mos apresentou o melhor índice. O rendimento de carcaça e de partes não foi alterado significativamente entre os tratamentos. As análises de qualidade de carne para pH e coloração... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The experiment was carried out at the School of Veterinary and Animal Science, FMVZ, Unesp, Botucatu. The study aimed to evaluated to effect of the use of flavonoids + mannan oligosaccharides (mos) and others growth promoters on performance, carcass yield and cuts, meat quality of broilers reared from 1 - 42 days. This experimental design was the completely randomized. One thousand and fifty male Cobb broiler chicks were distributed in five treatment with six replicates of 50 birds each. Growth performance data were obtained from 1 - 21, 22 - 42, 22 - 35, 36 - 42 and 1 - 42 days period. The treatments were denominated as: antibiotic, probiotic 1, probiotic 2, negative control and flavonoids + mos. At 42 days of age, twenty four birds from each treatment were slaughtered to evaluate carcass yield and cuts, and meat quality. Experiment data were calculated and analyzed using SISVAR (Ferreira, 1998). There were no significant effects of treatments on growth performance data were obtained from 1 - 21, 22 - 42, 22 - 35, 36 - 42 days period. In the total period, 1 - 42 days, the results showed that there were no significant of treatment effect on mortality, weight gain, feed consumption, live weight and efficiency production factor but there were significant effect on feed convertion, the treatment flavonoids + mos was better when compared with other treatments. There were no significant effects of treatments on carcass yield, yield cuts, pH and color. There were significant effects of treatments on Tbars (this analysis show the oxidative stability) to breast and thig meat, the treatment flavonoids + mos. was better when compared with other treatments. / Mestre

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:24:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2292715 bytes, checksum: cb27e9ba3f75b8d32163a1ae715a147c (MD5) Previous issue date: 2008-05-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / High Performance Liquid Chromatography (HPLC) allows both qualitative and quantitative chemical analysis, separating and identifying substances in mixtures with speed and efficiency. However, factors governing chromatographic retention are complex and the method development phase consumes a lot of resources. In our work we evaluated a chromatographic simulation software package (HIPAC-G, HIPAC-B e HIPAC-S, Phenomenex, Torrance, USA) for optimizing the chromatographic separation of eight flavonoid standards (3-O-[β-Dglucopyranosyl-( 1→6)-α-L-ramnopyranosyl]-7-O-α-L-ramnopyranosyl kampferol; hesperidine; kampferol; tiliroside; quercetin; 3,4 ,7,8-tetra-O-methyl-gossypetine; 3,3 ,4 ,7,8-penta-O-methylgossypetine and 3,3 ,4 ,7-tetra-O-methyl-quercetin). The HIPAC model of retention is based on the known linear relationship that exists between the retention factor of an analyte and the percentage of organic solvent in the mobile phase, to simulate retention data. Using gradient elution, three trial runs were done (preliminary runs that are used to input retention data to the software). The first trial run used a C18 column (250 x 4,6 mm, 5 m) and as mobile phase a gradient from 5 to 95% of acetonitrile (solvent B) in 0,1% formic acid (solvent A) at a flow rate of 1 mL/min with UV detection at 264 nm. The first trial run was comprised of two gradient runs using the same chromatographic conditions but different gradient duration times (30 and 60 minutes respectively). The second trial run used the same chromatographic conditions as the first one, but methanol instead of acetonitrile as the organic modifier and 10% and 100% as the initial and final %B, respectively. The third trial run was done with the same chromatographic conditions as the second one, but using a column with different stationary phase and dimensions (C8, 150 x 4,6 mm, 5 m). The retention data of the three trial runs were used as input to the simulation software, using the HIPAC-G module. For isocratic mode simulation using the HIPAC-B module, both a C8 (150 x 4,6 mm, 5 m) and a C18 (250 x 4,6 mm 5 m) column was used with binary mixtures of MeOH (solvent B) in 0,1% formic acid (solvent A). Two trial runs with 60% and 70%B were done for each column and the resulting retention data used as input for simulation. The optimized separation conditions as suggested by HIPAC-B were used as input for HIPAC-S to optimize the system chromatographic conditions. The optimization criterion used for all simulations was the average global resolution for all peaks in the chromatogram. Altogether twelve simulations in gradient elution mode and four isocratic simulations were done. The simulated retention data was then confronted with experimentally obtained retention data for the eight flavonoid standards. The correlation coefficient (r2) between simulated and observed retention times for the analytes when eluted in gradient mode varied from 0,9416 to 0,9992 (n=12). The correlation coefficient in isocratic mode varied from 0.9999 to 1 (n=4), indicating an excellent efficiency in predicting retention data for the mixture tested. Taken together our results show that the use of chromatographic simulation software such as HIPAC-G, HIPAC-B e HIPACS can constitute an important tool in the optimization of separation conditions of complex mixtures, such as those found in the field of natural products. / A Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) permite análises químicas qualitativas e quantitativas, separando e identificando substâncias em misturas com rapidez e eficiência. Entretanto, os fatores que governam a retenção cromatográfica são complexos e a fase de desenvolvimento de métodos consome muitos recursos. Em nosso trabalho nós avaliamos um pacote de softwares de simulação cromatográfica (HIPAC-G, HIPAC-B e HIPAC-S, Phenomenex, Torrance, USA) para otimização da separação cromatográfica de oito padrões de flavonóides: (3-O-[β-D-glicopiranosil-(1→6)-α-L-ramnopiranosil]-7-O-α-Lramnopiranosilkanferol; hesperidina; kanferol; tilirosideo; quercetina; 3,4 ,7,8-tetra-O-metilgossipetina; 3,3 ,4 ,7,8-penta-O-metil-gossipetina; 3,3 ,4 ,7-tetra-O-metil-quercetina). O modelo de retenção do HIPAC se baseia na conhecida relação linear entre o fator de retenção de um analito e a porcentagem de solvente orgânico na fase móvel para simulação de dados de retenção. Utilizando eluição em modo gradiente, três corridas preliminares foram realizadas (corridas preliminares são usadas para inserir dados de retenção para o software). A primeira corrida preliminar usou uma coluna C18 (250 x 4,6 mm, 5 m) e como fase móvel um gradiente de 5 a 95% de acetonitrila (solvente B) e acido fórmico a 0,1% (solvente A) a um fluxo de 1 mL/min com detecção no ultravioleta a 264 nm. A primeira corrida preliminar foi composta de duas corridas em modo gradiente usando as mesmas condições cromatográficas, mas com diferentes durações de tempo de gradiente (30 e 60 minutos respectivamente). A segunda corrida preliminar utilizou as mesmas condições cromatográficas da primeira, mas como modificador orgânico usou metanol ao invés de acetonitrila e %B inicial e final de 10% e 100%, respectivamente. A terceira corrida preliminar foi feita com as mesmas condições cromatográficas da segunda corrida, mas utilizando uma coluna com fase estacionária e dimensões diferentes (C8, 150 x 4,6 mm, 5 m). Os dados de retenção das três corridas preliminares foram usados para alimentar o software de simulação, utilizando o módulo HIPAC-G. Para simulação em modo isocrático usou-se o módulo HIPAC-B, tanto com uma coluna C8 (150 x 4,6 mm, 5 m) quanto C18 (250 x 4,6 mm 5 m) e misturas binárias de MeOH (Solvente B) em 0,1% de ácido fórmico (Solvente A). Duas corridas preliminares com 60% e 70%B foram realizadas para cada coluna e os dados de retenção resultantes foram usados para alimentar a simulação. As condições otimizadas de separação sugeridas pelo HIPAC-B foram usadas como dados para inserção no HIPAC-S para otimizar as condições do sistema cromatográfico. O critério de otimização utilizado para todas as simulações foi a resolução média global para todos os picos no cromatograma. No total, doze simulações em modo gradiente e quatro simulações em modo isocrático foram realizadas. Os dados de retenção simulados foram comparados com os dados experimentalmente obtidos para os oito flavonóides padrões. O coeficiente de correlação (r2) entre os tempos simulados e observados para analitos eluídos em modo gradiente variaram de 0,9416 a 0,9992 (n=12). O coeficiente de correlação em modo isocrático variou de 0.9999 a 1 (n=4), indicando excelente eficiência em predizer dados de retenção para a mistura testada. Tomados em conjunto, nossos resultados mostram que o uso de softwares de simulação cromatográfica tal como HIPAC-G, HIPAC-B e HIPAC-S podem constituir uma importante ferramenta na otimização das condições de separação de misturas complexas, tais como as que são encontradas no campo de produtos naturais.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-29T12:15:24Z No. of bitstreams: 2 Tese - Luciane Dias Pereira - 2016.pdf: 4859479 bytes, checksum: e060870fade58076d056ab4d8121aa49 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-29T12:17:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Luciane Dias Pereira - 2016.pdf: 4859479 bytes, checksum: e060870fade58076d056ab4d8121aa49 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-29T12:17:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Luciane Dias Pereira - 2016.pdf: 4859479 bytes, checksum: e060870fade58076d056ab4d8121aa49 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-07-22 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Seeds and peels of jabuticaba (Myrciaria cauliflora (Mart) O. Berg) collected in the Jabuticabal Winery were separately extracted with aqueous acetone (50%). After partitioning between solvents, the fractions ethyl acetate and methanol were subjected to repeated column chromatography using Diaion HP-20 and Sephadex LH-20 as adsorbents. Pure substances and fractions were analyzed by 1H NMR and 13C, one and two dimensional, and ESI-TOF mass spectroscopy. In this work, fifteen compounds were isolated and identified: seven ellagitannins, one of them is novel, one galloyl ester, three phenolic acids, two glycosylated flavonoids, one depside and one organic acid. To optimize the extraction of phenolic compounds, a randomized experimental design was applied, using Box-Wilson central composite design for two factors. The independent variables were stirring time () and solvent volume (V), which consisted of ethanol/hydrochloric acid (9:1). Three independent experiments in duplicate were performed, as well as assays for quantitation of phenolic compounds total monomeric anthocyanins (TMA), tannins (T), total phenols (TP), and color parameters color index (CI) and tonality (Ton). According to the results, when the volume remained constant and the stirring time increased, all phenolic contents and color patterns intensified. The best conditions for greater extraction were total ultrasonic time of 75 min and solvent volume of 64 ml, yielding the concentrations of TP, T and TMA of 33.5; 7.9 and 5.57 mg g-1, and CI and Ton, 0.893 a.u. and 0.833, respectively. In the extraction of phenolic compounds from seeds, the following solvents were tested water, aqueous ethanol (50%), aqueous methanol (50%), and the latter mixture provided the highest levels of TP, T and flavonoids: 15.71; 12.65 and 64.14 mg g-1, respectively. The influence of soil on jabuticaba seed and peel chemical contents was evaluated. Data obtained from the analysis of centesimal composition, phenolic contents, color parameters and mineral nutrients of samples collected in five orchards were analyzed by canonical redundancy (RDA) and hierarchical clustering (HCA). These analyzes ordered samples in four groups: the peels in groups I and II were related to high levels of phenolics and fibers, respectively, while the tannins and flavonoids were main compounds present in the seeds of group III, the moisture content was higher in seeds of group IV. The separation of peels (Groups I and II) and seeds (Groups III and IV) in different groups was influenced by the levels of fruits nutrients, Mn2+ and Cu2+, whereas Mn2+ from soil distinguished samples of the clusters I and III from the others, II and IV, characterizing a strong influence of some soil and fruits nutrients on the chemical composition of the jabuticaba seeds and peels. / Sementes e cascas de jabuticaba (Myrciaria cauliflora (Mart.) O. Berg) coletadas na Vinícola Jabuticabal, foram extraídas separadamente com acetona:água 50%. Após partição entre solventes, as frações acetato de etila e metanólica foram submetidas a repetidas cromatografias em coluna utilizando-se Diaion HP-20 e Sephadex LH-20 como adsorventes. Substâncias puras e frações foram analisadas por RMN de 1H e 13C, uni e bidimensional e espectroscopia de massas ESI-TOF. Neste trabalho foram isolados e identificados quinze compostos sendo sete elagitaninos, um deles inédito, um éster galoílico, três ácidos fenólicos, dois flavonoides glucosilados, um depsídeo e um ácido orgânico. Para otimização da extração dos compostos fenólicos utilizou-se um delineamento experimental ao acaso, empregando-se a técnica de planejamento Box-Wilson composto central para dois fatores. Os fatores foram compostos pelo tempo de agitação () e volume de solvente (V) constituído por etanol/ácido clorídrico (9:1). Foram realizados três experimentos independentes em duplicata, além de ensaios para quantificação dos compostos fenólicos antocianinas totais monoméricas (ATM), taninos (T) e fenóis totais (FT), padrões de coloração índice de cor (IC) e tonalidade (Ton). De acordo com os resultados, quando o volume permaneceu constante e variou o tempo de agitação observou-se que todos os teores de fenóis e padrões de cor aumentaram. O tempo total de 75 min de ultrassom e volume de solvente de 64 mL apresentou maior poder de extração, obtendo-se teores de FT, T e ATM de 33,5; 7,91 e 5,57 mg g-1, com IC e Ton de 0,893 u.a. e 0,833, respectivamente. Na extração de compostos fenólicos nas sementes foram testados os solventes: água, etanol aquoso (50%) e metanol aquoso (50%), sendo que esta última mistura forneceu os maiores teores de FT, T e flavonoides: 15,71; 12,65 e 64,14 mg g-1, respectivamente. No estudo da influência do solo nas variações químicas de cascas e sementes de jabuticaba, os dados obtidos da análise de composição centesimal, compostos fenólicos, padrões de coloração e nutrientes minerais de amostras de cinco pomares foram analisados por redundância canônica (RDA) e de agrupamento hierárquico (HCA). Essas análises ordenaram as amostras em quatro grupos: as cascas do grupo I e II foram relacionadas aos altos níveis de fenóis totais e fibras, respectivamente, enquanto que os taninos e flavonoides foram os principais compostos presentes nas sementes do grupo III e o teor de umidade foi maior em sementes do grupo IV. A separação de cascas (grupos I e II) de sementes (grupos III e IV) em grupos distintos foi influenciada pelos teores dos nutrientes Mn2+ e Cu2+ dos frutos, enquanto Mn2+ do solo distinguiu amostras das classes I e III das outras, II e IV, caracterizando assim uma forte influência de alguns nutrientes dos solos e dos frutos na composição química das sementes e cascas de jabuticaba.

Com o intuito de promover proteção de amplo espectro, na maioria dos protetores solares estão associados pelo menos dois filtros orgânicos (UVA e UVB). A combinação da avobenzona (BMBM), filtro UVA, e do p--metoxicinamato de octila (EHMC), filtro UVB, é conhecida e muito utilizada em formulações manipulas e industrializadas, porém apresenta alteração na absorção espectral após exposição à radiação UV. A estratégia empregada com maior frequência para reduzir a instabilidade da combinação é baseada na adição de agentes fotoestabilizadores. A adição de substâncias naturais em formulações fotoprotetoras vem sendo explorada, especialmente o grupo dos flavonoides, como a rutina, que apresenta resultados positivos em relação à eficácia fotoprotetora. O objetivo principal desta pesquisa foi avaliar o potencial da rutina como substância fotoestabilizadora dos filtros EHMC e BMBM. Foram desenvolvidas formulações contendo os dois filtros associados ou não com rutina de acordo planejamento fatorial em três níveis. As formulações foram avaliadas quanto a eficácia fotoprotetora in vitro aplicadas em placas de PMMA e analisadas por espectrofotometria de refletância com esfera de integração antes e após a exposição à radiação UV. As interações moleculares dos filtros com a rutina foram avaliadas por 1H RMN, DSC, TG e análise qualitativa da supressão do estado energético singleto. A adição de rutina nas formulações contendo 5,0% (p/p) de BMBM e 10,0% (p/p) de EHMC promoveu elevação na conservação do FPS in vitro de 53,9% para 65,8 (0,1% de rutina) e 70,8% (1,0% de rutina). As curvas DSC e TG da rutina apresentaram alterações promovidas pela presença dos filtros BMBM e EHMC, indicando interação entre o flavonoide e os filtros. Após dose de 5760 J cm-2 de radiação UV o valor da razão trans/cis para o filtro EHMC em solução adicionado do filtro BMBM foi elevado de 5,5±0,1, sem adição de rutina, para 12,6±0,4, com adição da rutina. A análise qualitativa da supressão do estado singleto indicou que um dos mecanismos envolvidos na fotoestabilização dos filtros BMBM e EHMC é a supressão do estado energético singleto. Os resultados reportados neste estudo indicaram que a adição da rutina em formulações fotoprotetoras representa um caminho simples e efetivo para elevar a fotoestabilidade da combinação dos filtros BMBM e EHMC. A adição da rutina em formulações fotoprotetoras representa uma estratégia promissora, pois aliada a ação fotoestabilizadora, verificada nesse estudo, esse flavonoide possui propriedades antioxidante e quelante de metais que podem colaborar para o desenvolvimento de formulações fotoprotetoras de amplo espectro com aumento da segurança e eficácia. / In order to promote broad-spectrum protection, most sunscreens are associated with at least two organic filters (UVA and UVB). The combination of avobenzone (BMBM), UVA filter, and octyl methoxycinnamate (EHMC), UVB filter, is well known and widely used in industrial formulations and pharmaceutical compounding, but shows alteration in spectral absorption after UV radiation exposure. The most commonly used strategy to reduce the instability of the combination is based on the addition of photostabilizer agents. The addition of natural substances in sunscreen formulations has been explored, especially the group of flavonoids such as rutin, which shows positive results regarding photoprotective efficacy. The main objective of this research was to evaluate the potential of rutin as a photostabilizer substance of EHMC and BMBM. Formulations were developed containing the two filters associated or not with rutin, according to factorial design at three levels. The formulations were evaluated for in vitro photoprotective efficacy applied on PMMA plates and analyzed by spectrophotometer with integrating sphere reflectance before and after exposure to UV radiation. Molecular interactions of filters with rutin were evaluated by 1H NMR, DSC, TG and qualitative analysis of the suppression of singlet energy state. The addition of rutin in the formulations containing 5.0 % (w/w) BMBM and 10.0 % (w/w) EHMC promoted an increase in the preservation of in vitro SPF of 53.9% to 65.8 (0.1 % rutin) and 70.8 % (1.0% rutin). The DSC and TG curves of rutin showed changes promoted by the presence of BMBM and EHMC filters, indicating interaction between the flavonoid and filters. After 5760 J cm-2 of UV radiation the value of the trans/cis ratio for the EHMC filter added from the BMBM filter was increased from 5.5 ± 0.1 without addition of rutin, to 12.6 ± 0 4,with the addition of rutin. Qualitative analysis of the suppression of the singlet state indicated that one of the mechanisms involved in the photostabilization BMBM and EHMC filters is suppression of singlet excited state.The results reported in this study indicate that the addition of rutin in sunscreen formulations is a simple and effective way to increase the photostability of the combination of BMBM and EHMC. The addition of rutin in sunscreen formulations represents a promising strategy, for allied with the photostabilization action, observed in this study, this flavonoid has antioxidant and chelating properties of metals that can contribute to the development of broad-spectrum sunscreens formulations with increased safety and efficacy.

A própolis é uma substância resinosa coletada pelas abelhas de diversas partes das plantas, como brotos, botões florais e exudados resinosos, conhecida por do ácido cinâmico e ácido benzócio, foram ainda encontrados o ácido pimárico, várias atividades biológicas como antimicrobiana, anti-inflamatória, antiproliferativa e antioxidante. Sua composição química depende de vários fatores, como a localização geográfica, vegetação e clima. A própolis brasileira com certificação de produto orgânico, proveniente do sul do Brasil, foi coletada e avaliada em diferentes estações do ano. Essa própolis é produzida em florestas nativas e áreas de reflorestamento, locais livres de contaminação por insumos agrícolas, metais pesados e poluição industrial. O objetivo deste trabalho foi avaliar a composição química e atividade antioxidante, considerando a variação sazonal das estações de verão, outono e primavera. Foram coletadas ao todo 78 amostras provenientes de 14 apiários distintos. O teor de compostos fenólicos totais e flavonoides foram feitos por métodos colorimétricos, a atividade antioxidante foi avaliada pelos métodos de sequestro dos radicais livres DPPH•, ABTS+, sendo a capacidade antioxidante contra os radicais peroxila, determinado pelo método ORAC. O perfil químico do extrato de etanólico da própolis (EEPO) foi avaliado por cromatografia de camada delgada em fase reversa (CCDAE-FR), varredura no ultravioleta-visível (UV-vis) e cromatografia gasosa acoplada com espectrometria de massas (CGEM). A composição de voláteis foi analisada por CG-EM. Os teores de flavonoides variaram de não detectado até 4,76 mg.g-1 e de 6,80 a 72,55 mg.g-1 para fenólicos totais. Em relação à atividade antioxidante, a variação encontrada foi de 1,01 a 384,60 mg Trolox.g-1 para ABTS+, de 4,50 a 148,10 µmol Trolox.g-1 para DPPH• e de 0,20 a 1,25 µmol Trolox.g-1 de amostra para o ORAC. Em relação às estações, o verão apresentou maior teor de flavonoides (p=6%) e o outono, maior teor de DPPH• (p=7%). Com base no perfil químico pela técnica de CCDAE, foi possível classificar as 78 amostras em sete variantes distintas. Dentre os compostos presentes e derivados dos ácidos cinâmico e benzóico, analisados pela técnica CG/MS, identificou-se os compostos ácido pimárico, norolean-12 ene, alfa bisabolol e metil comate A. Também foram identificados oito compostos voláteis em grande quantidade como α-pineno (54,77%), β- pineno (14,83%), α-limoneno (3,78%), β- mirceno (9,29%), ?-candineno (2,11%), γ -muroleno (1,86%), β-felandreno (4,79%) e α-selineno (8,40%). Uma correlação estatística foi encontrada entre o teor de fenólicos totais e o método DPPH•, p=0,78, diferentemente do teor de flavonoides que não apresentou correlação com a atividade antioxidante. Os resultados obtidos demonstraram que a própolis orgânica possui atividade antioxidante, embora apresente baixos teores de flavonoides. Não existe correlação entre os flavonoides e atividade antioxidante. Os compostos fenólicos e a atividade antioxidante foram influenciados pela sazonalidade, sendo o outono, a estação que apresentou teores maiores de fenólicos e atividade antioxidante. / Propolis is a resinous substance collected from plant buds, flowers, and exudates by Apis mellifera bees widely known for its biological activities such as antiviral, antimicrobial, anti-inflammatory, antiproliferative and antioxidant activities. Its chemical composition depends on many factors as geographic location, vegetation, and climate. A certified Brazilian propolis, originated from South Brazil, was collected and evaluated in different seasons. This kind of propolis is produced in native forest and in reforestation areas, where contamination derived from agricultural inputs, heavy metals, and factory fumes is found. Hence, the aim of this work was to evaluate the chemical composition and the antioxidant activity during seasonal variation in summer, autumn and spring. Seventy-eight samples were collected from 14 different apiaries. The phenolic compound content and flavonoids were performed by colorimetric methods. The antioxidant activity was evaluated by free radical scavenging methods such as DPPH• and ABTS+. The antioxidant capacity against peroxil radicals was assessed by ORAC method. The chemical profiles of the organic propolis ethanolic extracts were evaluated by reversed-phase thin-layer chromatography (RP-TLC), ultraviolet (UV) scanning, and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Flavonoid content varied from non - detected to 4.76 mg. g-1 and 6.80 to 72.55 mg.g-1 for phenolics. The antioxidant activity varied from 1.01 to 384.60 mg Trolox.g-1 for ABTS+ and 4.50 to 148.10 µmol Trolox.g-1 for DPPH. Considering the seasonal variation, summer presented the highest compound content for flavonoids (p=6%), meanwhile autumn presented the highest compound content for DPPH• (p=7%). Thus, considering the chemical profile presented by RP-TLC, seven different variances of propolis were classified. Compounds such as pimaric acid, norolean-12-ene, alpha bisabolol, and methyl commate A were found by GC-MS technique on these seven variances. Eight volatile compounds were also identified as follow: α-pinene (54,77%), β- pinene (14,83%), α-limonene (3,78%), β-myrcene (9,29%), .-candinene (2,11%), γ - muurolene (1,86%), β-phellandrene (4,79%), and α-selinene (8,40%). In conclusion, the results demonstrated that autumn showed higher antioxidant activity by DPPH• method than those produced in other seasons. A statistical correlation was found between phenolic compound and DPPH•, p=0.78, differing from the flavonoid content which did not demonstrate a correlation with antioxidant activity. The results obtained showed that organic propolis presents antioxidant activity, although its flavonoid content is extremely low. On extent, there was no correlation between flavonoid content and antioxidant activity. Moreover, the seasonal variation showed its influence on phenolic compounds as well as on antioxidant activity, in which autumn presented the highest phenolic content and antioxidant activity.

A própolis é uma mistura complexa de substâncias com aspecto resinoso, elaborada majoritariamente por Apis mellifera. Possui composição química diversificada, que varia de acordo com a flora ao redor da colmeia. Os objetivos deste trabalho são a caracterização química de quatro própolis de diferentes localidades do Brasil (MG, CE, PR e SC) e o isolamento e testes das atividades antioxidante (métodos do DPPH e β-caroteno) e anti-HIV (atividade inibitória da transcriptase reversa) das substâncias presentes nestas amostras. A fração volátil da própolis verde de Viçosa (MG) foi extraída e analisada por CG-EM. Verificou-se a presença de mono- e sesquiterpenos e ácidos fenólicos, sendo este o primeiro relato da presença do ledeno, muuroladieno, β-copaeno, aloaromadendreno e nerolidol na fração volátil da própolis verde brasileira. Um de seus constituintes majoritários, o éster alílico do ácido 3-prenilcinâmico foi isolado e testado quanto às atividades biológicas, apresentando alta ação antioxidante no método do β-caroteno. Nos demais testes o éster não foi ativo. Sugere-se que esta falta de atividade está ligada à ausência de hidroxilas fenólicas livres nesta substância. As amostras do CE, PR e SC foram analisadas por várias técnicas cromatográficas, incluindo CLAE-EM-EM, e colorimétricas. A própolis do CE, com origem botânica desconhecida, possui flavonoides (ex. naringenina e isoramnetina) e ácidos fenólicos (ex. cafeico e ρ-cumárico). Sua composição química é diferente daquela previamente descrita para uma própolis do mesmo estado. Os flavonoides pinocembrina e galangina, típicos da própolis europeia, foram detectados na própolis de SC, sugerindo que a origem botânica desta própolis seja Populus deltóide, descrita anteriormente como fonte de resinas para própolis da região. A própolis do PR não possui esses flavonoides, e é composta por ácidos fenólicos altamente prenilados. Sua composição é diferente daquelas já descritas, sugerindo uma nova fonte de resina para as própolis do sul do Brasil. Estas três própolis foram submetidas ao isolamento biomonitorado de seus constituintes, sendo obtidas 19 substâncias, nove delas com alta ação antioxidante, uma com ação anti-HIV, e três com ação anti-HIV moderada. Sugere-se que a atividade antioxidante destas própolis seja conferida pelos seus componentes majoritários, como o ácido p-cumárico, presente nas três própolis; quercetina, isoraminetina e 7,4\',5\'-trimetilmiricetina-5,3\'-dihidroxi-3-O-cafeoil glucosídeo, na própolis do CE; a mistura dos ácidos diidrocafeoilquinico + dimetoxicinamoil-diidrocafeoilquinico, na própolis do PR; ácido cafeico, pinocembrina e uma substância desconhecida, identificada como 16, na própolis de SC. Substâncias com ação anti-HIV foram isoladas das própolis do CE (naringenina, isoraminetina e quercetina) e PR (ácido 4-acetil-5-carboxi cumárico), demonstrando que estas própolis possuem grande potencial na busca de substâncias ativas / Propolis is a complex mixture of substances with resinous aspect, prepared mostly by Apis mellifera honeybees. It has a diverse chemical composition, according to the flora around the hive. The aims of this work are to chemically characterize four samples of propolis from different regions of Brazil (MG, CE, SC and PR states) and to isolate and test the antioxidant (DPPH and β-carotene methods) and anti-HIV (inhibitory activity of HIV-1 reverse transcriptase) activities of the compounds present on those samples. The volatile fraction sample of green propolis from Viçosa (MG) was extracted and analyzed by GC-MS. We verified the presence of mono-and sesquiterpenes and phenolic acids. Among them ledene, muuroladiene, β-copaene, aloaromadendrene and nerolidol were detected for the first time in the volatile fraction of Brazilian green propolis. One of its major constituents, the allyl ester of 3-prenylcinnamic acid was isolated and tested for biological activities. It was shown to have high antioxidant activity by the β-carotene method, but showed no activity regarding the other tests. It is suggested that the lack of activity is linked to the absence of free phenolic hydroxyl on the compound. The samples from CE, PR and SC states were analyzed by various chromatographic, including HPLC-MS-MS, and colorimetric techniques. The sample from CE, with unknown resin source, contains flavonoids (eg, naringenin and isorhamnetin) and phenolic acids (e.g. ρ-coumaric acid and caffeic). Its chemical composition is different from a previously described sample from the same state. The flavonoids galangin and pinocembrin, typical from European propolis, were detected in the sample from SC, which suggests that its botanical source is Populus deltoide. The sample from PR does not have these flavonoids; instead it possesses prenylated phenolic acids. Its composition is different from samples previously described, suggesting that the sample corresponds to a new type of propolis from southern Brazil. The three propolis samples were subjected to bioguided isolation of their constituents. Nineteen substances were obtained, nine of them with high antioxidant activity, one with anti-HIV action, and three with moderate anti-HIV activity. It is suggested that the antioxidant activity of these propolis is conferred by their major constituents, such as p-coumaric acid, present in all three samples, quercetin, isorhaminetin and 7,4\',5\'-trimethylmyricetin-5,3\'-dihydroxy-3-O-caffeoyl glucoside in propolis from CE; a mixture of dihydrocaffeoylquinic and dimethoxycinnamoyl-dihydrocaffeoylquinic acids in propolis from PR; and caffeic acid, pinocembrin and a unknown compound named 16, in propolis from SC. Compounds with anti-HIV activity were isolated from propolis from CE (naringenin, quercetin and isorhaminetin) and PR (4-acetyl-5-carboxy-coumaric acid), indicating that these types of propolis have high potential in the search for active compounds

[ES] La citricultura española produce unos 7 millones de toneladas de cítricos al año siendo nuestro país uno de los principales productores a nivel mundial, pero sobre todo es reconocido por ser el principal exportador de cítricos de mesa. De hecho, más del 52% del volumen anual producido se exporta para consumo en fresco. El actual marco normativo establece estrictas normas de comercialización al sector por el cual cada año, se generan entre un 10 y 20% de destríos que no pueden comercializarse para consumo en fresco por presencia de defectos como son calibres inapropiados o defectos de color en la piel. En las últimas décadas, ha surgido una industria de transformación, principalmente de zumos, que procesa estos volúmenes de destríos y que, a su vez, debe de dar salida al momento por el carácter perecedero de la fruta. No obstante, de todo el volumen de cítricos que se recepciona en la industria de transformación, más del 50% es biomasa formada por cortezas y membranas que se destinan al sector de piensos sin obtener apenas valor económico. Este volumen de biomasa es rico en compuestos de gran interés tanto para la industria alimentaria por su riqueza en nutrientes como la fibra dietética, así como para el sector farmacéutico por su riqueza en flavonoides. En base a esto, el objetivo general de esta Tesis Doctoral fue investigar la posible valorización de las corrientes de biomasa generadas en los procesos de fabricación de zumos cítricos. Para ello, el primer paso fue la caracterización de los flavonoides cítricos de mayor interés en las distintas corrientes de biomasa que resultan de la industria de fabricación de zumos, y que son, el propio zumo, las cortezas y las membranas del endocarpio. Los flavonoides seleccionados fueron la hesperidina, narirutina, diosmina, nobiletina, tangeretina y sinensetina y se cuantificaron en 6 variedades de naranja y otras 6 de mandarina. De esta caracterización se concluyó que la flavanona hesperidina era la más abundante, representando más del 60% de los flavonoides cuantificados en todas las variedades cítricas estudiadas. Además, más del 70% de esta flavanona se concentra en la corteza del fruto. Asimismo, otro resultado obtenido fue que las flavonas polimetoxiladas sinensetina, nobiletina y tangeretina presentaron una concentración mucho más alta en las variedades de mandarina híbridas Nadorcott, Ortanique y Orri que en el resto de las variedades de naranja y mandarina estudiadas. A continuación, se procedió a ensayar dos procedimientos de recuperación de hesperidina a partir de la corriente de cortezas generadas tras el exprimido industrial de zumos. Ambos se basaban en una extracción sólido-líquido, el primero utilizaba una relación corteza agua 1:2 y el segundo 1:0,25. De los resultados obtenidos se concluyó que, si bien el primer procedimiento se recuperaba mayor cantidad de extracto y de mayor pureza, al calcular el rendimiento del proceso como masa de hesperidina pura recuperada por unidad de masa de corteza, se comprobó que no había diferencias significativas. Asimismo, el estudio de viabilidad económica de ambos procedimientos confirmó que los costes asociados al mayor consumo de agua del primer procedimiento así como los derivados de la depuración de los vertidos generados lo hacían inviable. Finalmente, se realizó un ensayo de aplicación de fibra procedente de la corteza de cítricos a un zumo de naranja hasta aumentar su contenido en fibra dietética de 0,2% a 1,4%. Se realizó un ensayo clínico con voluntarios para comprobar la respuesta metabólica del zumo enriquecido con fibra frente al placebo, a través de un estudio del metabolismo hidrocarbonado y de tests de saciedad. De este ensayo se comprobó una mejor respuesta en las curvas de glucosa e insulina de los voluntarios al inicio en la fase de absorción del zumo enriquecido con la fibra. Asimismo, las pruebas demostraron un efecto significativo en la contribució / [CA] La citricultura espanyola produeix uns 7 milions de tones de cítrics a l'any, situant al nostre país entre els 5 o 6 principals productors del món, però sobre tot és reconeguda per ser el principal exportador de cítrics mundial. De fet més del 52 % del volum produït anualment és exportant en fresc. L'actual marc normatiu estableix unes estrictes normes de comercialització al sector pel qual cada any es generen entre un 10% i 20% de rebuig que no pot ser comercialitzat en fresc a causa de la presència de defectes com poden ser calibres inadequats o defectes de coloració a la pell. A les últimes dècades, ha sorgit una industria de transformació que processa estos volums de fruita de rebuig i que al mateix temps, se'ls ha de donar eixida immediata. No obstant, de tot el volum de cítrics que es rep a la industria, més del 50% és biomassa formada per les corfes i membranes que generalment s'acaben destinant al sector de pinsos obtenint-ne escàs valor econòmic. Este volum de biomassa és ric en compostos de interès tant per a la industria alimentaria per la seua riquesa en nutrients com la fibra dietètica, així como pel sector farmacèutic per la alta riquesa en flavonoides. En base a això l'objectiu general d'esta tesi doctoral va consistir en la valorització dels distints corrents de biomassa generats als processos de fabricació de sucs cítrics. Per a abordar este objectiu, el primer pas va ser la caracterització dels flavonoides cítrics de interès als distints corrents de biomassa que resulten de la industria de transformació, i que són el propi suc, les corfes i les membranes de l'endocarp. Els flavonoides seleccionats van ser la hesperidina, narirutina, diosmina, nobiletina, tangeretina y sinensetina i es quantificaren en 6 varietats de taronja i 6 de mandarina. D'esta caracterització es va arribar a la conclusió que la hesperidina era la més abundant, representant més del 60% dels flavonoides quantificats a les varietats cítriques estudiades. A més, més d'un 70% d'esta flavanona es concentra a la corfa del fruit. Així mateix, un altre resultat destacable dels treballs de caracterització va ser el fet de que les flavones polimetoxiladas sinensetina, nobiletina i tangeretina presentaren una concentració molt més alta a les varietats de mandarines híbrides Nadorcott, Ortanique i Orri que a la resta de varietats de taronja i mandarina estudiades. A continuació es va procedir a assajar dos procediments de recuperació d'hesperidina a partir del corrent de corfes generades amb l'operació d'exprimit de suc industrial. Tots dos es basaven en una extracció del tipus sòlid-líquid, al primer del quals es requeria una relació corfa:aigua del 1:2, mentre que el segon de 1:0,25- Dels assajos realitzats es va concloure que si be el primer procediment donava com a resultat una major quantitat d'extracte recuperat i de major puresa, no obstant això, al calcular el rendiment del procés com a masa d'Hesperidina pura obtinguda per unitat de masa de corfa, es va comprovar que no hi havia diferències significatives. A més a més, l'estudi de viabilitat econòmica d'ambdós procediments va confirmar que els costos associats al major consum d'aigua així com els derivats de la depuració dels abocaments el feien inviable. Finalment, es va realitzar un assaig d'aplicació de fibra procedent de la corfa de cítrics a un suc de taronja fins a augmentar el seu contingut en fibra dietètica des de 0,2% fins a 1,4%. Es va realitzar un assaig clínic amb voluntaris per a comprovar la resposta metabòlica del suc enriquit amb la fibra front al placebo, a través d'un estudi del metabolisme hidrocarbonat i de tests de sensació de sacietat. A este assaig es va comprovar una millor resposta a les corbes de glucosa i insulina dels voluntaris a l'inici de la fase d'absorció del suc enriquit amb fibra. Així mateix, les probes demostraren un efecte significatiu a la contribució de la sensació de sacietat / [EN] The Spanish citrus sector produces about 7 million tons of citrus per year. This figure places our country among the main producers worldwide, but the most important fact is that Spain is recognized as the main exporter of citrus for fresh consumption. In fact, more than 52% of the annual volume produced is exported to third countries. The current legal framework establishes strict marketing standards for the fresh fruit sector. Because of this, between 10 and 20% of the total citrus fruits produced do not meet those market standards and are rejected. This kind of fruits cannot be marketed for fresh consumption due to the presence of defects, such as inappropriate sizes or colour defects on the skin. In recent decades, a transformation industry has emerged, that processes these volumes of rejects. However, more than 50% of the entire volume of fruits that are received in the processing sites, is represented by the biomass formed by endocarp membranes and fruit peels that generally ends up being destined for the animal feed at a very residual economical value. This volume of biomass is rich in chemical compounds of great interest both for the food industry, due to its richness in certain nutrients such as dietary fiber, as well as for the pharmaceutical sector, due to its high richness in flavonoids. Based on this, the general objective of this Doctoral Thesis was to investigate the recovery options of certain substances of the different biomass streams generated during the citrus transformation at the fruit juice industry. To accomplish this objective, the first step was the characterization of the citrus flavonoids of greatest interest, in the different biomass streams that result from the manufacture of juices, and that are, the juice itself, the membranes of the endocarp and the peels. The selected flavonoids were hesperidin, narirutin, diosmin, nobiletin, tangeretin and sinensetin and were quantified in 6 varieties of orange and another 6 of mandarin. From this characterization, it was concluded that hesperidin flavanone was by far, the most abundant representing more than 70% of the total flavone content and, in addition it is concentrated in the rind of the fruit. Likewise, another remarkable result of the characterization work was the fact that the polymethoxylated flavones sinensetin, nobiletina and tangeretin presented a much higher concentration the hybrid mandarin varieties Nadorcott, Ortanique and Orri. Then, two hesperidin recovery processes were tested from the rind stream generated after industrial juicing. Both procedures were based on a solid-liquid extraction, the first one using a 1: 2 peel-to-water ratio and the second 1: 0.25. From the results obtained it was concluded that, although the first procedure lead to a greater quantity of recovered extract with higher purity, when calculating the yield of the process as mass of pure hesperidin recovered per unit mass of processed peel, it was found that there were no significant differences. Likewise, the economic feasibility study of both procedures confirmed that the costs associated with the higher consumption of water in the first procedure as well as those derived from the treatment of the wastewater generated, made it unviable. Finally, an application trial of fiber from citrus peel to an orange juice was carried out until its dietary fiber content increased by 0.2 % to 1.4%. A clinical trial was carried out with volunteers to verify the metabolic response of the fiber-enriched juice compared to placebo, through a study of carbohydrate metabolism and tests fulness feeling. From this test, a better response was found in the glucose and insulin curves of the volunteers at the beginning of the absorption phase of the fiber-enriched juice. Likewise, the tests showed a significant effect on the contribution to the feeling of satiety and fullness after the intake of the fiber-enriched juice. / Marqués Cardete, R. (2020). Valorización de la biomasa resultante del exprimido de la fruta en la industria de zumos cítricos. Recuperación del flavonoide hesperidina y aplicación de la fibra para alimentación humana [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/159934

Croton (Euphorbiaceae), é um gênero promissor para pesquisa de compostos bioativos, tanto pela variedade de compostos químicos encontrados, quanto pela diversidade de uso na medicina tradicional/popular. Estudos farmacológicos comprovaram atividades antimicrobianas, antivirais, anti-inflamatórias, antioxidantes e citotóxicas. Neste trabalho, foram obtidos extratos fracionados em Soxhlet (hexano, diclorometano, acetato de etila e metanol) de folhas e caules de C. pallidulus Baill var. pallidulus (Baill.) L.B. Smith & S.F. Smith. Esses extratos foram avaliados quanto às atividades 1) antibacteriana pelo método de microdiluição em caldo, utilizando Staphylococcus aureus - cepas sensível e resistente à vancomicina, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli e Salmonella choleraesuis; 2) antioxidante (sequestro do radical livre DPPH); e quanto à toxicidade frente à Artemia salina. A fração mais ativa neste último ensaio foi selecionada para a avaliação da atividade citotóxica utilizando as células de sarcoma uterino humano. Os fenóis totais, e flavonóis e flavonas totais foram quantificados por métodos colorimétricos. O fracionamento dos extratos hexânico e diclorometânico foi feito por cromatografia em coluna de sílica, enquanto o dos extratos de acetato de etila e metanol, em coluna de PVPP. O isolamento das substâncias das frações ativas nos ensaios de atividade antibacteriana (S. aureus - sensível) e de toxicidade frente à A. salina foi realizado por CLAE semipreparativo. O teor de fenóis totais de C. pallidulus var. pallidulus foi de 1,95 g EAG/100g MS e de flavonóis e flavonas totais foi de 0,56 g EQ/100g MS. Todos os extratos apresentaram atividade contra S. aureus (sensível e resistente), com CBM de 2048 mg/L, exceto o extrato metanólico que apresentou atividade apenas contra S. aureus (sensível). Nenhum extrato apresentou atividade contra as demais cepas. As frações FH-5A - hexano (CBM de 256mg/L) e FA-7 - acetato de etila (CBM de 1024mg/L) foram as que apresentaram maior atividade antibacteriana. A fração FH-5A foi separada em coluna de sílica, e suas subfrações apresentaram atividades antibacterianas menores que a fração que lhe deu origem. Das sete substâncias majoritárias isoladas da fração FA-7, nenhuma apresentou atividade antibacteriana. Seis delas são flavonoides: três C-glicosídeos de apigenina, um O-glucosídeo de campferol, um O-galactosídeo de isoramnetina e um O-rutinosídeo de isoraminetina. Apenas o extrato diclorometânico apresentou atividade no ensaio de toxicidade frente à A. salina, com CL50 de 385mg/L. A fração com maior toxicidade foi a FD-4A, com CL50 de 101mg/L. As substâncias mais abundantes nesta fração foram isoladas e identificadas como 8,9-secocauranos, derivados da kongensina F. Quanto a atividade citotóxica, a atividade de FD-4A foi três vezes maior que a atividade do extrato diclorometânico. Os extratos de acetato de etila e de metanol apresentaram os maiores valores de atividade antioxidante: 12,11 e 11,77 gEQ/100g, respectivamente. Verificou-se que os flavonoides foram as substâncias fenólicas que mais influenciaram na atividade antioxidante das frações dos extratos de acetato de etila e de metanol. Com esses resultados verifica-se que C. pallidulus var. pallidulus possui ação antibacteriana, citotóxica e antioxidante, sendo uma potencial fonte para novos fármacos para tratamento de doenças infecciosas e câncer. Conseguiu-se também isolar três 8,9-secocauranos, derivados da kongensina F, que aparentemente não haviam ainda sido descritos / Croton (Euphorbiaceae), is a promising genre for investigation of bioactive compounds, both for the variety of compouds, as for the diversity of use in traditional medicine. Pharmacological studies have demonstrated antimicrobial, antiviral, anti-inflammatory, cytotoxic, and antioxidant activities. In this study, fractionated extracts of leaves and stems of C. pallidulus Baill var. pallidulus (Baill.) L.B. S.F. Smith & Smith were obtained throught Soxhlet (hexane, dichloromethane, ethyl acetate and methanol). The following activities of these extracts were tested: 1) antibacterial activity, through microbroth dilution assay using: Staphylococcus aureus - sensitive and vancomycin-resistant strains, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli and Salmonella choleraesuis; 2) antioxidant activity (free radical DPPH scavenging) and Artemia salina toxicity evaluation. The most active fraction in the latter test was selected to evaluate the cytotoxic activity using human uterine sarcoma cells. The total phenols, and total flavonols and flavones were quantified by colorimetric methods. The fractionation of hexane and dichloromethane extracts was done through silica column chromatography, while PVPP column was used for the ethyl acetate and methanol extracts. The isolation of the active fractions major compounds in the antibacterial activity (S. aureus - sensitive) and A. saline toxicity assays were performed by semipreparative HPLC. The total phenolic content of C. pallidulus var. pallidulus was 1.95 g GAE/100g DM and total flavonols and flavones was 0.56 g QE/100g MS. All extracts showed activity against S. aureus (sensitive and resistant), with MBC of 2048 mg/L, except for the methanol extract, which showed activity only against S. aureus (sensitive). Extracts showed no activity against the other strains. Fractions FH-5A-hexane (MBC: 256mg/L) and FA-7-ethyl acetate (MBC: 1024mg/L) showed the highest antibacterial activity. The fraction FH-5A was separated on a silica column, and its subfractions showed smaller antibacterial activity than FH-5A. The seven major compounds isolated from the FA-7 fraction, showed no antibacterial activity. Six of them are flavonoids, three apigenin C-glycosides, one kaempferol O-glucoside, one isorhamnetin O-galactoside and one isorhamnetin O-rutinoside. Only the dichloromethane extract showed activity in the A. salina toxicity assay, LC50: 385mg/L. The fraction with the highest toxicity was the FD-4A, LC50: 101mg/L. The most abundant substances in this fraction were isolated and identified as 8,9 - secokauranes derived from kongensin F. As for the cytotoxic activity, the FD-4A activity was three times higher than the dichloromethane extract activity. The extracts of ethyl acetate and methanol showed the highest antioxidant activity: 12.11 and 11.77 gQE/100g, respectively. It was observed that flavonoids were the phenolic substances that most influenced the antioxidant activity of the fractions of the ethyl acetate and methanol extracts. With these results we suggest that C. pallidulus var. pallidulus has antibacterial activity, cytotoxic and antioxidant properties, being a potential source of new drugs for treatment of infectious diseases and cancer. We also isolated three 8,9-secokauranes derived from kongensin F, which apparently had not been described yet

Flavonoids and other phenolics are groups of natural bioactive compounds widely distributed in edible plants and are well documented to possess biological potential. Hyptis (Lamiaceae) is used in Brazilian folk medicine to treat various diseases. The aim of this study was to evaluate the antioxidant, anti-acetylcholinesterase, cytotoxic, antiviral and antibacterial potential of Hyptis radicans and Hyptis multibracteata by isolating and characterizing major constituents and their biological activities. H. radicans and H. multibracteata were dried, powdered and macerated in 70% ethanol which resulted in a crude ethanol extract (EE) for each species. EE were dissolved in 50% methanol and then was fractionated by partition with hexane and ethyl acetate; were obtained three phases: hexane phase (HP), ethyl acetate phase (EAP) and hydromethanol phase (HMP). EAP from H. radicans was the sample that presented the highest levels of total phenolic content, especially flavonoids, and was the sample with the high antioxidant activity with promising values of EC50: DPPH (32.12 µg mL-1), ABTS (5.04 µg mL-1), Metal chelator assay (42.36 µg mL-1), TBARS (40.46 µg mL-1) and nonsite-Specific Hydroxyl Radical-Mediated 2-Deoxy-D-ribose Degradation (NS-Spe) with EC50 of 75.08 µg mL-1. EE from H. radicans showed high antioxidant activity for FRAP and ORAC with EC50 of 6.01 and 2.68 µg mL-1, respectively and had the highest amount of rosmarinic acid (17.64 mg ?-CE g-1). HMP from H. radicans showed high antioxidant activity in Site-Specific Hydroxyl Radical-Mediated 2-Deoxy-D-ribose Degradation (S-Spe) assay with EC50 of 0.32 µg mL-1 and had the highest content of chlorogenic acid derivatives. Regarding the results of cytotoxicity, HP from H. multibracteata induced the death of more than 80% of RAW 264.7 Cell Lines at 100 µg mL-1. Nepetoidin B, isolated from H. multibracteata had the best EC50 (52.73 µg mL-1) for anti-acetylcholinesterase activity. Antibacterial activity was evaluated in vitro against two Gram-negative bacteria, Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli, and a Gram-positive Bacillus subtilis. Phases from H. multibracteata were more effective on inhibiting B. subtillis with MIC50 of 23.6 ?g mL-1 and 12.13 ?g mL-1 for HP and EAP, respectively. HP was also activity against P. aeruginosa with MIC50 of 37.55 µg mL-1. EE and HMP phase from H. radicans showed moderate anti-HIV-1 activity (MIC50 159 µg mL-1; MIC50 180 µg mL-1). Contents of total phenolic were not the main sample feature to define this activity, but there was correlation between Rosmarinic acid contents and anti-HIV1 activity of H. radicans. Cirsimaritin and litospermic acid A were isolated for the first time, being the first time that they are described for the genus Hyptis. This study provides the first evidence of chemical and biological potential for these two Brazilian native species of Hyptis / Flavonoides e outros compostos fenólicos são grupos de compostos bioativos naturais amplamente distribuídos em plantas e estão bem documentados por possuírem potencial biológico. Hyptis (Lamiaceae) é usado na medicina popular brasileira para tratar várias doenças. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial antioxidante, anti-acetilcolinesterase, citotóxico, antiviral e antibacteriano de Hyptis radicans, e Hyptis multibracteata, isolar e identificar substâncias e correlacionar as atividades biológicas com a quantidade de compostos fenólicos e substâncias isoladas. H. radicans e H. multibracteata foram secas, pulverizadas e maceradas em etanol 70%, resultando em extrato etanólico bruto (EE). EE foi dissolvido em metanol 50% e depois foi fracionado por partição com hexano e acetato de etila, o que resultou em três fases: fase hexânica (HP), fase acetato de etila (EAP) e fase hidrometanólica (HMP). EAP de H. radicans foi a amostra que apresentou os maiores teores de conteúdo fenólico, principalmente flavonoides, e foi a amostra com a maior atividade antioxidante, com valores promissores de EC50: DPPH (32,12 µg mL-1), ABTS (5,04 µg mL- 1), Quelante de metais (42,36 µg mL-1), TBARS (40,46 µg mL-1) e Degradação da 2-deoxy-D-ribose de sitio não especifico mediada pelo radical hidroxil (NS-Spe) com EC50 de 75,08 µg mL-1. EE de H. radicans apresentou a maior atividade antioxidante para FRAP e ORAC com EC50 de 6,01 e 2,68 µg mL-1, respectivamente, e apresentou a maior quantidade de ácido rosmarínico (17,64 mg ?-CE g-1). HMP de H. radicans apresentou a mais alta atividade antioxidante no ensaio de Degradação da 2-deoxy-D-ribose de sitio especifico mediada pelo radical hidroxil (S-Spe) com EC50 de 0,32 µg mL-1 e apresentou o maior teor de derivados de ácido clorogênico. Em relação aos resultados da citotoxicidade, HP de H. multibracteata induziu a morte de mais de 80% das células do tipo RAW 264.7 com uma concentração de 100 µg mL-1. A Nepetoidina B isolada de H. multibracteata apresentou a melhor EC50 (52,73 µg mL-1) para atividade anti-acetilcolinesterase. A atividade antibacteriana foi avaliada in vitro contra duas bactérias Gram-negativas, Pseudomonas aeruginosa e Escherichia coli, e uma bacteria Gram-positiva. Bacillus subtilis,. Fases de H. multibracteata foram mais eficazes na inibição de B. subtillis com MIC50 23,6 ?g mL-1 e 12,13 ?g mL-1 para HP e EAP, respectivamente. HP também apresentou atividade contra P. aeruginosa com MIC50 de 37,55 µg mL-1. EE e HMP de H. radicans mostraram moderada atividade anti-HIV-1 (MIC50 159 µg mL-1; MIC50 180 µg mL-1). Não há correlação entre o conteúdo total de fenólicos e esta atividade biológica, mas sim entre a quantidade de ácido rosmarínico das fases e a atividade anti-HIV1 de H. radicans. Foram isoladas pela primera vez a Cirsimaritina e o ácido litospermico A, sendo esta a primeira vez que se descrevem para o gênero Hyptis. Este estudo fornece a primeira evidência do potencial químico e biológico para estas duas espécies nativas de Hyptis

Submitted by Luis Ricardo Andrade da Silva (lrasilva@uefs.br) on 2017-01-11T21:46:05Z No. of bitstreams: 1 Boneco 97-2003-corre??es.pdf: 20164603 bytes, checksum: 78fbb46841fee330fc6bc340e1af3756 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-11T21:46:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Boneco 97-2003-corre??es.pdf: 20164603 bytes, checksum: 78fbb46841fee330fc6bc340e1af3756 (MD5) Previous issue date: 2016-08-26 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado da Bahia - FAPEB / Polygalaceae family species are traditionally used in many regions of the world and because of this, research is being conducted to evaluate the biological activities, as well as phytochemicals aspects of these plants. In this way, the present study was to carry out the proposed chemical characterization and evaluation of biological activity in vitro of the extract and prediction of new biological activities in silico of the substances identified in Asemeia ovata (Polyagalaceae). The chemical characterization was made through previous phytochemical screening tests and fingerprint by HPLC-DAD. The isolation and identification of compounds was performed by classical chromatography techniques, HPLC-DAD and 1H and 13C NMR. The evaluation of the antioxidant activity in vitro was taken by Scavenging of DPPH free radical method, acetylcholinesterase activity by adapting the method of Ellman and Artemia salina lethality. The prediction of activity was made by tools for in silico target fishing, followed by docking the DOCK 6.7 program and evaluation of interaction profiles by Protein-Ligand Interaction server profiler. The chemical characterization showed that the extracts are rich in flavonoids and phenolic acids. It was possible to identify and quantify using HPLC-DAD substances: rutin, luteolin-7-O-glucoside, caffeic acid, p-coumaric acid and trans-ferulic acid. Moreover, it was possible to isolate the rutin substance, poligalen and a possible new alkaloid. The ethyl acetate extract was superior in the evaluation of in vitro activity with EC50 = 5.46 mg/mL for antioxidant activity, and LC50 = 71.91 mg/mL A. salina lethality. Acetylcholinesterase activity did not yield significant results (AChEIs% <20%). Tools for in silico target fishing allowed, through the ChemProt 2.0 and DRAR- CPI-servers, to select the molecular targets carbonic anhydrase 12 and epidermal growth factor receptor for routine; for luteolin-7-O-glucoside targets cotransporter 2 sodium / glucose and CDC42-activated protein kinase 1; poligalen to the target protein tyrosine kinase JAK2; and for caffeic acid, p-coumaric acid and trans-ferulic the best targets were epidermal growth factor receptor and Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1, carbonic anhydrase 12 and Ornithine carbamoyltransferase, mitochondrial. This work provides new results for the species, both from a chemical and biological point of view, there is good prospects of study with interesting potential to be discovered. / Esp?cies da fam?lia Polygalaceae s?o utilizadas tradicionalmente em muitas regi?es do mundo e, devido a isso, pesquisas est?o sendo realizadas para avaliar as atividades biol?gicas, como tamb?m os aspectos fitoqu?micos desses vegetais. Desta forma, o presente trabalho teve como proposta realizar a caracteriza??o qu?mica e avalia??o de atividades biol?gicas in vitro de extratos da planta inteira e predi??o in silico de novas atividades biol?gicas das subst?ncias identificadas de Asemeia ovata (Polyagalaceae). A caracteriza??o qu?mica foi feita atrav?s de testes de triagem fitoqu?mica pr?via e fingerprint por CLAE-DAD. O isolamento e identifica??o de subst?ncias foi realizado por t?cnicas de cromatografia cl?ssica, CLAE-DAD e RMN de 1H e 13C. A avalia??o da atividade antioxidante in vitro foi feita pelo m?todo de sequestro de radical livre DPPH, atividade anticolinester?sica pela adapta??o do m?todo de Ellman e letalidade frente Artemia salina. A predi??o de atividades in silico foi feita por m?todos de Triagem Virtual Inversa (TVI), seguido de reacoplamento pelo programa DOCK 6.7 e avalia??o dos perfis de intera??o pelo servidor Protein-Ligand Interaction Profiler. A caracteriza??o qu?mica mostrou que os extratos s?o ricos em ?cidos fen?licos e flavonoides. Foi poss?vel identificar e quantificar, atrav?s de CLAE-DAD, as subst?ncias: rutina, luteolina-7-O-glicos?deo, ?cido cafeico, ?cido p-cum?rico e ?cido trans-fer?lico. Al?m disso, foi poss?vel isolar as subst?ncias rutina, poligaleno e um poss?vel novo alcaloide. O extrato acetato de etila mostrou-se superior na avali??o das atividades in vitro, com CE50 = 5,46 mg/mL para atividade antioxidante, e CL50 = 71,91 ?g/mL para letalidade frente a A. salina. Para a atividade anticolinester?sica n?o obteve-se resultados significativos (%IAChE < 20%). A TVI permitiu selecionar, atrav?s dos servidores ChemProt 2.0 e DRAR-CPI, os alvos moleculares Anidrase carb?nica 12 e Receptor de fator de crescimento epid?rmico para a rutina; para a luteolina-7-O-glicos?deo os alvos Cotransportador 2 de s?dio/glicose e Prote?na quinase CDC42 ativada 1; para o poligaleno o alvo Prote?na tirosina quinase JAK2; e para os ?cidos cafeico, p-cum?rico e trans-fer?lico os melhores alvos foram Receptor de fator de crescimento epid?rmico e Ras-relacionada ao substrato C3 da Toxina botul?nica 1, Anidrase carb?nica 12 e Ornitina carbamoiltransferase, mitocondrial. Esse trabalho fornece resultados in?ditos para a esp?cie, tanto do ponto de vista qu?mico, como biol?gico, apresentando boas perspectivas de estudo, com interessante potencial a ser descoberto.