A descoberta de novos alvos terapêuticos capazes de reverter o efeito tumoral imunossupressor sobre as células dendríticas (DCs) é de grande relevância clínica. Identificamos que monócitos de pacientes com leucemia linfóide crônica (LLC) têm alterações na sinalização de STAT6 induzida por IL-4 que previne a maturação fenotípico-funcional das DCs. Embora os monócitos dos pacientes apresentem alta expressão de IL-4R, a atividade de STAT6 está inibida devido aos elevados níveis de SOCS5. IL-10 reproduz esta desregulação de STAT6/SOCS5 nos monócitos de doadores saudáveis, causando diferenciação defeituosa das DCs. Isso indica que SOCS5 está envolvida nas alterações das DCs de pacientes. Ainda, encontramos que a inibição de STAT3 com pirimetamina, um composto em ensaio clínico para LLC, não afeta a maturação das DCs, diferentemente da inibição de STAT5 por JQ1. Isso mostra que STAT5 é importante para a maturação das DCs, e sugere que a JQ1, mas não a pirimetamina, pode causar imunossupressão. Já SOCS5 pode ser um novo potencial alvo para terapia do câncer. / Discovery of new targets to reverse tumor immunosuppression on dendritic cells (DCs) hold great therapeutic promise. Here, we identify that monocytes from chronic lymphocytic leukemia (CLL) patients have alteration in IL-4-induced STAT6 signaling that prevents DCs phenotypic and functional maturation. Although patients monocytes display high IL-4R expression, STAT6 activity is inhibited because of elevated SOCS5 levels. IL-10-treatment of healthy donors monocytes reproduces this altered mechanism (STAT6/SOCS5) and leads to a defective DC differentiation. These findings indicate that a high SOCS5 level is involved on CLL-DCs impaired function. Moreover, we find that pharmacologic inhibition of STAT3 by pyrimethamine, a clinical trial compound for CLL, does not affect LPS-induced DCs maturation while STAT5 inhibition by JQ1 prevents it. Our findings show that STAT5 is important for DCs maturation, and suggest that JQ1, but not pyrimetamine, can cause immunosuppression. Additionally, SOCS5 emerges as a new potential target for cancer treatment.

A esclerose múltipla é uma doença inflamatória crônica desencadeada por células T autorreativas contra antígenos proteicos da mielina. A encefalomielite experimental autoimune é o modelo murino mais utilizado para o estudo da EM. As tubas uterinas e o útero de camundongos fêmeas são órgãos ricos em células mesenquimais que são pouco utilizadas em estudos. Dessa forma, no presente projeto, caracterizamos a obtenção dessa população e avaliamos sua capacidade imunossupressora utilizando o modelo de EAE. Observamos que o tratamento é capaz de modular o perfil de linfócitos T CD4+ durante sua ativação nos linfonodos, induzindo o direcionamento para a subpopulação Tr1 e atenuando as Th1 e Th17. Assim, houve uma diminuição do número de células infiltrantes no SNC associado a uma menor ativação de células da microglia. Em conjunto, demostraramos que as meMSC utilizadas como tratamento são capazes de atrasar o desenvolvimento da EAE e, portanto, evidenciando o caráter imunomodulador das MSCs derivadas do endométrio, chamando a atenção para seu potencial terapêutico. / Multiple sclerosis is a chronic inflammatory disease triggered by autoreactive T cells against myelin protein. Experimental Autoimmune Encephalomyelitis is the most commonly used murine model for the study of MS. The uterine tubes and uterus of female mice are organs rich in mesenchymal cells which are rarely used. Thus, in the present work, we characterized the extraction of this population and evaluated its immunosuppressive capacity using the EAE model. We observed that the meMSC treatment is capable of modulating the CD4 T lymphocyte profile during its activation in the lymph nodes, inducing the expansion of the Tr1 subpopulation and attenuating Th1 and Th17. Consequently, there was a decrease in the number of infiltrating cells in the CNS associated with a reduction of microglial activation. Taken together, our results demonstrated that the meMSCs used as treatment are capable of delaying the development of EAE, therefore, evidencing its immunomodulatory features drawing attention to its therapeutic potential.

Neste trabalho, investigamos os mecanismos da resposta imune estimulados por PAS-1 para o desencadeamento do seu efeito modulatório na inflamação alérgica pulmonar. Para tanto, camundongos C57BL/6 selvagens, IL-12-/-, IFN-<font face=\"Symbol\">g-/- e IL-10-/- foram imunizados e desafiados com OVA ou PAS-1 ou OVA + PAS-1. Ainda, camundongos C57BL/6 imunizados e desafiados com OVA receberam transferência adotiva de células CD19+, B220+, CD3+, CD4+, CD8+, CD4+CD25-, CD4+CD25+ PAS-1-primadas. Nossos resultados demonstraram que o efeito imunomodulatório de PAS-1 é mediado por IFN-<font face=\"Symbol\">g e IL-10, mas não por IL-12, e que somente camundongos que receberam células CD8+ ou CD4+CD25+ não desenvolveram inflamação pulmonar e produziram, respectivamente, IFN-<font face=\"Symbol\">g e IL-10/TGF-ß. Em conjunto, estes resultados demonstraram que o efeito imunomodulatório de PAS-1 é devido à estimulação de células T CD8+ produtoras de IFN-<font face=\"Symbol\">g e por CD4+CD25+ secretoras de IL-10 e TGF-ß. / In this work, we investigate the immune response mechanisms triggered by PAS-1 to promote its immunomodulatory effect in the lung allergic inflammation. For that, wild type, IL-12-/-, IFN-<font face=\"Symbol\">g-/- and IL-10-/- C57BL/6 mice were immunized and challenged with OVA or PAS-1 or OVA + PAS-1. Moreover, wild type C57BL/6 mice were adoptively transferred with PAS-1-primed CD19+, B220+, CD3+, CD4+, CD8+, CD4+CD25-, and CD4+CD25+ lymphocytes. Our results demonstrated that the immunomodulatory effect induced by PAS-1 is mediated by IFN-<font face=\"Symbol\">g and IL-10, but not by IL-12, and only mice which received CD8+ or CD4+CD25+ T cells did not present lung allergic inflammation and produced IFN-<font face=\"Symbol\">g and IL-10/TGF-ß, respectively. Taken together, these results demonstrated that the imunomodulatory effect induced by PAS-1 is due to stimulating CD8+ T cells, which secrete IFN-<font face=\"Symbol\">g, and CD4+CD25+ T cells, which secrete IL-10 and TGF-ß.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-28T13:34:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO - Gabriela Calixto - Versão digital.pdf: 1903341 bytes, checksum: 0172917edb1a1f8a1512d8519caed260 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-28T13:34:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO - Gabriela Calixto - Versão digital.pdf: 1903341 bytes, checksum: 0172917edb1a1f8a1512d8519caed260 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / CNPq / Infecções maternas por Schistosoma mansoni modulam a imunidade de descendentes adultos em infecções pós-natais. Avaliou-se separadamente o efeito da amamentação ou gestação neste fenômeno através do grau de fibrose hepática, produção de citocinas Th1, Th2 e regulatórias, frequência de macrófagos produtores de NO e IL-10 e linfócitos T regulatórios em camundongos adultos, descendentes de mães esquistossomóticas, quando submetidos a infecção pós-natal. Para isto, fêmeas Swiss webster foram submetidas a infecção com S. mansoni (20 cercárias), sincronização do estro e acasalamento. Após nascimento, foi realizada a amamentação adotiva, em que descendentes de mães infectadas mamaram nas mães não infectadas (MI) e filhotes de mães não infectadas foram amamentados pelas mães infectadas (AI). Outro grupo de animais nascidos de mães esquistossomóticas permaneceu amamentando nas próprias mães (MIAI). Para grupo CONTROLE utilizou-se animais nascidos e amamentados em mães não infectadas. Descendentes adultos (machos) foram infectados (80 cercárias) e 60 dias pós-infecção, os animais tiveram os esplenócitos cultivados apenas com meio de cultura ou acrescentado de SWAP (12,5 μg/mL) ou ConA (5 μg/ml). Após 24 h e 72 h os sobrenadantes foram dosados para IL-4; IL-5; IL-10; IFN-γ, TGF-β; NO e as células usadas para imunofenotipagem, com anticorpos monoclonais ligados a fluorocromos para CD4+FoxP3, CD16/CD32+NOS2, CD14+IL-10+. O tecido hepático dos animais foi submetido a histomorfometria. Em relação ao Controle, o grupo MI apresentou frequênciaaumentada de CD16/CD32+NOS2+, maior produção de NO, IL-5 e IL-10, com diminuição de IFN- e, em comparação ao grupo MIAI, maior número e tamanho dos granulomas. O grupo AI, em relação ao Controle, obteve maior frequência de CD16/CD32+NOS2+, maiores níveis de TGF-β, menos IL-5, NO e IFN-. Em relação ao MIAI, tamanho maior de granuloma. O grupo MIAI apresentou menor número e tamanho de granulomas com menor produção de IFN- e NO, maior de IL-10 e TGF-β, além de maior frequência de células CD4+/FoxP3+. Não houve diferença nos níveis de células CD14+/IL-10+. Em conclusão, a gestação seguida da amamentação em mães esquistossomóticas proporcionou uma diminuição da reação granulomatosa e, além da produção da IL-10 (dependente da gestação) e de TGF-β (dependente da amamentação), as células T com fenótipo regulatório são requeridas para este fenômeno. / Maternal infections by Schistosoma mansoni modulate adult offspring immunity in postnatal infections. Here, was evaluated separately the effect of breastfeeding and pregnancy in this phenomenon by the degree of hepatic fibrosis, the production of Th1, Th2 and regulatory cytokines, the expression of macrophages producing NO and IL-10, and regulatory T lymphocytes in adult offspring from schistosomotic mothers when subjected to post-natal infection.Swiss webster females were subjected to infection with S. mansoni (20 cercariae), synchronization of estrus and mating. After birth, adoptive breastfeeding was held in which offspring of infected mothers breastfed in uninfected mothers (BIM) and offspring of uninfected mothers were breastfed by infected mothers (SIM). Another group of animals born in schistosomotic mothers breastfeeding remained in their mothers (BSIM). To control group was used animals born and breastfed in uninfected mothers. Male offsprings were infected when adults (80 cercariae) and 60 days post-infection animals splenocytes were cultured with medium alone or added with SWAP (12.5 μg/ml) and ConA (5 μg/ml). After 24 h and 72 h the supernatants were assayed for IL-4; IL-5; IL-10; INF-γ; TGF-β; NO and the cells used for immunophenotyping with monoclonal antibodies bound to fluorochromes for CD4+FoxP3+, CD16/CD32+NOS2+, CD14+IL-10+. The liver tissue were subjected to histomorphometry. Compared to control, the BIM group showed increased frequency of CD16/CD32+NOS2+, increased production of NO, IL-5 and IL-10, a reduction of IFN- and compared to BSIM group, the greater number and size of granulomas. The SIM group compared control, had a higher frequency of CD16/CD32+NOS2+, higher TGF-β levels, less IL-5, NO and IFN-. Regarding BSIM, greater granuloma size. The BSIM group showed smaller number and size of granulomas with lower production of IFN- and NO, increased IL-10 and TGF-β, as well as higher frequency of CD4+/FoxP3+ cells. There was no difference in the levels of CD14+/IL-10+ cells. In conclusion, gestation followed by breastfeeding in schistosomotic mothers provided a reduction in granulomatous reaction, and besides the production of IL-10 (dependent on gestation) and TGF-β (dependent breast feeding) T cells with regulatory phenotype are required to this phenomenon.

Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-06T17:10:41Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-dissertação-WhevertonRicardoCorreiaNascimento.pdf: 4035736 bytes, checksum: f33cf235cb56b67d16c3e819dbebb2a1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T17:10:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-dissertação-WhevertonRicardoCorreiaNascimento.pdf: 4035736 bytes, checksum: f33cf235cb56b67d16c3e819dbebb2a1 (MD5) Previous issue date: 2012-03-02 / O extrato de vermes adultos de Ascaris suum (Asc) possui atividade imunossupressora em modelos vacinais, de asma alérgica e doenças auto-imunes. Neste estudo, foi verificado o efeito da administração do Asc, profilática ou terapêutica, no modelo de hepatite induzida por Com A (HAI). Para isto, camundongos BALB/c, receberam ConA, i.v., (20mg/kg corpóreo) e três grupos de animais foram formados (n=6). 1)HAI: recebeu apenas ConA; 2)Protocolo profilático HAI+Asc: tratados com Asc (1mg/mL), i.p., 30 minutos antes da indução da HAI; 3)protocolo terapêutico HAI+Asc: tratados com Asc 2 horas após indução da HAI. Como grupo controle animais receberam apenas PBS. Foram dosados transaminases e imunoglobulinas totais séricas, 8, 24 horas e 7 dias após tratamento. Cultivou-se esplenócitos estimulados com Asc e ConA. Níveis de IL-4, IL-10, IL-13 e IFN-γ dos sobrenadantes foram dosados por ELISA. Os fígados foram pesados e analisados histologicamente (hematoxilina-eosina e Tricômico de Masson). No grupo HAI, ocorreu aumento no peso do fígado, dos níveis de transaminases e Imunoglobulinas totais. Estes parâmetros foram reduzidos nas 8, 24 horas e 7º dia no grupo profilático, enquanto no terapêutico apenas no 7º dia.Em ambos os tratamento houve aumento de IL-4, IL-10 e IL-13. No grupo profilático, houve redução do infiltrado celular e aumento da fibrose hepática. A administração profilática do Asc preveniu, e a terapêutica reduziu o dano hepatocelular da lesão. Ambas estimularam a fibrose hepática a longo prazo, pela possível ação da IL-13. Desta forma, o Asc teria eficiência mais acentuada na fase inicial da doença hepática. / The extract of adult Ascaris suum worms (Asc) has immunosuppressive activity in vaccine models, allergic asthma and autoimmune diseases. This study evaluated the prophylactic or therapeutic effect of administration of the Asc in a mouse model of Concanavalin A (Con A)-induced hepatitis. For this, BALB/c mice received ConA, i.v., (20mg/kg) and three groups of animals were formed (n=6). 1) IAH: received only ConA; 2) AIH+Asc prophylactic: treated with Asc (1mg/mL), i.p., 30 minutes before induction of the AIH; 3) AIH+Asc therapeutic: treated with Asc two hours after induction of AIH. The control group of animals received only PBS. Were measured transaminases and total immunoglobulins, in serum, 8, 24 hours and 7 days after treatment. Was cultivated splenocytes stimulated with ConA and Asc. IL-4, IL-10, IL-13 and IFN-γ were assayed in the supernatants by ELISA. The livers were weighed and examined histologically (hematoxylin-eosin and Masson’s trichrome). In the AIH group, there was an increase in liver weight, transaminase levels and total immunoglobulins. These parameters were reduced in 8, 24 hours and 7 days in the prophylactic group, while the therapeutic treatment only on day 7. In both treatments increased IL-4, IL-10 and IL-13. In the prophylactic group, decreased cellular infiltration and increased liver fibrosis. The prophylactic administration of Asc prevented, and treatment reduced the damage of hepatocellular injury. Both stimulated liver fibrosis in long term by IL-13 action. Thus, the efficiency of Asc would more pronounced in the initial stage of liver disease.

Orientador: Valdemiro Carlos Sgarbieri / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-17T02:46:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jacobucci_HelaineBeatriz_D.pdf: 1129830 bytes, checksum: 37cb3d4735acb6b02966f93620559d37 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Com o propósito de melhor harmonizar os vários aspectos pesquisados, a tese está apresentada em quatro capítulos. No primeiro capítulo se fez um apanhado geral dos aspectos químicos, nutricionais e funcionais (tanto tecnológicos como os fisiológicos) das fontes protéicas estudadas no decorrer do trabalho e descritos na literatura. No segundo capítulo estudou-se o poder imunoestimulante de uma caseína comercial (CC), da caseína isolada na forma de micelas íntegras (CM), de um isolado de proteína de soja comercial (IPS), um concentrado de globulinas (BSG) e um concentrado de albumina (BSA), isolados do soro de sangue bovino, um isolado protéico de soro de leite bovino (NZ), importado da Nova Zelândia, um isolado de soro de leite bovino produzido em planta piloto, em Rennes (Ren), França, e um concentrado de proteínas de soro de leite bovino (CSD), produzido em planta piloto (Tecnolat), ITAL, Campinas. A imunoestimulação foi medida no baço pelo processo de contagem de células formadoras de placa (CFP) após imunização de camundongos da linhagem A/Uni, com 5 x 106 hemáceas de carneiro. A formação de placas (reação antígeno-anticorpo) foi medida por contagem de células formadoras de placa com auxílio de um microscópio de fase e de uma lupa. O número de CFP, que representa a intensidade da reação antígeno-anticorpo foi expresso para o órgão todo (CFP/baço x 10-3). Foram estudados neste capítulo o poder imunoestimulante sobre as células de baço das várias proteínas, as influências da concentração da proteína na dieta, a combinação do CSD com as outras preparações protéicas e a influência de diferentes tratamentos (processamentos) sobre a imunoestimulação. Concluiu-se que o concentrado de soro de leite bovino produzido no ITAL, Campinas, foi o que apresentou maior poder imunoestimulante e que a imunoestimulação, para esse preparado, manteve-se na faixa de concentração de 7,5 a 20g de proteína/100g de dieta. Todas as fontes de proteína estudadas quando associadas (misturadas) ao CSD na dieta, influíram negativamente no poder imunoestimulante do CSD, exceto a BSA. Tratamentos térmicos acima de 50°C, exceto a pasteurização (72°C, 15 seg.) e a irradiação acima de 3KG influíram negativamente sobre o poder imunoestimulatório do CSD. A desidratação do concentrado em ¿Spray dryer¿ não afetou significativamente o poder de imunoestimulação do CSD. No terceiro capítulo procurou-se estudar as influências da composição em aminoácidos dos materiais protéicos, CSD, caseína, hidrolisado enzimático da caseína e, conseqüentemente, do estado de estruturação dessas proteínas, no consumo de dieta, ganho de peso corporal, proteínas sanguíneas e estímulo à síntese de glutationa, no fígado. No quarto capítulo realizou-se uma avaliação nutricional e imunológica de quatro dietas de composição básica semelhante, variando-se apenas o componente protéico. As dietas estudadas foram, uma fórmula comercial tomada como referência (FC), uma dieta à base de caseína micelar (CM), outra à base de CSD e finalmente uma mistura 50:50 CSD/CM. Para a avaliação do estímulo imunológico utilizaram-se camundongos da linhagem A/Uni com 6-8 semanas de idade e a técnica de imunoestimulação com injeção de hemáceas de carneiro (5 x 106 células), seguido da determinação do número de células formadoras de placa (CFP), contadas em suspensão de células de baço de animais, cinco dias após imunização. As CFP representam reações antígenoanticorpo, anticorpos que representam a imunoglobulina M (IgM), reação imune primária em resposta ao imunógeno das hemáceas de carneiro. Os resultados da imunoestimulação foram mais baixos para a dieta CM, mais elevados para as dietas CSD e FC e intermediários para CM/CSD (50:50). Estatisticamente não houve diferença entre as dietas CSD e FC nem entre CSD/CM e FC (p > 0,05), porém houve diferença estatística em favor da dieta CSD em relação à CM e CSD/CM (p < 0,05). Em relação ao poder de estímulo à glutationa, a dieta CSD revelou maior concentração hepática (8,02 ??0,59 ?moles/g de tecido). Não houve diferença estatística para glutationa entre FC e CSD/CM (6,55 ??0,96 ?moles/g de tecido) de glutationa hepática. Demonstrou-se uma correlação altamente positiva (CPF = 3,3395 + 9,0913 x GSH, r = 0,94) entre os estímulos à síntese de IgM (baço) e de GSH (fígado). Os parâmetros nutricionais consumo de dieta, ganho de peso, quociente de eficiência alimentar (QEA), digestibilidade aparente da proteína (Dap%), valor biológico aparente (VBap%), balanço de nitrogênio (BN) e quociente de eficiência protéica (PER), foram todos bastante elevados e não diferiram entre os tratamentos (p > 0,05). Tomados no todo, os resultados confirmam que, elevados valores nutricionais podem não representar elevadas propriedades funcionais-fisiológicas, avaliados nesta pesquisa como poder imunomodulador e estímulo à síntese de glutationa / Abstract: With the purpose of better harmonize the various aspects studied in this thesis, it was organized in four chapters. The first chapter consisted of an overview of the chemical nutritional and functional (technologic and physiologic) properties of the protein sources studied in this thesis, utilizing data from recent literature. The main objective of the second chapter was to comparatively demonstrate the immunestimulating power of various protein systems of food origen, including: a commercial casein preparation (CC), a casein isolated in pilot plant in the form of whole micelles (CM), a commercial soy protein isolate (SPI), a bovine serum albumin (BSA) and a bovine serum globulin (BSG) isolated in laboratory from bovine serum, a bovine whey protein isolate (NZ) imported from New Zealand, a bovine whey protein isolate produced in Pilot plant in Rennes (Ren), Rennes France, a bovine whey protein concentrate (WPC) produced in Pilot Plant, ITAL, Campinas. The immunestimulation was measured in spleen cells by counting Plaque Forming Cells (PFC) using A/Uni mice after immunization with sheep red blood cells (SRBC = 5 x 106 cells). The Plaque (antigen-antibody reaction) was quantified in spleen cell suspensions by using a phase microscope and a lup. The number of plaque forming cells (PFC) was considered for the whole spleen and expressed as (PFC/spleen x 10-3). The immunestimulating power on the spleen cells was studied for various protein sources. The influence of dietary protein concentration, the combination of WPC with other protein preparations and the influence of various treatments on the protein was also studied. It was conclude that the whey protein concentrate produced in ITAL (WPC) presented the highest immunestimulating power, that the immunestimulation for this preparation remained constant in the range of concentration 7.5 to 20g protein/100g diet, that all the protein sources studied, when mixed with WPC in the diet, showed a negative influence on the immunestimulating power of WPC alone. Heat treatment (>50°C), except pasteurization (72°C, 15 seg), and gamma-irradiation above 3KG, had a negative influence on the immunestimulation by WPC. The dehydration of the WPC by spray drying did not significantly affect the immunestimulation by WPC. The third chapter aimed at studying the influence of amino acid composition (WPC, CC, and CC-hidrolysates) and, consequently of the structural state of the casein molecules, in the diet consumption, body weight gain, blood protein profile, and on liver glutathione synthesis stimulation. The fourth chapter consists of the nutritional and immunological evaluation of four protein diets (CF, WPC, WPC:CM (50:50) and CM alone) in an otherwise similar composition. For the immunological property, A/Uni mice with 6-8 weeks of age, immunestimulated with sheep red blood cells (SRBC), 5 x 106 cells, following determination of the number of plaque forming cells (PFC) 5 days after immunization was used. PFC number indicates the antigen-antibody reaction between the SRBC-antigen and immunoglobulin M formed by the spleen cells. PFC was lowest for CM protein diet, highest for the WPC and CF diets and intermediate for CM/WPC (50:50) diet. No statistic difference was measured between WPC and CF or between WPC/CM and CF (p > 0.05), however there was statistic difference (p < 0.05) in favour of WPC, compared with CM and WPC/CM (50:50) (p < 0.05). Regarding glutathione stimulation, the WPC diet showed the highest activity (8.02 ± 0.59 µmoles GSH/g tissue). No statistic difference was shown between the CF and WPC/CM diets (6.55 ± 0.96 µmoles/g) for liver glutathione. A very strong positive correlation (CPF = 3.3395 + 9.0913 x GSH, r = 0.94) between spleen CPF counting (spleen IgM) and liver GSH, was demonstrated for the WPC protein diet. The nutritional parameters such as diet consumption body weight gain, diet efficiency ratio (QEA), apparent protein digestibility (Dap%), protein apparent biological value (BVap%), nitrogen balance (NB), and protein efficiency ratio (PER), they were all high but did not show statistic difference among them (p > 0.05). Considering all data this work confirm that protein nutritive value may not represent high functional properties, in this research applied to the immunestimulation and GSH biosynthesis / Doutorado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Doutor em Alimentos e Nutrição

A endometriose é uma doença inflamatória crônica, estrógeno-dependente e de etiologia multifatorial, caracterizada pela implantação e crescimento de tecido endometrial fora da cavidade uterina e associada à dor pélvica e infertilidade. A doença é classificada de acordo com os estádios e sítios de acometimento nos órgãos pélvicos. Variantes genéticas, endócrinas e ambientais podem contribuir para a geração de uma deficiência na resposta imune local permitindo a implantação das células ectópicas na cavidade pélvica. Alterações constatadas no padrão de citocinas presentes no microambiente pélvico poderiam promover um ambiente imunossupressor, justificando a diminuição da resposta imune efetora verificada na endometriose. Dentre os possíveis fatores imunomoduladores, está o antígeno leucocitário humano-G (HLA-G), cuja expressão se dá intensamente nas células trofoblásticas, sendo reconhecido por induzir a tolerância materno-fetal. A proteína HLA-G pode ser expressa na membrana celular ou ser secretada na forma solúvel. HLA-G encontra receptores inibitórios nas células do sistema imune inato e adaptativo e tem sua expressão induzida sob condições não fisiológicas, como em transplantes alogênicos, doenças inflamatórias ou neoplasias malignas. Assim, a hipótese deste estudo é a de que a proteína HLA-G seria produzida em níveis superiores nas mulheres com endometriose, o que poderia contribuir para a imunossupressão no microambiente da doença. Para testar esta hipótese, a proteína solúvel foi mensurada no soro e no fluido peritoneal de mulheres com e sem endometriose, por ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA). Além disto, a expressão gênica de HLA-G foi avaliada nos tecidos de endométrio, por qRT-PCR, bem como a expressão da proteína, avaliada por imunohistoquímica, nos tecidos de endométrio e de lesão de endometriose, em mulheres com e sem a doença. Como resultados, verificaram-se maiores níveis da proteína solúvel no soro de mulheres que apresentavam endometriose em estádios avançados, especialmente naquelas com endometriose ovariana. Entretanto, na comparação entre os fluidos peritoneais, não houve diferença significativa entre os grupos com e sem endometriose. A expressão do transcrito gênico (mRNA) se mostrou maior no endométrio de mulheres sem a doença, mas a presença da proteína foi semelhante entre os endométrios de mulheres com e sem endometriose. Por outro lado, a expressão da proteína HLA-G nos tecidos de lesão de endometriose avançada se mostrou superior à do endométrio de mulheres sem a doença, indicando que a expressão de HLA-G seria induzida ectopicamente, no microambiente pélvico da doença. Portanto, os resultados apontam para um aumento da expressão de HLA-G em endometriose avançada / Endometriosis is a chronic inflammatory, estrogen-dependent disease of multifactorial etiology characterized by implantation and growth of endometrial tissue outside the uterine cavity, and associated with pelvic pain and infertility. Endometriosis is classified according to the stages and sites of the disease. Genetic, endocrine and environmental factors may contribute to the deficit on local immune response, allowing ectopic implantation of endometrial cells into the pelvic cavity. Changes in cytokines pattern in the pelvic microenvironment might promote an immune suppressor environment and explain the decreased immune effector cells response verified in endometriosis. Among possible immunomodulatory factors is the human leucocytary antigen-G (HLA-G) which is intensively expressed in trophoblasts and recognized by inducing maternal-fetal tolerance. HLA-G protein is expressed in both membrane-bound and soluble forms. HLA-G binds inhibitory receptors on innate and adaptive immune cells surface and its expression is induced in non-physiological conditions, such as allogeneic transplants, inflammatory diseases or neoplastic malignancies. Thus, this study hypothesizes that the HLA-G protein would be overexpressed in women with endometriosis, and could contribute to the immunosuppression in the disease microenvironment. To test this hypothesis soluble HLA-G protein was measured in serum and peritoneal fluid of women with and without endometriosis. Moreover, HLA-G gene expression were evaluated on endometrial tissue using RT-qPCR, and HLA-G protein expression were evaluated in matched ectopic and eutopic endometrium of women with and without endometriosis. As results, higher levels of soluble HLA-G were found in serum of women with advanced endometriosis, especially in those with ovarian endometriosis. However, soluble HLA-G levels in peritoneal fluid did not show significant differences between women with and without endometriosis. HLA-G mRNA expression were higher in eutopic endometrium of women without endometriosis, but the HLA-G protein expression were similar in eutopic endometrium of women with and without endometriosis. On the other hand, HLA-G protein expression in ectopic endometrium of women with advanced endometriosis was higher than in eutopic endometrium of women without endometriosis, suggesting that HLA-G expression was induced ectopically, in the pelvic microenvironment of the disease. In conclusion, the results point to an upregulation of HLA-G expression in advanced endometriosis

O resveratrol, um polifenol de origem natural, é descrito como uma substância antiinflamatória, antioxidante, cardioprotetora e anticancerígena. Diversos estudos comprovam a atividade imunomodulatória do resveratrol in vitro e in vivo, estimulando ou diminuindo a secreção de citocinas envolvidas na resposta Th1/Th2. Além do uso em vacinas como adjuvantes, a descoberta de novas substâncias imunomodulatórias pode ser aplicada na profilaxia e tratamento de doenças imunodegenerativas com perda da tolerância sistêmica ou periférica. O objetivo desse estudo é relacionar o efeito modulador do resveratrol em ensaios de endocitose em macrófagos e de secreção de citocinas IL-6(produção de IgA) e IL-10(resposta Th2 e tolerância em mucosas) com a produção de anticorpos anti-ova IgG e IgA após imunização via-oral. Os resultados obtidos demonstraram que in vitro, houve aumento da endocitose em macrófagos e diminuição na secreção de IL-6 pelas células isoladas de placas de peyer em concentrações abaixo de 50 &#181;M de resveratrol. Após a administração oral de resveratrol de 5 mg e 10 mg/kg observou-se o aumento significativo da secreção de IL-10 em esplenócitos isolados de camundongos Balb/C. Nos grupos imunizados com 1 mg de ovalbumina/animal e resveratrol (5 mg e 10 mg/kg) via oral 2 vezes, com 14 dias de intervalos, houve aumento significativo da produção de IgG sérico em relação ao grupo imunizado somente com ovalbumina. Porém a produção de IgA sérico e em lavado intestinal diminuiu, indicando um possível aumento da tolerância oral. Esses resultados demonstram o efeito imunomodulador do resveratrol in vitro/in vivo e a necessidade de maiores estudos sobre o uso desta substãncia como adjuvante de vacinas ou uma droga imunossupressora de mucosa. / Resveratrol, a polyphenol of natural origin, is described as a substance-inflammatory, antioxidant, cardioprotective and anticancer. Several studies have demonstrated the immunomodulatory activity of resveratrol in vitro and in vivo, stimulating or decreasing the secretion of cytokines involved in Th1/Th2 response. Besides the use as adjuvants in vaccines, the discovery of new immunomodulatory substances can be applied for prophylaxis and treatment of diseases imunodegenerativas with loss of peripheral tolerance or systemic. The aim of this study is to relate the modulating effect of resveratrol on tests of endocytosis in macrophages and secretion of IL-6 (IgA production) and IL-10 (Th2 response and mucosal tolerance) with the production of anti-ova IgG and IgA after oral immunization route. The results of in vitro tests showed an increase of endocytosis in macrophages and decrease in IL-6 secretion by cells isolated from Peyer\'s patches at concentrations below 50 mM of resveratrol. After oral administration of resveratrol 10 mg / kg was observed to significantly increase the secretion of IL-10 in splenocytes isolated from Balb / C. In groups immunized with 1 mg ovalbumin / animal and resveratrol (5 mg and 10 mg / kg) orally two times with 14 days intervals, significant increase of IgG level in relation to the group immunized with ovalbumin only. But the production of IgA in serum and intestinal lavage decreased, indicating a possible increase in oral tolerance. These results demonstrate the immunomodulatory effect of resveratrol in vitro / in vivo and the need for more studies on substance use as a vaccine adjuvant or immunosuppressive drugs mucosa.

Orientador: Leonilda Maria Barbosa dos Santos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T01:42:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Longhini_AnaLedaFigueiredo_D.pdf: 9031331 bytes, checksum: 8341cfb783e3d43620c305cd18937b1e (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: No presente estudo demonstramos a ativação de mecanismos imunosupressores em células dendríticas plasmocitóides (pDCs) e linfócitos B pela ação do agonista de TLR-9, ODN-CpG no modelo de estudo da esclerose múltipla (EM) e na encefalomielite experimental autoimune (EAE). A EAE é o modelo experimental da esclerose múltipla. Nossos resultados demonstram que a administração in vivo de ODN-CpG reduz significativamente a gravidade de EAE. A redução da doença foi acompanhada pela diminuição da resposta proliferativa dos linfócitos encefalitogênicos e consequentemente a infiltração dessas células no sistema nervoso central. A diminuição da resposta proliferativa parece ser devido ao efeito imunoregulador das pDCs, uma vez que a depleção dessas células faz com que a resposta proliferativa retorne aos níveis normais. O tratamento com ODN-CpG induziu a expressão da enzima indoleamine 2,3 dioxigenase pelas pDCs. Essa enzima está relacionada à geração de células T reguladoras. De fato nossos resultados mostraram um aumento da porcentagem de células T CD4+CD25+ e da expressão das citocinas anti-inflamatórias IL-10 e TGF-b no grupo tratado. Adicionalmente, a transferência de pDCs ativadas isoladas é capaz de reduzir a gravidade da doença. Além das pDCs, os linfócitos B também expressam TLR-9 e podem ser ativados pelo tratamento com CpG, de fato, embora o número de células não difira do controle não tratado, a transferência de linfócitos B de animais tratados com CpG é capaz de diminuir a gravidade da doença. O efeito supressor dos linfócitos B pode ser atribuído à expressão de IL-10 nos animais tratados. Em paralelo, nós demonstramos um aumento na porcentagem de pDCs em líquido cefalorraquidiano de pacientes com EM durante a fase de surto da doença quando comparados com pacientes em remissão ou com outras doenças neurológicas não inflamatórias. Nossos resultados indicam que elas podem estar envolvidas tanto com a piora da doença, o que poderia ser explicado por uma infecção viral, ou pelo contrário, estando em maior número poderia com sua ação imunomoduladora preparar o organismo para a fase de remissão da doença. Entretanto, pacientes com EM apresentam deficiência na indução de células T naive a produzirem IL-10, mas não IFN-g, o que poderia ser explicado em parte pela deficiência da expressão de IDO obervada após ativação in vitro com CpG, quando comparadas com pDCs de indivíduos saudáveis. A deficiência da expressão de IDO pode comprometer o efeito imunomodulador das pDCs na esclerose múltipla / Abstract: In the present study we verified the activation of immunomodulatory mechanisms of plasmacytoid dendritic cells (pDCs) and B lymphocytes by the action of TLR9 agonist, CpG-ODN during multiple sclerosis and experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). EAE is the experimental model of human MS. Our results provide evidence that in vivo administration of CpG-ODN significantly reduces the severity of EAE. The reduction in disease was followed by decreasing in the proliferative response of encephalitogenic lymphocytes and consequently infiltration of these cells in the central nervous system. The decrease in the proliferative response seem to be due to the immunomodulatory effect of pDCs, since depletion of these cells restored the proliferative response, returns to normal levels. Treatment with ODN-CpG induced expression of indoleamine 2,3 dioxygenase enzyme by pDCs. This enzyme is related to the enhancement of regulatory T. Indeed, our results have shown an increased of percentage of CD25+CD4+Foxp3+ cells and expression of anti-inflammatory cytokines IL-10 and TGF-b in the treated group. Moreover, the adoptive transfer of activated pDCs alone reduced the clinical course of EAE. In addition to the pDCs, B lymphocytes also express TLR9 and can be activated by treatment with CpG, in fact, although the number of cells does not differ from untreated controls, the transfer of B lymphocytes from animals treated with CpG was able to reduce the severity of the disease as well. The immunomodulatory effect of B lymphocytes may be due to expression of IL-10 in treated animals. In parallel, we were able to report an increase of pDCs percentage in cerebrospinal fluid of MS patients during relapse compared with patients in remission or other non-inflammatory neurologic diseases. This data indicate that it may be involved with the worsening of the disease, which could be explained by viral infection, or be involved in the initial immunomodulatory mechanisms responsible for the remission. However, MS patients presented deficiency to induce naive T cells to produce IL-10, but not IFN-g, which could partly be explained by the deficiency of IDO expression observed after CpG in vitro activation, when compared with pDCs from healthy individuals. The deficiency of IDO expression may compromise the immunomodulatory effect of pDCs in MS disease / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_talita_roos.pdf: 1034703 bytes, checksum: 735f21674158cdd6ec6435bbd7c8bd5f (MD5) Previous issue date: 2009-11-09 / The immunization of livestock as a means to control infectious diseases began more than a century ago. It has however aroused new interest in view of new demands by consumer markets, restricting the use of antibiotics and other chemotherapeutical drugs. In addition, more effective vaccines, with fewer side effects, have been developed through the use of adjuvants and purified antigens. Probiotics modulate the immune response, enhancing the effect of vaccines, which opens up a new perspective on their possible uses. Bacillus cereus var. Toyoi and Saccharomyces boulardii are resistant to environmental conditions, which facilitate their use in the production, conservation and management of animal feed. The objective of the present study was to evaluate the immunomodulatory effects of Bacillus cereus var. Toyoi and Saccharomyces boulardii on the immune response of animals both during and after the interruption of its administration. Two experiments were conducted, one with mice and the other with sheep. In each experiment, the animals were divided into three groups, one supplemented with B. cereus var. Toyoi, another with S. boulardii and the third was the control group, i.e., without supplementation. As experimental model we used an inactivated vaccine against BoHV-5. Seroconversion and neutralization were used to evaluate the humoral immune response and cytokine expression in splenocytes and peripheral leukocytes, so as to evaluate the cellular response. All of the groups showed increased levels of antibodies due to vaccination. The calves fed probiotics had higher antibody levels than the control group both during supplementation and after its suspension. In the supplemented animals a change was observed in the profile of the immune response in Th1 as compared to Th2. This effect was observed through the data represented by the cytokine profile, as well as through the IgG isotype. Each probiotic had a distinct profile of cytokines, suggesting that the B. cereus var. Toyoi and S. boulardii mediated immunomodulation have distinct mechanisms of action. These data suggest that the use of B. cereus var. Toyoi and S. boulardii probiotics are effective modulators of vaccine response, and are a viable alternative for increasing the efficiency of commercial vaccines. / A imunização dos animais domésticos para controlar as doenças infecciosas, iniciada há mais de um século, tem despertado novo interesse em vista das restrições impostas pelos mercados consumidores ao uso de antibióticos e outros quimioterápicos. Vacinas mais eficientes e com menores efeitos colaterais foram desenvolvidas mediante a utilização de adjuvantes e antígenos purificados. Probióticos modulam a resposta imune, potencializando o efeito das vacinas, o que abre uma nova perspectiva de sua utilização. Bacillus cereus var. Toyoi e Saccharomyces boulardii resistem às condições ambientais, o que facilita seu uso na elaboração, conservação e administração de rações para animais. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos imunomoduladores de Bacillus cereus var. Toyoi e Saccharomyces boulardii na resposta imune em animais durante e após parar sua administração. Foram realizados dois experimentos, um com camundongos e outro em ovinos. Em cada experimento os animais foram divididos em três grupos, sendo um suplementado com B. cereus var. Toyoi, outro com S. boulardii e o terceiro sem suplementação grupo controle. Como modelo experimental foi utilizado uma vacina inativada contra BoHV-5. Foram utilizados, soroconversão e soroneutralização, para avaliação da resposta imune humoral e expressão de citocinas, de esplenócitos ou leucócitos periféricos, para avaliação da resposta celular. Todos os grupos mostraram aumento dos níveis de anticorpos em razão da vacinação. Os animais suplementados apresentaram níveis de anticorpos superiores, quando comparados ao grupo controle, durante a suplementação assim como após sua suspensão. Nos animais suplementados foi observada uma alteração no perfil da resposta imune de Th2 para Th1 este efeito observado através dos dados representados pelo perfil de citocinas, bem como pelo isotípo de IgG. Cada probiotico apresentou um perfil distinto de citocinas, sugerindo que a imunomodulção mediada por B. cereus var. Toyoi e S. boulardii possuem mecanismos distintos. Estes dados sugerem que a utilização de probioticos a base de B. cereus var. Toyoi e S. boulardii são eficientes moduladores da resposta vacinal, sendo uma alternativa viável a incrementar a eficiência de vacinas comercias.