Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-06-21T19:19:10Z No. of bitstreams: 1 AnaDias.pdf: 3102283 bytes, checksum: 6eb4c0bb2a542e274e68001ba7b1b766 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-21T19:19:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnaDias.pdf: 3102283 bytes, checksum: 6eb4c0bb2a542e274e68001ba7b1b766 (MD5) Previous issue date: 2016-06-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPQ) / Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão (FAPEMA) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Apoio à Pequisa (FUNAPE) / Leishmaniasis is a neglected and endemic disease in Brazil, especially in the Northeast, caused by over 20 species of the Leishmania protozoan. Diagnosis includes epidemiological, clinical, and laboratory aspects. Despite the existence of various diagnostic techniques that can be used, none has 100% sensitivity and specificity. Hence, this study aimed to validate three recombinant mimetic peptides (LC1, LC2, and LT) obtained by Phage display, for the development of a specific, sensitive, rapid low-cost immunological diagnosis. Sera for detection of IgG from 223 individuals were used (123 with visceral leishmaniasis (VL), 45 with cutaneous leishmaniasis (CL) and 55 with LV-HIV coinfection). For cross-reaction tests, we used samples of patients with Chagas' disease (n = 60) and Malaria (n=65), and control group (n= 75 sera from newborns). The peptides were also tested in saliva from patients with LV (n = 65), with LT (n = 40), and healthy individuals from an endemic area were used as control (n =35). Diagnostic tests using the mimetic LC1 and LC2 peptides were carried out in serum of 15 asymptomatic subjects; 13 healed individuals and 15 healthy subjects. To test the ability of the mimetic peptides to improve the immune response against Leishmania, murine macrophages C57BL/6 were treated in vitro with peptides LC1, LC2, and LT (0,6μM; 1,25μM; 2,5μM; 5μM, 10μM) and infected with L. infantum chagasi and L. amazonensis for invasion and multiplication assays. We also evaluated the potential protective action of mimetic peptide in mice infected with L. amazonensis. Therefore, animals were immunized and the parasite load, expression of cytokines, lesion size, and protein analysis binders were evaluated. The immunoassays showed that both serum and saliva of the patients exhibited a highly significant difference (p < 0.0001) compared to their controls, with 100% sensitivity and 100%specificity. Peptides were able to detect infection in asymptomatic subjects and showed no cross-reactivity to either Chagas’ disease or malaria, as well as co-infection LV-HIV did not interfere with responsiveness to LV antibodies, therefore being a promising tool for monitoring regions where these diseases occur. Tests using macrophages showed a highly significant reduction in the number of infected cells and of internalized parasites. A further reduction of parasites with increasing concentration of peptide was observed. Furthermore, it was observed that immunization of mice was able to induce high levels of IFN-γ, IL-12, GM-CSF and IL-10, while IL-4 did not change compared to the control. Additionally, immunized animals showed a reduction in parasitic load in all organs (spleen, lymph node, liver, and bone marrow), a decrease in paw lesion in which parasites were inoculated and phosphorylation of ERK1/2, JNK and p65/RelA. Western Blot assay identified two proteins to L. amazonensis (42 KDa) and two to Leishmania infantum chagasi (26 KDa). Thus, our results demonstrate that mimetic peptides act as antigens of L. infantum chagasi and L. amazonensis, being good immune markers for a simple and fast diagnosis with high sensitivity and specificity. Finally, data in murine macrophages in vitro and in vivo open perspectives for their use as a vaccine tool. / Leishmaniose é uma doença negligenciada e endêmica no Brasil, especialmente na região Nordeste, sendo causada por cerca de 20 espécies do protozoário Leishmania. O diagnóstico abrange aspectos epidemiológicos, clínicos e laboratoriais. Apesar de existir várias técnicas diagnósticas que podem ser utilizadas, nenhum dos testes disponíveis apresenta 100% de sensibilidade e especificidade. Baseado nisto, este trabalho se propôs a validar três peptídeos recombinantes miméticos (LC1, LC2 e LT) obtidos por Phage display, para o desenvolvimento de um diagnóstico imunológico rápido, específico, sensível e de baixo custo. Foram utilizados soros para detecção de IgG em 223 indivíduos, sendo 123 com leishmaniose visceral (LV), 45 com leishmaniose tegumentar (LT) e 55 com coinfecção LV-HIV. Para testes de reação cruzada, foram utilizadas amostras de pacientes com Doença de Chagas (n = 60) e com Malária (n = 65) e, como grupo controle, foram utilizados soros de 75 de recém-nascidos. Os peptídeos também foram testados em amostras de saliva de 65 pacientes com LV e 40 pacientes com LT, tendo como grupo controle 35 indivíduos saudáveis de área endêmica. Foram realizados também testes diagnósticos utilizando os peptídeos miméticos LC1 e LC2 em soro de 15 indivíduos assintomáticos; 13 indivíduos curados e 15 indivíduos sadios. Com a finalidade vacinal, macrófagos murinos C57BL/6 foram tratados in vitro com peptídeos LC1, LC2 e LT (0,6μM; 1,25μM; 2,5μM; 5μM; 10μM) e infectados com L. infantum chagasi e L. amazonensis para ensaio de invasão e multiplicação. Foram também realizados ensaios para testar o potencial protetor do peptídeo mimético em camundongos infectados por L. amazonensis. Para tanto, os animais foram imunizados e avaliada a carga parasitária, expressão de citocinas, tamanho da lesão, e análise protéica de ligantes. Os ensaios imunoenzimáticos mostraram que tanto soro quanto saliva dos pacientes apresentaram diferença altamente significativa (p < 0,0001) em relação a seus controles, apresentando sensibilidade de 100% e especificidade de 100% para todos os peptídeos, tanto em soro quanto em saliva. Os peptídeos foram capazes de detectar infecção em indivíduos assintomáticos e não apresentaram reação cruzada com Doença de Chagas e Malária, bem como a coinfecção com HIV não interfere na reatividade com os anticorpos para L. infantum chagasi, sendo, portanto, uma promissora ferramenta para monitoramento da infecção em regiões endêmicas. Os ensaios com macrófagos mostraram uma redução altamente significativa no número de células infectadas e do número de parasitas internalizados. Observou-se maior redução de parasitas com o aumento da concentração dos peptídeos. Foi observado que a imunização de camundongos foi capaz de induzir níveis elevados de IFN-γ, IL-12 e GM-CSF, enquanto os níveis de IL-4 e IL-10 foram reduzidos. Além disso, os animais imunizados apresentaram uma redução da carga parasitária em todos os órgãos (baço, linfonodo, fígado e medula óssea), uma diminuição da lesão da pata na qual os parasitas foram inoculados e fosforilação das proteínas ERK1/2, JNK e p65/RelA. O ensaio Western Blot identificou duas proteínas de L. amazonensis (42 kDa) e duas para Leishmania infantum chagasi (26 kDa). Assim, os resultados demonstram que os peptídeos sintéticos mimetizam antígenos de L. amazonensis e L. infantum chagasi, revelando-se bons marcadores para diagnóstico imunológico de uso rápido, simples e, principalmente, com alta sensibilidade e especificidade. Finalmente, os dados em macrófagos murinos in vitro e in vivo abrem perspectivas para o uso desses peptídeos como ferramenta vacinal.

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-08-22T17:51:47Z No. of bitstreams: 1 ZulmiraBatista.pdf: 174359 bytes, checksum: ad9eb8a6efe853246b6a9973287c6342 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-22T17:51:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ZulmiraBatista.pdf: 174359 bytes, checksum: ad9eb8a6efe853246b6a9973287c6342 (MD5) Previous issue date: 2014-06-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão (FAPEMA) / Visceral leishmaniasis (VL) is a anthropozoonosis worldwide distribution that affects humans, canines and marsupials. The disease is caused by different species of protozoa of the genus Leishmania and is transmitted by the bite of sand flies insects. The dog has been appointed as the main host and reservoir of LV, being probably the most important natural reservoir related to human cases. Moreover, it has a key role in the expansion of the disease in endemic areas. This study aimed to evaluate the cytokine profile, hematological and biochemical dogs with Leishmania infantum and treated with dry extract of Morinda citrifolia. For this study, nine dogs of both sexes and various breeds were used. Screening of animals was given through the ELISA / S7® testing and detection of parasites in blood smears. Animals used in the studies were all symptoms. To conduct the survey EDTA blood for complete blood count and blood without EDTA to carry out the biochemical and cytokines were collected. Tissue was also harvested in ear for conducting histopathological and immunohistochemical examinations. The following clinical variables was evaluated: hypertrophy of popliteal lymph nodes, skin changes, onychogryphosis, cachexia and eye injuries. Regarding clinical signs was observed that 78% had lymphadenopathy, 67% had skin lesions; 55% had hepatosplenomegaly, 44% had been slimming 33% presence of ocular lesions. While determining the hematologic values was statistically significant (p ≤ 0.05) in the values of MCV and platelet count. For the evaluation of the biochemical significance was (p = 0.05) for serum ALT, AST, urea and creatinine. Regarding cytokine assay no significant statistical result. The histopathological examination demonstrated decreased inflammation. And the examination of immunohistochemical not demosntrated presence of the parasite. Thus, it appears that studies of the differences in the cytokine profile in dogs presenting the most diverse forms of symptoms of CVL are inconclusive, since the results are contradictory. / A leishmaniose visceral (LV) é uma antropozoonose de distribuição mundial, que acomete o homem, canídeos e marsupiais. A doença é causada por diferentes espécies de protozoários do gênero Leishmania e é transmitida pela picada de insetos flebotomíneos. O cão vem sendo apontado como principal hospedeiro e reservatório da LV, sendo provavelmente o mais importante reservatório natural relacionado aos casos humanos. Além disso, tem um papel fundamental na expansão da doença em áreas endêmicas. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o perfil de citocinas, hematológico e bioquímico de cães portadores de Leishmania infantum e tratados com extrato seco de Morinda citrifolia. Para este estudo foram utilizados nove cães, de ambos os sexos e raças variadas. A triagem dos animais deu-se através do teste de ELISA/S7® e pesquisa do parasito em esfregaços sanguíneos. Os animais utilizados na pesquisas eram todos sintomáticos. Para realização da pesquisa foram colhidos sangue com EDTA para realização do hemograma e sangue sem EDTA para realização das dosagens bioquímicas e de citocinas. Foi colhido fragmento da pele da orelha para realização de exames histopatológicos e imunohistoquímicos. Foram avaliadas as seguintes variáveis clínicas: hipertrofia de linfonodos poplíteos, alterações cutâneas, onicogrifose, caquexia e lesões oculares. Quanto aos sinais clínicos observou-se que 78% apresentavam linfoadenopatia, 67% apresentavam alterações cutâneas; 55% apresentavam hepatoesplenomegalia, 44 % apresentavam estado de emagrecimento 33% presença de lesões oculares. Ao se verificar os valores hematológicos houve significado estatístico (p≤0,05) nos valores do VGM e contagem de plaquetas. Para a avaliação das provas bioquímicas houve significado estatístico (p≤0,05) para a dosagem de ALT, AST, ureia e creatinina. Em relação a dosagem de citocinas não houve resultado estatístico significante. O exame histopatológico demostrou diminuição do processo inflamatório. E o exame de imunohistoquímica não demonstrou presença do parasito. Dessa maneira, verificou-se que os estudos das diferenças no perfil de citocinas em cães que apresentavam as mais diversas formas de sintomas da LVC são inconclusivos, visto que os resultados encontrados são contraditórios.

A Leishmaniose Visceral Canina é uma doença na qual o ciclo de transmissão envolve a interação de vetores, parasitas, reservatórios e hospedeiros além de componentes ambientais, sociais, e biológicos, que tornam complexa a compreensão da dinâmica desta doença nas regiões endêmicas. Este estudo epidemiológico transversal de tipo caso controle objetivou a identificação de fatores sociodemográficos, socioeconômicos, ambientais, da dinâmica populacional canina e do estilo de vida dos cães, associados à ocorrência de Leishmaniose Visceral Canina no município de Panorama, estado de São Paulo, Brasil. Para a identificação destes fatores foi realizada um inquérito epidemiológico nos domicílios com cães positivos e negativos a Leishmaniose Visceral diagnosticados por sorologia no anos 2012 e 2013. Mediante um modelo de regressão logística foram considerados como fatores de risco para a ocorrência de Leishmaniose Visceral Canina: cães não castrados, cães que dormem fora de casa, famílias com renda inferior a três salários mínimos, presença de vegetação próximo do domicilio, não ter vidro na janela, ter vasos com plantas, ter arvores no quintal e aquisição de um cão no último ano. O desenvolvimento deste trabalho auxilia no programa de prevenção e controle da Leishmaniose Visceral Canina do Município de Panorama, mediante a identificação dos principais fatores de risco determinantes para a manutenção da doença. Este estudo demonstrou a presença de fatores de risco sujeitos a modificações por parte da população e das autoridades sanitárias que poderiam contribuir para a redução do risco de transmissão da doença em Panorama, sendo elas: a ordenação do ambiente no peri-domicílio pela redução de matéria orgânica e entulho que poderiam servir como local para reprodução e abrigo da população vetora, a modificação da relação com os cães de modo a aumentar a supervisão e a promoção do uso de medidas de proteção individual (coleira, repelentes, vacina) para a proteção da população canina nesta localidade. / Canine Visceral Leishmaniasis is a disease in which the transmission cycle involves the interaction of vectors, parasites, as well as reservoir hosts and environmental, social, and biological factors, making it very complex to understand the dynamic of this disease in endemic regions. This cross-sectional case-control epidemiological study aimed to identify risk factors for the occurrence of Canine Visceral Leishmaniasis in the city of Panorama, São Paulo, Brazil. An epidemiological survey was done to identify sociodemographic, socioeconomics, environmental, canine population dynamics and dogs life style factors, in households with positive and negative dogs diagnosed by serology in the years 2012 and 2013 in the city of Panorama. A logistic regression model was developed to take into account risk factors for the occurrence of Canine Visceral Leishmaniasis: intact dogs, dogs sleeping away from home, families with lower income, vegetation near the households, windows with no glass panels, potted plants, the presence of trees in the yard and the acquisition of a dog in the last year. The development of this work helps in the prevention and control program of Canine Visceral Leishmaniasis in the city of Panorama by the management of the determinant risk factors that maintain the disease. This study demonstrated the presence of some risk factors that are subject to modifications by the population and the health authorities and that could produce a reduction in the risk of disease transmission in Panorama: environmental ordination in areas around the houses with reduction of organic matter and rubbish that could serve as a place for the reproduction and shelter of the vector population, and the modification of the relationship with dogs promoting the use of individual protective measures (collar, repellents, vaccine etc.) to contribute to the protection of the dog population in this locality.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-09-22T13:21:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) BARBRA KATYÚSCYA SANCHES MORAES.pdf: 1057225 bytes, checksum: 43106c269cbed3f116c11fc89abec2f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-09-22T13:22:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) BARBRA KATYÚSCYA SANCHES MORAES.pdf: 1057225 bytes, checksum: 43106c269cbed3f116c11fc89abec2f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-22T13:22:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) BARBRA KATYÚSCYA SANCHES MORAES.pdf: 1057225 bytes, checksum: 43106c269cbed3f116c11fc89abec2f5 (MD5) Previous issue date: 2015-05-29 / Neste estudo, um método de CLAE-DAD foi desenvolvido e validado para a determinação de LASSBio-1736 em plasma de rato usando diclofenaco de sódio como padrão interno (PI). Extração líquido-líquido com acetonitrila foi utilizado para extrair LASSBio-1736. A separação cromatográfica foi realizada com coluna Waters Spherisorb®S5 ODS2 C18 (150 mm x 4,6 mm, 5μm), fase móvel isocrática composta por Trietilamina 0,3% (pH 4), metanol e acetonitrila (45:15:40, v/v/v) com vazão de 1 mL/min. Ambos LASSBio-1736 e PI foram eluídos em 4,2 e 5 min, respectivamente. O limite inferior de quantificação foi de 0,2 μg/mL e linearidade entre 0,2 - 4 μg/mL, com um r2> 0,99. A exatidão do método foi > 90,5%. Os desvios padrão relativos intra e inter-dias foram < 6,19 e < 7,83%, respectivamente. O método mostrou sensibilidade, linearidade, precisão, exatidão e seletividade necessária para quantificar LASSBio-1736 em estudos farmacocinéticos pré-clínicos O presente trabalho também investigou a farmacocinética plasmática e a distribuição do LASSBio-1736 em ratos Wistar. A farmacocinética de LASSBio-1736 foi investigada após a administração de dose intravenosa (3,2 mg/kg), por via oral e intraperitoneal (12,6 mg/kg).. A distribuição nos tecidos foi avaliada após administração de dose i.v. bolus. Os resultados para a via intravenosa indicam longo tempo meia-vida (24,3 ± 8,2 h), depuração de 49,3 ± 9,8 mL/Kg*h e volume de distribuição de 1,16 ± 0,3 L/kg. Para a via oral o tempo meia-vida foi de 28,6 ± 4,6 h, depuração de 49,7 ± 13 mL/Kg*h e volume de distribuição de 1,47 ± 0,34 L/kgforam semelhantes e biodisponibilidade de 12%. Para a via intraperitoneal o tempo meia-vida foi de 26 ± 8,9 h, depuração de 58 ± 19,6 mL/Kg*h e volume de distribuição de 1,8 ± 0,8 L/kg e biodisponibilidade de 38%. O LASSBio-1736 demonstrou penetração tecidual adequada no fígado, baço e pele. Com base nas características farmacocinéticas de outros fármacos leishmanicidas e a proposição de decisão para estudos farmacocinéticos visando a descoberta de candidatos a fármacos e a continuidade dos estudos, o LASSBio-1736 possui características farmacocinéticas apropriadas para um medicamento leishmanicida e novos estudos devem ser realizados para o escalonamento interespécies, além de estudos farmacológicos e toxicológicos complementares. / In this study, a method was developed and validated for HPLC-PDA determination LASSBio-1736 in rat plasma using diclofenac sodium as internal standard (IS). Liquid-liquid extraction was used to extract acetonitrile LASSBio-1736. The chromatographic separation was performed with Waters Spherisorb®S5 ODS2 C18 column (150 mm x 4.6 mm, 5μm), isocratic mobile phase consisting of Triethylamine 0.3% (pH 4), methanol and acetonitrile (45:15:40, v / v / v) with a flow rate of 1 mL/min. Both LASSBio-1736 and IS were eluted at 4.2 and 5 min, respectively. The lower limit of quantification was 0.2 μg/mL and linearity between 0.2 - 4 μg/mL, with r2> 0.99. The accuracy was > 90.5%. The relative standard deviation within and between days were < 6.19 and < 7.83%, respectively. The method showed sensitivity, linearity, precision, accuracy and selectivity needed to quantify LASSBio-1736 in preclinical pharmacokinetic studies. This study also investigated the plasma pharmacokinetics and distribution of LASSBio-1736 in Wistar rats. The pharmacokinetic LASSBio-1736 was investigated after intravenous dose administration (3.2 mg/kg) intraperitoneally and orally (12.6 mg/kg). The tissue distribution was evaluated after iv bolus dose administration. The results indicated an intravenous long half-life (24.3 ± 8.2 h) clearance 49.3 ± 9.8 mL/kg*h and the volume of distribution 1.16 ± 0.3 L/ kg. The oral route the half-life was 28.6 ± 4.6 h, clearance 49.7 ± 13 mL/kg*h and volume of distribution 1.47 ± 0.34 L/kg and bioavailability of 12%. The intraperitoneally half-life was 26 ± 8.9 h, clearance 58 ± 19.6 mL/kg*h and the volume of distribution 1.8 ± 0.8 L/kg and bioavailability of 38%were similar. The LASSBio-1736 showed adequate tissue penetration for liver, spleen and skin. Based on the pharmacokinetic characteristics of other antileishmanial drugs and the decision proposition for pharmacokinetic studies for the discovery of drug candidates and continuing studies, the LASSBio-1736 has pharmacokinetic characteristics appropriate for a leishmanicide and new drug studies should be conducted to the interspecies scaling, and additional pharmacological and toxicological studies.

Introdução - A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma antropozoonose com o envolvimento de várias espécies de Leishmania, mamíferos reservatórios e flebotomíneos (vetores). Apresenta ampla distribuição no Brasil, com registro de casos em todas as unidades da Federação. É de interesse em saúde pública devido à gravidade de algumas de suas formas e alta prevalência em algumas regiões. Em áreas de transmissão na Grande São Paulo, têm sido registradas várias espécies de flebotomíneos, merecendo destaque Pintomyia fischeri, por ser altamente antropofílica e apresentar ampla distribuição no estado de São Paulo. Objetivo - Identificar a capacidade vetora dos flebotomíneos Pintomyia fischeri para Leishmania (Viannia) braziliensis, um dos agentes da leishmaniose tegumentar americana (LTA), comparando-a com a de Nyssomyia intermedia, vetor desse parasita na região Sudeste do Brasil. Métodos - Os seguintes parâmetros foram identificados: em campo - densidade das espécies em relação a um hospedeiro (hamster), com a instalação da armadilha de Disney em duas áreas (município do Embu na Grande São Paulo e município de Iporanga, na região do Vale do Ribeira) e teste de uma nova armadilha (apenas em Iporanga); em laboratório, a partir de infecção experimental de flebotomíneos por meio da alimentação em hamsters infectados pelo parasita - probabilidade diária de sobrevivência dos flebotomíneos, duração do ciclo gonotrófico, período de incubação extrínseca dos parasitas, proporção de flebotomíneos que se alimentam em fonte infectante e que se tornaram infectivos. Com estes dados calculou-se a capacidade vetora (novas infecções que a população vetora levará adiante ao se alimentar em um hospedeiro infectado), pela expressão V = m.a.b.Einf, onde V = capacidade vetora, m = proporção de fêmeas atraídas ao hospedeiro, a = proporção de fêmeas alimentando-se no hospedeiro/duração do ciclo gonotrófico, b = proporção de fêmeas infectadas que desenvolvem a forma infectante e Einf = expectativa de vida infectiva. Resultados Em se tratando do parâmetro observado em campo (m), densidade de flebotomíneos/hamster/dia, na armadilha de Disney em Iporanga esse valor para Ny. intermedia foi de 0,027 e para Pi. fischeri (0,011), em Embu, para Pi. fischeri (0,103) e para nova armadilha, apenas em Iporanga, Ny. intermedia (7,9) e Pi. fischeri (0,11). Nos parâmetros obtidos em laboratório: sobrevida infectiva (Einf): Ny. intermedia (0,84 dias) e Pi. fischeri (0,89 dias); proporção de fêmeas alimentadas em hamster: Ny. intermedia (0,77) e Pi. fischeri (0,67) e mediana do ciclo gonotrófico, para as duas espécies de 5 dias; período de incubação extrínseca para as duas espécies de 5 dias; e proporção de fêmeas infectadas por promastigotas que chegaram à forma infectante (b) para Ny. intermedia (0,90) e Pi. fischeri (0,311). A capacidade vetora obtida com a armadilha de Disney para Ny. intermedia em Iporanga foi de 0,0027 e para Pi. fischeri (0,00089) e no Embu para Pi. fischeri de 0, 0083 e para a armadilha nova, em Iporanga apenas, Ny. intermedia (0,8) e Pi. fischeri (0,0089). Conclusão - A capacidade vetora avaliada pelas armadilhas nova e a de Disney apresentou disparidades. Para Ny. intermedia, em Iporanga o valor da primeira foi 296,3 vezes maior que o da Disney e para Pintomyia fischeri foi 10 vezes maior. Na comparação entre o mesmo tipo de armadilha, em Iporanga para Ny. intermedia o valor da capacidade vetora obtido com a Disney foi 3,03 vezes superior ao de Pi. fischeri e na nova, foi 89,9 vezes. Para Pintomyia fischeri, os valores obtidos para a capacidade vetora considerando a Disney (Embu) foram 9,3 vezes maiores que os de Iporanga. A capacidade vetorial de Pi. fischeri (Embu) foi 3,07 vezes maior do que o de Ny. intermedia (Iporanga). Possivelmente as duas espécies atuem na transmissão da LTA no estado de São Paulo. Em Iporanga Ny. intermedia atua de maneira bem mais incisiva do que a Pi. fischeri. Por outro lado, no Embu, onde Ny. intermedia não tem sido capturada, a população de Pi. fischeri apresentou capacidade vetora superior à de Ny. intermedia (Iporanga), quando avaliadas segundo o mesmo tipo de armadilha para obtenção da densidade vetora. / Introduction American cutaneous leishmaniasis (ACL) is an anthroponosis involving several species of Leishmania, mammalian reservoirs and phlebotomine vectors. It is widespread in Brazil, cases having been registered in all the states. It constitutes a serious public health problem due to the gravity of some of its forms and its high prevalence in some regions. Several species, including Pintomyia fischeri that is dominant, widespread and anthropophilic, have been registered in areas of transmission within the metropolitan region of Greater São Paulo, Objective To identify the vectorial capacity of Pintomyia fischeri for Leishmania (Viannia) braziliensis, one of the agents of ACL, comparing it with that of Nyssomyia intermedia, a vector of this parasite in Southeastern Brazil. Methods The following parameters were identified: in the field density of the species in relation to a host (hamster), with the installation of a Disney trap in two areas: Embu municipality (within Greater São Paulo) and Iporanga municipality (in the Ribeira Valley region), and a new trap (in Iporanga); in the laboratory on the basis of the experimental infection of sandflies which fed on hamsters infected with the parasite; daily probability of survival of the sandflies; duration of the gonotrophic cycle; extrinsic period of incubation of the parasite; proportion of phlebotomines which fed on the infective host and which themselves became infectious. With these data the vectorial capacity (new infections which the vector population will transmit when it feeds on an infected host) was calculated, using the expression V = m.a.b.Einf, where V = vectorial capacity, m = proportion of females attracted to the host , a = proportion of females feeding on the host/duration of gonotrophic cycle, b = proportion of infected females which develop the infective forms of the parasite and Einf = infective life expectancy. Results As regards the parameter observed in the field (m), density of insects/hamster/day, in the Disney trap in Iporanga this value for Ny. intermedia was 0.027 and for Pi. fischeri, 0.011, in Embu, for Pi. fischeri , 0.103 and for the new trap in Iporanga, for Ny. intermedia, 7.9 and for Pi. fischeri, 0.11. In the laboratory: infective life expectancy (Einf): Ny. intermedia (0.84 days) and Pi. fischeri (0.89 days); proportion of females fed on the hamster: Ny. intermedia (0.67) and Pi. fischeri (0.77) and median of the duration of the gonotrophic cycle for both species, of 5 days; and proportion of females infected by promastigotes which attained infective form (b) for Ny. intermedia (0.90) and Pi. fischeri (0.59). The vectorial capacity obtained with the Disney trap for Ny. intermedia in Iporanga was 0.0027 and for Pi. fischeri, 0.00089 and in Embu for Pi. fischeri, 0.0083 and for the new trap only in Iporanga, Ny. intermedia (0.8) and Pi. fischeri (0.0089). Conclusion The vectorial capacity measured by the new and the Disney traps presented considerable differences. For Ny. intermedia in Iporanga the value of the former was 296.3 times greater than that of the Disney and for Pintomyia fischeri it was 10 times greater. In the comparison between traps of the same kind, in Iporanga for Ny. intermedia the value of vectorial capacity obtained with the Disney trap was 3.03 times greater than that of Pi. fischeri and in the new trap it was 89.9 times greater. For Pintomyia fischeri, the vectorial capacity obtained with Disney (Embu) was 9.3 times greater than that for Iporanga. The vectorial capacity of Pi. fischeri (Embu) was 3.07 times greater than that of Ny. intermedia (Iporanga). Possibly both species are active in the transmission of ACL in the state of São Paulo. In Iporanga Ny. intermedia acts in a much more incisive way than Pi. fischeri. On the other hand, in Embu, where Ny. intermedia was not captured, the Pi. fischeri population presented a vectorial capacity greater than that of Ny. intermedia (Iporanga) when assessed by the same type of trap for the calculation of vector density.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2018-09-12T17:52:35Z No. of bitstreams: 1 2017 - Elisa Domingues Padua.pdf: 1950908 bytes, checksum: d9644f85d3b5935e0ad3f149d04d4f4b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-12T17:52:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017 - Elisa Domingues Padua.pdf: 1950908 bytes, checksum: d9644f85d3b5935e0ad3f149d04d4f4b (MD5) Previous issue date: 2017-07-25 / Despite some reports of the occurrence of Leishmaniasis in felines, the literature is scarce with regard to its research on populations of cats from areas endemic to the disease. In this way, the present study aimed to investigate the possibility of infection in cats by means of a rapid qualitative test of the antibody test in Serop?dica and Itagua?, metropolitan region of Rio de Janeiro, an endemic area for tegumentary and visceral canine leishmaniasis Anti-Leishmania chagasi by indirect immunoenzymatic assay (ELISA) and indirect immunofluorescence (RIFI). For this purpose, blood samples were collected and the serum of 255 cats was sent to the Escola Nacional de Sa?de P?blica (FIOCRUZ). In this population of cats five animals (1.9%, 5/255) were reactive to the rapid test (TR DPP?), 44 (17.3%) had anti-Leishmania spp. Identified by the RIFI. The main clinical signs observed in the seropositive animals were ocular secretion (16/44 - 36%), nasal secretion (16/44 - 36%), weight loss (7/44 - 15.9%), alopecia (6/44 - 13 , 6%) and ulcerated skin lesions (5/44 - 11.3%), in addition to hepatosplenomegaly (2/44 - 4.5%), lymphadenomegaly (5/44 - 11.3%), corneal opacity 2/44 - 4.5%) and gingivitis (2/44 - 4.5%). It was not possible to establish a standardization for the ELISA. Detection of anti-Leishmania spp. in felines, calls attention to this species that must be further investigated in relation to its power as a source of infection in relation to the parasite. / Apesar de alguns relatos da ocorr?ncia de Leishmaniose em felinos, a literatura ? escassa no que diz respeito ? sua pesquisa em popula??es de gatos de ?reas end?micas para a doen?a. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo pesquisar, em Serop?dica e Itagua?, regi?o metropolitana do Rio de Janeiro, ?rea end?mica para Leishmaniose tegumentar e visceral canina, a possibilidade de infec??o em gatos, por meio de teste r?pido qualitativo, da pesquisa de anticorpos anti-Leishmania chagasi pelas t?cnicas de ensaio imunoenzim?tico indireto (ELISA) e rea??o de imunofluoresc?ncia indireta (RIFI). Para tanto, foram colhidas amostras de sangue e soro de 255 gatos, os quais foram encaminhados ? Escola Nacional de Sa?de P?blica (FIOCRUZ). Nessa popula??o, cinco gatos (1,9%, 5/255) foram reagentes ao teste r?pido (TR DPP?), 44 (17,3%) apresentaram anticorpos anti-Leishmania spp. identificados pela RIFI. Os principais sinais cl?nicos observados nos animais soropositivos foram secre??o ocular (16/44 ? 36%), secre??o nasal (16/44 ? 36%), emagrecimento (7/44 ? 15,9%), alopecia (6/44 ? 13,6%) e les?o ulcerada na pele (5/44 ? 11,3%), al?m de hepatoesplenomegalia (2/44 ? 4,5%), linfadenomegalia (5/44 ? 11,3%), opacidade de c?rnea (2/44 ? 4,5%) e gengivite (2/44 ? 4,5%). N?o foi poss?vel estabelecer uma padroniza??o para o ELISA. A detec??o de anticorpos anti-Leishmania spp. em felinos chama a aten??o para essa esp?cie que deve ser mais investigada em rela??o ao seu poder como fonte de infec??o em rela??o ao parasito.

Leishmaniose visceral (LV) é uma doença crônica e potencialmente fatal causada pelas espécies Leishmania infantum/chagasi e Leishmania donovani. O desenvolvimento da resposta Th1 é classicamente associado à proteção contra esses parasitos, mas também há uma correlação positiva entre a produção de citocinas relacionadas com o padrão Th17 e a proteção contra LV por L. donovani em seres humanos. No entanto, a participação de Th17 durante a infecção por L. infantum/chagasi permanece desconhecida. O objetivo desse estudo foi avaliar a participação de Th17 e citocinas relacionadas, além do mecanismo pelo qual tais células operam durante a resposta imune do hospedeiro contra L. infantum/chagasi. Os resultados mostraram que o parasito é capaz de induzir grandes quantidades de TGF-, IL-1, IL-6 e IL-23 por células dendríticas derivadas da medula óssea (BMDC), citocinas envolvidas na indução e/ou manutenção do perfil Th17. Assim, co-cultivando células do baço de camundongos C57BL/6 naves com BMDCs infectadas com L. infantum/chagasi observou-se uma significativa produção de IL-17 por células T. Esses achados foram confirmados por experimentos in vivo onde se constatou a produção de IL-17 no fígado e no baço de camundongos WT infectados, sendo o pico de produção dessa citocina observado na 4ª e 6ª semanas após a infecção. O padrão de resposta do tipo Th17 é crítica para a imunidade protetora contra L. infantum/chagasi, uma vez que camudongos IL-17R-/-, IL-23p19-/- e IL-6-/- mostraram aumento da carga parasitária nos órgãos alvo da infecção, sendo que a susceptibilidade observada em camundongos IL-17R-/- foi associada com o aumento da produção de IL-10 por linfócitos, sugerindo que a IL-17 regula negativamente a produção de IL-10 levando ao controle da infecção causada pelo parasito. Ainda, a ausência da sinalização via IL-17R gerou uma diminuição da inflamação hepática, decorrente de uma menor capacidade proliferativa de linfócitos frente ao estímulo com conA. De maneira interessante, na ausência de IL-10 houve potencialização na produção de IL-17 por camundongos infectados, e esses foram mais resistentes à infecção, apresentando números reduzidos parasitos no baço e no fígado. Além de promover proteção através da modulação de IL-10, a IL-17 foi capaz de potencializar a produção de NO in vitro e in vivo. Juntos, nossos resultados demonstram que a L. infantum/chagasi é capaz de desencadear o padrão Th17 de resposta imune, o qual promove proteção do hospedeiro durante a infecção. / Visceral leishmaniasis (LV) is a chronic and potentially fatal disease caused by Leishmania donovani and Leishmania infantum/chagasi. The development of Th1 response is classically associated with protection against these parasites, but recent data also show that there is a positive correlation between the Th17-related cytokines production and the protection against LV by L. donovani in humans. However, the role of this CD4+ T cells subset during L. infantum/chagasi infection remains unknown. In this study, our aim was to evaluate the Th17 and related cytokines participation, besides the mechanism by which these cells playing during the L. infantum/chagasi infection.The results showed that the parasite induces high amounts of TGF-, IL-1, IL-6, and IL-23 by bone marrow-derived dendritic cells (BMDC), cytokines involved with Th17 induction and/or maintenance. Accordingly, naïve-C57BL/6 spleenocytes co-cultured with L. infantum/chagasi-infected BMDC produced significant amounts of IL-17 by TCD4+. Interestingly, IL-17 was produced in high amounts in the liver and spleen of WT infected-mice, being peaked at 4th and 6th weeks after infection. The Th17 is critical for protective immunity against L. infantum/chagasi, since that IL-17R-/-, IL-23p19-/- and IL-6-/- infected-mice showed increasing of parasite load associated with enhancement of IL-10 production in IL-17R-/- compared to WT infected-mice. Strictly, in the absence of IL-17 signaling, a smaller inflammatory infiltrate was observed in the liver. Interestingly, IL-17 production was potentiated in IL-10-/- infected-mice, and they were more resistant to infection, showing reduced parasites numbers in the spleen and liver. In addition to promoting protection through the downmodulation of IL-10, IL-17 enhanced the NO production. Together, our results demonstrate that L. infantum/chagasi trigger Th17 response that promotes the host protection during infection.

As leishmanioses são antropozoonoses de caráter crônico e distribuição mundial e apresentam uma incidência estimada de 2 milhões de novos casos por ano, entre leishmaniose visceral (LV) e leishmaniose tegumentar (LT). Os cães são bastante susceptíveis à infecção por LV e devido à sua estreita relação com o homem, são considerados os reservatórios de maior importância para a transmissão da doença ao ser humano. As leishmanioses ocorrem de forma endêmica nas regiões Norte, Nordeste, CentroOeste e Sudeste, fazendo-se necessária a realização de inquéritos sorológicos, visando conhecer a situação epidemiológica da doença nas áreas com transmissão ativa ou com potencial de transmissão. A brucelose é uma zoonose de distribuição mundial que causa infecção sistêmica no homem e diminuição da eficiência reprodutiva e aborto em espécies domésticas e silvestres. No Brasil, a brucelose devido a Brucella abortus é a infecção brucélica mais prevalente, seguida da B. suis e B. canis. Devido ao caráter zoonótico e a perdas reprodutivas é importante diagnosticar animais infectados para interromper a transmissão da doença. A partir do exposto, realizou-se um inquérito sorológico em humanos e em cães habitantes de aldeias indígenas da região amazônica do Brasil, com o objetivo de identificar áreas endêmicas para Leishmania spp. e Brucella spp. O presente estudo analisou amostras de soro e sangue de todos os indígenas e cães habitantes da Terra Indígena Tapirapé, assim como de cães da Terra Indígena Karajá, através dos testes sorológicos ELISA e RIFI para a pesquisa de leishmaniose e dos testes sorológicos IDGA e AAT, além da PCR para a pesquisa de brucelose. Os resultados obtidos para os humanos apresentaram prevalências de 0,4% e 0,9% para LT e brucelose, respectivamente. Todos os humanos foram negativos para LV. Para os cães das aldeias Tapirapé os resultados de prevalência foram 1,8%, 0,9% e 6,1% para LV e LT e brucelose, respectivamente. Os cães das aldeias Karajá apresentaram resultados negativos para LV e prevalências de 0,9% e 5,2% para LT e brucelose, respectivamente. Os resultados obtidos neste estudo indicam baixa ocorrência de infecção por Leishmania spp. e ocorrência moderada de infecção por Brucella spp. Embora as leishmanioses se apresentem pouco disseminadas nas áreas estudadas, requerem atenção, assim como a brucelose, para a tomada de medidas de controle e profilaxia. / Leishmaniasis is a chronic antropozoonose of worldwide distribution and has an estimated incidence of 2 million new cases per year between visceral leishmaniasis (VL) and cutaneous leishmaniasis (CL). Dogs are very susceptible to infection by VL and due to its close relationship with man, are considered the most important reservoirs for disease transmission to humans. Leishmaniasis occurs in endemic form in the North, Northeast, Midwest and Southeast, making it necessary to carry out serological surveys, to determine the epidemiological situation of the disease in areas with active transmission or potential of transmission. Brucellosis is a zoonosis of worldwide distribution that causes systemic infection in man and decreased reproductive efficiency and abortion in domestic and wild species. In Brazil, brucellosis due to Brucella abortus is the most prevalent Brucella infection, followed by B. suis and B. canis. Due to the zoonotic and reproductive losses, the diagnose of infected animals is important to interrupt transmission of the disease. From the foregoing, we performed a serological survey in humans and dogs living in indigenous communities in the Amazon region of Brazil, with the aim of identifying endemic areas for Leishmania spp. and Brucella spp. The present study analyzed blood and serum samples of all humans and dogs from Tapirapé indigenous villages as well as dogs from Karajá indigenous villages by serological tests ELISA and IFAT for detecting leishmaniasis and serological tests AGID and AAT and also PCR for the detection of brucellosis. The results showed prevalence rates of 0.4% and 0.9% for LT and brucellosis in humans, respectively. All humans tested negative for LV. For the dogs from Tapirapé villages, the results of prevalence were 1.8%, 0.9% and 6.1% for LV and LT and brucellosis, respectively. The results for dogs from Karajá villages showed prevalence rates of 0.9% and 5.2% for LT and brucellosis, respectively, and these dogs tested negative for LV. The results of this study indicate low occurrence of infection by Leishmania spp. and moderate occurrence of infection by Brucella spp. Although slightly disseminated in the studied areas, leishmaniasis requires attention, such as brucellosis, for taking control measures and prophylaxis.

Este trabalho teve como objetivo a síntese e caracterização de novos complexos de Cu2+ com &#945;-hidroxicarboxilatos fluorados, como forma de aumentar a lipofilicidade dos mesmos e, conseqüentemente, a sua biodisponibilidade. Os sólidos de coloração azul obtidos foram caracterizados por análise elementar e métodos espectroscópicos (eletrônico e infra-vermelho), confirmando a coordenação do metal a dois equivalentes dos ligantes, que se coordenam através da carboxila e da &#945;-hidroxila. Testes de partição em vesículas multi-camadas de lecitina indicaram que o complexo derivado do ácido trifluorolático é o mais lipossolúvel. A capacidade dos complexos catalisarem a reação de formação de espécies reativas de oxigênio pela reação com peróxido foi estudada por um método fluorimétrico (oxidação da 1,2,3- dihidrorodamina), sendo que os complexos fluorados em geral apresentaram menor taxa de formação de espécies oxidantes. A atividade anti-leishmânica dos compostos foi estudada em promastigotas de Leishmania amazonensis, tendo o complexo bis(trifluorolactato) de cobre(II) apresentado a maior atividade, que foi entretanto menor que o íon livre Cu(II), o que sugere que o ligante sirva como um transportador de metal para o alvo. Todos os complexos foram menos tóxicos a células de mamífero (HeLa). Nossos dados indicam que o aumento de lipofilicidade e/ou da taxa de formação de radicais livres pode ser uma estratégia interessante para o desenvolvimento de metalofármacos anti-leishmânicos a base de cobre / In this work we synthesized and characterized new Cu(II) complexes with fluorinated a-hydroxycarboxilates as a means of increase its lipophilicity and bioavailability. The blue solids were characterized by means of elemental analysis and spectroscopic methods (electronic and infrared), confirming the 2:1 ligand to metal stoichiometry and coordination through both the carboxylate and &#945;-hydroxyl moieties. Partition tests in multi-lamellar lecitin vesicles showed that the trifluorolactate derivative is the most lipossoluble. The ability of the complexes to catalyze the formation of reactive oxygen species under reaction with peroxide has been studied by a fluorimetric method (oxidation of 1,2,3-dihydrorhodamine); the fluorinated complexes showed decreased probe oxidation rate. Antileishmanial activities were studied on Leishmania amazonensis promastigotes, and the bis(trifluorolactate)copper(II) displayed the highest activity among the complexes, but smaller than that of free Cu(II), suggesting that ligand may ferry the metal to its biological target. All the complexes were less toxic to mammal (HeLa) cells. Our data suggest that increase of lipophilicity and/or free radicals generation rate may be an interesting strategy to develop antileishmanial metallodrugs based on copper

Os protozoários do gênero Leishmania são os agentes etiológicos da leishmaniose cutânea e visceral. A infecção é transmitida por insetos hematófagos, nos quais os parasitos se desenvolvem sob a forma promastigota. Nos hospedeiros mamíferos, incluindo a espécie humana, as formas encontradas são as amastigotas que proliferam nos macrófagos; estas células podem controlar a infecção produzindo radicais derivados do oxigênio e do nitrogênio. O óxido nítrico (NO) é um dos mais potentes radicais com atividade leishmanicida. Existem várias moléculas já descritas que liberam NO em meio aquoso ou quando adicionadas a suspensões celulares. São chamadas de doadoras de NO. Algumas destas vêm sendo estudadas pelo seu potencial terapêutico no tratamento das leishmanioses cutâneas. A molécula S-nitrosoglutationa (GSNO) pertence a um grupo de moléculas conhecido com S-nitroso-tióis e é um doador de NO relativamente estável. A GSNO havia sido previamente testada em culturas de formas promastigotas de L. amazonensis e causou a morte do parasito. O possível uso da GSNO na terapia das leishmanioses cutâneas demanda o conhecimento de suas ações sobre as formas amastigotas encontradas nos hospedeiros mamíferos. Terapias complementares aos antimoniais usados no tratamento da leishmaniose cutânea são necessárias porque estes são apenas injetáveis, têm efeitos colaterais e ocorrem altos índices de desistência do tratamento. O objetivo do trabalho foi analisar o efeito da molécula GSNO nas culturas de células THP-1 (linhagem de monócitos humanos leucêmicos) infectadas com L.major e o efeito da sua administração tópica diretamente na lesão ulcerada leishmaniótica de camundongos infectados. Os experimentos com células THP-1 infectadas com L. major e tratadas com GSNO, mostram marcada redução do parasitismo intracelular, dose dependente, em comparação às culturas sem tratamento. O tratamento com GSNO foi testado em camundongos Balb/c 8 infectados com L. major e em camundongos C57BL/6 desprovidos do gene de IFN<font face=\"symbol\">g- (Knockout de IFN ou IFN-<font face=\"symbol\">g KO) infectados com L. braziliensis. Grupos de animais foram infectados no dorso e após 60 dias iniciou-se o tratamento tópico com GSNO diluída em PBS, em GEL F127 ou com os respectivos veículos, como controles; ainda, outros grupos foram tratados sistemicamente (via endovenosa) com o antibiótico com ação leishmanicida, anfotericina B, ou com anfotericina B associada à aplicação tópica de GSNO. Foram feitas duas medições semanais das lesões. Decorridos aproximadamente 60 dias após o início do tratamento, os animais foram sacrificados e retirados o linfonodo drenante (inguinal superficial) e a lesão para fazer a quantificação parasitária. O tratamento tópico da infecção por L.major com a molécula GSNO reduziu o tamanho da lesão cutânea, chegando a se observar fechamento da úlcera em alguns animais; a carga parasitária no linfonodo drenante e/ou na lesão também sofreu redução. Nos camundongos IFN-<font face=\"symbol\">g KO infectados por L. braziliensis, também ocorreu inibição da progressão da lesão pelo tratamento local com GSNO em comparação ao grupo não tratado. Como conclusão, conseguimos demonstrar que GSNO apresenta efeito leishmanicida sobre formas amastigotas de L. major em cultura celular e reduz a lesão cutânea causada por L.major ou por L. braziliensis em comparação aos grupos controle. / Protozoa of the genus Leishmania are the etiological agents of cutaneous and visceral leishmaniasis. The infection is transmitted by hematophagous insects in which the parasite multiplies and differentiates as promastigotes. In the mammalian hosts, including man, the parasite proliferates as amastigotes inside macrophages; production of reactive oxygen or nitrogen intermediates (ROI and RNI) by these cells can control the infection. Nitric oxide (NO) is a very toxic RNI active against leishmania. The are many molecules that liberate NO in solution or when added to cellular suspensions. They are collectively called NO donors. A few of them have been studied because of their potential therapeutic use in cutaneous leishmaniasis. The molecule S-nitrosoglutathione (GSNO) belongs to the S-nitroso-thiols and is a relatively stable NO donor. GSNO has been previously tested and caused the death of L. amazonensis promastigotes in liquid culture. A putative application of GSNO in the treatment of cutaneous leishmaniasis requires the understanding of its activities on amastigote forms which are the parasite forms found in the mammalian host. Because the classical leishmaniasis treatment relies on injectable antimonial drugs which have many side effects, many patients abandon the treatment. Therefore, additional therapy to accelerate the cure is needed as well as new drugs are much needed. The aim of the present work is to analyze the effect of the molecule GSNO in cultures of THP-1 cells (a leukemia human monocyte cell line) infected with Leishmania major as well as the effect of administering it topically into the lesion of infected mice. The experiments done on L. major-infected THP-1 cells showed marked dose-dependent reduction of parasitism when compared to untreated infected cells. The topical treatment with GSNO was done in BALB/c mice infected with L. major and in C57BL/6 mice deprived of the IFN-<font face=\"symbol\">g gene (IFN- <font face=\"symbol\">g KO) infected with L. braziliensis. Groups of mice were infected in the shaven dorsal skin and 60 days later the topical treatment with GSNO dissolved in PBS, in GEL F127 was started. Still other groups were treated systemically (i.v.) with Amphotericin B which is leishmanicidal or with Amphotericin B associated to topically applied GSNO. The lesions were measured twice a week. After 60 days the mice were killed and the draining lymph node and the lesion were removed for quantifying the parasite numbers. The topical treatment of L. major-induced ulcer with GSNO reduced the size of the ulcer leading in some mice to complete healing; the parasitic loads in the draining lymph node or in the lesion were also reduced. In L. braziliensis-infected IFN-<font face=\"symbol\">g KO mice, inhibition of lesion growth also occurred in the mice topically treated with GSNO in comparison to the untreated control group. In conclusion we showed that GSNO is leishmanicidal to L. major intracellular amastigotes and that the topical treatment reduces the size of the lesion caused in mice by L. major or by L. braziliensis in comparison to the control groups.