O metabolismo celular é substancialmente alterado durante a oncogênese, progressão tumoral e outros processos patológicos. Tem sido frequentemente analisado para compreensão dos processos que permitem o crescimento dos tecidos, reprodução, manutenção da homeostase e resposta a sinais extracelulares. Dentre os vários métodos para caracterização de alterações metabólicas, a espectrometria de massas tem contribuído significativamente para a identificação e quantificação de proteínas envolvidas no metabolismo, e também para a caracterização do metaboloma. A análise proteômica baseada em espectrometria de massas permite estudos qualitativos em grande escala, adequados para a busca e descoberta de analitos relevantes. A análise proteômica dirigida complementa esse caráter com qualidade quantitativa para proteínas alvo pré-selecionadas. Neste trabalho foram desenvolvidos métodos de proteômica dirigida para o monitoramento de alterações quantitativas nos níveis de proteínas envolvidas na via glicolítica do metabolismo da glicólise. Para tal peptídeos proteotípicos para cada proteína foram identificados e padronizados utilizando a estratégia de monitoramento de reações múltiplas. O painel foi aplicado para obter resultados das alterações que ocorrem em um modelo de progressão tumoral. Com esta estratégia empregada, foi possível selecionar e utilizar vários peptídeos representativos das enzimas da via glicolítica e também de algumas proteínas relevantes ao câncer. A utilização de peptídeos sintéticos facilitou substancialmente o processo de desenvolvimento do método. Por fim, com a metodologia desenvolvida, foi demonstrado para células MCF7, que o fator EGF alterou a expressão das proteínas da via glicolítica, aumento no fluxo para via das pentoses e capacidade aumentada da respiração celular. Este estudo, portanto, sugere uma nova disposição do metabolismo celular dado o conhecimento estabelecido em relação aos efeitos na respiração, como o efeito Warburg. / Cellular metabolism is altered during ontogenesis, cancer progression and several other pathological events. Because of that, the metabolism is constantly analyzed in order to provide further comprehension of processes that allow tissue growth, reproduction, homeostasis maintenance, and response to extracellular signals. Among the methods great diversity of methods used to characterize metabolic alterations, mass spectrometry has been contributing significantly to identify and quantify proteins involved in a diversity of metabolic pathways, but also to monitor the changes in metabolome. Proteomics based on mass spectrometry allows highthroughput in-depth qualitative resources for discovery phases stages, providing the new relevant candidates for further biochemical characterization. In a complementary way, targeted proteomics allows precise quantitative analyses of such selected protein targets. Here, it was developed a targeted proteomics method for multiplex monitoring glycolytic pathway enzymes and relevant cancer-related proteins. For that, proteotypic peptides representing proteins of interest were selected and studied in detail to be incorporated in a multiple reaction monitoring assay. The developed method was applied to monitor the alterations in the glycolytic pathway in a cancer progression model. Using targeted proteomics strategies, we selected and applied for quantification several proteotypic peptides representing glycolitic enzymes and cancerrelated proteins. The use of synthetic peptides allowed faster method development and more sensitive methods. The application of such methods, demonstrated alterations in glycolytic pathways and cancer-related proteins promoted in MCF7 cells treated with EGF. Also, an activation of pentose-phosphate pathway was suggested and increase in cellular oxygen consumption. This study, therefore, suggests changes in the cellular metabolism that differs from the classic Warburg effect observed during cancer development.

ABREU, C. E. B. de. Análise fisiológica, bioquímica e proteômica de respostas ao estresse salino em plantas de feijão de corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.]. 153 f. 2012. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Aline Nascimento (vieiraaline@yahoo.com.br) on 2013-05-20T19:10:15Z No. of bitstreams: 1 2012_tes_cebdeabreu.pdf: 2996708 bytes, checksum: e87314913b5259395d2f145cb5cb481e (MD5) / Rejected by Aline Nascimento(vieiraaline@yahoo.com.br), reason: descrição on 2013-05-20T19:19:24Z (GMT) / Submitted by Aline Nascimento (vieiraaline@yahoo.com.br) on 2013-05-20T19:19:56Z No. of bitstreams: 1 2012_tes_cebdeabreu.pdf: 2996708 bytes, checksum: e87314913b5259395d2f145cb5cb481e (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Nascimento(vieiraaline@yahoo.com.br) on 2013-05-20T19:20:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tes_cebdeabreu.pdf: 2996708 bytes, checksum: e87314913b5259395d2f145cb5cb481e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-20T19:20:23Z (GMT). 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The results showed the existence of contrasting responses between the cultivars studied, especially with respect to inhibition of shoot growth and the accumulation of compatible solutes, which were higher in TVu. However, salinity did not alter the fluorescence parameters in both genotypes. The global analysis of 2D protein patterns showed that increasing levels of NaCl differentially alter the expression pattern of proteins in leaves, with larger changes in dose 100 mM NaCl. Nevertheless, in the second experiment, the moderate dose of salt with 75 mM NaCl was chosen as the reference dose for the study of changes in the proteome during salt stress and recovery. Salinity altered the expression of 22 protein spots in Pitiuba. Of these spots, the identities of 10 (6 up-regulated and 4 down-regulated) were determined by liquid chromatography electro-spray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). In TVU changes were observed in 27 spots being the identity determined for 9 (5 up-regulated and 4 down-regulated). Besides these, 5 spots that kept their rates expressions in salinity conditions in Pitiúba were also identified. The majority of the identified proteins is related to the process of photosynthesis, performing enzymatic functions or participating in the molecular constitution of photosystems. Proteins with protective role against stress such as chaperones and enzymes of oxidative stress (SOD) were identified, as well as calreticulin, which are probably involved in signal transduction network. In addition, during recovery treatments homeostasis mechanisms of plants to new conditions restored the levels of certain proteins, suggesting their participation in the process of acclimation to salt stress. Overall, results provide some additional information that can lead to a better understanding of the molecular basis of salt tolerance or sensitivity in cowpea plants. / No presente trabalho foi realizado um estudo integrado de fisiologia, bioquímica e proteômica comparativa em feijão de corda, uma cultura de grande valor econômico, com o objetivo de entender respostas de aclimatação das plantas à salinidade. Para tanto, dois experimentos foram conduzidos em casa de vegetação, sob condições hidropônicas, utilizando dois cultivares de feijão de corda (Vigna unguiculata) com tolerância diferencial ao estresse salino: Pitiúba (tolerante) e TVu 2331 (sensível). No primeiro experimento foram avaliadas as mudanças fisiológicas (crescimento, trocas gasosas, teor relativo de água, teor de clorofila, fluorescência da clorofila) e bioquímicas (acúmulo de íons e solutos orgânicos em folhas e raízes e padrão de expressão protéico foliar) induzidas por concentrações crescentes de salinidade (NaCl a 50, 75 e 100 mM). Os resultados demonstraram a existência de respostas contrastantes entre os cultivares estudados, especialmente com relação à inibição do crescimento da parte aérea e ao acúmulo de solutos compatíveis, os quais foram maiores no TVu. Contudo, a salinidade não alterou os parâmetros de fluorescência da clorofila em ambos os cultivares. Concentrações crescentes de NaCl alteraram de forma diferencial o padrão de expressão de proteínas nas folhas, com maiores alterações na dose 100 mM de NaCl. Apesar disso, no segundo experimento, a concentração moderada de sal com NaCl a 75 mM foi escolhida como referência para o estudo das mudanças no proteoma durante o estresse salino e após um período pós-estresse (recuperação). A salinidade modificou a expressão de 22 “spots” protéicos no Pitiúba, dos quais 10 (6 que aumentaram e 4 que diminuíram) tiveram suas identidades determinadas por espectrometria de massas acoplada a cromatografia líquida (LC-ESI-MS/MS). No TVu foram observadas mudanças em 27 “spots”, sendo determinada a identidade de 9 (5 que aumentaram e 4 que diminuíram). Além destes, 5 “spots” que mantiveram suas taxas de expressões em condições de salinidade no Pitiúba também foram identificados. A maioria das proteínas identificadas está relacionada com o processo de fotossíntese, realizando funções enzimáticas ou participando da constituição molecular dos fotossistemas. Proteínas com papel protetor contra o estresse, como chaperonas e enzimas do estresse oxidativo (SOD) foram identificadas, assim como a calreticulina, que provavelmente está envolvida em processos de transdução de sinal. Em adição, foi possível observar que durante a recuperação das plantas os mecanismos de homeostase às novas condições restabeleceram os níveis de algumas proteínas, o que sugere a participação delas no processo de aclimatação ao estresse salino. No geral, os resultados fornecem informações adicionais que podem levar a uma melhor compreensão das bases moleculares da tolerância ou sensibilidade de plantas de feijão de corda à salinidade.

SANTOS, R. M. B. A Perspectiva de elos dos fluxos reversos de produtos e embalagens retornados no segmento de massas e biscoitos em uma indústria nacional de alimentos. 2011. 112 f. Dissertação (Mestrado em Logística e Pesquisa Operacional) - Centro de Tecnologia, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by Thiago Calvet (thiago@ufc.br) on 2016-07-25T14:15:00Z No. of bitstreams: 1 rodney_marcelo_braga_santos_2011.pdf: 2445443 bytes, checksum: fe1db513c6e6512b91882b7519244f3b (MD5) / Rejected by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br), reason: falta corrrigir on 2016-07-25T14:26:23Z (GMT) / Submitted by Thiago Calvet (thiago@ufc.br) on 2016-07-25T19:58:27Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_rmbsantos.pdf: 2445443 bytes, checksum: fe1db513c6e6512b91882b7519244f3b (MD5) / Rejected by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br), reason: Alterar no arquivo o ano de defesa: de 2016_dis_XXXX PARA 2011_dis_XXX on 2016-07-28T17:54:09Z (GMT) / Submitted by Thiago Calvet (thiago@ufc.br) on 2016-07-28T18:22:38Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_rmbsantos.pdf: 2445443 bytes, checksum: fe1db513c6e6512b91882b7519244f3b (MD5) / Approved for entry into archive by Marlene Sousa (mmarlene@ufc.br) on 2016-08-01T16:27:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_rmbsantos.pdf: 2445443 bytes, checksum: fe1db513c6e6512b91882b7519244f3b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-01T16:27:40Z (GMT). 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After noticing the relevance of analyzing the context in whom they are inserted as links in the reverse current in the food industry, specifically in the segment of pasta and biscuits, and the identification of needs analysis, we present the following research problem " how reverse logistics can contribute, while differential logistic processes in the food sector? "This study took a qualitative approach overall, having been chosen as a strategy based on case study in the food industry, focusing on a single national industry, Group M. Dias Branco S/A, which is consolidated in the Brazilian food company and its operations as the largest company in this sector. The decision to draw up a single case study supports the observations of Yin (2005), with rationale in the typical case, which in this case may represent a family company considered typical of many other family businesses, from which can be extracted information about the experience in the industry. The methodology included was considered the most feasible to allow the internal relations of understanding phenomena in their context, presented a case study and expression of the phenomena studied, required by the act of comparison. From the standpoint of nature, is classified as applied, its objectives, exploratory and descriptive, and methodological procedures regarding the research is classified into bibliographic, documentary and field, because data were collected in the company, through semi-structured interviews conducted with employees of the reverse logistics industry, in addition to in situ observations from the non-participant observation and questionnaire with three supermarket retailers (small and medium). The interpretation and analysis, primary and secondary, are identified in two sections, which are presented in the description field of research (one of the company and its processes and identifying other retail flows), reaching the configuration of the logistics reverse (object of study). Finally, a discussion contextualized the practice of reverse logistics company, in addition to the existing configuration of the links that comprise the reverse flow (aftermarket) segment of pasta and cookie company's focus. / A presente dissertação consiste em analisar a configuração da logística reversa no segmento de massas e biscoitos em uma indústria de alimentos. A prática de logística reversa é extremamente necessária ao considerar o crescimento de operações reversas nos últimos anos, logo as empresas e a sociedade como um todo buscam atender a demandas que surgem, a partir da necessidade do desenvolvimento econômico; o compromisso socioambiental, e diretrizes legais; entre outros, são aspectos que fomentam uma atenção plausível para esse tema. Ainda, o cenário da logística reversa implica em um maior envolvimento e comprometimento de toda a cadeia de suprimentos em busca de processos produtivos menos agressivos e implantação de um desenvolvimento sustentável. Após notar-se a relevância de analisar o contexto em quem se encontram inseridos os atuais elos da cadeia reversa no setor de alimentos, especificamente no segmento de massas e biscoitos; e a identificação das necessidades de análise, apresenta-se o seguinte problema de pesquisa “De que forma a logística reversa pode contribuir, enquanto diferencial logístico, nos processos produtivos do setor de alimentos?” O presente estudo assumiu uma abordagem geral de caráter qualitativo, tendo sido escolhida como estratégia base o estudo de caso, no setor alimentício, centrado em uma única indústria nacional, o Grupo M. Dias Branco S/A, que se encontra consolidada no mercado brasileiro de produtos alimentícios e firma sua atuação como a maior empresa nesse setor. A decisão de elaborar um estudo de caso único sustenta-se nas observações de Yin (2005), com fundamento lógico no caso típico, que, neste caso, pode representar uma empresa familiar considerada típica entre muitas outras empresas familiares, a partir da qual podem ser extraídas informações acerca da experiência do setor. A metodologia contemplada foi considerada a mais viável no sentido de permitir relações de compreensão interna dos fenômenos nos seus contextos, apresentadas num estudo de caso e exteriorização dos fenômenos estudados, exigidos pelo ato da comparação. Do ponto de vista da natureza, classifica-se como aplicada; dos seus objetivos, exploratória e descritiva; e quanto aos procedimentos metodológicos a pesquisa é classificada em bibliográfica, documental e de campo, porque foram levantados dados na empresa, mediante entrevistas semiestruturadas realizadas com os funcionários do setor de logística reversa, além das observações in loco, a partir da observação não participante e aplicação de questionário com três varejos supermercadistas (médio e pequeno). A interpretação e análise dos dados, primários e secundários, são identificadas em duas seções, que são apresentadas na descrição do campo de pesquisa (uma sobre a empresa e seus processos e outra identificando os fluxos no varejo), chegando-se a configuração da logística reversa (objeto de estudo). Por fim, uma discussão, contextualizou-se a prática da logística reversa da empresa, além da configuração existente dos elos que compõem o fluxo reverso (pós-venda) no segmento de massas e biscoitos da empresa focal.

PINTO JÚNIOR, Vanir Reis. Análise estrutural de uma lectina de sementes de Diocle lasiophylla Mart. ex Benth e avaliação do seu efeito vasorelaxante, inflamatório e nociceptivo. 2016. 111 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia de Recursos Naturais)-Universidade Federal do Ceará, 2016. / Submitted by Aline Mendes (alinemendes.ufc@gmail.com) on 2016-08-29T18:39:59Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_vrpintojunior.pdf: 52654456 bytes, checksum: 6c7e922a7f28ee5e400ed43dda78bd59 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-29T22:52:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_vrpintojunior.pdf: 52654456 bytes, checksum: 6c7e922a7f28ee5e400ed43dda78bd59 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-29T22:52:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_vrpintojunior.pdf: 52654456 bytes, checksum: 6c7e922a7f28ee5e400ed43dda78bd59 (MD5) Previous issue date: 2016 / Lectins are (glyco)proteins of non-immune origin, capable of reversibly binding to specific mono or oligosaccharides, via a non-catalytic domain. The legume family is the most well-studied group, with many lectins purified, structurally characterized and applied in biological and biotechnological activities. The subtribe Diocleinae presents lectins that have high structural similarity, but different effects on biological activity assays. This variability is due to small differences which may be analyzed by structural studies. In context, this study aims to structurally characterize and analyze the effect on contractility, inflammation and nociception studies, of a lectin present in Dioclea lasiophylla Mart. ex Benth seeds, species of the Leguminosae family, Papilionoideae subfamily, Phaseoleae tribe, Diocleinae subtribe. The lectin (DlyL) was purified in a single step by affinity chromatography on Sephadex G-50 matrix. The primary sequence of DlyL was determined by tandem mass spectrometry (MS/MS) and sequencing of the gene encoding to the lectin, showing high similarity with others lectins from species of the same genus. The three-dimensional structure of DlyL complexed with X-Man was predicted in silico by homology modelling. DlyL presented vasorelaxant effect on smooth muscle of rat’s endothelialized aortas as well as inflammatory activity in the rat paw edema model. The lectin presented hipernociceptive effect associated with inflammation, determined by Von Frey method. / Lectinas são (glico)proteínas de origem não imune, capazes de se ligarem reversivelmente a mono ou oligossacarídeos específicos, através de um domínio não catalítico. A família das leguminosas representa o grupo mais bem estudado, com muitas lectinas purificadas, caracterizadas estruturalmente e aplicadas em atividades biológicas e biotecnológicas. A subtribo Diocleinae apresenta lectinas que possuem alta similaridade estrutural, porém apresentam diferentes efeitos em ensaios de atividade biológica. Esta variabilidade é devido a pequenas diferenças que podem ser analisadas em estudos estruturais. Neste contexto, o presente trabalho tem como objetivo caracterizar estruturalmente, bem como analisar o efeito em modelos de contratilidade, inflamação e nocicepção, de uma lectina presente em sementes de Dioclea lasiophylla Mart., espécie pertencente à família Leguminosae, subfamília Papilionoideae, tribo Phaseoleae, subtribo Diocleinae. A lectina (DlyL) foi purificada em uma única etapa através de cromatografia de afinidade em matriz Sephadex G-50. A sequência primária de DlyL foi determinada por espectrometria de massas em tandem (MS/MS) em conjunto com o sequenciamento do gene que codifica para a lectina, que apresentou alta similaridade com outras lectinas de espécies da mesma subtribo. A estrutura tridimensional de DlyL complexada com X-Man foi predita in silico através de modelagem por homologia. DlyL apresentou efeito vasorelaxante em músculo liso de aortas endotelizadas de rato, como também atividade inflamatória no modelo de edema de pata em rato. A lectina apresentou efeito hipernociceptivo associado a inflamação, determinado pelo método Von Frey.

MOREIRA, Cleane Gomes. Purificação, caracterização físico-química, estrutural e biológica de uma lectina de sementes de Canavalia villosa Benth. 2017. 84 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia de Recursos Naturais)-Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Coordenação PPGBiotec (ppgbiotec@ufc.br) on 2017-06-27T12:53:45Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_cgmoreira.pdf: 2444477 bytes, checksum: 2d95101645c5274785c72d6b9bf30aae (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-06-28T18:42:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_cgmoreira.pdf: 2444477 bytes, checksum: 2d95101645c5274785c72d6b9bf30aae (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T18:42:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_cgmoreira.pdf: 2444477 bytes, checksum: 2d95101645c5274785c72d6b9bf30aae (MD5) Previous issue date: 2017 / Presenting important carbohydrate binding properties, lectins are proteins able to decipher the glycocode, and as such, they can be used in bioassays involving, for example, cell-cell communication and cell signaling, as well as protein targeting. In this study, a new mannosespecific lectin from Canavalia villosa seeds (Cvill) was isolated by a single affinity chromatography step in a Sephadex® G-50 column. SDS-PAGE showed the lectin to be composed of three bands, and similar to the other lectins of the subtribe Diocleinae, analysis by mass spectrometry indicated that the lectin C. villosa has three chains (α, β and γ) with masses of 25,647; 12,966 and 12,685 Da, respectively, similarly to the profile of ConA-like lectins specific to mannose. A two-dimensional electrophoresis analysis showed the presence of five isoforms and isoelectric point around pH 5.0. The lectin strongly agglutinated rabbit erythrocytes native and treated with proteolytic enzymes, and presented sugar specificity to α-methyl-D-mannoside and D-mannose, in addition to high stability within a broad range of pH (pH 5,0 a 7,0) and temperature (up to 70 °C). Partial sequence of the protein was obtained by MS-MALDI TOF/TOF covering approximately 41% of the sequence. The protein was crystallized by vapor diffusion method in the presence of α-methyl-D-mannoside. The lectin also showed average toxicity against artemia nauplii and induced paw edema and hypernociception in mice with the participation of the carbohydrate binding site. In tests on C6 lineage of Rattus norvegicus glioma cells, Cvill showed ability to reduce viability and changes in morphology in the cells tested. / Com importantes propriedades de ligação a carboidratos, lectinas são proteínas capazes de decifrar o glicocódigo e, como tal, podem ser utilizadas em bioensaios que envolvem, por exemplo, a comunicação célula-célula e sinalização celular, bem como o direcionamento de proteínas. Neste estudo, uma nova lectina específica a manose foi isolada de sementes de Canavalia villosa por um único passo de cromatografia de afinidade em coluna de Sephadex® G-50. SDS-PAGE mostrou que a lectina é composta de três bandas e a análise por espectrometria de massas indicou que a lectina de C. villosa possui três cadeias (α, β e γ) com massas de 25.647, 12.966 e 12.685 Da, respectivamente, similar ao perfil de lectinas ConAlike específicas a manose. A análise em eletroforese bidimensional mostrou a presença de cinco isoformas e ponto isoelétrico em torno de pH 5,0. A lectina aglutinou fortemente eritrócitos de coelho nativos e tratados com enzimas proteolíticas e foi inibida por D-manose e α-metil-D-manosídeo. A atividade hemaglutinante da Cvill é máxima nos pH 5,0 a 7,0, e estável até a temperatura de 70 °C. A sequência parcial da lectina foi obtida por MS-MALDI TOF/TOF com cobertura de aproximadamente 41% da sequência. A proteína foi cristalizada pelo método de difusão de vapor na presença do ligante α-metil-D-manosídeo. Essa lectina mostrou alta toxicidade contra náuplios de Artemia sp., induziu edema de pata e hipernocicepção em ratos com participação do sítio de ligação a carboidratos e mostrou efeitos citotóxicos em células de glioma da linhagem C6 com uma potente atividade na redução da viabilidade celular e alteração na morfologia celular.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ecologia / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:39:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 332119.pdf: 2673241 bytes, checksum: 4040d33ab0f01b8b8501ff58d47ef3a9 (MD5) Previous issue date: 2014 / A comunidade mesozooplanctônica foi analisada em relação à estrutura de tamanho do fitoplâncton, às massas d' água e aos processos oceanográficos da plataforma continental de Santa Catarina. Arrastos verticais de zooplâncton (200 µm), amostras de água para nutrientes, clorofila e quantificação do fitoplâncton, registros de temperatura, salinidade e fluorescência (Rosette/CTD) foram obtidos no início do verão (dezembro/2010). Transectos perpendiculares à Baía da Babitonga (BB-26°S), Rio Itajaí (IR-27°S), Santa Catarina island (SCI-28°S) e Cabo de Santa Marta (CSM-28.5°S) foram conduzidos pelo NHo Cruzeiro do Sul. No CSM, a intrusão da Água Central do Atlântico Sul (ACAS) próximo à superfície coincidiu com altas concentrações de clorofila-a (2 mg . m-3) e biomassa zooplanctônica (1.40 mg.m-3) caracterizando o início da ressurgência de verão. O plâncton foi dominado por nanoflagelados, diatomáceas penadas, tintinídeos e o copépode detritívoro Oncaea venusta. A pluma da BB foi observada até 120km da costa(salinidade<35), associada à alta concentração de fosfato e a comunidade dominada por dinoflagelados tecados e diatomáceas penadas associados ao pico da abundância do copépode herbívoro Temora turbinata. Na plataforma externa e talude, a Água Tropical (AT) teve grande influência na composição de assembleias de espécies de águas quentes, com altas abundâncias de nanoplâncton e dinoflagelados associados ao copépode indicador da Corrente do Brasil (CB), Clausocalanus furcatus. Estas três estruturas de comunidades encontradas são semelhantes a assembleias de espécies de copépodes, cladóceros e quetognatos do S-SE do Brasil. As concentrações de formas nitrogenadas foram muito baixas e estiveram associadas a dominância de nanoflagelados e baixa abundância de microplâncton em ambos os processos costeiros. Em geral, a plataforma apresenta uma estrutura planctônica muito complexa e diversificada, formada principalmente por organismos pequenos (5-20µm: >70%), mesmo para copépodes (0.5-1mm: ~60%). Estes resultados refletem que a presença de processos de enriquecimento na plataforma interna e as águas quentes da CB controlam a variação da composição da comunidade planctônica no gradiente costa-oceano e determinam a estrutura de tamanho do plâncton.<br> / Abstract: The mesozooplankton community was analyzed in relation to phytoplankton size structure, the water masses and oceanographic processes of the Santa Catarina continental shelf. Vertical hauls of zooplankton (200 µm), water samples for nutrients and chlorophyll-a, records of temperature, salinity and fluorescence (Rosette/CTD) were obtained in early summer (December 2010). Cross-shelf transects were carried out off Babitonga Bay (BB-26°S), Itajai river (IR- 27°S), Santa Catarina island (SCI-28°S) and Cape Santa Marta (CSM-29°S) with the NHo Cruzeiro do Sul. In CSM, the intrusion of the SACW near the surface coincided with high chlorophyll-a (2 mg.m-3) and zooplankton biomass (1.40 g.m-3) at the beginning of the upwelling. Plankton was dominated by nanoflagellates, pennate diatoms, tintinnid ciliates and the detritivore copepod Oncaea venusta. A narrow coastal plume in BB waters of relative less saline water (< 35 psu) extending ~120 km offshore was associated with high values of phosphate and thecate dinoflagellates and pennate diatoms associated with the peak of the herbivore copepod Temora turbinata. In the outer shelf and slope, the Tropical Water (TW) had greater influence on the establishment of species assemblies of warm waters with high abundances of nanoplankton and dinoflagellates associated with the indicator species of the Brazil Current (BC), Clausocalanus furcatus. These three community structures are found share similarities with species of copepods, cladocerans and chaetognaths of the S-SE Brazil shelf. The different forms of dissolved inorganic nitrogen were very low and were associated with the nanoflagellates dominance and low abundances of microplankton in both coastal processes. In general, the continental shelf has a very complex and diversified plankton structure, primarily composed by small organisms (5-20µm: >70%), even for copepods (0.5-1mm: ~60%). These results reflect that the presence of enrichment processes in the inner shelf and the warm waters of the BC control the variability of plankton community composition in coastal-offshore gradient and determine the plankton size structure.

Made available in DSpace on 2014-08-26T17:15:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 62.pdf: 1343180 bytes, checksum: 81374788d79902cf138c199195d47e94 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Este estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência de resíduos de quatro classes de antibióticos em dois relevantes produtos de origem animal da dieta da população brasileira: ovos (ionóforos poliéteres, macrolídeos e lincosamidas) e leite (tetraciclinas). Ainda não havia dados disponíveis sobre a incidência de resíduos das classes mencionadas em ovos no Brasil. Os programas nacionais de monitoramento não investigam a presença desses medicamentos veterinários em ovos e não incluem o leite pasteurizado como matriz de análise. A relevância da pesquisa no âmbito da saúde pública deve-se à toxicidade cardiovascular dos ionóforos, ao risco de teratogenicidade de algumas tetraciclinas e à contribuição ao surgimento de microorganismos resistentes devido ao uso em larga escala de produtos veterinários à base dos antimicrobianos estudados. As metodologias analíticas foram desenvolvidas, validadas e aplicadas a uma centena de amostras de leite pasteurizado e de ovos adquiridos na região metropolitana do Rio de Janeiro. A alta sensibilidade da técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada à Espectrometria de Massas Sequencial (CLAE-EM/EM) permitiu a detecção de ionóforos em ovos com uma frequência de 25%, com a salinomicina sendo identificada em 21% dos casos. Entretanto, o índice de resultados não-conformes foi de somente 2%. A lincosamida lincomicina e o macrolídeo tilosina foram detectados em níveis de traços em 4 e 1% dos ovos avaliados, respectivamente. Nenhum caso de contaminação por lasalocida, claritromicina e eritromicina foi verificado. Embora a incidência de resíduos de coccidiostáticos acima dos limites permitidos tenha sido pequena, os resultados indicam falhas no atendimento às Boas Práticas Veterinárias por parte de alguns produtores. Em relação ao leite, 14% das amostras apresentaram traços de oxitetraciclina, mas nenhuma foi não-conforme. Esses resultados demonstram que a população da região metropolitana do Rio de Janeiro não está exposta a níveis prejudiciais de resíduos de tetraciclinas pela ingestão de leite pasteurizado. Os dados obtidos serão utilizados futuramente na avaliação da exposição alimentar a resíduos desses fármacos, contribuindo assim nas ações de Vigilância Sanitária. / This study aimed to evaluate the occurrence of residues of four classes of antibiotics in two relevant animal origin products from the Brazilian diet: eggs (polyether ionophores, macrolides and lincosamides) and milk (tetracyclines). There was still no available data on the incidence of residues of the referred classes in eggs in Brazil. The national monitoring programs do not check for those veterinary drugs in eggs and do not include pasteurized milk as a matrix of analysis. The relevance of research within the scope of the public health relays on the cardiovascular toxicity of ionophores, on the risk of teratogenicity of some tetracyclines and on the contribution to the emergence of resistant microorganisms due to widespread use of veterinary products based on the studied antimicrobials. The analytical methodologies were developed, validated and applied to a hundred samples of pasteurized milk and eggs purchased in the metropolitan area of Rio de Janeiro. The high sensitivity of the technique High Performance Liquid Chromatography coupled to Tandem Mass Sspectrometry (HPLC-MS/MS) allowed the detection of ionophores in eggs at a rate of 25%, with salinomycin being identified in 21% of cases. However, the rate of non-compliant results was only 2%. The lincosamide lincomycin and the macrolide tylosin were detected at trace levels in 4 and 1% of the analyzed eggs, respectively. No lasalocid, clarithromycin and erythromycin contamination case was found. Notwithstanding the incidence of coccidiostats residues above the permitted limits has been small, the results indicate failures in meeting the Veterinary Good Practices by some producers. Regarding milk, 14% of samples showed traces of oxytetracycline, but anyone was non-compliant. These results evidence that people from the metropolitan area of Rio de Janeiro are not exposed to harmful levels of tetracyclines residues by the intake of pasteurized milk. Obtained data will be used in future assessment of dietary exposure to residues of these drugs, thus contributing to Health Surveillance actions.

Made available in DSpace on 2014-09-09T12:30:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 3.pdf: 6860927 bytes, checksum: e648ea5190135ba1504f4985c3ec1499 (MD5) Previous issue date: 2012 / No presente estudo foram determinadas as concentrações de vinte e cinco elementos (Al, As, Ba, Bi, Ca, Cd, Cr, Cu, Fe, Ga, K, Li, Mg, Mn, Mo, Na, Ni, Pb, Rb, Sb, Se, Sn, Sr, V e Zn) em três espécies comestíveis de cogumelos, Lentinula edodes (Shiitake), Pleurotus ostreatus (Shimeji) e Pleurotus eryngii (Cardoncello) coletadas no Cultivo Cogumelos Imperial, Petrópolis, Rio de Janeiro. As amostras foram coletadas trimestralmente durante o ano de 2010. Um grama de amostra foi seco em estufa, homogeneizado em processador doméstico e pesado em cadinho de porcelana. Após a pré-digestão com adição ácido nítrico concentrado procedeu-se à mineralização em forno mufla na temperatura de 450º C por 12 h. As cinzas foram solubilizadas com 2 mL de ácido nítrico 10 % (v/v) e o conteúdo transferido com água desionizada para frasco de polipropileno de 15 mL. Utilizou-se para a determinação dos elementos as técnicas analíticas ICP-MS, utilizando Rh como padrão interno e EAA chama. Dois materiais de referência certificados do National Institute of Standards and Technology (NIST), Apple Leaves n° 1515 e Mussel Tissue n° 2976 foram utilizados obtendo valores de recuperação em torno de 98 %, com exceção para o Sn (51 %). Os resultados demonstraram que os cogumelos estudados são alimentos com altos teores de Fe, Mg, Mn, Mo e Zn com mais de 30 % das quantidades recomendadas para ingestões diárias para estes nutrientes conforme a RDC nº 269 e a portaria nº 27. Os cogumelos também apresentaram uma razão muito baixa Na/K, caracterizando-os como alimentos recomendados para hipertensos e as concentrações de Cd, Pb e As estão abaixo dos limites máximos permitidos preconizados pela legislação em vigor... / In this study we determined the concentration of twenty-five elements (Al, As, Ba, Bi, Ca, Cd, Cr, Cu, Fe, Ga, K, Li, Mg, Mn, Mo, Na, Ni, Pb, Rb , Sb, Se, Sn, Sr, V and Zn) in three species of edible mushrooms, Lentinula edodes (shiitake), Pleurotus ostreatus (Shimeji) and Pleurotus eryngii (Cardoncello) from Petropolis, Rio de Janeiro. Samples were collected quarterly during the year 2010. One gram of sample was oven-dried, homogenized in domestic processor and after a pre-digestion with concentrated nitric acid addition proceeded to mineralization in a muffle furnace at a temperature of 450 ° C for 12 h. The ashes were solubilized with 2 ml of nitric acid 10 % (v/v) and transferred with deionized water to a polypropylene 15 mL bottle. For the elements determination it was used ICP-MS, using Rh as internal standard and FAAS. Two certified reference materials from NIST, Apple Leaves nº 1515 and Mussel Tissue nº 2976, obtained recovery values around 98 %, except for the Sn (51 %). The results showed that the mushrooms are foods with high levels of Fe, Mg, Mn, Mo and Zn over 30% from the recommended daily intake for these nutrients according to Brazilian Legislation. The mushrooms also showed a very low ratio Na/K, characterizing them as recommended foods for hypertensive and their concentrations of Cd, Pb and As are below the recommended maximum limits allowed by Brazilian legislation. Two mushrooms, Shiitake and Cardoncello, as candidates of certified reference material was prepared and a collaborative study took place with ten laboratories. Nine elements, Ca, Cd, Cu, Fe, K, Mg, Mn, Na and Zn, had their concentrations certified. In bioaccumulation studies, factors were determined for 14 elements Al, Ba, Ca, Cr, Cu, Fe, K, Mg, Mn, Na, Rb, Sr, V and the results showed thate Al, Ca, Mn, Sr are bioexcluded elements. It was concluded that among the morphological structures, cap and stem, the elements are in greater quantity in the cap.

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:41:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) giani_santoro_ioc_dout_2007.pdf: 8860220 bytes, checksum: 4896d29487907732030c13e8ac4349d0 (MD5) Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Nifurtimox e benznidazol, as drogas usadas no tratamento da doença de Chagas, apresentam vários efeitos colaterais e tem sua eficácia limitada, especialmente na fase crônica. Diversos produtos naturais têm demonstrado potencial antiparasitário em laboratório e, nesse sentido, compostos obtidos de plantas aparecem como agentes potenciais para o desenvolvimento de novas drogas antiparasitárias. Assim, no presente trabalho investigamos o efeito de óleos essenciais obtidos de Origanum vulgare L. (orégano), Thymus vulgaris L. (tomilho), Achillea millefolium L. (mil-folhas), Syzygium aromaticum L. (cravo) Ocimum basilicum L. (manjericão) e Cymbopogon citratus (DC) Stapf (capim-limão), e de seus principais constituintes, sobre a proliferação e ultra-estrutura de Trypanosoma cruzi. Destilação a vapor foi usada para isolar os óleos essenciais, com análise química realizada por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (CG-EM) através de colaboração com o Departamento de Química da UFLA (Lavras, MG). Epimastigotas de cultura e tripomastigotas sangüíneos foram incubados por 24 h com diferentes concentrações dos óleos essenciais e de alguns de seus principais constituintes sendo quantificado o valor de IC50 Nossos dados indicam que óleos essenciais são eficazes contra T. cruzi apresentando a seguinte ordem decrescente de atividade sobre epimastigotas (IC50/24 h expresso µg/mL): tomilho (77,0) > cravo (99,5) > manjericão (102,0) > capim-limão (126,5) > mil folhas (145,5) > orégano (175,0 µg/mL). Nos ensaios com formas tripomastigotas sangüíneas os óleos mais efetivos foram: capim-limão (15,5) > tomilho (38,0) > cravo (57,5) > orégano (115,0) > mil-folhas (228,0) > manjericão (467,5). Assim, com exceção dos óleos de manjericão e de mil-folhas, os demais óleos testados foram mais ativos sobre tripomastigotas do que sobre epimastigotas. Tratamento com os principais constituintes dos óleos essenciais de capim-limão (citral), manjericão (linalol), cravo (eugenol) e tomilho (timol) também demonstrou efeito tripanocida. No caso de citral, timol e eugenol, as formas tripomastigotas foram as mais suscetíveis. Citral, principal componente do óleo de capim-limão, também foi eficiente no tratamento de macrófagos peritoneais infectados, inibindo a proliferação de amastigotas intracelulares e apresentando para o parâmetro percentagem de infecção um valor de IC50/48 h de 12,1 µg/mL. Experimentos de citometria de fluxo após incubação de epimastigotas e tripomastigotas com óleos essenciais de orégano e tomilho demonstraram que a permeabilidade da membrana celular foi afetada somente em concentrações 4 vezes maiores que a concentração correspondente ao IC50/24 h. Por outro lado, uso de concentrações de óleos correspondentes ao IC50/24h não resultou em permeabilização celular Microscopia eletrônica de varredura (MEV) de parasitas tratados com todos os óleos essenciais não demonstrou alterações na membrana plasmática. Entretanto, havia inchaço do corpo do parasito, quando comparado a parasitas do grupo controle. Observação por microscopia eletrônica de transmissão (MET) mostrou inchaço citoplasmático, porém com manutenção na integridade da membrana dos parasitos. Estes dados indicam que os óleos permeam as membranas e atuam sobre organelas ou vias metabólicas citoplasmáticas. Os óleos essenciais de tomilho e capim-limão foram muito mais ativos sobre os parasitas do que sobre macrófagos peritoneais apontando para a realização de ensaios in vivo. Nossos resultados indicam que óleos essenciais e seus constituintes são promissores agentes anti-T. cruzi, abrindo perspectivas para descoberta de drogas mais eficazes de origem vegetal para o tratamento de doenças parasitárias / Nifurtimox and benznidazole, currently used for the treatment of Chagas disease, present several side effects and have limited efficacy, especially in the chronic phase of the disease. Several natural products have revealed anti-parasitic potential in the laboratory and, in this sense, plant-derived compounds appear as potential targets for the development of new anti-parasitic drugs. Thus, in the present work we have investigated the effect of essential oils obtained from Origanum vulgare L. (oregano), Thymus vulgaris L. (thyme), Achillea millefolium L. (yarrow), Syzygium aromaticum L. (clove), Ocimum basilicum L. (basil) and Cymbopogon citratus (DC) Stapf (lemongrass), and of their main constituents, on proliferation and ultrastructure of Trypanosoma cruzi. Steam distillation was used to isolate the essential oils, with chemical analyses performed by gas chromatography C coupled to mass spectrometry (GC-MS) in collaboration with the Departamento de Química of UFLA (Lavras, MG). Epimastigotes and bloodstream trypomastigotes were incubated for 24 hours with different concentrations of the essential oils and with some of the main constituents of the oils, being quantified the IC50/24h. Our data indicate that essential oils are effective against T. cruzi, presenting the following order of decreased activity on epimastigotes (IC50/24 h expressed as μg/mL): thyme (77.0) > clove (99.5) > basil (102.0) > lemongrass (126.5) > yarrow (145.5) > oregano (175.0). In the assays with bloodstream trypomastigotes, the more active oils were: lemongrass (15.5) > thyme (38.0) > clove (57.5) > oregano (115.0) > yarrow (228.0) > basil (467.5). Thus, except for basil and yarrow, the essential oils were more active on trypomastigotes than on epimastigotes. Treatment with the main constituents of lemongrass (citral), basil (linalool), clove (eugenol) and thyme (thymol) essential oils also demonstrated trypanocidal effect. The lemongrass oil was effective in the treatment of infected macrophages, inhibiting intracellular amastigote proliferation, and presenting for the parameter % of infection an IC50/2 days of 12.1 μg/mL. Flow cytometry experiments after incubation with oregano and thyme essential oils demonstrated that the cell membrane permeability of treated epimastigotes and trypomastigotes was affected only at concentrations at least 4 times higher than that of the corresponding IC50/24h. On the other hand, use of corresponding IC50/24h value for each essential oil did not result in cell permeabilization. Scanning electron microscopy (SEM) of treated cells demonstrated apparently no plasma membrane alteration with all used oils. However, there was swelling of the parasite body, as compared to control cells. Observation by transmission electron microscopy (TEM) showed cytoplasmic swelling, however with maintenance of the parasite membrane integrity, as compared to control cells. These data indicate that the oils permeate the membranes and act on cytoplasmic organelles or metabolic pathways. Thyme and lemongrass oils were much more active against the parasites when compared to the effect on peritoneal macrophages, pointing out to further assays of treatment of experimentally infected mice. Our results indicate that essential oils and their constituents are promising anti-T. cruzi agents, opening perspectives to the discovery of more effective drugs of vegetal origin for the treatment of parasitic diseases.

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 23.pdf: 1389389 bytes, checksum: 79ab5a32cd4a782ac19d9bd08bfa4066 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Os interferons (INFs) são proteínas produzidas por células animais em resposta a infecções virais. Essas substâncias possuem vários efeitos farmacológicos, incluindo antiviral, antitumoral e imunomodulatório. Com o advento da tecnologia do DNA recombinante, vários interferons passaram a ser produzidos e comercializados como Biofármacos. O mais importante é o α2b, que é uma das bases do tratamento das hepatites virais. A única norma oficial que regulamenta a produção de INF-α2b é a Farmacopéia Européia, sendo que restringe-se a matéria prima. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo para caracterizar a estrutura molecular do INF-α2b em formulações farmacêuticas por espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF. Para a análise por MALDI-TOF foi necessário inicialmente desenvolver um método de cromatografia líquida para promover a separação entre o INF-α2b constituinte ativo e minoritário e o soro albumina humana, também componente presente nas formulações farmacêuticas. Primeiramente foi desenvolvido um procedimento baseado em imunoafinidade e cromatografia de gel filtração. As amostras preparadas dessa forma apresentaram homogeneidade protéica por eletroforese, sendo analisadas por dicroísmo circular e fluorescência, o que demonstrou ter ocorrido degradação da estrutura tridimensional. Adicionalmente, essas amostras não geraram espectros de massa. Foi desenvolvido então outro método de separação cromatográfica, baseado em fase reversa, obtendo-se amostras com homogeneidade protéica, revelada por eletroforese. / Os interferons (INFs) são proteínas produzidas por células animais em resposta a infecções virais. Essas substâncias possuem vários efeitos farmacológicos, incluindo antiviral, antitumoral e imunomodulatório. Com o advento da tecnologia do DNA recombinante, vários interferons passaram a ser produzidos e comercializados como Biofármacos. O mais importante é o α2b, que é uma das bases do tratamento das hepatites virais. A única norma oficial que regulamenta a produção de INF-α2b é a Farmacopéia Européia, sendo que restringe-se a matéria prima. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo para caracterizar a estrutura molecular do INF-α2b em formulações farmacêuticas por espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF. Para a análise por MALDI-TOF foi necessário inicialmente desenvolver um método de cromatografia líquida para promover a separação entre o INF-α2b constituinte ativo e minoritário e o soro albumina humana, também componente presente nas formulações farmacêuticas. Primeiramente foi desenvolvido um procedimento baseado em imunoafinidade e cromatografia de gel filtração. As amostras preparadas dessa forma apresentaram homogeneidade protéica por eletroforese, sendo analisadas por dicroísmo circular e fluorescência, o que demonstrou ter ocorrido degradação da estrutura tridimensional. Adicionalmente, essas amostras não geraram espectros de massa. Foi desenvolvido então outro método de separação cromatográfica, baseado em fase reversa, obtendo-se amostras com homogeneidade protéica, revelada por eletroforese. As amostras em solução foram submetidas à digestão com tripsina, levadas ao espectrômetro de massa MALDI-TOF, onde seus fragmentos trípticos foram identificados segundo a correlação entre os resultados encontrados a partir das amostras e do padrão de INF-α2 da Farmacopéia Européia submetido aos mesmos procedimentos. As coberturas de seqüência atingida no padrão foram de 72,7 % e para as amostras de 45,5 %. No produto comercial foi identificada uma ponte disulfeto. Esse trabalho fornece dados importantes que subsidiam o estabelecimento de um protocolo para a análise de INF-α2b em produto final, que poderia substituir o mapa de peptídeos tradicional por cromatografia líquida, com a vantagem de resultar em um maior número de informações sobre a estrutura molecular do biofármaco, importante para a ação farmacológica. Portanto, implementar o controle de qualidade e caracterização estrutural com a introdução de metodologias analíticas sensíveis de maneira que tenhamos informação acerca da segurança, qualidade e eficácia do biofármaco para o devido suporte para as ações de Vigilância Sanitária.