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Bacillus thuringiensis para controle de Musca domestica: seleção de estirpes e avaliação do perfil de hemócitos em larvas / Bacillus thuringiensis for control of Musca domestica: selection of strains and evaluation of the hemocyte profile in larvaeStein, Ana Elisabeth Korte 28 June 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-06-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Musca domestica is considered one of the most harmful pests to the egg industry due to
its high reproductive capacity and great potential of acting as a mechanical vector of
many pathogenicagens to the egg-laying hens. Currently, the society is interested in
alternative methods for pest control, once the constant and indiscriminate use of
chemical products has caused intoxication to humans and domestic animals. Also, the
irregular use of chemicals has selected resistant fly populations, accumulated chemical
residues in the environment and food, and eliminated insects important to the natural
control of flies. In order to develop alternative methods to control M. domestica, this
study investigated Bacillus thuringiensis strains able to act as promising biological
control agents. Twenty two strains of B. thuringiensis were tested in a screening assay
for selecting the most virulent ones; one third of them were virulent to M. domestica
larva, and two of them were selected for the next tests. Bioassays were conducted with
the strains S601 and S599 to determine the larval treatment efficiency; they showed
efficiency to control larva of M. domestica in all concentrations tested. The current
study also characterized the hemocytes from hemolymph of larva of M. domestica by
their identification and quantification; also, we evaluated the effect of the strain S599 of
B. thuringiensis infection to the total hemocytes counts, and number and size of
hemocyte types, using optical microscopy. Collections were made at the times of 12, 24,
48 and 72 hrs. Five hemocyte types were found: prohemocytes, plasmatocytes,
granulocytes, oenocytoids and spherulocytes, in which plasmatocytes were found in
superior number. Prohemocytes were the smallest cells observed, and oenocytoids were
the biggest ones. The treatment of M. domestica larva with B. thuringiensis did not
change morpholigical characteristics of hemocytes, as well as it did not modify the
counts of hemocyte types. The total number of hemocytes in the hemolymph, however,
increased significantly 48 hours after the larval treatment. B. thuringiensis strains
selected in the current study are promising agents for biological control of M.
domestica. / Musca domestica é considerada umas das pragas mais prejudiciais à produção intensiva
de aves poedeiras devido seu alto poder reprodutivo e elevado potencial de agir como
vetor mecânico de vários agentes causadores de doenças. Atualmente a sociedade vem
procurando novas formas de controle de pragas, já que o uso constante e indiscriminado
de produtos químicos tem levado a casos de intoxicação em humanos e animais, além
de selecionar populações cada vez mais resistentes, deixar resíduos no ambiente e nos
alimentos e prejudicar insetos importantes para o equilíbrio biológico. No intuito de
desenvolver outra forma de controle para M. domestica, o presente trabalho selecionou
estirpes de Bacillus thuringiensis promissoras para atuarem como agentes de
biocontrole de M. domestica. Dessa forma, no teste seletivo foram testadas 22 estirpes
de B. thuringiensis, onde duas mostraram-se virulentas para larvas da mosca.
Bioensaios para determinação de eficácia do tratamento larval foram realizados e as
estirpes testadas (S601 e S599) mostraram-se promissoras para o controle de larvas de
M. domestica em todas as concentrações testadas (20; 15; 10; 5; 1; 0,5; 0,25;
0,125mg/g). Em outra etapa, o estudo caracterizou os hemócitos da hemolinfa de larvas
de M. domestica por identificação e quantificação dos tipos celulares presentes na
hemolinfa, estudou ainda o efeito do tratamento com a estirpe S599 de B. thuringiensis
na contagem total das células, contagem diferencial celular e no tamanho das células,
utilizando-se para esta finalidade a microscopia ótica. Realizou-se coletas nos tempos de
12, 24, 48 e 72 hrs. Foram encontrados cinco tipos celulares: pró-hemócitos,
plasmatócitos, granulócitos, oenocitoides e esferulócitos, sendo os plasmatócitos as
células em maior número, os pró-hemócitos as menores células encontradas e os
oenocitoides as maiores células encontradas. O tratamento com B. thuringiensis não
alterou as características morfológicas dos hemócitos, assim como não alterou a
contagem diferencial das células; no entanto, o número total de hemócitos na hemolinfa
aumentou significativamente 48 horas após tratamento das larvas. As estirpes de B.
thuringiensis selecionadas são possíveis agentes de biocontrole de M. domestica.
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Detecção de Strongyloides Stercoralis por PCR em amostra de fezes de pacientes portadores de diabetes mellitus tipo 2 / Detection of Strongyloides stercoralis by PCR in faecal samples of patients with diabetes mellitus type 2Mazzaro, Marcia Carolina 30 May 2017 (has links)
Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2017-10-20T15:45:20Z
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Previous issue date: 2017-05-30 / Strongyloides stercoralis is an intestinal nematode that infects approximately 100 million people worldwide, mainly in tropical and subtropical regions. Most S. stercoralis carriers are asymptomatic or oligo-symptomatic, which does not mean absence of pathogenic action. Extra-intestinal manifestations can lead to severe and life-threatening conditions, especially in immunocompromised patients. The medical literature has case reports of disseminated strongyloidiasis in diabetic patients, but no studies have determined the relationship between diabetes and strongyloidiasis. The objective of this study aims to evaluate the parasitological and molecular profile of strongyloidiasis in patients with type 2 diabetes mellitus (DM2) and to analyze their value in the detection of chronic asymptomatic infection in these patients. The population for this research were patients from Diabetes Outpatient Clinic of Jataí -GO and other non - diabetic individuals living in the city. Fresh stool samples were obtained from 149 individuals, and were characterized in two groups: Group I (97) patients with DM2, Group II (52) individuals not carrying DM2. The fecal samples provided were submitted to parasitological methods of Hoffman, Rugai and agar plate culture, and subsequently, to molecular analysis by Polymerase Chain Reaction (PCR). The overall positivity of S. stercoralis by parasitological techniques was 2,6 % (4/149), and only one DM2 patient was positive for the infection. With PCR, the positivity was 16.1% (24/149), 9,3% (9/97) in the group I, and 28,8% (15/52) in the group II. DM2 showed to be a protective factor for strongyloidiasis (OR 0,252 IC95% 0,101 a 0,628 p=0,003). There was no agreement between the parasitological methods and PCR in the detection of S. stercoralis. Thus, the PCR technique using primer species-specific for S. stercoralis showed a greater ability to detect infection in asymptomatic diabetic and non-diabetic patients. / milhões de pessoas no mundo, principalmente em regiões tropicais e subtropicais. A maioria dos portadores de S. stercoralis são assintomáticos ou oligoassintomáticos, o que não significa ausência de ação patogênica. As manifestações extra-intestinais podem levar a quadros graves e potencialmente fatais principalmente em pacientes imunocomprometidos. Na literatura são descritos casos de estrongiloidíase disseminada em pacientes diabéticos, porém não há estudos que determinam a relação existente entre o diabetes e o desenvolvimento da estrongiloidíase. O Objetivo desse estudo foi avaliar o perfil parasitológico e molecular da estrongiloidíase em pacientes portadores Diabetes mellitus tipo 2 (DM2) e analisar sua performance na detecção de infecção crônica assintomática nesses pacientes. A pesquisa foi realizada com pacientes atendidos no ambulatório de diabetes da prefeitura de Jataí - GO e indivíduos não diabéticos residentes no município. Amostras fecais frescas foram obtidas de 149 indivíduos, sendo caracterizados em dois grupos: Grupo I (97) pacientes portadores de DM2, Grupo II (52) indivíduos não portadores de DM2. As amostras fecais fornecidas foram analisadas pelos métodos parasitológicos de Hoffman, Rugai e cultura em placa de ágar, e posteriormente submetidas à análise molecular por técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) utilizando primer específico. A positividade geral de S. stercoralis pelas técnicas parasitológicas foi de 2,6%(4/149), e apenas um paciente DM2 foi positivo. Com a utilização de técnica de PCR, a positividade geral foi de 16,1% (24/149), sendo 9,3% (9/97) no Grupo I, e 28,8% (15/52) no Grupo II. DM2 mostrou ser um fator de proteção para estrongiloidiase (OR 0,252 IC95% 0,101 a 0,628 p=0,003). Não houve concordância entre os métodos parasitológicos e PCR na detecção de S. stercoralis. Desta forma, a técnica de PCR utilizando primer espécie-especifico para S. stercoralis apresentou maior capacidade de detecção de infecção em portadores assintomáticos diabéticos e não diabéticos.
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Efeito da temperatura e da formulação oleosa na germinação e virulência de conídios de Metarhizium anisopliae a Rhipicephalus sanguineus / Effect of temperature and oil-based formulation on germination and virulence of Metarhizium anisopliae conidia against Rhipicephalus sanguineusBarreto, Lucas Prado 08 October 2014 (has links)
Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-08-19T20:28:16Z
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Previous issue date: 2014-10-08 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Resistence of the tick Rhipicephalus sanguineus to chemicals is commonly reported. Entomopathogenic fungi emerge
as an alternative to the exclusive use of chemical acaricides for tick control; however, heat and other environmental
factors may limit the efficacy of fungi. Thus, the current study evaluated the effect of heat on conidial germination of
Metarhizium anisopliae IP 119 when suspended in pure mineral oil (Impex®) or in water (Tween 80, 0.01%) and
applied to the cuticle of R. sanguineus (in vivo) or in artificial medium PDAY (in vitro). Then, the results obtained
with tests in vivo were compared to the results obtained with tests conducted in vitro, and finally, experiments were
conducted to verify the virulence of M. anisopliae IP 119 for R. sanguineus engorged females. Conidial suspensions of
M. anisopliae in water or oil, adjusted to 108 conidia ml-1, were exposed to 0 (control) or 4 h to 45 ± 0.5 °C in a water
bath, and then, individually inoculated onto the dorsal surface of R. sanguineus engorged females. The samples were
incubated at 27 ± 1 °C and RH > 80% for 0, 12, 18, 24, 36, 48 or 72 h. In parallel, aliquots of the aqueous conidial
suspensions (control or 45 °C) were inoculated onto PDAY medium in Petri plates. The samples were incubated at the
same temperature and for the same time periods described above. After each incubation time, ticks were fixed and
dissected, i.e., a fragment of the dorsal cuticle was removed. Cuticles that received conidia suspended in water,
exposed or not to heat, were processed for fluorescence microscopy for evaluation of conidial germination. Cuticles
that received conidia suspended in water or oil, exposed or not to heat, were processed for scanning electron
microscopy for evaluation of conidial germination. Conidial germination on PDAY plates was assessed using a phasecontrast microscope. A minimum of 300 conidia per cuticle or plate was evaluated for calculation of percent
germination. When conidia were exposed to heat, a high percentage of germination was observed in PDAY medium
(61.5%) in comparison to the tick cuticle (13%), 72 h after inoculation. Appressoria were observed 36 h after
inoculation, only in conidia that were not exposed to heat. On tick cuticle, the percentage of germination of conidia
suspended in mineral oil and exposed to heat was high in comparison to the percentage of germination of conidia
suspended in water, at all incubation times investigated. At 36 h of incubation, the mean percentage of germination of
conidia suspended in oil reached 16.3%, whereas conidia suspended in water reached only 2.2%. Conversely, in the
control groups (ticks treated with conidia not exposed to heat), the percentage of germination of conidia suspended in
water or oil differed at 48 and 72 h of incubation, where germination was also high for conidia suspended in oil and
inoculated on the tick cuticle. M. anisopliae conidia suspended in oil exposed or not to heat showed control percentage
greater than the observed with aqueous suspensions. Thus, the results showed a significant delay in germination for
conidia suspended in water and exposed to 45 °C in comparison to conidia suspended in mineral oil; in this sense, the
oil formulation of conidia when exposed or not to heat proved to be more effective for controlling R. sanguineus
engorged females. Moreover, conidia suspended in water germinated faster when inoculated in PDAY than when they
were applied to the tick cuticle. Therefore, the results indicated that the negative effect of heat on conidial germination
was more expressive when conidia were suspended in water and applied to the arthropod cuticle than it would be
predicted by the in vitro thermotolerance tests. Also, conidia suffered less interference from heat exposures when
suspended in oil. In conclusion, mineral oil protects conidia against the heat effects and enhances the fungal
germination on the cuticle of R. sanguineus. / Relatos da resistência do carrapato Rhipicephalus sanguineus a bases químicas utilizadas para controle tem sido
comuns. Neste contexto, os fungos entomopatogênicos surgem como uma alternativa ao uso exclusivo do controle
químico; entretanto, calor e outros fatores ambientais podem limitar a eficácia dos fungos. Sendo assim, o presente
estudo avaliou o efeito do calor sobre a germinação de conídios de Metarhizium anisopliae IP 119 quando suspensos
em puro óleo mineral (Impex®) ou em água (Tween 80, 0,01%) e aplicados sobre a cutícula de R. sanguineus (in vivo)
ou em meio de cultivo BDAY (in vitro). Em seguida, a resposta dos testes in vivo foi comparada a dos testes in vitro, e
bioensaios foram realizados para verificar a virulência do isolado IP 119 para fêmeas ingurgitadas de R. sanguineus.
Suspensões conidiais de M. anisopliae em água ou óleo, ajustadas a 108 conídios ml-1, foram expostas a 0 h (controle)
ou 4 h a 45 ± 0,5 ºC em banho-maria e, em seguida, inoculadas individualmente na superfície dorsal de fêmeas
ingurgitadas de R. sanguineus. Os indivíduos foram incubados a 27 ± 1°C e UR > 80% por 0, 12, 18, 24, 36, 48 ou 72
h. Em paralelo, alíquotas das suspensões conidiais aquosas (controle ou 45ºC) foram inoculadas em placas de Petri
contendo meio BDAY. As amostras foram incubadas na mesma temperatura e pelos mesmos períodos de tempo
descritos acima. Após cada período de incubação, os carrapatos correspondentes foram fixados e dissecados,
retirando-se um fragmento da cutícula dorsal. Cutículas que receberam conídios suspensos em água, e expostos ou não
ao calor, foram processadas para microscopia de fluorescência para avaliação da germinação. Cutículas que receberam
conídios suspensos em água ou óleo, e expostos ou não ao calor, foram processadas para microscopia eletrônica de
varredura para avaliação da germinação. A germinação de conídios em BDAY foi avaliada por microscopia de
contraste de fase. Um mínimo de 300 conídios por cutícula ou por placa foi avaliado para calcular o percentual de
germinação. Verificou-se que quando conídios foram expostos ao calor, um maior percentual de germinação foi
observado em BDAY (61,5%) em comparação com a cutícula do carrapato (13%), 72 h após a inoculação. Apressórios
foram observados 36 h após a inoculação, apenas em conídios que não foram expostos ao calor. Na cutícula de R.
sanguineus, o percentual de germinação de conídios suspensos em óleo mineral e expostos ao calor foi maior em
comparação ao percentual de germinação de conídios suspensos em água, em todos os tempos de incubação
investigados. Com 36 h de incubação, a germinação média de conídios suspensos em óleo chegou a 16,3%, enquanto
conídios suspensos em água apresentavam 2,2% de germinação. Em contrapartida, nos controles, o percentual de
germinação de conídios suspensos em água ou óleo diferiu nos tempos de 48 e 72 h de incubação, onde a germinação
sobre a cutícula também foi maior em conídios suspensos em óleo. M. anisopliae quando suspenso em óleo e exposto
ou não ao calor apresentou percentual de controle de fêmeas maior que o observado nas suspensões aquosas. Sendo
assim, os resultados demonstraram: marcante atraso na germinação dos conídios suspensos em água e expostos a 45 ºC
em comparação aos conídios suspensos em óleo mineral; a formulação oleosa de conídios quando exposta ou não ao
calor mostrou-se mais efetiva para controle de R. sanguineus. Ainda, conídios suspensos em água germinaram mais
rapidamente quando inoculados em BDAY do que quando foram aplicados sobre a cutícula do carrapato. Neste
sentido, permite-se inferir que o efeito negativo do calor sobre a germinação de conídios suspensos em água foi maior
quando os conídios foram aplicados sobre a cutícula do artrópode do que seria previsto nos testes in vitro, e os
conídios sofreram menor interferência do calor quando suspensos em óleo. Portanto, conclui-se que o óleo mineral
protege os conídios contra a ação do calor e potencializa a germinação do fungo na cutícula de R. sanguineus.
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Formulação de Culicinomyces clavisporus para controle de Aedes aegypti / Formulation of Culicinomyces clavisporus for biological control of Aedes aegyptiRodrigues Filho, Juscelino 21 February 2014 (has links)
Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-22T14:05:55Z
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Previous issue date: 2014-02-21 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The dengue fever, transmitted by the mosquito Aedes aegypti, is of one of the most important vector-borne diseases in the world. Since there is no vaccine, the main way to control this disease is by combating the vector, which is mainly made with chemicals. However, with the emergence of resistant mosquito populations the interest in integrated control increased. Biopesticides based on entomopathogenic fungi are good alternatives to incorporate this policy to combat. Formulations protect fungal propagules against abiotic factors and are specific to the target vector. Culicinomyces clavisporus possesses specificity to dipteran larvae and their hosts infected orally get. Therefore, formulation of this fungus should contain palatable adjuvants, thus ensuring the ingestion by the larvae. This study evaluated the activity of conidia of C. clavisporus on larvae of A. aegypti, the preparation and evaluation of cellulose pellets formulated with or without adjuvant (10 or 20% soy flour) and / or conidia of C. clavisporus, and the viability of conidia exposed to different temperatures. The pellets without conidia were evaluated for stability in water and the ability to promote the development of larvae, while pellets with conidia were evaluated regarding their larvicidal activity. The results showed that concentrations ≥ 105 conidia / ml were sufficient to kill all of the larvae. Pellets containing 10% soybean flour seem to be ideal for fungal formulation and application, they disintegrate in water and do not promote a rapid development of larvae. However, pellets formulated with conidia had no larvicidal effect, which can be explained by a possible inviability of conidia by heat during the drying process / A Febre Dengue, transmitida pelo mosquito Aedes aegypti, é uma das doenças de transmissão vetorial mais importantes no mundo. Por não existir vacinas, a principal forma de controle desta doença é através do combate do vetor, que é feita principalmente com produtos químicos. Entretanto, com o aparecimento de populações de mosquitos resistentes, aumentou o interesse pelo combate integrado. Bioinseticidas à base de fungos entomopatogênicos são boas alternativas para integrar esta política de combate. Formulados fûngicos protegem os propágulos de fatores
abióticos e são específicos ao vetor alvo. Culicinomyces clavisporus possui especificidade para larvas de dípteros e infecta o hospedeiro por via oral. Portanto, formulados deste fungo devem conter aditivos palatáveis, garantindo assim a ingestão pela larva. O presente trabalho avaliou a atividade de conídios de C. clavisporus em larvas de A. aegypti, a preparação e estabilidade de pellets de celulose, formulado ou não com aditivo (10 ou 20% de farinha de soja) e/ou conídios de C. clavisporus, e a viabilidade de conídios expostos a diferentes temperaturas. Os pellets sem conídios foram avaliados quanto à estabilidade em água e a capacidade de promover o desenvolvimento de larvas, já pellets com conídios foram avaliados quanto a sua atividade larvicida. Os resultados obtidos mostraram que concentrações ≥ 105 conídios/ml são suficientes para matar todas as larvas. Pellets contendo 10% de farinha de soja parecem ser ideais para formulação fúngica e aplicação, já que se desintegram em água e não promovem o desenvolvimento rápido das larvas. Porém, pellets formulados com conídios apresentaram baixo efeito larvicida, o que pode ser explicado devido uma possível inviabilização dos conídios por calor durante o processo de secagem.
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Planejamento e identificação de novos compostos moluscicidas para Biomphalaria glabrata (Mollusca, Planorbidae) / Planning and discovery of new molluscicidal compounds for Biomphalaria glabrata (Mollusca, Planorbidae)Moreira Filho, José Teófilo 29 July 2016 (has links)
Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-08-23T18:34:08Z
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Previous issue date: 2016-07-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Schistosomiasis is a neglected tropical disease caused by parasites of the genus Schistosoma.
Worldwide, there are about 240 million people infected and have more than 700 million people
at risk of infection in 78 countries. Biomphalaria glabrata is the main intermediate host of
Schistosoma mansoni in Brazil. Niclosamide is the molluscicide recommended by the WHO.
However, this molluscicide is toxic to other species of aquatic animals and plants, has difficult
solubilization both in organic solvents and in water and also high cost. The utilization of in
silico methods for virtual screening of new compounds rationalizes costs, reduces the time and
also the number of animals in the early stages of research and development. The work’s
purpose was plan and identify new molluscicidal compounds potentially active against B.
glabrata through in silico methods. Known active and inactive molluscicidal compounds against
B. glabrata were selected from literature. Decoys were generated to validate the shape-based
models and QSAR models. First, the top 10,000 compounds from Chembridge and ZINC
"DrugsNow" databases were screened with the best shape-based model, selected using
TanimotoCombo socre function. Later, the activity of the compounds was predicted using
consensus QSAR models. Finally, the water solubility of the compounds was calculated for the
best molluscicidal candidates, leading to the identification of 20 potentially active compounds
as molluscicides against B. glabrata. / A esquistossomose é uma doença tropical negligenciada causada por parasitos do gênero
Schistosoma. No mundo, existem cerca de 240 milhões de pessoas infectadas e mais de 700
milhões de pessoas em 78 países sob risco de infecção. Biomphalaria glabrata é o principal
hospedeiro intermediário de Schistosoma mansoni no Brasil. A niclosamida é o moluscicida
recomendado pela Organização Mundial de Saúde. No entanto, este moluscicida é tóxico a
outras espécies de animais aquáticos e plantas, possui difícil solubilização tanto em solventes
orgânicos quanto em água e, também, possui alto custo. A utilização de métodos in silico para
triagem virtual de novos compostos racionaliza os custos, diminui o tempo e reduz número de
animais nas fases iniciais de pesquisas e desenvolvimento. O objetivo deste trabalho foi
planejar e identificar novos compostos moluscicidas potencialmente ativos contra B. glabrata
através de métodos in silico. Compostos ativos e inativos como moluscicidas contra B. glabrata
foram selecionados na literatura. Decoys foram gerados para a validação dos modelos de
similaridade pela forma 3D e modelos de QSAR. Primeiramente, os melhores 10.000
compostos das bases de dados Chembridge e ZINC "DrugsNow" foram triados com o melhor
modelo de similaridade pela forma 3D, utilizando a função de score TanimotoCombo.
Posteriormente, a atividade dos compostos foi predita utilizando os modelos de QSAR gerados.
Ao final, a solubilidade em água dos compostos com melhor atividade predita foi calculada,
levando à identificação de 20 compostos potencialmente moluscicidas contra B. glabrata.
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Desenvolvimento de terapia alternativa usando adjuvantes nanoestruturados para o tratamento de tumor experimental / Development of alternative therapy using nanostructured adjuvants for the treatment of experimental tumorsPraxedes, Layanny Kelly Silveira 08 April 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-04-08 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The capacity of the tumor has not present as immunogenic to the immune system is one of its escape mechanisms. The aim of this study was to evaluate the use of nanoparticles formed from poly Lactic-co-glycolic acid (PLGA) associated with aluminum hydroxide may potentiate the effect of these on the resolution of the tumor. Balb/c mice inoculated with Sarcoma 180 tumor cells were distributed into nine groups for the implementation of the various immunotherapeutic treatments involving the use of aluminum hydroxide, PLGA nanoparticles, and activated macrophages. The evaluation of the treatment was performed by analysis of the tumor, considering the weight reduction of the dissected tumor, morphological and histological analysis, and analysis of pro-inflammatory and immunosuppressive cytokines in the serum of mice. The group of mice treated with PLGA nanoparticle associated with aluminum hydroxide caused a significant regression of the tumor (p = 0.039) compared with untreated mice. The treatment involving macrophages and PLGA nanoparticles showed significant tumor regression compared to the group treated only with macrophages (p = 0.021). The groups that had significant tumor regression have high levels of IFN--4 and IL-10, differing from the profile found in the other groups. In the other treatments tested there was a reduction of the tumor mass, but without significant statistical results, and without changes in the levels of cytokines measured in the serum of animals. Therefore, it is believed that PLGA nanoparticle by their ability to release hydroxide in target cells controlled manner, can enhance the action of the adjuvant aluminum hydroxide. Further studies are needed to elucidate the mechanisms involved in this phenomenon, which support the other investigations / A capacidade do tumor de não se apresentar como imunogênico ao sistema imune constitui um dos seus mecanismos de escape. O objetivo do presente trabalho foi avaliar se o uso de nanopartículas formadas a partir de co-polímeros de ácido láctico-co-glicólico (PLGA), associada ao hidróxido de alumínio poderia potencializar o efeito destes na resolução do tumor. Camundongos Balb/c inoculados com células tumorais de Sarcoma 180 e distribuídos em nove grupos para a realização dos diferentes tratamentos imunoterápicos, envolvendo a utilização de hidróxido de alumínio, nanopartículas de PLGA e macrófagos ativados. A avaliação dos tratamentos foi realizada pela análise do tumor, considerando a redução do peso do tumor dissecado, análise morfológica e histopatológica e análise de citocinas pró-inflamatórias e imunossupressoras no soro dos camundongos. O grupo de camundongos tratados com nanopartículas de PLGA associadas ao hidróxido de alumínio promoveu uma regressão significativa do tamanho da massa tumoral (p = 0,039) comparado com camundongos não tratados. O tratamento envolvendo macrófagos e nanopartículas de PLGA apresentou uma regressão tumoral significativa comparada com o grupo tratado apenas com macrófagos (p = 0,021). Os grupos que tiveram regressão tumoral significativa apresentaram níveis elevados das citocinas IFN-, IL-4 e IL-10, diferenciando-se do perfil encontrado nos demais grupos. Nos outros tratamentos testados houve a redução da massa tumoral, porém sem resultados estatísticos significativos e sem grandes alterações nos níveis de citocinas dosados no soro dos animais. Logo, acredita-se que a nanopartícula de PLGA, por meio de sua capacidade de transporte e liberação do hidróxido nas células alvo de forma controlada, possa potencializar a ação do adjuvante hidróxido de alumínio. Outros estudos são necessários para a elucidação dos mecanismos envolvidos nesse fenômeno.
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Reposicionamento in silico de novos fármacos contra o schistosoma mansoni / Repositioning in silico of new drugs against Schistosoma mansoniArantes, Morgana Elias 14 March 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-03-14 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Schistosomiasis is a neglected tropical disease caused by parasites of the genus Schistosoma. In Brazil only Schistosoma mansoni transmits this disease. The World Health Organization estimated in 2012 approximately 249 million people at risk of acquiring this disease around the world. The main strategy to control this disease is the treatment of individuals living in endemic areas with Praziquantel. The drug praziquantel is used on a large scale in the treatment of schistosomiasis and currently there are reported cases of resistance, indicating the need to discover new drugs. In silico drug repositioning is a strategy that reduces the time and cost in the search of anti-schistosomal agents. This work used bioinformatics tools and methodology based on previous studies, as a means to identify potential new S. mansoni targets and drug homologs, consequently identifying potential new schistosomal drugs. A list was compiled with S. mansoni potential targets that are part of essential processes in the database TDR and the targets that are part of the tegument were obtained in the scientific literature. The file with S. mansoni targets contained 1376 targets, and of these only 61 targets associated with 399 drugs had homology with drug targets. After removal of duplicate drugs, drugs found in previous studies and after the analysis of the conservation of the active site only 28 S. mansoni targets associated with 102 drugs had 60% or more of the active site conserved. Some of the drugs had activity and are interesting to validate this study such as: artemether, lumefantrine, meloxicam. Among the drugs found 18 drugs were selected to be tested using the following criteria: low toxicity in vivo, expired patent and a value of log P interesting for oral administration. / A esquistossomose é uma doença tropical negligenciada causada por parasitos do gênero Schistosoma. No Brasil apenas o Schistosoma mansoni transmite esta doença. A Organização Mundial de Saúde estimou em 2012 cerca de 249 milhões de pessoas em risco de adquirirem esta doença por meio de diferentes espécies e países. A principal estratégia no controle desta doença é o tratamento dos indivíduos que vivem em áreas endêmicas com o fármaco praziquantel. O praziquantel é o fármaco utilizado em ampla escala no tratamento desta doença e atualmente há casos de resistência relatados, sendo necessário a descoberta de novos fármacos. O reposicionamento in silico é uma estratégia que reduz o tempo e o custo na busca de fármacos esquistossomicidas. Neste trabalho, por meio da ferramenta de bioinformática e com base em estudos anteriores, identificou-se potenciais novos alvos homólogos a alvos de fármacos em uso em humanos, identificando com isso, potenciais novos fármacos esquistossomicidas. Compilou-se uma lista com os potenciais alvos do S. mansoni que fazem parte das vias essências da base de dados do TDR e encontrou-se os alvos que fazem parte do tegumento na literatura científica. O arquivo com os alvos do S. mansoni continha 1376 alvos, sendo que destes apenas 61 alvos do S. mansoni possuía homologia com alvos de fármacos associados a 399 fármacos. Após a remoção dos fármacos duplicados, fármacos encontrados em estudos anteriores e após a análise da conservação do sítio ativo restou 28 alvos do S. mansoni associados a 102 fármacos que tinha 60% ou mais do sítio ativo. Encontrou-se alguns fármacos com atividade comprovada e validam o estudo como: artemeter, lumefantrina, meloxicam. Dentre os fármacos encontrados cerca 18 fármacos foram selecionados para serem testados e a sua atividade então comprovada, utilizando os seguintes critérios: baixa toxicidade in vivo, patente expirada e um valor de log P interessante para um fármaco de administração oral.
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Avaliação da ação da IL-17 em macrófagos peritoneais murinosMartins, Lohane Suzart 25 July 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-07-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / L. (L.) amazonensis is one of the species that cause American tegumentary leishmaniasis. Resistance to Leishmania infection is associated with Th1 lymphocytes, which produce IFN-γ and activate macrophages and promote the death of the parasites. However, during the infection, other T cells subtypes can develop, such as the Th17 subtype, which produce IL-17. The role of IL-17 is known in inflammatory diseases and infections with extracellular pathogens, and its function is associated to the migration and activation of neutrophils. In Leishmania infection, it is not clear whether this cytokine would influence the activation of a phenotype that controls infection. Aim: To assess whether IL-17 interferes with activation of murine macrophages and with their Leishmania amazonensis leishmanicidal. Methods: Thyoglycolate-elicited peritoneal macrophages from BALB/c or C57BL/6 mice were primed with IL-17, IFN-γ or IL-4, activated or not with lipopolysaccharide (LPS) and infected with L. (L.) amazonensis promastigotes. Culture supernatants were harvested 48 h after the stimulus to assess nitric oxide (NO) and IL-12p40 production. The cells were used to determine the phagocytic, leishmanicidal and arginase activity. Results: Macrophages from BALB/c and C57BL/6 mice stimulated with IL-17 and LPS produced IL-10 and increased arginase activity. IL-17 was not able to induce NO production by these cells, but promoted a small increase in IL-12p40 secretion by C57BL/6 mice macrophages. IL-17 favored the proliferation of Leishmania in macrophages from BALB/c mice, but not in C57BL/6 mice. A synergism was observed between IL-17 and IL-4 that increased IL-10 production and arginase activity in macrophages from BALB/c mice. In macrophages from C57BL/6 mice, however, a synergism was observed between IL-17 and IFN-γ in the stimulation of NO production. Conclusion: These results suggest that IL-17 may participate in the activation of macrophages toward either phenotype depending on the mouse strain. The finding that IL-17 impairs the control of L. (L.) amazonensis in BALB/c mice was not observed in C57BL/6 mice. IL-10 production in macrophages stimulated with IL-17 suggests a regulatory role of this last cytokine. / A L. (L.) amazonensis é uma das espécies que causam a leishmaniose tegumentar americana. A resistência à infecção é associada à linfócitos Th1, os quais produzem IFN-γ que ativam macrófagos e promovem a morte do parasito. No entanto, durante a infecção, há o desenvolvimento de outros perfis de linfócitos, como o Th17, que produz IL-17. O papel da IL-17 é bem descrito em doenças inflamatórias e infecções por patógenos extracelulares, sendo que sua função está relacionada com a quimiotaxia e ativação de neutrófilos. Quanto à infecções por patógenos intracelulares, como a leishmânia, não está claro se esta citocina poderia agir interferindo no perfil dos macrófagos e, consequentemente, no controle da doença. Objetivo: avaliar se a IL-17 é capaz de influenciar na ativação dos macrófagos e nos mecanismos leishmanicidas de macrófagos murinos infectados com L. (L.) amazonensis. Métodos: macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c e C57BL/6 foram estimulados com IFN-γ, IL-4 ou IL-17, ativados ou não com LPS e infectados com promastigotas de L. (L.) amazonensis. O sobrenadante foi utilizado para avaliar produção de NO, IL-12p40 e IL-10 e as células remanescentes usadas para avaliar a atividade de arginase, a atividade fagocítica e leishmanicida. Resultados: macrófagos de camundongos BALB/c e C57Bl/6 estimulados com IL-17 e LPS produziram IL-10 e aumentaram a atividade de arginase. A IL-17 não foi capaz de induzir a produção de NO pelos macrófagos, mas promoveu um pequeno aumento da produção de IL-12p40 em macrófagos de C57BL/6. A IL-17 favoreceu a proliferação da L. (L.) amazonensis em macrófagos de camundongos BALB/c, mas não nos de camundongos C57BL/6. Observou-se um sinergismo entre IL-17 e IL-4 na produção de IL-10 e a atividade de arginase em macrófagos de camundongos BALB/c. Em macrófagos de camundongos C57BL/6, por sua vez, foi observado sinergismo entre IL-17 e IFN-γ para a produção de NO. Conclusão: A IL-17 pode estar relacionada tanto com a ativação clássica de macrófago quanto com sua ativação alternativa. Porém, a morte da leishmânia é prejudicada em macrófagos de BALB/c estimulados com IL-17. A indução da produção de IL-10 em macrófagos estimulados com IL-17 sugere um potencial regulador desta última citocina.
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Avaliação da imunoglobulina E (IgE) anti - leishmania como marcador de prognóstico na leishmaniose tegumentar americana / Evaluation of the use of immunoglobulin E (IgE) anti - leishmania as marker of prognosis in american Tegumentary leishamaniasisLeão, Natallia Moreira Lopes 02 July 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-07-02 / Outro / Leishmaniases comprise a disease group with a great epidemiological and clinical diversity. The detection of IgE can be an important tool for prognosis of American Tegumentary Leishmaniasis (LTA). The objective of this present work was to assess if the immunoglobulin E (IgE), anti - Leishmania can be used as biomarkers for prognosis in LTA. The standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was carried out applying antigenic extract of L. (V.) braziliensis to detect IgE specific for leishmania in LTA patients’ plasmas. It was determined that the dilution which differed positive from negative samples was 1/20 for plasma and 1/100 for peroxidase labeled anti-IgE antibody. Forty LTA patients were assisted in the laboratory of endemic diseases at AnuarAuad Hospital (HDT/GO), Goiânia - GO, between 2009 and 2012. Twenty-seven of those patients showed localized cutaneous leishmaniasis (LCL) and 1 showed mucosal leishmaniasis (LM). Twenty-seven of those patients were male and thirteen were female. The LCL patients’ ages varied between 18 to 65 years and LM patients’ ages varied from 25 to 61 years. The LCL patients showed 1 to 20 lesions whose sizes varied from 0,2 to 7 cm and the duration of the lesion diagnostic varied from 0,5 to 4 months, and in LM patients it varied from 0,5 to 120 months. The positive result of the AH, IDRM, IF and Elisa lab tests for IgG was 80%, 67,5%, 42,5% and 87,5% respectively. A cross - reactivity analysis was performed using samples of patients with blastomycosis, malaria, visceral leishmaniasis (LV), Chagas disease and toxoplasmosis and only one sample from an LV patient (10%) was positive, the test was 98,3% precise. The specific IgE detection occurred in 40% of the LTA patients. No correlation between the quantity of IgE and IDRM results was found. No correlation between the index of IgE and the number of lesions in LCL patients was observed. No association between clinical cure or no cure and the index of IgE reactivity was detected. A higher number of patients’ samples are necessary to obtain more accurate results. / As leishmanioses compreendem um grupo de doenças, com grande diversidade epidemiológica e clínica. A detecção de IgE pode constituir uma ferramenta valiosa para o prognóstico da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA). O objetivo do presente trabalho foi avaliar se Imunoglobulina E (IgE) anti - Leishmania podem ser utilizados como biomarcadores de prognóstico na LTA. Foi realizada a padronização do ensaio imunoenzimático (ELISA) utilizando extrato antigênico de L. (V.) braziliensis para detecção de IgE específica para leishmânia, nos plasmas de pacientes com LTA. Foi determinado que a diluição que discriminava amostras positivas de negativas era de 1/20 para o plasma e 1/100 para o anticorpo anti-IgE marcado com peroxidase. Dos 40 pacientes com LTA atendidos no ambulatório de endemias do Hospital Anuar Auad (HDT/GO), Goiânia-GO, entre 2009 e 2012, 27 apresentavam leishmaniose cutânea localizada (LCL) e 1 leishmaniose mucosa (LM). Destes pacientes, 27 eram do sexo masculino e 13, feminino. A idade dos pacientes com LCL variou entre 18 a 65 anos e com LM, de 25 a 61 anos. Os pacientes com LCL apresentavam de uma a 20 lesões, os tamanhos das lesões variaram entre 0,2 a 7 cm e o tempo das lesões ao diagnóstico variou de 0,5 a 4 meses e com LM de 0,5 a 120 meses. A positividade dos testes laboratoriais AH, IDRM, IF e Elisa para IgG foi de 80%, 67,5%, 42,5% e 87,5% respectivamente. Foi realizada análise de reatividade cruzada com amostras de pacientes com blastomicose, malária, leishmaniose visceral (LV), doença de chagas e toxoplasmose e apenas uma amostra de paciente com LV (10%) foi reagente, a especificidade do teste foi de 98,3%. A detecção de IgE específica ocorreu em 40% dos pacientes com LTA. Não houve correlação entre as quantidades de IgE e os resultados da IDRM. Não foi observada correlação entre os índices de IgE e o número de lesões em pacientes com LCL. Não foi detectada uma associação entre cura ou não cura clínica e os índices de reatividade de IgE. Um aumento do número de amostras de pacientes é necessário para melhorar a acurácia dos resultados.
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Efeito da umidade relativa sobre o desenvolvimento de micélio e conídios de microescleródios de metarhizium anisopliae em formulação peletizada / Effect of relative humidity on the development of mycelium and conidia of microsclerotia of metarhizium anisopliae in pelletized formulationCatão, Alaine Maria Lopes 26 February 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-02-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Metarhizium anisopliae has a worldwide repertation in microbial control due to its entomopathogenic characteristics, infecting a wide range of insects. High relative humidity is a key factor in the development of mycoses during extra-cuticular phases. In adverse conditions, M. anisopliae can produce resistance structures formed by hyphal aggregates. Upon high humidity these aggregates are capable of producing new conidia that can cause infection in the target host. However, the fungus not always finds suitable conditions of humidity to develop itself. To overcome constraints related to suboptimal humidities, formulations play a pivotal role, and formulated products containing additives, such as humectants, have a great potential to accomplish this goal. The objective of this study was to develop a pelletized formulation of hyphal aggregates of M. anisopliae IP 46 with or without addition of a humectant, and further evaluate the effect of relative humidity on conidia production of M. anisopliae in laboratory conditions. A screening with glycerin, propylene glycol and PEG 400 was performed to find out which humectant was best for water absorption. Hyphal aggregates were produced in specific semi-synthetic liquid medium. The biomass was filtered and pellets prepared with microcrystalline cellulose or vermiculite amended with or without glycerine. The relative humidity was assessed under controlled humidity gradient generated by aqueous solutions of NaCl. The water absorption rate with the glycerin appeared to be greater when compared to propylene glycol and PEG 400. Among the additives tested with glycerin, microcrystalline cellulose absorbed greater water content than the vermiculite, since the former has humectant properties increasing water absorption. The largest number of conidia, both for pellets with vermiculite and cellulose, was produced at 100% RH and the lowest production was achieved at 93 % RH. At humidities < 93% there was no conidia production up to 20 days, indicating a strong humidity effect in the fungal sporulation. An accumulation of water could be seen on pellets with 40% glycerin at humidity ≥ 91% and at 93% RH on pellets with glycerin 10%. This high water content could have been prevented the fungal growth. In pellets with addition of 10% glycerin, only pellets exposed to 91% RH produced conidia, both for cellulose pellets, and for vermiculite pellets. / Metarhizium anisopliae chama atenção no controle microbiano devido às suas características entomopatogênicas, infectando uma ampla gama de insetos. Umidade relativa alta é um fator chave no desenvolvimento da micose durante as fases extra-cuticulares. Em condições adversas, M. anisopliae consegue produzir estruturas de resistência, denominadas agregados de hifas. Em umidade alta, esses agregados são capazes de produzir novos conídios que, por sua vez, podem causar infecção no hospedeiro alvo. Entretanto, nem sempre o fungo encontra circunstâncias ideais de umidade para se desenvolver. Para contornar problemas relacionados a umidades suboptimais, o desenvolvimento de formulações é de suma importância, e produtos formulados contendo aditivos, tais como umectantes, apresentam grande potencial. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma formulação peletizada de agregados de hifas de M. anisopliae IP 46 com adição ou não de umectante, e avaliar o efeito que a umidade relativa exerce sobre a produção de conídios de M. anisopliae em condições de laboratório. Uma triagem com glicerina, propilenoglicol e PEG 400 foi realizada para saber qual melhor umectante em relação à absorção de água. Agregados de hifas foram produzidos em meio líquido. A biomassa foi filtrada e péletes foram preparados com celulose microcristalina ou vermiculita com ou sem glicerina. A umidade relativa foi avaliada através de gradiente de umidade controlada com soluções aquosas de NaCl. A absorção de água com a glicerina foi maior quando comparada com propilenoglicol e PEG 400. Entre os aditivos testados com glicerina, celulose microcristalina absorveu mais água do que o aditivo vermiculita, visto que a celulose tem propriedades umectantes aumentando a absorção de água. O maior número de conídios, tanto para péletes com vermiculita, como para celulose foi produzido a 100% UR e a menor produção foi com 93% UR. Em umidades < 93% não houve produção de conídios até 20 dias, evidenciando o forte efeito da umidade na produção de conídios. Um acúmulo de água pôde ser observado em péletes com 40% de glicerina em umidade ≥ 91% e com 93% UR nos péletes com glicerina 10%. Essa concentração pode ter sido alta e impediu o crescimento do fungo. Nos péletes com adição de glicerina 10 %, apenas péletes expostos a 91% UR que produziram conídios, tanto para péletes de celulose, como para péletes de vermiculita.
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