Residencia para optar al Título de Profesional Especialista en Farmacia Clínica y Atención Farmacéutica / El cumplimiento a la medicación antirretroviral (ARV) es un elemento clave para el éxito del tratamiento en pacientes que viven con el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). Diferentes estudios internacionales consignan que la terapia en esta patología entrega resultados exitosos cuando se alcanza un cumplimiento ≥ 95%. El objetivo general de este estudio fue evaluar el grado de cumplimiento en pacientes pediátricos en tratamiento con fármacos antirretrovirales en el que sus cuidadores responsables reciben intervenciones educacionales durante la dispensación. Se realizó un estudio piloto de seguimiento prospectivo de 6 meses con intervención educacional al paciente pediátrico que es atendido ambulatoriamente en el Hospital Dr. Exequiel González Cortés del Servicio de Salud Metropolitano Sur, determinando el grado de cumplimiento con el tratamiento antirretroviral (TAR) por medio de métodos indirectos. En el presente trabajo se utilizaron varios métodos, tales como el cuestionario SMAQ, registro de dispensación, recuento de medicación y una escala visual análoga, los que se aplicaron mensualmente al cuidador responsable. Se realizaron tres intervenciones educacionales y se aplicó un punto de corte de ≥ 95% como indicador de resultado del grado de cumplimiento con el TAR. Se utilizó estadística descriptiva para los análisis del estudio. Un total de 16 pacientes cumplieron con los criterios de selección y sus cuidadores responsables aceptaron firmar el formulario de consentimiento informado, 14 de ellos se clasificaron como cumplidores y 2 como incumplidores al final del estudio. Los pacientes cumplidores presentaron cargas virales indetectables al final del estudio y con un mayor grado de conocimiento antes y después de las intervenciones educativas en los tres temas evaluados en comparación con los pacientes clasificados como incumplidores. El establecimiento de métodos de cálculo de cumplimiento con el TAR permitió detectar a los pacientes potencialmente incumplidores en forma precoz, lo que ayudó al equipo del Programa de VIH/SIDA del Hospital Exequiel González Cortés a definir estrategias para mejorar el cumplimiento con el tratamiento / Compliance with antiretroviral medication (ARV) is a key element for successful treatment in patients living with Human Immunodeficiency Virus (HIV). Several international studies have reported that therapy for this disease is successful when the adherence to the treatment is ≥ 95%. The aim of this study was to evaluate the level of compliance in pediatric patients being treated with antiretroviral medication when the people responsible for that treatment receive educational intervention during dispensing period. A 6 month prospective follow-up pilot study was carried out with educational intervention for the pediatric patients who were assisted as outpatients in the Hospital Dr. Exequiel González Cortés, which belongs to the South Metropolitan Health Service. The compliance with antiretroviral therapy (ART) was determined through several indirect methods, such as the SMAQ questionnaire, dispensing records, medication count sheet and a visual analog scale. These evaluation measures were done monthly to the responsible caregiver. There were three educational interventions and a cutoff of ≥ 95% as a performance indicator of the level of compliance to ART was applied. Data analyses were performed using descriptive statistics. A total of 16 patients met the selection criteria and their responsible caregivers agreed to sign the informed consent form. At the end of the study a total of 14 patients were classified as compliers and 2 as a non-compliant. Compliant patients showed undetectable viral loads and a greater level of knowledge before and after educational interventions in the three items assessed in comparison with patients classified as noncompliant. The establishment of methods to determine compliance with antiretroviral treatment would allow the earlier detection of potentially noncompliant patients, which would help the HIV / AIDS Program Team from the Hospital Exequiel González Cortés to define strategies to improve adherence to antiretroviral treatment

Notre laboratoire a développé un prototype de vaccin unique contre le VIH-1 / SIDA. C'est un un lentivecteur ADN non-intégratif qui a été testé dans une étude pilote utilisant des modèles animaux. L'étude a montré la protection de tous les macaques (6/6) vaccinés et la réponse était composée de cellules effectrices (EM) et des cellules T mémoire centrale (CM). Plus important encore, elle contenait également des cellules antigène spécifique à haute capacité de prolifération contenant des cellules T mémoire de type cellule souche (TSCM). Durant le travail de cette thèse, le génome vaccinal a été encore amélioré en commutant son enveloppe dotée de tropisme CXCR4 contre des enveloppes à tropisme CCR5 de virus de clade B (WARO) obtenu à partir d'un patient infecté de façon chronique et de trois souches de VIH-1 de Clade C transmetteur foundateur (T/F) de patients Zambiens. Une deuxième amélioration du vaccin a été réalisée en modifiant le génome afin qu’il puisse incorporer des adjuvants moléculaires capables d'améliorer d’avantage son immunogénicité.Etant donné que le lentivirus humain VIH-1 a développé plusieurs stratégies complexes pour persister, l’autre partie de la thèse a été consacrée à développer un outil pour comprendre la latence dans les cellules T CD4 + de la mémoire infectée. Les cellules latentes ont des génomes d'ADN viral intégrés non exprimés. Un des principaux mécanismes de cette latence est l'absence de transactivation du promoteur LTR par Tat. Les développements récents de la thérapie antivirale hautement active (HAART) efficace pour contrôler les cellules infectées circulantes et dans les tissus reste inefficaces contre les cellules du réservoir composé de cellules infectées latentes. Un des obstacles pour ce type d'études est l'absence de prototypes de lentivirus de primates appropriés incapables de d’effectuer la latence pour s’en servir comme modèle d'infection extrême dans l'évaluation. Nous avons émis l'hypothèse qu'un génome SHIV réplicatifdont l’expression est sous le contrôle de LTR du CAEV, Tat-indépendant doté de promoteur constitutif constituera un outil précieux pour de telles études. Nous avons conçu des LTRs chimères de CAEV portant les séquences d'attachement de celles du SIV à leurs extrémités et nous les ont utilisés pour contrôler l’expression du génome complet de SHIV-KU2. La construction résultante est SHIV-YCC qui devrait générer un virus qui ne n’effectue pas de latence en absence de Tat. Nous avons observé que les cellules transfectées avec le génome SHIV-YCC produisent des protéines SHIV qui s’assemblent en particules infectieuses excrétées des cellules. Les virions sont capables d'infecter les lymphocytes T CD4 + cibles tant dans les PBMC primaires que dans les lignées cellulaires. Le passage en série du virus dans les PBMC de macaques augmente la réplication et l'infectiosité du virus. SHIV-YCC est le premier lentivirus chimérique réplicatif de primates qui exprime de manière constitutive toutes les protéines virales. Ce nouveau modèle offre la possibilité d'étudier les événements précoces par lesquels le provirus subit une latence, en particulier lorsque le gène de l'enveloppe sera remplacé par celui du T / F CCR5 tropique VIH-1. / Our lab has previously described the generation of a unique vaccine prototype against HIV-1/AIDS. It is a non-integrative DNA lentivector vaccine tested in pilot studies in animal models of HIV vaccine. The non-human primate study showed protection of all 6/6 macaques and immune response correlates were composed of a variety of effector (EM) and central memory (CM) T cells. More importantly, they also contained high proliferating antigen specific cells containing a type of stem cell-like memory T cells (TSCM). In this thesis the vaccine was enhanced further by switching the CXCR4 envelope of the vaccine to CCR5 tropic envelopes such as the clade B WARO obtained from a chronically infected patient and a series of three transmitted/founder (T/F) HIV Clade C strains from Zambia. To improve further the vaccine we developed new strategies to incorporate molecular adjuvants able to enhance and sustain the newly elicited immune responses.Since the human lentivirus HIV-1 has developed multiple complex strategies to persist, the focus of the next part of my thesis was to develop a tool to ease and better understand the underlying mechanisms of latency in infected memory CD4+ T cells. Latently-infected cells have non-expressed integrated viral DNA genomes. One of the main mechanisms of this latency is absence of Tat transactivation of the LTR promoter. The recent focus post development of efficient highly active antiviral therapy (HAART), is the cure of the reservoir of latently infected cells. One of the obstacles for this type of studies is the lack of proper primate lentivirus prototypes incapable of undergoing latency as extreme infection model in the evaluation. We hypothesized that a replication-competent SHIV genome driven by the Tat-independent constitutive-expression LTRs of CAEV will be a valuable tool for such studies. We designed chimeric CAEV LTRs bearing the attachment sequences of SIV at their extremities and used them to drive the complete genome of SHIV-KU2. The resulting construct is SHIV-YCC which is expected to generate virus that will not undergo latency due to absence of Tat. We found that cells transfected with SHIV-YCC genome produce SHIV proteins that are assembled into infectious particles released out of the cells. Virions are able to infect target CD4+ T cells both in primary PBMCs and cell lines. Passaged virus in macaques PBMCs increased virus replication and infectivity. SHIV-YCC is the first chimeric primate replication-competent lentivirus that constitutively expresses all viral proteins. This new model offers the possibility of studying the early events by which provirus undergoes latency particularly when the envelop gene will be replaced with that of the T/F CCR5 tropic HIV-1.

La tuberculose est une cause majeure de mortalité chez les enfants infectés par le VIH, représentant plus d'un tiers de la mortalité chez ceux-ci. Il n'existe actuellement pas d’estimation précise de la prévalence du VIH dans le million de cas de tuberculose pédiatrique annuel. Cependant, les décès liés au VIH pourraient représenter jusqu'à 1/5 de tous les décès dus à la tuberculose chez les enfants. Le diagnostic de la tuberculose est difficile chez les enfants du fait de sa nature paucibacillaire et des difficultés de recueil d’échantillons respiratoires. Il constitue un obstacle majeur à l'accès au traitement. Plus de 96% des décès pourraient survenir chez des enfants non traités. Les enfants infectés par le VIH présentent des difficultés diagnostiques accrues et une mortalité plus élevée. Notre objectif principal était de contribuer à l'amélioration du diagnostic de la tuberculose chez les enfants infectés par le VIH par le développement d'un algorithme diagnostic. Ce travail est basé sur l'étude ANRS 12229 PAANTHER 01 qui a recruté 438 enfants séropositifs âgés de 0 à 13 ans suspects de tuberculose dans 8 hôpitaux du Burkina Faso, du Cambodge, du Cameroun et du Vietnam d'avril 2011 à mai 2014. La mortalité était élevée (19,6%) chez les enfants naïfs de traitement antirétroviral (TARV), malgré l'accès au traitement. Elle était plus élevée les cas confirmés par l’Xpert MTB/RIF (Xpert) ou la bacilloscopie. Le traitement antituberculeux était associé à une diminution de la mortalité chez les tuberculoses confirmées et non confirmées et à un retard problématique au début du TARV, celui-ci étant associé à une réduction massive de la mortalité quand débuté durant le premier mois de suivi. L'évaluation de la performance diagnostique de l’Xpert sur des échantillons alternatifs, y compris des aspirations naso-pharyngées (ANP), des échantillons de selles et le string test a montré que la combinaison d’un ANP et d’un échantillon de selles avait une faisabilité (100%) et une sensibilité (75,9%) élevées par rapport aux méthodes standards (crachats ou aspirations gastriques). L’algorithme diagnostique a inclus 11 prédicteurs dont des symptômes et des signes, le contage, les résultats de radiographie pulmonaire (RP) et d'échographie abdominale, ainsi que les résultats du Quantiferon Gold In-Tube (QFT). L’aire sous la courbe de ROC était de 0,866 lorsque Xpert était inclus. Le score développé à partir du modèle avait une bonne performance diagnostique globale. L'interprétation de la RP avait un accord inter-relecteurs médiocre à passable pour la détection de lésions compatibles avec la tuberculose chez les 403 enfants avec toutes les revues disponibles, et une précision diagnostique limitée (sensibilité 71,4%, spécificité 50,0%) pour le diagnostic de la tuberculose chez 51 cas et 151 contrôles vivants sans traitement à 6 mois. Enfin, nous présentons des travaux sur l'utilisation chez les enfants infectés par le VIH du standard de référence recommandé pour les études diagnostiques sur la tuberculose, décrivant les changements dans la classification résultant d'une mise à jour récente et soulignant les limites de ces standards. Ce travail souligne la nécessité d'un diagnostic rapide de la tuberculose chez les enfants infectés par le VIH afin de réduire la mortalité. Il propose d'améliorer le diagnostic par une approche alternative à la confirmation microbiologique et le développement d'un algorithme rapide de décision de traitement chez les enfants à haut risque de mortalité. Il met en évidence les défis pratiques et méthodologiques liés à l'utilisation de la RP et du standard de référence diagnostique dans cette population. Le projet TB Speed permettra la validation externe de l'algorithme chez les enfants infectés par le VIH et contribuera à l'amélioration du diagnostic de la tuberculose et à la réduction de la mortalité chez les enfants en décentralisant la confirmation microbiologique et le diagnostic dans des pays à faible revenu. / Tuberculosis remains a major cause of death in HIV-infected children, accounting for more than 1/3 of mortality in this group. There are currently no estimates of HIV prevalence in the one million childhood tuberculosis cases every year. However, it is estimated that HIV-related deaths account for up to 1/5 of all tuberculosis deaths in children. Due its paucibacillary nature and difficulties in collecting respiratory specimen, tuberculosis diagnostic is challenging in children and is a major barrier hampering access to treatment. It is estimated that more than 96% of tuberculosis death could occur in children not receiving treatment. HIV-infected children present greater diagnostic challenges in a context of higher mortality. The main objective of this thesis was to contribute to the improvement of tuberculosis diagnosis in HIV-infected children by the development of a diagnostic algorithm. This work is based on the ANRS 12229 PAANTHER 01 study which enrolled 438 HIV infected children aged 0 to 13 years presenting with a suspicion of tuberculosis in 8 hospitals from Burkina Faso, Cambodia, Cameroon, and Vietnam from April 2011 to Mai 2014. The mortality was high [50 deaths (19.6%)] in 266 art-naïve children from this study, despite access to antiretroviral and tuberculosis treatment. It was significantly higher in those with bacteriological confirmation by Xpert MTB/RIF (Xpert) or smear microscopy. Introduction of tuberculosis treatment led to decreased mortality in both confirmed and unconfirmed tuberculosis and to delayed ART introduction, which is a problem, as ART was associated with a more than 10-fold reduction in mortality when started during the first month of follow-up. The assessment of the diagnostic performance of Xpert on alternative specimens including nasopharyngeal aspirates (NPA), stool samples, and string tests showed that a combination of NPA and stool samples had high feasibility (100%) and sensitivity (75.9%) and a yield similar to standard specimen collection methods consisting in sputum samples or gastric aspirates. We developed a tuberculosis diagnostic algorithm for HIV-infected children. The model identified 11 predictors including some symptoms and signs, history of contact, chest radiograph (CXR) and abdominal ultrasonography findings, and Quantiferon TB Gold In-Tube (QFT) results. Its area under the receiver operating characteristic curves was 0.839, and 0.866 when Xpert was included. The score developed from the model had a good diagnostic performance overall. CXR interpretation showed poor to fair inter-reader agreement for the detection of lesions consistent with tuberculosis in 403 children with all reviews available, and limited diagnostic accuracy (sensitivity 71.4%; specificity 50.0%) for the diagnosis of tuberculosis in 51 culture confirmed cases and 151 controls alive without treatment at 6 months. At last, we present work on the use of the recommended tuberculosis reference standard for diagnostic studies in HIV-infected children, describing changes in classification occurring from a recent update and highlighting limitations of these reference standards. Overall, this work contributes to highlight the need for an accurate and timely tuberculosis diagnosis in HIV-infected children to reduce mortality. It proposes two major ways to improve diagnosis by an alternative approach to microbiological confirmation and the development of an algorithm for prompt treatment decision in children with a high risk of mortality. It also highlights practical and methodological challenges related to the use of CXR and diagnostic reference standards in this population. The newly funded TB Speed project will enable external validation of the algorithm in HIV-infected children. By decentralizing Xpert performed on NPA and stool in district health systems in low-income countries, it will further contribute to the overall goal of improving tuberculosis diagnosis and reducing mortality in children.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Describe las barreras identificadas por el personal de salud para el tamizaje de VIH/Sida a población indígena en establecimientos de salud de las regiones Loreto, Madre de Dios, Huánuco y Amazonas. Estudio mixto, en el cual la fase cualitativa es de tipo exploratoria mientras que la fase cuantitativa se basa en un estudio descriptivo transversal de carácter exploratorio. Las entrevistas son grabadas, transcritas, y codificadas mediante el software Atlas.ti a partir de un análisis temático. Para las encuestas se realiza un análisis estadístico descriptivo, con medidas de frecuencia y medidas de tendencia central. La validación de dicha encuesta es realizada mediante apreciación de juicio de expertos. Se realiza una prueba piloto con el fin de realizar el análisis de confiabilidad de la encuesta con la prueba Alfa de Cronbach, obteniéndose como valor final a 0,730. Se concluye que las principales barreras que limitan el tamizaje en población indígena amazónica son en su mayoría de índole sociocultural y las vinculadas al sistema de salud. Resulta necesario que las estrategias de captación y oferta de la prueba de VIH tomen en cuenta estos aspectos. / Tesis

De nombreux obstacles freinent le développement d'un vaccin efficace contre le VIH. Pour franchir ces barrières, le recours aux adjuvants est une option prometteuse. Dans ce contexte, l'objectif de ce doctorat est l'évaluation de combinaisons de ligands de PRR et de particules biodégradables pour la vaccination muqueuse. La première partie de l'étude vise à analyser la valeur ajoutée de molécules hybrides composée de deux ligands de PRR comparée à la co-administration des deux agonistes. Des molécules stimulant TLR7 et TLR2 puis TLR7 et NOD2 ont été évaluées. Nous avons démontré l'intérêt de l'association de ligands de PRR au sein d'une même molécule, pour l'induction de réponses immunitaires systémiques et muqueuses. Des études récentes ont montré l'intérêt d'agonistes de STING comme adjuvant vaccinaux. Nous avons étudié l'induction de réponses immunitaires par les agonistes de STING, administrés par voie parentérale ou muqueuse. Nous avons démontré le fort potentiel de ligands de STING pour l'induction de réponses cellulaires et muqueuses. Lors de ces études, nous avons démontré que l'intérêt de la vectorisation d'agonistes de PRR dépend de la molécule. En effet, bien que la vectorisation d'une molécule hybride TLR7/TLR2 n'ait pas d'impact sur la réponse immunitaire induite, la vectorisation d'agonistes de STING potentialise leur effet immunostimulant. Pour finir, nous avons montré que la voie d'administration a un impact sur la réponse immunitaire induite. Afin de mieux comprendre les mécanismes mis en jeu, une étude de biodistribution des formulations de NP de PLA après administration par voie systémique ou muqueuse a été réalisée / There are many barriers to the development an effective HIV vaccine. The use of adjuvants is a promising option to overcome these obstacles. In this context, the objective of this PhD is the evaluation of combinations of PRR ligands and biodegradable particles for mucosal vaccination.The first part of this study aimed at assessing the added value of hybrid molecules composed of two PRR ligands compared to the co-administration of the two agonists. TLR7 and TLR2 stimulating molecules followed by TLR7 and NOD2 were evaluated. We demonstrated the interest of the association of PRR ligands within the same molecule for the induction of systemic and mucosal immune responses.Recent studies showed the interest of STING agonists as a vaccine adjuvant. We investigated the induction of immune responses by STING agonists administered parenterally or mucosally. We confirmed the strong potential of STING ligands for the induction of cellular and mucosal responses.In these studies, we demonstrated that the interest of vectorization of PRR agonists depends on the molecule. Indeed, although the encapsulation of a TLR7/TLR2 hybrid molecule has no impact on the induced immune response, the vectorization of STING agonists potentiates their immunostimulatory effect.Finally, we showed that the route of administration has an impact on the immune response induced. In order to better understand the mechanisms involved, a biodistribution study of PLA NP formulations after systemic or mucosal administration was performed

Sur le plan mondial, le nombre de patients infectés par le VIH (PVVIH) sous traitement antirétroviral (TARV) est en constante augmentation. Les pays aux ressources limitées (PRL) sont les plus touchés par l’épidémie et de fortes inégalités existent ce malgré des objectifs ambitieux fixés par les Nations Unies en 2015 (90-90-90). Le suivi biologique nécessaire des patients sous TARV est connu et les avantages de la mesure de la charge virale (CV) sont bien établis en termes de détection précoce de l'échec thérapeutique, de détection de la non-observance au TARV et de prévention de l’accumulation de résistances. Cependant, dans les PRL et notamment en zone décentralisée, l’accès à la mesure de la CV reste très restreint. Les obstacles sont divers : difficulté d’accès pour les patients à un laboratoire en capacité d’effectuer cette mesure, manque en ressources humaines et matérielles. L’utilisation des Dried Blood Spot (DBS) comme support de prélèvement permet de surmonter ces barrières notamment du fait de sa simplicité, de l’absence de nécessité de chaine de froid et de l’utilisation des machines existantes.L’objectif de ce travail de thèse est de proposer et d’évaluer une stratégie afin d’améliorer le suivi virologique des PVVIH sous TARV issus de zones décentralisées de PRL en montrant la faisabilité et la validité d’un système de collecte de DBS afin de donner accès à la mesure de la CV aux patients suivis dans des centres non dotés des machines couteuses et de la logistique nécessaire à la réalisation de celle-ci. Une méta-analyse sur le contrôle virologique en Afrique Sub-saharienne a mis en évidence un taux de succès virologique en « intention de traiter » de 65.4% [61.8_69.1] et de 56.8% [51.3-62.4] à respectivement 12 et 24 mois de TARV ainsi qu’une proportion de succès significativement plus élevée rapportées dans les essais cliniques comparativement à ceux issus des cohortes. Ensuite, plusieurs projets ont été menés afin d’obtenir des résultats dans des conditions de vie réelle dans deux zones géographiques différentes: le Cameroun et le Vietnam. Au Cameroun, une étude menée dans 12 sites décentralisés a permis d’évaluer 2215 patients dont 937 ont été évalués virologiquement. Cette étude a montré un faible taux de rétention avec 63.3%, 53.5% et 39.9% à respectivement 12, 24 et 36 mois de l’initiation du TARV. Le taux de suppression virologique était très bas avec 66.6%, 62.7% et 59.8% à respectivement 12, 24 et 36 mois de TARV. Le profil des résistances virales analysé chez les patients ayant une CV>5000 cp/mL a montré une accumulation importante des résistances virales, s’aggravant au cours du temps et hypothéquant les options. Au Vietnam, deux études incluant 198 et 203 patients, ont été menées afin d’évaluer les performances de la mesure de la CV sur DBS comparativement au plasma. Trois techniques de mesure de la CV issues de deux industriels ont été évaluées. Une sensibilité de 93.3% [81.7–98.6], 90.1% [80.7-95.9] et 54.9% [40.3–68.9] a été trouvé avec respectivement l’ancien et le nouveau protocole fournis par Abbott et le nouveau protocole fourni par Roche (FVE). La spécificité retrouvé a été respectivement de 94.8% [90.0–97.7], 96.2% [91.4-98.8] et 100% [97.5–100]. Ainsi, à travers ces travaux nous avons montré que l’utilisation des DBS est faisable, immédiatement disponible et d’un niveau de performance acceptable. Elle permet d’apporter des données précieuses tant au niveau individuel, collectif que programmatique. L’utilisation des DBS devrait être intégrée à la stratégie d’expansion de l’accès à la CV. Le suivi virologique des patients est un enjeu de Santé Publique majeur dans un contexte d’utilisation en 1ère ligne de TARV de molécules à barrière génétique faible à la résistance, d’augmentation des résistances transmises et acquises et d’un taux d’incidence encore élevé de l’infection. / Worldwide, the number of HIV-infected patients (PLWHA) on antiretroviral therapy (ART) is growing steadily. Low- and Middle-Incomes Countries (LMICs) are the most affected and strong inequalities still exist despite ambitious goals set by the United Nations in 2015 (90-90-90). The required biological monitoring of patients on ART is well known and the benefits of viral load (VL) measurement are well established, in terms of early detection of treatment failure, detection of non-adherence to ART and prevention of resistance accumulation. However, in LMICs and especially in decentralized areas, access to VL measurement remains scarce or unavailable. Barriers are various: difficulty for patients to reach a laboratory able to perform this measurement, lack of human and material resources. The use of Dried Blood Spot (DBS) as a sampling carrier allows to overcome these barriers, in particular because of its simplicity, the lack of the necessity of a cold chain and the use of existing machines. This PhD work aims at proposing and improving virological monitoring of PLWHA on ART living in decentralized areas of LMICs by demonstrating the feasibility and validity of a DBS collection system to provide access to VL measurement for patients followed in centres not equipped with costly machines and the logistics for its realization.A meta-analysis on virological success in Sub-Saharan Africa was conducted. This work showed a virological success rate in "intention to treat" analysis of 65.4%[61.8-69.1] and 56.8%[51.3-62.4] at 12 and 24 months of ART respectively, and a significantly higher proportion of success reported in clinical trials compared to cohorts. Then, several projects were conducted to obtain results in real life conditions in two different settings: Cameroon and Vietnam. In Cameroon, a study conducted in 12 decentralized sites evaluated 2215 PLWHA on ART, 937 of whom were virologically evaluated. This study showed a low retention rate with 63.3%, 53.5% and 39.9% at 12, 24 and 36 months after ART initiation, respectively. Virological suppression rate was also low with 66.6%, 62.7% and 59.8% at 12, 24 and 36 months of ART, respectively. Profiles of HIV Drug Resistance (HIVDR) in patients with VL>5000 cp/mL showed a significant accumulation of viral resistance, worsening over time and hypothecating therapeutic options. In Vietnam, two studies, involving 198 and 203 patients, were conducted to evaluate performance of VL measurement on DBS compared to plasma. Three VL techniques from two manufacturers were evaluated. Sensitivities of 93.3% [81.7-98.6], 90.1% [80.7-95.9] and 54.9% [40.3-68.9] were found with the old and optimized protocol provided by Abbott company and the new protocol provided by Roche company (FVE), respectively. Specificities were 94.8% [90.0-97.7], 96.2% [91.4-98.8] and 100% [97.5-100], respectively. Through this work, we showed that the use of DBS is feasible, immediately available and with an acceptable level of performance. It provides valuable data at the individual, collective and programmatic levels. The use of DBS should be integrated into the strategy of expanding access to VL. Virological monitoring of patients is a major public health challenge in a context of use in first line ART of molecules with a low genetic barrier to HIVDR, an increase of transmitted and acquired HIVDR and a persistently high incidence of infection.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2016-12-06T11:51:47Z No. of bitstreams: 1 arquvo total.pdf: 1445164 bytes, checksum: c60aaaae6e7c42159dfa8981b25218be (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-06T11:51:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquvo total.pdf: 1445164 bytes, checksum: c60aaaae6e7c42159dfa8981b25218be (MD5) Previous issue date: 2015-11-30 / In recent years, there has been a significant growth of the elderly population as a result of technological advances in health care and changes in the socioeconomic conditions. This changing of the population’s demographic profile is an important factor to understanding the Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS) in older people, as it continues to increase the number of infection notifications with Human Immunodeficiency Virus (HIV) in this age group. However, older people living with HIV tend to have the effect of immune suppression more rapidly than other age groups, because they add to clinical manifestations of AIDS, the signs and symptoms of other illnesses that may be linked to aging, and thus can compromise their autonomy, functional independence and aging representation. Thus, this study becomes relevant to the implementation of actions that improve and/or maintain the health of the elderly, during the process of aging and well-being, also contributing with health professionals in the design and implementation of therapeutic and preventive action plans, targeting the health of the elderly. This study aims to analyze and compare the social representations of active aging, elaborated by elderly people living with and without HIV/AIDS. It is an exploratory study, using the theoretical framework of the Theory of Social Representations. Participate in the study, 48 elderly people, aged between 60 and 96 years, divided into two groups: older people with and without a diagnosis of HIV / AIDS. Data were collected from the Test of Free Association of Words and semi structured interviews and processed with the help of Iramuteq and Trideux software. The data collected and analyzed were interpreted subsidized in the theoretical framework adopted and presented in figures, charts and themes. The results correlate with each other, allowing inferences about the social representations on active aging permeated by positive and negative dimensions. For the active elderly stimulus, they highlight the most positive meanings and to the AIDS elderly stimulus, has been found themselves’ senses tied with the condition of being with the diagnosis of AIDS disease. Active aging depends on a variety of determining factors involving individuals, families and society. Providing a successful aging to the elder HIV positive person is possible through the combination of various sectors and use of transdisciplinary strategies to the promotion of health, allowing it to remain autonomous, independent and participatory society. / En los últimos años ha habido un crecimiento significativo de la población de edad avanzada, como resultado de los avances tecnológicos en materia de salud y los cambios en las condiciones socioeconómicas de la población. Este perfil demográfico cambiante de la población es un factor importante para la comprensión del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) en las personas mayores, ya que sigue aumentando el número de notificaciones de infección por virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) en este grupo de edad. Sin embargo, las personas VIH-positivas mayores tienden a tener el efecto de la inmunosupresión más rápidamente que otros grupos de edad, ya que representan las manifestaciones clínicas de los síntomas y signos de otras enfermedades de SIDA que puedan estar vinculados al envejecimiento, pudiendo así el compromiso su autonomía, independencia funcional y la representación de envejecimiento. Por lo tanto, este estudio se convierte en relevante para la implementación de acciones que mejoran y/o mantener la salud de las personas mayores, durante el proceso de envejecimiento y el bienestar, contribuyendo también con profesionales de la salud en los planes de diseño e implementación acción terapéutica y preventiva, la orientación a la salud de las personas mayores. Este estudio tiene como objetivo analizar las representaciones sociales de envejecimiento activo, elaborado por las personas mayores con y sin VIH/SIDA. Se trata de un estudio exploratorio, utilizando el marco teórico de la Teoría de las Representaciones Sociales. Participar en el estudio, 48 personas de edad avanzada, con edades comprendidas entre 60 y 96 años, divididos en dos grupos: las personas mayores con y sin diagnóstico de VIH/SIDA. Se recogieron datos de la Prueba de Asociación Libre de Palabras y entrevistas semi estructuradas y procesados con la ayuda de software Iramuteq y Trideux. Los datos recogidos y analizados fueron interpretados subvencionado en el marco teórico adoptado y presentado en cifras, gráficos y temas. Los resultados se correlacionan entre sí, lo que permite inferencias acerca de las representaciones sociales sobre el envejecimiento activo permeadas por las dimensiones positivas y negativas. Para el estímulo ancianos activos, destacan los significados más positivos y estimulantes ayuda en la edad se encontró atado sentidos la condición de ser con el diagnóstico de la enfermedad del SIDA. El envejecimiento activo depende de una variedad de factores relacionados con las personas, las familias y la sociedad determinante. Proporcionar un envejecimiento con éxito el VIH elder positivo, es posible a través de la combinación de diversos sectores y uso de estrategias disciplinarias para promover la salud, lo que le permite permanecer sociedad autónoma, independiente y participativa. / Nos últimos anos observa-se um crescimento significativo da população idosa, decorrente dos avanços tecnológicos na área da saúde e das modificações nas condições socioeconômicas da população mundial. Esta mudança do perfil demográfico da população brasileira é um fator importante à compreensão da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (aids) em pessoas idosas, uma vez que continua aumentando o número de notificações da infecção pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) nessa faixa etária. No entanto, as pessoas idosas soropositivas tendem a apresentar os efeitos da imunodepressão de maneira mais acelerada que as outras faixas etárias, porque se somam as manifestações clínicas da aids os sinais e sintomas de outras doenças que podem estar atreladas ao envelhecimento, podendo assim, comprometer a sua autonomia, independência funcional e representação do envelhecimento. Neste sentido, este estudo torna-se relevante à implementação de ações que venham melhorar e/ou manter a saúde de idosos, durante o processo de envelhecimento e bem-estar, contribuindo também, com os profissionais da saúde na elaboração e execução de planos de ação terapêuticos e preventivos, visando a saúde da pessoa idosa. Este estudo tem como objetivo analisar as representações sociais sobre envelhecimento ativo, elaboradas por pessoas idosas com e sem HIV/Aids. Trata-se de um estudo exploratório, utilizando-se o aporte teórico da Teoria das Representações Sociais. Participam do estudo, 48 pessoas idosas, com idades entre 60 e 96 anos, divididas em dois grupos: pessoas idosas com e sem o diagnóstico de HIV/Aids. Os dados foram coletados a partir do Teste da Associação Livre de Palavras e entrevista semi estruturada e processados com auxílio dos softwares Iramuteq e Trideux. Os dados coletados e analisados foram interpretados subsidiados no referencial teórico adotado e apresentados em figuras, quadros e temas. Os resultados correlacionam-se entre si, possibilitando inferências acerca das representações sociais sobre o envelhecimento ativo permeada por dimensões positivas e negativas. Para o estímulo idoso ativo, sobressaíram os significados mais positivos e para o estímulo aids em idoso percebeu-se sentidos atrelados a condição de estar com o diagnóstico da doença aids. O envelhecimento ativo depende de uma diversidade de fatores determinantes que envolvem os indivíduos, familiares e sociedade. Proporcionar um envelhecimento bem sucedido a pessoa idosa soropositiva, é possível através da articulação de diversos setores e utilização de estratégias transdisciplinares à promoção da saúde, permitindo que este se mantenha autônomo, independente e participativo na sociedade.

Les macrophages sont une cible cellulaire importante du VIH-1 et sont impliqués dans la propagation virale et la constitution du réservoir. Les patients infectés par le VIH-2 présentent un contrôle naturel de l'infection qui est généralement absent chez les patients infectés par le VIH-1. Nous avons étudié ici la relation entre les macrophages et le VIH-2 afin d'évaluer leur contribution à la physiopathologie de l'infection. L'assemblage de particules virales dans des macrophages dérivés de monocytes (MDM) infectés par le VIH-2 se fait au niveau de la membrane de compartiments internes semblables aux VCC documentés dans les MDM infectés par le VIH-1. Les VCC des MDM infectés par le VIH-1 et le VIH-2 partagent la même composition protéique, et la même morphologie. Contrairement à Gag du VIH-1, la protéine Gag du VIH-2 est absente du cytosol et presque exclusivement localisée dans les VCC, ce qui suggère que Gag du VIH-2 est rapidement transportée vers le VCC une fois synthétisée dans le cytosol. Les particules de VIH-2 produites de novo par les MDM peuvent mûrir, mais sont faiblement infectieuses et se transmettent inefficacement aux cellules T activés. Cette faible infectiosité n'est pas associée avec l'expression du facteur de restriction BST-2 et n'est pas non plus améliorée par une baisse des niveaux d'expression de BST-2 induite par Vpu. Nos données suggèrent que les macrophages infectés par le VIH-2 ne contribuent probablement pas à la production et à la dissémination du virus in vivo. Cependant, les macrophages infectés par le VIH-2 peuvent représenter une source potentielle d'antigènes viraux qui pourraient stimuler les réponses des cellules T spécifiques du virus. / Macrophages are an important cellular target of HIV-1 and are potentially involved in viral spreading and constitution of the viral reservoir. HIV-2-infected patients exhibit a natural virological control of the infection that is generally absent from HIV-1-infected patients. Here, we studied the relationship between macrophages and HIV-2 to approach their potential contribution to the physiopathology of HIV-2 infection. Viral particles assembly in HIV-2-infected monocyte-derived macrophages (MDMs) occurred at the limiting membrane of internal compartments similar to virus-containing compartments (VCCs) documented in HIV-1-infected MDMs. Indeed, VCCs from HIV-1 and HIV-2-infected MDMs shared protein composition, as seen by confocal microcopy, and morphology, as seen by electron microscopy. Strikingly, HIV-2 Gag was mostly absent from the cytosol and almost exclusively localized to the VCCs, whereas HIV-1 Gag was distributed in both locations, suggesting that HIV-2 Gag is rapidly transported to the VCC membranes once synthesized in the cytosol. HIV-2 particles produced de novo by MDMs can mature, but are poorly infectious and inefficiently transmitted to activated T cells. This low infectivity neither correlate with expression of the restriction factor BST-2, nor was improved by Vpu-induced down-modulation of BST-2 levels. Our data suggest that, HIV-2-infected macrophages are unlikely to contribute to viral production and dissemination in vivo. However, HIV-2-infected macrophages accumulate large amounts of intracellular virus that may represent a potential source of viral antigens that could stimulate virus specific T cell responses.

Le détournement de la machinerie cellulaire basé sur la dégradation par la voie du protéasome est une stratégie fréquemment retrouvée chez les virus afin d’optimiser leur réplication. Ainsi, le VIH-1 a développé toute une série de contremesures via ses protéines accessoires, vif et vpu notamment, afin de cibler les facteurs de restriction vers la voie du protéasome. La protéine accessoire Vpr est également associée à un complexe Cul4 E3 ubiquitin ligase mais est toujoursorphelin de sa cible. Nos travaux ont montré que la protéine CTIP2 est un acteur majeur impliqué dans la restriction de la réplication du VIH-1. Nous proposons de défendre la thèse selon laquelle la protéine CTIP2 est dégradée par la voie du protéasome en présence de la protéine vpr. Nous avons ainsi montré que l’expression de la protéine CTIP2 est plus forte en absence qu’en présence de la protéine vpr. Des expériences utilisant des inhibiteurs de la voie du protéasome sont en faveur d’une régulation de type post traductionnel. Par immunoprécipitation, nous avons montré que CTIP2 fait partie d’un complexe comprenant DDB1 et DCAF1 en présence et en absence de Vpr. Sa dégradation est prévenue en présence du mutant vpr (Q65R) qui n’interagit plus avec DCAF, et en présence d’un Knock Down de DCAF1par ailleurs, DCAF1 est associé avec CTIP2 inclus dans le complexe impliqué dans l’établissement de la latence du VIH-1 comprenant notamment HDAC1. Enfin, les protéines CTIP2, Vpr et DCAF colocalisent dans les noyaux des cellules microgliales. Nos résultats suggèrent fortement que la protéine Vpr favorise la dégradation du facteur CTIP2, qui est décrit comme un facteur restreignant l’infection par le VIH-1 dans les cellules microgliales, et ainsi favorise sa réplication. / Usurping the host ubiquitination proteasome system (UPS) to inactivate the undesirable host protein is a common viral strategy. HIV-1 proteins inactivate the detrimental host proteins by this system. In Microglial cells, CTIP2 represses both initial phase and late phase of HIV-1 gene transcription. As HIV-1 can still replicate in the presence of CTIP2, we postulated that it might inactivate CTIP2 by using Cul4 E3 ubiquitin ligase complex to resume its replication. We observed higher CTIP2 expressions in the absence of Vpr, with no effect on CTIP2 mRNA and proteasome inhibitor can block this degradation. Co-immunoprecipitation assays showed that CTIP2 is associated with DCAF1 and DDB1 in the absence and presence of Vpr. We showed that this degradation is prevented by the using Vpr mutant (Q65R) and by knock down of DCAF1. Finally, we observed the co-localization of CTIP2 with Cul4A-DCAF1-DDB1 complex even in the absence of Vpr, in microglial cells. Additionally, DCAF1 interacts with CTIP2-associated heterochromatin enzymes complex. Our results suggest that Vpr expression increases the turnover of CTIP2 in HIV-1 productively infected cells. By degrading CTIP2, HIV-1 counteracts CTIP2-mediated silencing of its expression and favors its replication.

Describe los eventos relacionados con la evolución molecular del VIH-1 en sujetos peruanos TS y NTS infectados de Lima y Callao. Materiales y métodos. Se realizó el análisis molecular del VIH a partir de 93 sujetos infectados, 61 fueron trabajadoras y trabajadores sexuales (TS) y 32 militares no trabajadores sexuales (NTS). Se extrajo el ADN proviral de toda la población, el cual fue sometido a PCR para la amplificación de los genes gag, env, y pol de VIH-1. Los productos fueron purificados, secuenciados y analizados. Los productos de PCR de env fueron analizados mediante ensayo de movilidad de heterodúplex (HMA) y luego clonados y secuenciados en vectores plasmídicos para la identificación de variantes genéticas virales por medio de análisis filogenético. Las secuencias fueron analizadas usando herramientas de bioinformática para la identificación de subtipos genéticos, recombinación, mutaciones en regiones conservadas, mutaciones de resistencia a los antirretrovirales (ARV), hipermutación y tropismo. Para el análisis estadístico de frecuencias, riesgo absoluto (RO) e índice de asociación se usó el programa SPSS versión 21. Se demostró que todas las muestras analizadas fueron subtipo B con evidencia de recombinación entre diferentes subtipos, siendo la forma B/D la más frecuente (28%). Se hallaron dieciocho casos de infecciones mixtas y 66% de virus con tropismo R5. Los virus restantes con tropismo X4 fueron más frecuentes en pacientes con CD4 < 200 células/mL. Asimismo, se hallaron mutaciones no conservadas en la región de MHR, principalmente en TS, incluyendo un caso de hipermutación. También se halló un índice de 24% de resistencia frente a los ARV. Dentro de ello, se encontró evidencia de resistencia primaria (17%) la cual estuvo asociada con el ejercicio del trabajo sexual (p = 0.04) y con la presencia de infecciones mixtas (p = 0.01). Se demuestra que la evolución molecular del VIH sigue trayectorias diferentes entre TS y NTS, siendo la presencia de algunos factores de riesgo como infecciones mixtas y el ejercicio del trabajo sexual determinantes en este proceso. / Tesis