Peu d'études ont étudié l'impact du traitement antirétroviral sur l'activation et l'inflammation chez les patients infectés par le VIH. Ces études ont inclus des personnes ayant un contrôle virologique variable, ce qui explique leurs résultats discordants. Les objectifs de ce travail étaient d'évaluer l'évolution des marqueurs d'activation et d'inflammation chez les patients initiant un traitement antirétroviral avec un succès virologique rapide et persistante au cours de 2 ans, et d'identifier les facteurs associés à la persistance des niveaux élevés des marqueurs post-traitement. De plus, comparer l'impact des différents traitements antirétroviraux sur l'évolution des marqueurs.Mon travail a permis de montrer qu'avant l'initiation de traitement, les niveaux d'IL-6, IP-10, MIG et sCD14 étaient plus élevés chez les patients que chez les témoins VIH-séronégatifs. Après deux ans, les niveaux d'IL-6, IP-10 et MIG ont diminué significativement alors qu'aucun changement de CRP-us et de sCD14 n'a été observé. Les niveaux élevés d'IP-10 et MIG ont été associées à l'âge. La seule différence observée entre les traitements était une moindre diminution d'IP-10 et MIG avec l'ATV/r qu'avec l'EFV.Ces résultats suggèrent que le contrôle virologique rapide et persistant sous traitement antirétrovirale est nécessaire mais pas suffisant pour atténuer l'activation immunitaire et l'inflammation. L'initiation de traitement antirétroviral avec un meilleur impact sur l'activation immunitaire pourrait être considérée en particulier chez les patients âgés. La mesure des marqueurs d'activation immunitaire pourrait être un critère utile lors de l'évaluation de nouvelles molécules antirétrovirales.

La diversité génétique du virus de l'immunodéficience humaine, le VIH-1 responsable de la pandémie du SIDA, représente un challenge dans le développement d'un vaccin qui doit conférer une protection contre différentes formes du virus pour être efficace. L'identification de populations de lymphocytes T CD8+ (CTL) capables de reconnaître des variants peptidiques d'un épitope est donc une étape importante. Dans le modèle singes rhésus, j'ai montré en utilisant des tétramères spécifiques de 9 variants peptidiques d'un épitope qu'une même population de CTL générés par la vaccination, peut reconnaître l'épitope relatif à l'immunogène et un certain nombre de ses variants provenant de diverses formes du VIH-1. Ces études ont également permis de caractériser les populations de CTL spécifiques de chaque variant de cet épitope en analysant l'expression des différents gènes codant pour la chaîne variable β du TCR (Vβ répertoire) et par un large séquençage des régions complémentaires déterminantes 3 (CDR3) du TCRβ. Ces travaux ont montré qu'une vaccination utilisant la séquence du clade C de l'enveloppe du VIH-1 conduit à des réponses divergentes chez 2 singes rhésus Mamu-A*01+. De plus, ces résultats ont mis en évidence que l'usage de certainβes nVe permet pas de déterminer le potentiel cross-réactif des CTL. Par ailleurs, une immunisation utilisant des séquences de l'enveloppe du clade B du VIH-1 peut générer des CTL capables de reconnaître un large nombre de variants de l'épitope testé. L'analyse de 8112 séquences CDR3 du TCRβ a permis de les caractériser. Cependant, les tests fonctionnels ont démontré que bon nombre de ces variants peptidiques stimulent une production suboptimale de cytokines par les CTL générés après vaccination. Ces résultats démontrent que la reconnaissance de variant peptidiques d'un épitope est nécessaire mais pas suffisante pour protéger contre différentes formes du VIH-1 exprimant ces séquences. L'identification de variants peptidiques capables d'induire une réponse fonctionnelle des CTL pourrait contribuer au développement d'un vaccin efficace contre le VIH-1.

1) Antecedentes y objetivos.En adultos, la interrupción del tratamiento antirretroviral(IPT) guiada por CD4+ incrementa de forma significativa el riesgo de enfermedades oportunistas o muerte; la experiencia en niños es escasa. El estudio pretende evaluar la seguridad de una IPT única, entendida como una forma de reducir la exposición a los antirretrovirales, en una población pediátrica con una respuesta prolongada óptima a TARGA de primera línea.2) Pacientes y métodosSerie de casos prospectiva, con grupo de comparación. Criterios de inclusión: a. infección VIH de transmisión vertical; b. TARGA de primera línea, iniciada durante la fase aguda de la infección VIH (grupo A) o la fase crónica (grupo B); y al menos durante los últimos 24 meses: c. ausencia de condiciones clínicas relacionadas con el VIH, d. carga viral indetectable (ARN-VIH) (para el grupo B), y e. recuento normal de la cifra de CD4+ (>350 cél./mm3) o el porcentaje (>25%).Se recluta un grupo de comparación (grupo C) de pacientes que cumplen los mismos criterios de inclusión para pacientes tratados en la fase crónica de la infección VIH, pero que no serán sometidos a una IPT.3) Resultados. IPT en la fase aguda de la infección VIH: Se incluyen 6 pacientes.Un mes tras la IPT, se observa un repunte de la carga viral plasmática (valorm mediano: 4.6 log copias/mL); la viremia se estabiliza posteriormente. Los pacientes han permanecido una mediana de 39 meses en IPT. Tres pacientes han reiniciado TARGA, dos debido a una inmunodepresión libre de síntomas, y uno por deseo de los padres. A pesar de la progresiva inmunodepresión, no se han hallado diferencias con respecto a la evolución clínica entre los periodos pre y post-IPT. Todos los pacientes que han reiniciado TARGA han tenido una respuesta virológica e inmunológica óptimas. IPT en la fase crónica de la infección VIH: Se incluyen 25 pacientes, de los cuales 12 se someten a una IPT. Un mes tras la IPT, se observa un repunte de la carga viral plasmática (valor mediano: 4.7 log copias/mL); la viremia se estabiliza posteriormente. Tres pacientes han reiniciado TARGA precozmente, entre 2 y 4 meses de la IPT, debido a una inmunodepresión libre de síntomas. El resto ha permanecido una mediana de 39 meses en IPT. A pesar de la progresiva inmunodepresión, no se han hallado diferencias en la evolución clínica con respecto al grupo de comparación. Otros dos pacientes han reiniciado TARGA tardíamente, debido a una inmunodepresión libre de síntomas. Todos los pacientes que han reiniciado TARGA han tenido una respuesta virológica e inmunológica óptimas.4) Conclusiones.Se ha observado una inmunodepresión progresiva tras la IPT en la población seleccionada de pacientes, aunque no se han producido eventos clínicos mayores. / 1) Background and Aims. In adults, CD4-guided planned treatment interruptions (PTI) significantly increase the risk of opportunistic disease or death; experience in children is still very scarce. We evaluate the safety of a single PTI, intended as a sparing regimen, in pediatric patients with long-term optimal response to first-line HAART.2) Patients and Methods.Interventional case series. Inclusion criteria: a. verticallytransmitted HIV infection; b. first-line HAART, initiated during acute infection (group A) or chronic infection (group B); and at least a 24-month period of: c. no HIV-relatedclinical conditions, d. undetectable plasmatic HIV-RNA (for group B), and e. normal CD4 cell count (>350 cells/mm3) or percentage (>25%). A comparison group (group C) of patients fulfilling the inclusion criteria for patients treated during chronic infection but not undergoing PTI was used.3) Results.PTI in acute HIV infection: 6 patients were included. One month after PTI, HIV viral load had increased (median value: 4.6 log copies/mL); viremia stabilized thereafter. The patients have remained off therapy a median time of 39 months.Three patients had to reinitiate HAART, two because of symptom-free immunosuppression and one because of parents' wish. Despite progressiveimmunosuppression, differences in clinical evolution were not observed with respect to the pre-PTI period, during HAART. In those patients resuming treatment, an optimal virological and immunological response was observed. PTI in chronic HIV infection: Twenty-five patients were included, 12 underwent PTI. One month afterPTI, HIV viral load had increased (median value: 4.7log copies/mL); viremia stabilized thereafter. Three girls had to resume therapy within 2-4 months because of symptom-free immunosuppression. The rest remained off therapy a median time of 39 months. Despite progressive immunosuppression, differences in clinical evolution were not observed with respect to the comparison group. Two additional girls had toreinitiate HAART. In those patients resuming treatment, an optimal virological andimmunological response was observed.4) Conclusions. Progressive immunosuppression was observed after a single PTI in selected HIV-infected children, although major clinical events did not occur.

La present Tesi tracta sobre el desenvolupament d’inhibidors d’integrasa (INIs) del VIH alternatius. Es va partir de la base existent a la literatura química sobre diverses substàncies quelatants d’ions divalents com a potencials inhibidors del procés de strand transfer catalitzat per la integrasa. Amb aquest concepte en mà, varem pensar que la unió de grups quelatants semblants, però no idèntics, als àcids 2,4-dioxocarbonílics a nucleobases o nucleòsids purínics i pirimidínics podrien millorar les propietats farmacocinètiques dels substrats, tot reduint-ne la toxicitat intrínseca d’alguns dicetoàcids. Al Capítol 1 de la Tesi es duen a terme rutes accessibles i segures cap a la síntesis de tetrazols substituïts mitjançant una reacció de cicloaddició-[3+2] entre azides orgàniques i cianurs d’acil en presència de Cu2(OTf)2. Al Capítol 2 es concentren els nostres esforços cap a la preparació de “dicetotetrazols” juntament amb la síntesi de derivats de timidines i AZT amb subestructures de “dicetotetrazols”. Al Capítol 3 es preparen estructures que contenen nucleòsids o nucleobases units a hidroxiquinolines (com a farmacòfors del tipus “dicetoàcids” o “dicetotetrazols”). Finalment, al Capítol 4, es descriuen les diferents rutes que s’han assajat per arribar a la obtenció de N-hidroxiderivats d’hipoxantina i inosines, així com N-hidroxiderivats de benzopirimidines. En aquest cas, el farmacòfor està relacionat amb el Raltegravir, que és l’únic INI aprovat fins la data per la FDA. / As the initial diketo acids, uncovered by Shionogi and Merck pharmaceutical companies around 2000 as integrase inhibitors, turned out to be toxic, other small molecules were early designed. An obvious replacement of the carboxyl group by its bioisoster tetrazole ring was envisaged by many groups. This posed the question of how to prepare these substrates safely and efficiently. A new method to synthesize 5-acetyl or 5-methoxycarbonyl derivatives of tetrazoles was envisaged in our lab taking advantage of the [3+2]-cycloaddition reaction of organic azides with acyl cyanides and alcoxycarbonyl cyanides (ROCO-CO-CN) in the presence of Cu2(OTf)2 as the catalyst of choice. We achieved to carry out these processes under very mild conditions as described in chapter 1. The most outstanding facts of the second topic may be summarized as follows: 5-acetyl-tetrazole (prepared as reported in topic 1) was linked to N3 of thymidine and of 3’-azido-3’-deoxythymidine (AZT), as model compounds of natural nucleosides and of nucleoside RT inhibitors (NRTIs), respectively, by condensation of the lithium salt of 5-acetyl-1-(4-methoxybenzyl)tetrazole, with nucleoside-derived oxo nitriles. Most of the original activity of AZT was retained. A route for the conjugation of potential NRTIs with pharmacophores of integrase inhibitors (INIs) was disclosed. In the third topic, which we examined in parallel with the preceding one, 8-hydroxy-quinolinecarboxylic acids were linked to position 5 of 5-iodo-2’-deoxy- uridines or 5-iodouracils through spacers that were generated by [3+2]-cycloaddition of TMS–C=C–Ura (where Ura means any uracil derivative), with azides, catalysed by Cu2(OTf)2. This is an example of a click reaction with a non-terminal triple bond, but it was shown that the cleavage of C–Si bond preceded the CuAAC reaction. In topic 4, N-hydroxybenzopyrimidine-2-carboxamides and N-hydroxyhypoxanthine-2-carboxamide with the amide nitrogen substituted by a 4-fluorobenzyl group, containing the essential pharmacophoric elements of HIV-1 integrase inhibitor Raltegravir, were synthesized by means of a sequence that involved a cyclization of amino-hydroxamates with methyl trimetoxiacetate. Other approaches were unsuccessful. Unfortunately, prototypes prepared to date are devoid of integrase inhibition and antiviral activity (IC50 and EC50 > 10 μM).

Construimos mediante ingeniería genética los diferentes vectores de expresión micobacteriano, a partir de los vectores parentales pMV261 y pMV361. Se desarrollaron 3 cepas BCG recombinantes expresando la proteína completa gp120 de la envuelta del VIH, cepa (HXBC2). Se evaluaron diferentes promotores de BCG para inducir la expresión de la proteína heteróloga del VIH. Inicialmente usamos el promotor hsp60 de BCG, un promotor fuerte que ha demostrado ser uno de los más eficaces y posteriormente, se probó con un promotor débil denominado alfa - antígeno. Una vez obtenidas las diferentes cepas BCG recombinantes se evaluó la expresión in vitro de la proteína mediante la técnica de Western blot. Posteriormente evaluamos in vivo la respuesta inmune celular específica, en un modelo animal murino. Se inmunizaron retones con las cepas BCGr: 222VIHA, BCGr: 223VIHA y virus vaccinia modificado cepa Ankara (VAM), expresando el inmunogeno del VIHA correspondiente a la proteína entera gag y envuelta del subtipo A predominante en África del este, más diferentes epítopos CTL de nef, pol. La respuesta específica de células T CD8+, se detectó por la tinción de los tetrámeros y por la tinción intracelular de IFN-alfa. Finalmente para superar las limitantes en la diferenciación de la inducción de citocinas entre BCG (cepa salvaje) y BCGr por la técnica de ELISPOT, evaluamos la expresión génica de IFN-alfa a partir de linfocitos de ratón, detectando el ARNm de esta citocina por la técnica de RT-PCR.Aportaciones de la tesis:- Diseño y desarrollo, por ingeniería genética y biología molecular de 3 cepas vacunales de BCG recombinante (BCGr:261VIH-1gp120, BCGr:222VIH-1gp120 y BCGr:223VIH-1gp120)- Estudio y descripción del reajuste genético que produce BCG cepa salvaje, cuando esta es transformada por el vector de expresión micobacteriano pMV261 que incluye clonado el fragmento de ADN que codífica la proteína del VIH-1 gp120 y que culmino con la deleción del mismo. (Este estudio se presento en un póster, en la Conferencia Mundial Sobre Vacunas VIH en Lausanne Suiza sept. 2004) - Los resultados de los ensayos preclínicos, para la evaluación de la inmunogenicidad de nuestras cepas vacunales, para inducir respuesta celular T CD8 específica frente al VIH-1 en ratones, evaluada por diferentes técnicas, proporcionan experiencias de utilidad en futuros ensayos referentes a las dosis, vías de administración y régimen empleado, así como en la selección de la técnica para detectar dicha respuesta inmune.

INTRODUCCIÓN: El tratamiento antirretroviral de gran actividad (TARGA) ha permitido reducir la morbilidad y la mortalidad de la infección por el VIH, pero no puede erradicar la infección. Por eso se buscan alternativas como las terapias inmunomediadas, que potencian la respuesta inmune del paciente, para poder retirar, al menos temporalmente, el TARGA. Estas respuestas inmunes, tanto CD4+ como CD8+, existen al inicio de la infección, pero desaparecen con el TARGA, probablemente debido a la pérdida de estimulación del sistema inmune. En este sentido, los pacientes que presentan episodios de viremia intermitente (EVI), es decir, elevaciones transitorias de la carga viral (CV), se ha demostrado que aumentan estas respuestas. Dichos EVI se han asociado a diferentes circunstancias, entre ellas las vacunaciones. Como los pacientes VIH son inmunodeprimidos, se aconseja que sean vacunados. Por tanto, si dichas vacunaciones inducen EVI, esto se podría asociar a dos efectos antagónicos: por un lado, un aumento en las respuestas anti-VIH con un potencial mejor control de la infección; pero por otro lado, un potencial riesgo de aparición de resistencias al TARGA y fracaso terapéutico. PACIENTES Y MÉTODOS: Para evaluar esta circunstancia se llevó a cabo un ensayo clínico unicéntrico, prospectivo, randomizado, doble ciego y controlado con placebo en el que 26 pacientes con infección por el VIH se randomizaron a recibir durante 12 meses su TARGA junto a, o bien un calendario vacunal de 10 vacunas comerciales diferentes (hepatitis B, hepatitis A, gripe, neumococo, varicela, triple vírica (sarampión-rubéola-parotiditis) y tétanos-difteria), o bien placebo, suspendiendo el TARGA a los 12 meses. Se estudió el efecto del calendario vacunal, tanto durante el TARGA como tras su interrupción, sobre la CV (incluyendo la aparición de resistencias), las subpoblaciones linfocitarias, las respuestas específicas anti-VIH, la función tímica y las respuestas vacunales humorales y celulares. Además, mediante tres subestudios se evaluó el efecto de los EVI (superiores a 20 y 200 copias) sobre los mismos aspectos, y el efecto de la interrupción del TARGA sobre la función tímica, el sistema de la IL-7 y su receptor y las respuestas adquiridas a los antígenos vacunales. RESULTADOS: Ni el calendario vacunal en general ni ninguna vacuna en particular se asoció a un aumento en la frecuencia de CV detectables, aunque sí provocaron un descenso en los linfocitos T CD4+, un aumento en la activación y maduración linfocitaria hacia células memoria, así como en las respuestas linfoproliferativas, sin cambios en las respuestas específicas CD8+ anti-VIH. Tras la interrupción, el grupo vacunado presentó un rebote igual al que recibió el placebo, sin más resistencias virales, aunque presentó mayores respuestas específicas CD8+ anti-VIH en el periodo sin tratamiento. Cuando se analizó la influencia de los EVI sobre el sistema inmune se observó que los pacientes detectables presentaban durante el tratamiento menor número de linfocitos CD4+ y mayor de CD8+, así como un aumento en las respuestas específicas anti-VIH CD8+. Tras la interrupción, los pacientes detectables presentaron también un mayor rebote viral y un aumento de las respuestas linfoproliferativas anti-VIH. Las diferencias entre pacientes detectables e indetectables disminuyeron cuando se definieron por un ensayo con límite de 20 c/mL. Cuando se analizó la función tímica tras la interrupción se observó un descenso inicial con una recuperación parcial posterior. Y las respuestas vacunales humorales descendieron tras la interrupción, aumentando las celulares. CONCLUSIONES: El calendario vacunal fue seguro y no se asoció a efectos secundarios valorables ni elevaciones de la CV, pero tampoco fue útil como inmunoterapia. Además, la estimulación continuada produjo un aumento de la activación linfocitaria y una disminución en el recuento de linfocitos T CD4+. PALABRAS CLAVE: Infección por VIH, vacunaciones, inmunoterapia, timo, interrupciones de tratamiento antirretroviral. / "Study of the influence of immunological repeated stimuli with commercial vaccines over the Viral Load (VL), resistance development and specific immunological response against HIV in early stage HIV patients with undetectable VL after HAART"INTRODUCTION: As HIV-infected patients are considered immunocompromised, it is generally recommended that they have to receipt appropriate vaccines. However data are conflicting concerning potential harmful effects following the administration of commercial vaccines in HIV-infected patients. Transient increases ("blips") in the viral load have been described associated with a single dose of vaccine, with the potential risk of developing resistance to HAART. On the other hand, there has been described that patients with blips can have an increase in HIV-specific immune responses, which may help to improve the viral control. PATIENTS AND METHODS: We have performed a clinical trial to evaluate the effect of a vaccination program in successfully treated HIV-infected adults on HAART compared to placebo. Its influence over viral load (including resistances), lymphocyte subsets, specific anti-HIV responses, thymic function and responses to vaccinations were analysed. There were also studied the influence of blips over immunity and the influence of interrupting HAART over thymic function and vaccination responses. RESULTS: Vaccinations were not associated to more detectable viral loads, but induced an increase in lymphocyte activation and a loss of CD4+ T-cells. They were not useful as immunotherapy because viral load rebounded after HAART interruption in the same way in placebo and vaccinated group, although specific CD8+ responses against HIV were higher in the latest. Patients with blips had less CD4+ T-cells, more specific CD8+ responses against HIV, and a higher rebound of viral load after discontinuing HAART. After HAART interruption, thymic function decreased firstly, but later presented a partial recovery. Humoral responses to vaccines decreased after stopping HAART.CONCLUSIONS: Vaccinations in HIV patients were safe and did not associate with more detectable viral loads. However, they induce a loss in CD4 T cells. They were not useful as immunotherapy.

Los reservorios del VIH-1 se establecen en fases muy iniciales de la infección. Un estudio reciente documenta la presencia de gran cantidad de ARN vírico en ganglios linfáticos de individuos expuestos dos días después de la aparición de síntomas asociados con la infección aguda, incluso antes de la detección de anticuerpos.También se ha demostrado la existencia de un pequeño pool de células de vida media larga, linfocitos T CD4+ infectados, a partir del cual se puede recuperar el virus mediante técnicas de cultivo ultrasensible, teniendo la mayoría de los linfocitos T CD4+ fenotipo memoria. La vida media de este reservorio es contradictoria, estimándose entre 6 y 43 meses aunque datos recientes sugieren que podría durar más de 60 meses. De todas maneras los linfocitos T CD4+ infectados que permanecen latentes son sólo uno de los reservorios en la infección por el VIH-1 existiendo otros como pueden ser el sistema nervioso central, el semen, el tejido renal y el tejido linfático que es el motivo principal de nuestros estudios.Los principales marcadores para el seguimiento y pronóstico de los pacientes infectados con el VIH-1 son la carga viral plasmática y las subpoblaciones de linfocitos T en sangre periférica. Su eficacia para el estudio de la replicación viral y la inmunodeficiencia o como predictores de la evolución de pacientes con o sin tratamiento ha sido ampliamente demostrada. Sin embargo, en ocasiones, pueden no ser suficiente para el estudio de los cambios acaecidos después de la terapia antirretroviral administrada ya que diversos trabajos han evidenciado discrepancias entre los hallazgos en sangre periférica y en tejido linfático, tanto al valorar la replicación viral como los cambios en los niveles de las subpoblaciones de linfocitos. Incluso se ha descrito la existencia de pacientes con carga viral plasmática indetectable pero con presencia de carga viral en varios compartimentos, entre ellos el tejido linfático. Esto podría explicar casos clínicos de respuesta discordante de pacientes con caída de linfocitos T CD4+ a pesar de tener un buen control de la replicación viralEl manejo de la infección por el VIH-1 se basa actualmente en el uso de tratamientos antirretrovirales altamente efectivos combinados con la monitorización del efecto virológico del tratamiento en plasma. El objetivo de estos tratamientos es suprimir la replicación viral con tal de prevenir el desarrollo de resistencias y la progresión clínica, y permitir así la restauración de la función inmune.En diversos estudios de investigación se produce la discusión de cómo se produce la restauración inmunológica, de cual es la replicación viral residual después de la supresión de la viremia o porque existen discrepancias entre la carga viral y la respuesta de las células CD4+ en algunos pacientes infectados por el VIH-1 que reciben terapia antirretroviral. Este conocimiento de la dinámica de la replicación viral y de las poblaciones linfocitarias es esencial para poder combatir esta infección. Se cree que la CVTL influye sobre la CVP y los parámetros del sistema inmunológico del tejido linfático y de la sangre periférica tanto antes como después de TARGA, además de correlacionarse con los cambios anatomopatológicos en tejido linfático.Está demostrado que los pacientes con CVP < 200 copias/ml y CVTL detectable tienen más posibilidad de fracaso que aquellos con CVTL indetectable. Por lo tanto, el conocimiento de las relaciones entre el tejido linfático y la sangre periférica permitiría identificar marcadores en periferia, más accesibles y repetibles, que nos indicasen qué pacientes están realmente inhibidos en tejido linfático y por tanto tienen menor riesgo de fracaso. Esto permitiría modificar las pautas de TARGA para evitar dicho fracaso. Estos últimos interrogantes y el comportamiento diferente entre la sangre periférica y el tejido linfático ha promovido que las investigaciones actuales profundicen en el estudio de este tejido para poder dilucidar su papel como reservorio de la replicación viral y poder valorar con mayor exactitud el efecto de la medicación antirretroviral y la recuperación inmunológica con inmunoterapia o para pronosticar el tiempo con viremia suprimida después del tratamiento.Siguiendo esta línea, en nuestros estudios, hemos investigado las relaciones entre los cambios producidos en la carga viral y las subpoblaciones de linfocitos en el tejido linfático amigdalar y en sangre periférica con el objetivo de buscar marcadores más exactos para el seguimiento y pronóstico de los pacientes infectados con el VIH-1, así como la influencia de esta carga viral, antes o después de la instauración del tratamiento, en la persistencia de las alteraciones en el sistema inmunológico del tejido linfático1º ARTÍCULO: PREDICTORS OF TONSILLAR TISSUE HIV-1 VIRAL BURDEN AT BASELINE AND AFTER 1 YEAR OF ANTIRETROVIRAL THERAPY. Antiviral Therapyt 8:635-637. ABSTRACT En pacientes naive infectados de forma crónica por el VIH, se observa una correlación entre la carga viral de tejido amigdalar y diferentes parámetros inmunológicos y virológicos de sangre periférica, que no se observan después de 1 año de tratamiento antirretroviral de alta actividad (TARGA). Los regímenes que contienen un inhibidor de la proteasa son los mejores predictores de una buena respuesta virológica en el tejido amigdalar después de un año de TARGA.Palabras clave: carga viral en tejido amigdalar, carga viral plasmática, marcadores, activación inmune.2º ARTÍCULO: IMMUNOARCHITECTURE OF LYMPHOID TISSUE IN HIV-INFECTION DURING ANTIRETROVIRAL THERAPY CORRELATES WITH VIRAL PERSISTENCE. Modern Pathology (2005) 18, 127-136La carga viral plasmática y las determinaciones de las subpoblaciones linfocitarias en sangre periférica son los marcadores usados para monitorizar la infección por VIH. Sin embargo, la replicación viral y la mayoría de los cambios inmunológicos suceden en los tejidos linfoides (TL) Hemos estudiado las biopsias amigdalares de 30 pacientes en estadíos tempranos de la enfermedad, antes del inicio de cualquier tratamiento y después de 12 y 36 meses de tratamiento antirretroviral de alta actividad (TARGA). Se ha investigado el ARN del VIH mediante técnicas de PCR (carga viral en TL), la inmunoexpresión de la proteína p24 viral y la arquitectura del tejido linfoide y subpoblaciones celulares por medio de un morfómetro. La carga viral en TL y la inmunoexpresión de p24, la cual fue encontrada asociada principalmente a células foliculares dendríticas, desciende significativamente después del tratamiento, pero no desaparece en todos los casos, incluso después de 36 meses de tratamiento. Fue observada una mejoría significativa de la arquitectura del TL después del tratamiento, con recuperación de las estructuras foliculares. Estos cambios histológicos se correlacionan con la carga viral en TL. Además, el número de células CD4+ se incrementa, mientras los linfocitos CD8+ y citotóxicos (CD8+granzymeB+) descienden significativamente, la última tanto en el área folicular como interfolicular. Sin embargo estos niveles celulares después del tratamiento no alcanzan los de los pacientes control sanos. Las células naive (CD45RA+) y memoria (CD45RO+) aumentan significativamente después del tratamiento. En conclusión, en la infección por VIH el impacto del tratamiento sólo puede ser establecido completamente en los reservorios de TL, donde la mayoría de los virus se almacenan y se asocian a celulas foliculares dendríticas. TARGA produce una recuperación significativa de la arquitectura del TL y de las subpoblaciones linfocitarias, las cuales estan asociadas a un descenso en la carga viral en TL. Sin embargo estos parámetros estudiados en TL no se restablecen completamente, incluso después de 36 meses de TARGA.Palabras clave: TARGA, VIH, Inmunohistoquímica, tejido linfoide, morfometro, p24.

La imposibilidad de erradicar el virus de la immunodeficiencia humana (VIH-1) del organismo humano con las pautas terapéuticas de alta eficacia (TARGA), la adherencia a pautas terapéuticas complejas y el riesgo a una importante toxicidad farmacológica aguda y crónica, son los principales problemas en la administración prolongada de los fármacos antirretrovirales. Es iminente la necesidad de diseñar nuevas estrategias de tratamiento y en este sentido se han desarrollado las terapias inmuno-mediadas, siendo un ejemplo las interrupciones estrucutradas del tratamiento (IET), dirigidas a controlar la replicación del VIH en base a la recuperación de la respuesta inmune específica. Con estos antecedentes, el estudio virológico de la dinámica y evolución del VIH a lo largo de las diferentes interrupciones estructuradas del tratamiento, permitirá un mejor conocimiento de los cambios observados en la replicación viral durante el periodo de las IET, ya sea debido a factores inmunológicos, virológicos o ambos, para ello se determinó la dinámica viral durante las IET y su relación con la respuesta celular T VIH-1 específica en un grupo de pacientes sometidos a IET, en un grupo de pacientes sometidos a IET y un immunomodulador, la hidroxiurea y en un un grupo de pacientes sometidos a IET y un inmunosupresor, el ácido micofenólico. También se realizó un estudio de evolución del virus en el primer grupo de pacientes. Por último, el estudio de las mutaciones de resistencia en estos pacientes ayudarán a determinar el riesgo que puede comportar la aplicación de esta terapia a la práctica clínica.Los resultados obtenidos en el análisis de la dinámica viral fueron que en todos los pacientes se observó un rebrote de la carga viral en cada una de las interrupciones del tratamiento. Cabe destacar que se observaron atenuaciones significativas en el rebrote de la carga viral a lo largo de las IET.Un 25% de los pacientes mantuvieron valores de estabilización del la carga viral <5000 copias/ml durante una media de 52 semanas de la última interrupción, en los que se observó un incremento de la respuesta celular inmune específica frente al VIH-1. En la totalidad de los pacientes se consiguieron cargas virales indetectables una vez reintroducido el tratamiento.En los resultados obtenidos en la evolución genética del virus a lo largo de las IET no se observó una tendencia a la homogenización de las cuasiespecies virales. No se observaron diferencias significativas en la variabilidad genética entre los virus de pacientes con capacidad o no de neutralizar la replicación viral. En cambio si se detectó la reactivación con la consiguiente reemergencia de provirus ancestrales en el rebrote de carga viral como consecuencia de la interrupción del tratamiento. Al estudiar el riesgo de selección de mutaciones de resistencia durante las IET se observó que un 26% de los pacientes presentaban mutaciones, de los cuales la mitad los seleccionaron de novo durante el periodo de las IET. De estos pacientes un 23% presentaron mutaciones de novo a los inhibidores de la transcriptasa inversa no análogos de nucleósidos (ITIANN), 12% a los inhibidores de la transcriptasa inversa análogos de nucleósidos (ITIAN). No se detectaron mutaciones de resistencia a los inhibidotes de la proteasa (IP).El riesgo de selección de las mutaciones de resistencia fue superior a los ITIANN debido a la larga vida media de estos fármacos, hecho que se debe tener en cuenta cuando se realiza este tipo de estrategia terapéutica.

Thèse (D. en communication)--Université du Québec à Montréal, 2005. / En tête du titre: Université du Québec à Montréal. Bibliogr.: f. [356]-381. Publié aussi en version électronique.

La protéine Rev du VIH-1 est une petite protéine qui permet l'export nucléaire des transcrits viraux partiellement ou non épissés. L'import nucléaire de Rev est réalisé par Importin β (Impβ), un facteur de transport cellulaire qui reconnaît le signal de localisation nucléaire (NLS) riche en arginine présent sur Rev. Le but de cette thèse est de déterminer la structure tridimensionnelle du complexe formé par Impβ et Rev. Après des essais de cristallogenèse infructueux, nous avons sondé la structure du complexe Impβ/Rev en utilisant différentes approches biochimiques, biophysiques et computationnelles. Les résultats suggèrent un nombre limité de modèles tridimensionnels du complexe Impβ/Rev. Ces travaux augmentent notre compréhension de la façon dont Impβ reconnaît Rev et devraient dans l'avenir, faciliter la détermination de la structure de ce complexe à haute résolution. / HIV-1 Rev is a small protein which mediates the nuclear export of unspliced and partially spliced viral transcripts. The nuclear import of Rev is mediated by the host cell protein Importin β (Impβ), a transport factor that recognizes the arginine- rich nuclear localization signal (NLS) present on Rev. The goal of this project is to determine the three-dimensional structure of the complex formed by Impβ and Rev. Because attempts to crystallize this complex were unsuccessful, we sought structural information using a range of biochemical, biophysical and computational approaches. The results suggest a limited number of hypothetical configurations for the Impβ/Rev complex, which can be specifically verified with additional experiments. The work described in this thesis increases our understanding of how Impβ recognizes Rev and should facilitate future efforts at determining the high-resolution structure of this complex.