Submitted by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2015-02-09T12:08:56Z No. of bitstreams: 1 Mestrado_Jorge_Possas.pdf: 2405516 bytes, checksum: 670ec740bf14634ac4f95c8209ae9eb6 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2015-02-09T12:09:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Mestrado_Jorge_Possas.pdf: 2405516 bytes, checksum: 670ec740bf14634ac4f95c8209ae9eb6 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2015-02-09T12:09:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Mestrado_Jorge_Possas.pdf: 2405516 bytes, checksum: 670ec740bf14634ac4f95c8209ae9eb6 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-09T12:09:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mestrado_Jorge_Possas.pdf: 2405516 bytes, checksum: 670ec740bf14634ac4f95c8209ae9eb6 (MD5) Previous issue date: 2014 / Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A abordagem do conceito do Erro Total é ferramenta para efetuar validações que apresenta desempenho superior à abordagem clássica, que avalia os componentes de veracidade e precisão isoladamente, e é capaz de identificar deficiências na Exatidão de um modelo de cálculos de resultados de um imunoensaio. O uso do conceito do Erro Total em validação de métodos analíticos é abordagem que incorpora a expressão da soma da veracidade e da precisão. Esse método utiliza ainda os Perfis de Exatidão baseados em intervalos de tolerância (ou intervalos de predição) para decidir se um modelo de calibração dará resultados de qualidade e prevê o controle do risco de aceitar uma metodologia imprópria. Com a finalidade de avaliar o uso dessas ferramentas para: a) decidir qual o modelo de cálculo de curva de calibração de maior exatidão; b) documentar a validação de imunoensaios, foram aplicados o Conceito do Erro Total, os perfis de Exatidão e os Índices de Exatidão no estudo de validação em uso de um ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) para determinar o teor de ovoalbumina em vacinas, fortificando-se as vacinas com três concentrações de ovoalbumina em relação à concentração existente na vacina (5,0μg/0,5mL) na faixa 25 a 300%, testadas em relação à vacina pura. O Estudo de validação em uso demonstrou que, quando utilizado ométodo de cálculo de curva logística de 5 parâmetros, os resultados mostraram-se mais exatos em relação aos outros dois modelos testados. O ensaio apresenta exatidão, precisão, linearidade e veracidade em conformidade ao intervalo de concentrações estudado, e mostrou ser um ensaio confiável para avaliar o teor de ovalbumina. / The Total Error approach is a validation tool that shows superior performance, when compared to the classical analysis, which assesses the trueness and precision components separately, and it is qualified to identify the deficiencies in the accuracy of an immunoassay. The use of the Total Error approachfor validating of analytical methods incorporates the expression of the sum of trueness and precision. This analysis also uses the Accuracy Profiles based on tolerance intervals (or prediction intervals) to determine whether a calibration modelwill provide quality results and to predict the control of risk in accepting an inadequate methodology. In order to evaluate the use of the Total Error, the Accuracy Profiles and the Accuracy Index approaches for validating immunoassays, these tools were used in the in use study of validation of an ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) for determining the ovalbumin contents in vaccines. It covered the range of 25-300% of a concentration existent on the vaccine (5.0 ug/mL) in relation to the pure vaccine. The in use study validation showed that, by using the five parameters logistic curve for calculating results, this assay demonstrates complying accuracy, precision, linearity and accuracy in the concentration range of 1.25-300μg/0,5mL; and it is a reliable methodology to assess the ovalbumin contents.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:53:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dione Henrique Breda Binoti.pdf: 341138 bytes, checksum: 6c66646819669adecffe7330b65615a7 (MD5) Previous issue date: 2011-08-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The dairy farming is practiced throughout the national territory and approximately 70% of milk production in Brazil comes from crossbred animals derived from European dairy cattle breeds with zebu breeds of excellent adaptation to tropical conditions. Due the metabolic profile studies have focused on specialized pure breeds in this research was aimed to assess the metabolic profile of protein in two genetic groups of Holstein x Gir cows, from the second lactation order, in two periods of lactation, during the dry season. This work was carried out at the Fazenda Santa Luzia, belonging to the Grupo Cabo Verde, Passos - MG. Data were collected between May and August 2009, from ½ HG cows (37) and ¾ HG cows (35). Two periods of lactation were studied: from 28 to 60 and from 110 to 130 days. The feeding of the herd was conducted in accordance with milk production. From each animal, fasting, 10 mL of blood without anticoagulant, and 4.5 mL, with EDTA anticoagulant were collected. Milk yield and body condition score were evaluated and serum levels of urea, albumin, total protein and hemoglobin determined using a manual spectrophotometer, based on specific procedures for each component. Results showed that milk production was higher in animals ¾ HG in both periods of lactation and body condition score higher in the animals of the second period of lactation, but similar when comparing genetic groups. Although had occurred differences among lactation periods to the genetic groups for urea, albumin and total protein, results for these variables were similar as well as for hemoglobin into genetic groups. However genetic groups presented different results from those obtained for purebreds, demonstrating the need particularly to reconsider the nutritional management of these groups, when related to the purebreds. So, it s suggested that others research could be done in these conditions in order to elucidate this uncertain and to enable to construct tables with specific reference values for these genetic groups / A atividade leiteira é praticada em todo o território nacional e aproximadamente 70% da produção de leite do Brasil provem de animais derivados de cruzamentos de raças européias especializadas para produção de leite com raças zebuínas de excelente adaptação às condições tropicais. Estudos de Perfil Metabólico têm se concentrado em raças especializadas puras, assim objetivou-se aferir o perfil metabólico protéico de dois grupos genéticos de vacas Holandês x Gir, de segunda ordem de lactação, em dois períodos da lactação, na estação seca do ano. Também se procurou relacionar os resultados com os de estudos com raças puras. Foi conduzido na Fazenda Santa Luzia, pertencente ao Grupo Cabo Verde, Passos - MG. Os dados foram coletados entre maio e agosto de 2009, em vacas ½ HG (37) e vacas ¾ HG (35). Foram estudados dois períodos da lactação: de 28 a 60 e de 110 a 130 dias. O manejo alimentar do rebanho foi conduzido de acordo com a produção de leite. Foram coletados, de cada animal, em jejum, 10 mL de sangue, sem anticoagulante, e 4,5 mL, com anticoagulante EDTA. Foram avaliados a produção de leite e o escore de condição corporal e determinados os teores séricos de uréia, albumina, proteínas totais e hemoglobina em espectrofotômetro manual, baseado em procedimentos específicos para cada componente. Os resultados mostraram que a produção de leite foi mais elevada em animais ¾ HG, em ambos os períodos da lactação e o escore de condição corporal mais elevado nos animais do segundo período da lactação, mas semelhantes quando se comparam grupos genéticos. Embora entre períodos da lactação tenham ocorrido diferenças dentro de cada grupo genético para uréia, albumina e proteínas totais, entre os dois grupos genéticos os resultados para essas variáveis, assim como para hemoglobina, foram semelhantes. Contudo, os dois grupos genéticos apresentaram resultados distintos dos obtidos com raças puras, demonstrando a necessidade de se reconsiderar o manejo, principalmente nutricional, desses grupos genéticos em relação às raças puras. Assim, sugere-se que outras pesquisas possam ser realizadas, visando a elucidar essa incerteza e possibilitar a construção de tabelas de valores de referência específicas para esses grupos genéticos

Submitted by JOÃO PAULO RAMOS COSTA null (jpramoscosta@hotmail.com) on 2016-02-25T13:30:07Z No. of bitstreams: 1 Tese_João_Paulo_Ramos_Costa.pdf: 3560400 bytes, checksum: 7b30b4c8363f3e9135f4b6977b1e5ac2 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-02-26T16:28:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 costa_jpr_dr_jabo.pdf: 3560400 bytes, checksum: 7b30b4c8363f3e9135f4b6977b1e5ac2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T16:28:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 costa_jpr_dr_jabo.pdf: 3560400 bytes, checksum: 7b30b4c8363f3e9135f4b6977b1e5ac2 (MD5) Previous issue date: 2016-02-02 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo foi avaliar o efeito da virginiamicina (VM) via suplemento mineral e altura pastos (AP) sobre o desempenho, parâmetros sanguíneos, fermentação ruminal, microorganismos ruminais e produção de N microbiano. O estudo foi dividido em dois experimentos. Capítulo 1: Oitenta tourinhos Nelore (inicial BW = 258 ± 15 kg) foram blocados por peso e distribuídos aleatoriamente em 16 piquetes (5 animais / piquete) arranjados em um fatorial 2 × 2: suplemento mineral sem VM (SVM) ou com VM e AP [15 e 35 cm (15AP e 35AP, respectivamente)]. Os animais que receberam VM tiveram maior GMD (P <0,01). Como esperado, o 35AP apresentou maior GMD (P <0,01). A VM não afetou a ingestão de suplemento mineral por PV (ISPV) nem por animal (ISA) (P = 0,49 e P = 0,55, respectivamente) e 15AP mostrou um maior ISPV e ISA (P <0,01 e P <0,01 , respectivamente). Albumina sanguínea foi maior em VM (P <0,01) e tendeu ser maior (P = 0,07) em 35AP. A concentração de ureia no sangue tendeu a diminuir em VM (P = 0,06) e foi maior (P <0,01) em 15AP. A concentrações de NEFA e de cálcio foram maiores (P = 0,007 e P = 0,038, respectivamente) em VM. Capítulo 2: Doze Touros Nelore (PV inicial = 334 ± 47 kg) canulados no rúmem foram designados no mesmo tratamento citados acima em três quadrados latino balanceado 4 × 4. O CMS foi maior no 15AP (P <0,01) do que em 35AP. A amônia-N tendeu a ser maior em VM (P = 0,07). A proporção de nenhuma das bactérias ruminais foram afetados (P > 0,10), excepto R. flavefaciens que tendeu a aumentar em 35AP (P = 0,08), enquanto que a contagem de protozoários totais aumentou (P = 0,03) e o género Entodinium tendeu a aumentar (P = 0,05) em VM. A VM aumento do ácido úrico (P <0,01) e tendeu a aumentar a excreção derivados de purinas (PD; P = 0,074), as purinas absorvidas (AP; P = 0,07), fluxo de N microbiano (NMIC; P = 0,07) e o índice de PDC (P = 0,07)]. Portanto, o efeito da VM parece estar mais relacionada ao aumento do fluxo de N microbiano para o intestino provocado pelo aumento dos protozoários ruminais do que a fermentação ruminal. / The objective was evaluate the effect of virginiamycin (VM) via mineral supplement and two swards height (SH) on performance, blood metabolites, ruminal fermentation, ruminal microorganisms and microbial N production. The trial was divided in two experiments. Chapter 1: Eighty Nellore young Bulls (initial BW = 258 ± 15 kg) were blocked by weight and randomly assigned into 16 paddocks (5 animals/paddock) arranged in a 2 × 2 factorial design: mineral supplement without VM (WVM) or with VM and two SH [15 and 35 cm (15SH and 35SH, respectively)]. The animals receiving VM had higher ADG (P < 0.01). As expected, the 35SH had higher ADG (P < 0.01). VM had no effect on mineral supplement intake by BW (MSIBW) or mineral supplement intake by animal (MSIA) (P = 0.49 and P = 0.55, respectively) and 15SH showed a greater MSIBW and MSIA (P < 0.01 and P < 0.01, respectively). Blood albumin was greater in VM (P < 0.01) and tended to be greater (P = 0.07) in 35SH. The blood urea concentration tended to decrease in VM (P = 0.06) and was higher (P < 0.01) in 15SH. Plasma NEFA and calcium concentrations were greater (P = 0.007 and P = 0.038, respectively) in VM. Chapter 2: Twelve Nellore steer (initial BW = 334 ± 47) ruminally cannulated were used in three 4 × 4 balanced Latin square were assigned in the same treatment arrangement cited above. The DMI was greater (P < 0.01) in 15SH than in 35SH. Ammonia-N tended to be higher in VM (P = 0.07). None ruminal bacteria proportion were affected (P > 0.10), except R. flavefaciens that tended to increase in IV 35SH (P = 0.08), while total protozoa counts increased (P = 0.03) and the Entodinium genus tended to increase (P = 0.05) in VM. The VM increased uric acid (P < 0.01) and tended to increase the purines derivatives excretion (PD; P = 0.074), absorbed purines (AP; P = 0.07), microbial N flow (NMIC; P = 0.07) and the PD: creatinine ratio index [PDC index (P = 0.07)]. Therefore, the VM effect seems to be more related to increasing the N microbial flow to the intestine caused by incresing of ruminal protozoa than the ruminal fermentation. / FAPESP: 2012/02166-1

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:25:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AbdoFN_TESE.pdf: 1739510 bytes, checksum: 7f520b9c4a32fd74e279d017c0bdd143 (MD5) Previous issue date: 2014-03-31 / Foam was developed as a novel vehicle for streptokinase with the purpose of increasing the contact time and area between the fibrinolytic and the target thrombus, which would lead to a greater therapeutic efficacy at lower doses, decreasing the drug s potential to cause bleeding. Fibrinolytic foams were prepared using CO2 and human albumin (at different v:v ratios), as the gas and liquid phases, respectively, and streptokinase at a low total dose (100,000 IU) was used as fibrinolytic agent conveyed in 1 mL of foam and in isotonic saline solution. The foams were characterized as foam stability and apparent viscosity. The thrombolytic effect of the streptokinase foam was determined in vitro as thrombus lysis and the results were compared to those of a fibrinolytic solution (prepared using the same dose of streptokinase) and foam without the fibrinolytic. In vitro tests were conducted using fresh clots were weighed and placed in test tubes kept at 37 ? C. All the samples were injected intrathrombus using a multiperforated catheter. The results showed that both foam stability and apparent viscosity increased with the increase in the CO2:albumin solution ratio and therefore, the ratio of 3:1 was used for the incorporation of streptokinase. The results of thrombus lysis showed that the streptokinase foam presented the highest thrombolytic activity (44.78 ? 9.97%) when compared to those of the streptokinase solution (32.07 ? 3.41%) and the foam without the drug (19.2 ? 7.19%). We conclude that fibrinolytic foam showed statistically significant results regarding the enhancement of the lytic activity of streptokinase compared to the effect of the prepared saline solution, thus it can be a promising alternative in the treatment of thrombosis. However, in vivo studies are needed in order to corroborate the results obtained in vitro / Uma espuma foi desenvolvida como novo ve?culo para a estreptoquinase com vistas a aumentar a ?rea de contato e o tempo de perman?ncia junto ao trombo, de modo a se obter maior efici?ncia terap?utica em doses menores, diminuindo suas potenciais complica??es hemorr?gicas. A espuma fibrinol?tica foi preparada com CO2, albumina humana e estreptoquinase, em dispositivo desenvolvido para tal fim, com diferentes raz?es de fases g?s/l?quido. Ensaios de estabilidade e viscosidade aparente foram realizados para caracteriza??o das espumas e a escolha da mais est?vel. A estreptoquinase em dose total reduzida (100.000 UI) foi utilizada como fibrinol?tico veiculado em 1 mL de espuma e em solu??o salina isot?nica (0,9%). A espuma sem fibrinol?tico tamb?m foi utilizada como comparativo. Testes in vitro foram realizados utilizando-se co?gulos frescos, que foram pesados e colocados em tubos de ensaio mantidos a 37?C. As espumas com e sem fibrinol?tico e a solu??o fibrinol?tica foram testadas por aplica??o intraco?gulo em doses id?nticas atrav?s de cateter multiperfurado e pistola de inje??o. Os resultados in vitro evidenciaram atrav?s da diminui??o dos pesos dos co?gulos, que a espuma trombol?tica apresentou atividade l?tica de 44,78 ? 9,97%, enquanto as mesmas doses da estreptoquinase em solu??o salina isot?nica promoveram 32,07 ?3,41% de lise dos co?gulos. Na espuma sem fibrinol?tico a redu??o do trombo foi de 19,2 ? 7,19%. Conclui-se que a espuma fibrinol?tica apresentou resultados estatisticamente significativos no tocante ? potencializa??o da atividade l?tica da estreptoquinase, quando comparado ao efeito da solu??o preparada com solu??o salina, podendo ser uma alternativa promissora nos tratamentos das tromboses. Os dados obtidos sinalizam para necessidade de estudos in vivo para comprova??o dos obtidos nos in vitro

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Castor bean (Ricinus communis L.) is an important crop for the Northeast of Brazil, which recently has been used to produce biodiesel. Around 90% of the castor bean production in Brazil is concentrated at Northeast region and the state of Cearà is the second largest producer. During the oil extraction process from the castor bean seeds, a resulting residue, called castor cake, is underutilized. However, this byproduct is rich in protein and micronutrients such as nitrogen, phosphorus and potassium, an attribute that qualifies it as a stuff that could be used as organic fertilizer or as animal feed, for example, bringing added value to it. Unfortunately, its use as food has not been possible because of the presence of toxic elements and allergens (ricin, ricinine, complex allergens) in its composition, unless it were previously submitted to a detoxification process. To date, the existing technologies to this end are not economically viable on an industrial scale. Therefore, studies to add value to this abundant byproduct generated in the castor bean biodiesel productive chain is of paramount importance. Thus, in this context, this study was performed to identify, isolate, purify and characterize new bioactive molecules of de-oiled castor cake with biotechnological potential. Through extraction of soluble proteins with 50 mM Tris-HCl pH 7.5, fractionation with ammonium sulfate (50-75%), following by hydrophobic interaction chromatography in Phenyl-Sepharose column and ion exchange chromatography (DEAE-Sepharose), a protein, named Rc-2S-Alb, able to inhibit trypsin was purified. Rc-2S-Alb has a molecular mass of approximately 75.8 kDa, as determined by SDS-PAGE, and under reducing conditions showed a large and a small protein band of 15.8 kDa and 10.5 kDa, respectively. Its NH2-terminal sequence showed similarity with the following proteins: putative 2S albumin precursor (89%), chain A of RicC3 (89%), and chain A of mabilin-1 (89%), all from R. communis seeds; and with the short chain of a "napin-like" protein from Brassica napus (89%). In addition, these similar proteins have two highly conserved domains: QEVQRKDLS and YLRQS. Comparison of the partial primary structure of Rc-2S-Alb generated by the ESI-Q-TOF MS/MS analysis of 17 tryptic peptides, showed 43% similarity to Mabinlin-1 (pI/Mr 6.7 and 29.3 kDa) from R. communis. There were also high similarities among the three-dimensional structures of Rc-2S-Alb, RicC3 and Mabinlin-1. Rc-2S-Alb did not inhibit the spore germination of the phytopathogenic fungi Fusarium oxysporum and Rizoctonia solani, but promoted aggregation of their respective spores. Moreover, Rc-2S-Alb did not inhibit the mycelial growth of Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Rizoctonia solani and Collethotricum gloeosporioides. Contrary, Rc-2S-Alb was effective in inhibiting the growth of the human pathogenic bacteria Pseudomonas aeruginosae, Klebsiella pneumoniae and Bacillus subtilis, at low concentrations. In conclusion, it was established a protocol to purify a new 2S albumin from castor bean cake, which inhibits trypsin and has important antibacterial activity. Thus, the Rc-2S-Alb should be further studied in order to verify its effectiveness as new alternative therapeutic agent against resistant bacteria to commercial antibiotics, which will contribute to improve the human health. / A mamoneira (Ricinus communis L.) à uma cultura importante para a regiÃo Nordeste do Brasil, onde, recentemente, tem sido utilizada para produÃÃo de biodiesel. O Nordeste detÃm 90% da produÃÃo brasileira de mamona, sendo o CearÃ, o segundo maior produtor. No processo de extraÃÃo de Ãleo das sementes de mamoneira para produÃÃo de biodiesel, o resÃduo resultante, denominado de torta da mamona, representa um subproduto pouco utilizado. Apesar disso, essa torta à rica em proteÃnas e micronutrientes, como nitrogÃnio, fÃsforo e potÃssio, atributo que a qualifica como um insumo que poderia ser utilizado como adubo orgÃnico, ou mesmo como raÃÃo animal, o que lhe agregaria valor comercial. Todavia, seu uso como alimento nÃo tem sido possÃvel por causa da presenÃa de elementos tÃxicos e alergÃnicos (Ricina, Ricinina, Complexos AlergÃnicos) na sua composiÃÃo, a nÃo ser que passasse por processamento para sua destoxificaÃÃo. Infelizmente, tecnologia economicamente viÃvel para esse fim, em escala industrial, ainda à inexistente. Portanto, hà necessidade de pesquisas que venham a agregar valor a esse subproduto abundante da cadeia produtiva do biodiesel. Assim, nesse contexto, o presente trabalho està inserido num projeto cujo objetivo maior à identificar, isolar, purificar e caracterizar novas molÃculas bioativas da torta delipidada de sementes de mamoeira com potencial biotecnolÃgico. AtravÃs de extraÃÃo de proteÃnas solÃveis com tampÃo Tris-HCl, 50 mM, pH 7,5, e fracionamento do extrato obtido com sulfato de amÃnio (50-75%), cromatografia de interaÃÃo hidrofÃbica em coluna Phenyl-Sepharose e cromatografia de troca iÃnica (DEAE-Sepharose) foi possÃvel purificar uma albumina 2S, denominada Rc-2S-Alb, capaz de inibir tripsina. A Rc-2S-Alb apresentou massa molecular de, aproximadamente, 75,8 kDa, determinada por SDS-PAGE, mas, em condiÃÃes redutoras, apareceu como uma banda maior de 15,8 kDa e outra menor com 10,5 kDa. Sua sequÃncia NH2-terminal revelou haver similaridade (89%) com o precursor putativo da albumina 2S de R. communis jà descrita, com a cadeia A da estrutura da RicC3 (89%), com a cadeia A da mabilin-1, ambas, tambÃm, de R. communis (89%), com a cadeia pequena de uma proteina ânapin-likeâde Brassica napus (89%). Em todas essas proteÃnas similares, dois domÃnios, QEVQRKDLS e YLRQS, sÃo altamente conservados. ComparaÃÃo da estrutura primÃria gerada por ESI-Q-TOF MS/MS, a apartir de 17 peptÃdeos trÃpticos da Rc-2S-Alb, mostrou similaridade de 43% com a Mabinlin-1 (pI/Mr de 6,7 e 29.3 kDa) de R. communis. Em relaÃÃo à estrutura tridimensional da Rc-2S-Alb, ela apresentou similaridade com a de Ric C3 e Mabinlin-1. A Rc-2S-Alb foi incapaz de inibir a germinaÃÃo de esporos dos fungos fitopatogÃnicos Fusarium oxysporum e Rizoctonia solani, mas foi capaz de promover a aglomeraÃÃo dos mesmos. A Rc-2S-Alb tambÃm nÃo foi capaz de inibir o crescimento micelial dos fungos Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Rizoctonia solani e Collethotricum gloeosporioides. Por outro lado, a Rc-2S-Alb foi eficiente em inibir o crescimento de Pseudomonas aeruginosae, Klebsiella pneumoniae e Bacillus subtilis, todas as bactÃrias patogÃnicas a seres humanos, quando em baixas concentraÃÃes. Como conclusÃo, foi possÃvel a purificaÃÃo de uma nova albumina 2S da torta da mamona, capaz de inibir tripsina e com atividade antibacteriana importante. Assim, a Rc-2S-Alb deve ser explorada no sentido de verificar sua eficÃcia como um novo agente terapÃutico alternativo no combate a bactÃrias resistentes aos produtos disponÃveis, hoje, no mercado, o que, se confirmado, poderà contribuir para a melhoria da saÃde humana.

INTRODUÇÃO: Produtos de glicação avançada (AGE) encontram-se aumentados no diabete melito e contribuem independentemente para o risco cardiovascular. O reconhecimento dos AGE pelo receptor para produtos de glicação avançada (RAGE) potencializa vias de sinalização pró-aterogênicas. Antagonistas do receptor de angiotensina II (ANGII) do tipo 1 (AT-1) diminuem a expressão de RAGE em área de lesão aterosclerótica. No presente projeto, avaliou-se, na aorta de camundongos dislipidêmicos (knockout para apoE) tratados ou não com inibidor do receptor AT-1 (losartana, LOS), o efeito do tratamento crônico com albumina-AGE sobre o infiltrado de lípides, a expressão de mRNA e proteínas envolvidas no eixo AGE/RAGE, ANGII/AT-1, modulação da resposta inflamatória e fluxo de lípides, além da secreção de citocinas inflamatórias por macrófagos tratados com albumina controle ou AGE, concomitantemente ou não a losartana, isolados da cavidade peritoneal de camundongos apoE knockout. MÉTODOS: Camundongos machos knockout para apoE de 12 semanas de idade foram mantidos em dieta padrão e divididos, aleatoriamente, em quatro grupos experimentais (n = 20/grupo): grupo Controle (C), C+LOS, albumina-AGE (AGE) e AGE+LOS. Os animais receberam injeção intraperitoneal diária, durante 30 dias, de 2 mg de albumina controle (grupos C e C+LOS) ou albumina AGE (AGE e AGE+LOS). Os animais C+LOS e AGE+LOS foram tratados durante todo o período experimental com losartana (100 mg/L água). Secções do arco aórtico foram utilizadas para imunofluorescência para RAGE, carboximetil-lisina (CML), AT-1 e 4-hidroxinonenal (4-HNE) e determinação infiltrado lipídico por coloração com Oil Red-O. Análise do mRNA de Ager (RAGE), Agtr1a (AT-1), Orl1 (LOX-1), Msr1 (MCP-1), Ccl2 (SR-A), Cybb (Nox2), Nfkb (NF-kB), Tnf (TNF-alfa), Abca1 (ABCA-1), Abcg1 (ABCG-1) e Agt (angiotensinogênio) foi realizada por de qRT-PCR. Ensaio in vitro para secreção de IL-6 por ELISA e expressão de Il1b (IL-1beta) e Il18 (IL-18) por alfaRT-PCR, foi realizado com macrófagos peritoneais isolados camundongos apoE knockout incubados com albumina C ou AGE (2 mg/mL), concomitante ou não ao tratamento com losartana (1 uM). RESULTADOS: Não houve diferença entre os grupos em relação ao peso corporal, colesterol total, triglicérides e glicose plasmáticos, no período basal e final. A pressão arterial sistólica foi reduzida nos animais tratados com losartana quando comparados aos não tratados (p < 0,05). Não foi detectada a presença de infiltrado macrofágico na aorta por meio de ensaios de imunofluorescência para CD-68 e pela análise de coloração com hematoxilina-eosina. Todavia, o infiltrado de lípides foi 5,3 e 2 vezes maior no grupo AGE quando comparado, respectivamente, ao grupo C e AGE+LOS (p < 0,05). O conteúdo proteico de RAGE e CML, assim como do marcador de peroxidação lipídica (4-HNE) foi maior no grupo AGE em comparação aos demais grupos, o que não prevenido no grupo AGE+LOS (p < 0,05). A expressão do mRNA de Ager, Orl1 e Tnf foi maior no grupo AGE em comparação ao C, ao passo que o tratamento com losartana impediu o aumento da expressão destes genes (p < 0,05). Isto não foi observado para aumento de Cybb estimulado por albumina-AGE. A losartana diminuiu o mRNA de Agtr1a (AT-1) em ambos os grupos tratados. Não foram observadas diferenças na expressão do mRNA de Msr1, Ccl2, Abca1, Abcg1, Agt e Nfkb. Macrófagos tratados com albumina-AGE apresentaram secreção de IL-6 aumentada em 1,4 vezes em comparação ao grupo C, o que foi prevenido pela losartana (p < 0,05). Nestas mesmas células, a albumina-AGE aumentou a expressão de Il1b e Il18, em comparação à albumina-C, o que não foi prevenido pela losartana. CONCLUSÃO: A administração crônica de albumina-AGE em modelo animal de dislipidemia isento de DM, aumentou o infiltrado de lípides no aorco aórtico, independentemente de variação na pressão arterial, lípides plasmáticos e da modulação local de componentes do sistema renina-angiotensina. A ação da albumina-AGE foi consequente ao maior insulto oxidativo e inflamatório associado ao maior conteúdo de RAGE e CML. A losartana, por reduzir o insulto oxidativo e inflamatório contrapõe-se à albumina-AGE, contribuindo para prevenção da aterogênese / INTRODUCTION: Advanced glycated end-products (AGE) elevated in diabetes mellitus and independently contribute to cardiovascular risk. The AGE binding to the receptor for AGE (RAGE) potentializes pro-atherogenic signaling pathways. Antagonists of angiotensin II receptor type 1 (AT-1) diminish RAGE expression in atherosclerotic plaques. In this study, we evaluated in the aortic arch of dyslipidemic mice (apoE knockout), treated or not with AT-1 blocker losartan (LOS), the effect of chronic treatment with AGE-albumin in aortic root lipid infiltration, mRNA expression and protein content of components of AGE/RAGE, ANGII/AT-1 axes and modulators of lipid flux and inflammation, and also the secretion of inflammatory cytokines by peritoneal macrophages treated either with control (C) or AGE-albumin, together with or not by losartan treatment,. METHODS: 12-week old male apoE knockout mice were fed chow diet and ramdomly assigned into four groups (n = 20/group): Control (C), C+LOS, AGE-albumin (AGE) and AGE+LOS. Animals received daily intraperitoneal injection of 2 mg of C- albumin (C and C+LOS) or AGE-albumin (AGE and AGE+LOS) during 30 days. LOS groups were treated with losartan (100 mg/L water). Immufluorescence for RAGE, AT-1, carboxymethyllysine (CML) and 4-hydroxynonenal (4-HNE), and Oil red-O staining for lipid infiltration was performed in sections from the aortic arch. mRNA expression of Ager (RAGE), Agtr1a (AT-1), Orl1 (LOX-1), Msr1 (MCP-1), Ccl2 (SR-A), Cybb (Nox2), Nfkb (NF-kB), Tnf (TNF-alfa), Abca1 (ABCA-1), Abcg1 (ABCG-1) e Agt (angiotensinogen) was evaluated by qRT-PCR. In vitro assay for IL-6 secretion was performed by ELISA and Il1b (IL-1beta) and Il18 (IL-18) mRNA expression was performed by qRT-PCR in peritoneal macrophages from of apoE knockout mice after treatment with C or AGE-albumin (2 mg/mL), with or without losartan (1 ?M). RESULTS: No differences among groups were observed in body weight, plasma total cholesterol, triglycerides and glucose in basal and final periods. Sistolic blood pressure was reduced in both LOS groups when compared to non-treated groups (p < 0.05). It was not observed CD-68 infiltration in the arterial wall. However, lipid infiltration was, respectively, 5.3 and 2 times greater in AGE group in comparison to C and AGE+LOS groups (p < 0.05). RAGE and CML protein and the lipid peroxidation marker (4-HNE) were greater in AGE group when compared to other groups, which was prevented in AGE+LOS (p < 0.05). Ager, Orl1 and Tnf mRNA expression was increased in AGE group when compared to C, and losartan was able to prevent this event (p < 0.05), except for Cybb. Losartan decreased Agtr1a mRNA expression in both groups (p < 0.05). No differences were observed among groups for Msr1, Ccl2, Abca1, Abcg1, Agt and Nfkb mRNA expression. Macrophages treated with AGE-albumin presented 1.4 times great IL-6 secretion, which was prevented by losartan (p < 0.05). In these cells, AGE-albumin increased Il1b and Il18 mRNA expression in AGE group, but this was not prevent by losartan. CONCLUSION: Chronic administration of AGE-albumin in non diabetic dyslipidemic mice increased aortic lipid infiltration, independently of changes in blood pressutre, plasma lipids and local modulation of renin angiotensin system components. The role of AGE-albumin was consequent to the enhanced inflammatory and oxidative insult associated to the higher content of CML and RAGE. Losartan by reducing oxidation and inflammation counteracts the effects of AGE-albumin contributing to prevent atherogenesis

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao SantosKFD.pdf: 3452223 bytes, checksum: 425b2eff60093d958263e376587dc3c7 (MD5) Previous issue date: 2010-03-31 / The objective of this dissertation was to analyze quantitative and qualitatively the total storage protein content and its fractions albumin, globulin, prolamin and glutelin from the grain of 29 genotypes of the wild rice Oryza glumaepatula and 70 interspecific lines backcross 2 obtained from the cross O. sativa x O. glumaepatula. From these lines, 34 BC2F8 were obtained from the cross O. sativa BG 90-2 x O. glumaepatula RS-16 and 36 BC2F10 were obtained from the cross O. sativa CICA-8 x O. glumaepatula RS-16. From the analysis of variance for the total protein content and its fractions, it were found highly significant differences (P<0.01) between the wild genotypes and the interspecific lines. The average of total protein content of wild genotypes was 12.17%, whereas the lines of BG 90-2 x RS-16 showed an average of 7.05% and the lines of CICA-8 x RS-16 showed an average of 8.40%. The wild genotype BGA14280 showed the highest total protein content (14.94%). In the comparative analysis of interspecific lines and their parents, it were found five lines with higher total protein content (average of 10.95%), which was significantly superior to the cultivated parent BG 90-2 (10.0%) and CICA-8 (9.61%). However, these lines showed lower content in relation to the wild parent RS-16 (14.06%). In relation to the protein fractions, 40 interspecific lines showed higher values in relation to their parents, excepting in one occasion, where the wild parent RS-16 showed higher value to the glutelin fraction. Considering the 29 wild genotypes, it were found the highest contents of albumin, prolamin and glutelin, excepting to the globulin fraction, where the wild genotype was not significantly different from the cultivar BRS Bonança. The SDS-PAGE analyses of the total protein and the glutelin fraction showed a differential profile of &#945;-glutelins for the wild genotypes, emphasizing the BGA14232 genotype, which did not showed the &#945;-polypeptides commonly identified in the remaining genotypes. Considering the interspecific lines and their parents, it was found similar profile of total protein and &#945;-globulins, with differences in relation to the 40 kDa &#945;-glutelin, which was found just in the wild parent RS-16, indicating a differential expression in O. glumaepatula, since the O. sativa showed a 39 kDa &#945;-glutelin. In relation to albumin, globulin and prolamin fractions, the wild genotypes showed a different protein profile in comparison to the interspecific lines and the cultivated rice, probably due to the two crosses in direction to BG 90-2 and CICA-8, which were the recurrent parents during the interspecific lines development. The highest protein content found to the O. glumaepatula, the different protein profile and the finding of interspecific lines with higher protein content in relation to their cultivated parents clearly show the positive contribution of this species to the genetic breeding aiming the increase of the nutritional value for the grain of the cultivated rice in Brazil. / O objetivo desta dissertação foi analisar quantitativa e qualitativamente proteínas de reserva totais e as frações albumina, globulina, prolamina e glutelina presentes no grão de 29 genótipos de arroz silvestre Oryza glumaepatula e de 70 linhagens interespecíficas Retrocruzamento 2 desenvolvidas a partir do cruzamento O. sativa x O. glumaepatula. Destas linhagens, 34 (RC2F8) foram obtidas do cruzamento O. sativa BG90-2 x O. glumaepatula RS-16, e 36 (RC2F10) foram desenvolvidas a partir do cruzamento O. sativa CICA-8 x O. glumaepatula RS-16. Através da análise de variância para o teor de proteína total e frações protéicas, foram encontradas diferenças altamente significativas (P<0,01) entre os genótipos silvestres e entre as linhagens interespecíficas. O teor médio de proteína total dos genótipos silvestres foi de 12,17%, enquanto as linhagens do cruzamento BG90-2 x RS-16 apresentaram média de 7,05% e as linhagens do cruzamento CICA-8 x RS-16 apresentaram média de 8,40%. O genótipo silvestre BGA14280 destacou-se por apresentar o maior teor de proteína total (14,94%). Na análise comparativa envolvendo as linhagens interespecíficas e seus parentais, foram encontradas cinco linhagens com maior conteúdo de proteína total (teor médio de 10,95%), sendo significativamente superiores aos parentais cultivados BG 90-2 (10,0%) e CICA-8 (9,61%). No entanto, essas linhagens apresentaram teor inferior ao parental silvestre RS-16 (14,06%). Em relação às frações protéicas, 40 linhagens interespecíficas apresentaram valores mais elevados em relação aos seus parentais, exceto em uma ocasião, onde o parental silvestre RS-16 apresentou alto teor de glutelina. Entre os 29 genótipos silvestres, foram encontrados os maiores teores de albumina, prolamina e glutelina, exceto para a fração globulina, onde o genótipo silvestre BGA14162 não diferiu significativamente da cultivar BRS Bonança. A análise de SDS-PAGE da proteína total e da fração glutelina foi encontrada um perfil diferencial de &#945;-glutelinas entre os genótipos silvestres, com destaque para o genótipo BGA14232 que não apresentou &#945;-polipeptídeos comuns aos demais genótipos. Entre as linhagens interespecíficas e os seus parentais, foram encontrados perfis de proteína total e &#945;-glutelinas bastante similares, havendo diferença em relação a &#945;-glutelina de 40 kDa presentes apenas no parental silvestre RS-16, o que pode indicar uma constituição protéica diferencial em O. glumaepatula, já que a O. sativa apresentou &#945;-glutelinas de 39 kDa. Em relação às frações albumina, globulina e prolamina os genótipos silvestres apresentaram um perfil protéico diferenciado comparado às linhagens interespecíficas e o arroz cultivado, e a provável causa foram os dois cruzamentos em direção à BG90-2 e CICA-8, que foram os parentais recorrentes durante o desenvolvimento das linhagens interespecíficas. Os maiores teores de proteína encontrados para a espécie O. glumaepatula, os diferentes perfis protéicos e a identificação de linhagens interespecíficas com maior conteúdo protéico em relação aos parentais cultivados, deixam claro a contribuição favorável desta espécie para o melhoramento visando o aumento do valor nutricional do grão do arroz cultivado no Brasil.

Novos sistemas biocompatíveis para aplicações biotecnológicas são relevantes não só do ponto de vista tecnológico, mas também para avanços científicos. A presente dissertação visou à criação e caracterização de filmes finos (espessura de até 100 nm) ou micrométricos (espessura de 50 &#181;m a 100 &#181;m) formados por goma xantana (GXT), poli(cloreto de dimetil dialil amônio), (PDDA), albumina bovina sérica (BSA), e nanopartículas de magnetita (NPM). A incorporação de amoxicilina (Amox), um antibiótico amplamente utilizado contra muitas infecções, nos filmes foi realizada durante a formação dos sistemas. Os filmes finos foram caracterizados através de elipsometria e microscopia de força atômica. Em solução, as interações favoráveis entre o Amox e a BSA foram evidenciadas por mudanças substanciais na estrutura secundária da BSA, como revelado pelo dicroísmo circular. Os filmes micrométricos (patches) de GXT e GXT/NPM/BSA foram imersos em Amox 2 g/L, levando a incorporação de 10 ± 3 e 17 ± 4 &#181;g/cm³ de Amox, respectivamente. Sua caracterização compreendeu espectroscopia vibracional no infravermelho por transformada de Fourier no modo de refletância total atenuada (FTIR-ATR), microscopia eletrônica de varredura (MEV), medidas de sorção e espectrometria de emissão óptica com plasma indutivamente acoplado (ICP-OES). A incorporação de 0,2% em massa de Fe3O4 nos \"patches\" e sua exposição a um campo magnético externo, viabilizou a liberação total in vitro de Amox, em pH 5,5 e em 0,02 mol/L de NaCl, seguindo o comportamento quasi-Fickiano. A difusão da Amox dos \"patches\" de GXT/NPM/BSA em ágar contendo Staphylococcus aureus e Escherichia coli, levou halos de inibição consideráveis. A inibição do crescimento de E. coli foi particularmente eficiente sob efeito de campo magnético externo. / New biocompatible systems for biotech applications are relevant not only from a technological point of view, but also for scientific advances. The present project aimed at the creation and characterization of thin films (thickness up to 100 nm) or micrometric patches (thickness of 50 &#181;m to 100 &#181;m) formed by the deposition of xanthan gum (GXT), poly (dimethyl diallyl ammonium chloride) (PDDA), bovine serum albumin (BSA), and magnetite nanoparticles (NPM). The incorporation of amoxicillin (Amox), a widely used antibiotic against many infections, in the films was performed during the formation of the systems. Thin films were characterized by means of ellipsometry and atomic force microscopy. In solution, favorable interactions between Amox and BSA were evidenced by substantial changes in the secondary structure of BSA, as revealed by circular dichroism spectra. Patches of GXT and GXT/NPM/BSA were immersed into Amox solution at 2 g/L, leading to the Amox incorporation of 10 ± 3 and 17 ± 4 &#181;g/cm3, respectively. The patches characterization included Fourier Transform Infrared vibration spectroscopy in the attenuated total reflectance mode (FTIR-ATR), scanning electron microscopy (MEV), sorption measurements and inductively coupled plasma optical emission spectrometry (ICP-OES). The incorporation of 0.2 wt% of Fe3O4 in the patches and their exposure to an external magnetic field, allowed the total in vitro release of Amox, at pH 5.5 and 0.02 mol/L NaCl, following the behavior quasi-Fickian. Amox diffusion from GXT/NPM/BSA patches in agar containing Staphylococcus aureus and Escherichia coli led to a considerable zone of inhibition. Inhibition of E. coli growth was particularly efficient under the effect of external magnetic field.

INTRODUÇÃO: a albumina sérica reduzida em pacientes em diálise peritoneal (DP) é associada à aterosclerose, causa de morte mais comum entre esses pacientes. Semelhantemente à síndrome nefrótica, supõe-se que a perda de proteínas conjuntamente a de fatores de regulação da hemostasia leva ao estímulo da síntese hepática de fatores pró-coagulantes, como o fibrinogênio, deslocando o equilíbrio hemostático em direção ao estado pró-trombótico. Pacientes em DP apresentam valores séricos elevados de marcadores da ativação endotelial e fatores pró-coagulantes, quando comparados a pacientes em hemodiálise (HD). A tromboelastografia (TEG) é um método que avalia propriedades do sangue global e dinâmica da coagulação, fornecendo, por meio de um traçado, valores absolutos do tempo de formação de fibrina (K), a agregação plaquetária (amplitude máxima - AM), a firmeza do coágulo (G), entre outros dados. Por final, classifica a coagulação em normal, hipocoagulante ou hipercoagulante segundo o índice de coagulação (IC) apresentado, sendo assim útil no diagnóstico precoce de coagulopatias. Por ser pouco utilizado em pacientes com DRC, utilizou-se o TEG na avaliação da hemostasia dos pacientes em diálise peritoneal automatizada (DPA) e investigou-se a relação com a perda de proteínas, bem como outras condições clínicas inerentes ao tratamento dialítico. MÉTODOS: este estudo foi do tipo transversal que incluiu pacientes estáveis em DPA. Foram obtidos dados demográficos, clínicos e bioquímicos de rotina do prontuário médico eletrônico. Adicionalmente, foram avaliados a coagulometria, a hemostasia primária [antitrombina (AT), proteína S, fator VIII (FVIII), fator IX (FIX), fator V (FV), fibrinogênio e dímero-D] e o TEG. Os pacientes foram submetidos ao teste de equilíbrio peritoneal (PET), a avaliação da perda de proteínas para a solução de diálise (PSD) e a absorção de glicose. O estado nutricional dos pacientes foi avaliado por meio de métodos objetivos e subjetivos. RESULTADOS: vinte pacientes (38±16 anos de idade, 55% mulheres, 22,4±14,8 meses em DPA, 40% de glomerulopatia, 70% transportadores médio lento/lento e em bom estado nutricional) foram incluídos no estudo. O FVIII e FIX elevados em 85% e 50% da amostra, respectivamente. O fibrinogênio (553,8±100,5 mg/dL) e o dímero-D (720 (520-1940) ug/L) foram elevados em mais da metade dos pacientes. O TEG revelou 55% dos pacientes hipercoagulantes, 45%, normais, e nenhum era hipocoagulante. Os pacientes hipercoagulantes foram caracterizados por um tempo K menor (1,3±0,4 vs. 1,8±0,3 minutos, p=0,007); AM (72,1±2,4 vs. 64,7±3,6 mm, p=0,000) e G (13,1±1,6 vs. 9,3±1,5 K, p= p=0,000) elevados, também alterados em 78% e 33%, respectivamente, nos pacientes com coagulação normal. Pacientes hipercoagulantes também apresentaram maiores valores de plaquetas (251±28 vs. 214±51 mil/mm³, p=0,038), que se correlacionou positivamente com AM/G (r=0,594, p=0,006), enquanto a proteína C foi menor (108±12 vs. 117±20 %, p=0,034) e a AT se correlacionou positivamente com o tempo K (r=0,635, p=0,011). Não houve diferença de albumina sérica, PSD, cinética de creatinina e estado nutricional entre os grupos normal e hipercoagulante. Os pacientes hipercoagulantes, entretanto, apresentaram menores valores de hemoglobina (10,3±1,4 g/dL vs. 12,0±1,1 g/dL; p=0,007), que se correlacionou negativamente com AM/G (r=-0,673, p=0,001), bem como o hematócrito (31±4 % vs. 36±3 %; p=0,010), que também se correlacionou negativamente com AM/G (r=-0,640; p=0,002). CONCLUSÃO: demonstramos que pacientes em DPA estáveis apresentaram uma tendência pró-trombótica caracterizada pela hiperfunção plaquetária e maior força de coágulo. Mesmo não havendo linearidade na relação com a hemostasia a perda de proteínas pode ter contribuído para a hipercoagulabilidade nesses pacientes. Entretanto, os eritrócitos reduzidos representaram um fator de confusão para o resultado do / INTRODUCTION: reduced serum albumin in patients on peritoneal dialysis (PD) is associated to atherosclerosis that is the leading cause of death. Similarly to nephrotic syndrome they lose protein; it is assumed that together with regulating factors of haemostasis this loss leads to liver synthesizes of procoagulants factors, such as fibrinogen, shifting the hemostatic equilibrium to a prothrombotic state. Patients on PD present elevated serum markers of endothelial activation and coagulant factors when compared with hemodialysis (HD) patients. Thromboelastography (TEG) is a method that evaluate blood properties through coagulation\'s global and dynamic perspectives, providing through a trace absolute values of fibrin\'s time formation (K), platelet aggregation (maximum amplitude - MA), clot strength (G), among other data. Finally it classifies the coagulation in normal, hypocoagulant or hypercoagulant according to the coagulation index (CI), so that it is useful in the early diagnosis of coagulopathies. TEG is not often used in patients with CKD, because of this we chose to use TEG for hemostatic evaluation in patients on APD and investigated its relation with protein loss as well as other clinical conditions intrinsic to the dialytic therapy. METHODS: this was a cross-sectional study that included stable patients on automated peritoneal dialysis (APD). Demographic, clinical and routine biochemical data were obtained from electronic medical chart. Additionally the coagulometry, primary hemostasis [antithrombin (AT), protein S, factor VIII (FVIII), factor IX (FIX), factor V (FV), fibrinogen and D-dimer] and TEG were evaluated. Patients were submitted to peritoneal equilibrium test (PET), protein loss to dialysis solution (PDS) and glucose absorption evaluations. Patients nutritional status was evaluated by objective and subjective methods. RESULTS: twenty patients (38±16 years old, 55% women, 22.4±14.8 months on APD, 40% of glomerulopathy, 70% slow average/slow transporters and well nourished) were included in this study. FVIII and FIX were elevated in 85% and 50% of the sample, respectively. Fibrinogen (553.8±100.5 mg/dL) and D-dimer (720 (520-1940) ug/L) were elevated in over half of the patients. TEG showed 55% of the patients hypercoagulant, 45% were normal and nobody was hypocoagulant. Hypercoagulant patients were characterized by a lower K-time (1.3±0.4 vs. 1.8±0.3 minutes; p=0.007); elevated MA (72.1±2.4 vs. 64.7±3.6 mm; p=0.000) and G (13.1±1.6 vs. 9.3±1.5 K; p= p=0.000); altered too in 78% and 33%, respectively, in normal coagulation patients. Hypercoagulant patients presented too higher values of platelet count (251±28 vs. 214±51 mil/mm³, p=0,038), but within the normal range, that correlated positively with MA/G (r=0.594; p=0.006) while protein C was lower (108±12 vs. 117±20 %; p=0,034) and AT correlated positively with K-time (r=0.635; p=0.011). There was no difference to serum albumin, PDS, creatinin kinetic and nutritional status between hypercoagulant and normal groups. However hypercoagulant patients presented lower values of hemoglobin (10.3±1.4 g/dL vs. 12.0±1.1 g/dL; p=0.007); that correlated negatively with MA/G (r=-0.673; p=0.001), as well as hematocrit (31±4 % vs. 36±3 %; p=0,010), which also correlated negatively with MA/G (r=-0.640; p=0.002). CONCLUSION: we demonstrated that stable patients on APD presented a prothrombotic tendency characterized by platelet hyperfuntion and clot strength. Even though there was no linearity in relation to hemostasis; protein loss may have contributed to the hypercoagulability in these patients. However reduced erythrocytes were a confounding factor in the TEG analysis

Orientadores: Carlos Francisco Sampaio Bonafé, Claudio Chrysostomo Werneck / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-19T01:47:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Norberto_DouglasRicardo_D.pdf: 1634322 bytes, checksum: 288f08df151602db46da98bf9d58476f (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Ureia desnatura proteínas em diferentes concentrações, dependendo das condições experimentais e da proteína. A proteína monomérica soro albumina bovina (BSA) foi o principal modelo de investigação na presença de concentrações subdesnaturantes de ureia com base no modelo de equilíbrio de dois estados. A desnaturação induzida por alta pressão foi intensificada em concentrações de ureia ( [U] ) entre 3,5 M e 8,0 M, com variação de energia livre à pressão atmosférica (?Gº[U]) de +5,0 a -2,5 kJ/mol de BSA, e variação do volume de desnaturação (?V) de -30 a -36 mL/mol de BSA. Os parâmetros m apresentaram caráter bifásico, com valores de m1 e m2 de 0,92 e 2,35 kJ.mol-1.M-1, respectivamente. A partir de gráficos da variação de com relação à foram obtidos valores de , o coeficiente estequiométrico aparente do agente desnaturante, de 1,68 e 6,67 mol de ureia/mol de BSA, respectivamente v1 e v2, correspondentes à m1 e m2. Estes resultados foram comparados com os de outras proteínas monoméricas da literatura e com um conjunto de dados da SNase ?+PHS I92A e estequiometrias sistematicamente baixas foram observadas. No entanto, um valor de 140 mols de ureia/mol de BSA pode ser alcançado a partir de abordagem que considera a existência de uma população heterogênea com respeito a energia livre de desnaturação e aspectos moleculares da interação proteína-solvente puderam ser melhor interpretados / Abstract: Urea denatures proteins at different concentrations, depending on the experimental conditions and the protein. We investigated the pressure-induced denaturation of bovine serum albumin (BSA) as a model in the presence of subdenaturing concentrations of urea based on a two-state equilibrium model. Pressure-induced denaturation was enhanced at urea concentrations ([U]) of 3.5 M to 8.0 M, with the free energy of denaturation at atmospheric pressure (?Gº[U]) ranging from +5.0 to -2.5 kJ/mol of BSA while the volume change ranged from -30 to -36 mL/mol of BSA. The m values appeared to be biphasic, with m1 and m2 of 0.92 and 2.35 kJ.mol-1.M-1, respectively. Plots of ?Gº[U] versu ln[U] yielded values of v , the apparent stoichiometric coefficient, of 1.68 and 6.67 mol of urea/mol of BSA respectively for m1 and m2. These results were compared with the m and values of other monomeric proteins reported from the literature and of SNase ?+PHS I92A and the very low values of were systematically observed. However, a value of 140 moles of urea/mole of BSA could be reached by considering the existence of a heterogeneous molecular population with respect to the free energy of denaturation and the molecular binding aspects could be better interpreted / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular