Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos. / Made available in DSpace on 2012-10-22T08:32:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 231714.pdf: 2439985 bytes, checksum: 7ba5bbe67c59e45c6ebdc5101e9f8e98 (MD5) / Os extratos etéreo, acetônico, alcoólico e aquoso de gengibre (Zingiber officinale Roscoe) foram avaliados quanto ao conteúdo de compostos fenólicos totais e atividade antioxidante, tendo como objetivo observar a influência de cada solvente extrator e da época de colheita sobre esses parâmetros. Para isto, as amostras de gengibre coletadas em dois períodos de colheita diferentes foram submetidas a análises com o método de Folin - Ciocalteau, o qual quantifica os fenólicos totais da amostra; ao método com o radical ABTS (2,2´-azinobis(3-etilbenzotiazolina-6-ácido sulfônico) e ao sistema de cooxidação ß-caroteno/ácido linoléico, os quais medem a atividade antioxidante de cada extrato, sendo que o último foi também utilizado para avaliar o efeito sinérgico entre as amostras e o antioxidante sintético BHT (butil hidroxitolueno). Os resultados indicaram uma boa capacidade antioxidante dos extratos etéreo e aquoso, principalmente nos extratos da amostras coletadas próximas ao fim do período de colheita. Pode ser observada uma correlação linear entre o conteúdo de compostos fenólicos e atividade antioxidante (r2=0,9590). Também foi demonstrado o sinergismo entre os extratos aquosos a 200 ppm e o BHT, apresentando aproximadamente 90% de inibição do processo oxidativo. As amostras de gengibre também foram fracionadas em: ácidos fenólicos livres, ésteres solúveis e insolúveis a fim de identificar os ácidos fenólicos presentes em cada fração. Essas frações foram submetidas à análise cromatográfica, além da avaliação quanto ao seu potencial antioxidante, através do método ABTS, e quanto ao conteúdo de fenólicos totais, de acordo com o método Folin-Ciocalteau. Observou-se uma boa quantidade de compostos fenólicos totais nas frações, variando de 846,37 a 1409,05 mg GAE (equivalentes em ácido gálico) por 100 g de amostra (peso seco). As frações foram submetidas à cromatografia gasosa e a quantificação foi baseada nos tempos de retenção dos padrões de ácidos fenólicos. Uma alta quantidade de ácido salicílico foi encontrada em todas as frações, com valores variando entre 75% e 98%. Outros ácidos, como o caféico, ferúlico, sináptico e gálico também foram encontrados nas frações, e sua presença pode ter influência sobre a atividade antioxidante total do gengibre, já que o ácido salicílico não possui atividade por si só. Os resultados indicam que o gengibre pode ser uma potencial fonte de antioxidantes naturais, possivelmente podendo ser utilizado como substituinte aos antioxidantes sintéticos amplamente utilizados pela indústria de alimentos, tendo em consideração a preocupação dos consumidores com a toxicidade desses aditivos. The etheric, acetonic, alcoholic and aqueous extracts of ginger (Zingiber officinale Roscoe) had their total phenolic content and antioxidant activity evaluated, aiming to observe the influence of the extraction solvent and the harvest time over these parameters. Thus, the ginger samples collected in two different harvest times were submitted to analysis with the Folin - Ciocalteau method, which quantifies the total phenolic contento f the samples; to the ABTS (2,2´-azinobis(3-ethylbenzothyazoline-6-sulphonic acid) method and to the cooxidation system ß-carotene/linoleic acid, which measures the antioxidant activity of each extract, considering that the last was also used to evaluate the synergism within the samples and the synthetic antioxidant BHT (butyl hydroxytoluene). The results indicated a high antioxidant capacity of the etheric and aqueous extracts, mainly in the extracts of the samples collected close to the end of the harvest time. A linear correlation could be observed within the total phenolic content and the antioxidant activity (r2=0,9590). The synergism among the aqueous extracts and BHT could also be observed, showing approximately 90% of oxidation inhibition. The ginger samples were also fractionated to: free phenolic acids, esterified soluble bound and insoluble bound phenolic acids in order to identify the phenolic acids present in each fraction. These samples were submitted to chromatographic analysis, and also for the evaluation of their antioxidant potential, through ABTS method, and total phenolic content, according to Folin-Ciocalteau´s method. A high quantity of total phenolics could be observed, varying from 846,37 to 1409,05 mg GAE (gallic acid equivalent) per 100 g of the sample (dry weight). The fractions were submitted to gas-chromatography and the quantification was based on the retention times of the phenolic acids standards. A high quantity of salicylic acid was found in all the fractions, which values varied from 75% to 98%. Some other acids, as caffeic, ferulic, synaptic and gallic were also found in the fractions, and their presence can influence the total antioxidant activity of ginger, considering that salicylic acid has no activity itself. The results indicate that ginger could be a potential source of natural antioxidants, possibly being utilized as a substitute for the synthetic antioxidants widely used by the food industry, considering the concerns on the toxicity of these additives.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos. / Made available in DSpace on 2012-10-22T08:41:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 231715.pdf: 724421 bytes, checksum: 248b669693bd8a4c9c4a455395634c5e (MD5) / O consumo moderado e constante de alguns compostos naturalmente presentes nos alimentos pode ser responsável por diversos efeitos favoráveis a saúde. Importantes pesquisas são realizadas visando avaliar a possível contribuição que os antioxidantes presentes na dieta podem ter na prevenção de diversas doenças. A composição da cerveja, se destaca pela presença de vitaminas, proteínas e compostos fenólicos, provenientes geralmente da sua matéria-prima. Este estudo teve como objetivo investigar o potencial antioxidante e compostos fenólicos de cervejas distintas, bem como analisar sua principal matéria-prima, cevada, e o subproduto gerado, bagaço de brassagem na sua forma úmida e seca. Tanto para as cervejas como para a cevada e o bagaço foram realizadas as análises para determinação da atividade antioxidante, através dos métodos químicos: ABTS (ácido 2,2'-azino-bis (3-etilbenzotiazolin 6-sulfônico) e o DPPH (2,2- Difenil-1-picrilhidrazilo), e para os compostos fenólicos totais o método de Folin-Ciocalteu e para determinar os flavanóis o método DMACA. Com o intuito de determinar se o bagaço de brassagem, denominado também como resíduo do processamento, pode ser reaproveitado realizou-se o estudo da sua composição centesimal. A cevada e o bagaço de brassagem foram analisados após obtenção de extratos com três diferentes solventes (acetona, água e etanol), pelo método de extração seqüencial e também por extração direta com acetona, em diferentes concentrações. O solvente extrator de maior desempenho foi a acetona 70%, medida através do método ABTS. Na cerveja, os compostos fenólicos podem variar de 249,73 a 808,58 mg GAE/L, em ordem crescente a cerveja escura de trigo, apresenta os maiores valores de polifenóis totais, seguida das cervejas escura de cevada, das cervejas clara de trigo e das cervejas clara de cevada. Apresentando valores de atividade antioxidante equivalente ao Trolox, TEAC (método ABTS), que variaram de 1048,62 a 3957,97µMol TEAC/L e pelo método DPPH, de 1051,98 a 3015,29 µMol TEAC/L. Enquanto que no chopp de cevada, o conteúdo de compostos fenólicos pode variar de 314,3-360,7 mg GAE/L, e atividade antioxidante (método ABTS) média de 2113,02 µMol TEAC/L (lote 3). Na cevada o conteúdo médio de polifenóis totais foi 292 mg (GAE)/100g, e de atividade antioxidante 1779,75 µMol TEAC/100g. Considerável conteúdo total de compostos fenólicos permanecem no bagaço, em média 114,81 mg GAE/100g de amostra no bagaço úmido e 180,58 mg GAE/100g de amostra no bagaço seco, ambos obtidos pela extração seqüencial, e a atividade antioxidante no bagaço úmido varia de 98,92 a 427,99 µMol TEAC/100g e de 167,26 a 680,81 µMol TEAC/100g de bagaço seco. Os resultados obtidos demonstraram que existe correlação entre a atividade antioxidante e os compostos fenólicos, na cerveja e no chopp, assim como na cevada e no bagaço de brassagem. As cervejas analisadas podem ser fonte de compostos fenólicos aos quais se atribui a atividade antioxidante. A moderate and constant consumption of some naturally present compounds in foods can be responsible for some favorable effects to the health. Nowadays, there are many researches aiming to evaluate the possible contributions that antioxidants originating from diet could have on the prevention of diverse diseases. Compounds that are proeminent in beer composition are vitamins, proteins and phenolic compounds, usually procceding from its raw material. The objective of this study was to investigate the antioxidant potential and phenolic compounds from different types of beers, as well as analyse its principal raw material, barley, and the subproduct generated, brassage pomace in its humid and dried form. As much in the beers as in the barley, analyses for the determination of antioxidant activity were determined using both methods: ABTS (2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothyazoline 6-sulphonic acid) and DPPH (2,2- diphenyl-1-picrylhydrazil); for the total phenolic content, the Folin-Ciocalteu´s method; for the determination of flavanols, the flavanols,the DMACA method. With the intention of determining if the brassage pomace, also called processing residue, could be reused, the centesimal composition analysis was carried out. The barley and bagasse pomace were analysed after attainment of their extracts using three different solvents: acetone, water and ethanol, using the sequential extraction method and also through direct extraction with acetone in different concentrations. The extraction solvent with better performance, acetone 70%, was obtained with the ABTS method. In the beers, the phenolic compounds varied from 249,73 to 808,58 mg GAE/L, in crescent order the dark wheat beer presented the highest poliphenolic values, followed by dark barley beer, clear wheat beer and clear barley beer, presenting trolox equivalent antioxidant activities, TEAC (ABTS method), which varied from 1048,62 to 3957,97µMol TEAC/L and with the DPPH method, from 1051,98 to 3015,29 µMol TEAC/L. While in barley fresh beer, the total phenolic content varied from 314,3-360,7 mg GAE/L, and antioxidant activity (ABTS method) means varied from 2113,02 µMol TEAC/L (allotment 3). In the barley, the total phenolic content mean was 292 mg (GAE)/100g, and antioxidant activity was 1779,75 µMol TEAC/100g. A high total phenolic content could be observed in the pomace, which mean was 114,81 mg GAE/100g in the humid pomace and 180,58 mg GAE/100g in the dried pomace, both obtained by the sequential extraction, and the antioxidant activity of the humid pomace varied from 98,92 to 427,99 µMol TEAC/100g and from 167,26 to 680,81 µMol TEAC/100g in the dried pomace. The results obtained show that there is correlation between the antioxidant activity and phenolic compounds in beer and fresh beer, as well as in the barley and brassage pomace. The beers analysed could be a potential source of phenolic compounds to which the total antioxidant activity is attributed.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-22T12:49:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 230241.pdf: 975395 bytes, checksum: e71c6d82630aa4dba1e9f2852b78bd59 (MD5) / O estresse oxidativo desempenha um importante papel na patogênese de várias doenças humanas, tais como injúria por isquemia e reperfusão, aterosclerose, doenças neurodegenerativas e câncer. No sistema cardiovascular, os radicais livres estão envolvidos principalmente no desenvolvimento da hipertensão e aterosclerose. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo investigar, in vitro e in vivo, a atividade antioxidante de Cyathea phalerata, além de sua atividade vasodilatadora em anéis de aorta torácica isolada de rato. A atividade antioxidante in vitro foi avaliada através da medida da capacidade seqüestradora do Extrato Bruto (EB), Precipitado (PPT), Fração Aquosa (FAQ), Fração n-Butanol (FBU) e Fração Acetato de Etila (FAE), sobre os radicais DPPH, O2"- e OH", e sobre a peroxidação lipídica. Nestes ensaios foi possível observar o relevante potencial antioxidante da FAE, principalmente a sua capacidade de captar o radical OH" e inibir a peroxidação lipídica. A avaliação in vivo do estresse oxidativo foi realizada em camundongos pré-tratados com a FAE (10, 30 ou 100 mg/kg) e posteriormente expostos ao tetracloreto de carbono (CCl4), através da medida ex vivo de fragmentação do DNA, carbonilação de proteínas e lipoperoxidação de membranas, e das defesas antioxidantes (concentração de GSH e atividades de CAT e GST). A FAE foi capaz de reduzir o dano induzido pelo agente estressor (CCl4) ao DNA, lipídeos e proteínas e aumentar a atividade das enzimas CAT e GST. O importante potencial antioxidante apresentado pela FAE de Cyathea phalerata levou ao estudo desta fração em um modelo de reatividade vascular in vitro (aorta torácica isolada de ratos). A FAE apresentou um efeito vasodilatador dependente da camada de células endoteliais, principalmente nas menores concentrações. A incubação prévia com L-NOARG e ODQ demonstrou a participação da via NO/GMPc no efeito vasodilatador desta fração. Além disso, prostaciclina produzida pelas células endoteliais também parece participar desta atividade. A FAE não alterou a contração induzida pela fenilefrina e nem o relaxamento induzido pelo SNP. O relevante potencial antioxidante e a atividade vasodilatadora de Cyathea phalerata podem estar relacionados à sua composição química, rica em flavonóides. Esta planta pode ser importante para o tratamento de patologias que envolvem estresse oxidativo, podendo diminuir os dano causados à macromoléculas (lipídeos, proteínas e DNA) e aumentar as defesas antioxidantes. Destaca-se a importância da FAE de Cyathea phalerata, rica em flavonóides, para a prevenção e tratamento de doenças cardiovasculares.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-11-10T03:11:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 335960.pdf: 1177335 bytes, checksum: 2eb70c6d081d67e2c8f5ba56666ea456 (MD5) Previous issue date: 2015 / Os antioxidantes são amplamente utilizados em alimentos e cosméticos para controlar o processo de oxidação. Entretanto, a quantidade de antioxidantes obtidos a partir de recursos naturais não é suficiente para atender à demanda atual e muitas vezes alguns destes antioxidantes, como o ácido L-ascórbico, não são estáveis em determinados produtos. Com isso, diversos métodos têm sido desenvolvidos visando à produção de antioxidantes estáveis tanto em produtos hidrofílicos como lipofílicos. A catálise enzimática para produção de ascorbil oleato a partir do ácido L-ascórbico usando ácido oleico está sendo investigada como um método de síntese alternativo ao método químico. O estudo da produção deste composto via síntese enzimática em sistemas alternativos, como banho de ultrassom é considerado uma tecnologia inovadora, visto que na literatura há poucos relatos da síntese de ascorbil ésteres, porém, com resultados vantajosos, o que a torna uma tecnologia promissora e passível de ser explorada em outros sistemas. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi propor uma nova tecnologia para a produção enzimática de ascorbil oleato a partir de ácido L-ascórbico e ácido oleico, empregando a lipase Novozym 435, em sistema assistido por ultrassom. Estudos cinéticos foram realizados nas razões molares de ácido L-ascórbico:ácido oleico de 1:3, 1:6 e 1:9, 100% da potência do ultrassom (132 W), temperatura de 50, 60 e 70 ºC, 20 mL de terc-butanol, com ou sem adição de peneira molecular (2,5; 5; 10 e 20% (m/m)), com de 5% (m/m) da enzima. Ensaios controle sem utilização do ultrassom durante a reação de síntese enzimática de ascorbil oleato também foram realizados. Pela avaliação cinética do efeito da razão molar dos substratos e da temperatura foi identificado que a máxima conversão em ascorbil oleato (66%) foi obtida na razão molar de 1:9 e temperatura de 70 °C, porém as cinéticas apresentaram comportamento instável. O uso de peneira molecular pré-ativada no meio reacional (20%) levou a um comportamento mais estável da reação e uma conversão máxima em ascorbil oleato de 60%. Desta forma, a síntese enzimática de ascorbil oleato em sistema assistido por ultrassom mostra-se uma tecnologia bastante promissora.<br> / Abstract : Antioxidants are widely used in food and cosmetics to control the oxidation process. However, the amount of antioxidants obtained from natural resources is not sufficient to meet current demand and often these are not stable in certain products, such as L-ascorbic acid. Thus, several methods have been developed aiming stable antioxidants production either in hydrophilic products such as lipophilic. The enzymatic catalysis to ascorbyl oleate production from L-ascorbic acid using oleic acid is being investigated as an alternative method of synthesis instead of chemical methods. The study of the production of this compound via enzymatic synthesis in alternative systems such as ultrasound bath is considered an innovative technology, since in the literature there are only reports of other ascorbyl esters synthesis, with advantageous results, which makes it a promising and capable technology to be explored in other systems. In this context, the aim of this study was to propose a new technology for the enzymatic production of ascorbyl oleate from L-ascorbic acid and oleic acid, using Novozym 435 lipase, in system assisted by ultrasound. Kinetic studies were performed in molar ratios of L-ascorbic acid:oleic acid 1:3, 1:6, 1:9, 100% of the power of the ultrasound (132 W), temperature 50, 60 and 70 °C, 20 mL terc-butanol, with or without addition of molecular sieves, preactivated or not (2.5, 5, 10 and 20% (w/w)), and 5% (w/w) of the enzyme. Testing control without ultrasound use during the enzymatic synthesis of ascorbyl oleate was also conducted. By the kinetic study of the molar ratio of the substrate temperature and was identified that the maximum conversion acorbil oleate (66%) was obtained in a molar ratio of 1:9 and a temperature of 70 °C, but the kinetics exhibited unstable behavior. The use of pre-activated molecular sieve in the reaction system (20%) led to a more stable and a maximum conversion of 60% ascorbyl oleate. In this, the enzymatic synthesis of ascorbyl oleate in system assisted by ultrasound is shown to be a very promising technology.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-11T16:57:57Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 160063 bytes, checksum: eb0939720ed57ae55a82e22622003d55 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-11T16:57:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 160063 bytes, checksum: eb0939720ed57ae55a82e22622003d55 (MD5) Previous issue date: 2005-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O cafeeiro é originário de ambientes sombreados, fato gerador de uma crença bem estabelecida de que se trata de uma espécie de sombra. No entanto, em muitos locais, o café é cultivado a pleno sol, com produções satisfatórias. O objetivo deste trabalho foi, pois, identificar potenciais mecanismos de fotoproteção, bem como avaliar como eles se ajustam diurna e sazonalmente. As plantas foram cultivadas no campo, sob dois níveis de irradiância (50 e 100% da luz natural incidente), analisando-se folhas das faces do renque completamente expostas à luz, em três épocas contrastantes: agosto e dezembro de 2003 e outubro de 2004. A fotossíntese líquida e a condutância estomática apresentaram valores baixos e similares nas plantas de ambos regimes de luz em todas as épocas, especialmente à tarde. Tendência semelhante foi observada para a atividade da carboxilase/oxigenase da ribulose-1,5-bisfosfato, amostrada ao meio-dia. Observou-se fotoinibição crônica em agosto e uma discreta fotoinibição dinâmica em dezembro e em outubro nas plantas de ambos tratamentos. As concentrações de clorofilas e carotenóides totais foram menores em agosto nas plantas de ambos regimes de luz. O ângulo foliar foi sempre maior nas plantas a pleno sol em relação às sob sombra. Na maioria das amostragens, a taxa de transporte de elétrons foi semelhante em plantas de ambos tratamentos. Em laboratório, observou-se, na medida em que incrementava a irradiância, redução na fração de energia utilizada na fase fotoquímica da fotossíntese e aumentos concomitantes e consistentes na fração dissipada na forma de calor e na fração da energia não utilizada na fase fotoquímica e tampouco dissipada como calor. Isto foi observado até a irradiância actínica de 1500 μmol(fótons) m - 2 -1 s sem, contudo, verificar-se um padrão claro entre plantas a pleno sol e sob sombra. Não se observaram diferenças entre essas plantas acerca das atividades das enzimas antioxidantes: dismutase do superóxido (SOD), catalase (CAT), peroxidase do ascorbato (APX) e redutase da glutationa (GR). Comparativamente, maior atividade da SOD e da APX ocorreram em outubro, da CAT, em outubro/dezembro, enquanto a da GR foi similar entre as épocas avaliadas. Verificou-se tendência de maiores níveis de ascorbato nas plantas a pleno sol que naquelas sob sombra, mas apenas em agosto tais diferenças foram significativas. De modo geral, danos celulares de pequena magnitude, caracterizados por aumentos discretos no extravasamento de eletrólitos e acúmulo de aldeído malônico, foram mais evidentes em agosto e em outubro em relação a dezembro, embora similar entre plantas de ambos tratamentos. Em suma, nas condições deste experimento, o cafeeiro apresentou alta plasticidade fisiológica de seu aparelho fotossintético às variações da irradiância. / Coffee is native to shady environments, a fact that has been associated with a general belief that it is a shade species. However, in many places, coffee grows well without shade and even out-yields shaded coffee. The aim of this work was to identify potential mechanisms of photoprotection as well as to evaluate how they are able to adjust diurnally and seasonally. The plants were grown in the field under two irradiance levels (50 and 100% of incident natural light). Sampling and measurements were made using outer leaves from the sun-faced sides of the coffee hedgerow in three contrasting times: August and December 2003 and October 2004. Regardless of the treatments, net photosynthesis and stomatal conductance were very low, particularly in the afternoon. A similar trend was observed for the activity of ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase, as analyzed at midday. Chronic photoinhibition was found in August, whereas a slight, dynamic photoinhibition was observed in December and October, irrespective of light treatments. Concentrations of chlorophylls and total carotenoids were smaller in August than in December or October, regardless of light conditions. Leaf angle was always steeper in plants under full sunlight in relation to those under shade. On most occasions, electron transport rate was similar in plants under both irradiance treatments. Under laboratory conditions, there was a reduction in the fraction of absorbed light used in photochemistry which was accompanied by increases in the fraction of absorbed light dissipated as heat as well as in that fraction neither used in photochemistry nor dissipated thermally. This was observed until applying an actinic irradiance of 1500 μmol (photons) m -2 s -1 , but no clear difference between sun leaves and shaded ones was noted, however. Activities of key antioxidant enzymes, superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), ascorbate peroxidase (APX), and glutathione reductase (GR), were similar between plants from both light treatments. Comparatively, larger activity of SOD and APX occurred in October, that of CAT in October/December, while GR activity was similar among the evaluated periods. A trend for higher reduced ascorbate pool was observed in plants grown in the open than in those grown under shade, but only in August such differences reach statistical significance. In a general way, discrete cellular damages, characterized by slight increases both in electrolyte leakage and malondialdehyde accumulation, were more evident in August and in October as compared to December, but such damages were similar between plants from both irradiance treatments. Summing up, the photosynthetic apparatus of the coffee tree, under the present experimental conditions, showed a high physiological plasticity to varying irradiance. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-05-23T17:45:22Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3124574 bytes, checksum: ce609aa046ca24cb5b5837a887286022 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-23T17:45:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3124574 bytes, checksum: ce609aa046ca24cb5b5837a887286022 (MD5) Previous issue date: 2017-02-09 / Neste trabalho estudou-se o desenvolvimento de vesículas lipossomais utilizando o método de hidratação de filme lipídico para a nanoencapsulação do eugenol. Lipossomas elaborados a partir de diferentes concentrações de lecitina de soja, esfingomielina e colesterol foram avaliados em função do diâmetro hidrodinâmico, potencial zeta e eficiência de encapsulação, para a determinação do tratamento de maior estabilidade cinética e poder de encapsulação. O sistema escolhido (com e sem eugenol) foi avaliado durante 2 meses na temperatura de 4 ºC, para monitorar alterações vesiculares no tamanho e a carga superficial, estudou-se também a liberação in vitro e a capacidade antioxidante do eugenol livre e encapsulado. O sistema lipossomal desenvolvido atingiu 80,9 ± 2,5 % de eficiência de encapsulação, estruturou-se por vesículas com 98,6 nm de diâmetro hidrodinâmico e potencial zeta de -49,5 mV, mantendo sua estabilidade durante o período total de avaliação. O estudo de liberação in vitro do eugenol, demostrou que este processo ajustou-se ao modelo matemático de Higuchi que descreve a liberação como um processo controlado pela difusão. Finalmente, o estudo revelou que o sistema lipossomal desestabilizou-se nas soluções de DPPH e ABTS utilizadas para a avaliação da capacidade antioxidante. / This work studied the development of the vesicle population of liposomes using the method of lipid film hydration to the nanoencapsulation of eugenol Liposomes prepared from different concentrations of soy lecithin, sphingomyelin and cholesterol were assessed in the light of the hydrodynamic diameter, zeta potential and efficiency of encapsulation, for determining the treatment of greater stability and kinetic power of encapsulation. The system chosen (with and without eugenol) was evaluated during 2 months in the temperature of 4º C, to monitor changes in the vesicular size and surface charge, also studied in vitro release and the antioxidant capacity of eugenol free and encapsulated. The liposomal system developed has reached 80.9 ± 2.5% efficiency of encapsulation, structured by vesicles with 98.6 nm in diameter and zeta potential of hydrodynamic -49.5 mV, keeping your stability during the total period of evaluation. The study of in vitro release of eugenol, demonstrated that this process set to mathematical model of Higuchi describing the release as a diffusion-controlled process. Finally, the study revealed that the liposomal system destabilized the DPPH solutions and ABTS used for assessment of antioxidant capacity.Finally, the study revealed that the liposomal system destabilized the DPPH solutions and ABTS used for assessment of antioxidant capacity. / Currículo Lattes da autora não abre

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-02-02T16:56:32Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 633302 bytes, checksum: 58c53a6e1cc39b415d6fa207311c49cf (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-02T16:56:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 633302 bytes, checksum: 58c53a6e1cc39b415d6fa207311c49cf (MD5) Previous issue date: 2017-08-15 / O pão é um alimento que apresenta grande frequência de consumo entre os brasileiros e ganhou um mercado expressivo, devido à sua praticidade de consumo, principalmente. A polpa da manga Ubá se destaca pelo seu alto teor de sólidos solúveis totais, carotenoides e vitamina C. O objetivo deste estudo foi elaborar pães de forma adicionados de polpa de manga da variedade Ubá e sem adição de sacarose. Neste caso, os sólidos solúveis totais, em especial os açúcares presentes na polpa, foram empregados como substrato para as leveduras; os carotenoides foram utilizados para conferir coloração atrativa ao produto; e a vitamina C presente na polpa foi utilizada para fortalecer as massas. Inicialmente, realizou-se uma avaliação das características físicas e químicas da polpa de manga Ubá. Em seguida, foram preparadas as massas adicionadas de 0% (FC); 30% (F1), 50% (F2) e 70% (F3) de polpa de manga Ubá, e avaliou-se a influência da adição dessas diferentes concentrações nas propriedades reológicas das massas e nos testes de panificação experimental e na coloração do miolo dos pães. Adicionalmente, foi realizada a caracterização da composição centesimal, determinação de carotenoides totais e capacidade antioxidante das diferentes formulações testadas de pães de forma. A polpa de manga Ubá apresentou teor de carotenoides de 2,98 mg/100 g de polpa; sólidos solúveis totais de 18,20 °Brix e ainda 73,73 mg de ácido ascórbico/100 g de polpa. Em relação às análises reológicas, os testes dinâmico-oscilatórios, mostraram que os módulos elástico (G’) e viscoso (G’’) aumentaram com o aumento de frequência (1 rad·s -1 até 316,226 rad·s -1 ) e que G’ predominou sobre G’’ durante toda faixa de frequência varrida, e isso indicou um comportamento sólido das massas. Nos testes de panificação experimental, verificou-se que o volume específico dos pães de forma foi reduzido, de acordo com o aumento da concentração de polpa de manga Ubá, variando de 3,27 cm 3 ·g -1 (FC) a 2,23 cm 3 ·g -1 (F3). Já a densidade aumentou, de acordo com o incremento de polpa. Os valores foram de 0,31 g·cm -3 (FC) até 0,45 g·cm -3 (F3). Na determinação da composição centesimal, à medida que se aumentou o teor de polpa, a umidade foi diminuída, variando de 37,21% (FC) para 34,21% (F3). O teor de carboidratos, calculado por diferença, aumentou de 56,10% para 58,59%, para as formulações controle e 70% de polpa de manga, respectivamente. Pelas coordenadas de cor, os valores obtidos para os valores L* indicaram que, à medida que aumentou a concentração de polpa, houve escurecimento da cor do miolo dos pães. Segundo a avaliação do croma (C*), houve um aumento na intensidade da cor conforme a polpa de manga foi adicionada. Para o ângulo de tonalidade (h*) de 72,27 (FC) a 76,93 (F3), sendo valores próximos a 90°, que se caracterizam por tons amarelos. O teor de carotenoides para as formulações de pães, neste estudo, aumentou de 0,11 mg/100g (FC) para 1,55 mg/100g (F3). Esse aumento também foi observado na capacidade antioxidante pelo radical ABTS de 0,60 μmol de trolox/ g de pão (FC) a 1,17 μmol de trolox/ g de pão (F3). Concluiu-se que as formulações sem adição de sacarose e com adição de polpa de manga Ubá proporcionaram massas mais firmes, densas e elásticas. A incorporação de polpa de manga Ubá nas formulações de pães promoveu uma tendência no aumento da capacidade antioxidante e o teor de carotenoides, que são agentes antioxidantes e corantes naturais, que, pode trazer benefícios à saúde pela presença de compostos bioativos. Constatou-se que a intenção primária de elaborar formulações de pães de forma com adição de polpa de manga Ubá e sem adição de sacarose mostrou-se bastante apropriada, uma vez que o produto pode trazer benefícios à qualidade de vida da população, estimulando a redução de consumo do açúcar. / White bread presents great frequency in the consumption by the Brazilian population, and it has been gained an expressive market due to its practicality, mainly. Ubá mango pulp is notable for its high soluble solids, carotenoids and vitamin C content. The aim of this study was to prepare white bread containing Ubá mango pulp, without sucrose addition. In this case, total soluble solids, for instance sugars present in the pulp, were used as a substrate for the yeasts; carotenoids were used to give an attractive coloration to white bread, and to improve the handling to the doughs; and vitamin C was used to strengthen the doughs. Initially, a physicochemical evaluation of Ubá mango pulp characteristics was carried out. Thereafter, doughs containing 0% (FC); 30% (F1), 50% (F2), and 70% (F3) of Ubá mango pulp were prepared, and the influence of these different concentrations added on was analyzed. Then, doughs rheological properties, and experimental baking tests and bread crumb color of the white bread were studied. Additionally, centesimal composition, total carotenoid content, and antioxidant capacity of white bread formulations were determinate. Ubá mango pulp presented 2.98 mg/100 g carotenoid content; 18.20 °Brix total soluble solids, and 73.73 mg ascorbic acid/100 g. In rheological analyzes, dynamic-oscillatory tests showed that elastic (G’) and viscous (G’’) modules were increased according to the increased frequency (1 rad∙s -1 up to γ16,ββ6 rad∙s -1 ), and G’ prevailed over G’’ in swept frequency range, which indicated a solid doughs behavior. In the experimental baking tests, it was observed that specific volume of white bread was reduced according to Ubá mango pulp concentration added, ranging from 3.27 cm 3 ·g -1 (FC) to 2.23 cm 3 ·g -1 (F3). Density was increased according to pulp increment, and values were 0.31 g·cm -3 (FC) to 0.45 g·cm -3 (F3). In the centesimal composition, according the pulp content was increased the humidity was decreased, ranging from 37.21% (FC) to 34.21% (F3). The carbohydrate content, calculated by difference, increased from 56.10% to 58.59%, for the control formulations and 70% mango pulp, respectively. Color coordinates were obtained, and L* values indicated that according pulp concentration was increased the bread crumbs was browning. Chroma (C*) values showed an increase in color intensity with mango pulp addition. For the hue angle (h*) from 72.27 (FC) to 76.93 (F3), values close to 90 °, which are characterized by yellow tones. Carotenoid content for bread formulations increased from 0.11 mg/100g (FC) to 1.55 mg/100g (F3). This increase was also observed in the antioxidant capacity by the ABTS radical, 0.60 μmol trolox/g (FC) to 1.17 μmol trolox/g bread (F3). It was concluded that formulations without sucrose addition, and containing Ubá mango pulp provided firmer, dense and elastic doughs. Ubá mango pulp incorporated in white bread formulations increased the antioxidant capacity, and the carotenoid content, which are antioxidants and natural dyes, and health benefits can be to bring by bioactive compounds presence. It was verified that elaborate white bread formulations containing Ubá mango pulp, and without sucrose addition showed appropriate, since the product could bring benefits to the quality of life of the population, and stimulate sugar reduction in food products.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-03-07T15:31:03Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1244938 bytes, checksum: 225e3aba08d159061874e94db968fe61 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-07T15:31:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1244938 bytes, checksum: 225e3aba08d159061874e94db968fe61 (MD5) Previous issue date: 2014-11-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O sorgo é o quinto cereal mais produzido no mundo e considerado uma fonte de nutrientes e de compostos bioativos, especialmente 3- deoxiantocianidinas, taninos, vitamina E, policosanóis e outros compostos antioxidantes, que modulam beneficamente parâmetros relacionados com doenças não transmissíveis. Antes da utilização para consumo humano, o sorgo precisa ser processado, o que pode alterar os seus nutrientes e compostos bioativos. Este estudo teve como objetivo avaliar a variabilidade de nutrientes e compostos bioativos em sorgo (Sorghum bicolor L.) e a estabilidade deles à extrusão e processamento em forno convencional, utilizando calor seco. Cem genótipos de sorgo foram selecionados a partir de uma coleção com alta variabilidade genética da Embrapa Milho e Sorgo (Sete Lagoas, MG, Brasil) e analisados quanto aos teores de carotenoides e vitamina E (tococromanois) por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector de arranjo de diodos (DAD). A variabilidade genética de carotenoides e tococromanois em 100 genótipos de sorgo foi avaliada pela técnica de agrupamento de Tocher. Os cem genótipos de sorgo apresentaram alta variabilidade nos teores de tococromanois (280,7-2.962,4 μg/100g, base úmida), sendo que 23% dos genótipos foram classificados como fonte de vitamina E. Os carotenoides totais variaram entre 2,12 e 85,46 μg/100g nos cem genótipos de sorgo. De acordo com a variabilidade genética para carotenoides e tococromanois, os 100 genótipos foram divididos em sete grupos geneticamente distintos entre si. A partir de 100 genótipos de sorgo, três foram selecionados (SC319; B.DLO357 e SC391) e submetidos a três tipos de tratamento: F1) Farinha crua: grãos moídos em um moinho analítico micro-rotor (850 μm); F2) Calor seco em forno convencional/moagem (Forno/moagem): grãos inteiros submetidos ao calor seco em forno convencional (CSFC) (121 ° 25 min) e, subsequentemente, C, moídos em um moinho analítico micro-rotor (850 μm); F3) Extrusão/moagem: grãos extrudados em uma extrusora com parafuso de dupla rosca. Os grãos dos três genótipos processados foram caracterizados quanto ao flavanonas, teor de carotenoides, 3-deoxiantocianidinas, flavonas e determinados por CLAE-DAD; tococromanois e grau proantocianidinas, analisados por CLAE com detecção por fluorescência; e fenólicos totais espectrofotometria. e atividade antioxidante, As diferenças entre os determinados efeitos dos por diferentes processamentos foram avaliadas pela ANOVA, seguida do teste de Duncan (α = 5%). A retenção do total de tococromanois e equivalente de α-tocoferol diminuiu após a extrusão (69,1-84,8% e 52,4-85,0%, respectivamente), mas aumentou após processamento por CSFC (106,8-114,7% e 109,9-115,8%, respectivamente). A retenção dos carotenoides do sorgo diminuiu após a extrusão (30,7-37,1%) e CSFC (58,6-79,2%). Os teores de flavanonas e flavonas diminuíram após a extrusão (100%) e CSFC (31,7-61,6%). As 3- DXAS foram estáveis após CSFC, mas foram susceptíveis à extrusão (70,7- 93,9%). As proantocianidinas foram identificadas apenas no genótipo SC391 e reduziram em após ambos os processamentos (CSFC: 39,2% e extrusão: 52,1%). Os fenóis totais diminuíram no genótipo SC319 submetido ao CSFC (8,3%) e em todos os genótipos extrudados (13,6-14,9%). O CSFC aumentou a capacidade antioxidante de todos os genótipos, enquanto que a extrusão reduziu a capacidade antioxidante de dois genótipos. Em conclusão, o perfil de tococromanois e carotenoides apresentaram ampla variação e os genótipos apresentaram alta variabilidade genética para carotenoides e tococromanois. O sorgo apresentou-se como uma fonte de tococromanois, que aumentaram após o CSFC e diminuíram após a extrusão. O teor de carotenoides em sorgo diminuiu após o CSFC e a extrusão. A estabilidade diferencial dos principais flavonoides em sorgo foi observada após o CSFC e a extrusão, o que implica que diferentes técnicas de processamento podem ser selecionadas para minimizar a perda de polifenóis bioativos em sorgo, dependendo da composição de flavonoides. / Sorghum is the fifth most produced cereal in the world. This cereal is a source of nutrients and bioactive compounds, especially 3- deoxyanthocyanidins, tannins, and polycosanols, which beneficially modulate parameters related to non-communicable diseases. Sorghum needs to be processed prior to use for human consumption, which may change its antioxidant compounds. This study aimed to evaluate the variability of nutrients and bioactive compounds in sorghum (Sorghum bicolor L.) and their stability to extrusion and dry heat in a conventional oven. One hundred sorghum genotypes were selected from a core collection with high genetic variability from Embrapa Maize and Sorghum (Sete Lagoas, MG, Brazil) and the content of carotenoid and vitamin E were analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC) with diode array detector. The genetic variability of carotenoids and tocochromanols in 100 sorghum genotypes were assessed by Tocher’s clustering technique. The one hundred sorghum genotypes showed high variability in tocochromanol content (280.7-2,962.4 μg/100g in wet basis) and 23% of the genotypes were classified as source of vitamin E. Also, the total carotenoid content varied from 2.12 to 85.46 μg/100g in the one hundred sorghum genotypes. According to the genetic variability for carotenoids and tocochromanols, the 100 genotypes were divided into seven groups genetically distinct from each other. From 100 genotypes, three sorghum genotypes were selected (genotype SC319; genotype B.DLO357 and genotype SC391) and submitted to three types of treatment: F1) Raw flour: grains ground in a micro-rotor analytical mill (850 μm); F2) Dry heat in a conventional oven/milling (Oven/ milling): whole grains subjected to dry heat in a conventional oven (DHCO) (121 ° 25 min) and C, subsequently, ground in a micro-rotor analytical mill (850 μm); F3) Extrusion/milling: grains extruded in a co-rotating twin-screw. The grains of the three processed genotypes were characterized according to the content of carotenoids, 3-deoxianthocyanidins, flavones and flavanones, that were determined by HPLC with diode array detector; the vitamin E content and the degree of polymerization of proanthocyanidins, that were analyzed by HPLC with fluorescence detection; and the total phenolics compounds and the antioxidant activity, that were determined by spectrophotometry. Data normality on the stability of antioxidant compounds was assessed using the Shapiro-Wilk test and the differences between treatments were evaluated by ANOVA, followed by Duncan test to compare the treatment averages, at 5% probability. The retention of the total tocochromanols and α-tocopherol equivalent decreased after extrusion (69.1-84.8% and 52.4-85.0%, respectively) but increased after DHCO (106.8-114.7% and 109.9-115.8%, respectively). Sorghum carotenoids were sensitive to extrusion (30.7-37.1%) and DHCO (58.6-79.2%). The content of flavanones and flavones decreased after extrusion (100%) and DHCO (31.7 to 61.6%). The 3-DXAs were stable in DHCO, but were susceptible to extrusion (70.7 to 93.9%). Proanthocyanidins were identified only in the genotype SC391 and reduced after both treatments (DHCO: 39.2% and extrusion: 52.1%). Phenols decreased in the genotype SC319 submitted to DHCO (8.3%) and in all extruded genotypes (13.6-14.9%). The DHCO increased the antioxidant capacity in all genotypes, whereas extrusion reduced the antioxidant capacity in only two genotypes. In conclusion, the tocochromanols profile in sorghum varied widely and the genotypes presented high genetic variability for carotenoids and tocochromanols. Sorghum was a source of tocochromanols, which increased after DHCO and decreased after extrusion. The carotenoid content in sorghum decreased after DHCO and extrusion. The differential stability of the major flavonoids in sorghum was observed under DHCO and extrusion treatments, implying that different processing techniques can be selected to minimize losses of bioactive polyphenols in sorghum depending on the flavonoid composition.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-11-26 / É bem estabelecido que a depressão maior tem um componente ambiental e um componente genético. Considerando os fatores ambientais, o isolamento social parece aumentar a resistência à antidepressivos em pacientes deprimidos. Assim, o isolamento social poderia ser usado para desenvolver um modelo animal de depressão resistente a antidepressivos. Paralelamente, a maioria dos antidepressivos de uso clínico (inibidores da MAO e inibidores de recaptação de monoaminas) compartilham a habilidade de direta ou indiretamente evitar a oxidação de monoaminas pela MAO reduzindo assim a produção de radicais livres. O objetivo desse estudo é duplo: primeiro, desenvolver um modelo animal de depressão resistente a antidepressivos que inclua os componentes ambiental e genético; segundo, investigar os efeitos do tratamento repetido com os agentes antioxidantes vitaminas C + E juntos nesse modelo. No experimento 1 demonstramos que o isolamento social por 6 h (mas não por 1 ou 12h) aumentou a duração de imobilidade no teste de natação forçada. No experimento 2 nós mostramos que os camundongos que apresentaram a maior duração de imobilidade na primeira sessão do teste de natação forçada continuaram a apresentar um comportamento depressivo maior nos testes subsequentes. Além disso, mostramos que esse maior comportamento depressivo poderia ser posteriormente potencializado pelo isolamento social. Assim, os animais puderam ser distribuídos em quatro grupos: camundongos com pouca predisposição ao comportamento depressivo que não foram submetidos ao isolamento social (grupo pouco deprimido–não isolado: PNão), camundongos com pouca pré-disposição ao comportamento depressivo que foram submetidos ao isolamento social (grupo pouco deprimido–isolado: PIso), camundongos com muita pré-disposição ao comportamento depressivo que não foram submetidos ao isolamento social (grupo muito deprimido–não isolado: MNão), camundongos com muita pré-disposição ao comportamento depressivo que foram submetidos ao isolamento social (grupo muito deprimido–isolado: MIso). No experimento 3 mostramos que a diferença no comportamento depressivo entre os 4 grupos não eram decorrentes de alterações motoras uma vez que nenhuma diferença foi observada no teste do campo aberto. Nos experimentos 4-8 mostramos que o tratamento a longo prazo com fluoxetina ou amitriptilina foi efetivo em reduzir a duração de imobilidade apenas no grupo MNão, sugerindo que a duração de imobilidade apresentada pelos grupos PNão e PIso refletem um comportamento depressivo não patológico (reativo), enquanto que a duração de imobilidade apresentada pelo grupo MIso apresenta-se como um modelo de depressão resistente a antidepressivos. Nos experimentos 9 e 10 mostramos que o tratamento a longo prazo com vitamina C + E reduziu significativamente o comportamento depressivo em ambos os grupos muito deprimidos (MNão e MIso), sugerindo um potencial clínico desses agentes para o tratamento da depressão resistente a antidepressivos. No experimento 11 demonstramos que os agentes pró-oxidantes e ácido 3-nitropropiônico não foram capazes de aumentar um comportamento depressivo em camundongos sem predisposição genética à depressão. Finalmente, no experimento 12 mostramos que o aumento do comportamento depressivo produzido pelo isolamento social ou pela maior predisposição à depressão bem como o efeito antidepressivo produzido pelo tratamento com antioxidantes em camundongos muito deprimidos isolados não estão associados com a peroxidação lipídica hipocampal mas estão associados com alterações nos níveis de corticosterona plasmática. Concluindo, no presente estudo desenvolvemos um modelo de depressão resistente a antidepressivos que é sensível ao tratamento a longo prazo com antioxidantes. Esses achados fortalecem o envolvimento do estresse oxidativo na fisiopatologia da depressão e sugerem um potencial clínico de agentes antioxidantes para tratar a depressão resistente a antidepressivos. / as a genetic predisposition component. Concerning environmental factors, social isolation seems to increase antidepressant resistence in depressive patients. Thus, social isolation could be used to develop an animal model of antidepressant resistent depression. In parallel, the main antidepressant agents in current clinical use (MAO inhibitors and monoamine reuptake inhibitors) share the ability of directly or undirectly avoiding monoamine oxidation by MAO therefore also avoiding the production of free radicals. The aims of the present study were twofold: first, to develop an animal model of antidepressant resistent depression comprising both the environmental component and the genetic predisposition component; second to investigate the effects of repeated treatment with the association of the antioxidant agents vitamins C + E on such a model. In experiment 1 we demonstrated that social isolation for 6h (but not for 1 or 12h) increased immobility duration in the forced swim test (FST). In experiment 2 we showed that mice which presented higher immobility duration in the first session of the FST continue to present higher depressive behavior in the following tests. In addition, we showed that this higher basal depressive behavior could be further increased by social isolation. Thus, we could classify the animals in four groups: mice with lower predisposition to depressive behevior which were not submitted to social isolation (pouco deprimido–não isolado: PNão group), mice with lower predisposition to depressive behavior which were submitted to social isolation (pouco deprimido–isolado: PIso group), mice with higher predisposition to depressive behavior which were not submitted to social isolation (muito deprimido– não isolado: MNão group) and mice with higher predisposition to depressive behavior which were submitted to social isolation (muito deprimido–isolado: MIso group). In experiment 3 we showed that differences in depressive behavior among the 4 groups were not related to motor function alterations since no difference was observed in the open-field test. In experiments 4-8 we showed that fluoxetine or amitriptiline long-term treatments were effective in decreasing immobility duration only in the MNão group, suggesting that immobility durations presented by the PNão and the PIso groups reflect a non-pathological (reactive) depressive behavior, whereas the immobility duration presented by the MIso group models an antidepressant resistent pathological depression. In experiment 9 and 10 we showed that long term treatment with vitamins C + E significantly reduced depressive behavior in both MNão and MIso groups, suggesting the clinical potential of such treatment for antidepressant resistent depression. In experiment 11 we demonstrated that the pro-oxidant agents aminotriazole and 3-nitropropionic acid were not able to increase depressive behavior in mice without genetic predisposition to depressive behavior. Finally, experiment 12 showed that both the increase in depressive behavior produced by social isolation or by higher depressive behavior predisposition and the antidepressive behavior produced by antioxidant treatment in the MIso group are not associated with hypocampal lipid peroxidation but are associated with alterations in plasmatic corticosterone levels. In conclusion, in the present study we have developed an animal model of antidepressant resistent depression which is sensitive to antioxidant long-term treatment. These findings strengthen the involvement of oxidative stress in the pathophysiology of depression and suggest the clinical potential of antioxidant agents to treat antidepressant resistent depression. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-04-29T21:05:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 330536.pdf: 3500374 bytes, checksum: 15992ed423b9beb5fa061d0b05f86e13 (MD5) Previous issue date: 2014 / As Leishmanioses afetam cerca de 15 milhões de pessoas e constiuem um importante problema de saúde pública mundial. O controle da parasitose baseia-se principalmente na quimioterapia, usando como medicamento de primeira escolha o antimonial pentavalente SbV (Glucantime®). O surgimento de resistência aos fármacos de uso clínico, a ausência de vacinas eficazes, a propagação de vetores resistentes aos inseticidas tornam o controle das Leishmanioses difícil e complexo. Para entender melhor o papel dos macrófagos na Leishmaniose humana e estabelecer estratégias para prevenir os efeitos nocivos da Leishmania, dados sobre os padrões de expressão de genes e proteínas, em Macrófagos Derivados de Monócitos de Humanos (MDM) infectados com Leishmania sob condições de tratamento, são essenciais. Neste estudo, foram analisadas as alterações nos níveis de expressão de genes e proteínas de macrófagos humanos, durante a infecção in vitro por Leishmania braziliensis e tratamento com Glucantime usando qPCR-arrays, ensaios de Western blot, microscopia confocal e ensaios de inibição usando siRNA. Os resultados indicam que a infecção com L. braziliensis e o tratamento SbV conjuntamente, modulam a expressão de genes em macrófagos, em particular aqueles envolvidos na via de biossíntese da glutationa. Análises de correlação permitiram determinar superexpressão dos marcadores GSTP1, GCLM, GSR, GSS, TRX e ABCB5 tanto nos níveis do mRNA quanto das proteínas, em MDM de humanos infectados e tratados quando comparados ao grupo controle. O estudo da localização subcelular mostrou que o transportador ABCB5 apresenta uma localização predominantemente fagolisossomal, indicando que essa proteína poderia estar envolvida no transporte de Glucantime. Nos ensaios de inibição selectiva o silenciamento dos genes gstp1, gss e abcb5 aumentaram o efeito leishmanicida in vitro do SbV induzindo uma redução da sobrevivência intracelular de L. brazilienisis em macrófagos THP-1. Essa resposta foi igualmente confirmada para o gene gstp1 onde os resultados de tempo e concentração dependente mostraram que a redução da sobrevivência intracelular era observada 24h após exposição ao SbV e a uma dose menor. Nossos resultados sugerem que há uma ativação de genes envolvidos na defesa antioxidante em macrófagos humanos como resposta a infecção com L. braziliensis e o tratamento com Glucantime, potencializando a detoxificação do fármaco. Conclui-se que as proteínas GSTP1, GSS e ABCB5 seriam potenciais alvos candidatos para intervenção terapêutica mediante a inibição seletiva destes marcadores. <br> / Abstract: Leishmaniasis affects millions of people worldwide and represents a major public health problem. Leishmaniasis control relies primarily on chemotherapy, with the mainstay being pentavalent antimony (SbV) complexed to carbohydrates in the form of sodium stibogluconate (Pentostam®) or meglumine antimoniate (Glucantime®). Due to the emergence of drug resistance, the absence of effective vaccines and the spread of insecticide-resistant vectors, Leishmaniasis control is becoming extremely difficult and complex. To better understand the role of macrophages in human Leishmaniasis and to advance in new strategies to prevent the harmful effects of Leishmania parasites, information about the protein expression patterns in the context of Leishmania-infected human monocyte-derived macrophages (MDM) under drug treatment conditions are essential. In this study, we analyzed the changes in the expression levels of human MDM proteins during in vitro infection by Leishmania braziliensis and treatment with Glucantime using qPCR arrays, Western blot, confocal microscopy and siRNA inhibition assays. The results indicate that L. braziliensis infection/SbV treatment modulated the host gene expression, particularly in the glutathione biosynthesis pathway. Comparing results from gene transcription and protein expression analysis, allowed to determine that GSTP1, GCLM, GSR, GSS, TXN, and ABCB5 were strongly up-regulated at both mRNA and protein levels when compared to the control group. Subcellular localization studies showed mostly fagolissosomal location of the ABCB5 transportes, indicating that this protein may be involved in the transport of Glucantime. Selective inhibition assays by gene silencing siRNA assays of gstp1, gss and abcb5 showed an increased in vitro leishmanicidal effect to Sb exposure inducing a decrease in intracellular survival of L. brazilienisis in THP-1 macrophages. This response was also confirmed for gstp1 gene in which the results showed a time and dose-dependent effect in the reduction of intracellular survival where even at 24 hours of exposure to SbV and a lower dose of 8 mg/mL significant intracellular leishmanicidal effects were found. These analyses suggest that, modulations of human MDM by L. braziliensis infection and Glucantime treatment raise the activation of genes participating in antioxidant defense enhancing the drug detoxification. Therefore we concluded that GSTP1, GSS and ABCB5 proteins could be potential targets for therapeutic interventions by selective inhibition of these markers.