Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais. / Made available in DSpace on 2012-10-23T07:36:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 246407.pdf: 1552649 bytes, checksum: 5547ed51e8faa1914b287981fd499edf (MD5) / Desde a década de 80, o cultivo da macieira no Brasil vem sofrendo grandes perdas devido à Mancha foliar de Glomerella (MFG) causada por Colletotrichum spp. Esta doença tem se espalhado pelos pomares do sul do Brasil, e recentemente também pelos pomares dos Estados Unidos. Devido aos prejuízos econômicos causados pela MFG é crescente a preocupação por parte da comunidade científica em buscar o entendimento dos mecanismos genéticos envolvidos na resistência a essa doença, uma vez que não existem medidas de controle químico que atendam às exigências da produção integrada (PIM). Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi desenvolver um mapa genético de ligação, em macieira, saturado para a região que contém o gene de resistência à Mancha Foliar de Glomerella (Colletotrichum gloeosporioides), visando contribuir para a eficiência na geração de novas cultivares de macieira resistentes a essa doença. Foi analisada reação à MFG em três populações de mapeamento (M-13/91 x M-46/94, M-13/91 x 'Gala' e 'Pink Lady' x 'Imperatriz'). Os resultados obtidos nos bioensaios indicaram a necessidade de se fazer ajustes de metodologia para incubação da MFG em cada caso. A reação identificada nas populações em estudo aponta para uma resistência monogênica recessiva, concordando, portanto, com os resultados encontrados na literatura. Contudo, os resultados encontrados também não permitem rejeitar a hipótese de segregação de 9:7. Assim, não se descarta a hipótese de que outro gene esteja interferindo nas respostas das plantas ao Colletotricum spp. Foi também realizada a seleção de marcadores RAPD, microssatélites e AFLP, visando mapeamento genético de macieira em duas populações segregantes. Para os marcadores RAPD a estratégia de seleção de marcadores utilizada foi o BSA. Dos 195 iniciadores RAPD testados, nenhum apresentou produto de amplificação co-segregando com o gene de resistência a MFG. No caso dos marcadores microssatélites o polimorfismo encontrado foi abundante e dos 93 iniciadores testados, 63 foram utilizados no mapeamento genético da população M-13/91 x 'Gala'. Os marcadores AFLP apresentaram uma média de 13,1 e 10,5 fragmentos polimórficos entre os parentais das duas populações em estudo. Um mapa genético de ligação foi construído para a população proveniente do cruzamento M-13/91 x 'Gala' contendo 23 grupos de ligação abrangendo 1.179,7 cM com uma média de distância entre marcadores de 8,8 cM. O gene de resistência a MFG foi mapeado no grupo de ligação 15, próximo aos microssatélites NZ02b1 (2,1 cM), CH03b06 (6,8cM) e Hi03g06 (7,5 cM). O microssatélite NZ02b1 pode ser utilizado em programas de melhoramento de macieira, visando selecionar plantas resistentes a MFG, uma vez que o mesmo encontra-se ligado ao gene de resistência a essa doença. A freqüência de recombinação relativamente baixa entre eles caracteriza este como um marcador útil para seleção indireta.

Resumo: A "queda prematura dos frutos cítricos" é causada pelo fungo Colletotrichum acutatum. O controle eficiente da doença baseia-se na pulverização com fungicidas na época da florada. Esta é considerada a principal doença fúngica do sudoeste paulista, para tanto o trabalho foi instalado em pomar comercial na cidade de Santa Cruz do Rio Pardo / SP, e teve por finalidade avaliar a eficiência de algumas misturas formuladas de fungicidas, adicionados ou não com Cloreto de Benzalcônio (CB). Utilizou-se os seguintes tratamentos: T1) tratamento testemunha; T2) CB 10g ia/100L; T3) CB 5g ia/100L; T4) Famoxadona+Mancozebe (FA + MA) 6,25+625 g ia/100L; T5) FA + MA + CB 6,25+62,5+10 g ia/100L; T6) Carbendazim (CA) 50 g ia/100L; T7) CA + CB 50+5 g ia/100L; T8) CA + CB 50+10 g ia/100L; T9) Fenilpiridinilamina (FE) 25 g ia/100L; T10) FE + CB 25+10 g ia/100L; T11) Trifloxistrobina+Tebuconazol (TR + TE) 4+8 g ia/100L; T12) TR + TE + CB 4+8+10 g ia/100L; T13) 1ª aplicação foi usado Difenoconazol 6,25 g ia/100L e nas três subseqüentes foi utilizado Carbendazim 50 g ia/100L, Convencional da fazenda (CF) + CB 10g ia/100L em todas aplicações; T14) CF. Os tratamentos foram compostos de 4 aplicações, nos estádios de "cabeça de alfinete", "cotonete", flor aberta e ¾ de queda de pétalas, as avaliações foram feitas medindo a quantidade de flores com sintomas, numero médio efetivo de frutos e produtividade mediante a contagem dos frutos na colheita. Os tratamentos T11 e T12 mostraram-se os mais eficientes no controle da doença, já os tratamentos compostos por Cloreto de Benzalcônio não foram eficiente quando aplicados isoladamente e quando misturados para os tratamentos (T5; T12; T13;) embora não haja diferença estatística significativa proporcionou um acréscimo em produtividade fazendo-se necessário a realização de estudos complementares / Abstract: The postbloom fruit drop (PFC) is caused by Colletotrichum acutatum. Fungicide application during bloom is the main measure of control. PFC is considered the main fungal disease of the southwest of Sao Paulo State, for both the work was installed in a commercial orchard in Santa Cruz do Rio Pardo and aimed at evaluating the efficiency of fungicides formulated mixtures, added or not with benzalkonium chloride (BC). The treatment utilized were:T1) control; T2) - BC 10g ia/100L; T3) BC 5g ia/100L; T4) famaxodone + mancozeb (FA + MA) 6.25 + 625g ia/100L; T5) FA + MA + (BC) 62.5 + 6.25 + 10g ia/100L; T6) carbendazim (CA) 50g ia/100L; T7) CA + BC 50 + 5g ia/100L; T8) CA + BC 50 + 10g ia/100L; T9) phenylpyridinamine (PH) 25g ia/100L; T10) PH + BC 25 + 10g ia/100L, T-11 trifloxystrobin + tebuconazol (TR + TE) 4 + 8g ia/100L; T12) TR + TE + BC 4 + 8 + 10g ia/100L; T13) first application with difenoconazol 6.25g ia/100L, and three application subsequent carbendazim 50g ia/100L. Conventional farm application (CF) added with BC 10g ia/100L in all applications; T14) BC. The treatments consisted of 4 applications, in stages of pin head, 'hollow ball', and flowers open and ¾ of petal fall, the assessments were made by measuring the amount of flowers with symptoms, effectives average number of fruits and number of fruit at harvest. The treatments T11 and T12 were the most effective for disease control, the treatments with benzalkonium chloride not provided efficient when applied alone or in mixture in tank with the treatments (T5; T12; T13), although not observed difference significant, provided a increased productivity, necessity studies complements / Orientador: Antonio de Goes / Coorientador: Ricardo Braga Baldassari / Banca: Renato Ferrari dos Reis / Banca: Rita de Cássia Panizzi / Mestre

Orientador: Antonio de Goes / Coorientador: Hélida Mara Magalhães / Banca: Rita de Cassia Panizzi / Banca: Luciana Rossini Pinto / Banca: Viviani Vieira Marques / Banca: Rubens Pazza / Resumo: O Brasil é o terceiro maior produtor mundial de frutas, com mais de 40 milhões de toneladas anuais, e uma área plantada em torno de três milhões de hectares. Entretanto, esse setor ressente-se de problemas complexos, de natureza diversa, como os de ordem fitossanitária, dentre eles, destaca-se a antracnose, causada por fungos do gênero Colletotrichum. As perdas resultantes desta doença dão-se em pré e pós-colheita, podendo chegar a 90% de prejuízo dependendo das condições ambientais e do manejo adotado. Nas frutíferas tropicais o Colletotrichum gloeosporioides é descrito com maior frequência, como agente causal da antracnose, porem estudos recentes demonstram que nem sempre apenas essa espécie é a responsável pela doença. De um modo geral, os patógenos descritos em associação com o complexo de sintomas de antracnose em frutas são classificados Colletotrichum gloeosporioides e Colletotrichum acutatum. Estudos recentes demonstram que nem sempre os critérios adotados para a classificação da espécie do patógeno associado aos sintomas são os adequados. Com isso, para maior precisão e clareza é fundamental o estudo completo desses patógenos, envolvendo analises simultâneas das caracteristicas morfoculturais e moleculares / Abstract: Brazil ranks third among the largest fruit producers in the world with more than 40 million tons per year and a planted area of about three million hectares. However, this sector has complex problems of different nature, such as plant diseases and among them, anthracnose. This disease is caused by fungi of the Colletotrichum genus. Losses resulting from this disease happen pre- and post-harvest, reaching 90% of damage depending on environmental conditions and management adopted. Colletotrichum gloeosporioides is described most often as the causal agent of anthracnose in tropical fruits; however, recent studies have shown that this is not always the case. In general, the pathogens described in connection with the complex symptoms of anthracnose in fruits are classified either as Colletotrichum gloeosporioides or Colletotrichum acutatum. But, recent studies have shown that the criteria adopted to classify the pathogen species associated with the symptoms are not always the most appropriate. Thus, simultaneous analysis of morphocultural and molecular characteristics are necessary to classify these pathogen species more accurately / Doutor

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-11-03T03:09:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 336035.pdf: 1749129 bytes, checksum: 652600fc4a7cd061b80febeb468258e5 (MD5) Previous issue date: 2015 / A macieira é uma espécie frutícola de clima temperado de maior importância comercial, tanto no contexto internacional, quanto no nacional. No sul do Brasil e Uruguai, a cultura é severamente afetada por doenças típicas de clima tropical, entre elas merece destaque a mancha foliar de Glomerella (MFG) e a podridão amarga (PA), ambas causadas por espécies do gênero Colletotrichum. A MFG e a PA podem ocorrer simultaneamente nos pomares, porém possuem muitas diferenças no que se refere à capacidade de infecção. Dessa forma, o principal objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar isolados de Colletotrichum que afetam as folhas e os frutos de macieira no sul do Brasil e Uruguai e investigar os principais mecanismos bioquímicos envolvidos no processo de infecção em folhas. No estudo de diversidade, o sequenciamento de três regiões gênicas (ITS, GAPDH e TUB2) permitiu a identificação de três espécies causadoras de PA e MFG no Brasil, Colletotrichum fructicola, Colletotrichum karstii e Colletotrichum nymphaeae; e três espécies causadoras de PA no Uruguai, Colletotrichum fructicola, Colletotrichum theobromicola e Colletotrichum melonis. Além disso, a análise filogenética e multivariada agrupou os isolados em três diferentes complexos de espécies, Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum boninense e Colletotrichum acutatum. No teste de patogenicidade em frutos, todos os isolados brasileiros provenientes de PA causaram podridão em frutos com ferimentos, mas apenas 5 em frutos sem ferimentos. No entanto, todos os isolados uruguaios causaram podridão em frutos com e sem ferimentos. Em folhas, todos os isolados brasileiros de MFG e 11 de PA foram capazes de causar mancha foliar, enquanto que somente um isolado uruguaio de PA possuiu essa capacidade. Na produção de enzimas extracelulares, o isolado de PA apresentou os maiores níveis de laccase e pectina liase em meio líquido comparado ao isolado de MFG. Em folhas de macieira, o isolado de MFG apresentou apressórios predominantemente sésseis, enquanto que os de PA foram pedicelados. O isolado de PA exibiu mais conídios com múltiplos apressórios melanizadosprovavelmente como um sinal das múltiplas tentativas de infecção. O acúmulo de H2O2 foi raramente observado nos sítios de infecção, e o escurecimento em algumas células epidérmicas não foi associado à reação de hipersensibilidade. Folhas inoculadas com o isolado de MFG aumentaram a perda de eletrólitos 48 h após a inoculação (HAI), o reflete a transição do fungo da fase biotrófica para a necrotrófica. Em relação à atividade das enzimas envolvidas com o estresse oxidativo, os dois isolados testados aumentaram a atividade das enzimas guaiacol peroxidase, catalase e glutationa redutase, porém de forma diferenciada ao longo do tempo. A atividade da ascorbato peroxidase apresentou um aumento 6 HAI com o isolado de MFG, enquanto que a atividade da superóxido dismutase não foi afetada. Plantas inoculadas com o isolado de MFG tiveram um menor acúmulo de H2O2 48 HAI, o que pode indicar a eficiência das enzimas antioxidantes na eliminação de espécies reativas de oxigênio e em evitar a morte celular. Os isolados de MFG parecem ter um mecanismo para suprimir as respostas de defesa da planta.<br> / Abstract : Apple is one of the most important fruit of temperate climate in the international and national context. In Southern Brazil and Uruguay, it is severely affected by tropical climate diseases, such as, glomerella leaf spot (GLS) and apple bitter rot (ABR), both caused by Colletotrichum spp. GLS and ABR can occur simultaneously in orchards, but have clear differences in tissue specialization. Thus, the main objective of this work was to identify and characterize Colletotrichum isolates that affects leaves and fruits in Southern Brazil and Uruguay and investigate biochemical mechanisms involved during the leaf infection process. In diversity studies, sequencing of three gene regions (ITS, GAPDH and TUB2) allowed the identification of three species causing ABR and GLS in Brazil, i.e., Colletotrichum fructicola, Colletotrichum karstii, and Colletotrichum nymphaeae; and three species causing ABR in Uruguay, i.e., Colletotrichum fructicola, Colletotrichum theobromicola, and Colletotrichum melonis. Furthermore, phylogenetic and multivariate analysis clustered the isolates into three different species complexes, C. gloeosporioides, C. boninense and C. acutatum. In pathogenicity test, Brazilian isolates caused ABR in wounded fruits, but only five in non-wounded ones. Uruguayan isolates produced symptoms in fruits with or without previous wounding. All Brazilian isolates from GLS and eleven from ABR were able to cause GLS symptoms, while a sole Uruguayan ABR-isolate caused leaf spot symptom. In culture, ABR-isolate exhibited higher levels of laccase and pectin lyase, but not polygalacturonase. On leaves, GLS-isolate formed appressoria mostly sessile, while ABR-isolate pedicellate. ABR-isolate germlings formed multiple melanized appressoria probably as a sign of unsuccessful infection attempts. H2O2 accumulation was rarely visualized at infection sites and was not associated with hypersensitive response. GLS-isolate markedly increased the electrolyte leakage at 48 hours after infection (HAI) reflecting its transition from the biotrophic into the necrotrophic phase. Both isolates influenced differently oxidative stress enzymes,increasing the activities of guaiacol peroxidase, catalase and glutathione reductase at different times, except for superoxide dismutase that remained unaltered. Ascorbate peroxidase activity was only affected with GLS-isolate at 6 HAI. GLS-isolate reduced H2O2 accumulation in leaves at 48 HAI, suggesting that antioxidative enzymes act more efficiently in scavenging reactive oxygen species and avoiding cell death. GLS-isolate seems, therefore, to have a mechanism to suppress plant defence responses.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-06T17:04:14Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1027371 bytes, checksum: 4e398d839358cc6d5df73b81780ade4f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T17:04:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1027371 bytes, checksum: 4e398d839358cc6d5df73b81780ade4f (MD5) Previous issue date: 2016-07-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Colletotrichum é um gênero que apresenta dez complexos de espécies, bem como uma série de pequenos grupos e espécies únicas. Esse gênero inclui importantes patógenos causadores de doenças em plantas. Entretanto, espécies de Colletotrichum são também descritas como endofíticas em plantas lenhosas e herbáceas, e têm demonstrado produzir compostos bioativos. A seringueira (Hevea spp.) tem como seu centro de origem a região Amazônica e a espécie H. brasiliensis apresenta a mais alta produtividade de borracha natural (látex). No Brasil, até hoje, nenhum estudo foi feito para determinar as espécies de Colletotrichum endofíticas associadas à seringueira. Diante disso, foram estudados 176 isolados de Colletotrichum spp. obtidos de folhas, caule e raízes de H. brasiliensis e H. guianensis. Para isso, foram sequenciadas quatro regiões gênicas que permitiram compreender os relacionamentos filogenéticos dos isolados estudados. Somado a isso, foi utilizado o marcador IRAP para avaliar a diversidade genética e, finalmente, foi analisada a concordância entre os agrupamentos feitos pelos dois métodos moleculares utilizados. Há diferentes espécies que pertencem aos complexos C. boninense e C. gloeosporioides e a espécie C. cliviae como endofíticas em Hevea spp. A análise utilizando o marcador molecular IRAP revelou uma alta variabilidade genética, formando diferentes clusters na análise de agrupamentos. Esses resultados foram condizentes em alguns casos com os agrupamentos observados nas análises filogenéticas. Neste trabalho se descreve pela primeira vez a presença de isolados do complexo C. gloesporioides em caule e raiz de Hevea spp. / Colletotrichum is a genus that features ten species complex, as well as a number of small groups and singletons. This genus includes important pathogens causing diseases in plants. However, Colletotrichum spp. are also described as endophytic in woody and herbaceous plants, and have been shown to produce bioactive compounds. Amazon forest is the center of origin of the rubber tree (Hevea spp.) and H. brasiliensis specie has the highest productivity of natural rubber (latex). In Brazil, until now, no researches about Colletotrichum endophytic species associated with rubber tree were done. Therefore, 176 isolates of Colletotrichum spp. obtained from leaves, stems and roots of H. brasiliensis and H. guianensis were studied. For this, in order to understand phylogenetic relationships four gene regions were sequenced. Additionally, to assess the genetic variability the IRAP marker was used and the correlation between the groupings made by two molecular methods were analyzed. There are different species belonging to C. boninense and C. gloeosporioides species complex and C. cliviae as endophytic in Hevea spp. The analysis using molecular marker IRAP revealed a high genetic variability, forming different clusters. These results were consistent in some cases with clusters observed in phylogenetic analyzes. Here was described for the first time the presence of the complex isolated in C. gloesporioides stem and roots of Hevea spp.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-19T13:01:26Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4192864 bytes, checksum: 5620a24d933c3a64b3d7cc69f709ce7a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-19T13:01:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4192864 bytes, checksum: 5620a24d933c3a64b3d7cc69f709ce7a (MD5) Previous issue date: 2000-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Esse trabalho objetivou: a) Levantar a micobiota associada às seguintes espécies: aguapé (Eichhornia crassipes); alface d'água (Pistia estratiotes); canavieira (Echinochloa polystachya); aguapé de cordão (Eichhornia azurea); taboa (Typha domingensis); capim barrigudo (Paspalum repens); pinheirinho d'água (Myriophyllum aquaticum); cataia gigante (Polygonum spectabile); tripa de sapo (Alternanthera phylloxeroides); salvinia (Salvinia auriculata); nas bacias dos Rios Doce e São Francisco. b) Avaliar, preliminarmente o potencial de Colletotrichum typhae como micoherbicida para T. domingensis. Na bacia do Rio Doce foram coletadas 44 amostras e na do São Francisco coletaram-se 63 amostras de plantas aquáticas apresentando sintomas de doença. Em toda a extensão mediana e inferior do Rio Doce, todas as plantas alvo foram encontradas, à exceção de capim barrigudo. No Rio São Francisco encontraram-se todas as plantas alvo com exceção de M. aquaticum. Associados a T. domingensis foram identificados os fungos C. typhae, Stenella sp., Cercospora sp., Cladosporium typharum, Phoma sp. e Pestalotiopsis dichaeta. Os testes de patogenicidade efetuados indicam que apenas os isolados de C. typhae eram patogênicos a T. domingensis. O crescimento da colônia de C. typhae em meio artificial foi maior em fotoperíodo de 24 horas. As percentagens de germinação de conídios nos fotoperíodos: 0 hora, 12 horas e 24 horas foram 32,4, 37,9 e 39,1%, respectivamente, não havendo diferença significativa entre os tratamentos. O fungo cresceu bem às temperaturas de 25 e 35 o C, e o intervalo de temperatura adequado para germinação foi de 15 a 20 o C. A faixa ótima de temperatura e período de molhamento foliar para o desenvolvimento da doença foi de 15 a 20 o C e de 24 a 48 horas respectivamente. A incidência diminuiu com o aumento da temperatura e a redução do período de molhamento foliar. No teste de especificidade C. typhae só foi patogênico a T. domingensis. Pelos resultados, obtidos conclui-se que o fungo tem algumas das características desejáveis para utilização no desenvolvimento de micoherbicidas. / The purpose of this work was: a) Surveying the basin of the rivers São Francisco and Doce for the mycobiota associated with the following aquatic weeds: water hyacinth (Eichhornia crassipes), water lettuce (Pistia estratiotes), “canavieira” (Echinochloa polystachya), anchored water hyacinth (Eichhornia azurea), cattail (Typha domingensis), “capim barrigudo” (Paspalum repens), parrot’s feathers (Myriophyllum aquaticum), giant smartweed (Polygonum spectabile), alligator weed (Alternanthera phylloxeroides) and salvinia (Salvinia auriculata); in. b) To undertake a primarinary evaluation of the poterntial of Colletotrichum typhae as mycoherbicide for T. domingensis. Forty four samples of diseased aquatic weeds were collected in the basin of the river Doce and 63 in the basin of the river São Francisco. All the target-plants except for P. repens were found in the lower half of the river Doce. In the river São Francisco all the plants except for M. aquaticum were collected. The fungi C. typhae, Stenella sp., Cercospora sp., Cladosporium typharum, Phoma sp., and Pestalotiopsis dichaeta were found associated with T. domingensis. The pathogenicity tests indicated that only C. typhae isolates were pathogenic to T. domingensis. C. typhae grew better under constant light. Conidial germination percentages varied under different light regimes (0 hour, 12 hours and 24 hours). These were 32.4, 37.9, and 39.1% respectively. These results were nevertheless not statistically significantly different. The fungus grew well between 25 and 35o C and the adequate temperature for conidial germination was between 15 and 20o C. Ideal conditions of temperature and dew period for disease development was 15 - 20o C and 24 - 48 hours of dew. Disease incidence decreased with the increase of temperature and reduction of dew period. The specificity test showed that C. typhae was only pathogenic to T. domingensis. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-06-26T11:34:18Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 244166 bytes, checksum: 28b894d0c84b084bd5eff97592beb6a0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-26T11:34:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 244166 bytes, checksum: 28b894d0c84b084bd5eff97592beb6a0 (MD5) Previous issue date: 2005-02-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O objetivo geral deste trabalho foi piramidar genes de resistência à antracnose em um cultivar de feijoeiro de grão tipo “carioca”. Em uma primeira etapa, 30 linhagens elite de feijoeiro com grãos tipo “carioca”, desenvolvidas por diversos centros de pesquisa do país, e que têm se destacado em ensaios de competição, foram inoculadas com 18 patótipos de Colletotrichum lindemuthianum. Os resultados das inoculações mostraram que a grande parte das linhagens é altamente suscetível à maioria dos patótipos avaliados. No entanto, de certa forma, os programas de melhoramento têm evoluído em relação ao desenvolvimento de cultivares de maior espectro de resistência, pois quatro das linhagens apresentaram resistência a todos os patótipos de ocorrência nacional avaliados. Para piramidar os dois principais genes de resistência à antracnose do cultivar G 2333, duas populações derivadas do cruzamento entre Rudá (recorrente) e G 2333 (doador) foram utilizadas. Uma população RC1F3 foi selecionada com base no marcador molecular OPAB3450C ligado ao gene Co-5, e outra população RC3F5 foi selecionada com base no marcador OPAS13950C ligado ao gene Co-42. Foram feitos testes de progênie por meio de inoculações com C. lindemuthianum; análises moleculares com primers RAPD para determinação das distâncias genéticas. Obteve-se 10 famílias homozigotas para o gene Co-42 e similares ao genitor recorrente, e sete famílias homozigotas para o gene Co-5 e com distância genética relativa em relação ao genitor recorrente variando de 40,9 a 27,8%, com todas as famílias, apresentando características de grãos similares às do cultivar Rudá. Estas 17 famílias foram inoculadas com 12 patótipos de C. lindemuthianum, sendo 10 de ocorrência freqüente no território nacional e outros dois de alta virulência, provenientes de outros países. As linhagens portadoras do gene Co-5 comportaram-se como suscetíveis apenas aos patótipos estrangeiros, enquanto as linhagens portadoras do gene Co-42 apresentaram resistência a todos os patótipos, inclusive ao 2047. Com base nos dados de distância genética e espectro de resistência, as linhagens 1-46-7 (Co-5) e 19-1-1-7 (Co-42) foram selecionadas para serem utilizadas na etapa final da piramidação. Essas duas linhagens foram cruzadas com a linhagem Rudá “R” portadora dos genes Co-4, Co-6, Co-10, Ur- ON e Phg-1. Plantas F1 provenientes de cada cruzamento foram intercruzadas e geraram sementes F1. Das plantas F1 obtidas destas sementes, foi extraído DNA para análise com marcadores moleculares estreitamente relacionados aos genes de resistência (SCAR Y20, AB3, AZ20, F10, BA8, H13 e RAPD AS13). Plantas F1 que apresentaram marcas relacionadas a todos os genes de resistência foram submetidas à autofecundação para gerar sementes F2. Destas, foram obtidas 505 plantas F2, das quais o DNA foi extraído para novas análises moleculares. A partir destas análises, foram selecionadas 52 plantas F2, contendo as sete marcas moleculares. Estas plantas foram autofecundadas, obtendo- se famílias F3 que foram abertas em teste de progênie com o patótipo 2047, a fim de se diferenciar as plantas que possuem o alelo Co-42 das que possuem o alelo Co-4. Das 52 famílias abertas no teste de progênie, 18 apresentaram resistência não segregante ao patótipo 2047, o que permite dizer que estas famílias apresentam o alelo Co-42 fixado. / This work aimed to pyramid anthracnose resistance genes in a "carioca-type" common bean line. Initially, 30 elite “carioca-type” common bean lines developed by several research centers in the country, with outstanding performance in official trials, were inoculated with 18 pathotypes of Colletotrichum lindemuthianum. The inoculation results showed that most of the lines were highly susceptible to most of the pathotypes. They also showed that the breeding programs have advanced lately in the development of lines with larger resistance spectrum. Four lines were resistant to all the pathotypes tested that occur in Brazil. To pyramid the two main anthracnose resistance genes present in cultivar G 2333, two populations derived from crosses between Rudá (recurent parent) and G 2333 (donor parent) were used. One population (BC1F3) underwent selection based on the presence of RAPD molecular marker OPB03450C linked to the allele Co-5. The other population (BC3F5) was selected based on the marker OPAS13950C linked to the allele Co-42. Progeny tests were performed by inoculations with C. lindemuthianum, and molecular analyses were done with RAPD primers for genetic distances determination. Ten homozygous families were obtained for the allele Co-42, all genetically similar to the recurrent parent. Seven homozygous families for the allele Co-5 with relative genetic distance in relation to the recurrent parent varying from 40.9 to 27.8% were also obtained. All the selected families presented “carioca-type” grains like the recurrent parent Rudá. These 17 lines were inoculated with 12 C. lindemuthianum pathotypes, 10 of which frequently detected in several growing regions in Brazil and two highly virulent pathotypes from other countries. The lines bearing the Co-5 allele were susceptible only to the foreign pathotypes, while the lines bearing the Co-42 allele were resistant to all pathotypes, including pathotype 2047. Based on the genetic distance and resistance spectrum data lines 1-46-7 (Co-5) and 19-1-1-7 (Co-42) were selected to be used in the final stage of the pyramiding process. These two lines were crossed with the line Rudá "R" bearing the alleles Co-4, Co-6, Co-10, Ur-ON and Phg-1. F1 plants derived from each cross were intercrossed producing F1 seeds. DNA was extracted from these plants for analyses with molecular markers closely linked to the resistance genes (SCAR Y20, AB3, AZ20, F10, BA8, H13 and RAPD AS13). F1 plants bearing all the markers were selfed and a total of 505 F2 plants were obtained. Molecular analyses of these plants revealed that 52 of them contained the seven molecular markers. These plants were selfed, and the resulting F3 families were inoculated with pathotype 2047, in order to allow the distinction of plants bearing the Co-42 allele from the ones with the Co-4 allele. From 52 F3 families, 18 did not segregate for resistance to pathotype 2047. This result allows to conclude that these families have fixed the Co-42.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-05T20:01:47Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 613081 bytes, checksum: 51a4d7528d9d2e7c73d3049bdf77a998 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-05T20:01:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 613081 bytes, checksum: 51a4d7528d9d2e7c73d3049bdf77a998 (MD5) Previous issue date: 2001-01-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Isolinhas de feijoeiro-comum obtidas por cruzamentos em que o cultivar Rudá foi o genitor recorrente foram inoculadas com diferentes patótipos de ferrugem, antracnose e mancha-angular, analisadas com marcadores moleculares de DNA e avaliadas por meio de características quantitativas. As inoculações feitas em isolinhas RC n F 2:3 indicaram que as proporções entre as famílias heterozigotas e homozigotas para a resistência foram 2:1 em todos os cruzamentos. Para resistência à ferrugem e antracnose simultaneamente, foram selecionadas 13 isolinhas do retrocruzamento Rudá x Ouro Negro. Para resistência à antracnose, foram selecionadas, ainda, outras 16 isolinhas, sendo 10 isolinhas provenientes do retrocruzamento Rudá x TO e seis do retrocruzamento Rudá x AB 136. Cinco isolinhas homozigotas do retrocruzamento Rudá x AND 277 foram selecionadas para resistência à mancha-angular. De todas as isolinhas homozigotas, foram selecionadas aquelas geneticamente mais próximas do genitor recorrente, pela utilização de marcadores RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA). Essas isolinhas foram utilizadas para avaliar a reação de resistência a ferrugem, antracnose e mancha-angular causadas pelos patótipos Uromyces appendiculatus, Colletotrichum lindemuthianum e Phaeoisariopsis griseola , respectivamente. A s isolinhas ON-25-99 e ON-48-99 se comportavam como resistentes a todos os patótipos de ferrugem inoculados. As isolinhas TO-41-5-6-24 e AB-74-1-13 foram resistentes a todos os patótipos de antracnose testados. A isolinha AN-7-2-9-4-6 foi resistente aos seis isolados de mancha-angular testados. As isolinhas mais próximas geneticamente do recorrente foram caracterizadas com marcadores moleculares fortemente ligados aos genes de resistência dos genitores doadores. Treze marcadores foram testados, e oito deles (OPAZ20 940 , OPB03 1800 , OPH13 490 , ScarBA08 560 , ScarF10 1050 , OPX11 630 , OPY20 830 e Satt174) podem ser potencialmente utilizados para dar continuidade ao processo de piramidização dos genes de resistência no cultivar Rudá. Os outros cinco marcadores sofreram recombinação no processo de retrocruzamento. As isolinhas foram, ainda, testadas para características quantitativas, em que foram estimados diferentes parâmetros genéticos, correlações fenotípicas, genotípicas e ambientais e efeitos diretos e indiretos de cada característica sobre a produção, mediante o uso da análise de trilha conduzido em dois ambientes diferentes. Os caracteres “número de vagens por planta” e “número de sementes por vagem” apresentaram maiores correlações genotípicas com a produção por planta. A média das características e a precisão experimental foram semelhantes nos dois ensaios. Os resultados encontrados neste trabalho são importantes para dar continuidade ao processo de piramidização de genes visando à resistência a ferrugem, antracnose e mancha- angular no cultivar Rudá atualmente sendo conduzido pelo BIOAGRO/UFV. / Common bean isolines obtained from crosses in which cultivar Rudá was the recurrent parent were inoculated with different rust, anthracnose, and angular leaf spot pathotypes, and also characterized with DNA molecular markers and evaluated for quantitative traits. The inoculations done in BC n F 2:3 isolines showed that the proportion between heterozygous and homozygous resistant plants was 2:1 for all crosses. Thirteen homozygous isolines resistant to rust and anthracnose simultaneously were selected from the cross Rudá x Ouro Negro. Sixteen isolines resistant to anthracnose were selected, 10 from the cross Rudá x TO, and six isolines from the cross Rudá x AB 136. Six homozygous isolines resistant to angular leaf spot were selected from the cross Rudá x AND 277. The isolines genetically closer to the recurrent parent were identified with the use of the random amplified DNA (RAPD) technique. These lines were tested against different pathotypes of the causing agents of rust, anthracnose and angular leaf spot, Uromyces appendiculatus, Colletotrichum lindemuthianum and Phaeoisariopsis griseola , respectively. Isolines ON-25-99 and ON-48-99 were resistant to all rust pathotypes tested. Isolines TO-41-5-6-24 and AB-74-1-13 were resistant to all anthracnose pathotypes tested. Isoline AN-7-2-9-4-6 was resistant to six angular spot pathotypes tested. The isolines which were genetically closer to the recurrent parent were characterized with molecular markers previously shown to be tightly linked to disease resistance genes in the donor parents. Thirteen markers were tested and eight of them (OPAZ20 940 , OPB03 1800 , OPH13 490 , ScarBA08 560 , ScarF10 1050 , OPX11 630 , OPY20 830 and Satt174) proved to be potentially useful in a breeding program to pyramid the resistance genes in the same cultivar. The other five markers separated from the resistance loci due to recombinations during the backcrossing process. The isolines were also tested for quantitative traits and different genetic parameters, phenotypic, genotypic and environmental correlations, and the direct effect of each characteristic on productivity by using path analysis in two different environments. The characters ‘number of pods per plant’ and ‘number of seeds per pod’ presented the highest correlations with productivity per plant. The mean values for the traits and the experimental precision were similar for both assays. Our results will be important to continue the pyramidation process of resistance genes for rust, anthracnose, and angular leaf spot in the cultivar Rudá presently being conducted at BIOAGRO/UFV.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-12-17T14:22:48Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 774323 bytes, checksum: b6cf6fb63a7b4fe8f1931ff6b345b7f3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-17T14:22:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 774323 bytes, checksum: b6cf6fb63a7b4fe8f1931ff6b345b7f3 (MD5) Previous issue date: 2009-02-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Desde o contato inicial até o estabelecimento dos sintomas da doença, C. lindemuthianum regula a expressão diferencial de genes essenciais para a patogenicidade que vão possibilitar a colonização do tecido hospedeiro e a finalização do seu ciclo de infecção. Nesse trabalho, o gene pacCl, que codifica o regulador transcricional de resposta ao pH ambiental, foi isolado e caracterizado estrutural e funcionalmente. Uma sequência de 2.546 pb foi isolada do banco genômico de C. lindemuthianum, correspondente ao gene pacCl. Esta sequência apresenta uma ORF de 1.746 pb, codificando, portanto, uma proteína de 581 resíduos de aminoácidos. Foram identificados na sequência, três íntrons putativos, contendo 60, 58 e 74 pb, cada um deles. O alinhamento múltiplo da sequência deduzida da proteína, com as sequências disponíveis nos bancos de dados, demonstrou elevado grau de identidade e similaridade da proteína identificada com o regulador transcricional PacC/Him101 de fungos filamentosos e leveduras, respectivamente. Além disso, a proteína PacCl se mostrou eficiente como marcador filogenético em fungos, pois agrupou de forma coerente os organismos taxonomicamente relacionados. A hibridização de DNA usando o gene pacCl como sonda, mostrou que o gene encontra- se em uma única cópia no genoma de C. lindemuthianum. Do mesmo modo, a análise do mutante Mutpac2 por hibridização de DNA, confirmou que o gene pacCl havia sido inativado por um evento de recombinação homóloga do tipo troca gênica. Por fim, a técnica de PCR quantitativo em tempo real mostrou que o gene pacCl é expresso em todas as fases do ciclo de infecção, porém, os maiores níveis foram encontrados no final da fase necrotrófica. Pode-se sugerir que um dos fatores responsáveis por esse aumento, seja a alcalinização do tecido vegetal, decorrente do envelhecimento do tecido, e/ou até mesmo da própria atividade do fungo, que em muitos casos secreta substâncias alcalinizantes, como por exemplo, amônia. / From the initial contact to the establishment of the symptoms of the disease, C. lindemuthianum regulates the differential expression of the genes that are essential to the pathogenicity and will make possible the colonization of the host tissue and the conclusion of its infection cycle. In this study, the pacCl gene codifying the transcriptional regulator of the response to the environmental pH was isolated and structurally and functionally characterized. A 2.546 pb sequence was isolated from the genomic bank of C. lindemuthianum, corresponding to the gene pacCl. This sequence shows an ORF with 1.746 pb, therefore codifying a protein containing 581 residues of amino acids. In the sequence, three putative introns containing 60, 58 and 74 pb each one were identified. The multiple alignment of the protein-deduced sequence with the sequences available in the data file showed both high identity level and similarity of the protein identified with the PacC/Him101 transcriptional regulator of filamentous fungus and yeasts, respectively. In addition, the PacCl protein was shown to be efficient as a phylogenetic marker in fungus, since it coherently grouped those taxonomically related organisms. The DNA hybridization by using the pacCl gene as probe showed the gene is found in one single copy in the genome of C. lindemuthianum. In the same way, the mutant Mutpac2 analysis by hybridization of DNA corroborated the gene pacCl was inactivated by an event of the genic exchange-type homologous recombination. Finally, the quantitative PCR technique in real time showed the pacCl gene to be expressed in all phases of the infection cycle, but the highest levels were found at the end of the necrotrophic phase. It can be suggested that one of the factors responsible for this increase to be the alkalization of the vegetal tissue due to the aging of the tissue and/or even from the activity of the fungus, since in many cases it secretes some alkalinizing substances such as the ammonia.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-04-26T11:31:40Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 828935 bytes, checksum: 1db7e181e01f2e3911c0020c68d4f833 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-26T11:31:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 828935 bytes, checksum: 1db7e181e01f2e3911c0020c68d4f833 (MD5) Previous issue date: 2015-02-19 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A Anthracnose, causada pelo fungo Colletotrichum truncatum, é uma das doenças de soja mais importantes no mundo, mas não há estudos avaliando as alterações fisiológicas neste patossistema. Portanto, uma abordagem para avaliar os eventos que ocorrem no local da infecção e perto da área infectada na folha, ao longo do tempo, contribuirá para uma melhor compreensão da interação planta-hospedeiro e atividade fotossintética. Assim, o presente estudo buscou investigar parâmetros de fluorescência da clorofila a (Chl a) na área da lesão e uma área adjacente, associando os ás trocas gasosas e avaliação de pigmentos fotossintéticos em plantas de soja inoculadas ou não inoculadas com C. truncatum. O parâmetros de trocas gasosas não foram alterados em plantas inoculadas. No entanto, ocorreu redução da concentração de Chl a, Ch b e da Chl total (a + b) nas plantas inoculadas as 72 e 144 horas após a inoculação (hai), com redução máxima à 144 hai de 24% para Chl a, que demonstrou ser mais sensível que a Chl b, ocasionando, portanto, a redução da razão Chl a/ Chl b. Também foi encontrado queda em valores de fluorescência da clorofila a como, Fluorescência inicial (Fo), Fluorescência máxima (Fm), Eficiencia quântica máxima do fotossistema II (Fv/Fm), Rendimento quântico de dissipação de energia regulada Y(NPQ) e coeficiente não- fotoquímico (qN), e um acréscimo no Rendimento quântico efetivo do PSII Y(II), Rendimento quântico de dissipação de energia não regulada (NO) e coeficiente fotoquímico (qP) nas área sintomática de plantas inoculadas. Entretanto esses parâmetros sofreram pequenas alterações nas áreas adjacentes das plantas inoculadas, diferindo apenas em alguns tempos. Demonstrando, dessa forma, um menor efeito do patógeno nas áreas adjacentes. / Anthracnose, caused by Colletotrichum truncatum, is one of the most important soybean diseases worldwide. However, there are no studies evaluating the physiological changes affecting this pathossystem. Therefore, one approach to evaluating events that occur at the site of infection and near the infected area on the leaf, over time, will contribute to a better understanding of the host-plant interaction and photosynthetic activity. The present study aimed to investigate chlorophyll a fluorescence parameters at injured and adjacent areas and the related changes in gas exchange and evaluation of photosynthetic pigments in soybean plants inoculated or non-inoculated with C. truncatum. There were no significant differences regarding gas exchange parameters for inoculated plants. However, there was a reduction in the concentration of Chl a, Chl b e Chl total (a + b) of inoculated plants in the 72 and 144 hours after inoculation (hai). Reduction in chlorophyll a fluorescence parameters to as initial fluorescence (Fo), maximal fluorescence (Fm), maximal photosystem II quantum yield (Fv/ Fm), quantum yield of regulated energy dissipation Y (NPQ) and coefficient non-photochemical (qN), and an increase in the Effective PSII quantum yield Y (II), quantum yield of non- regulated energy dissipation (NO) and photochemical coefficient (qP) in the symptomatic area plants inoculated. However, these parameters have undergone minor adjacent areas of inoculated plants, differing only in a few days. Demonstrating a smaller effect of the pathogen in adjacent.