Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2016-12-16T09:22:11Z No. of bitstreams: 2 Tese - Aline de Araujo Freitas - 2015.pdf: 4592269 bytes, checksum: 4e3d268a1c9a9eb3594460d9effc4237 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-12-16T13:48:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Aline de Araujo Freitas - 2015.pdf: 4592269 bytes, checksum: 4e3d268a1c9a9eb3594460d9effc4237 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-16T13:48:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Aline de Araujo Freitas - 2015.pdf: 4592269 bytes, checksum: 4e3d268a1c9a9eb3594460d9effc4237 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-09-25 / Outro / Leprosy is a complex dermato-neurological disease that presents multiple clinical forms and its differential diagnosis requires clinical expertise. The clinical manifestations in leprosy are defined by the type of imune response developed by the patient: cellular/Th1 or humoral/Th2 in paucibacillary/PB and multibacillary disease respectively. Multidrugtherapy (MDT) is considered efficacious however its impact on the immune responses of PB and MB leprosy patients remains unknown. Currently no single laboratory test is capable to detect all clinical forms of leprosy and laboratory tests are not available to aid the differential diagnosis. This study evaluated the impact of MDT on both cell-mediated immunity (CMI) and antibody responses by the follow up of untreated PB and MB leprosy patients evaluated at 2 time points after MDT using a panel of recombinants M. leprae proteins (rML). At diagnosis, PB patients produced interferon gamma (IFNγ), and MB patients exhibited low or absent response. Shortly after MDT, IFNγ production was observed only to LID-1 in PB and MB leprosy patients (p<0,05). Almost 2 years after MDT, IFNγ levels declined in PB and MB patients. Most untreated PB patients were seronegative to PGL-I and rML, remaining so after MDT. Most untreated MB patients were seropositive to all antigens, and IgG to rMLs declined after MDT. Reduction in antigen-specific CMI in PB and in antibody response in MB patients may help monitor MDT effectiveness but may also have a role in the risk of relapse/reinfection. This study also evaluated the usefulness of cellular test (Whole blood assay – WBA to LID-1) and serology to PGL-I and LID-1 to differential diagnosis of leprosy. Newly diagnosed and untreated PB and MB leprosy patients, patients with other dermatoses clinically suspect of leprosy and healthy endemic individuals were recruited in two geographic areas of Brazil (Goiânia and Fortaleza). Higher IFN levels to LID-1 were detected in PB leprosy patients when compared to all other study groups: MB patients (p<0.0001), other dermatoses (p=0.0008) and endemic controls (p<0.0001). In MB patients, the seroreactivity to LID-1 and PGL-I was statistically different from: PB leprosy (p<0.0001), other dermatoses (p<0.0001) and endemic controls (p<0.0001). The IFN detection by WBA-LID-1 and the serology to PGL-I and LID-1 were able to discriminate leprosy patients from patients with other dermatoses indicating their utility for the differential diagnosis of leprosy. / A hanseníase é uma doença dermato-neurológica complexa que apresenta múltiplas formas clínicas e o diagnóstico diferencial requer expertise clínica. As manifestações clínicas da hanseníase são definidas de acordo com o tipo de resposta imune do paciente, a qual pode ser celular/Th1 na doença paucibacilar (PB) ou humoral/Th2 na doença multibacilar (MB). A multidrogaterapia (MDT) é considerada eficaz, todavia, pouco se sabe sobre seu impacto na resposta imune de pacientes com hanseníase PB e MB. Não existe um teste laboratorial único adequado para o diagnóstico de todas as formas clínicas da hanseníase e que possa contribuir para o diagnóstico diferencial. Este estudo avaliou o impacto da MDT nas respostas imune celular e humoral de pacientes PB e MB recém-diagnosticados, não tratados em dois momentos após a conclusão da MDT utilizando um painel de proteínas recombinantes do M. leprae (rMLs). Ao diagnóstico, pacientes PB produziram IFN para todas as rMLs, pacientes MB produziram baixos níveis de IFN. Cerca de 4-8 meses após o término da MDT observou-se aumento nos níveis de IFN em pacientes PB e MB (p<0,05), contudo, não houve produção de IFN cerca de 2 anos após o término da MDT. A sororeatividade de pacientes PB ao diagnóstico foi negativa para a maioria das rMLs e para o PGL-I e este perfil não foi modificado após a MDT. Ao diagnóstico pacientes MB apresentaram alta soropositividade para rMLs e PGL-I após a MDT os níveis de IgG declinaram. A redução nos níveis de IFN para LID-1 em pacientes PB e o declínio de IgG em pacientes MB podem auxiliar no monitoramento da eficácia da MDT, entretanto não se sabe qual a repercussão desta redução no risco de recidiva/reinfecção. Este estudo também avaliou a utilidade do teste de imunidade celular (ensaio de sangue total/EST para LID-1) e da sorologia para PGL-I e LID-1 no diagnóstico diferencial da hanseníase. Pacientes PB e MB recém- diagnosticados, não tratados, pacientes com outras dermatoses clinicamente semelhantes à hanseníase e indivíduos saudáveis de área endêmica (EC) foram recrutados em duas áreas endêmicas do Brasil (Goiânia e Fortaleza). Maiores níveis de IFN para LID-1 foram detectados em pacientes PB quando comparados aos outros grupos de estudo: MB (p<0,0001), outras dermatoses (p=0,0008) e EC (p<0,0001). Em pacientes MB a sororeatividade para LID-1 e PGL-I foi estatisticamente diferente quando comparada com pacientes PB (p<0,0001), pacientes com outras dermatoses (p<0,0001) e EC (p<0,0001). A detecção de IFN e a sorologia para PGL-I e LID-1 foram capazes de discriminar pacientes PB e MB de pacientes com outras dermatoses indicando a utilidade destes testes no diagnóstico diferencial da hanseníase.

Submitted by Maryse Santos (maryseeu4@gmail.com) on 2016-09-02T14:35:55Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado PPGIBA Isabella da Motta Passos.pdf: 3280548 bytes, checksum: b79b047ec4d53bbab26965c89fd73380 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-16T12:44:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado PPGIBA Isabella da Motta Passos.pdf: 3280548 bytes, checksum: b79b047ec4d53bbab26965c89fd73380 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-16T12:50:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado PPGIBA Isabella da Motta Passos.pdf: 3280548 bytes, checksum: b79b047ec4d53bbab26965c89fd73380 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-16T12:50:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado PPGIBA Isabella da Motta Passos.pdf: 3280548 bytes, checksum: b79b047ec4d53bbab26965c89fd73380 (MD5) Previous issue date: 2011-09-20 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leprosy is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae, with a broad clinical spectrum, which affects the skin and nerves. Only 5% of infected individuals will develop the disease. Patients present with various clinical forms directly associated with the immune response, where individuals that have the tuberculoid pole, presents a vigorous cell-mediated response, with predominant Th1 cytokines profile, resulting in bacillary containment and individuals that have the lepromatous pole, presents humoral immune response with production of Th2 cytokines, which cause bacillary spread. Although they are described Th1 and Th2 responses in leprosy, various aspects of immunology of this disease have yet to be elucidated. Interleukin 17 (IL-17) is a cytokine capable of producing inflammation, indizindo quimicinas (CXCL8) and colony-stimulating factor granulocyte (G-CSG), with subsequent increase of neutrophils to the infection site. Plays an important role in the pathological development of autoimmune diseases and infection by extracellular pathogens, when produced by T helper lymphocytes. In intracellular infections, as is the case of mycobacteria, IL-17 acts in the defense early in the infection, being produced by cells of the innate system, such as lymphocytes Tδγ. This type of immune response has not been studied in leprosy and the aim to investigate the response pattern of IL-17 in leprosy patients was collected from peripheral blood to evaluate the levels of IL-17, IL-23 and IL-6 in serum by ELISA. We also analyzed the expression of genes for IL-17, IL-23 and IL-6 in biopsies of skin lesions by polymerase chain reaction quantitative (qPCR). This study aimed to evaluate the IL-17 and related cytokines response and compare the pattern of response observed among patients of the tuberculoid pole, lepromatous and healthy subjects. The results showed no detection of IL- 17 and IL-23 in peripheral blood in as many patients as in controls, but IL-6 was increased in lepromatous patients. When evaluated the expression of these cytokines in biopsy lesions of leprosy patients, all clinical forms showed low expression of IL-17, IL23 and IL-6 compared to healthy subjects. Moreover, negative correlation was demonstrated expression of IL-17 and IL-23 with the bacterial index. This absence of IL-17 in patients may be a constitutive feature of leprosy genetic or circumstantial event induced by a local presence of the pathogen, as an escape mechanism. / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica causada pelo Mycobacterium leprae, de amplo espectro clínico, que afeta principalmente a pele e os nervos. Apenas 5% dos indivíduos infectados irão desenvolver a doença. Os pacientes apresentam diversas formas clínicas associadas diretamente com a resposta imune, onde indivíduos do polo tuberculoide apresentam vigorosa resposta mediada por células, com perfil predominante de citocinas Th1, resultando na contenção bacilar e indivíduos do polo virchowiano apresentam resposta imune humoral, com produção de citocinas Th2, que ocasionam a dispersão bacilar. Embora estejam descritas as respostas Th1 e Th2 na hanseníase, vários aspectos da imunologia desta doença precisam ainda ser elucidados. A interleucina 17 (IL-17) é uma citocina capaz de produzir inflamação, indizindo quimicinas (CXCL8) e fator estimulante de colônias de granulócitos (G-CSG), com aumento subsequente de neutrófilos para o local na infecção. Tem papel importante no desenvolvimento patológico das doenças autoimunes e na infecção por patógenos extracelulares, quando produzidas pelos linfócitos T helper. Nas infecções intracelulares, como é caso das micobacterioses, a IL-17 atua na defesa nos primeiros momentos da infecção, sendo produzida pelas células do sistema inato, como os linfocitos Tδγ. Este tipo de resposta imunológica ainda não havia sido estudada na hanseníase e com intuito de investigar o padrão de resposta IL-17 em pacientes com hanseníase foi realizada coleta de sangue periférico para avaliação da produção das citocinas IL-17, IL-23 e IL-6 no soro pela técnica de ELISA. Também foi avaliada a expressão dos genes para IL-17, IL-23 e IL-6 em biópsias de lesão cutânea pela reação em cadeia da polimerase quantitativo (qPCR). Este estudo teve como objetivo avaliar as citocinas relacionas à resposta IL-17 e comparar o padrão de resposta observado entre os pacientes dos pólos tuberculoide, virchowiano e indivíduos controles. Os resultados mostraram ausência de detecção de IL-17 e IL-23 no sangue periférico tantos nos pacientes quanto nos controles, porém IL-6 estava aumentada nos pacientes virchowianos. Quando avaliados a expressão dessas citocinas na biópsia lesão dos pacientes de hanseníase, todas as formas clínicas apresentaram baixa expressão de IL-17, IL23 e IL-6 em comparação aos controles. Além disso, foi demonstrada correlação negativa da expressão de IL-17 e IL-23 com o índice baciloscópico. Esta ausência de IL-17 em pacientes pode ser uma característica constitutiva genética da hanseníase ou um evento circunstancial induzido pela presença local do patógeno, como um mecanismo de escape.

Em 2015 ocorreram no mundo 210.758 casos novos de hanseníase, representando uma taxa de detecção de 3,2 casos para cada 100.000 habitantes. O Brasil foi o segundo país em número de casos, com um coeficiente de detecção de 14,6 casos por 100.000 habitantes. Uma das principais características epidemiológicas da hanseníase é sua heterogeneidade e desigualdade de distribuição em um local geograficamente definido, o que torna relevante identificar áreas mais suscetíveis que explicam a ocorrência da doença nesses locais. Objetivo: Identificar áreas de maior e de menor risco para a ocorrência de hanseníase em Ribeirão Preto/SP. Materiais e Métodos: Trata-se de um estudo ecológico, realizado no município de Ribeirão Preto/SP, em que foram considerados os casos de hanseníase notificados no SINAN no período de janeiro de 2006 a dezembro de 2013. Para detecção de risco para aglomerados espaciais e espaço-temporais dos casos de hanseníase procedeu-se inicialmente a geocodificação dos casos por meio do software TerraView versão 4.2.2, utilizando como unidade de análise ecológica o setor censitário urbano. A técnica de estatística de varredura foi processada controlando- se a ocorrência de casos pelo tamanho da população dos setores censitários, por sua distribuição etária e do sexo, com vistas a detecção de aglomerados no espaço e no espaço-tempo de alto e baixo risco relativo (RR) com seus respectivos intervalos de confiança em 95%. Fixou-se erro tipo I em 5% (p<0,05) como estatisticamente significativos. A técnica de varredura foi processada no software SaTScan 9.4 e os mapas temáticos contendo o RR dos aglomerados foram feitos por meio do software ArcGIS 10.1. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Escola de Enfermagem de Ribeirão Preto/USP (nº 44637215.0.0000.5393). Resultados: Foram notificados 434 casos de hanseníase no período de investigação, dos quais 392 casos foram geocodificados (95%). A análise de varredura dos casos de hanseníase possibilitou a detecção de dois aglomerados espaciais estatisticamente significativos (p<0,05), no qual um aglomerado de alto risco (RR=3,41; IC95%: 2,721-4,267; p=0,000), e um de baixo risco (RR=0,41; IC95%: 0,326-0,528; p=0,000). Na análise espaço-temporal, foram identificados três aglomerados estatisticamente significativos (p<0,05), sendo dois de alto risco (RR=24,35; IC95%: 11,133-52,984; p=0,006), (RR=15,24, IC95%: 10,114-22,919; p=0,000) ocorridos no período de 2012 a 2012 e 2012 a 2013, respectivamente; e um aglomerado de baixo risco (RR=0,35; IC95%: 0,252-0,485) no período de 2008 a 2011. Conclusões: O estudo possibilitou a identificação das áreas de maior e menor risco para o acometimento pela hanseníase. Os locais com maior RR situam-se nos distritos de saúde Norte, Oeste e Central, caracterizados por apresentar os piores indicadores socioeconômicos do município, com carências em habitação, renda, escolaridade e acesso a serviços de saúde, o que evidencia a desigualdade social no local sob estudo / In 2015, 210,758 new cases of leprosy occurred in the world, representing a detection rate of 3.2 cases per 100,000 inhabitants. Brazil was the second country in terms of number of cases, with a detection coefficient of 14.6 cases per 100,000 inhabitants. The main epidemiological characteristics of leprosy is its heterogeneity and inequality distribution in an area geographically located, which becomes the disease an important issue to identify areas with Risk. Objective: To identify areas with high and low risk for occurrence of leprosy in Ribeirão Preto / SP. Materials and Methods: This is an ecological study, carried out in Ribeirão Preto / SP, in which the cases were gathered through SINAN from January 2006 to December 2013. For the detection of areas with Spatial Risk and Spatial Temporal Risk, initially the cases of leprosy cases were geocoded cases using TerraView software version 4.2.2; Census tract was considered as ecological analysis unit or urban. The scan statistic was performed considering occurrence of cases by size of the population in census tract according age and sex. It was measured the Relative Risk and its confident interval by 95%. Type I error was set at 5% (p <0.05) as statistically significant. The scanning technique was used by SaTScan 9.4 software and the thematic maps was constructed by ArcGIS 10.1. The study was approved by the Research Ethics Committee of Ribeirão Preto School of Nursing - USP (nº 44637215.0.0000.5393). Results: A total of 434 leprosy cases were reported, of which 392 cases were geocoded (95%). Through Scan Statistic two areas were observed as statistically significant (p <0.05), being one area with high risk (RR = 3.41; CI95%: 2.721-4.267; p=0.000), and another one with low risk (RR = 0.41; CI95%: 0.326-0.528; p=0.000). In the space-time analysis, three statistically significant clusters (p <0.05) were identified, two of them were with high risk (RR = 24.35; CI95%: 11.133-52.984; p=0.006), (RR = 15.24; CI95%: 10.114-22.919; p=0.000) and one with low risk (RR = 0, 35; CI95%: 0.252-0.485; p=0.000). Conclusions: The study provided the identification of the areas with high and low risk for transmission of leprosy. The areas with high Risk are located in the districts of North, West and Central health, which also present the social vulnerability in terms of dwelling, income, schooling and access to the health services

Introdução: A hanseníase pode acometer a pele e o sistema nervoso periférico podendo levar a graves deformidades. É causada pelo Mycobacterium leprae, bacilo álcool-ácido resistente, parasita exclusivamente intracelular. Atualmente, a hanseníase é classificada em dois grandes grupos: paucibacilar (menos de cinco lesões) e multibacilar (mais de cinco lesões). É um problema de saúde pública, estando o Brasil entre os países de maior endemicidade no mundo. A morbidade dessa doença milenar se deve ao fato de causar incapacidades, por vezes irreversíveis, além do estigma que a acompanha, levando ao comprometimento da qualidade de vida. Vários trabalhos têm sido realizados a respeito da qualidade de vida em doenças dermatológicas, como psoríase, dermatite atópica, acne, herpes genital, hanseníase, no sentido de se tentar avaliar o grau de comprometimento do bem-estar físico, psicossocial e de atividades da rotina diária, assim como se tentar melhorar a relação médico-paciente e das ações de saúde, com o intuito de se minimizar os problemas decorrentes de cada enfermidade. Objetivo: avaliar o comprometimento da qualidade de vida nos pacientes do grupo paucibacilar de hanseníase em tratamento ambulatorial. Métodos: aplicação dos questionários Dermatology Life Quality Index e Short Form-36. O Dermatology Life Quality Index é um questionário específico para a dermatologia e é constituído de 10 questões, cujo escore varia de zero a 30, sendo o máximo valor (30) relacionado ao maior comprometimento da qualidade de vida. O Short Form-36, questionário mais genérico, abrange oito domínios (Capacidade Funcional, Aspectos físicos, Dor, Estado geral de saúde, Vitalidade, Aspectos sociais, Aspectos emocionais e Saúde mental), distribuídos em 11 questões, cada qual com número variável de itens, perfazendo 36 itens, que nos dá um escore que pode variar de zero a 100, sendo o maior escore (100) atribuído ao menor comprometimento da qualidade de vida. Foram aplicados esses dois questionários em 49 doentes com hanseníase do grupo paucibacilar. Resultados: Dos 49 pacientes que participaram do estudo, 36 do sexo feminino e 13 do sexo masculino, a maioria (63%) não apresentou comprometimento da qualidade de vida, de acordo com os resultados obtidos através do questionário Dermatology Life Quality Index. Ao aplicar o questionário genérico Short Form - 36, os escores alcançados nos diversos domínios também demonstraram pouco comprometimento da qualidade de vida no grupo estudado / Introduction - Leprosy can affect the skin and peripheral nervous system and can lead to severe deformities. It is caused by Mycobacterium leprae, Bacillus acid-resistant, an intracellular parasite exclusively. Currently, leprosy is classified into two major groups: paucibacillary (less than five lesions) and multibacillary (more than five lesions). It is a public health problem, with Brazil among the countries with the highest endemicity in the world. The millennial morbidity of this disease is due to the fact that causes disabilities, sometimes irreversible, besides the stigma that accompanies it, compromising the quality of life. Several studies have been conducted regarding the quality of life in dermatological diseases such as psoriasis, atopic dermatitis, acne, genital herpes, leprosy, in order to try to assess the degree of impairment of physical well-being, psychosocial and daily routine activities as well as try to improve the doctor-patient relationship and health actions in order to minimize problems arising from each disease. Objective: To assess the actual quality of life for patients in group paucibacillary leprosy outpatients. Methods: application of the Dermatology Life Quality Index questionnaire and Short Form-36. The Dermatology Life Quality Index is a dermatology-specific questionnaire and consists of 10 questions which score ranges from zero to 30, with the maximum value (30) related to greater impairment of quality of life. The Short Form-36, more generic questionnaire covers eight domains (Physical Functioning, Role Physical, Pain, General Health, Vitality, Social, Emotional and Mental Health Aspects), distributed in 11 questions, each with varying number of items, totaling 36 items, which gives a score that can range from zero to 100, with the highest score (100) assigned to lower impairment of quality of life. These two questionnaires were applied in 49 patients with paucibacillary leprosy group. Results: Of 49 patients who participated in the study, 36 females and 13 males, most (63%) did not show quality of life compromising, according to the results obtained by the Dermatology Life Quality Index questionnaire. By applying the generic questionnaire SF - 36, the scores achieved in several domains also showed little decrease in quality of life in the studied group

A hanseniase e uma doenca endemica no Brasil sendo considerado um problema de saude publica. A hanseniase causa acometimentos oculares, cutaneos, sistemicos e nervosos, sendo este ultimo o mais importante, pois provoca alteracoes de sensibilidade e propriocepcao, que podem afetar o controle da postura. O objetivo principal deste estudo e descrever o controle postural de sujeitos portadores de hanseniase e compara-los com sujeitos saudaveis. Para tanto, tambem serao mensuradas algumas respostas sensorio-motoras possivelmente relacionadas ao controle postural destes sujeitos. Foi avaliado o controle postural por meio do Teste Clinico de Interacao Sensorial no Equilibrio modificado utilizando-se uma plataforma de forca e do BESTest, Balance Evaluation Systems Tests, uma medida funcional do equilibrio. Quanto as respostas sensorio-motoras, foram avaliados os reflexos tendinosos, a forca muscular, a palpacao de dois nervos do membro inferior, a propriocepcao, a sensibilidade cutanea, a acuidade visual, em todos os sujeitos, e o grau de incapacidades fisicas apenas nos sujeitos portadores de hanseniase. De forma geral, todas as respostas sensorio-motoras dos portadores de hanseniase estao prejudicadas. O desempenho no BESTest indica que os portadores de hanseniase apresentam dificuldades em controlar o equilibrio em tarefas tipicas das atividades da vida diaria. O desempenho nas tarefas de equilibrio quantificado pela posturografia indica que os portadores de hanseniase apresentam dificuldades em controlar o equilibrio na postura ereta quieta sem ou com manipulacao da informacao sensorial. Os resultados reportados neste trabalho mostram pela primeira vez que portadores de hanseniase possuem deficits no controle postural relevantes para a manutencao do equilibrio e para execucao de outras tarefas comuns da vida diaria. Estes resultados sugerem que portadores de hanseniase devem receber auxilio especial para que estes deficits possam ser diminuidos / Hansen\'s disease is an endemic disease in Brazil and it is considered a public health problem. The Hansen\'s disease causes eye, cutaneous, systemic, and nervous problems; being the latter the most important hence affects the sensibility and proprioception and possibly can affect postural control. The main goal of this study is to describe the postural control of individuals with Hansen\'s disease and compare them to healthy individuals. For such, it will also be measured sensory-motor responses possibly related to the postural control of these individuals. The postural control was evaluated employing a modified version of the Clinical Test of Sensory Interaction and Balance using a force plate and the BESTest, Balance Evaluation Systems Tests, a functional measure of the postural control. In regard to the sensory-motor responses, it was evaluated the tendinous reflex, muscle force, palpation of two nerves of the lower limb, proprioception, cutaneous sensibility, visual acuity, in all subjects, and the degree of physical incapacity only of individuals with Hansen\'s disease. In general, all the sensory-motor responses of the individuals with hanseniase are deteriorated. The performance in the BESTest suggests that individuals with Hansen\'s disease have problems in controlling their posture in typical daily living tasks. The performance in the postural control tasks measured by posturography also suggests that the individuals with Hansen\'s disease have problems in controlling their posture with or without the manipulation of the sensory information. These results show by the first time that individuals with Hansen\'s disease have significant postural control deficits that impair their ability to maintain their upright posture and to execute common daily living tasks. These results suggest that individuals with Hansen\'s disease must receive special attention in order to reduce these deficits

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Assistência Farmacêutica, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:12:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 341973.pdf: 1388709 bytes, checksum: 2bdb43a3c16d17306cd7d7a27ea68277 (MD5) Previous issue date: 2016 / Esta dissertação é sobre a hanseníase. A partir da perspectiva dos sujeitos atingidos pela hanseníase em Teresina, Piauí, buscamos descrever suas concepções de saúde e doença e as estratégias de atenção e autoatenção utilizadas para recuperar a saúde, bem como as interfaces da Assistência Farmacêutica com esses processos. Sob a lente de método qualitativo etnográfico, buscou-se descrever os processos de saúde-doença-atenção de pessoas atingidas pela hanseníase em Teresina, onde endemia tem incidência muito alta. Através de observação participante, entrevistas abertas e semiestruturadas, descrevemos as redes de itinerários terapêuticos oficiais e alternativas articuladas pelos indivíduos, sua relação com a cadeia de serviços de Assistência Farmacêutica, e o processo de adoecimento e cura, bem como as estratégias de atenção e autoatenção utilizadas na luta contra a hanseníase. Destacamos a forma com que os usuários articularam a rede oficial de serviços de saúde, a partir de suas experiências individuais e coletivas, bem como a estratégia de autoajuda em torno do Movimento de Reintegração das Pessoas Atingidas pela Hanseníase, o Morhan, como importante estratégia de autoatenção utilizada para a superação da sickness hansênica. Como parte do Componente Estratégico da Assistência Farmacêutica, descrevemos como a cadeia de serviços carece de estratégia, destacando pontos fundamentais para intervenção farmacêutica. Importantes desafios para a superação da hanseníase em Teresina foram levantados pelos sujeitos atingidos pela doença. Se mostrou necessário fortalecer e incentivar a integração dos serviços oficiais com as redes criadas pelos usuários, em especial com o Morhan.<br> / Abstract : This dissertation is about leprosy, approached from the people with the disease in Teresina, Piauí, Brazil. We describe their visions of health and illness, and their strategies of attention and self-attention to regain their health, as well as the role of the Pharmaceutical Assistance Chain on those processes. Through the view of a qualitative ethnographic method, we attempted to describe the processes of health-illness-care of people affected by leprosy in Teresina, where its endemicity is very high. Through participant observation, open and semistructured interviews, we described the official and unofficial nets of therapeutic itineraries performed by the individuals, their relationship with the chain of Pharmaceutical Care services, and the process of getting ill and healing back, as well as the strategies of attention and self-attention used in the combat against leprosy. We highlight the way that users articulated the official network of health services, from their individual and collective experiences, as well as self-help strategy within the Movimento de Reintegração das Pessoas Atingidas pela Hanseníase (Movement for Reintegration of People Affected by Leprosy), the Morhan, as an important strategy of self-attention used to overcome leprosy sickness. As part of the Strategic Pharmaceutical Assistance Component, we described the lack of strategy in the chain of pharmaceutical services, highlighting fundamental issues for pharmaceutical intervention. Important challenges to overcome leprosy in Teresina were raised by the individuals affected by the disease. It is necessary to strength and encourage the integration of official health services with the networks created by users, especially Morhan.

Introdução: A hanseníase é a principal causa infecciosa de neuropatia periférica e consequentes incapacidades em todo o mundo. Seu diagnóstico, na maioria das vezes é simples, especialmente quando as clássicas lesões cutâneas estão presentes. No entanto, alguns pacientes apresentam apenas envolvimento neural (forma neural pura - PNL) transformando o seu diagnóstico em um grande desafio. Nesses casos, mesmo quando essa possibilidade é aventada, sua confirmação pode ser extremamente difícil e muitos pacientes só serão corretamente diagnosticados tardiamente, quando uma neuropatia grave e irreversível já está estabelecida. Objetivos: Analisar as características de uma série de pacientes com diagnóstico definitivo ou provável de PNL seguidos no setor de doenças neuromusculares e dermatologia no HCRP em um período de 12 anos e reconhecer o padrão de apresentação mais frequente, suas manifestações clínicas e o padrão eletroneuromiográfico. Métodos: Estudo retrospectivo, observacional, cujos critérios de inclusão foram: evidência clínica de comprometimento de nervos periféricos na ausência de lesões de pele. O diagnóstico definitivo foi estabelecido quando o Mycobacterium leprae foi identificado na biópsia de nervo, e provável quando um quadro clínico sugestivo foi associado a pelo menos um dos seguintes: anti PGL1 positivo, padrão sugestivo na biópsia (neurite granulomatosa epitelióide, infiltrado linfomomononuclear, fibrose) e/ou padrão eletroneuromiográfico sugestivo. Para avaliar a importância da duração da doença na apresentação clínica, foram considerados dois grupos de acordo com o tempo da doença, 12 meses ou menos (grupo 1) e mais de 12 meses (grupo 2). Foram comparados os sinais, os sintomas, a gravidade da doença e o padrão da EMG para delinear o quadro de apresentação. Resultados: Dos 34 pacientes incluídos no estudo, 7 tinham diagnóstico definitivo e 24 diagnóstico provável. Os sintomas de início mais frequentes foram alterações sensitivas (91,2%), em 70,6% dos casos iniciaram nos membros superiores, sendo o nervo ulnar o local mais frequente. O padrão de distribuição intradérmico exclusivo foi observado apenas no grupo 1. A alteração da sensibilidade vibratória (p=0,07), a presença de alterações motoras (p=0,03) e hipo ou areflexia em 1 ou mais nervos (p=0,03) foram mais frequentemente observadas no grupo 2. Os nervos sensitivos mais frequentemente envolvidos foram o ulnar e fibular superficial. O nervo motor mais frequentemente afetado foi o ulnar. O padrão eletroneuromiográfico mais frequente foi de uma neuropatia sensitivo motora assimétrica com reduções focais da velocidade de condução e franco predomínio sensitivo. Conclusões: A PNL se apresenta invariavelmente de maneira assimétrica e com franco predomínio sensitivo. Na maioria das vezes o início ocorre nos membros superiores, especificamente no território do nervo ulnar. Há uma predisposição ao acometimento das fibras finas nos estágios iniciais e com a evolução da doença as fibras grossas passam a também serem afetadas. Os nervos sensitivos mais frequentemente envolvidos são o ulnar seguido pelo fibular superficial. / Backgrounds: Leprosy is the main infectious cause of peripheral neuropathy and disabilities in the world. Its diagnosis is straightforward when the classical skin lesions are present. However, some patients present only neural involvement (pure neural form-PNL) turning its diagnosis on a great challenge. Additionally, even when this possibility is suspected, confirmation may be extremely difficult and many patients are only correctly diagnosed late on the clinical course of the disease when a severe and irreversible neuropathy is already established. Objectives: To review the characteristics of a series of PNL patients followed in our institution in the last 12 years and recognize the clinical manifestations. Methods: Inclusion criteria: Clinical evidence of peripheral nerve impairment with no skin lesions. PNL diagnose were classified as definitive when the Mycobacterium leprae was identified under nerve biopsy, and probable when a suggestive clinical picture was associated to at least one of the following: positive anti PGL1, suggestive pattern biopsy represented by the presence of epithelioid granulomatous neuritis, mononuclear cell endoneuritis and fibrose and/or an EMG pattern showing a predominantly sensory mononeuritis multiplex pattern. Exclusion criteria: Two patients were excluded because of associated diabetes mellitus, one because had CMT1A and another had HNPP. To evaluate the importance of disease duration in clinical presentation, we considered two groups according to the time course, first that disease duration of 12 or fewer months (group 1) and those with disease duration over 12 months (group 2). Results: We reviewed 34 patients with PNL, including 7 with a definite and 24 with probable diagnosis. The most common onset symptoms were sensory (91.2 %), in 70.6 % of cases symptoms started in the upper limbs, the ulnar nerve being the most frequent site. Intradermal pattern was observed only in group 1. Vibration was altered more frequent in group 2 (p=0.07), the presence of motor abnormalities (p = 0.03) and deep tendon reflexes reduced or absent in 1 or more nerves (p = 0.03) were more frequently observed in group 2. Sensory nerves most frequently involved were the ulnar and superficial peroneal. The motor nerve most often affected was the ulnar. The most frequent EMG pattern was an asymmetrical sensory and motor neuropathy with focal slowing of conduction velocity. Conclusions: PNL is an asymmetrical sensory or sensory motor neuropathy. Upper limbs are most frequent affected with frequent ulnar nerve territory involvement. Small fibers seem to be affected at early stages. Larger fibers are affected with disease progression. It is unclear whether the PNL represents a stage prior to the appearance of typical skin lesions or whether it represents a different and more aggressive leprosy type. Phenotype characterization from early signs and symptoms its a powerful tool to PNL early diagnosis.

CHAPTER II: Objective: Our aim was to compare the performance of three serological assays in leprosy patients and their household contacts utilizing two quantitative ELISA tests using native PGL-I (PGL-1 ELISA), synthetic ND-O-HSA (ND-O-HSA ELISA), and the semi-quantitative lateral flow test (ML-Flow). Methods: Compare the performance of three immunological assays, PGL-I ELISA, ND-O-HSA ELISA, and ML-Flow were evaluated in 156 leprosy patients and 191 household contacts. Results: The sensitivity results of the PGL-1, ND-O-HSA, and ML-Flow were 68.83%, 63.65%, and 60.65%, respectively. The native and synthetic PGL-I ELISA assays detected antibodies in 22.73%, 31.82% of the paucibacillary (PB) patients, and the ML Flow test did not detect antibodies in this group. The ML-Flow test was able to discriminate patients into PB and multibacillary (MB) forms, while the native PGL-I and ND-O-HSA correlated with the bacillary load and the Ridley-Jopling clinical forms. In household contacts, the native PGL-I, ND-O-HSA, and ML-Flow assays detected seropositivity of 25%, 17%, and 10%, respectively. Conclusions: The use of ELISA and ML-Flow tests are thus recommended as additional tools in the diagnosis and classification of the clinical forms, aiding in prescribing the correct treatment regimen to prevent subsequent nerve damage and disability. CHAPTER III: Host pathogen interactions are mainly mediated by specialized molecules of the cell envelope. One of these essential mycobacterial cell wall components is the lipoarabinomannan (LAM). LAM has immunomodulatory roles, but its heterogeneity may be responsible for the differential immune response in leprosy patients and contacts. The research to structural motifs that could contribute as virulence factors and/or protective epitopes, and thereby derive effective biomarkers for diagnosis, drugs and/ or vaccines against leprosy has been very developed. Therefore, our aim was to develop specific mimetic peptides to this lipoglycan by using Phage Display of a random heptamer peptide library that may recognize a differential response in patients and contacts. We have used the anti-LAM CS-35 monoclonal antibody as a target for three rounds of selection. After sequencing and translation, peptides were pre-validated by ELISA and compared to the synthetic LAM-BSA antigen. The most reactive and repetitive peptide motif (A9) was subsequently tested against serum from 54 leprosy patients and 27 endemic controls by ELISA. The A9 phage-displayed peptide clone presented high levels of IgG antibodies in paucibacillary patients, from which 50% of them presented highly reactive sera. This reactivity has also been detected in tuberculoid, borderline-borderline and lepromatous patients. High levels of IgG1 were most frequent in endemic controls and reactional patients. On the other hand, the IgG profile and its subclasses in patients presented high levels of IgG and IgG2 and low levels of IgG1. The A9 clone presented a significant correlation with the synthetic LAM-BSA, for the IgG1 response. The highly reactive IgG response against the A9 clone was associated with the tuberculoid clinical form diagnosis, and detection of both IgG1 and IgG3 against this clone was associated with protection in endemic controls. CHAPTER IV: Heat Shock Proteins (HSPs), GroES and GroEL, are targets of strong human T-cell response, and a third of the cells responsive to M. leprae, recognize these proteins. Monoclonal antibodies mAbs CS-01 and CS-44 selected mimetic peptides that are ligands of their Fab portions, by phage display technique. Sera from 54 patients, 48 household contacts and 27 endemic controls were submitted to ELISA with B2 and A1 mimetic clones of the GroES and GroEL proteins, respectively, for detection of IgG and its subclasses. Using the mimetic clone of B2 GroES, the ELISA detected IgG antibodies present in sera of patients, contacts and endemic controls. The IgG antibodies were abundant in sera from multibacillary patients, especially in lepromatous (LL). A decline of IgG1 was found in patients and household contacts that became sick with leprosy and a raise of this subclass was present in sera of household contacts that did not develop the disease. With the mimetic clone of GroEL A1, the reactive antibodies were abundant in multibacillary patients, with a correlation with the bacillary load. In this study we observed that IgG antibodies against GroEL and GroES can be detected in the diagnosis of leprosy in serological tests produced with clones mimetics of these proteins. And the subclasses of IgG antibodies to GroES can demonstrate a targeting of antigenic molecules that induce the production of protective antibodies. / CAPÍTULO III: Objetivo: O objetivo do trabalho foi comparar a performance de três testes sorológicos em pacientes e seus contatos domiciliares utilizando dois testes quantitativos ELISA, um com o antígeno PGL-1 nativo (ELISA PGL-1), com o antígeno ND-O-HSA sintético (ELISA ND-O-HSA), e o teste semi-quantitativo do fluxo lateral (ML-FLow). Métodos: Os três testes imunológicos ELISA PGL-I, ELISA ND-O-HSA, e ML-Flow foram realizados utilizando soros de 156 pacientes com hanseníase e 191 contatos domiciliares. Resultados: Os resultados da sensibilidade dos testes ELISA PGL-1, ND-O-HSA e ML-FLow foram de 68.83%, 63.65%, e 60.65%, respectivamente. Os testes ELISA PGL-1 nativo e sintético detectaram anticorpos em 22,73% e 31,82% dos soros de pacientes paucibacilares (PB),e o teste ML-FLow não apresentou reatividade em nenhum soro. O ML-Flow foi capaz de discriminar entre os pacientes com as formas PB e multibacilares (MB), enquanto que o ELISA PGL-1 e ND-O-HSA correlacionaram com a carga bacilar e as formas clínicas de Ridley-Jopling. Em contatos domiciliares, os testes ELISA PGL-1 nativo, ND-O-HSA e Ml-FLow detectaram soropositividade de 25%, 17%, e 10%, respectivamente. Conclusões: O uso do teste ELISA e ML-Flow são recomendados no diagnóstico e classificação das formas clínicas, auxiliando na prescrição do tratamento correto e na prevenção do dano neural e da incapacidade. CAPÍTULO IV: Interação patógeno-hospedeiro é mediada principalmente por moléculas especializadas do envelope celular. Um dos componentes essenciais da parede celular das micobactérias é a lipoarabinomanana (LAM). A LAM tem um papel imunomodulador, mas a sua heterogeneidade pode ser responsável pela resposta imune diferenciada em pacientes com hanseníase e contatos. Espera-se que a pesquisa por motivos estruturais de M. leprae possam contribuir, como fatores de virulência ou epítopos de proteção, e assim, derivar biomarcadores eficazes para o diagnóstico, drogas e vacinas contra a hanseníase. Portanto, nosso objetivo foi desenvolver peptídeos miméticos específicos à LAM utilizando Phage Display de uma biblioteca aleatória de peptídeos heptameros que possam reconhecer uma resposta diferencial em pacientes com hanseníase e contatos. Nós utilizamos o anticorpo monoclonal anti-LAM, CS-35, como um alvo de três rodadas de seleção. Após seqüenciamento e tradução, os peptídeos foram pré-validados por ELISA e comparados com o antígeno sintético LAM-BSA. O motivo peptídeo mais reativo e repetitivo (A9) foi posteriormente testado contra o soro de 54 pacientes com hanseníase e 27 controles endêmicos por ELISA. O clone mimético A9 apresentou altos níveis de anticorpos IgG em pacientes paucibacibacilares (PB), sendo que 50% destes soros foram altamente reativos. Esta reação também ocorreu em pacientes tuberculóides, dimorfo-dimorfo e virchowiano. Controles endêmicos e pacientes reacionais apresentaram altos níveis de IgG1 no soro. Por outro lado, o perfil de IgG e suas subclasses em pacientes apresentou altos níveis de IgG e IgG2 e baixos níveis de IgG1. O clone A9 apresentou uma correlação positiva significativa com o antígeno LAM-BSA sintético para a resposta IgG1. A resposta de IgG altamente reativa contra o clone A9 foi associada com o diagnóstico da forma clínica tuberculóide, e a detecção de ambos, IgG1 e IgG3, contra esse clone foi associado à proteção nos controles endêmicos. CAPÍTULO V: Interação patógeno-hospedeiro é mediada principalmente por moléculas especializadas do envelope celular. Um dos componentes essenciais da parede celular das micobactérias é a lipoarabinomanana (LAM). A LAM tem um papel imunomodulador, mas a sua heterogeneidade pode ser responsável pela resposta imune diferenciada em pacientes com hanseníase e contatos. Espera-se que a pesquisa por motivos estruturais de M. leprae possam contribuir, como fatores de virulência ou epítopos de proteção, e assim, derivar biomarcadores eficazes para o diagnóstico, drogas e vacinas contra a hanseníase. Portanto, nosso objetivo foi desenvolver peptídeos miméticos específicos à LAM utilizando Phage Display de uma biblioteca aleatória de peptídeos heptameros que possam reconhecer uma resposta diferencial em pacientes com hanseníase e contatos. Nós utilizamos o anticorpo monoclonal anti-LAM, CS-35, como um alvo de três rodadas de seleção. Após seqüenciamento e tradução, os peptídeos foram pré-validados por ELISA e comparados com o antígeno sintético LAM-BSA. O motivo peptídeo mais reativo e repetitivo (A9) foi posteriormente testado contra o soro de 54 pacientes com hanseníase e 27 controles endêmicos por ELISA. O clone mimético A9 apresentou altos níveis de anticorpos IgG em pacientes paucibacibacilares (PB), sendo que 50% destes soros foram altamente reativos. Esta reação também ocorreu em pacientes tuberculóides, dimorfo-dimorfo e virchowiano. Controles endêmicos e pacientes reacionais apresentaram altos níveis de IgG1 no soro. Por outro lado, o perfil de IgG e suas subclasses em pacientes apresentou altos níveis de IgG e IgG2 e baixos níveis de IgG1. O clone A9 apresentou uma correlação positiva significativa com o antígeno LAM-BSA sintético para a resposta IgG1. A resposta de IgG altamente reativa contra o clone A9 foi associada com o diagnóstico da forma clínica tuberculóide, e a detecção de ambos, IgG1 e IgG3, contra esse clone foi associado à proteção nos controles endêmicos. / Doutor em Genética e Bioquímica

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No. of bitstreams: 3 Jairo Campos de Carvalho Avalia??o da produ??o de ?xido n?trico, citocinas e express?o de receptores Toll em leuc?citos do sangue perif?rico de pacientes com rea??es hans?nicas e formas cl?nicas da hansen?ase 2016.pdf.txt: 165886 bytes, checksum: 99c9bf145630a298a5981d91ce0b9e67 (MD5) Jairo Campos de Carvalho Avalia??o da produ??o de ?xido n?trico, citocinas e express?o de receptores Toll em leuc?citos do sangue perif?rico de pacientes com rea??es hans?nicas e formas cl?nicas da hansen?ase 2016.pdf: 2181484 bytes, checksum: d0a59c438a72ba1abbf03a31f901d434 (MD5) license.txt: 2991 bytes, checksum: 5a560609d32a3863062d77ff32785d58 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / O objetivo deste estudo foi identificar biomarcadores associados com as distintas formas/manifestações da hanseníase. Características fenotípicas (TLR2; TLR4; HLA-DR) e funcionais (NO-DAF-2T; IL-8;TNF-α; IL-4; IL-10;TGF- β) da imunidade inata (Neutrofilos-NEU; Monocitos-MON) e adaptiva (CD4+; CD8+T-cells) foram avaliadas ex vivo e sob estímulo de M. leprae in vitro (*). A população do estudo incluiu indivíduos com as forma Tuberculóide (DD/DT/T); Virchowiano (DV/V); reação hansênica Tipo-1; reação hansênica Tipo-2 e indivíduos saudáveis controle (NI). A análise dos dados demonstrou que independente da forma clínica, pacientes com hanseníase apresentaram baixo NEU TLR4+ e MON TGF-β+, enquanto DV/V apresentou alto MON HLA-DR+. Ambos DD/DT/T e DV/V apresentou aumento de CD4+IL-10+, mas não somente DV/V apresentou aumento de CD8+TLR2+ e IL-10. Pacientes com reação Tipo-1 exibiram, no geral, uma baixa na regulação de TLR na imunidade inata e adaptativa (NEU: MON TLR2+ e NEU: CD4+TLR4+). Foi observada uma alta regulação de CD4+: CD8+IL-10+ nos indivíduos com reação hansênica, mas somente pacientes com reação do Tipo-2 mostrou aumento em MON IL-10+. Assinaturas de biomarcadores específicos para M. leprae (*) revelaram uma expansão das características fenotípicas e funcionais nos pacientes com hanseníase com aumento de *MON NO-DAF-2T+ em DD/DT/T e alta regulação de *NEU TLR2+ e *CD8+IL-10+ em DV/V. Foi evidenciado diminuição na expressão dos principais biomarcadores dos pacientes com reação hansênica particularmente na imunidade adaptativa. Um resumo dos dados trabalhados indicou que MON IL-10+ e *NEU TLR4+ podem ser considerados como biomarcadores universais da hanseníase juntamente com MON TGF-β+; *MON TNF-α+; *CD4+TGF-β+; *CD8+TLR2+; *CD8+TNF-α+; *CD8+IL-4+; *CD8+TGF-β+ como um ensaio clínico relacionado com as características da hanseníase e *CD4+ como biomarcadores de reação hansênica. MON HLA-DR+; *CD8+IL-10+ foram biomarcadores polo seletivo para DV/V, NEU TLR2+; NEU TLR4+; CD4+TLR4+; *NEU NO-DAF-2T+; *MON TLR2+; *MON HLA-DR+; *CD4+TLR2+; *CD4+TLR4+; *CD8+ para reação hansênica Tipo-1 e MONIL-10+; *CD8+IL-8+ para Tipo-2. Em conclusão, este estudo mostrou a existência de diferenças em marcadores imunológicas entre as formas/manifestações da hanseníase que poderão ser futuramente aplicados como biomarcadores para estudos clínicos. / The aim of this study was to identify biomarkers associated with distinct clinical forms/manifestations of leprosy. Phenotypic (TLR2;TLR4;HLA-DR) and fuctional features (NO-DAF-2T;IL-8;TNF-α;IL-4;IL-10;TGF-β) of innate (Neutrophils- NEU;Monocytes-MON) and adaptive (CD4+;CD8+T-cells) immunity were evaluated at ex vivo and upon M. leprae stimuli in vitro (*). Study population included tuberculoid-(BB/BT/T); lepromatous-(BL/L); Type-1; Type-2 and healthy controls-(NI). Data analysis demonstrated that regardless of clinical forms, leprosy patients presented lower NEUTLR4+ and MONTGF-β+, while BL/L displayed higher MONHLA-DR+. Both BB/BT/T and BL/L showed enhanced CD4+IL-10+, but only BL/L presented increased CD8+TLR2+ and IL- 10. Type-1 patients displayed an overall downregulation of TLR in innate/adaptive immunity (NEU:MONTLR2+ and NEU:CD4+TLR4+). An overall upregulation of CD4+:CD8+IL-10+ was observed in leprosy reactions, but only Type-2 patients displayed enhanced MONIL-10+. M. leprae-specific (*) biomarker signatures revealed an expansion of phenotypic and functional features in leprosy patients with enhanced *MONNO-DAF-2T+ in BB/BT/T and upregulation of *NEUTLR2+ and *CD8+IL-10+ in BL/L. Evident was the shrinkage of most biomarkers in leprosy reaction patients particularly in the adaptive immunity. A summary of data mining indicated MONIL-10+ and *NEUTLR4+ as universal leprosy biomarkers along with MONTGF- β+;*MONTNF-α+;*CD4+TGF-β+;*CD8+TLR2+;*CD8+TNF-α+;*CD8+IL- 4+;*CD8+TGF-β+ as clinical-related leprosy features and *CD4+ as leprosy reaction biomarker. MONHLA-DR+;*CD8+IL-10+ were pole-selective biomarkers for BL/L, NEUTLR2+;NEUTLR4+;CD4+TLR4+;*NEUNO-DAF- 2T+;*MONTLR2+;*MONHLA-DR+;*CD4+TLR2+;*CD4+TLR4+; *CD8+ for Type-1 and MONIL-10+;*CD8+IL-8+ for Type-2. In conclusion, this study provided insights into the immunological features of leprosy forms/manifestations applicable as novel biomarkers for clinical studies.

Leprosy is a chronic, infectious-contagious disease caused by the Mycobacterium leprae bacillus. This is transmitted by airway and infects phagocytic cells of the skin and the Schwann cells of the peripheral nerves. Despite clinical treatment, patients may present with inflammatory complications such as leprosy reactions and lesions on peripheral nerves which may progress to physical disability. The disease may present different profiles of immune responses that are related to its clinical manifestations. Although it is known about the immune response in leprosy and the influence of hormones in the evolution of infections, there is still no understanding to generate markers that can define the most serious clinical forms and inflammatory complications of the disease. Therefore, this work aimed to identify immunological and hormonal aspects associated with the clinical presentation and complications of leprosy. The methodology included a cross-sectional study comparing groups based on the collection of clinical data and serum markers (immunological and hormonal) of healthy contact controls and patients with leprosy. In addition, a cohort study was carried out with monthly follow up and up to one year after clinical discharge in order to evaluate the occurrence of reactional episodes and/or physical disability. Serum levels of hormones (adrenocorticotrophic- ACTH, cortisol, Insulin-like growth factor type 1-IGF-1 and testosterone) and cytokines (INF-ɣ, IL-12p70, IL-17A, IL1-β, IL-10 and TNF-ɣ was related to clinical forms (indeterminate-IL, tuberculoid-TT, boderline-BL and lepromatous- LL), operational classification (paucibacillary-PB and multibacillary-MB), presence of reactional episodes and physical disability. There was a higher proportion of MB men (54.3%). MB patients also had a higher frequency of reaction episodes (44.4%) and physical disability (76.5%) when compared to patients with PB. As regards the presence of circulating hormones, high levels of ACTH were found in MB (24.2 ±13.1 ng/ml, p= 0.002) and PB (23.5 ± 14.9 ng/ml, p = 0.007) when compared whit controls (11.9 ± 12.3 ng/ml). High levels of cortisol were also detected in TT patients (12.1 ± 4.7 μg/dl) compared to controls (8.4 ± 2.7 μg/dl, p = 0.003), BL (9.02 ± 4 , 8 μg/dL, p = 0.004) and LL (8.9 ± 2.7 μg/dL, p = 0.03). Patients who had leprosy before treatment had lower levels of ACTH (19.7 ± 10.3 ng/ml) and cortisol (8.5±3.9 ng/ml; p= 0.04) when compared with the patients without reaction. A positive correlation was observed when correlating ACTH and cortisol between the hormones (CI: 0.35-0.65, r= 0.52, p <0.0001). Higher IGF-1 levels were obtained in IL patients (6.5 ± 6.4 ng/ml) than in the other forms (TT 3.03 ± 3.5 ng/ml; BL 3.1 ± 4.5 ng/ml; LL 3.6 ± 2.5 ng/ml). Patients with physical disabilities (grades 1 and 2) have lower levels of IGF-1 (2.8 ± 1.6 ng/ml) compared to those without this limitation (grade 0: 4.5 ± 2,7 ng/ml, p= 0.007). High testosterone levels were found in men over 50 years of age and MB (6.58 ± 3.2 ng/ml) when compared to PB men (4.21 ± 2.3 ng/ml) and controls (4.26 ± 0,8 ng/ml). Regarding the evaluation of immunological markers, all the cytokines evaluated were increased in the patients, in comparison to the controls, highlighting INF-ɣ (79.02 ± 26.9 pg/ml), IL-10 (156.4 ± 53 pg/ml) and TNF-α (463.3±160.6 pg/ml) that were elevated in the LL forms. Regarding IL-17A, patients with TT presented higher levels (49.2±10.5 pg/ml) when compared to patients with LL (40.7 ± 4.6 pg/ml). IL1-β was elevated in IL forms (62.9 ± 16.3 pg/ml) when compared to more severe forms of the disease and controls. Finally, the increase in INF-ɣ (97.1 ± 44.5 pg/ml, p= 0.02) and TNF-α (407.3 ± 82.08 pg/ml, p= 0.04) was related in MB patients to the occurrence of reaction episode. The latter was also higher in patients with physical disability (354.3 ± 92.2 pg/ml, p= 0.04). The hormonal and immunological markers support the hypothesis that the interaction between leprosy and the neuroendocrine and immunological systems play an important role in the natural course of M. leprae infection. Reduced concentrations of cortisol and IGF-1, high testosterone concentrations related to the worst clinical outcome suggest that these hormones are important modulators of the inflammatory episode and supports future therapeutical studies as well as the attempt of prophylactic treatment. In addition, IL-17 and IL-1β cytokines act to control bacillus multiplication. The cytokines IFN-ɣ and TNF-α were associated with the presence of a reaction suggesting a deleterious effect on the lesion. / A Hanseníase é uma doença crônica, infecto-contagiosa, causada pelo bacilo Mycobacterium leprae. Este é transmitido por via aérea superior e infecta células fagocíticas da pele e as células de Schwann dos nervos periféricos. Apesar do tratamento clínico, os pacientes podem apresentar complicações inflamatórias como as reações hansênicas e lesões em nervos periféricos o que pode evoluir para incapacidade física. A doença pode apresentar diferentes perfis de respostas imunológicas que estão relacionadas com as suas manifestações clínicas. Embora se conheça sobre a resposta imune na hanseníase e da influencia hormônal na evolução de infecções, ainda não há entendimento para gerar marcadores que possam definir as formas clínicas mais graves e complicações inflamatórias da doença. Diante disso, esse trabalho objetivou identificar aspectos imunológicos e hormonais associados à apresentação clínica e complicações da hanseníase. A metodologia incluiu um estudo transversal de comparação de grupos baseado na coleta de dados clínicos e marcadores séricos (imunológicos e hormonais) de controles contactantes sadios e pacientes com hanseníase. Além disso foi realizado um estudo de coorte com acompanhamento mensal e até um ano após a alta clínica a fim de avaliar o surgimento de episódios reacionais e/ou incapacidade física. Foram realizadas dosagem séricas de hormônios (adenocorticotrófico-ACTH, cortisol, fator de crescimento semelhante à insulina tipo 1- IGF-1 e testosterona) e de citocinas (INF-ɣ, IL-12p70, IL-17A, IL1-β, IL-10 e TNF-α) e, em seguida, relacionados às formas clínicas (Indeterminada- HI, Tuberculóide- HT, Dimorfa- HD e Virchowiana- HV), classificação operacional (Paucibacilar-PB e Multibacilar-MB), presença de episódios reacionais e incapacidade física. Os resultados encontraram maior proporção de homens MB (54,3%). Os pacientes MB também apresentaram maior frequência de episódios reacional (44,4%) e incapacidade física (76,5%) em comparação aos pacientes PB. Quanto à presença de hormônios circulantes foi encontrado níveis elevados de ACTH em MB (24,2±13,1 ng/ml; p= 0,002) e PB (23,5±14,9 ng/ml; p= 0,007) quando comparados aos controles (11,9±12,3 ng/ml). Concentrações elevadas de cortisol também foram detectados nos pacientes HT (12,1±4,7 μg/dl) em relação aos controles (8,4±2,7 μg/dl, p= 0,003), HD (9,02±4,8 μg/dl; p= 0,004) e os HV (8,9±2,7 μg/dl; p= 0,03). Os pacientes que apresentaram reação hansênica antes do tratamento tiveram níveis mais baixos de ACTH (19,7±10,3 ng/ml) e cortisol (8,5±3,9 ng/ml; p= 0,04) quando comparados com os pacientes sem reação. Também foi observado correlação positiva entre ACTH e cortisol (IC: 0,35-0,65; r=0,52; p<0,0001). Foram obtidos níveis mais altos de IGF-1 nos pacientes HI (6,5±6,4 ng/ml) que nas demais formas (HT 3,03±3,5 ng/ml; HD 3,1±4,5 ng/ml; HV 3,6±2,5 ng/ml). Os pacientes com incapacidades físicas (graus 1 e 2) apresentam concentrações mais baixas de IGF-1 (2,8±1,6 ng/ml) quando comparados aos que não apresentam essa limitação (grau 0: 4,5±2,7 ng/ml; p= 0,007). Níveis elevados de testosterona foram encontrados em homens acima de 50 anos e MB (6,58± 3,2 ng/ml) quando comparado aos homens PB (4,21± 2,3 ng/ml) e com os controles (4,26± 0,8 ng/ml). Em relação à avaliação de marcadores imunológicos todas as citocinas avaliadas estiveram aumentadas nos pacientes, em relação aos controles, destacando INF-ɣ (79,02 ± 26,9 pg/ml), IL-10 (156,4 ± 53 pg/ml) e TNF-α (463,3 ± 160,6 pg/ml) que estavam elevadas nas HV. Em relação à IL-17A, os pacientes com HT apresentaram níveis mais elevados (49,2 ± 10,5 pg/ml) quando comparados aos valores de pacientes com HV (40,7 ± 4,6 pg/ml). Já a IL1-β esteve elevada formas HI (62,9 ± 16,3 pg/ml) quando comparada às formas mais graves da doença e aos controles. Por fim o aumento em INF-ɣ (97,1 ± 44,5 pg/ml, p= 0,02) e TNF-α (407,3 ± 82,08 pg/ml, p= 0,04) esteve relacionado, nos pacientes MB, à ocorrência de episódio reacional. E esta última, também, mais elevada nos pacientes com incapacidade física (354,3 ± 92,2 pg/ml, p= 0,04). Os marcadores hormonais e imunológicos acima descritos suportam a hipótese de que a interação entre a hanseníase e os sistemas neuroendócrinos e imunológicos desempenham um papel importante no curso natural da infecção pelo M. Leprae. Concentrações reduzidas de cortisol e IGF-1, altas concentrações de testosterona relacionadas ao pior desfecho clínico sugerem esses hormônios sejam importantes moduladores do episódio inflamatório e dá suporte estudos terapeuticos futuros bem como a tentativa de tratamento profilático. Além disso, as citocinas IL-17 e IL-1β atuam no controle da multiplicação do bacilo. Já as citocinas IFN- ɣ e TNF-α foram associadas a presença de reação sugerindo um efeito deletério na lesão.