Nos últimos anos, houve uma tendência na busca por substâncias reguladoras que pudessem otimizar o processo de cicatrização de membranas timpânicas (MTs) perfuradas. Objetivos: Determinar os efeitos da utilização da insulina tópica e da biomembrana de látex natural, de forma isolada e em associação, no processo de cicatrização de perfurações traumáticas de MTs. Materiais e Métodos: MTs de 61 ratos Wistar foram perfuradas nas porções anterior e posterior ao cabo do martelo. Os animais foram divididos em quatro grupos: Controle, Insulina, Látex e Insulina+Látex. No grupo Insulina, as perfurações foram tratadas com uso tópico de insulina regular. No grupo Látex, tratadas com biomembrana de látex natural. No grupo Insulina+Látex, tratadas com associação da insulina e da biomembrana de látex. As MTs foram avaliadas por técnicas histológicas com três, cinco e sete dias após sua perfuração traumática. Foram analisadas as morfometrias das espessuras das camadas epitelial, fibrosa e mucosa; tamanho da perfuração; área de secção transversal da MT; avaliação semiquantitativa e qualitativa da produção de colágeno por microscopia de polarização; e avaliação imuno-histoquímica das células epiteliais, dos miofibroblastos e da vascularização. Resultados: A insulina e a biomembrana de látex anteciparam o fechamento das perfurações traumáticas de MTs (p<0,01); estimularam precocemente o aumento da espessura da camada epitelial externa (p<0,01); promoveram aumento precoce da espessura da camada fibrosa (p<0,01); contribuíram para a maior identificação do anticorpo anti-panqueratina como marcador epitelial (p<0,05); aumentaram a marcação do anticorpo anti-alfa-actina de músculo liso (p<0,05), caracterizando maior proliferação de miofibroblastos. A insulina, isoladamente, provocou maior formação do colágeno tecidual (p<0,05), com fibras colágenas mais espessas e melhor organizadas (p<0,05). Conclusão: A insulina e a biomembrana de látex natural, de forma isolada e em associação, aceleraram o processo de cicatrização de perfurações traumáticas de MTs. / In recent years, there has been a tendency to search for regulatory substances that can optimize the healing process of perforated tympanic membranes (TMs). Objectives: To determine the effects of using topical insulin and natural latex biomembrane, alone or in combination, in the healing process of traumatic perforations of TMs. Methods: TMs of 61 Wistar rats were perforated in two sections, anterior and posterior to the malleus. The rats were divided into 4 groups: Control, Insulin, Latex, and Insulin+Latex. The Insulin group was treated with topical regular insulin. The Latex group was treated with natural latex biomembrane. The Insulin+Latex group was treated with a combination of insulin plus latex biomembrane. The TMs were histologically examined 3, 5, and 7 days post-perforation through morphometric analysis of the thickness of the epithelial, fibrous, and mucosal layers; size of the perforation; cross sectional area of the TM; semiquantitative and qualitative evaluation of the collagen production by polarization microscopy, and immunohistochemical evaluation of epithelial cells, myofibroblasts, and vascularization markers. Results: Insulin and latex biomembrane accelerated the healing process of the perforated TMs (p<0.01); stimulated early thickening of the outer epithelial layer (p<0.01); promoted premature increase in the thickness of the fibrous layer (p<0.01); contributed to a larger identification of anti-pankeratin antibody as epithelial marker (p<0.05); increased labeling of anti-alpha smooth muscle actin antibody (p<0.05), indicating greater proliferation of myofibroblasts. When insulin was used alone, it resulted in greater formation of collagen tissue (p<0.05), with thicker and better-organized collagen fibers (p<0.05). Conclusion: Insulin and natural latex biomembrane, used alone or in combination, accelerated the healing process of traumatic perforations of TMs.

A rejeição ao aloenxerto mediada por mecanismos celulares ou humorais representa uma importante complicação no pós-transplante renal. Estudos anteriores demonstraram que o depósito de C4d peritubular é um marcador de rejeição mediada por anticorpos. A técnica padrão ouro para a pesquisa de C4d é a imunofluorescência em criostato. No entanto, o manuseio do material congelado implica em algumas limitações custo-operacionais, particularmente em nosso meio. Nos casos de rejeição mediada por anticorpos é de relevância patogenética a análise da participação de linfócitos B e plasmócitos, pois são as células responsáveis pela produção de anticorpos. Considerando que até o momento o envolvimento de linfócitos B e plasmócitos no processo de rejeição foi pouco investigado, no presente estudo também será analisada a expressão de CD20 e CD138 em biópsias renais, para caracterização destes componentes celulares. Portanto, o objetivo do presente estudo foi analisar a detecção do fragmento C4d por meio de 4 diferentes técnicas, além de analisar o infiltrado de linfócitos B e plasmócitos em biópsias de enxerto renal, correlacionando estes achados com o C4d peritubular. Foram analisadas 107 biópsias de 82 pacientes submetidos a transplante renal. A pesquisa do C4d foi realizada utilizando-se as técnicas de imunofluorescência [IF] (em cortes de criostato e de parafina) e imuno-histoquímica [IH] (em cortes de criostato e de parafina), enquanto que as pesquisas dos linfócitos B e plasmócitos foram realizadas pela técnica de IH em cortes de parafina utilizando-se os anticorpos anti-CD20 e anti-CD138, específicos para linfócitos B e plasmócitos, respectivamente. Com relação à detecção de C4d, as técnicas com maior índice de concordância com a IF-criostato, considerada padrão-ouro, foram IH-criostato (75,6% dos casos apresentaram resultados coincidentes, r=0,72; p<0,0001) e IF-parafina (73%, r=0,59; p=0,0001), enquanto a taxa de concordância na técnica de IH-parafina foi de apenas 51,4% (r=0,35; p=0,03). Analisando a evolução clínica, a sobrevida do enxerto renal em 3 anos pós-biópsia foi menor no grupo C4d positivo comparado ao grupo C4d negativo (67% vs 96%, respectivamente, p=0,01). A prevalência de linfócitos B (CD20+) foi de 54% das biópsias de enxerto renal. A análise histológica do infiltrado de linfócitos B revelou 2 padrões distintos de infiltrado: padrão de células isoladas (74%) e padrão nodular (26%). O padrão nodular esteve associado a uma menor sobrevida do enxerto renal em 3 anos pós-biópsia (61% vs 89% no grupo CD20 negativo; p=0,03; e 61% vs 87% no grupo padrão de células isoladas; p=0,03). A prevalência de plasmócitos (CD138+) em biópsias de enxerto renal foi de 59%. O infiltrado plasmocitário não esteve associado a uma pior evolução clínica do transplante. A análise da correlação entre C4d peritubular, linfócitos B e plasmócitos demonstrou que o número de células CD20+ e CD138+ foi significativamente maior nos casos C4d positivos comparados aos casos C4d negativos (CD20+: 155±53 vs 26±7 cels/mm2, respectivamente; p=0,001; CD138+: 46±22 vs 4±1 cels/mm2, respectivamente; p=0,002). O presente estudo concluiu que o depósito peritubular de C4d e o infiltrado de linfócitos B, em especial o padrão nodular, estão associados a uma evolução clínica desfavorável do transplante renal. Outra conclusão importante é que há uma associação positiva entre os infiltrados de linfócitos B e de plasmócitos com o C4d peritubular, sugerindo um possível papel destas células responsáveis pela produção de anticorpos na ativação do sistema complemento in situ. Finalmente, as técnicas de IH-criostato e IF-parafina podem ser consideradas técnicas alternativas à técnica de IF-criostato para a detecção do C4d / Allograft rejection mediated by cellular or humoral mechanisms represents an important complication after kidney transplantation. Capillary C4d deposition was recognized as a specific and independent prognostic marker of antibody mediated rejection. The gold standard technique for C4d detection is the immunofluorescence in cryostat sections. However, this technique involves some operating and costs limitations, particularly in Brazil. In antibody mediated rejection, the analysis of B lymphocytes and plasma cells is of pathogenetic relevance since these cells are responsible for antibody production. Considering that the involvement of B lymphocytes and plasma cells in the rejection process is not clear, in this study the CD20 and CD138 expression in kidney biopsies will be also analyzed. Therefore, the aim of the present study was to analyze the C4d detection by 4 different techniques and the infiltration of B lymphocytes and plasma cells in renal allograft biopsies, correlating these findings with the capillary C4d deposition. One hundred and seven biopsies of 82 renal transplant patients were analyzed. C4d was evaluated by immunofluorescence (IF) and immunohistochemistry (IHC) techniques in frozen and paraffin sections (obtained from the same patients), whereas B-lymphocytes and plasma cells were evaluated by immunohistochemistry in paraffin sections using specific antibodies anti-B Lymphocytes (CD20) and anti-plasma cells (CD138). Regarding the C4d detection, the techniques with higher concordance rate with frozen-IF, considered the gold standard, were the frozen-IHC technique (85.4% of cases showed coincident results, r=0.72; p<0.0001) and the paraffin-IF technique (73%, r=0.59; p=0.0001), whereas the concordance rate in the paraffin-IHC technique was only 51.4% (r=0.35; p=0.03). The clinical follow up analysis demonstrate that C4d positive group was associated with a poor graft survival at 3 years post-diagnosis (67% vs 96% in C4d negative group; p=0.01). The histological analysis of mature B cells (CD20+) infiltrate showed 2 distinct patterns: scattered cells and clusters. The cluster pattern was associated with poor graft survival at 3 years (61% vs 89% in the CD20 negative group; p=0.03; and 61% vs 87% in the CD20+ scattered pattern group; p=0.03). The plasma cells infiltrate was not associated with a worse clinical transplant outcome. The analysis of the capillary C4d and B lymphocytes correlation demonstrate that the number of CD20+ and CD138+ cells was significantly higher in C4d positive cases (CD20+: 155±53 vs 26±7 cells/mm2, respectively; p=0.001; CD138+: 46±22 vs 4±1 cells/mm2, respectively; p=0.002). This study concluded that C4d capillary and mature B cells (clusters pattern) are associated with worse graft survival. Another important conclusion is a positive association between B lymphocytes (mature B cells and plasma cells) and capillary C4d, suggesting a possible role of these cells, responsible for antibodies production, in the in situ complement system activation. Finally, the frozen-IHC and paraffin-IF techniques may be considered alternative to frozen-IF technique for C4d detection

INTRODUÇÃO: Os distúrbios minerais e ósseos (DMO) da doença renal crônica (DRC) estão associados ao aumento do risco de fratura, estudos relatam cerca de 3% de fraturas neste grupo de pacientes, e as mesmas ocorrem mais precocemente quando comparadas à população geral, ou seja, 16 e 13 anos antes para homens e mulheres, respectivamente. A melhora no tratamento do DMO ainda não impactou na diminuição das fraturas, assim a melhor compreensão da fisiopatologia das mesmas provavelmente contribuiria para novas abordagens terapêuticas. OBJETIVOS: avaliar informes de fraturas, de ossos longos, de um banco de biopsias ósseas de pacientes com DRC em hemodiálise, e comparar, as características clínicas, bioquímicas e os resultados da análise histomorfométrica do osso trabecular e cortical desses pacientes com o de outros sem fraturas, pareados para idade, sexo e tempo de hemodiálise. Avaliamos também, por imunohistoquimica, a expressão de proteínas envolvidas na formação (SOST) e na mineralização óssea (DMP1, MEPE) de ambos os grupos. MÉTODOS: dezessete pacientes com fratura e igual número de controles foram estudados. RESULTADOS: A prevalência de fraturas foi de 5,5 fraturas/1000 pacientes ano a maioria deles tinha menos de 60 anos e tempo em hemodiálise inferior a 10 anos. Quanto a analise dos dados bioquímicos somente os níveis de fósforo sérico foram significativamente mais baixos nos pacientes com fratura comparada aos controles. Os resultados da análise histomorfométrica revelaram que a totalidade dos pacientes com e sem fratura apresentava doença de alta remodelação e nos fraturados detectamos menor volume e espessura trabecular, maior superfície osteóide, menor superfície de reabsorção além de menor superfície mineralizante, taxa de formação e maior tempo de intervalo para mineralização óssea quando comparados aos controles. Não encontramos diferenças na análise da espessura e porosidade cortical entre os dois grupos e a expressão da DMP1 no osso cortical foi menor e da SOST no osso trabecular foi maior nos pacientes fraturados comparados aos controles além de se associarem com parâmetros estruturais, de formação, de reabsorção e de mineralização. CONCLUSÕES: No banco de informes de biópsias ósseas analisado, encontramos alta prevalência de pacientes com fratura. Os pacientes com e sem fratura apresentavam doença de alta remodelação, porém os fraturados apresentavam maior comprometimento da microarquitetura óssea assim como menor formação e maior defeito de mineralização quando comparados aos pacientes sem fratura. A expressão de proteínas ósseas envolvidas na formação e mineralização óssea se correlacionaram com parâmetros envolvidos na remodelação óssea / INTRODUCTION: Mineral and bone disorders (BMD) of chronic kidney disease (CKD) are associated with increased risk of fracture. Studies report about 3% of fractures in this group of patients, and these occur earlier than in the general population, namely 16 and 13 years earlier for men and women, respectively. Improvement in BMD treatment has not yet impacted reduction of fractures, therefore a better understanding of the pathophysiology of fractures would probably contribute to new therapeutic approaches. OBJECTIVES: evaluate report of long bone fractures from a bank of bone biopsies from patients with CKD on hemodialysis, and compare clinical and biochemical characteristics as well as the results of the histomorphometric analysis of trabecular and cortical bone of these patients with that of others without fractures, paired for age, gender, and time on hemodialysis. We also evaluated the expression of proteins involved in formation (SOST) and bone mineralization (DMP1, MEPE) of both groups by immunohistochemistry. METHODS: seventeen patients with fracture and an equal number of controls were studied. RESULTS: The prevalence of fractures was 6%, the majority of the patients were less than 60 years old, and the time on hemodialysis was less than 10 years. Regarding the analysis of the biochemical data, only serum phosphorus levels were significantly lower in patients with fracture compared to controls. Results of the histomorphometric analysis revealed that all the patients with and without fracture had high turnover disease, and in the fractured ones we detected a smaller trabecular volume and thickness, greater osteoid surface, and smaller surface of resorption in addition to smaller mineralizing surface, formation rate and longer time interval for bone mineralization when compared to controls. We did not find differences in the analysis of thickness and cortical porosity between the two groups; the DMP1 expression in the cortical bone was smaller and the SOST in the trabecular bone was higher in the fractured patients compared to that of controls, besides being associated with structural parameters, formation, reabsorption and mineralization. CONCLUSIONS: In the database of analyzed bone biopsies, we found low prevalence of patients with fracture. Patients with and without fracture had high turnover disease, but the fractured ones presented more impaired bone microarchitecture as well as lower formation and greater mineralization defect when compared to the patients without fracture. The expression of bone proteins involved in bone formation and mineralization correlated with parameters involved in bone remodeling

O objetivo deste estudo foi avaliar: 1) a resposta pulpar de dentes decíduos humanos após pulpotomia com diferentes materiais capeadores por meio de análise clínica, radiográfica e histológica; e 2) a expressão da Proteína 1 da Matriz Dentinária (DMP-1) na resposta pulpar. Vinte e cinco molares decíduos inferiores de 22 crianças com idade entre 6 e 9 anos foram criteriosamente selecionados. Os dentes foram randomicamente divididos nos grupos Formocresol de Buckley diluído a 1/5 (Grupo I - FC), Hidróxido de Cálcio (Grupo II HC), Agregado Trióxido Mineral (Grupo III MTA), Otosporin® + Hidróxido de Cálcio (Grupo IV OTO+HC) e Cimento Portland (Grupo V PC), e tratados pela técnica convencional de pulpotomia em sessão única. As avaliações clínicas e radiográficas foram realizadas até o período normal de esfoliação. Os dentes foram extraídos e processados para análise histológica e imuno-histoquímica. Os resultados clínicos e radiográficos não mostraram diferença estatisticamente significativa nos grupos estudados (p>0,05). A análise estatística da avaliação histológica revelou diferença estatisticamente significativa para presença de barreira dentinária e camada odontoblástica entre o Grupo I(FC) e os Grupos II(HC), III(MTA), IV(OTO+HC) e V(PC) visto que o Grupo I(FC) não apresentou barreira dentinária e camada odontoblástica em nenhuma das lâminas observadas. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos estudados quando da avaliação da calcificação pulpar. Para o item reabsorção interna observou-se diferença estatisticamente significativa entre o Grupo I(FC), II(HC) e os Grupos III(MTA), IV(OTO+HC) e V(PC) onde não se observaram reabsorções internas nas análises histológicas. A análise da expressão da DMP-1 demonstrou para o Grupo I(FC) imunomarcação localizada na região de calcificações pulpares localizadas nas raízes dos dentes avaliados, não havendo camada odontoblástica nem formação de barreira dentinária. Os Grupos II(HC), III(MTA), IV(OTO+HC) e V(PC) apresentaram imunomarcação na região de barreira dentinária e da camada odontoblástica, evidenciando a biocompatibilidade destes materiais, bem como a capacidade indutora para secreção de dentina. A análise conjunta dos resultados obtidos neste trabalho, com o uso de diferentes técnicas, permitiu concluir que todos os materiais empregados apresentaram índices de sucesso clínico e radiográfico aceitáveis para indicação clínica. Na análise histológica os materiais HC, MTA e PC apresentaram melhores resultados no reparo pulpar. A expressão da DMP-1 na resposta pulpar permitiu visualizar a capacidade bioindutora dos materiais HC, MTA e PC no processo de reparo pulpar e formação de barreira. A comparação entre os grupos estudados permitiu constatar que o MTA e o PC se mostraram mais eficientes, proporcionando formação de barreira dentinária e respostas do complexo dentinho-pulpar mais satisfatórias. / The aim of this study was to evaluate: 1) the pulpal response of human primary teeth after pulpotomies with different pulp capping materials through clinical, radiographic and histological analysis; and 2) the expression of Dentin Matrix Protein 1 (DMP-1) in the pulpal response. Twenty-five primary molars of 22 children aged 6-9 years-old were criteriously selected. The teeth were randomly divided into the following groups: Buckleys Formocresol (diluted 1:5) (Group I - FC), Calcium Hydroxide - (Group II CH), Mineral Trioxide Aggregate (Group III MTA), Otosporin® + Calcium Hydroxide (Group IV OTO+CH) and Portland cement (Group V PC); and treated by the conventional technique of pulpotomy at a single appointment. The clinical and radiographic evaluations were performed until the teeth underwent normal exfoliation. The teeth were extracted and processed for histological and immunohistochemical analyses. The clinical and radiographic studies did not show statistically significant difference among the groups studied (p>0.05). The statistical analysis of the histological evaluation revealed statistically significant difference relating to the presence of the dentine barrier and odontoblastic layer between Group I(FC) and Groups II(CH), III(MTA), IV(OTO+CH) and V(PC) since the Group I(FC) did not exhibited dentine barrier and odontoblastic layer in any of the cuts observed. There was no statistically significant difference among the groups studied regarding to the evaluation of pulpal calcification. Concerning to internal resorption, there was a statistically significant difference among Group I(FC), II(CH) and Groups III(MTA), IV(OTO+CH) and V(PC) where internal resorption was not seen in the histological analyses. The analysis of the expression DMP-1 demonstrated for Group I(FC) immunostaining located in the area of pulpal calcifications within the roots of the teeth evaluated; however, neither odontoblastic layer nor dentine barrier were seen. The Groups II(CH), III(MTA), IV(OTO+CH) and V(PC) showed immunostaining in the area of dentine barrier and odontoblastic layer, evidencing the biocompatibility of these materials, as well as, the capacity for inducing dentine secretion. The comprehensive analyses of the results obtained in this study with the use of different techniques enabled to conclude that all materials employed showed clinical and radiographic success rates acceptable for the clinical indication. In the histological analysis, CH, MTA and PC materials exhibited the best results for pulpal repair. The expression of DMP-1 in the pulpal response allowed visualizing the biological inductive capacity of CH, MTA and PC materials on the process of pulpal repair and barrier formation. The comparison among the groups studied enable to find that MTA and PC were more efficient, providing the dentine barrier formation and more satisfactory responses of the dentino-pulpal complex.

O melanoma cutâneo é a neoplasia de pele de maior mortalidade e grande imprevisibilidade na sua evolução. Na doença disseminada, as opções terapêuticas são pouco eficazes. A pesquisa de novos marcadores tumorais permite a melhor compreensão da patogênese do melanoma e possibilita a descoberta de alvos moleculares. A proteína Dermicidina (DCD) foi identificada entre os 9 genes de uma assinatura gênica de predição de diagnóstico clínico do melanoma humano, porém vários autores divergem sobre o papel desta na doença e os mecanismos moleculares pelos quais a DCD atua nos tumores permanecem incertos. O presente estudo teve como objetivo investigar o papel da DCD na tumorigênese do melanoma maligno e correlacionar sua expressão com dados clínicos, demográficos e patológicos dos pacientes. Através da técnica de imuno-histoquímica em lâminas de TMAs (tissue-microarray), o padrão de expressão de DCD foi analisado em tecido tumoral de duas coortes de pacientes, a primeira com 53 casos tratados no Hospital A.C. Camargo, predominantemente caucasianos, e a segunda com 48 casos, todos asiáticos, obtidos comercialmente da empresa IMGENEX. A análise in situ da Dermicidina mostrou que a proteína está expressa de forma heterogênea nas células tumorais, e pode ocorrer tanto em tumores amelanocíticos como melanocíticos. Em melanomas primários, a expressão de DCD foi mais frequente em tumores localizados nas regiões do tronco e membros superiores, já nas metástases, a proteína foi detectada predominantemente em células em transito nos linfonodos (69,23% dos casos). Analisando os resultados dos 101 pacientes das duas coortes em conjunto, pelo método de Kaplan-Meier, foi confirmado que nos indivíduos com tumores DCD-negativo, a taxa de sobrevida foi de 65,54% em 60 meses, e de 62,86% em 130 meses. Já indivíduos com tumor DCD-positivo tiveram sobrevida de 43,33% em 5 anos, e 28,12% em 130 meses, sendo a diferença significante entre os grupos (p=0,0229). A taxa de óbito dos pacientes com tumor DCD-positivo foi mais elevada, 56%, quando comparada à taxa dos indivíduos com tumor DCDnegativo, 33,33% (p=0,0281). Também foi encontrada uma tendência de tumores expressando DCD se relacionarem a pacientes com idade superior a 50 anos (p=0,1057). Em uma consulta de 4 estudos diferentes que reuniram os dados de sequenciamento de DNA de tumores de 515 pacientes, observamos que o gene DCD, em melanomas, não se encontra predominantemente amplificado, mas sim mutado. A substituição E43K foi a alteração mais frequente, correspondendo a 70% dos casos com mutação no gene. Ao relacionarmos os casos disponíveis de mutação em DCD com os genes BRAF, NRAS, MITF, CDKN2A e ERBB4, encontrou-se uma associação com a mutação BRAF V600E nos casos em que ocorria a mutação DCD E43K. Por ter alta frequência em melanomas (variando entre 45 e 54%), e ser um indicador de pior prognóstico para a neoplasia, a expressão de DCD pode ser considerada um potencial biomarcador / Cutaneous melanoma is the skin neoplasia with the highest mortality rate and great unpredictability in its evolution. In disseminated disease, the treatment options are little effective. The research for new tumor markers allows a better understanding of the pathogenesis of melanoma and enables the discovery of molecular targets. The Dermcidin protein (DCD) was identified among the nine genes of a gene signature predicting clinical diagnosis of human melanoma, although many authors differ on its role in the disease and the molecular mechanisms by which DCD acts in tumors remain unclear. The present study aimed to investigate the role of DCD in the tumorigenesis of malignant melanoma and to correlate its expression with clinical, demographic and pathologic data of patients. Using the technique of immunohistochemistry in TMA slides (tissue microarray), the expression pattern of DCD was analyzed in tumoral tissue of two cohorts of patients, the first with 53 cases treated in hospital AC Camargo, predominantly caucasians, and the second with 48 cases, all Asians, commercially obtained from IMGENEX company. The in situ analysis of Dermcidin showed that the protein is expressed in a heterogeneous manner in tumor cells, and can occur in non-melanocytic as well as in melanocytic tumors. In the primary melanoma, DCD expression was more seen in tumors located in the regions of torso and upper limbs. In the metastases, the protein was found predominantly in cells in transit in the lymph nodes (69.23% of cases). Analyzing the 101 patients of the two cohorts together, by the Kaplan-Meier method, it was confirmed that patients with DCD-negative, the survival rate was 65.54% in 60 months, and 62.86% in 130 months, while the group of patients with DCD-positive tumor had 43.33% in 5 years, and 22.12% in 130 months, knowing that a difference between the groups was significative (p=0.0229). The death rate of patients with DCD-positive tumor was higher, 56%, when compared with the death rate of individuals with DCD-negative tumor, 33.33% (p=0.0281). It was also found a trend of tumors expressing DCD related to patients older than 50 years (p=0.1057). In a search of 4 different studies grouping the DNA sequencing tumor of 515 patients we observed that the DCD gene, in melanoma, is not predominantly amplified, but mutated. The E43K substitution was the most frequent alteration, corresponding to 70% of cases of gene mutation. When comparing the available cases of mutations in DCD with the genes BRAF, NRAS, MITF, CDKN2A, ERBB4, we found an association with the BRAF V600E mutation in cases where occurred the DCD E43K. By having high frequency in melanomas (ranging between 45 and 54%) and being an indicator of poor prognosis for the neoplasia, DCD expression can be considered as a potential biomarker

Introdução: O carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço tem na cirurgia e na radioterapia, as principais modalidades terapêuticas iniciais. Nas recidivas loco-regionais, a cirurgia é a escolha padrão de tratamento. Objetivos: Identificação de fatores prognósticos clínicos, histopatológicos e biomoleculares e a avaliação da sobrevida após cirurgia de resgate. Casuística e Métodos: Estudo retrospectivo de pacientes submetidos a tratamento cirúrgico inicial, com revisão de variáveis histopatológicas e expressão imunohistoquímica de VEGF, ciclina d1 e EGF-R no tumor inicial e no resgate. Das recidivas, 10 eram de estádio clínico precoce (I e II) e 18, avançado (III e IV). O período de seguimento médio foi de 33,4 meses. Resultados: A comparação das variáveis histológicas e dos marcadores moleculares no tumor inicial e na recidiva não apresentou alterações estatisticamente significantes. A sobrevida global após cirurgia de resgate foi superior nas recidivas com diagnóstico após seis meses (p=0,02). Conclusões: Os achados sugerem que a expressão de VEGF superior a 75% é fator preditivo para controle da doença após a recidiva. A sobrevida entre o tempo decorrido do tratamento inicial e a recidiva foi estatisticamente significante / Introduction: The usual management of squamous cell carcinoma (SCC) head and neck is the surgery associated or not to post surgical radiotherapy. Salvage surgery is the first therapeutic option for recurrent tumors. Objective: The identification of prognostic factors and to assess survival interval after salvage surgery for SCC. Methods: Retrospective analysis of patients treated with surgery and review of histopathological variables and immunohistochemical expression of VEGF, EGF-R and Ciclina in the initial tumor and salvage surgery. Twenty eight patients were submitted salvage surgery with 10 were staged as early tumors (I and II) and 18 as advanced ones (III and IV). The average follow-up was 33.4 months. Results: The comparison of histopathologicals variables in the initial tumor and loco regional recurrence no statistically significant changes. Survival after salvage surgery was 70% in cases with recurrences diagnosed after six months of follow-up (p=0.02). Conclusions: The findings suggest that variables immunohistopathologicals in loco regional recurrence were of minor importance in prognosis. The time between the initial treatment and recurrence loco regional was independent variable of survival

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-08-31T15:40:53Z No. of bitstreams: 0 / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-09-01T11:35:40Z (GMT) No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2017-09-01T11:35:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Por alinhamento das sequências de aminoácidos da apirase de S. tuberosum e isoformas de outras espécies de plantas, alta identidade (46% a 94%) e similaridade (64% a 96%) foram identificadas entre elas, incluindo espécies diferentes de Fabaceae, e estreita relação estrutural foi encontrada entre os domínios B destas proteínas. Anticorpos policlonais anti-apirase de batata S. tuberosum inibiram 65-80% da atividade catalítica desta proteína. Soros imunes policlonais produzidos contra os peptídeos sintéticos homólogos potB1LJ, LbB1LJ e SmB1LJ ou potB2LJ, LbB2LJ e SmB2LJ, derivados de domínios B de isoformas de NTPDases, inibiram significativamente (32-44%) a atividade da apirase de batata. Estes anticorpos podem ser ferramentas moleculares auxiliares para o estudo das isoformas de apirase. A atividade apirásica de tecidos de folha (NL) ou caule (NS) normais e de galha globosa (GG) de Calliandra brevipes BENTH (Fabaceae: Mimosoidae) foi testada em meio de reação pH 7,5 e na presença de C12E9, e a hidrólise de ADP, UDP ou GDP por GG foi 1,8 a 2,4 vezes maiores que tecidos não galhados. Anticorpos policlonais anti-apirase de batata inibiram significativamente (70-90%) a hidrólise de ATP, ADP, GDP ou UDP por NS. Em GG, similarmente, a atividade ATPásica, GDPásica, ADPásica ou UDPásica foi significativamente inibida (40-66%). Para o isolamento e identificação de apirase de tecidos normais e galha globosa de Calliandra brevipes, amostra de tecido de NS ou NL não galhado, ou de GG previamente homogeneizada em Triton X-100 mais deoxicolato de sódio foi fracionada em gel não desnaturante contendo os mesmos detergentes. Usando ADP como o substrato, a atividade catalítica da enzima permitiu o aparecimento de uma única banda de precipitado de fosfato de cálcio mostrando idêntica mobilidade eletroforética nas amostras NS, NL e GG, sendo mais intensa nesta última, sugerindo que a apirase é superexpressa neste tecido. Nesta banda de maior mobilidade, distintos polipeptídeos de 52 a 75 kDa foram reconhecidos pela imunoreatividade cruzada de anticorpos anti-apirase de batata, sugerindo a existência de formas ativas da mesma proteína com diferentes cargas líquidas, possivelmente como um resultado de diferentes níveis de glicosilação. Além disso, uma banda de aproximadamente 52 kDa, de menor mobilidade e atividade, foi também identificada em todos os tecidos, possivelmente a apirase em sua forma completamente deglicosilada. Usando técnicas histoquímicas e microscopia óptica, cortes micrométricos corados por lugol ou azul de astra-safranina evidenciaram a câmara pulpal amplamente circundada por tecido nutritivo contendo amido em sua porção distal, e parênquima cortical delimitado por anéis esclerenquimáticos lignificados. Por técnicas histoquímicas, a atividade ADPásica ou ATPásica foi encontrada como um depósito eletrodenso granular de fosfato de chumbo distribuído na superfície externa, e nos tecidos nutritivos da galha globosa. Por técnicas imunohistoquímicas, usando Microscópio Confocal de Varredura a Laser e anticorpos anti-apirase de batata e anti-peptídeos sintéticos, a apirase de galha globosa foi encontrada nos mesmos sítios. Hipóteses funcionais para esta proteína estão sob investigação. Além disso, o tempo de germinação de semente de C. brevipes foi determinado, e no quinto dia após a instalação do teste, a primeira folha foi aberta, identificando tecidos de crescimento rápido apropriados para a investigação da regulação da hidrólise de ATP por apirase na proliferação celular. / By alignment of amino acid sequences of the S. tuberosum apyrase and isoforms from other plant species, high identity (46 to 94%) and similarity (64 to 96%) were identified between them, including distinct species of Fabaceae, and closer structural relationship was found between the domains B from these proteins. Polyclonal antibodies anti- S. tuberosum potato apyrase inhibited 65-80% of the catalytic activity of this protein. In addition, polyclonal immune sera produced against homologue synthetic peptides potB1LJ, LbB1LJ and SmB1LJ or potB2LJ, LbB2LJ and SmB2LJ, derivatives from B domains of NTPDases isoforms, significantly inhibited (32 to 44%) potato apyrase activity. These antibodies could be useful molecular tools for studies of the apyrase isoforms. The apyrase activity from the non-galled stem (NS), non-galled leaf (NL), or globose gall (GG) tissue from Calliandra brevipes BENTH (Fabaceae: Mimosoidae) was tested in reaction medium pH 7.4 and in the presence of C12E9, the ADP, UDP or GDP hydrolysis by GG was 1.8 to 2.4 fold higher than non-galled tissues. Polyclonal antibodies anti-potato apyrase significantly inhibited (70 to 90%) the ATP, ADP, GDP or UDP hydrolysis by NS. In GG, similarly, the ATPase, GDPase, ADPase or UDPase activity was also significantly inhibited (40-66%). For isolation and identification of apyrase from normal tissues and globose gall from the Calliandra brevipes, sample of NS, NL or GG tissue was previously homogenised in Triton X-100 plus sodium deoxycholate, and fractionated in non-denaturing gel containing the same detergents. Using ADP as the substrate, the enzyme catalytic activity gave rise to the appearance of a single calcium phosphate precipitate band displaying identical electrophoretic mobilities in NS, NL, and GG samples, being more intense in this last one suggesting that apyrase is over-expressed in this tissue. In this band of higher mobility, a number of distinct polypeptides ranging from 52 to 75 kDa were recognized by cross-immunoreactivity with polyclonal anti-potato apyrase antibodies, suggesting the existence of active forms of the same protein with different net charges, possibly as a result of distinct glycosylation levels. In addition, an immunoreactive band of approximately 52 kDa, of lower mobility and activity, was also identified in all tissues, possibly apyrase in completely deglycosylated form. By histochemical techniques and light microscopy, micrometric sections stained with lugol or Astra Blue-Saphranine evidenced the chamber pulpal widely surrounded by nutritive tissue containing starch in its distal portion, and cortical parenchime delimited by rings sclereides lignified. By histochemical techniques, the ADPase or ATPase activity was found as a granular dense lead phosphate deposit distributed at the external surface, and inside of the nutritive cells of the globose gall. By immunohistochemical techniques, using confocal laser scanning microscopy and antibodies anti-potato apyrase and anti-synthetic peptides, the gall globose apyrase was found at same sites. In addition, the time of laboratory germination of C. brevipes seed was determined, and on the fifth day after test installation, the first leaf opened, identifying rapid growing tissues suitable for further investigations on the participation of both apyrase and regulation of ATP hydrolysis in cell proliferation.

Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-04-26T15:54:34Z No. of bitstreams: 1 klausrubackbertges.pdf: 2812002 bytes, checksum: 85312f3aa11372affe21388fe45dce43 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-04-27T11:52:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 klausrubackbertges.pdf: 2812002 bytes, checksum: 85312f3aa11372affe21388fe45dce43 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-27T11:52:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 klausrubackbertges.pdf: 2812002 bytes, checksum: 85312f3aa11372affe21388fe45dce43 (MD5) Previous issue date: 2018-03-21 / A esofagite eosinofílica vem tendo uma importância crescente na literatura médica. É uma doença inflamatória crônica, imunoantígeno mediada, caracterizada por sintomas de disfunção esofágica e uma infiltração predominantemente eosinofílica na mucosa do esôfago. O diagnóstico histopatológico é definido pela presença de 15 ou mais eosinófilos por campo de grande aumento e o tratamento de cada paciente deve ser individualizado. O processo de remodelamento do esôfago na esofagite eosinofílica ainda não está completamente esclarecido, mas parece envolver a presença de fibrose na lâmina própria, sendo a grande responsável pelos sintomas de disfagia e impactação alimentar. A IL-13 contrarregula a expressão de filagrina nas células epiteliais, promovendo um mecanismo pelo qual antígenos alimentares ativam o sistema imunológico. Este estudo objetivou avaliar a prevalência das características histopatológicas de remodelamento tecidual e a expressão da filagrina em biópsias esofágicas de pacientes com esofagite eosinofílica. Foram avaliadas, retrospectivamente, 50 pacientes com suspeita clínica e/ou endoscópica de esofagite eosinofílica. Deste total, 27 foram selecionados e distribuídos em dois grupos: GI, com 15 a 24 eosinófilos por campo de grande aumento e GII, contendo mais de 24. Após a histomorfometria e imuno-histoquímica para filagrina, comparou-se os dois grupos. Nos parâmetros de fibrose, houve diferença estatisticamente significante, com maior prevalência no GII (p < 0,05). Também houve mais espessamento da camada basal no GII (p < 0,001). No estudo de correlação entre o número de eosinófilos e o percentual de fibrose, encontrou-se correlação positiva: 50,8% (p = 0,016), ou seja, mais fibrose nos casos do GII. Na correlação entre o número de eosinófilos e a espessura da camada basal, o resultado também foi positivo: 52,1% (p = 0,08), ou seja, membrana basal mais espessa no GII. A filagrina mostrou-se reduzida nos pacientes com esofagite eosinofílica. / Eosinophilic esophagitis is of increasing importance in the medical literature. It is a chronic inflammatory disease, mediated immunoantigen, characterized by symptoms of esophageal dysfunction and a predominantly eosinophilic infiltration in the esophagic mucosa. The histopathological diagnosis is defined by the presence of 15 or more eosinophils per large increase field and the treatment of each patient should be individualized. The process of esophageal remodeling into eosinophilic esophagitis is still not fully understood, but it seems to involve a presence of fibrosis in the lamina propria, being a major cause of the symptoms of dysphagia and food impaction. IL-13 counteracts the expression of filaggrin in epithelial cells, promoting a mechanism by which food antigens activate the immune system. This study aimed to evaluate a prevalence of the histopathological characteristics of tissue remodeling and the filaggrin expression in esophageal biopsies of patients with eosinophilic esophagitis. Fifty patients with clinical and/or endoscopic suspicion of eosinophilic esophagitis were retrospectively evaluated. Of these, 27 were selected and distributed in two groups: GI, with 15 to 24 eosinophils per large increase field and GII, containing more than 24. After a histomorphometry and immunohistochemistry for filaggrin, the two groups were compared. In the fibrosis parameters, there was a statistically significant difference, with a higher prevalence in GII (p < 0.05). There was also more thickening of the basal layer in GII (p < 0.001). The correlation study between the number of eosinophils and the percentage of fibrosis found a positive correlation: 50.8% (p = 0.016), that means, more fibrosis in cases of GII. In the correlation between the number of eosinophils and the thickness of the basal layer, the result was also positive: 52.1% (p = 0.08), that means, thicker basal layer in GII. Filaggrin was reduced in patients with eosinophilic esophagitis.

As lesões tendíneas são uma das mais comuns que ocorrem nos esportes, sua freqüência é de 10 a 55% de todas as lesões ocorridas. A cabeça medial do músculo gastrocnêmio (GCm) é constituído por duas regiões bem distintas: uma região profunda \"vermelha\" e uma região superficial \"branca\". Dada essa característica de distribuição dos tipos de fibras, torna-se possível determinar se, no mesmo músculo, a tenotomia afeta as fibras de maneira diferente, dependendo do tipo de fibra predominante em cada região. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da tenotomia e tenorrafia experimental na GCm. Foram usados 38 ratos Wistar machos pesando aproximadamente 300 g divididos em três grupos: Controle (C), Tenotomizado (T) e Tenorrafiado (R), avaliados aos 14 e 21 dias pós-cirurgia. Os animais foram mantidos sob as mesmas condições de alojamento, alimentação, temperatura umidade e luz. No grupo T, o tendão calcâneo do membro pélvico esquerdo foi dissecado e seccionado transversalmente no terço médio. No grupo R, este mesmo tendão foi imediatamente submetido à sutura de Kessler modificada após a tenotomia. Foram realizadas seções de 10 µm de espessura em criostato e, em seguida, estas secções foram submetidas às técnicas da hematoxilina e eosina, picro-sirius, NADH-tr e para análise em microscopia eletrônica de transmissão A significância estatística das diferenças inter-grupos foi determinada pela análise de variância, (ANOVA) e foi aceito p <0,05. Foram encontradas diferenças significativas entre os grupos C, T e R. Observou-se uma grande variação no tamanho e formato das fibras musculares e, ainda, uma desorientação e degeneração das miofibrilas e desorganização dos sarcômeros nos animais do grupo T. Ambos os grupos, T e R, apresentaram diminuição da área de secção transversa e comprimento da GCm. / Tendon injuries are one of the most commonly occurring in sports, its frequency is 10 to 55% of all injuries. The medial head of gastrocnemius muscle (GCm) consists of two clearly distinct regions: a deep region \"red\" and, a superficial region \"white\". Because of that characteristic distribution of fiber types, it becomes possible to determine if the same muscle tenotomy affects differently, depending on the predominant fiber type in each region. The aim of this study was to evaluate the effect of experimental tenotomy and tenorrhaphy on GCm. We used 38 male Wistar rats weighing approximately 300 g divided into three groups: control (C), tenotomized (T) and Tenorraphized (R). They were evaluated at 14 and 21 days after the surgery. Animals were kept under the same conditions of accommodation, feeding, temperature, humidity and light. In T group, calcaneal tendon of the left pelvic limb was dissected and sectioned in the middle third. In R group, the same tendon was immediately submmitted to the modified Kessler suture after tenotomy. Sections were performed in 10 µm thick in a cryostat and they were then stained according to hematoxylin and eosin, Picrosirius, NADH-tr methods and they were analyzed by transmission electron microscopy. The statistical significance of inter-group differences was determined by analysis of variance (ANOVA) and was accepted p<0.05. Significant differences were found between C, T and R groups. There was a wide variation in size and shape of muscle fibers and also a disorientation and degeneration of myofibrils and disorganization of sarcomeres in T group. Both T and R groups showed a decrease in cross-sectional area and length of the GCm.

Orientador: Oslei Paes de Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-23T09:15:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ToralRizo_VictorHugo_D.pdf: 3216317 bytes, checksum: f10b9daa311d7ae2e304dc1ea8925abf (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O linfoma difuso de grandes células B (LDGCB) é o linfoma da cavidade bucal mais comum. Alguns dos LDGCB podem apresentar células grandes morfologicamente similares às células Hodgkin e Reed/Sternberg (HRS) dos linfomas de Hodgkin clássico (LHC). O objetivo deste estudo foi comparar os LDGCB bucal que apresentem células HRS-like (LDGCB-HRS) com o linfoma de Hodgkin primário nodal, considerando os aspectos histológicos e imunoistoquímicos (IQs), angiogênese, índice de mastócitos e células dendríticas (CD), por meio de um amplo painel IQ. Quize casos foram estudados, nos quais sete eram LDGCB-HRS like e oito eram LHC nodal. Para a análise dos aspectos histológicos e IQs foram utilizados os seguintes anticorpos: CD3, CD15, CD20, CD30, CD43, LCA, CD45RO, CD79a, CD83, EMA, MUM-1, PAX-5, perforina, granzyme B, FASN, Ki-67, LMP-1; e EBER1/2. Já para a análise da angiogênese foram utilizados os anticorpos CD34, CD31, D2-40, CD105, vWF e VEGF; e para o índice de mastócitos utilizou-se o mast cell triptase. Finalmente, para avaliar a expressão IQ das CD os anticorpos CD1a, CD83, CD123, CD207, S-100 e FXIIIa foram utilizados. Todas as lâminas foram escaneadas e as células HRS-like, mastócitos e CD imunopositivas foram analisados, assim como os parâmetros morfométricos da angiogênese. Os resultados mostraram que a imunoexpressão foi postiva em 100% de casos de LHC e em 57% dos casos de LDGCB de boca, enquanto que LCA, CD20 e CD79a foram exclusivos para todos os LDGCB, e apenas CD15 foi exclusivo para os LHC. Angiogênese e o índice de mastócitos estavam aumentados em ambas as lesões, e entre elas, o LHC obteve maiores valores que o LDGCB da cavidade bucal em todos os anticorpos analisados. Por fim, o índice de CDs foram estatisticamente significante entre os grupos, exceto para CD83, que não mostrou nenhuma diferença estatística. A distribuição de CD foi reconhecida principalmente na área tumoral e ao redor das células neoplásicas em ambas as entidades. Foi possível concluir que os LDGCB com células HRS-like da cavidade bucal devem ser incluídos no diagnóstico diferencial de LHC da cavidade bucal. Quando da avaliação destes casos, a analise morfológica detalhada assim como o uso de um amplo painel de IQ são recomendados para realizar o diagnóstico correto. A angiogênese é essencial para o desenvolvimento de LDGCB da cavidade bucal, e quaisquer dos anticorpos CD34, CD31 e vWF podem ser utilizados para avaliar os parâmetros morfométricos. A presença significativa de CD nestes linfomas provavelmente desempenha um papel patologicamente relevante nos linfomas. Nossos resultados sugerem que o aumento no número de CD parece ser um fator contribuinte para a resposta imune estimulada pelo crescimento tumoral / Abstract: Diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) is the most common oral lymphoma. Some DLBCLs can present large cells morphologically similar to Hodgkin and Reed-Sternberg (HRS) cells of classical Hodgkin lymphoma (cHL). The objective of this study was to compare oral DLBCL presenting HRS-like cells (DLBCL-HRS like) with primary nodal cHL, considering the following aspects: histological and immunohistochemical (IHC), angiogenesis, index of mast cells and dendritic cells (DCs); through a broad immunohistochemical panel. Fifteen cases were studied, of which, seven were DLBCL-HRS like and eight were nodal cHL. For histological and IHC aspects, immunoexpression of CD3, CD15, CD20, CD30, CD43, LCA, CD45RO, CD79a, CD83, EMA, MUM-1, PAX-5, perforin, granzyme B, FASN, Ki-67, LMP-1; and EBER1/2, were assessed. As for angiogenesis analysis, the antibodies used were CD34, CD31, D2-40, CD105, vWF and VEGF; and for the index of mast cell were used the mast cell tryptase. Finally, for IHC expression of DCs, the antibodies used were CD1a, CD83, CD123, CD207, S-100, and FXIIIa. All slides were scanned and positive immunoreactive cells HRS-like, mast cell and DCs were analyzed, as well as morphometric parameters of angiogenesis. The results showed that the immunoexpression of CD30 was 100% positive in cHL and 57% in oral DLBCL HRS-like, while LCA, CD20 and CD79a were exclusive for all oral DLBCL, and only CD15 was exclusive for cHL. Angiogenesis and mast cell index values were increased in both lesions and between them, cHL was greater than oral DLBCL with all antibodies studied. Finally, DC subsets were statistically significant between groups, except CD83, which did not show statistical significance. The distribution of DCs was mainly in the tumor area, around neoplastic cells in both entities. It was possible to conclude that DLBCL-HRS should be included in the differential diagnosis of oral cHL. When evaluating these cases, a detailed morphologic and a broad IHC analyses for the correct diagnosis are recommended. Angiogenesis is essential to the development of DLBCL of the oral cavity and any of the antibodies CD34, CD31 and vWF could be used to evaluate morphometric parameters. The presence of significantly higher numbers of DCs in these lymphomas could suggest that these cells are likely to play a pathological relevant role in lymphomas. Our findings suggest that increased number of DCs in lymphomas appears to be a factor contributing to the immune response against tumor growth / Doutorado / Patologia / Doutor em Estomatopatologia