La présente étude porte tout d’abord sur la mesure de l’activité antimicrobienne de 42 plantes médicinales qui sont utilisées traditionnellement en Iran et en Guadeloupe, contre 36 souches microbiennes résistantes à de multiples drogues afin de sélectionner la plante la plus intéressante. Les résultats obtenus révèlent la présence des principes actifs antimicrobiens dans chacune des plantes.Nous avons finalement sélectionné Hyptis atrorubens Poit. qui présente une forte activité antimicrobienne. De plus, cette plante n’a jamais été étudiée dans la littérature. Des analyses phytochimiques et biologiques sur l’extrait hydro-méthanolique des tiges, nous ont permis de trouver pour la première fois les quatre principaux composés actifs de cette plante : acide rosmarinique, rosmarinate de méthyle, quercétine-3-glucoside (isoquercétine) et quercétine-3-galactoside (hyperoside). L’activité antibactérienne de ces composés a été évaluée par différentes valeurs microbiologiques (CMI, CMB, synergie, dénombrement bactérien et courbes de croissance). La meilleure activité inhibitrice et bactéricide a été trouvée pour le rosmarinate de méthyle (0,3 mg/ml). Cette recherche suggère la forte potentialité d’activité antimicrobienne pour la combinaison de quatre composés avec une CMI de 70 µg/ml, qui s’approche de la CMI des antibiotiques.Ce travail présente les composés d’Hyptis atrorubens Poit. comme étant de nouveaux agents antimicrobiens et comme étant une source potentielle de lutte contre les bactéries, de plus en plus résistantes aux antibiotiques. / This study focuses firstly on the extent of the antimicrobial activity of 42 medicinal plants that are traditionally used in Iran and Guadeloupe, against a panel of 36 pathogenic and multi-resistant bacteria and fungi. The results show presence of the antimicrobial agents in all plants.We finally selected Hyptis atrorubens Poit. which has a strong antimicrobial activity. In addition, this plant has never been studied in the literature. Phytochemical and biological analysis of the hydro-methanolic extract of stems, enabled us to find for the first time the four main active compounds of this plant: rosmarinic acid, methyl rosmarinate, quercetin-3-glucoside (isoquercetin) and quercetin-3-galactoside (hyperoside).The antibacterial activity of these compounds was evaluated by various microbiological values ​​(MIC, MBC, synergy, kill-time and growth curves).The best inhibitory and bactericidal activity was found for methyl rosmarinate (0.3 mg/ml).This research suggests the high potential of antimicrobial activity for a combination of all four compounds (MIC = 70 µg/ml), which is very close to MICs of antibiotics.This work presents the main compounds of Hyptis atrorubens Poit. as new antimicrobial agents and as potentially useful tools against bacteria that are more and more resistant to antibiotics.

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Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2362562 bytes, checksum: d376a52df38ce22517107be4aa578dea (MD5) Previous issue date: 2013-09-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Cancer is the name given to a collection of hundreds of different diseases that result from the progressive accumulation of mutations. Its treatment has been benefited from studies that are based on research of natural sources. Several compounds and plant derivatives have shown antitumor activity, including essential oils. Hyptis umbrosa Salzm. is popularly known as aleluia do serrote and alfazema-do-mato and is rarely reported in the literature. The fenchone monoterpene is the major component of the essential oil from the leaves of this species (24.8%). This study aimed to evaluate the toxicity and antitumor activity in vitro and in vivo of O.E.H. and fenchone. In hemolysis assay of mice erythrocytes it was obtained a CH50 value of 494.9 μg/mL for O.E.H. and greater than 3000 μg/mL for fenchone, suggesting moderate and low toxicity of the samples respectively for these non-tumor cells, which are commonly affected by antineoplastic therapy. The O.E.H. showed weaker antitumor effect in vitro on human tumor cell lines, while fenchone did not alter cell viability at any of the concentrations tested. After acute administration of O.E.H. depressant and excitatory effects were observed in central nervous system of animals treated with 2000 mg/kg of oil. Although it hasn t shown antitumor activity in vitro, O.E.H. (50, 100, or 150 mg / kg) and fenchone (30 or 60 mg / kg) showed significant activity in vivo of Ehrlich ascites carcinoma model (EAC) after nine days of treatment, given the parameters of volume, weight and viability of the cells. The treatment with O.E.H. induced cycle arrest in the G0/G1 phase and increased sub-G1, suggesting induction of cell death by apoptosis. In conjunction with the results of staining with Annexin V-PI, where there was a slight increase of cells stained with Annexin V as well as with Annexin V-PI, it can be inferred that possibly apoptotic cells were phagocytosed. The fenchone induced cycle arrest in S phase, and significantly increased the percentage of cells stained with Annexin V-PI, without increasing marking only with Annexin V, wich suggests that cell death by necrosis is occurring. There was also an increase in median survival of animals transplanted with Ehrlich tumor and treated with essential oil. The toxicological analyzes show that the treatment with O.E.H caused a body weight decrease and lower hematological and biochemical toxicity after nine days. The treatment with fenchone induced changes in ALT and AST parameters suggestive of fibrosis. Histopathologic analysis confirmed the evidence of hepatotoxicity especially for OEH, however, the damage was moderate and reversible. The O.E.H. induced an increase in the number of micronucleated erythrocytes, in the micronucleus essay, only the highest dose tested (300 mg / kg). Therefore, we can infer that O.E.H. and fenchone shows an antitumor activity in vivo with moderate toxicity, which is not a limiting factor for the continuation of the pre-clinical studies. The findings suggested that fenchone is not the only component responsible for the oil activity as it showed activity only at double of the dose associated with its quantity in that oil. / O câncer é o nome dado a um conjunto de centenas de doenças distintas que decorrem do acúmulo progressivo de mutações. Seu tratamento tem se beneficiado dos estudos que se baseiam em pesquisas de fontes naturais. Vários compostos e derivados vegetais têm mostrado atividade antitumoral, dentre eles, os óleos essenciais. Hyptis umbrosa Salzm. é conhecida popularmente por aleluia do serrote e alfazema-do-mato e é pouco relatada na literatura, sendo o componente majoritário do óleo essencial das folhas dessa espécie (O.E.H.) o monoterpeno fenchona (24,8%). Esse trabalho teve como objetivo avaliar a toxicidade e atividade antitumoral do O.E.H. e da fenchona em modelos in vitro e in vivo. No ensaio de hemólise em eritrócitos de camundongos o valor de CH50 obtido foi de 494,9 μg/mL para O.E.H. e superior a 3000 μg/mL para a fenchona, o que sugere moderada e baixa toxicidade das amostras, respectivamente, para essas células não tumorais que são comumente afetadas pela terapia antineoplásica. O.E.H. mostrou fraco efeito antitumoral in vitro em linhagens de células tumorais humanas, enquanto que a fenchona não alterou a viabilidade celular em nenhuma das concentrações testadas. Após administração aguda do O.E.H. em camundongos foram observados efeitos depressores e excitatórios do Sistema Nervoso Central nos animais tratados com 2000 mg/kg do óleo. O valor estimado da DL50 foi em torno de 500 mg/kg. Apesar de não apresentar atividade antitumoral in vitro, O.E.H. (50, 100 ou 150 mg/kg) e fenchona (60 mg/kg), após nove dias de tratamento, mostraram significante atividade in vivo em modelo de carcinoma ascítico de Ehrlich (EAC), considerando os parâmetros volume, peso e viabilidade celular. O tratamento com O.E.H. (150 mg/kg) induziu parada do ciclo na fase G0/G1 e aumento da fração sub-G1, o que sugere morte celular por apoptose. Em conjunto com os resultados da marcação com Anexina V-IP, onde houve pequeno aumento de células marcadas com Anexina V, bem como com Anexina V-IP, pode-se inferir que, possivelmente, as células em apoptose foram fagocitadas. A fenchona induziu parada do ciclo na fase S e aumentou significativamente a porcentagem de células marcadas com Anexina V-IP, sem aumentar a marcação apenas com Anexina V, o que sugere que está ocorrendo morte celular por necrose. Observou-se ainda, aumento na média de sobrevida dos animais transplantados com tumor de Ehrlich e tradados com o óleo essencial. As análises toxicológicas indicam que, após nove dias de tratamento com O.E.H. foi observado redução no peso corporal e baixa toxicidade hematológica e bioquímica. O tratamento com a fenchona induziu alteração nos parâmetros AST e ALT sugestivas de fibrose. A análise histopatológica indicou danos hepáticos após tratamento com O.E.H., entretanto, os danos foram considerados moderados e reversíveis. O.E.H. induziu aumento na quantidade de eritrócitos micronucleados, no ensaio do micronúcleo, apenas na maior dose testada (300 mg/kg). Portanto, é possível inferir que O.E.H. e fenchona apresentam atividade antitumoral in vivo com moderada toxicidade, o que não representa um fator limitante para a continuação de seus estudos pré-clínicos. Os dados permitem sugerir que a fenchona não é o único componente responsável pela atividade do óleo, uma vez que, mostrou atividade apenas no dobro na dose associada com sua quantidade no referido óleo.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / This work describes the phytochemical investigation of two specimens of Hyptis: H. carvalhoi Harley and H. crassifolia Mart. ex Benth., whose purpose is to investigate northeastern Brazil plants of the Hyptis genus, in the search for bioactive compounds, especially with anticancer activity. The chemical analysis of both species resulted in the isolation and characterization of 10 substances for H. crassifolia and 12 substances for H. carvalhoi. Of the ethanol extract from roots of H. crassifolia were isolated nine diterpenes and the known triterpene betulinic acid. Of the nine diterpenes, four are abietanes: 12-hydroxy-8,11,13-abietatriene, 12-hydroxy-8,11,13-abietatrie-7-one, 11,12,15-tri-hydroxy-8,11,13-abietatrien-7-one and 6α,11,12,15-tetra-hydroxy-8,11,13-abietatrien-7-one, from which 11,12,15-tri-hydroxy-8,11,13-abietatrien-7-one is being reported for the first time in the literature as a new natural abietane diterpene and the 6α,11,12,15-tetra-hydroxy-8,11,13-abietatrien-7-one is unknow. Three have rearranged abietanes skeletons: 11,12,14,16-tetra-hydroxy-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-one, 11,12,16-tri-hydroxy-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-one and (16S)-12,16-epoxy-11,14-di-hydroxy-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-one, from which the 11,12,16-tri-hydroxy-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-one is unknown, and to the (16S)-12,16-epoxy-11,14-di-hydroxy-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-one is proposed a revision of the 1H and 13C NMR data previously reported in the literature. Two known labdane diterpenes: 11-oxomanoyl oxide and 11β-hydroxymanoyl oxide were also isolated. From the hexane extract of the roots of H. carvalhoi were isolated ten diterpenes, one compound from a mixed biosynthesis, 3β-[4â-acetoxyangeloiloxy]-tremetone, not yet reported for the Lamiaceae, and betulinic acid, a chemotaxonomic marker for the genus Hyptis. Of the ten diterpenes, five are abietane: 12-hydroxy-8,11,13-abietatrien-20-al, 8,11,13-abietatrien-12,20-diol, 11-hydroxy-12-metoxy-8,11,13-abietatrien-10-oic acid, 12-hydroxy-8,11,13-abietatrien-10-oic acid and 12-hydroxy-8,11,13-abietatriene, an unknown nor-diterpene, with a 20-nor-icetexane skeleton identified as 8(7),10(7)-di-epoxy-12-hydroxy-20-nor-8,11,13-abietatriene, a pimarane diterpene, 11-ketosandaracopimar-15-en-8β-ol, unknow in the Lamiaceae and three tanshinones: 7β-hydroxy-11,14-di-oxoabieta-8,13-diene, 7,12-di-hydroxy-8,12-abietadien-11,14-di-oxo-20-al and 7α-hydroxy-11,14-dioxoabieta-8,13-diene, from which the last is unknown. All compounds were isolated using successive chromatographic purification steps, including HPLC, and structural determination was performed by mean of spectroscopic techniques such as HRMS, IR, 1H and 13C NMR, including uni and bidimensional pulse sequences, and comparison with data from the literature. Among the isolated compounds, eighteen have been tested for cell-growth inhibition activity against several human cancer cell lines, and ten showed activity. From the compounds isolated from H. crassifolia, 12-hydroxy-8,11,13-abietatriene and 11,12,14,16-tetra-hydroxy-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-one showed a moderate cytotoxic activity, while 12-hydroxy-8,11,13-abietatrie-7-one exhibited a moderate, but selective activity against leukemia cell line. All diterpenes isolated from H. carvalhoi exhibited cytotoxic activity, but 7,12-di-hydroxy-8,12-abietadien-11,14-di-oxo-20-al, after 72 hours of incubation, showed IC50 values ranging from 3.91 to 32.01 μM in colon tumor (HCT-116) and leukemic (HL-60) cells, respectively. Its possible mechanism of action was then studied. / Este trabalho descreve a investigaÃÃo fitoquÃmica de dois espÃcimes de Hyptis: H. carvalhoi Harley e H. crassifolia Mart. ex Benth. O objetivo à investigar plantas do gÃnero Hyptis do Nordeste do Brasil, na busca por compostos bioativos, principalmente com atividade anticÃncer. A prospecÃÃo quÃmica relativa Ãs duas espÃcies resultou no isolamento de 10 substÃncias para H. crassifolia e 12 substÃncias para H. carvalhoi. Do extrato etanÃlico das raÃzes de H. crassifolia foram isolados nove diterpenos e o triterpeno conhecido como Ãcido betulÃnico. Dos nove diterpenos, quatro sÃo abietanos: 12-hidroxi-8,11,13-abietatrieno, 12-hidroxi-8,11,13-abietatrien-7-ona, 11,12,15-tri-hidroxi-8,11,13-abietatrien-7-ona e 6α,11,12,15-tetra-hidroxi-8,11,13-abietatrien-7-ona, dos quais a 11,12,15-tri-hidroxi-8,11,13-abietatrien-7-ona està sendo relatada pela primeira vez como um novo diterpeno abietano natural e a 6α,11,12,15-tetra-hidroxi-8,11,13-abietatrien-7-ona à inÃdita na literatura. TrÃs apresentam esqueletos abietanos rearranjados: 11,12,14,16-tetra-hidroxi-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-ona, 11,12,16-tri-hidroxi-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-ona e (16S)-12,16-epoxi-11,14-di-hidroxi-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-ona, sendo a 11,12,16-tri-hidroxi-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-ona inÃdita, e para a (16S)-12,16-epoxi-11,14-di-hidroxi-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-ona està se propondo uma revisÃo dos dados de RMN de 1H e 13C relatados na literatura. Foram isolados tambÃm dois diterpenos labdanos conhecidos: Ãxido de 11β-hidroximanoila e Ãxido de 11-oxomanoila. Do extrato hexÃnico das raÃzes de H. carvalhoi foram isolados dez diterpenos, uma substÃncia de biossÃntese mista, denominada de 3β-[4â-acetoxiangeloiloxi]-tremetona, ainda nÃo relatada na famÃlia Lamiaceae e o Ãcido betulÃnico, marcador quimiotaxonÃmico no gÃnero Hyptis. Dos dez diterpenos, cinco sÃo abietanos: 12-hidroxi-8,11,13-abietatrien-20-al, 8,11,13-abietatrien-12,20-diol, Ãcido 11-hidroxi-12-metoxi-8,11,13-abietatrien-10-Ãico, Ãcido 12-hidroxi-8,11,13-abietatrien-10-Ãico e 12-hidroxi-8,11,13-abietatrieno, um nor-diterpeno, com esqueleto 20-nor-icetexano inÃdito, denominado 8(7),10(7)-diepoxi-12-hidroxi-20-nor-8,11,13-abietatrieno, um diterpeno pimarano, o 11-cetosandaracopimar-15-en-8β-ol, inÃdito na famÃlia Lamiaceae e trÃs tanshinonas: 7β-hidroxi-11,14-dioxoabieta-8,13-dieno, 7,12-di-hidroxi-8,12-abietadien-11,14-di-oxo-20-al e 7α-hidroxi-11,14-dioxoabieta-8,13-dieno, sendo a Ãltima inÃdita na literatura. Todos os compostos foram isolados utilizando sucessivos fracionamentos cromatogrÃficos, incluindo CLAE e a determinaÃÃo estrutural foi realizada atravÃs de tÃcnicas espectroscÃpicas como EMAR, IV, RMN de 1H e 13C, incluindo sequÃncias de pulsos uni e bidimensionais, e comparaÃÃo com dados descritos na literatura. Dentre os compostos isolados, dezoito foram testados com relaÃÃo a inibiÃÃo do crescimento celular de quatro linhagens de cÃlulas humanas cancerÃgenas e dez mostraram atividade. Dos compostos isolados de H. crassifolia o 12-hidroxi-8,11,13-abietatrieno e a 11,12,14,16-tetra-hidroxi-17 -abeo-abieta-8,11,13-trien-7-ona apresentaram atividade citotÃxica moderada, enquanto a 12-hidroxi-8,11,13-abietatrien-7-ona apresentou uma atividade citotÃxica moderada, porÃm seletiva contra cÃlulas tumorais leucÃmicas. Dos compostos isolados de H. carvalhoi todos os diterpenos apresentaram atividade citotÃxica, mas a 7,12-di-hidroxi-8,12-abietadien-11,14-di-oxo-20-al, apÃs 72 horas de incubaÃÃo, apresentou valores de CI50 que variaram de 3,91 a 32,01 μM em cÃlulas tumorais de cÃlon (HCT-116) e leucÃmicas (HL-60), respectivamente. O seu possÃvel mecanismo de aÃÃo, foi entÃo estudado.

O Aedes aegypti (Linn, 1762) é atualmente o mosquito que apresenta maior dispersão em áreas urbanas do mundo. Esta espécie é de grande importância para a medicina pois, trata-se do vetor de quatro sorotipos do flavivírus causador do dengue clássico e da febre hemorrágica do dengue. O aumento na densidade desse mosquito está relacionado ao comportamento sinantrópico e ao hábito antropofílico desssa espécie. Urge, portanto, o controle da densidade populacional do A. aegypti para que o dengue não assuma proporções de uma epidemia. Não existe vacina para o dengue, e a melhor forma de combater a doença é atacar o vetor, principalmente eliminando os locais onde ocorre a oviposição e o desenvolvimento das larvas do A. aegypti. Atualmente esse controle é feito por meio de aplicações de inseticidas organafosforados. Porém, o uso freqüente e em doses cada vez maiores desses produtos, têm selecionado populações resistentes do mosquito. Em todo o mundo diversas pesquisas são desenvolvidas no sentido de encontrar substância de origem vegetal, como alternativa para o controle do dengue. Os óleos essenciais, produzidos no metabolismo secundário das plantas, têm apresentado atividades inseticidas, larvicidas, fumigantes, deterrentes e outras. Este trabalho teve como objetivo identificar óleos essenciais de plantas do Estado de Sergipe com atividade larvicida contra o Aedes aegypti (Linn, 1762). Foram testados os óleos essenciais de Croton heliotropiifolius, Croton pulegiodorus, Hyptis fruticosa, Hyptis pectinata e Lippia gracilis. O óleo essencial das folhas foi extraído por hidrodestilação, com arraste de vapor, usando um aparelho de Clevenger. A análise dos óleos essenciais foi feita por cromatografia gasosa acoplado a um espectômetro de massas (CG/EM). Os ensaios larvicidas foram realizados utilizando-se 20 larvas por teste, em um béquer contendo 20ml de água mineral (26-28°) e mais a solução teste nas concentrações pré-estabelecidas para cada planta. Os testes foram feitos em quintuplicata para cada concentração. A análise dos dados foi feita de acordo com o método Reed-Muench (Colegate & Molyneux, 1993), estimando-se uma CL50 de 550,68; 158,81; 502,68; 366,35 e 98,06 mg L-1 respectivamente para Croton heliotropiifolius, Croton pulegiodorus, Hyptis fruticosa, Hyptis pectinata e Lippia gracilis. Todos os óleos testados foram ativos contra as larvas do Aedes aegypti, porém o óleo essencial de Lippia gracilis apresentou a melhor atividade. Além disso, o óleo de L. gracilis teve o maior rendimento, que foi de 7%. Isto sugere que o óleo essencial dessa espécie vegetal, pode ser uma alternativa no combate ao vetor do dengue, diminuindo o impacto sobre o ambiente e a saúde da população.

Flavonoids and other phenolics are groups of natural bioactive compounds widely distributed in edible plants and are well documented to possess biological potential. Hyptis (Lamiaceae) is used in Brazilian folk medicine to treat various diseases. The aim of this study was to evaluate the antioxidant, anti-acetylcholinesterase, cytotoxic, antiviral and antibacterial potential of Hyptis radicans and Hyptis multibracteata by isolating and characterizing major constituents and their biological activities. H. radicans and H. multibracteata were dried, powdered and macerated in 70% ethanol which resulted in a crude ethanol extract (EE) for each species. EE were dissolved in 50% methanol and then was fractionated by partition with hexane and ethyl acetate; were obtained three phases: hexane phase (HP), ethyl acetate phase (EAP) and hydromethanol phase (HMP). EAP from H. radicans was the sample that presented the highest levels of total phenolic content, especially flavonoids, and was the sample with the high antioxidant activity with promising values of EC50: DPPH (32.12 µg mL-1), ABTS (5.04 µg mL-1), Metal chelator assay (42.36 µg mL-1), TBARS (40.46 µg mL-1) and nonsite-Specific Hydroxyl Radical-Mediated 2-Deoxy-D-ribose Degradation (NS-Spe) with EC50 of 75.08 µg mL-1. EE from H. radicans showed high antioxidant activity for FRAP and ORAC with EC50 of 6.01 and 2.68 µg mL-1, respectively and had the highest amount of rosmarinic acid (17.64 mg ?-CE g-1). HMP from H. radicans showed high antioxidant activity in Site-Specific Hydroxyl Radical-Mediated 2-Deoxy-D-ribose Degradation (S-Spe) assay with EC50 of 0.32 µg mL-1 and had the highest content of chlorogenic acid derivatives. Regarding the results of cytotoxicity, HP from H. multibracteata induced the death of more than 80% of RAW 264.7 Cell Lines at 100 µg mL-1. Nepetoidin B, isolated from H. multibracteata had the best EC50 (52.73 µg mL-1) for anti-acetylcholinesterase activity. Antibacterial activity was evaluated in vitro against two Gram-negative bacteria, Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli, and a Gram-positive Bacillus subtilis. Phases from H. multibracteata were more effective on inhibiting B. subtillis with MIC50 of 23.6 ?g mL-1 and 12.13 ?g mL-1 for HP and EAP, respectively. HP was also activity against P. aeruginosa with MIC50 of 37.55 µg mL-1. EE and HMP phase from H. radicans showed moderate anti-HIV-1 activity (MIC50 159 µg mL-1; MIC50 180 µg mL-1). Contents of total phenolic were not the main sample feature to define this activity, but there was correlation between Rosmarinic acid contents and anti-HIV1 activity of H. radicans. Cirsimaritin and litospermic acid A were isolated for the first time, being the first time that they are described for the genus Hyptis. This study provides the first evidence of chemical and biological potential for these two Brazilian native species of Hyptis / Flavonoides e outros compostos fenólicos são grupos de compostos bioativos naturais amplamente distribuídos em plantas e estão bem documentados por possuírem potencial biológico. Hyptis (Lamiaceae) é usado na medicina popular brasileira para tratar várias doenças. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial antioxidante, anti-acetilcolinesterase, citotóxico, antiviral e antibacteriano de Hyptis radicans, e Hyptis multibracteata, isolar e identificar substâncias e correlacionar as atividades biológicas com a quantidade de compostos fenólicos e substâncias isoladas. H. radicans e H. multibracteata foram secas, pulverizadas e maceradas em etanol 70%, resultando em extrato etanólico bruto (EE). EE foi dissolvido em metanol 50% e depois foi fracionado por partição com hexano e acetato de etila, o que resultou em três fases: fase hexânica (HP), fase acetato de etila (EAP) e fase hidrometanólica (HMP). EAP de H. radicans foi a amostra que apresentou os maiores teores de conteúdo fenólico, principalmente flavonoides, e foi a amostra com a maior atividade antioxidante, com valores promissores de EC50: DPPH (32,12 µg mL-1), ABTS (5,04 µg mL- 1), Quelante de metais (42,36 µg mL-1), TBARS (40,46 µg mL-1) e Degradação da 2-deoxy-D-ribose de sitio não especifico mediada pelo radical hidroxil (NS-Spe) com EC50 de 75,08 µg mL-1. EE de H. radicans apresentou a maior atividade antioxidante para FRAP e ORAC com EC50 de 6,01 e 2,68 µg mL-1, respectivamente, e apresentou a maior quantidade de ácido rosmarínico (17,64 mg ?-CE g-1). HMP de H. radicans apresentou a mais alta atividade antioxidante no ensaio de Degradação da 2-deoxy-D-ribose de sitio especifico mediada pelo radical hidroxil (S-Spe) com EC50 de 0,32 µg mL-1 e apresentou o maior teor de derivados de ácido clorogênico. Em relação aos resultados da citotoxicidade, HP de H. multibracteata induziu a morte de mais de 80% das células do tipo RAW 264.7 com uma concentração de 100 µg mL-1. A Nepetoidina B isolada de H. multibracteata apresentou a melhor EC50 (52,73 µg mL-1) para atividade anti-acetilcolinesterase. A atividade antibacteriana foi avaliada in vitro contra duas bactérias Gram-negativas, Pseudomonas aeruginosa e Escherichia coli, e uma bacteria Gram-positiva. Bacillus subtilis,. Fases de H. multibracteata foram mais eficazes na inibição de B. subtillis com MIC50 23,6 ?g mL-1 e 12,13 ?g mL-1 para HP e EAP, respectivamente. HP também apresentou atividade contra P. aeruginosa com MIC50 de 37,55 µg mL-1. EE e HMP de H. radicans mostraram moderada atividade anti-HIV-1 (MIC50 159 µg mL-1; MIC50 180 µg mL-1). Não há correlação entre o conteúdo total de fenólicos e esta atividade biológica, mas sim entre a quantidade de ácido rosmarínico das fases e a atividade anti-HIV1 de H. radicans. Foram isoladas pela primera vez a Cirsimaritina e o ácido litospermico A, sendo esta a primeira vez que se descrevem para o gênero Hyptis. Este estudo fornece a primeira evidência do potencial químico e biológico para estas duas espécies nativas de Hyptis

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:48:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Julierme_IQ_UFG_2012.pdf: 1572042 bytes, checksum: c5e12770e49c6a65ee23600c84379152 (MD5) Previous issue date: 2012-04-13 / Cerrado is the second largest Brazilian biome, occupying about 24% of the country. However, there are only 61% of preserved Cerrado areas. Therefore, studies are needed in order to preserve these natural resources. For this purpose the reassessment of systematic relationships between 88 taxa of Hyptis Jacq. were based on the vegetative and reproductive morphological characters (chapter 1). In order to perform a phenetic study, multivariate statistical analysis were used for determination of taxa distribution patterns. The relationships between the examined taxa have been expressed as Ward hierarchical clustering using multiple correspondence analysis of 50 characters distributed into 168 character states. The perceptual map shows a subdivision of Hyptis into two major clusters. Cluster I contained 41 taxa belonging to sections Cyanocephalus, Cyrta, Gymneia, Mesosphaeria, Polydesmia and Tricosphaeria which mainly showed elongated, elliptic, linear bracts, curvature of the calyx's tube upper limb, oblique calyx tube orifice, as well as smooth nutlets. Cluster II contained 47 taxa from sections Apodotes, Eriosphaeria, Hyptis, Induratae, Pachyphyllae, Pusilae and Xylodontes. Their main morphological characteristics included hemispheric or subglobose cymes, the presence of a stylopodium, slightly rough nutlets and nutlets truncate at apex. Cluster analysis focused on 6 of the morphological characters which were distinguished by discriminant correspondence analysis, revealed similar traits. Multivariate analyses were also applied in the essential oil chemovariations of 13 Hypenia species (chapter 2). The results revealed the presence of two taxonomic clusters. Cluster I included 3 species belonging to section Densiflorae in addition to H. subrosea Harley and H. aristulata (Epl.) R. Harley, and showed the highest percentages of α-muurolol (5.85 ± 3.08%). In Cluster II, which contained 8 species belonging to section Laxiflorae, the major discriminant constituents were (E)-caryophyllene (7.09 ± 4.88%), germacrene D (18.1 ± 11.4%) and bicyclogermacrene (6.65 ± 1.19%). All essential oils showed a predominance of sesquiterpenes, such as spathulenol (4.5-31.6%), caryophyllene oxide (2.2-14.4%) and selin-11-en-4α-ol (0-34.8%). Furthermore, identical clusters were revealed by multivariate analysis of chemical constituents based on carbon skeletons, as well as on 18 morphological leaf characters of the species studied. / O Cerrado é a segunda maior formação vegetal brasileira, ocupando 24% do território nacional. No entanto, restam apenas 61% de áreas preservadas de Cerrado. Desta forma, estudos para caracterização e preservação desta riqueza natural são necessários. Com este intuito, reavaliou-se a relação sistemática entre 88 espécies de Hyptis Jacq. com base em caracteres morfológicos e reprodutivos (capítulo 1). A análise estatística multivariada foi aplicada para determinar o padrão de distribuição dos taxa com o objetivo de se realizar uma análise fenética. As relações entre os taxa estudados foram expressas pelo agrupamento hierárquico de Ward utilizando a análise de correspondência múltipla com base em 50 caracteres distribuídos em 168 estados dos caracters. O mapa perceptual mostrou a subdivisão de Hyptis em duas grandes classes. A classe I foi formada por 41 taxa pertencentes às seções Cyanocephalus, Cyrta, Gymneia, Mesosphaeria, Polydesmia e Tricosphaeria, as quais demostraram brácteas linares alongadas e elípticas, curvatura do tubo do cálice acima do limbo, orifício do tubo do cálice oblíquo, bem como núculas suaves. A classe II contou com 47 taxa das seções Apodotes, Eriosphaeria, Hyptis, Induratae, Pachyphyllae, Pusilae e Xylodontes. Suas principais características morfológicas incluíram cimas hemisféricas ou subglobosas, presença de um estilopódio, núculas levemente rugosas e núculas truncadas no ápice. A análise de agrupamento focada em 6 dos caracteres morfológicos, previamente distinguidos pela análise de correspondência discriminante, revelou a mesma similaridade entre os taxa, sugerindo a divisão de Hyptis em 2 subgêneros. Procedeu-se também à análise multivariada da composição química dos óleos essenciais de 13 espécies de Hypenia (capítulo 2). Os resultados indicaram a presença de 2 grupos de óleos em relação às seções botânicas das amostras. O primeiro grupo (classe I) incluiu as 3 espécies da seção Densiflorae em adição a H. subrosea Harley e H. aristulata (Epl.) R. Harley, o qual foi caracterizado pelo maior percentual de α-muurolol (5,85 ± 3,08%). Na classe II, com 8 espécies da seção Laxiflorae, os principais constituintes discriminantes foram o (E)-cariofileno (7,09 ± 4,88%), germacreno D (18,1 ± 11,4%) e o biciclogermacreno (6,65 ± 1,19%). Todos os óleos essenciais apresentaram predominantemente sesquiterpenos, tais como espatulenol (4,5-31,6%), óxido de cariofileno (2,2-14,4%) e selin-11-en-4α-ol (0-34,8%). Os agrupamentos foram idênticos quando utilizada a análise multivariada baseada nos esqueletos carbônicos dos constituintes químicos ou utilizando 18 caracteres morfológicos das folhas das espécies.

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2015-07-28T01:31:42Z No. of bitstreams: 1 Disserta??o Bianca Final.pdf: 956007 bytes, checksum: beb73baaedae8e53837ad84aa8d164cc (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-28T01:31:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disserta??o Bianca Final.pdf: 956007 bytes, checksum: beb73baaedae8e53837ad84aa8d164cc (MD5) Previous issue date: 2014-03-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Lamiaceae is a family of flowering plants of great importance due to its aromatic herbs with pharmaceutical properties. Endemic species from the semiarid region of Brazil, as Martianthus leucocaphalus (Mart. Ex Benth.) J. F. B. Pastore, produce essential oils of great phytochemical and economic potential, due to its proven antimicrobial and antifungal activities. This species is not yet commercially cropped, but it is already known that biotic and abiotic factors play an important role on the production of essential oils, making it difficult to to explore these compounds. In this sense, we aimed to evaluate the effect of climate in different months of the year in edaphoclimatic conditions of Feira de Santana, BA, on the growth, production and composition of essential oil from M. leucocaphalus. Experiments were performed on Horto Florestal Experimental Unit from Universidade Estadual de Feira de Santana. We monthly quantified growth, by foliar area parameters, using fresh and dried leaves, branches and inflorescences. In each period we evaluated content and chemical composition of essential oilds under a combination of Gas Chromatography techniques (CG), in order to quantify constituents and Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry (CG/EM) to identify these constituents. Climatic data were obtained over INMET. Obtained data were analyzed under SAS, using Spearman correlation among variables and descriptive statistics. A mean test was performed on SISVAR for comparison. Total dried mass (MST) and essential oil content (TO) were higher on months of great solar intensity and lower on months with abundant precipitation. Constituents varied considerably due to climatic factors, with major concentration of the majoritary compound on more humid months with a low solar irradiance. / A fam?lia Lamiaceae possui not?vel import?ncia devido ?s suas ervas arom?ticas com potencial farmac?utico. Esp?cies end?micas do semi?rido do Brasil, como Martianthus leucocaphalus (Mart. ex Benth.) J.F.B.Pastore produzem ?leo essencial com elevado potencial fitoqu?mico e econ?mico, com atividade antimicrobiana e antif?ngica comprovada. A esp?cie ainda n?o ? cultivada comercialmente, entretanto, sabe-se que a produ??o de ?leos essenciais sofre grande influ?ncia de fatores bi?ticos e abi?ticos, o que dificulta a explora??o desses compostos. Visando avaliar a influ?ncia clim?tica na produ??o do ?leo essencial de M. leucocephalus e, com isso, identificar a melhor ?poca de plantio e colheita da esp?cie para a produ??o de compostos bioativos, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito do clima, ao longo de diferentes meses do ano, em condi??es edafoclim?ticas de Feira de Santana-BA, sobre o crescimento, produ??o e composi??o do ?leo essencial dessa esp?cie. O experimento foi realizado na Unidade Experimental Horto Florestal da Universidade Estadual de Feira de Santana. Foi quantificado mensalmente o crescimento, atrav?s dos par?metros ?rea foliar, massa fresca e seca de folhas, ramos e infloresc?ncias. Em cada per?odo foi avaliado o teor e composi??o qu?mica dos ?leos essenciais atrav?s da combina??o de t?cnicas de Cromatografia Gasosa (CG), para quantifica??o dos constituintes e Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massas (CG/EM) para identifica??o dos mesmos. Os dados clim?ticos foram obtidos atrav?s do INMET. Os dados obtidos foram analisados atrav?s da ANAVA, realizando-se a correla??o de Spearman entre as vari?veis e teste de Scott-Knott para compara??o das m?dias. A massa seca total (MST) e o teor de ?leo essencial (TO) foram maiores nos meses com elevada intensidade solar e menor nos meses com muita precipita??o. Os constituintes variaram consideravelmente em fun??o dos fatores clim?ticos, com maior concentra??o do composto majorit?rio nos meses mais ?midos com baixa irradi?ncia solar.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to obtain new fish anesthetic and sedative drugs from Brazilian medicinal plants: Ocimum gratissimum (OG), Ocimum americanum (OA) e Hyptis mutabilis (HM). Essential oils from these plants were obtained by hydrodestilation and analysed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). The chirality of one constituent of OA oil was also determined. Isolation process from essential oil of OA and HM was conduced and the isolated compounds were analyzed by spectroscopic methods. To determine the point at which anesthesia was induced and the length of the recovery period, juvenile silver catfish (Rhamdia quelen) were placed in aquaria containing essential oil or isolated compounds. The mechanism of action of the essential oil of OG and (-)-globulol was evaluated through association with diazepam (150 μM) and reversion with flumazenil (5μM). The evaluation of tolerance development was performed to OG oil using re-exposure after 30 days or at week intervals. The effects of OA oil (300 and 500 mg L-1) exposure on stress parameters (plasma cortisol, glucose and sodium levels) after handling were also assayed. The major compounds of the essential oils were eugenol (73.6%) in OG, 1,8-cineol (21% in the leaf) and linalool (20.2% in the leaf; 46.6% in the inflorescence) in OA, globulol (26.6% in the leaf) and germacrene D (15% in the inflorescence) in HM. Anesthetic effects were detected to all samples in silver catfish in concentration ranges of 30-300 mg L-1 of OG, 200- 500 mg L-1 of OA and 344 mg L-1 of HM. Fractionation of the essential oil of HM furnished (+)-1-terpinen-4-ol and (-)-globulol, which demonstrated sedative effect at 10 mg L-1. Anesthesia was obtained with 83-190 mg L-1 of (-)-globulol, but animals showed loss of mucus during induction and mortality at these concentrations. Benzodiazepinic-like action on receptor GABAA was detected to the essential oil of OG, as well as tolerance development. The same pattern could not be observed to (-)-globulol. The R-(-)-linalool detected in essential oil of OA demonstrated higher anesthetic effect in silver catfish in relation to the S- (+)-form isolated from the essential oil of Lippia alba, which was the only active against Aeromonas hydrophila in vitro. Regarding to the stress parameters, previous exposure to the essential oil of OA was able to prevent handling-induced stress. / Este trabalho visou obter anestésicos e sedativos para peixes a partir de plantas medicinais brasileiras, nomeadamente Ocimum gratissimum (OG), Ocimum americanum (OA) e Hyptis mutabilis (HM). Os óleos essenciais destas espécies foram obtidos por hidrodestilação e analisados por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM). A quiralidade de um dos componentes do óleo de OA também foi determinada. Os óleos de OA e HM foram submetidos ao processo de isolamento de seus constituintes, os quais foram caracterizados por métodos espectroscópicos. A determinação do tempo de indução aos estágios de anestesia e de recuperação foi realizada em jundiás juvenis (Rhamdia quelen) por meio de banhos contendo os óleos essenciais ou constituintes isolados. Para o óleo de OG e o (-)-globulol também foram avaliados o mecanismo de ação via sítio benzodiazepínico do receptor gabaérgico por meio de associação com diazepam (150 μM) e reversão com flumazenil (5μM). O desenvolvimento de tolerância foi avaliado para o óleo de OG através de re-exposição sucessiva após 30 dias ou com intervalos semanais. Os efeitos da exposição ao óleo de OA (300 e 500 mg L-1) em parâmetros de estresse (níveis plasmáticos de cortisol, glicose e sódio) após manuseio também foram testados. Os constituintes majoritários dos óleos essenciais corresponderam ao eugenol (73,6%) em OG, 1,8-cineol (21% nas folhas) e linalol (20,2% nas folhas e 46,6% nas inflorescências) em OA, globulol (26,6% nas folhas) e germacreno D (15% nas inflorescências) em HM. Todos os óleos apresentaram atividade anestésica em jundiás juvenis em concentrações entre 30-300 mg L-1 de OG, 200-500 mg L-1 de OA e 344 mg L-1 de HM. O fracionamento do óleo essencial de HM forneceu os compostos (+)-1-terpinen-4-ol e (-)-globulol, os quais demonstraram ação sedativa em 10 mg L-1. (-)-Globulol foi capaz de induzir anestesia entre 83-190 mg L-1, contudo perda de muco e mortalidade foram observados nos peixes expostos. Ação similar aos benzodiazepínicos no receptor GABA foi detectada para o óleo de OG, inclusive no que se refere ao desenvolvimento de tolerância. Para o (-)-globulol o mesmo não pode ser observado. A avaliação da quiralidade do linalol presente no óleo de OA demonstrou a presença do isômero R-(-), o qual demonstrou maior efeito anestésico que o S-(+)-linalol isolado do óleo de Lippia alba em jundiás. Os isômeros também apresentaram diferenças em relação à ação bactericida frente a Aeromonas hydrophila, sendo apenas o S-(+)-linalol ativo. Em relação aos efeitos sobre parâmetros de estresse, a exposição prévia ao óleo essencial de OA preveniu o estresse induzido pelo manuseio.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Hyptis pectinata L. Poit. (Lamiaceae), widely known as Sambacaitá, is an example of a plant commonly used in folk Medicine; various biological effects are associated with its extracts, such as: analgesic, anti-inflammatory, and anti-microbial. Many studies in vivo and in vitro has assessed the effects promoted by the aqueous extract and essential oil of the leaves of the plant, whose chemical composition constitute their water soluble compounds and their volatile compounds, respectively. This study aimed at keeping on these studies, determining the chemical constituents and the acute toxicity of the sample of the aqueous extract and essential oil used to study the analgesic effect of these extracts in an acute articular inflammatory condition, similar to an episode of acute arthritis as in Gout. The phyto-chemical studies of aqueous extract identified the presence of alkaloid, tannin and flavonoid. The analysis of the constituents of the essential oil was made by gas chromatography and mass spectrometer, showing as main constituents: β- cariofilene and Germacrene-D. The evaluation of acute toxicity was represented by the establishment of DL50 in Swiss mice, obtained by the probits method, it was not possible to measure the DL50 of the aqueous extract due to its low toxicity, as for the essential oil, it was obtained a 1.1 g/kg DL50. The analgesic effect was studied using the sodium urate crystals induced arthritis model, in Wistar mice, as proposed by Coderre and Wall; the aqueous extract presented expressive analgesic effect with the 50 mg/kg doses, which was reverted by the opioid antagonist, naloxone (5 mg/kg). The essential oil did not present analgesic effect with the tested doses. The results showed that the aqueous extract has low toxicity and it presents analgesic effect in a rheumatic condition, similar to Gout arthritis, while the essential oil presents medium toxicity and it does not show analgesic effect in the proposed rheumatic condition. / A Hyptis pectinata L. Poit. (Lamiaceae), vulgarmente conhecida como sambacaitá, é um exemplo de planta comumente utilizada na medicina popular; diversos efeitos biológicos estão associados aos seus extratos, tais como analgésico, antiinflamatório e antimicrobiano. Vários estudos in vivo e in vitro têm avaliado estes efeitos promovidos pelo extrato aquoso e óleo essencial das folhas da planta, cujas composições químicas, constituem os seus compostos solúveis em água e os seus compostos voláteis respectivamente. Este trabalho objetivou dar continuidade a esses estudos, determinando os constituintes químicos e a toxicidade aguda da amostra de extrato aquoso e óleo essencial utilizados, para estudar o efeito antinociceptivo (analgésico) dos extratos citados, em uma condição inflamatória articular aguda, similar a um ataque de artrite aguda como o ocorrido na gota. Os estudos fitoquímicos do extrato aquoso identificaram a presença de alcalóides, taninos e flavonóides. A análise dos constituintes do óleo essencial se deu por cromatografia gasosa e espectrômetro de massa, revelando como principais constituintes: β-cariofileno e germacreno-D. A avaliação da toxicidade aguda foi representada pela determinação da DL50, em camundongos swiss, obtida pelo método dos probitos; não foi possível mensurar a DL50 do extrato aquoso, devido a sua baixa toxicidade, já o óleo essencial, obteve uma DL50 de 1,1 g/kg. O efeito antinociceptivo foi estudado usando o modelo de artrite induzida por cristais de urato de sódio, em ratos wistar, proposto por Coderre e Wall. O extrato aquoso apresentou efeito antinociceptivo significativo na dose de 50 mg/Kg, o qual foi revertido pelo antagonista opióide, naloxona (5mg/kg). O óleo essencial não apresentou efeito antinociceptivo nas doses testadas. Os resultados mostraram que o extrato aquoso possui baixa toxicidade e apresenta atividade antinociceptiva numa condição reumática, semelhante à artrite gotosa; enquanto o óleo essencial apresenta toxicidade média e não apresenta atividade antinociceptiva na condição reumática proposta.