Resumo: O objetivo neste estudo foi analisar a utilização das proteínas de fase aguda (PFA) e perfil bioquímico-sérico como um método para realizar diagnóstico diferencial precoce de mucometra e piometra. Coletaram-se amostras do endométrio de fêmeas caninas hígidas na fase de diestro, sem qualquer alteração ou afecção no trato reprodutor ou em outros sistemas (Grupo diestro: Grupo 1, n=39) e amostras do endométrio de fêmeas caninas acometidas por mucometra (Grupo mucometra: Grupo 2, n=43), e fêmeas caninas acometidas por piometra (Grupo piometra, Grupo 3 ao 6, n=118), durante ovariohisterectomias (OH) eletivas ou terapêuticas. Os dados também foram comparados entre os grupos categorizados segundo a classificação ASA (American Society of Anesthesiologists). Realizou-se anamnese do histórico reprodutivo detalhado, exame físico, exame de macroscopia vulvar, citologia vaginal, exames hematológicos e bioquímicos, e dosagem sérica de progesterona e estradiol, exames de imagem (radiografia e ultrassonografia abdominal). A concentração de proteína total do soro sanguíneo foi determinada pelo método do biureto. As leituras das amostras foram realizadas em espectrofotômetro semi-automático (Labquest, Labtest, Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil), com comprimentos de onda específicos para o teste. Para o fracionamento proteico utilizou-se a técnica SDS-PAGE. Verificou-se que conforme a evolução do quadro inflamatório, os níveis séricos das proteínas de fase aguda, ceruloplasmina, transferrina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to analyze the use of acute phase proteins (PFA) and biochemical-serum profile as a method to perform early differential diagnosis of mucometra and pyometra. Samples of the endometrium of healthy canine females were obtained in the right-handed stage, without any alteration or affection in the reproductive tract or in other systems (Group 1, n = 39) and endometrial samples of canine females affected by mucometra (Group 2, n = 43), and canine females affected by pyometra (Pyometra Group, Group 3 to 6, n = 118) during elective or therapeutic ovariohysterectomies (OH). The data were also compared among the groups classified according to the ASA (American Society of Anesthesiologists) classification. Anamnesis of the detailed reproductive history, physical examination, vulvar macroscopy examination, vaginal cytology, hematological and biochemical exams, and serum progesterone and estradiol dosage, imaging (radiography and abdominal ultrasonography) were performed. The total protein concentration of the blood serum was determined by the biuret method. The sample readings were performed in semi-automatic spectrophotometer (Labquest, Labtest, Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil), with specific wavelengths for the test. SDS-PAGE was used for protein fractionation. Serum levels of the acute phase proteins, ceruloplasmin, transferrin, albumin (p <0.0001), IgGCP (p <0.0001), haptoglobin (p <0.0001), alpha glycoprotein acid (p <0.0001), IgGCL (p <0.0001) ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Embora a obesidade possa levar a mudanças no limiar de dor, o mecanismo pelo qual isto ocorre não é bem compreendido. Com as recentes descobertas das propriedades do tecido adiposo branco de secretar substâncias com relevantes efeitos biológicos, seu papel endócrino assumiu grande importância. A ocorrência e a magnitude da dor e do quadro inflamatório podem estar relacionadas a mudanças endócrinas causadas pela obesidade, entre as quais se destacam as alterações nos níveis de citocinas inflamatórias, leptina, grelina e opióides endógenos, entre outros. Por esta razão, o objetivo deste estudo foi avaliar, através de testes de nocicepção aguda, como Placa Quente, Retirada de Cauda, teste Von Frey eletrônico e avaliação do Edema de Pata por Pletismometria, as diferenças no limiar nociceptivo e perfil inflamatório, entre os animais que tiveram obesidade induzida por dieta hipercalórica (grupo HD) e os animais alimentados com dieta controle (grupo CD) a partir da quarta semana de vida, durante 16 semanas. Além destes, foram realizados também testes de comportamento, como Labirinto em Cruz Elevado e teste de Campo Aberto, para avaliação de ansiedade e movimentações no aparato, entre os grupos. Parâmetros metabólicos, como Índice de Lee, glicemia de jejum, triglicerídeos e proteínas séricas foram avaliados e as gorduras perigonadal e retroperitoneal foram excisadas e pesadas para caracterização da obesidade experimental, em ambos os grupos. Nossos resultados demonstram que os parâmetros metabólicos e o peso das gorduras perigonadal e retroperitoneal foram maiores no grupo HD que no grupo CD, mostrando que a dieta hipercalórica foi efetiva em induzir obesidade no grupo HD. Nos testes de nocicepção aguda, a Retirada de Cauda não mostrou diferença entre os grupos, enquanto que, no teste de Placa Quente, o grupo HD mostrou menor período de latência em segundos para reação que o grupo CD, após aplicação intraplantar de carragenina em comparação ao grupo controle (salina). Também foi demonstrado que os animais do grupo HD tiveram maior hipernocicepção mecânica e maior edema de pata, após aplicação de carragenina. Na avaliação dos testes de comportamento não foram encontradas diferenças significativas entre os grupos. Os experimentos foram desenvolvidos no Instituto de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Alfenas. / Although obesity can lead to changes in pain threshold, the mechanism by which this occurs is not well understood. With the recent discoveries of the properties of white adipose tissue to secrete substances with important biological effects, endocrine role has assumed greater importance. The occurrence and magnitude of pain and inflammation may be related to endocrine changes caused by obesity, among which we highlight the changes in the levels of inflammatory cytokines, leptin, ghrelin and endogenous opioids, among others. For this reason, the objective of this study was to evaluate, through tests of acute nociception, such as Hot Plate, Tail Withdrawal, electronic Von Frey test and evaluation of Paw Edema by Pletismometry, differences in nociceptive threshold and inflammatory profile, between animals that had high-calorie diet-induced obesity (HD group) and animals fed a control diet (CD) from the fourth week of life, for 16 weeks. In addition, behavioral tests were also performed, such as Elevated Plus Maze and Open Field test to evaluate anxiety and movement in the apparatus, between the groups. Metabolic parameters, such as Lee Index, fasting glucose, triglycerides and serum proteins were evaluated and perigonadal and retroperitoneal fat were excised and weighed to the characterization of experimental obesity in both groups. Our results demonstrate that metabolic parameters and weight of perigonadal and retroperitoneal fat were higher in HD than in group CD, showing that high calorie diet was effective in inducing obesity in the HD group. In tests of acute nociception, the Tail Withdrawal showed no difference between groups, while in the Hot Plate test, the HD group showed a shorter latency period in seconds for the CD group reaction after application intraplantar carrageenan compared the control group (saline). It was also shown that animals of the HD group had a greater mechanical hypernociception and a grea paw edema after carrageenan application. In the assessment of behavioral tests were not significant differences between groups. The experiments were conducted at the Institute of Biological Sciences, Federal University of Alfenas. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

As plantas medicinais são comumente utilizadas pela população a fim de substituir ou auxiliar os processos de cura. Dentro deste contexo, o nabo forrageiro, Raphanus sativus L. var. oleiferus Metzg., pertencente à família Brassicaceae, também chamada por crucifera, é uma planta que apresenta conhecidas classes de compostos bioativos, assim como o próprio Raphanus sativus L. Neste trabalho, foram realizados estudos com a finalidade de se obterem parâmetros físico-químicos da droga vegetal como granulometria, cinzas totais e insolúveis em ácido, perda por dessecação e substâncias extrativas e estudos para o conhecimento do seu potencial bioativo e fitoquímico, sendo os testes de analgesia e inflamação e a triagem fitoquímica complementada à espectrometria de massas do extrato seco. Os parâmetros físico-químicos revelaram pela granulometria que a droga possui particulas moderadamente grossas, e com valores de cinzas totais e insolúveis em ácido de 16,69 e 0,025% respectivamente. A perda por dessecação foi de 6,96% e as substâncias extrativas representam 25% do total de massa da droga. A triagem fitoquímica revelou a presença de importantes classes farmacognósticas como flavonoides, esteroides-triterpenos e taninos, que puderam ser extensivamente associados à atividade biológica. Adicionalmente, foram propostas estruturas para os flavonóides encontrados no extrato seco de R. sativus, como sendo o canferol, e a quercetina além do glicosinolato glicorrafenina. Os ensaios biológicos mostraram: ausência de toxicidade aguda nas concentrações testadas; uma atividade anti-inflamatória para o teste de peritonite comparável à do padrão Indometacina nas concentrações de 30, 100 e 300 mg/kg do extrato seco. Já no teste de edema de pata, as concentrações mais ativas e com atividade comparável à do padrão foram de 30 e 300 mg/kg. O teste de analgesia feito pela metodologia da formalina mostrou melhor atividade do extrato para a concentração de 300 mg/kg enquanto que a atividade nas outras duas concentrações (30 e 100 mg/kg) não evidenciou efeito significativo. O teste da placa quente, porém, não mostrou resultado antinociceptivo favorável do extrato seco. / Medicinal plants are commonly used by the population to replace or assist the healing process. Within this surrounding context, the wild radish, Raphanus sativus L. var. oleiferus Metzg., wich belongs to the Brassicaceae family, also known as crucifera, is a plant with known classes of bioactive compounds, as well as the Raphanus sativus L itself. In this work, studies were conducted to obtain physico-chemical parameters of the drug as grain size, total and acid insoluble ashes, loss on drying and extractive substances, and studies to the knowledge of its bioactive and phytochemical potential, with tests such as analgesia and inflammation and phytochemical screening complemented with mass spectrometry of dry extract. The physico-chemical parameters classified the drug as moderately coarse size particles, and values​ ​of total and acid insoluble ashes of 16.69 and 0.025% respectively. The loss on drying was 6.96% and extractive substances representing 25% of the total mass of drug. Phytochemical screening revealed the presence of important pharmacognostic classes such as flavonoids, steroids, triterpenes and tannins, which could be extensively associated with biological activity. In addition, chemical structures were proposed for the flavonoids and other compounds found in dry extract of R. sativus, as the kaempferol and quercetin as the flavonoids and glicorrafenine as a glucosinate. The biological tests showed: absence of acute toxicity at the tested concentrations; an anti-inflammatory activity comparable to indomethacin in the standard concentrations of 30, 100 and 300 mg/kg of dry extract peritonitis test. You paw edema test, the most active and comparable to the standard activity concentrations were 30 and 300 mg/kg. The analgesia test made ​​by the methodology of formalin better activity of the extract at the concentration of 300 mg/kg whereas the activity of the other two concentrations (30 and 100 mg/kg) showed no significant effect. The hot plate test, however, showed no antinociceptive favorable result of dry extract. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A Tripanossomíase Americana ou doença de Chagas representa uma doença tropical negligenciada causada pelo parasito protozoário Trypanosoma cruzi. A doença de Chagas representa a principal causa de cardiomiopatia não isquêmica em todo o mundo. Embora a quimioterapia com benznidazol seja indicada como referência no tratamento etiológico da doença, após o parasito se instalar em múltiplos órgãos do hospedeiro vertebrado, a cura geralmente não é alcançada. Assim, novas drogas e esquemas terapêuticos têm sido testados na busca por estratégias mais eficientes e toleráveis no tratamento da doença. Devido a sua atividade anti-inflamatória, antioxidante e imunomoduladora, a currumina tem mostrado efeitos promissores no tratamento de doenças parasitárias como malária, leishmaniose e esquistossomose. Entretanto a aplicabilidade da curcumina no manejo terapêutico da doença de Chagas ainda é pouco conhecida. Dessa forma, o presente estudo foi delineado para investigar a influência do tratamento com benznidazol e curcumina sobre o parasitismo sanguíneo e cardíaco, resposta inflamatória, dano oxidativo e remodelamento morfológico do miocárdio em camundongos infectados por T. cruzi. Oitenta e quatro camundongos suiços fêmeas com oito semanas de vida foram igualmente divididos em sete grupos: G1, não infectados; G2 , infectados; G3, infectados + benznidazol (100 mg/kg); G4, infectados + benznidazol (50 mg/kg); G5, infectados + curcumina (100 mg/kg); G6, infectados + benznidazol (100 mg/kg) + curcumina (100 mg/kg); G7, infectados + benznidazol (50 mg/kg) + curcumina (100 mg/kg). Os animais infectados foram inoculados intraperitonealmente com 2000 formas tripomastigotas da cepa Y de T. cruzi. O benznidazol e a curcumina foram oralmente administrados uma vez a dia, durante 20 dias, por meio de gavagem. Os resultados indicaram que a curcumina apresentou efeitos antiparasitários limitados, mas que quando combinada ao benznidazol, essa molécula potencializou a ação terapêutica da quimioterapia de referência. Aparentemente, esse efeito foi mediado por uma maior redução da parasitemia, carga parasitária, processo inflamatório e dano oxidativo cardíaco, bem como bloqueio da reativação da infecção após o término do tratamento. Além de aumentar a sobrevivência e taxa de cura em camundongos infectados, o tratamento combinado também atenuou a toxicidade hepática induzida pelo benznidazol, impedindo a reativação da infecção mesmo quando os animais foram tratados com a metade da dose terapêutica recomenda para o benznidazol. / The American trypanosomiasis or Chagas disease is a neglected tropical disease caused by protozoan parasite Trypanosoma cruzi. Chagas' disease is the leading cause of non-ischemic cardiomyopathy worldwide. Although chemotherapy with benznidazol is recommended as a reference in the etiological treatment of the disease, after the parasite settling in multiple organs of the vertebrate host, healing is usually not achieved. Thus, new drugs and therapeutic schedules have been tested in the search for more tolerable and effective strategies for the treatment of disease. Due to its anti-inflammatory activity, antioxidant and immunomodulatory, the currumina has shown promising effects on the treatment of parasitic diseases such as malaria, leishmaniasis and schistosomiasis. However, the applicability of curcumin in the therapeutic management of Chagas disease is still unknown. Thus, the present study was designed to investigate the influence of treatment with benznidazol and curcumin on blood and cardiac parasitism, inflammatory response, oxidative damage and morphological myocardial remodeling in mice infected with T. cruzi. Eighty-four Swiss female mice eight weeks of life were equally divided into seven groups: G1, uninfected; G2, infected; G3 infected benznidazol + (100 mg / kg); G4 infected benznidazol + (50 mg / kg); G5, infected + curcumin (100mg / kg); G6 infected benznidazol + (100 mg / kg) + curcumin (100mg / kg); G7 infected benznidazol + (50 mg / kg) + curcumin (100mg / kg). The infected animals were inoculated intraperitoneally with 2000 trypomastigotes of T. cruzi Y strain. The benznidazol and curcumin were administered orally once daily for 20 days by gavage. The results showed that curcumin had limited antiparasitic effects, but when combined with benznidazol, this molecule enhanced the therapeutic action of the reference chemotherapy. Apparently, this effect was mediated by a greater reduction in parasitemia, parasite load, inflammation and cardiac oxidative damage and block the reactivation of the infection after completion of treatment. In addition to increasing the survival and cure rate in infected mice, the combined treatment also attenuated hepatic toxicity induced by benznidazol, preventing reactivation of infection even when the animals were treated with half the therapeutic dose recommended for benznidazol.

A identificação de novos alvos para controlar o processo inflamatório é, provavelmente, o principal desafio que dificulta o desenvolvimento de novas drogas anti-inflamatórias. Assim, a modulação das vias de sinalização intracelulares em fagócitos desponta como uma forma interessante de alcançar este objetivo. No entanto, isso pode trazer como consequência a diminuição da defesa do hospedeiro contra patógenos. Este estudo teve como objetivo examinar se o nitróxido 4-hidroxi-2,2,6,6-tetrametil-1-piperidiniloxi (Tempol) exerce efeito sobre produção de oxidantes por neutrófilos inflamatórios através da regulação da atividade de proteínas quinases e da proteína dissulfeto isomerase (PDI), uma chaperona cujos sítios ativos contêm o motivo Cys-Gly-His-Cys (CXXC) e está envolvida na montagem do complexo enzimático NADPH oxidase (Nox2) de fagócitos. Vias bioquímicas diferentes foram ativadas para a liberação de espécies reativas de oxigênio por neutrófilos inflamatórios, e, paralelamente, a atividade de proteínas quinases foi determinada sob efeito de Tempol nos fagócitos. O nitróxido inibiu significativamente o burst oxidativo dos neutrófilos de maneira dependente da concentração. Este efeito foi detectado pelo consumo de oxigênio, onde a IC50 encontrada foi de 45±4 μM. Utilizando-se ensaios de quimioluminescência dependente de luminol ou de isoluminol, mostramos que o Tempol provocou um atraso no período de resposta latente da ativação de Nox2 dos neutrófilos sob diferentes estímulos. Coerentemente, o nitróxido inibiu a atividade de proteínas quinases de neutrófilos estimuladas por diferentes vias bioquímicas, como quantificado por ensaios quimioluminescentes e por teste dot blot. Nas mesmas condições, Tempol reduziu a atividade fungicida de neutrófilos contra Candida albicans. Na presença de Tempol a atividade redutase de PDI foi reversivelmente afetada tanto in vitro como em neutrófilos inflamatórios estimulados, cuja IC50 de 35±3,3 μM foi calculada através de metodologia de espectrofluorescência. Esta atividade inibitória foi confirmada com o método espectrofotométrico de enovelamento de insulina. Foi utilizada PDI recombinante para ser estudado o mecanismo de inibição que o Tempol exerce sobre a esta tiol óxido-redutase, através de espectrometria de massa. Na análise da proteína total, 1 e 4 moléculas de Tempol foram detectadas ligadas à proteína. No entanto, somente uma molécula do nitróxido foi encontrada ligada covalentemente à PDI. Mais especificamente, a Cys400 foi modificada por Tempol. Em conjunto, os resultados revelam um novo mecanismo do Tempol sobre a regulação de enzimas associadas à atividade do complexo Nox2 de neutrófilos inflamatórios, os quais apresentam aplicações clínicas potenciais para intervenção terapêutica em processos patológicos. Entretanto, o possível uso do Tempol como agente anti-inflamatório deve ser cauteloso, uma vez que este nitróxido diminuiu a resposta microbicida de neutrófilos. / The identification of new targets for controlling inflammatory processes is, almost certainly, the major challenge that hampers the development of new anti-inflammatory drugs. Thus, the modulation of intracellular signaling pathways in phagocytes emerges as an interesting way to achieve this goal. However, this strategy can bring the effect of lowering the host defense against pathogens. This study aimed to examine whether the nitroxide 4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy (Tempol) has an effect on production of oxidants by inflammatory neutrophils through regulation of protein kinase activity and protein disulfide isomerase (PDI), a chaperone whose active sites containing the motif Cys-Gly-His-Cys (CXXC) and is involved in the assembly of the NADPH oxidase enzyme complex (Nox2) on phagocytes. Different biochemical pathways were activated for the release of reactive oxygen species by inflammatory neutrophils, and, in parallel, the protein kinase activities were determined under Tempol treatment of phagocytes. The nitroxide significantly inhibited oxidative burst of neutrophils in a concentration dependent manner. This effect was detected by oxygen consumption, where the IC50 was found to be 45±4 µM. By means of chemiluminescence luminol- or isoluminol-dependent assay, we showed that Tempol caused a delay in the lag period of neutrophils Nox2 activation under different stimuli. Accordingly, the nitroxide inhibited the activity of protein kinases in neutrophils stimulated by various biochemical pathways, as quantitated by chemiluminescent assays and dot blot test. Under the same conditions, Tempol reduced neutrophil fungicidal activity against Candida albicans. In the presence of Tempol, PDI reductase activity was reversibly affected both in vitro and in stimulated inflammatory neutrophils, whose IC50 of 35±3.3 µM was calculated by fluorescent methodology. This inhibitory activity was confirmed by the spectrophotometric insulin method. Recombinant PDI was used for the purpose of studying the mechanism of inhibition that Tempol exerts on this thiol oxide reductase enzyme, by mass spectrometry. In the analysis of total protein, 1 and 4 molecules of Tempol were detected bound to the protein. However, only one molecule of the nitroxide was found covalently linked to PDI. More specifically, Cys400 has been changed by Tempol. Together, these results reveal a novel mechanism of Tempol on the regulation of enzymes associated with Nox2 complex inflammatory activity of neutrophils, which have potential clinical applications for therapeutic intervention in pathological processes. However, the promising use of Tempol as an anti-inflammatory agent must be taken with caution, since this nitroxide decreased neutrophil microbicidal response.

O ambiente perinatal é crucial para a programação metabólica e hormonal e a qualidade deste ambiente em roedores tem consequências fisiológicas e comportamentais em longo prazo. Condições desfavoráveis no período perinatal, época em que ocorre o desenvolvimento do sistema regulador do balanço energético podem reprogramar o metabolismo e ajustá-lo nesta condição por toda a vida. Um dos modelos experimentais de programação neonatal é obtido por meio da redução de ninhada, em que ninhadas são padronizadas para três ou quatro filhotes por mãe. O maior aporte nutricional em períodos precoces de desenvolvimento promove uma programação metabólica e os efeitos desta programação podem se estender durante toda a vida, com a sobrenutrição pós-natal levando à obesidade na vida adulta. Uma vez que os tecidos adiposos subcutâneo e abdominal são descritos como tecidos ativos na regulação de processos fisiológicos e patológicos, incluindo imunidade e inflamação torna-se importante avaliar se a sobrealimentação e o sobrepeso advindos da redução do tamanho da ninhada levam a alterações nas respostas comportamentais e inflamatórias em filhotes adultos. Em resposta ao lipopolissacarídeo, ratos machos adultos com sobrepeso de nosso estudo exibiram uma exacerbação das respostas comportamentais e aumento da febre, além de aumento nos níveis plasmáticos de corticosterona e de citocina pró-inflamatória IL-1β. Em conclusão, nossos resultados demonstram que o sobrepeso e suas consequências interferem na capacidade destes animais de reagirem ao desafio imunológico. Os experimentos foram desenvolvidos no Laboratório de Ciências Biomédicas da Universidade Federal de Alfenas. / The perinatal environment is crucial for metabolic and hormonal programming and the quality of the environment in rodents have physiological and behavioral consequences in long-term. Adverse conditions in the perinatal period, a time when there is the development of the regulatory system of energy balance can reprogram metabolism and adjust it in this condition for life. One of the experimental models of neonatal programming is obtained by reducing litter, where litters are standardized for three or four pups per mother. The largest nutritional supply in early periods of development promotes a metabolic programming and the effects of this program can extend throughout life, with the postnatal overnutrition leading to obesity in adulthood. Since subcutaneous and abdominal adipose tissues are described as active tissues in the regulation of physiological and pathological processes including immunity and inflammation it becomes important to evaluate if the overfeeding and overweight arising from reduction in litter size lead to changes in the behavioral and inflammatory responses in adult offspring. In response to lipopolysaccharide, overweight adult male rats of this study exhibited an exacerbation of behavioral responses and increase of fever besides an increased plasma levels of corticosterone and IL-1β proinflammatory cytokine. In conclusion, our results show that overweight and its consequences interfere with the ability of these animals to respond to immune challenge. The experiments were developed in the Biomedical Sciences Laboratory of the Federal University of Alfenas. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

A meta-clorofenilpiperazina (1-(3-clorofenil)piperazina; mCPP) é uma piperazina sintética que vem sendo apreendida de forma crescente no mercado de drogas ilícitas, primeiro na Europa e, a partir de 2006, também no Brasil. Recentemente há relatos de aumento significativo da apreensão de comprimidos vendidos como ecstasy e que na realidade contêm mCPP, porém estudos sobre potenciais riscos dessa utilização à saúde ainda são escassos. O papel da mCPP como agonista de receptores serotoninérgicos já está bem descrito na literatura, razão pela qual esta substância é amplamente empregada em trabalhos científicos, principalmente psiquiátricos. No entanto, poucos são os trabalhos realizados com o intuito de investigar mais profundamente as ações desencadeadas no organismo pela substância em si. É sabido que a serotonina é um neurotransmissor liberado por plaquetas no local de inflamação e que exerce papel imunomodulatório importante sobre as células imune Assim, considerando (1) a relevância atual da mCPP no contexto de apreensão de drogas de abuso, (2) a necessidade de estudos sobre efeitos das drogas de abuso no organismo, (3) escassez de avaliações dos efeitos da mCPP sobre o sistema imunológico e (4) sua provável correlação com este sistema a partir de suas ações em receptores serotoninérgicos, o presente trabalho pretendeu iniciar investigações acerca da atividade da mCPP sobre as respostas imune inatas e sobre os mecanismos da mobilização leucocitária. Para tanto, ratos Wistar machos foram tratados com mCPP (1mg/kg, v.o.) e foram realizadas quantificações de leucócitos na medula óssea, no compartimento circulante e no foco inflamatório (peritônio), em presença ou ausência de estímulo inflamatório (LPS, 1 mg/mL, i.p.), como também da mieloperoxidase presente em tecido hepático, pulmonar e do baço. Complementando os estudos in vivo, ainda foi quantificada a cortisona plasmática em animais que receberam tal tratamento tendo seus receptores de glicocorticoides previamente antagonizados (RU38486). Neutrófilos coletados do exsudato peritoneal foram incubados nas concentrações de 10 &#181;M, 100 &#181;M e 1000 &#181;M in vitro e investigados a migração neutrofílica, a expressão das moléculas de adesão na superfície neutrofílica, a quantificação de mediadores inflamatórios no sobrenadante de cultura de neutrófilos e o processo de adesão neutrófilo-endotélio, com células endoteliais coletados a partir do cremáster. Os resultados demonstram que a mCPP diminuiu a quantificação de leucócitos no exsudato peritoneal e, concomitantemente, aumentou o influxo de PMN para o tecido pulmonar, em vigência de estímulo inflamatório. Ainda, in vivo, não foi possível observar diferenças na concentração de cortisona sérica entre animais cujos receptores de glicocorticóides foram antagonizados e aqueles cujos receptores em questão encontravam-se normais. In vitro, a mCPP, nas três concentrações empregadas, e tanto na vigência quanto na ausência de estímulo (LPS ou fMLP), causou alterações na migração dos neutrófilos, na adesão deste tipo celular ao endotélio, na expressão de moléculas de adesão (Lselectina, &#946;2-integrina e PECAM-1) na superfície neutrofílica e na quantificação das concentrações de mediadores inflamatórios (NO, IL-1&#946;, IL-10, TNF-&#945;) no sobrenadante de cultura de neutrófilos. Os resultados obtidos sugerem, em conjunto, que a mCPP exerce atividade pró-inflamatória no que se refere à atividade neutrofílica, bem como sugerem que o fármaco seja capaz de amplificar a resposta inflamatória em modelo animal de rato, tanto in vivo quanto in vitro. / The meta-chlorophenylpiperazine is a synthetic piperazine which has been seized increasingly in the illicit drug market, primarily in Europe and after 2006, in Brazil. Recently, there has been a significant increase on the apprehension of tablets sold as ecstasy but that in reality contain mCPP. Despite its importance, studies over its potential health risks are few. The mCPP role as serotonergic receptor agonist is well known in the literature, reason why this substance is widely employed in scientific research, particularly in psychiatric studies. But there are few reports that aim to investigate thoroughly the actions that this substance triggers in the organisms. It is also known that serotonin is a neurotransmitter released by platelets at the site of inflammation and plays important immunomodulatory role on immune cells. Therefore, considering (1) the relevance of mCPP in the drug abuse context nowadays, (2) the necessity of researching the effects of the drug abuse in the organisms, (3) the lack of studies containing analysis of the mCPP effects over the immune system and (4) the probable correlation between mCPP and this system, through its activity in serotoninergic receptors, this report intended to lead investigations about the mCPP activity over the innate immune response and over the leukocyte mobilization mechanisms. For this purpose, Wistar male rats were treated with mCPP (1mg/kg, v.o.), their leukocytes were measured in the bone marrow, in the circulating compartment and in the inflammatory foci (peritoneum) in the presence or absence of inflammatory stimuli (LPS, 1 mg/mL, i.p.) and the myeloperoxidase present in liver tissue, lung and spleen was also quantified. In addition to in vivo studies, the cortisone plasma was quantified in animals receiving such treatment with glucocorticoid receptors antagonized previously (RU38486). Neutrophils collected from the peritoneal exudate were incubated at concentrations of 10 mM, 100 mM and 1000 mM in vitro. It was then investigated the neutrophil migration and the expression of adhesion molecules on the surface of neutrophils as well as the quantification of inflammatory mediators in the culture supernatant. The process of neutrophil-neutrophil adhesion to endothelium was also analyzed and endothelial cells were collected from the cremaster. Results reflect that mCPP decreased the amount of leukocytes at the peritoneal exudate and, concomitantly, increased the influx of PMN into the lung tissue during an inflammatory stimulus. Also, in vivo, it was possible to observe differences in the concentration of serum from animals which cortisone glucocorticoid receptors were previously antagonized and those in which the receptors in question were normal. In vitro, mCPP in three concentrations employed, and both in the presence or absence of stimulus (LPS or fMLP) caused changes in the migration of neutrophils, in the cell adhesion to the endothelium, in the expression of adhesion molecules (L-selectin, integrin-&#946;2 and PECAM-1), on the surface of neutrophils and in the concentrations of inflammatory mediators (NO, IL-1&#946;, IL-10, TNF-&#945;) in the culture supernatant of neutrophils. The results suggest that, together, mCPP exerts pro-inflammatory activity with respect to neutrophil activity. They also suggest that the drug is able to amplify the inflammatory response in an animal model rat both in vivo and in vitro.

O objetivo do presente estudo foi avaliar aspectos histológicos, imuno-histoquímicos e ultraestruturais da resposta inflamatória induzida experimentalmente, através da inoculação de BCG por via intramuscular em peixes filogeneticamente primitivos do gênero Arius sp e modernos do gênero Centropomus sp, com o intuito de estabelecer parâmetros comparativos da resposta inflamatória do ponto de vista filogenético entre peixes modernos e primitivos. Os resultados mostram haver diferenças na resposta inflamatória entre peixes modernos e primitivos; sendo que o primeiro tem capacidade de organização da lesão em granulomas típicos e células epitelióides secretoras de proteína S100 e citoqueratina, e que ao longo do experimento desenvolveu junções desmossômicas entre si; enquanto peixes primitivos não possuem capacidade de organização da lesão, não formando granulomas, apenas células gigantes secretoras de proteína S100. Não houve participação expressiva de células gigantes e pigmentares na resposta inflamatória no gênero Centropomus sp, sugerindo ser uma característica relacionada à espécie, contrariando alguns resultados verificados em peixes modernos no que diz respeito à participação de células pigmentares. / The aim of this study was the evaluation of the histological, imunohistochemical and ultra structural aspect of the inflammatory response experimentally induced by BCG intramuscular injection in phylogenetically primitive fishes of the genera Arius sp and modern of the genera Centropomus sp, with the purpose of establishing comparative parameters of the inflammatory response between modern and primitive fishes about phylogenetic aspect. The results show differences in the inflammatory response between modern and primitive fishes. Modern fishes have the ability of organization of the lesion, with development of tipical granulomas and epithelioid cells that produce S100 protein, cytokeratin and throughout the experiment they developed desmosomic junctions; instead of primitive fishes that don?t show the ability of organization of the lesion without forming an granuloma, just giant cells that produce S100 protein. It didn?t have an expressive participation of giant cells and pigmentcontaining cells in the inflammatory reaction in genera Centropomus sp, suggesting that It is a specie-specific characteristic, in opposition to some results found in modern fishes about pigment cells participation in the inflammatory reaction of modern fishes.

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Orientador: Valdecir Farias Ximenes / Banca: Rodrigo Cardoso de Oliveira / Banca: Luiz Carlos da Silva Filho / Banca: Noeli Pereira Rocha / Banca: Carlos Alan Candido Doas Junior / Resumo: Apocinina é o mais empregado inibidor de NADPH oxidase, um complexo multienzimático capaz de catalisar a redução unieletrônica do oxigênio molecular ao radical ânion superóxido. Apesar de controvérsias sobre sua seletividade, a apocinina tem sido utilizada como um das mais promissoras drogas em diversos modelos experimentais de inflamação. Neste estudo nosso objetivo foi caracterizar as características antioxidantes, pró-oxidantes e antinociceptivas da apocinina e dos compostos estruturalmente relacionados vanilina e ácido vanílico. Descobrimos que estes compostos são relativamente fracos como antioxidantes. Por outro lado, a apocinina e a vanilina, mas não o ácido vanílico mostraram significativas características pró-oxidantes. No que diz respeito aos efitos antinociceptivos em ratos, a administração oral de 100 mg/Kg de apocinina, vanilina e ácido vanílico, uma hora antes dos testes, foi capaz de reduzir significativamente o edema da pata provocada por carragenina e a dor no teste de formalina (fase inflamatória) A apocinina foi também capaz de reduzir o efeito nociceptivo induzido por capsaicina, cinamaldeído, mentol e glutamato. Utilizando antagonistas específicos, descobrimos que a via serotonérgica, mas não a via mediada por óxido nítrico está envolvida no mecanismo de antinocicepção da apocinina. Concluímos que não há relação entre as propriedades antioxidantes, pró-oxidantes, inibição de NADPH oxidase e os efeitos antinociceptivos estudados. Assim, os efeitos farmacológicos obtidos para a apocinina é uma confirmação de que este composto fitoquímico é muito mais do que um inibidor de NADPH oxidase. Estudos adicionais deverão ser realizados, mas as propriedades antiinflamatórias e antinociceptivas obtidas neste trabalho e os efeitos já descritos na literatura é um indicativo que esta molécula simples e barata se tornará um real anti-inflamatório e/o analgésico / Abstract: Apocynin is the most employed inhibitor of NADPH oxidase, a multienzymatic complex capable of catalyzing the one-electron reduction of molecular oxygen to the superoxide anion. Despite controversies about its selectivity, apocynin has been used as one of the most promising drugs in several experimental models of inflammatory diseases. In this study our aim was to characterize the antioxidant, pro-oxidant and antinociceptive properties of apocynin and the structurally-related compounds vanillin and vanillic acid. We found that apocynin, vanillin and vanillic acid are poor antioxidants. Conversely, apocynin and vanillin, but not vanillic acid, showed significant pro-oxidant characteristics. Regarding antinociceptive effects in rats, the oral administration of 100 mg/Kg of apocynin, vanillin and vanillic, one hour before the tests, was able to reduce significantly the paw edema pain provoked by carrageenan and the pain in the formalin test (inflammatory phase). Apocynin was also able to reduce the nociceptive effect induced by capsaicin, cinnamaldehyde, menthol and glutamate. By using specific antagonists, we found that serotonergic, but not the nitric oxide pathway seems to be involved in the mechanism of antinociception of apocynin. In conclusion, there is no relationship between antioxidant, pro-oxidant, inhibition of NADPH oxidase and the antinociception effects observed in these studies. Hence, the pharmacological effects obtained for apocynin is a confirmation that this phytochemical is much more than an NADPH oxidase inhibitor. Additional studies must be done, but the anti-inflammatory and antinociceptive properties of apocynin obtained in this work and the effects described in the literature are indicative that this simple and inexpensive molecule will become a real anti-inflammatory and analgesic drugs / Doutor