Nesta tese, dois projetos distintos que usaram a técnica do Espalhamento de Luz foram desenvolvidos. Estudou-se a influência de soluções concentradas de uréia sobre agregados supramoleculares de anfifilicos (ASA\'s), através de condutimetria, supressão de fluorescência e espalhamento de luz. A uréia causou aumento da concentração micelar crítica (CMC) em todos os sistemas micelares estudados. A uréia diminuiu a seletividade da ligação iônica entre cloreto e brometo em micelas de haleto de cetil-trimetil-amônio, estudada através de supressão de fluorescência. Este aditivo causou também aumento na segunda CMC de brometo de tetradeciltrimetil- amônio (TTAB) e diminuição do peso molecular das micelas em bastão formadas. Concluiu-se, desta primeira parte, que a uréia tende a interferir nas transições de fase apresentadas em sistemas micelares, provavelmente através da combinação dos mecanismos direto e indireto. A uréia apresenta potencial para uso como aditivo para modulação das propriedades estruturais de sistemas micelares. Na segunda parte da tese desenvolveu-se um sistema, baseado em espalhamento de luz, capaz de monitorar o peso molecular de polímeros durante a polimerização. O sistema foi eficiente no monitoramento da polimerização da N-vinil-pirrolidinona, mostrando que o peso molecular do polímero formado é constante durante a maior parte da reação. As teorias atuais de cinética de polimerização não foram capazes de explicar esse comportamento. / Light scattering techniques (static and dynamic) were used to detenninate the effect of urea on supramolecular aggregates and to monitor on-line molar mass ofpolymerization reactions. For the first set of investigation it was already established that urea increases the CMC and the dissociation degree (α) of ionic micelles (CTABr, TTABr, and SDS). From fluorescence suppression studies it was found that urea diminishes the ionic binding in zwitterionic and cationic micelles as well as in cationic vesicles. Bromide and chloride ionic selectivity in cationic micelles was found to nearly disappear in the presence of urea. Light scattering (static) detenninations showed that the weight averaged molecular weight (Mw) ofboth SDS and CTABr are invariant by the presence of the denaturant. A slight increase in the excluded volume tenn (A2) was detected for CTABr in the presence of 3M urea. In parallel both A2 and the radius of gyration (γ) of two polyelectrolytes (PAA and Hyaluronic acid) were not affected by the presence of urea. Sphere-to-rod concentration transitions (2nd CMC) of TIABr micelles increased in the presence of urea and the MW of rod particles were observed to decrease. For the insoluble mixture of CTABr/Polystyrenesulfonate solubilization was achieved in the presence of 3M urea. These set of results were explained as a result of the dual effect of urea, that is, the indirect effect by changing the properties of the solvent and the direct effect by solvating the hydrophilic domain of the aggregates and contributing with a stronger dipole moment. The second set of experiments was directed towards the real-time, on-line monitoring of Mw of polymerization reactions. This new approach could be succeeded by the coupling a light scattering detector, an UV photometer and a differential refractometer on line with a HPLC system. Mw growth formed in the polymerization of N-vynil-pirrolidone was accomplished with a small inherent error. Within the studied conditions Mw reached a plateau at early polymerization stages, after that only an increase in the number of polymer kinetic chains was observed. Current kinetic models were unable to predict the observed Mw growth pattern. This system is of great importance in basic and technological applications by virtue of its on-line capability.

INTRODUÇÃO: Sistemas nanométricos carreadores de fármacos, ao alcançarem a circulação sanguínea, se concentram em seus sítios de ação (\"drug-targeting\"), evitando tecidos saudáveis. O diâmetro médio e a polidispersidade de nanopartículas são parâmetros relevantes, pois podem influenciar no percurso pelo fluxo sanguíneo da partícula e na interação celular. A LDE, uma nanopartícula lipídica que mimetiza a lipoproteína de baixa densidade (LDL), é capaz de carrear fármacos como o quimioterápico paclitaxel para tecidos com alta taxa de proliferação celular, como por exemplo, lesões ateroscleróticas e tecidos neoplásicos. Assim, é relevante investigar a influência de diferentes tamanhos da LDE na captação celular e na eficácia terapêutica em aterosclerose experimental. OBJETIVO: Avaliar a influência de duas faixas de tamanhos da nanopartícula lipídica carreadora do quimioterápico paclitaxel (LDE-paclitaxel), na captação celular e na resposta terapêutica do tratamento da aterosclerose em coelhos submetidos à dieta rica em colesterol. MÉTODOS: A associação LDE-paclitaxel foi preparada por emulsificação por alta pressão. A separação da LDE-paclitaxel original em LDE-paclitaxel grande e LDE-paclitaxel pequena foi feita por ultracentrifugação por gradientes de densidade. Nos estudos com células endoteliais HUVEC foram avaliados citotoxicidade, internalização celular e detecção de apoptose/necrose. Para estudo em animal, foram utilizados coelhos New Zealand machos, com aterosclerose induzida por dieta, divididos em dois grupos: LDE-paclitaxel-grande (n=9) e LDE-paclitaxel-pequena (n=10). O tratamento com LDE-paclitaxel foi iniciado após 4 semanas da dieta. Aortas dos coelhos foram coletadas para análise macro e microscópica das lesões ateroscleróticas. RESULTADOS: A LDE-paclitaxel original foi caracterizada com diâmetro médio de 75nm; após a ultracentrifugação, a LDE-paclitaxel grande apresentou diâmetro médio de 83nm e a LDE-paclitaxel pequena de 40nm. Os ensaios de citotoxicidade mostraram que, após incubação por 24 horas, a LDE-paclitaxel pequena alcançou o IC50 com menor concentração que a LDE-paclitaxel grande. No ensaio de internalização, a LDE-paclitaxel pequena foi internalizada em menores concentrações e em menor tempo em comparação com as partículas da LDE-paclitaxel original ou LDE-paclitaxel grande. Nos ensaios para detecção de apoptose/necrose, LDE-paclitaxel, independentemente do tamanho, aumentou a porcentagem de células necróticas. A LDE-paclitaxel pequena também aumentou a percentagem de células apoptóticas, em comparação às outras partículas. No estudo in vivo, não houve diferença entre os tratamentos LDE-paclitaxel grande e LDEpaclitaxel pequena: a razão área de lesão/área total foi igual entre os grupos, assim como a quantificação de macrófagos e de células de músculo liso na íntima das aortas. CONCLUSÃO: O tamanho da LDE, apesar de ser um relevante parâmetro físico-químico, não influenciou no efeito antiaterosclerótico da associação LDE-paclitaxel. Portanto, em relação ao tamanho das partículas, a LDE-paclitaxel original, que possui ambas as populações, é eficienteno tratamento da aterosclerose experimental induzida por dieta rica em colesterol / INTRODUCTION: As nanometric drug carriers enter the blood circulation, they concentrate on their action sites, avoiding healthy tissue. The average diameter and polydispersity of nanoparticles are relevant parameters because they have influence on the particles course through the blood flow and on cell interaction. LDE, a lipid nanoparticle that mimics low-density lipoprotein (LDL), is capable of carrying chemotherapeutic drugs such as paclitaxel, for tissues with a high rate of cell proliferation, such as atherosclerotic lesions. Thus, it is important to investigate the influence of different sizes in the cellular uptake of LDE and therapeutic efficacy in experimental atherosclerosis. OBJECTIVE: To evaluate the influence of two size ranges of the lipid nanoparticle carrier of the chemotherapeutic drug paclitaxel (LDE-paclitaxel) in cellular uptake and therapeutic response in experimental atherosclerosis. METHODS: LDEpaclitaxel was prepared by emulsification by high energy. The separation of original-LDE-paclitaxel in large-LDE-paclitaxel particles and small-LDEpaclitaxel particles was performed by ultracentrifugation by density gradients. In studies with HUVEC endothelial cells, cytotoxicity, cell internalization and detection of apoptosis/necrosis were assessed. In in vivo study, New Zealand male rabbits, with atherosclerosis induced by cholesterol-rich diet, were divided into two groups: large-LDE-paclitaxel (n=9) and small-LDE-paclitaxel (n=10). Treatment with LDE-paclitaxel started after 4 weeks of diet. Aortas of the rabbits were collected for macroscopic and microscopic analysis of atherosclerotic lesions. RESULTS: The original-LDE-paclitaxel was characterized with an average diameter of 75nm. After ultracentrifugation, the large-LDE-paclitaxel showed average diameter of 83nm and small-LDE-paclitaxel 40nm. The cytotoxicity assay showed that, after incubation for 24 hours, small-LDE paclitaxel reached the IC50 in lower concentration than large-LDE paclitaxel. In internalization assays, small-LDE-paclitaxel was internalized in lower concentrations and shorter time as compared with the original and large particles. LDE-paclitaxel, independently of particle size, increased the percentage of necrotic cells. Small-LDE-paclitaxel was also able to increase the percentage of apoptotic cellsas compared with the original and large particles. In experimental study, there was no difference between large-LDE-paclitaxel and small-LDE-paclitaxel treatment: lesion area / total area ratio was similar between groups as well as the quantification of macrophages and smooth muscle cells of the intima of aortas.CONCLUSION: The size of the LDE, although an important physicochemical parameter, did not influence the antiatherosclerotic effect of LDE-paclitaxel. Therefore, with respect to particle size, the original-LDE-paclitaxel that has both populations is efficient to treat experimental atherosclerosis induced by a cholesterol-rich diet

Oxigênio molecular singlete [O2(1Δg)], uma espécie excitada, desempenha um papel importante em sistemas químicos e biológicos. É um poderoso eletrófilo, que reage com moléculas ricas em elétrons através de cicloadições [2+2], [4+2] e reações tipo ene. Ácidos graxos poliinsaturados, proteínas e DNA são alvos vulneráveis para o ataque de O2(1Δg). Os endoperóxidos de derivados de naftaleno são muito úteis e versáteis como fontes limpas de O2(1Δg), uma vez que são quase quimicamente inertes. Por outro lado, o desenvolvimento de novas fontes de O2(1Δg) ainda é uma tarefa desafiadora. Os derivados de naftaleno são capazes de armazenar O2(1Δg) por reação de cicloadiação [4+2] e liberá-lo em temperaturas amenas, o que os torna muito adequados para uso em estudos biológicos. A síntese destes compostos está baseada em modificações nos substituintes ligados nas posições 1 e 4 da estrutura do naftaleno. Na primeira parte deste trabalho, a síntese de três endoperóxidos derivados do naftaleno solúveis em água foi realizada. DHPNO2 e NDPO2 foram preparados de acordo com métodos similares descritos na literatura. A síntese de um novo endoperóxido dicatiônico derivado do naftaleno (NBTEO2) foi desenvolvida, contendo dois grupos de cloreto de amônio quaternário nas posições 1,4 do anel aromático. O intermediário chave na síntese dos três endoperóxidos é o BBMN, o qual foi preparado a partir da bromação radicalar do 1,4-dimetilnaftaleno. Nossos resultados têm indicado que este composto dicatiônico pode ser uma fonte química de O2(1Δg) em potencial, e pode ser explorado em estudos com mitocôndrias, onde o papel biológico de O2(1Δg) é investigado. A segunda parte deste trabalho foi dedicada a investigar a geração de O2(1Δg) através das reações entre hidroperóxidos de lipídeos (ácido oleico, linoleico e colesterol), hidroperóxidos orgânicos (cumeno e t-butila), bem como peróxido de hidrogênio com NO2+, utilizando o composto NO2BF4. Evidências da geração de O2(1Δg) foram obtidas através de medidas de emissão de luz na região do infravermelho próximo, no comprimento de onda de 1270 nm. Além disso, a prova inequívoca da presença de O2(1Δg) foi demonstrada através da caracterização espectral direta da emissão de luz no infravermelho próximo. O uso de azida de sódio como captador físico de O2(1Δg), juntamente com as medidas da quimiluminescência, contribuíram para identificar a geração desta espécie na reação entre hidroperóxidos de lipídeos e NO2BF4. Embora seja uma abordagem química, nossos resultados adicionaram informações importantes sobre a peroxidação lipídica, principalmente quando espécies reativas de nitrogênio estão envolvidas. O O2(1Δg) poderia ser gerado como um subproduto da peroxidação lipídica em condições onde espécies reativas de nitrogênio interagem com hidroperóxidos lipídicos. Isto pode contribuir para um melhor entendimento deste evento complexo com implicações fisiológicas ou fisiopatológicas. / Singlet molecular oxygen [O2(1Δg)], an excited species, plays an important role in chemical and biological systems. It is a powerfull electrophile, reacting with electron rich molecules through [2+2] cycloadditions, [4+2] cycloadditions and ene reactions. Polyunsaturated fatty acids, proteins and DNA are vulnerable targets for O2(1Δg) reaction. Naphthalene derivatives endoperoxides are very useful and versatile as a clean source of O2(1Δg), once they are almost chemically inert. On the other hand, developing new sources of O2(1Δg) are still a challenging task. Naphthalene derivatives are able to trap O2(1Δg) by [4+2] cycloaddition and release it in mild temperatures, which make them very suitable for biological studies. The synthesis of these compounds is based on modifications in substituents bonded in 1,4 positions of nafhthalene backbone. In the first part of present work, the synthesis of three water soluble naphthalene derivatives endoperoxides was performed. DHPNO2, NDPO2 were prepared according to similar methods described in the literature. A new di-cationic naphthalene derivative endoperoxide (NBTEO2) synthesis was developed, containing two quaternary ammonium chloride groups in 1,4-positions of aromatic ring. The key intermediate: for the synthesis of the three endoperoxides is the compound BBMN, which was prepared from radicalar bromination of 1,4-dimethylnaphthalene. Our results have indicated that this di-cationic compound can be a potential chemical source of O2(1Δg) and may be explored in mitochondrial studies where O2(1Δg) biological role is investigated. The second part of this work is dedicated to the investigation of generation of O2(1Δg) through reaction of lipid hydroperoxides (oleic acid, linoleic acids and cholesterol), organic hydroperoxides (cumene and t-butyl), as well as hydrogen peroxide with NO2+, using the compound NO2BF4. Evidences of generation of O2(1Δg) were obtained recording the monomol light emission measurement in near infrared region at wavelength of 1270 nm. Moreover, the proof of the presence of O2(1Δg) was unequivocally demonstrated by the direct spectral characterization of near-infrared light emission. The use of sodium azide as a physical quencher of O2(1Δg), associated to chemiluminescence measurements, contributed to identify the generation of this species in the reaction of lipid hydroperoxides and NO2BF4. Although, it is a chemical approach, our results add important information about lipid peroxidation, mainly when reactive species of nitrogen are involved. O2(1Δg) might be generate as a byproduct of lipid peroxidation, in conditions where reactive nitrogen species interact with lipid hydroperoxides. This might contribute to a better understand of this complex event and physiological or physiopathological implications

A doença cardiovascular aterosclerótica é a principal causa de morte no hemisfério ocidental, portanto também no Brasil. A detecção não invasiva da aterosclerose é fundamental para prevenção. Objetivos: Correlacionar os fatores de risco (escore de Framingham), o perfil lipídico, a PCR-us, a espessura da íntima-média da carótida, a função endotelial, o índice tornozelo-braquial e o escore de cálcio pela tomografia computadorizada, com a extensão da doença coronariana determinada pelo índice de Friesinger, na cinecoronariografia. Casuística e métodos: Foram estudados 100 pacientes de ambos os sexos, com idade de 55,1±10,7 sendo 55% homens e 45% mulheres. Não foram incluídos pacientes com síndrome coronariana aguda, insuficiência renal dialítica, doença do colágeno e câncer. Todos se submeteram a avaliação clínica, laboratorial (glicemia, perfil lipídico e PCR-us), função endotelial da artéria braquial e ultrasonografia da artéria carótida por ultra-som de alta resolução, índice tornozelo-braquial e tomografia computadorizada coronária para determinação do escore de cálcio. Foram calculados o colesterol não HDL-c e a relação TG/HDL-c. Todos os pacientes foram submetidos à cinecoronariografia por indicação do médico assistente. Foram considerados normais pacientes sem lesão obstrutiva na cinecoronariografia. Resultados: Pela análise univariada, escore de cálcio (529,5 ± 930,9) um HDL-c (45,9±15,5), relação TG/HDL (5,5±9,2) e IMT (0,77±0,22) mostraram correlação significativa com o índice de Friesinger. Já por análise multivariada somente o escore de cálcio, relação TG/HDL-c aumentada e HDL-c baixo correlacionaram-se significativamente com a extensão da DAC. A PCR-s (3,4±3,5), LDL-c (122,8±51,5) e DMF (4,8±5,7) não se correlacionaram com o índice de Friensinger. Conclusão: Assim, é possível ter uma idéia aproximada da presença/extensão da DAC usando métodos não invasivos, especialmente escore de cálcio, relação TG/HDL-c e HDL-c baixo. / Background: Atherosclerotic cardiovascular disease is the leading cause of death in the western hemisphere including Brazil. Non-invasive detection of atherosclerosis is critical to prevention. Objectives: We correlated the risk factors (score of Framingham), lipid profile, PCR-us, carotid intima-media thickness, endothelial function, ankle-brachial index and calcium score by computed tomography with the extent of coronary disease determined by the Friesinger index, by coronary angiography. Methods: We studied 100 patients of both sexes, aged from 55.1 ± 10.7, 55% men and 45% women. Patients with acute coronary syndrome, renal dialitic, collagen disease and cancer were not included. All were submitted to clinical evaluation, laboratory (blood glucose, lipid profile and hs-CRP), endothelial function of brachial artery and ultra-sonography of carotid artery by high-resolution ultra-sound, ankle-brachial index and computed tomography for coronary determination of calcium score. We calculated the cholesterol not HDL-c and TG/HDL-c ratio. All patients were submitted to coronary angiography for indication by attending physician. We considered normal patients without obstructive lesion in coronary angiography. Results: By univariate analysis, calcium score, HDL-c, TG/HDL ratio and IMT showed significant correlation with Friesinger index. However, multivariate analysis only calcium score, increased TG/HDL-c and low HDL-c correlated significantly with the extension of the CAD. The hs-CRP, LDL-c and FMD, did not correlate Friensinger index. Conclusion: Thus, it is possible to have an approximate idea of the presence/extension of CAD by non-invasive methods, especially calcium score, TG/HDL-C ratio and HDL-c.

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Foram realizadas as análises bromatológica e de perfil de ácidos graxos dos alimentos. Foram investigados o perfil lipídico sérico, os aspectos físicos e morfológicos do sêmen in natura e as relações entre eles. A análise estatística contemplou a análise de variância (Anova), a comparação de médias pelo teste de Tukey, além das correlações de Pearson (P<0,05). O Grupo ÓLEO teve consumo 71,23% superior de ácidos graxos saturados e 55,40% superior de ácidos graxos insaturados em relação ao Grupo CONT. Efeitos significativos em relação aos grupos, para os parâmetros séricos, foram observados para triglicerídeos, colesterol, HDL e lipídeos totais, com valores maiores para o Grupo ÓLEO e, efeitos significativos em relação a período para colesterol, LDL, VLDL e lipídeos totais (P<0,05). Com relação aos parâmetros seminais, houve significativa redução em turbilhonamento e integridade de membrana plasmática, e redução da concentração seminal em função do período para o Grupo ÓLEO. Houve correlação significativa entre as variáveis: triglicerídeos e defeitos menores (r=-0.412; P=0,006), LDL e defeitos totais (r=-0,333; P=0,030), VLDL e viabilidade espermática (r=0,381; P=0,012), lipídeos totais e defeitos menores (r=-0.366; P= 0,017), e lipídeos totais e defeitos totais (r=-0,309; P= 0,046). Apesar de haver relação entre maiores níveis de lipídeos séricos e melhor morfologia espermática e do uso do óleo de palma não reduzir a qualidade do sêmen in natura a níveis abaixo dos fisiológicos, seu uso a 2% na dieta não favoreceu efetivamente os parâmetros relacionados com elevação da qualidade seminal e potencial fertilidade dos touros. / The objective of this study was to evaluate the effect of incorporation of palm oil on serum lipid levels and sperm quality of buffalo bulls, since research about palm oil seed for reproductive purposes are scarce. The study was conducted at Embrapa Eastern Amazon, and used 12 pre-selected buffalo bulls, with a mean age of 3.47 ± 0.92 years and weight of 456.8 ± 50.4 kg. The bulls were fed and divided into two groups according to diet received. Diets were isoproteic (cracked corn, wheat bran and corn silage; proportion roughage / concentrate 50%) and were offered in collective pens. Animals of CONT Group (n = 5) received a control diet and OIL Group (n = 7) received the same diet with addition of 2% of palm oil on the DM. Analyses were performed using chemical and fatty acid profile of foods. Serum lipid profile, physical and morphological features of raw semen were investigated, including the relations between them. Statistical analysis included analysis of variance (ANOVA), comparison of means by Tukey test and Pearson correlations (P <0.05). Increased lipid consumption was noted related to saturated fat acids (71.23%) and unsaturated fat acids (55.40%) in OIL Group. Significant effects for serum parameters were observed for triglycerides, cholesterol, HDL and total lipids, with higher values for the OIL Group, and significant effects over time for cholesterol, LDL, VLDL and total lipids (P <0.05). Regarding to semen parameters, there was a significant reduction in gross motility and integrity of plasmatic membrane, and reduced seminal concentration on the period for the OIL Group. There was significant correlation between the variables: triglycerides and minor defects (r = -0412, P = 0.006), LDL and total defects (r = -0.333, P = 0.030), VLDL and viability (r = 0.381, P = 0.012), total lipids and minor defects (r = -0366, P = 0.017), and total lipids and total defects (r = -0.309, P = 0.046). Although an observed relationship between higher levels of serum lipids and better sperm morphology, and no reduction of fresh semen quality by palm oil addition below the physiological levels, the use of 2% of palm oil in the diet did not improve effectively the parameters related to semen quality and bulls fertility.

O presente trabalho está inserido dentro de um estudo que pretende entender os mecanismos químicos e bioquímicos envolvidos na biodegradação da madeira por Ceriporiopsis subvermispora. Particularmente avaliou-se a relação entre a atividade redutora de Fe3+ presente em extratos aquosos de cultivos de Ceriporiopsis subvermispora sobre madeira com a iniciação de reações de peroxidação de ácido linoleico. A madeira foi biotratada por períodos de 7, 14 e 28 dias. Após a biodegradação, os cavacos foram extraídos com água e os extratos gerados foram caracterizados quanto a atividade redutora de Fe3+ e a capacidade de peroxidar ácido linoleico in vitro. As reações de peroxidação foram avaliadas a partir do monitoramento do consumo de O2 em um oxímetro. A partir desses ensaios foi possível determinar que tanto a oxidação de íons Fe2+ adicionados diretamente ao meio reacional ou a adição de íons Fe3+ e extratos com atividade redutora foram capazes de gerar radicais hidroperoxila que podem iniciar a peroxidação de ácido linoleico. As reações controle indicaram que a peroxidação não ocorre na presença de Fe3+. A adição de metanol às reações contendo Fe2+ não proporcionou menor capacidade de peroxidação de lipídeos, indicando que a reação não deve ser iniciada por OH radical. Tanto a atividade redutora de Fe+3 como a capacidade de iniciar a peroxidação de ácido linoleico dos extratos aumentaram em função do tempo de cultivo. A ultrafiltação dos extratos através de membranas seletivas associada com estudos de cromatografia de permeação em gel (CPG) indicaram que a maior parte da atividade redutora e da capacidade peroxidativa pode ser atribuída a compostos menores que 5kDa. Entre os compostos orgânicos identificados nas frações menores que 5 kDa, foram identificados, por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG/EM), alguns ácidos graxos como o palmítico e o ácido esteárico, além de glicerol e ácido oxálico e compostos aromáticos como a vanilina, e os ácidos vanílico, siríngico e gálico. A vanilina, detectada em todas as amostras em estudo, foi usada como padrão para um estudo comparativo das atividades redutoras de Fe3+ detectadas nos extratos. As concentrações estimadas de vanilina nos extratos foram de 5 a 22 ? moles/L de extrato ultrafiltrado. Soluções padrão de vanilina foram então preparadas em concentrações de 5 a 30 ? M e avaliadas quanto a capacidade de reduzir Fe3+ na presença de ferrozina. Essas misturas levaram à formação de Fe2+ nas concentrações de 0,5 a 0,7 ? M de Fe2+ , após 10 min de reação. A comparação desses dados com a capacidade redutora de Fe3+ encontrada nos ultrafiltrados da amostra de madeira biotratada por 14 dias, 43 ?M de Fe2+ em 10 min, sugeriu que a maior parte da capacidade redutora dos extratos não pode ser atribuída aos compostos detectados por CG/EM e sim deve ser atribuída a compostos que apresentam massa molar próxima àquela obtida pela calibração do sistema de CPG, entre 3 e 5 kDa. Isso sugere que a atividade redutora não estaria presente em compostos de baixa massa molar compatíveis com estruturas contendo 1 ou, no máximo, 2 anéis aromáticos e sim em derivados fenólicos maiores, oriundos da biodegradação da lignina. / The present work is inserted in a broad study aiming to understand the chemical and biochemical mechanisms involved in wood biodegradation by Ceriporiopsis subvermispora. Particularly, the relationship between the Fe3+-reducing activity present in aqueous extracts recovered from Ceriporiopsis subvermispora cultures on wood with the initiation of linoleic acid peroxidation reactions was evaluated. Wood chips were biotreated for periods varying from 7 to 28 days. After biotreatment, the wood chips were extracted with water and the resulting extracts were characterized according to their Fe3+-reducing activity, as well as their capacity to initiate linoleic acid peroxidation reactions in vitro. The peroxidation reactions were monitored through O2 consumption by using an appropriated Oximeter. Based on these assays, it was possible to show that Fe2+ ions added directly to the reaction media or the addition of Fe3+ ions plus aqueous extracts were able to generate hidroperoxil radicals that initiated linoleic acid peroxidation. The control reactions indicated that the peroxidation did not occur in the presence of Fe3+ ions alone. Addition of methanol to the reaction media containing Fe2+ did not diminish the lipid peroxidation extent, suggesting that the reaction should not depend on the formation of hydroxyl radical. The Fe3+-reducing activity and the capacity to initiate linoleic acid peroxidation increased in the aqueous wood extracts as a function of culturing time. The ultrafiltration of the extracts associated with gel permeation chromatography (GPC) studies indicated that most of the reducing activity and the peroxidation capacity present in the extracts were assigned to compounds presenting molecular mass lower than 5 kDa. In the fraction lower than 5 kDa some organic compounds were identified by using gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC/MS). Palmitic and estearic acids, glycerol, oxalic acid and some aromatic compounds such as vanillin, vanillic, gallic and syringic acids were identified. Vanillin, detected in all the studied samples, was used as a standard for comparative evaluation of the Fe3+-reducing activities detected in the extracts. The estimated concentrations of vanillin in the extracts varied from 5 to 22 &#956;mol/L of ultrafiltrated extract. Therefore, 5 to 30 &#956;M standard solutions of va nillin were assayed for their Fe3+-reducing activity. These solutions reduced 0.5 to 0.7?M of Fe3+ after 10 min reaction. The comparison of these data with the Fe3+-reducing capacity found in the ultrafiltrated aqueous extract from the 14-day biotreated sample, 43 ? M of Fe3+ reduced after 10 min reaction, suggested that most of the reducing capacity in the extracts could not be attributed to compounds detect by GC/MS. Conversely, the Fe3+-reducing capacity could be assigned to compounds with higher molar mass as already observed in the GPC studies (3 to 5 kDa). These data suggest that the reducing activity detected in the aqueous extracts would not be compatible with low molar mass compounds containing 1 or, at least 2, aromatic rings. Instead, the Fe3+-reducing capacity should be assigned to high molar mass phenolic derivatives produced during the lignin biodegradation.

A influência da obesidade sobre o fígado e a função hepática é tema ainda pouco estudado e discutido, principalmente no Brasil. O crescente aumento da população obesa de maneira global alerta sobre esse grave problema, que hoje em dia, se torna de saúde pública. Amplia-se, cada vez mais, o número de pessoas e a faixa etária atingida. A doença hepática não alcoólica é uma condição clínico-patológica comum caracterizada por depósitos de lipídios em hepatócitos no parênquima hepático. Um espectro de danos ocorrem no parênquima, desde uma simples esteatose macrogoticular podendo evoluir para esteato-hepatite, fibrose e até cirrose. Os casos de esteatose hepática não alcoólica (EHNA) que progridem para cirrose tem sido reconhecidos como a maior causa de morbidade e mortalidade com potencial para progredir para falência hepática. Apesar de haver um aumento na prevalência da doença hepática não alcoólica, os critérios para seu diagnóstico continuam pobremente definidos. A utilização da espectroscopia de prótons na ressonância magnética auxilia na quantificação do conteúdo lipídico hepático e na musculatura da perna (tibial anterior e sóleo), embora venha sendo utilizada apenas em pesquisas. Tivemos como objetivos o estudo do metabolismo lipídico de humanos xii obesos por espectroscopia por ressonância magnética, correlacionando com dados laboratoriais e de biópsias hepáticas. Neste estudo observacional transversal e prospectivo realizado em obesos, que foram submetidos a cirurgia redutora gástrica pela técnica de Capella no Hospital Prof. Edmundo Vasconcelos em São Paulo, foram incluídos 27 pacientes analisados no pré e pós-operatório para descrição dos dados. Foi constatada uma razão masculino/feminino geral de 8 :19 e a faixa etária entre 24 e 55 anos. Os índices de massa corpórea (IMC) eram sempre superiores a 40 Kg/m² para inclusão cirúrgica. Os pacientes obesos que no pré-operatório apresentavam esteatose hepática observada na ressonância magnética e esteatose e/ou esteato-hepatite na biópsia hepática evoluíram com melhora ou resolução no pós-operatório. Em conclusão, em pacientes obesos o grau de esteatose hepática pode ser analisado qualitativa e quantitativamente através da ressonância magnética com espectroscopia assim como, o controle pós tratamento cirúrgico evitando-se a utilização de métodos invasivos, entre eles a biópsia hepática. / The obesity influence on the liver and the hepatic function are themes that are not so discussed or studied, especially in Brazil. The world-wide increasing number of obese people calls the attention to this serious problem, that nowadays, became a public health problem. The number of people and the age of the people who suffer from it is increasing each day more. The non-alcoholic hepatic disease is a common pathological clinic condition caractherized by lipid deposits in hemocytes in the hepatic parenchyma. There are some injuries in the parenchyma, since a single steatosy macrogoticular to a steatohepatitis, a fibrosis and even a cirrhosis (Sass et al., 2005). The non-alcoholic steatosy hepatic (NASH) cases which lead to a cirrhosis have been known as the main causes of death with possibilities to evolute to a hepatic fail. Besides there is an increasing in the non-alcoholic hepatic disease, the means for its diagnosis still remain poorly defined. The protons spectroscopy use, in the magnetic resonance, helps on the lipidic hepatic contents numbers, although it has been used only for researches. We had as a goal the lipid metabolism study of obese human beings, related to the laboratorials data and the hepatic biopsy. On this study, where we observed obese people that were submitted to a gastric reducing surgery by the Capella techinic in the hospital Prof. Edmundo Vasconcelos in São Paulo, were included 27 pacients analyzed on the before and after operation for the datas description. It was noted a male/female general reason 9: 18 and the ages between 24 and 55 years old. The body mass indexes (IMC) were always over 40 Kg/m² to be included in a surgery. The obese patients who presented steatosy hepatic before operatory observed on the magnetic resonance and steatosy and/or steatohepatitis during the hepatic biosy went better on the pos-operatory. Finally, in obese patients the xiv steatosy hepatic degree can be analysed on its qualitativy and quantitativy through the magnetic resonance with spectroscopy, and so the cirurgical pos- treatment control, avoiding the use of invasive methods, among them the hepatic biopsy.

A determinação de Intervalos de Referência (IR) é uma árdua tarefa para os laboratórios clínicos, porém indispensável e de fundamental importância para a tomada de decisão médica. Para parâmetros como os lípides séricos, os IR tem sido estabelecidos consensos nacionais ou internacionais definindo limites de decisão (CLSI, 2008). O objetivo deste estudo foi determinar os IR para colesterol total, HDL-colesterol, colesterol não-HDL, LDL- colesterol e triglicérides séricos em crianças e adolescentes saudáveis do município de Cuiabá, capital do estado de Mato Grosso. Trata-se de um estudo transversal, descritivo, realizado em 1.866 crianças e adolescentes saudáveis de creches e escolas municipais desta capital, obtidas por amostragem aleatória. Foi aplicado um questionário avaliando antecedentes do indivíduo e de seus familiares além de dados demográficos e antropométricos. Foram definidos como critérios de inclusão do estudo, crianças e adolescentes nas faixas etárias de 1 a 12 anos 11 meses e 29 dias, sem nenhuma doença de base diagnosticada ou queixas clínicas no momento da coleta. Além disto, os participantes não deveriam fazer uso regular de medicamento. As amostras foram coletadas em jejum. As amostras foram processadas no equipamento cobas® 6000 (analyser series - Roche Diagnostics), em laboratório da rede DASA na cidade de Cuiabá. Em relação à metodologia estatística, foi analisada a homogeneidade das variâncias através do teste de Bartlett para cada analito por idade e, posteriormente, testados pelo teste ANOVA ou Kruskal-Wallis para verificar a existência de diferença entre as faixas etárias. O teste \"post hoc\" de Bonferroni foi aplicado quando se constatou a diferença para reagrupar as faixas etárias similares, constituindo assim novos grupos etários. Aplicou-se então, o teste de Bartlett e, conforme seu resultado, realizou-se ANOVA ou Kruskal-Wallis para verificar se os agrupamentos nas faixas se mantinham. Em seguida, procedeu-se a exclusão de valores extremos (outiliers) tomados como sendo aqueles valores acima ou abaixo da média ± 3 desvios-padrão. Depois de excluídos os outiliers, obteve-se o IR como sendo a média ± 2 desvios-padrão dos valores remanescentes. Adicionalmente, foi calculada a distribuição em percentis, sendo adotado o critério do NHLBI 2012 como proposta de limite de decisão para a população estudada. Em todos os testes, o nível de significância adotado foi de 5%. As análises estatísticas foram realizadas pelos programas MINITAB (versão 15) e SPSS (versão 16). Este projeto foi aprovado pelas Comitês de Ética em Pesquisa das instituições envolvidas e das Secretarias Municipais de Educação e Saúde de Cuiabá. Os valores encontrados para o colesterol total, nos percentis 75 e 95 foram: 1 a 2 anos de 160 mg/dL e 189 mg/dL; 3 a 8 anos de 170 mg/dL e 199 mg/dL; 9 a 12 anos de 176 mg/dL e 205 mg/dL, respectivamente. Para o colesterol não-HDL, na única faixa etária de 1 a 12 anos, os valores nestes percentis foram de 122 mg/dL e 150 mg/dL, respectivamente. Para o LDL-colesterol, os valores correspondentes aos percentis acima, na faixa etária de 1 a 8 anos e de 9 a 12 anos, foram de 104 mg/dL e 132 mg/dL; 106 mg/dL e 139 mg/dL, respectivamente. Para os triglicérides, os valores correspondentes aos referidos percentis foram: 1 ano de 127 mg/dL e 189 mg/dL; 2 a 5 anos de 98 a 139 mg/dL; 6 a 12 anos de 92 mg/dL e 139 mg/dL. Para as faixas etárias propostas para o HDL-colesterol os valores correspondentes ao percentil 10 foram: 1 ano de 24 mg/dL; 2 anos de 28 mg/dL; 3 anos de 32 mg/dL e de 4 a 12 anos foi de 36 mg/dL. Os valores dos parâmetros aqui avaliados, definidos em diferentes faixas etárias em crianças e adolescentes brasileiros da cidade de Cuiabá, podem representar limites de decisão para a população pediátrica brasileira contribuindo para aprimorar o diagnóstico neste grupo específico em nosso país / Establishment of Reference Intervals (RI) is an arduous task for clinical laboratories however vital and fundamental importance to medical decision making. For some parameters, such as serum lipids, RI have been established by national and international consensus defining decision limits (CLSI 2008). The aim of this study was to determine pediatric RI of total cholesterol, HDL-cholesterol, cholesterol non- HDL, LDL-cholesterol and triglycerides in healthy children and adolescents in Cuiabá, capital of Mato Grosso. This is a descriptive study, conducted in 1,866 healthy children and adolescents from kindergartens and schools of the capital city, obtained by random sampling. A questionnaire assessing the individual background and their relatives besides demographic and anthropometric data had beeb also carried out. Were defined as inclusion criteria of the study, children and adolescents in the group 1-12 years 11 months and 29 days without any underlying disease or diagnosed clinical complaints at the time of collection. In addition, participants should not take any regular medication. The samples were collected during fasting period and were determined using cobas® 6000 (analyser series - Roche Diagnostics). Regarding statistic methodology, we did analyse the homogeneity of variances by Bartlett´s test for each parameter by age and subsequently by ANOVA or Kruskal-Wallis test to check the differences between age groups. The test \"pos hoc\" Bonferroni was applied when it was found the difference to regroup similar age groups, thus constituting a new age bracket. After this procedure the Bartllet test was applied, as it result, we did conduct ANOVA or Kruskal-Wallis to check if the groups remained. Then proceeded to the exclusion of extreme values (outliers) taken as those values above or below the mean ± 3 standard deviations. After excluding outliers, obtained the RI as the mean ± 2 standard deviations of the remaining values. Additionally, we calculated the percentile distribution, and adopted the criteria of NHLBI 2012 as proposed decision limit for the population studied. In all tests, the significance level was 5%. Statistical analyzes were performed by Minitab software (version 15) and SPSS (version 16). The project was approved by the Research Ethics Committees of the institutions involved and Municipal Departments of Education and Health of Cuiabá city The values obtained for total cholesterol, 75 and 95 percentiles, were: 1 to 2 years, 160 mg/dL and 189 mg/dL; 3 to 8 years, 170 mg/dL and 199 mg/dL; 9 to 12 years, 176 mg/dL and 205 mg/dL, respectively. For the non-HDL cholesterol, the only age group 1 to 12 years, this percentiles values were 122 mg/dL and 150 mg/dL, respectively. For the LDLcholesterol, the values corresponding to the percentiles above, aged 1 to 8 years and 9 to 12 years, were 104 mg/dL and 132 mg/dL; 106 mg/dL and 139 mg/dL, respectively. For the triglycerides, the values corresponding to these percentiles were: 1 year, 127 mg/dL and 189 mg/dL; 2 to 5 years, 98 to 139 mg/dL; 6 to 12 years, 92 mg/dL and 139 mg/dL. For ages proposed for HDL-cholesterol the corresponding values to 10th percentile were: 1 year, 24 mg/dL; 2 years, 28 mg/dL; 3 years, 32 mg/dL and 4 to 12 years were 36 mg/dL. The values of the parameters evaluated here, defined in different age groups in Brazilian children and adolescents in the city of Cuiabá, can represent decision limits for the Brazilian pediatric population contributing to improve the diagnosis in this particular group in our country

Introdução: Durante a síndrome da resposta inflamatória sistêmica acontecem importantes alterações no metabolismo lipídico. Estas alterações são descritas nos pacientes adultos com sepse grave, porém o perfil lipídico no paciente pediátrico gravemente doente é pouco conhecido. Além disso, nos pacientes gravemente doentes baixas concentrações de colesterol foram associadas a maior gravidade da doença e aumento na mortalidade. Objetivos: Avaliar a relação entre a intensidade da reposta inflamatória e alterações no perfil lipídico em crianças e adolescentes gravemente doentes à admissão na UTI e se estas alterações se atenuam à medida que há resolução do processo inflamatório. Métodos: Analisamos o perfil lipídico de 40 pacientes com SIRS/sepse admitidos numa UTI Pediátrica de nível I. A Proteína C Reativa (PCR) foi utilizada para caracterizar resposta inflamatória. Mensuramos os níveis séricos de triglicerídeos (TG), colesterol total (CT), lipoproteína de alta densidade (HDL), lipoproteína de baixa densidade (LDL) e apolipoproteínas à admissão e no sétimo dia de internação. Utilizamos um grupo controle de 42 pacientes pediátricos avaliados no pronto socorro que não apresentavam sinais de sepse. Foi utilizado o Pediatric Risk of Mortality Score nos pacientes admitidos na UTI e realizada avaliação nutricional nos dois grupos. Resultados: As concentrações de PCR apresentaram-se bastante elevadas no 1º dia do estudo e tiveram uma redução significativa durante a evolução. Os pacientes internados na UTI tiveram níveis significativamente mais baixos de CT, HDL, LDL bem como concentrações mais altas de TG em comparação ao grupo controle. Houve um aumento significativo nos níveis de CT, HDL, LDL e apolipoproteínas entre o primeiro e sétimo dias de estudo. Não houve relação entre a classificação nutricional e as concentrações de lipoproteínas. Conclusão: Durante a resposta inflamatória encontramos níveis séricos mais baixos de lipídeos e apolipoproteínas com associação inversa em relação às concentrações de PCR. À medida que houve resolução da resposta inflamatória os níveis de CT, HDL, LDL e apolipoproteínas aumentaram mostrando relação direta entre as alterações no perfil lipídico e a inflamação. As alterações no perfil lipídico não se associaram ao estado nutricional / Introduction: During the course of systemic inflammatory response syndrome, there are important changes in lipid metabolism. These changes are described in adult patients with severe sepsis, but little is known about lipid profile in critically ill pediatric patients. Furthermore, in critically ill patients low cholesterol levels were shown to be correlated with the severity of disease and associated with higher mortality rates. Purpose: To evaluate the relationship among the intensity of the inflammatory response and changes in lipid profile in critically ill children and adolescents on admission to the PICU and whether these changes are attenuated as there is resolution of the inflammatory process. Materials and Methods: We analyzed the serum lipid in 40 patients with SIRS/sepsis admitted to the level I pediatric ICU. The C-reactive protein (CRP) was used to characterize the inflammatory response. We measured serum levels of triglyceride (TG), total cholesterol (TC), high density lipoprotein (HDL), low density lipoprotein (LDL) and apolipoprotein on admission and on the seventh day of hospitalization. We used a control group of 42 pediatric patients seen in emergency department without sepsis. Severity of disease was evaluated with Pediatric Risk of mortality score (PRISM) on admission and nutrition classification was performed in all patients. Results: CRP concentrations were very high on the first day of the study and had a significant reduction during evolution. On admission to the PICU, patients had significantly lower levels of TC, HDL, LDL as well as higher concentrations of TG in comparison with control group. There was a significant increase in the TC, HDL, LDL and apolipoprotein levels between the first and seventh days of the study. There was no relationship between the nutritional classification and lipoproteins levels. Conclusions: During the systemic inflammatory response we found lower serum levels of lipids and apolipoproteins with negative correlation in relation to CRP. As improvement in the inflammatory response, the levels of CT, HDL, LDL and apolipoprotein increased showing a direct relationship among changes in lipid profile and inflammation. Changes in lipid profile were not associated with nutritional status

Ao utilizar uma microemulsão lipídica artificial rica em colesterol (LDE), como transportador de fármacos antineoplásicos, é possível aumentar a dose administrada com redução dos efeitos tóxicos. Quando injetada na circulação, a LDE liga-se aos receptores da lipoproteína de baixa densidade (rLDL). Grande parte das células neoplásicas apresenta aumento da expressão dos rLDL, permitindo aumento da concentração da LDE e do fármaco nestes tecidos. Recentemente, o quimioterápico etoposídeo foi associado à LDE através de uma modificação em sua estrutura, sem alterar o efeito citotóxico do fármaco e sendo captado via rLDL. Neste estudo, deu-se continuidade a esta linha, realizando os estudos pré-clínicos, em camundongos, da associação LDE-oleato de etoposídeo. Foram realizados estudos de toxicidade crônica e toxicidade aguda, tendo sido determinadas as doses máximas toleradas (DMT) e doses letais (DL) da LDE-oleato de etoposídeo em comparação com o fármaco comercial. A DMT para a formulação LDE-oleato de etoposídeo é oito vezes maior do que a encontrada para o etoposídeo comercial, enquanto a DL50 é 5,4 vezes menor, o que demonstra uma redução significativa da toxicidade do fármaco após a modificação e associação à LDE. No mesmo modelo animal, foi comparada a eficácia antitumoral das formulações de LDE-oleato de etoposídeo e etoposídeo comercial, através da observação da evolução do crescimento tumoral e porcentagem de sobrevivência. A associação LDE-oleato de etoposídeo mostrou-se mais efetiva em retardar o crescimento tumoral, assim como promoveu aumento da taxa de sobrevida quando, comparado ao etoposídeo comercial. Dessa forma, a associação LDE-oleato de etoposídeo aumentou o índice terapêutico do fármaco. / When using a cholesterol-rich microemulsion (LDE), as an antineoplastic drug transporter, it is possible to increase the administered dose and reduce its side effects. When injected in the circulation, LDE binds to the low density lipoprotein receptors (LDLr). Most of the neoplastics cells has LDLr overexpressed, what leads to LDE and drug concentration in these tissues. Recently, the etoposide was associated to LDE through a modification in its structure, without changing the drug cytotoxic effect and being uptaken by rLDL. This study follows up the LDE-etoposide oleate development, through in mice pre-clinical studies. Chronic toxicity and acute toxicity studies were accomplished to determinate the maximum tolerated doses (MTD) and lethal doses (DL) of LDE-etoposide oleate comparing with the commercial drug. The LDE-etoposide oleate MTD is 8-fold higher than the commercial etoposídeo, while DL50 is 5,4-fold lower, resulting in a significant reduction of the drug toxicity after the modification and association to LDE. In the same animal model, it was compared the antitumoral activity effectiveness of the LDE-etoposide oleate and commercial etoposide, through the observation of the growth tumoral inhibition and survival percentage. The association LDE- etoposide oleate showed to be more effective in inhibit the tumoral growth and promoted increase of the median survival as compared to the commercial etoposide. In conclusion, the association LDE-etoposide oleate increased the therapeutic index of the drug.