O uso de células da medula óssea no tratamento da insuficiência hepática aguda é uma alternativa promissora, visto que o único tratamento disponível atualmente é o transplante hepático o qual, devido à falta de órgãos para transplante e complicações pós-cirúrgicas, está associado a uma alta mortalidade. O interesse na identificação de populações celulares capazes de se diferenciar em células tipo-hepatócitos tem ganhado grande atenção, não somente como uma promissora fonte de células para terapia celular de doenças hepáticas, mas também como potencial fonte celular para modelos in vitro de testes pré-clínicos de medicamentos, modelos para estudo da hepatogênese, e desenvolvimento de fígados bioartificiais. O presente estudo teve como objetivo identificar a capacidade de diferentes populações de células da fração mononuclear da medula óssea (FMMO) de se diferenciar em células tipo-hepatócitos. Para isso, utilizamos um sistema de co-cultivo, onde as células da fração aderente e nãoaderente da FMMO eram mantidas em contato com o meio de hepatócitos derivados de animais com ou sem lesão por Tetracloreto de Carbono (CCl4). Nossos resultados mostram que células da fração não-aderente são capazes de adquirir características típicas de hepatócitos após 24 horas de exposição às células do tecido lesionado, tais como expressão gênica de Albumina e Citokeratina-18, e produção e secreção de uréia. Foi identificada a presença de microvesículas carregando material genético específico de hepatócitos no sobrenadante das células diferenciadas, indicando um possível mecanismo molecular na indução da diferenciação. Este trabalho permitiu o estudo da diferenciação celular in vitro e análise do papel do microambiente de lesão neste processo. / Cell therapy using bone marrow-derived cells is a promising approach for the treatment of acute liver failure, as liver transplant is associated to high mortality due to lack of organs and post-surgical complications. The identification of cell populations capable of generating hepatocyte-like cells has gained immense interest, not only as a promising cell source for cell-based therapy of liver diseases, but also as a potential cell source for in vitro models of drug safety testing, models for studying hepatogenesis, and development of bioartificial livers. In the present study, we investigated the capability of different populations from the bone marrow mononuclear cells (BMMC) to differentiate into hepatocyte-like cells. For that, adherent and non-adherent cells from the BMMC were co-cultured with hepatocytes obtained from animals with or without Carbon Tetrachloride (CCl4)-induced liver injury. Our results showed that non-adherent BMMC presented signs of differentiation, such as Albumin and Cytokeratin-18 expression and urea production, after 24 hours of co-culture with damaged hepatocytes. Microvesicles carrying hepatocyte-specific genetic material were detected in the supernatant from differentiated cells, thus suggesting a mechanism of differentiation. In summary, this study assessed in vitro differentiation of BMMC and analyzed the role of injury micro-environment in cell plasticity.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-26T09:09:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 302615.pdf: 1176972 bytes, checksum: 7817651b85e1920291ab9691ad63d7a3 (MD5) / A medula espinhal é conhecida por ser um centro de controle ortodrômico (nocicepção), bem como antidrômico (vasodilatação) na via nociceptiva. Os receptores de histamina participam da transmissão nociceptiva na medula espinhal, assim, é concebível que a histamina possa também desempenhar um papel no controle medular da vasodilatação periférica. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da via histaminérgica medular na incapacitação, no edema articular e na migração celular induzida pela injeção da carragenina na articulação do joelhos de ratos. Os animais receberam todos os fármacos por via intratecal 20 min antes da injeção intraarticular de carragenina (50 mg). A incapacitação articular foi medida pela contagem do tempo de elevação da pata (TEP), durante 1 min de caminhada forçada a cada hora, num total de 6 horas. O edema foi avaliado pela mensuração do diâmetro articular (DA). Após 6 h, o líquido sinovial foi coletado para a avaliação do infiltrado de leucócitos. A histamina foi hiponociceptiva e pró-edematogenica, diminuindo dessa forma o TEP (20 nmol) e aumentando o DA (0,002 nmol). Da mesma forma, 2-PEA diminuiu o TEP (1 nmol), e aumentou o DA (0,001 nmol). Cetirizina aumentou o TEP (0,126 pmol), e diminuiu do edema (12,6 nmol). O dimaprit diminuiu incapacitação, mas aumentou edema (18 pmol). Da mesma forma, ranitidina aumentou a incapacitação e diminuiu o edema (38 pmol). Immepip diminuiu a incapacitação (8 nmol), mas aumentou o edema (32 nmol). A tioperamida foi hipernociceptiva (4 nmol), e pró-edematogenica (0,04 nmol). A morfina inibiu incapacitação e edema (5, 45 nmol). A co-administração de morfina (0,5 nmol) com cetirizina (12,6 nmol) e immepip (16 pmol) causou hiponocicepção. Cetirizina e thioperamide aumentou o conteúdo sinovial leucócitos. A histamina pode atuar na medula espinhal por receptores H1 e H3 causando hiponocicepção, mas sua ação também pode aumentar a inflamação periférica. / Spinal cord is known to be a center that controls ortodromic (nociception) as well as antidromic traffic (vasodilation) in the nociceptive pathway. Histamine receptors are known to participate in the spinal cord nociceptive transmission, thus it is conceivable that histamine may also play a role in the spinal cord control on the peripheral vasodilation. The aim of this study was evaluate the role of spinal cord histamine in the articular incapacitation, edema and cell migration induced by carrageenan injection into rat knee-joints. The animals received intrathecal injection with drugs 20 min before knee-joint carrageenan injection (50 ìg). Articular incapacitation was measured by counting the paw elevation time, during 1-min periods of forced walk hourly. Edema was accessed by the metering of the articular diameter. After 6 h, synovial fluid was collected for the evaluation of leukocyte infiltration. Histamine decreased the incapacitation (20 nmol), while increased the edema (0.002 nmol). Similarly, 2-PEA decreased the incapacitation (1 nmol), and increased the edema (0.001 nmol). Cetirizine increased the incapacitation (0.126 pmol), and decreased edema (12,6 nmol). Dimaprit decreased incapacitation, but increased edema (18 pmol). Similarly, Ranitidine increased incapacitation and decreased edema (38 pmol). Immepip decreased the incapacitation (8 nmol), but increased the edema (32 nmol). Thioperamide increased the incapacitation (4 nmol), and the edema (0.04 nmol). Morphine inhibited incapacitation and edema (5; 45 nmol). The coadministration of morphine (0.5 nmol) with cetirizine (12,6 nmol) and immepip (16 pmol) decreased incapacitation. Cetirizine and thioperamide increased the synovial leukocyte content. Histamine may act in the spinal cord by H1 and H3 receptors to cause hyponociception, but this action may also increase peripheral inflammation.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-26T12:04:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 302042.pdf: 693987 bytes, checksum: 823b44b5d3f07e3feb6ab9f9b1c8df9d (MD5) / Glutamato, o principal neurotransmissor central excitatório, induz excitotoxicidade neuronal pela ativação de receptores NMDA e AMPA, promovendo o influxo de cálcio nos neurônios. Estudos recentes do nosso grupo demonstram que as frações e sub-frações isoladas da Croton celtidifolius possuem propriedades anti-inflamatórias, antioxidantes e antinociceptivas. Assim, utilizando um modelo in vitro de excitotoxicidade induzida por glutamato (Glu) e in vivo de neurotoxicidade decorrente da lesão da medula espinhal de ratos Wistar adultos, avaliou-se o possível efeito neuroprotetor da fração rica (FRP) em proantocianidinas isolada da Croton celtidifolius. Glu induziu morte de células do gânglio da raiz dorsal (GRD), de forma dependente da concentração e do tempo de exposição. O pós-tratamento com a FRP (1 - 100 µg/ml) inibiu em até 37% a morte celular induzida por Glu (1 mM). Já o co-tratamento, foi capaz de reduzir a morte celular em 27%. A exposição das células ao Glu (0,01, 0,1 e 1 mM) aumentou os níveis da enzima lactato desidrogenase de 6,5 % (células controle) para 37, 49 e 63 %, respectivamente, indicativo de alteração na permeabilidade da membrana celular. Esta alteração foi atenuada pelo tratamento das células com a FRP (100 µg/mL). Ademais, o insulto glutamatérgico induziu a geração de espécies reativas de oxigênio, a qual foi inibida pelo tratamento das células do GRD com FRP (100 µg/ml). Além disso, o efeito neuroprotetor desencadeado pela FRP parece ser mediado em parte pela inibição de receptores glutamatérgicos do tipo NMDA, mas não os metabotrópicos uma vez que a perda da viabilidade celular decorrentes da exposição das células ao agonista NMDA, mas não ao agonista metabotrópico, foi revertida pela FRP. Nos estudos in vivo, animais submetidos a lesão medular e tratados com a FRP na dose de 10 mg/kg por via intraperitoneal, durante 5 dias consecutivos, apresentaram uma melhora significante na performance locomotora e na força de preensão, quando comparado aos animais lesados tratados com veículo. Em conjunto, estes resultados fornecem a primeira evidência de que a FRP atenua a morte celular por necrose e por apoptose, bem como a produção de EROs induzida por Glu, inibe a morte celular induzida por peróxido de hidrogênio e pelo agonista NMDA. A FRP também foi capaz de promover uma melhora na atividade locomotora e na força de preensão de animais submetidos à lesão traumática da medula espinhal, reforçando a hipótese de que polifenóis podem ser ferramentas terapêuticas promissoras como agentes neuroprotetores. / Glutamate, the major central excitatory neurotransmitter, induces neuronal excitotoxicity by activation of NMDA and AMPA receptors and stimulating the influx of calcium into neurons. Recently, our group showed that fractions and subfractions isolated from Croton celtidifolius have antiinflammatory, antioxidant and antinociceptive properties. Thus, using an in vitro model of excitotoxicity induced by glutamate (Glu) and in vivo neurotoxicity caused by spinal cord injury (SCI) in adult Wistar Rats, we evaluated the possible neuroprotective effect of a proanthocyanidin-rich fraction (PRF) isolated from the bark of Croton celtidifolius. Glu induced cell death of dorsal root ganglion (DRG) in a manner concentration-dependent and the exposure time. The post-treatment with FRP (from 1 to 100 ìg / mL) inhibited the cell death induced by Glu (1 mM) in 37%. Since co-treatment, was able to reduce cell death in 27%. The exposure of cells to glu (0.001, 0.1 and 1 mM) increased the levels of the enzyme lactate deydrogenase from 6.5% (control cells) to 37, 49 and 63% respectively, indicating changes in cell membrane permeability. This change was attenuated by treatment of cells with the PRF (100 ìg / mL). Moreover, the glutamatergic insult induced generation of reactive oxygen species, which was inhibited by treatment of cells with FRP (100 ìg / mL). Moreover, the neuroprotective effect triggered by FRP seems to be mediated in part by inhibition of NMDA-type glutamate receptors, but not metabotropic receptors, since the loss of cell viability after exposure of cells to NMDA agonist, but not a metabotropic agonist was reversed by FRP. The in vivo studies, animals subjected to SCI and treated with PRF at a dose of 10 mg / kg by i.p. route for 5 consecutive days showed a significant improvement in locomotor performance and grip force when compared to injured animals treated with vehicle. Taken together, these results provide the first evidence that PRF attenuated the cell death by apoptosis and the production of ROS induced by Glu, also inhibits cell death induced by hydrogen peroxide and the NMDA agonist receptors. The FRP was able to promote an improvement in locomotor activity and grip strength of animals subjected to traumatic spinal cord injury (SCI), reinforcing the hypothesis that polyphenols are promising therapeutic tools such as neuroprotective agents.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química / Made available in DSpace on 2013-07-16T04:16:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 305252.pdf: 1400650 bytes, checksum: 83e4a007927147a9402a26f64b85b606 (MD5) / A utilização de materiais hidrogéis poliméricos visando ancorar células e promover a regeneração neuronal é uma abordagem atual e promissora. Neste sentido, o estudo da viabilidade e interação de células neuronais nesses biomateriais é de grande importância para engenharia de tecido neuronal. A interação das células com o material arcabouço pode definir o sucesso da formação do novo tecido. Neste trabalho foram avaliadas a viabilidade e a interação de células de gânglios da raiz dorsal de ratos Wistar em arcabouço hidrogel baseado em celulose bacteriana. Utilizou-se hidrogel de celulose bacteriana modificado com fibronectina e poli-L-lisina/laminina como arcabouço para o cultivo celular com o objetivo de avaliar a viabilidade e interação celular in vitro. Os resultados evidenciaram que houve interação entre as células e o arcabouço e que as mesmas se mantiveram viáveis e não apresentaram citotoxicidade para células neuronais, sendo que o hidrogel de superfície modificada composto de CB e poli-L-lisina/laminina manteve o maior número de células viáveis. Também, a adsorção de fibronectina e poli-L-lisina/lamina aumentou a adesão e a interação celular ao biomaterial e o tratamento enzimático hidrogel composto de CB-PL (CB-PL injetável) não apresentou citotoxicidade. No entanto ocorreu uma diminuição na viabilidade celular quando comparado ao biomaterial CB-PL sem tratamento enzimático. Portanto, o hidrogel de celulose bacteriana modificada com poli-L-lisina/laminina se apresenta como um biomaterial promissor para promover a regeneração de tecidos neurais uma vez que os mesmos potencializam a adesão celular e aumentam a sobrevida neuronal. / The use of polymeric hydrogel materials to anchor cells and to promote the neuronal regeneration is a promising current approach. In this way, the study of viability and interaction neuronal cells in these biomaterials is of great importance for neuronal tissue engineering. The cell interactions with the material scaffold can define the success of the new tissue formation. In this work was assessed the viability and interaction of ganglion cells of Wistar rat dorsal roots, hydrogel scaffold based in bacterial cellulose. It was used modified bacterial cellulose with fibronectin and poli-L-lisina/lamina as scaffold for cell culture, aiming to assess the cellular viability and interaction in vitro. The results showed that there was interaction between cells and scaffold and that ones were viable and did not present cytotoxity for neuronal cells, being that the modified surface hydrogel composed of CB and poli-L-lisina/lamina kept the highest number of viable cells. The absorption of fibronectin and poli-L-lisina/lamina also increased the cell adhesion and interaction to the biomaterial and the hydrogel enzymatic treatment compound of CD-PL (injected CB-PL) did not present cytotoxicity, however, occurred a decrease in the cell viability when compared to CB-PL biomaterial without enzymatic treatment. Therefore, the hydrogel of modified bacterial cellulose with poli-lisina/lamina present as a prosperous biomaterial to promote neuronal tissue regeneration, since they potentiate cell adhesion and increase the neuronal survival.

Devido a dificuldades técnicas de modelagem experimental e de aferição de dor, até os anos 70, acreditava-se que recém-nascidos e lactentes jovens não teriam maturidade neurológica para conduzir, de forma adequada, os estímulos dolorosos; portanto, não sentiam dor. Recentes estudos, focados na área de neurobiologia do desenvolvimento, têm demonstrado como as informações sensoriais são processadas no início da vida e que dor intensa ou persistente no prematuro ou neonato pode provocar alterações de comportamento e percepção da dor que podem persistir no decorrer da vida. Considerando a relevância do tema, este trabalho teve como objetivo avaliar possíveis alterações comportamentais e bioquímicas, a partir de uma intervenção farmacológica com anestésicos gerais, acompanhados ou não de procedimento cirúrgico realizado no 14°dia de vida do animal. Foram utilizadas 40 ninhadas padronizadas com 8 ratos Wistar machos. O modelo cirúrgico utilizado foi descrito por Levine, modificado por Rice et al. (1981), porém sem a oclusão da carótida. Para as avaliações comportamentais foram utilizados os testes de campo aberto, labirinto em cruz elevado, tail-flick e formalina. O parâmetro bioquímico avaliado foi atividade das enzimas E-NTPDases e ecto-5’nucleotidase. Este trabalho foi dividido em dois desenhos experimentais. No primeiro, os animais foram divididos em 3 grupos: controle (O2), anestesia (isoflurano), anestesia/cirurgia (isoflurano/cirurgia); no segundo, os animais foram divididos em 3 grupos: controle (salina), anestesia (cetamina S+/fentanil), anestesia/cirurgia (cetamina S+/fentanil/cirurgia). Os animais que receberam isoflurano apresentaram aumento na atividade locomotora em P14 e P30 e maior analgesia no tail-flick em P14 e P60, associados a uma diminuição da hidrólise de ATP, ADP e AMP em P14. É importante salientar que o procedimento cirúrgico reverteu a diminuição na hidrólise do ATP e do ADP. Os animais que receberam cetamina S+/fentanil (CF) apresentaram diminuição do nível de ansiedade (P30 e P60) e maior analgesia no tail-flick (P30), associadas a aumento da hidrólise de ATP e AMP, o procedimento cirúrgico reverteu o efeito observado no ATP. Esses resultados indicam que manipulações farmacológicas com anestésicos gerais, como as utilizadas nesta dissertação, em um período de maturação do sistema nervoso central, promovem alterações que podem ser percebidas ao longo da vida do animal. Os anestésicos são capazes de interagir com uma variedade de sistemas neuronais, incluindo sistemas GABAérgico, glicinérgico, colinérgico e glutamatérgico, e alterações em número e/ou afinidade de receptores destes sistemas podem estar contribuindo com os resultados obtidos nesta dissertação. No entanto, as técnicas utilizadas neste estudo não nos permitem determinar os mecanismos de neurotransmissão suscetíveis à exposição a anestésicos gerais, associado ou não ao procedimento cirúrgico, em animais com 14 dias, e envolvidos nas alterações observadas nas respostas comportamentais e bioquímicas em curto, médio e longo prazos. Novos estudos são necessários para melhor elucidar os resultados obtidos. / Due to technical difficulties of modeling and experimental measurement of pain, until the 70th decade, it was thought that newborns and young infants would not have neurological maturity to drive properly painful stimuli, so they felt no pain. Recent studies focused on the area of developmental neurobiology have shown how sensory information is processed at the beginning of life and severe or persistent pain in premature or newborn may cause changes in behavior and perception of pain that can persist throughout life. Considering the relevance of the theme of this work, it was evaluated possible behavioral and biochemical changes from a pharmacological intervention with general anesthetics, associated or not with surgical procedure performed on the 14th day of life of the animal. Fourty litters were used with standard 8 male Wistar rats. The surgical model used was described by Levine, modified by Rice et al. (1981), but without carotid occlusion. For behavioral assessments the open-field, elevated plus-maze, tail-flick and formalin were performed. The biochemical parameters evaluated was the enzymatic activity of E-NTPDases and ecto-5'nucleotidase. This work was divided into two experimental designs: the first, the animals were divided into 3 groups: control (O2), anesthesia (isoflurane), anesthesia / surgery (isoflurane / surgery); in the second, the animals were divided into 3 groups: control (saline), anesthesia (ketamine S+/fentanyl), anesthesia / surgery (ketamine S+/fentanyl / surgery). The animals that received isoflurane showed an increase in locomotor activity in P14 and P30 and greater analgesia in tail-flick in P14 and P60, associated with decreased hydrolysis of ATP, ADP and AMP in P14. It is important to note that the surgery reversed the decrease in the hydrolysis of ATP and ADP. The animals that received ketamine S+/fentanyl had decreased levels of anxiety (P30 and P60) and greater analgesia in tail-flick (P30) associated with increased ATP hydrolysis and AMP, the surgery reversed the effect observed in the ATP. These results indicate that pharmacological manipulation with general anesthetics, such as those used in this work, in a period of maturation of the central nervous system, can promote changes which could be seen throughout the animal's life. Anesthetics are able to interact with a variety of neuronal systems, including systems GABAergic, glycinergic, glutamatergic and cholinergic, and changes in the level of receptors of these systems in numbers and / or affinity may be contributing to the results obtained in this dissertation. However, the techniques used in this study did not allow us to determine the mechanisms of neurotransmission susceptible to exposure to general anesthetics in association or not surgery in animals with 14 days and involved in the observed changes in behavioral and biochemical alterations in short, medium and long term. Further studies are needed to further elucidate the results.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-14Bitstream added on 2014-06-13T19:53:36Z : No. of bitstreams: 1 paiva_mb_me_araca.pdf: 916442 bytes, checksum: 4f58624ad7c03912e0dcd44c4e383d66 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo dessa pesquisa foi analisar a resposta imune celular de cães negativos (GI), vacinados (GII) e positivos (GIII) para a LVC por meio da imunocitoquímica para os anticorpos anti-CD4, anti-CD8 e FOXP3 na capa leucocitária e medula óssea. Na capa leucocitária, quando comparados os grupos entre si, não houve diferença estatística para as células T CD4. Os grupos I e III apresentaram maior imunomarcação para anti-CD8. Embora não tenha sido observada diferença estatística (p>0,05), a imunomarcação para FOXP3 mostrou os menores valores percentuais nos três grupos estudados. Os grupos I e II apresentaram maior imunomarcação para anti-CD4, seguida do anti-CD8, quando comparados os anticorpos em cada grupo separadamente. Nos animais do grupo III, foi observada maior expressão de células imunorreativas ao anti-CD8 seguida do anti-CD4, e valores reduzidos para FOXP3. Nas células da medula óssea não foi verificada diferença estatística na expressão dos anticorpos anti-CD4, anti-CD8 e FOXP3 quando comparados os grupos entre si. Na análise comparativa entre os anticorpos testados, entretanto, foi observada maior marcação para o anticorpo anti-CD4 em GI, ausência de diferença estatística em GII e maior percentual de células positivas para anti-CD8 em GIII. Os valores de FOXP3 também se mantiveram reduzidos em todos os grupos. A técnica de cito inclusão foi padronizada com sucesso, obtendo 68% de viabilidade para amostras da capa leucocitária e medula óssea. Os resultados obtidos neste estudo indicam que a presença de células T CD4+ e CD8+ em animais vacinados, em associação à expressão reduzida do marcador de células T regulatórias FOXP3, sugerem que a vacina Leishmune® exerce um efeito estimulatório na resposta imune celular de cães, promovendo um incremento da resposta protetora Th1 / The aim of this research was to analyze the cellular immune response of negative (GI), vaccinated (GII) and positive (GIII) dogs for VCL by immunocytochemistry for CD4, CD8 and FOXP3 antibodies on the buffy coat and bone marrow. In the buffy coat, when compared the three groups together, there was no statistical difference in CD4+ T cells. Groups I and III showed higher immunostainning for anti-CD8. Although no statistical difference was observed, immunostainning for FOXP3 showed the lowest percentages in all three groups. Groups I and II showed higher immunoreactivity to anti-CD4 followed by anti-CD8 antibodies when compared each group separately. In group III, we observed increased expression of immunoreactive cells to anti- CD8 followed by anti-CD4, and reduced values for FOXP3. In bone marrow cells there was no statistical difference in the expression of anti-CD4, anti-CD8 and FOXP3 antibodies in the three groups. The comparative analysis between the antibodies tested, however, revealed greater cellularity expressing anti-CD4 in GII, and higher percentage of anti-CD8 positive cells in GIII. The group II showed no statistical difference between the antibodies analyzed. FOXP3 values also remained low in all groups. The results of this study indicate that the presence of CD4 + and CD8 + T lymphocytes in the vaccinated animals, combined with reduced expression of the marker of regulatory T cells FOXP3 suggest that Leishmune ® vaccine exerts a stimulatory effect on immune response of dogs, promoting an increase in the protective Th1 response

Orientadora : Profa. Dra. Maria Aparecida Barbato Frazão Vital / Co-orientadora : Profª Drª Valdo José Dias da Silva / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba,17/09/2014 / Inclui referências / Área de concentração: Farmacologia / Resumo: A Doença de Parkinson é uma doença neurodegenerativa caracterizada pela perda de neurônios dopaminérgicos na SNpc. O presente trabalho visou investigar em duas linhas distintas o papel do microambiente celular na neurodegeneração. Na primeira linha de investigação, os animais foram avaliados quanto ao efeito da pinealectomia sobre a neurodegeneração e estresse oxidativo induzido pela administração de MPTP e 6-OHDA. A administração dessas neurotoxinas resultou em comprometimento motor em ambos os grupos Sham e Px 24 h após a lesão no teste do campo aberto. Contudo, 7 e 14 dias após a cirurgia, os animais lesados pertencentes ao grupo Sham apresentavam recuperação motora, ao contrário dos grupos Px e lesados. No teste de natação forçada os animais lesados apresentavam menor tempo de natação em relação aos grupos controles, e ainda, os grupos Sham- 6-OHDA e Px-6-OHDA apresentaram maior tempo de imobilidade comparado aos controles. Corroborando com essas alterações, significativa degeneração dopaminérgica foi evidenciada nos animais lesados, e ainda, aumento na quantidade de células contendo ROS nesses grupos em relação aos grupos controles. Já no segundo estudo, o modelo do MPTP foi empregado para avaliar o efeito do transplante de BMMC ou BM-MSC em diferentes tempos, imediatamente e 24 h após a infusão da neurotoxina. A infusão de MPTP resultou em quebra da BHE e prejuízo motor 24 h após a infusão de MPTP, e o tratamento com BMMC imediatamente após a lesão aumentou significativamente a perda de células TH-ir nesses animais, ao contrário do tratamento com BM-MSCs. Por outro lado, o tratamento com BMMC 24 h após a infusão de MPTP resultou em similar perda de neurônios TH-ir comparado ao grupo MPTP-salina. No teste de natação forçada, o grupo MPTP-BMMC apresentou aumento no tempo de imobilidade comparado aos grupos Sham e MPTP, e ainda, aumento no número de células CD45+ e micróglia ativada nas secções estudadas. O presente estudo sugere que o transplante de BM-MSC em animais lesados com MPTP module positivamente o microambiente neuronal favorecendo a sobrevivência neuronal, enquanto que o transplante com BMMCs e a redução dos níveis fisiológicos de melatonina mostraram-se desfavorável ao microambiente neuronal. Palavras-chave: MPTP, 6-OHDA, BMMC, BM-MSC, pinealectomia e DP. / Abstract: Parkinson's disease (PD) is a neurodegenerative disease characterized by loss of dopaminergic neurons in the SNpc. This study aimed to investigate the role of cellular microenvironment on the neurodegenration in two distinct investigation lines. In the first line, the animals were evaluated for the effect of pinealectomy (Px) on neurodegeneration and oxidative stress induced by MPTP or 6-OHDA. The administration of these neurotoxins results in motor impairment in both sham and Px groups 24 h after injury in the open field test. However, 7 and 14th days after injury, the injured animals belonging to Sham group showed recovery of motor abnormalities, unlike injured animals of the Px-groups. In the forced swim test, the injured animals exhibited shorter swimming compared to control groups, and futher, Sham-6-OHDA and Px-6-OHDA groups showed a significant increase in immobility time compared to control groups. Supporting these alterations, significant dopaminergic loss in animals injured was observed in comparison to control groups, and futher, increased quantity of cellular ROS in these groups. In the second study, the MPTP model was used to evaluate the effect of BMMC and BM-MSCs at different times, immediately and 24 hours, after neurotoxins infusion. The MPTP infusion resulted in breakdown of bloodbrain barrier and motor impairment 24h after MPTP infusion, and the BMMC treatment immediately after lesion induced a significant increase loss of TH-ir neurons in these animals when compared to MPTP-saline group, in opposite to the BM-MSCs treatment. In the other hand, MPTP-lesioned rats treated with BMMCs 24 h after to neurotoxin infusion showed similar loss of dopaminergic neurons to MPTP-saline. In the forced swimming test, MPTP-BMMC treated group presented an increase in the immobility time compared to sham and MPTP-saline group, and futher increase in the number of CD45-labeled cells and activated microglial cells in the sections studied. This study suggests that the BM-MSCs transplantation in MPTP-lesioned rats positively modulate the microenvironment favoring neuronal neuronal survival, whereas transplantation BMMCs and the reduction of physiological levels of melatonin have proved unfavorable neuronal microenvironment. Keywords: MPTP, 6-OHDA, BMMC, BM-MSC, pinealectomy e PD.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-05Bitstream added on 2014-06-13T19:23:19Z : No. of bitstreams: 1 000749254.pdf: 1885169 bytes, checksum: 24b6601284053d8b99b0722497bb3702 (MD5) / A avaliação da medula óssea e das células do sangue em cães com leishmaniose visceral (LV) pode proporcionar valiosas informações, tanto quantitativas quanto qualitativas, relativas à hematopoiese. Os objetivos deste estudo foram avaliar a medula óssea de cães com LV, por meio de exame citológico, histopatológico e imuno-histoquímico (IHC), avaliando-se a carga parasitária, a quantidade de linfócitos e macrófagos, além de células expressando MHC de classe II, IFN-, IL-10, TNF-α e TGF-β, bem como sua repercussão nas células do sangue. Para tanto, foram utilizados 60 cães, sendo 54 infectados e seis animais não infectados. Os cães infectados apresentaram anemia normocítica normocrômica, porém sem alterações na linhagem eritroide da medula óssea, além de displasia granulocítica, megacariocítica e granulomas na medula óssea. A linfocitose observada na medula óssea se refletiu no sangue. No exame citológico, observou-se grande infiltração de macrófagos, linfócitos e plasmócitos nos animais infectados. Quanto à IHC, os cães infectados apresentaram grande quantidade de células imunomarcadas para TNF-α, IL-10, IFN-,TGF-β e macrófagos / The evaluation of the bone marrow and blood cells in dogs with visceral leishmaniasis (VL) can provide valuable information, both quantitative and qualitative, on the hematopoiesis. The objectives of this study were to evaluate the bone marrow of dogs with VL through cytological, histopathological and immunohistochemical (IHC) examination, evaluating the parasitic load, the amount of lymphocytes and macrophages and by cells expressing MHC class II, IFN-, IL-10, TNF-α and TGF-β, as well as its effect on blood cells. To this end, 60 dogs, 54 infected and six uninfected animals were used. Infected dogs showed normochromic normocytic anemia, but without any changes in the erythroid lineage bone marrow, and dysplasia granulocytic, megakaryocytic and granulomas in the bone marrow. The lymphocytosis in the bone marrow was reflected in the blood. On cytological examination, there was extensive infiltration of macrophages, lymphocytes and plasma cells in infected animals. As for IHC, infected dogs showed large amount of immunostained cells to TGF-β, TNF-α, IL-10, IFN- and macrophages

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-30Bitstream added on 2014-06-13T19:23:33Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_fes_me_botfm.pdf: 467840 bytes, checksum: d3c28808bd912c063727bbc7c3d6f639 (MD5) / Hospital Das Clinicas da Faculdade de Medicina de Botucatu / Pro-Reitoria de Extensao / Secretaria de Saúde do Estado de São Paulo / altas probabilidades de cura, graças aos avanços da ciência e da tecnologia. Porém, quando este diagnóstico é dado a crianças ou adolescentes ele ainda gera desconfortos, devido ao impacto que esta doença pode causar no desenvolvimento destes indivíduos. Tanto a fase de diagnóstico, quanto as etapas do tratamento incluem a realização de procedimentos invasivos, bem como a utilização de drogas agressivas. O objetivo deste estudo foi compreender a experiência de crianças e adolescentes submetidos a procedimentos de punção de medula óssea e punção lombar realizadas em uma Unidade de Centro Cirúrgico de um Hospital Oncológico, sedadas antes da realização dos mesmos. Foi realizado um estudo qualitativo, utilizando-se o Discurso do Sujeito Coletivo (DSC) para a organização dos dados, e para análise dos resultados foi elaborado um Quadro Teórico. Foram entrevistados 15 sujeitos nos períodos pré e pós-procedimentos, na faixa etária de 7 a 14 anos de idade, procedentes de diversos Estados do Brasil. A maioria deles é do sexo masculino, com diagnóstico de Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA). De acordo com os resultados foram construídos 18 DSC que revelaram, além de aspectos positivos quanto à importância da sedação antes da execução dos procedimentos, noções sobre o tratamento e a doença, assim como, satisfação pelo atendimento recebido, sentimentos como medo, ansiedade, devido ao tempo de espera na etapa do préprocedimento e insegurança quanto à cura. Foram reveladas também dificuldades quanto à realização do tratamento, como a dependência de transporte público, da rotina hospitalar, a separação da família, a distância da escola e dos amigos. Oferecer uma assistência tecnicamente diferenciada ainda é insuficiente para minimizar as adversidades enfrentadas por estes indivíduos e suas famílias... / Child cancer has presently been more often studied and better understood, and it is very likely to be cured as a result of scientific and technological advancement. However, when this diagnosis is given to children or adolescents, it still causes discomfort due to the impact that such disease can have on those individuals’ development. Both the diagnostic phase and the treatment period include the performance of invasive procedures as well as the use of aggressive drugs. This study aimed at understanding the experience of children and adolescents submitted to bone marrow puncture and lumbar puncture procedures, who had been sedated prior to such interventions, at the surgery unit of an oncology hospital. A qualitative study was carried out by using the Collective Subject Discourse (CSD) for data organization. In order to analyze the results, a Theoretical Chart was designed. Fifteen subjects from various Brazilian states at ages 7 to 14 were interviewed in the pre- and post-procedure periods. Most of them were males with an acute lymphoblastic leukemia diagnosis (ALL). According to the results, 18 CSD were constructed, which revealed, in addition to positive aspects concerning the importance of sedation prior to performing the procedure, notions related to the disease and its treatment, satisfaction concerning the care given, feelings such as anxiety due to the waiting time in the pre-procedure phase and insecurity in relation to being cured. Difficulties in treatment conduction, such as dependence on public transportation, hospital routine, separation from one’s family, distance from school and friends, were also revealed. Providing technically differentiated care is still insufficient to minimize the adversities faced by these individuals and their families. Re-structuring physical space and the service’s organization in order to further contribute to this clientele’s well-being is required.

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-01-14. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:25Z : No. of bitstreams: 1 000830386.pdf: 724318 bytes, checksum: a64bf88549f15ca40e80c9949d4d3fcc (MD5) / Este estudo teve como objetivo a quantificação sérica de hormônios e citocinas indutores (eritropoietina e IL-3) e supressores (paratormônio, IL-1β, TNFα e IFNγ) da eritropoiese, correlacionando-os com as variáveis eritrocitárias periféricas e centrais. Amostras de sangue periférico, urina e medula óssea foram obtidas de 10 cães com doença renal crônica estádio 2 (DRC2), 10 cães com DRC estádio 3 (DRC3), 10 cães com DRC estádio 4 (DRC4) e 10 cães adultos saudáveis (grupo controle) com vistas à realização de hemograma, análise bioquímica sérica e urinária, urinálise, ensaios imunoenzimáticos e análise citológica da medula óssea. As concentrações dos fatores indutores e supressores da eritropoiese, assim como os resultados do mielograma dos cães do DRC2 assemelharam-se aos do grupo controle, e apesar de não terem manifestado anemia, a presença de reticulocitose alerta para o fato de fatores externos a medula óssea estarem precocemente causando perda ou destruição dos eritrócitos. A anemia em cães com DRC está relacionada ao aumento nas concentrações de paratormônio e TNFα, e a exacerbação dos referidos fatores supressores, bem como à hipoplasia da série eritróide, representada principalmente pela redução da população de eritroblastos policromatofílicos e ortocromáticos, constituem, parcialmente, a base da gênese e do agravamento do estado anêmico nas fases mais avançadas da DRC em cães / The aim of this study was to evaluate bone marrow precursor cells, circulating concentrations of cytokines and hormones that can stimulate (erythropoietin and IL-3) and suppress (parathyroid hormone, IL-1β, TNF and IFN) erythropoiesis, and make their correlation with the peripheral and central erythrocyte variables. Peripheral blood samples, urine and bone marrow were obtained from 10 dogs with chronic kidney disease stage 2 (CKD2), 10 dogs with CKD stage 3 (CKD3), 10 dogs with CKD stage 4 (CKD4), and 10 healthy adult dogs (control group) for complete blood count (CBC), serum and urinary biochemical analysis, urinalysis, immunoassays and cytological analysis of bone marrow. The concentrations of erythropoiesis stimulator and suppressor factors, and cytological bone marrow results from CKD2 dogs were similar to those of the control group. This group also exhibited reticulocytosis even though not have expressed anemia, which means that extrinsic factors are early cause of blood loss or destruction of red blood cells. The anemia in dogs with CKD is related to increased parathyroid hormone and TNFα serum concentrations. The increases of such suppressor factors in association with erythroid hypoplasia are considered as part of the genesis and the aggravation of the anemic state in the end stages of CKD in dogs