Base teórica: A introdução de agentes biológicos, especialmente os bloqueadores do fator de necrose tumoral (anti-TNF), para o tratamento de doenças reumáticas aumentou o risco de desenvolver tuberculose (TB). O rastreio para infecção tuberculosa latente (ILTB) é fortemente recomendado antes de iniciar a terapia com agentes anti-TNF. Os objetivos deste estudo foram identificar a prevalência de ILTB e TB entre pacientes com doenças reumáticas em uso dos medicamentos anti-TNF. Métodos: Estudo transversal. Foram revisados os registros médicos eletrónicos de todos os doentes adultos (≥ 18 anos) em uso da terapia anti-TNF. Todos os pacientes foram submetidos ao teste tuberculínico (TT) antes de iniciar o tratamento com os medicamentos anti-TNF. Resultados: No total, 176 pacientes foram incluídos no estudo. A idade média de todos os pacientes foi de 51,9 ± 12,4 anos, 34,7% eram do sexo masculino e 90,9% eram brancos. As doenças subjacentes mais comuns foram: Artite Reumatóide (AR) em 89 pacientes (50,6%), Espondilite Anquilosante (EA) em 49 (27,8%) e Artrite Psoriática (AP) em 31 (17,6%). A prevalência de TT positivo foi de 29,5%. O contato domiciliar com TB foi significativamente associado com TT positivo (p = 0,020). Os pacientes com AR apresentaram reações TT menores do que os pacientes com EA (p = 0,022). Houve seis casos de TB (3,4%) diagnosticados durante a terapia anti-TNF. Conclusões: Demonstrou-se alta prevalência de TT positivo (29,5%) em pacientes com doenças reumáticas em uma região com alta prevalência de TB. Nossos dados corroboram a recomendação do Colégio Americano de Reumatologia (ACR) de que os pacientes que vivem em configurações de alta incidência de TB devem ser testados anualmente para ILTB. / Background: The introduction of biological agents, especially the blockers of tumor necrosis factor (anti-TNF), for the treatment of rheumatic diseases increased the risk of developing tuberculosis (TB). Screening for latent TB infection (LTBI|) is strongly recommended before starting therapy with anti-TNF agents. The objectives of this study were to identify the prevalence of LTBI and TB among patients with rheumatic diseases on anti-TNF drugs. Methods: Cross-sectional study. The electronic medical records of all adult patients (≥ 18 years old) undergoing anti-TNF treatment were reviewed. Every patient underwent TST test before starting anti-TNF treatment. Results: In total, 176 patients were included in the study. The mean age of all patients was 51.9 ± 12.4 years, 34.7% were males, and 90.9% were white. The most common underlying diseases were: RA in 89 patients (50.6%), AS in 49 (27.8%), and PA in 31 (17.6%). The prevalence of positive TST was 29.5%. Household contact with TB was significantly associated with a positive TST (p=0.020). RA patients had lower TST reactions than AS patients (p=0.022). There were six cases of TB (3.4%) diagnosed during anti-TNF therapy. Conclusions: We demonstrated a high prevalence of positive TST (29.5%) among patients with rheumatic diseases in a region with high TB prevalence. Our data corroborates the ACR’s recommendation that patients who live in high TB incidence settings should be tested annually for LTBI.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Estreptococos do grupo B (EGB) é a principal causa de sepse e meningite neonatal e tem sido recentemente reconhecido como patógeno responsável por infecções invasivas em adultos imunocomprometidos (idosos ou portadores de doenças crônicas). Os EGB produzem inúmeras enzimas extracelulares, várias das quais interagem com o sistema imune do hospedeiro e são importantes durante a interação EGB-hospedeiro, bem como para o desenvolvimento da doença. Estudos anteriores mostraram que metaloproteases estão envolvidas em várias vias metabólicas em diferentes tipos celulares. Por esta razão, nós decidimos investigar o possível envolvimento de metaloproteases de EGB durante a interação celular e apoptose/necrose induzida pelo micro-organismo em células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC) e da linhagem de epitélio respiratório (A549). Tratamento de EGB com inibidores de metaloproteases (EDTA, EGTA e FEN) não induziu alterações no crescimento bacteriano, mas promoveu alterações na expressão de proteínas de superfície, capacidade adesiva e perfil de sobrevivência intracelular do patógeno. O EGB e o sobrenadante do crescimento bacteriano (meio condicionado; MC) promoveram a morte das células HUVEC e A549. Contudo, o tratamento com inibidores de metaloproteases restauraram a viabilidade celular induzida pelos EGB e o MC, sugerindo que metaloproteases bacteriana estão envolvidas no rompimento da barreira celular, promovendo a disseminação bacteriana. Este trabalho descreve pela primeira vez apoptose e necrose induzidas pelo EGB e MC em HUVEC e células A549 após 24h de incubação, respectivamente. Nós também observamos redução da pró-caspase-3 após infecção das HUVEC com EGB e MC, sugerindo ativação da caspase-3. Além disso, o aumento da expressão da proteína pró-apoptótica Bax e diminuição dos níveis da proteína anti-apoptótica Bcl-2 em HUVEC, demonstram o envolvimento do mecanismo apoptótico mitocondrial (via intrínseca). A melhor compreensão das bases moleculares da patogênese do EGB contribui para identificar novas moléculas bacterianas e hospedeiras que podem representar novos alvos terapêuticos ou imunoprofiláticos contra a doença causada por esse patógeno neonatal. / Group B streptococcus (GBS) is the leading cause of neonatal sepsis and meningitis and has recently been recognized as an increasingly common cause of invasive disease in immunocompromised adults (elderly or chronic diseases). GBS produces a number of extracellular enzymes, several of which interact with the host immune system and are important for the GBS- host interaction and for the development of disease. Previous studies showed that metalloproteases are involved in several metabolic pathways in different cellular types. For this reason, we decided to investigate the possible involvement of GBS metalloproteases during cell interaction and apoptosis/necrosis induced by microorganism in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and epithelial respiratory cells line (A549). Treatment of GBS with metalloproteases inhibitors (EDTA, EGTA and PHEN) did not induce alteration on bacterial growth, but promoted changes in the expression of surface proteins, adhesive capacity and profile of intracellular survival of the pathogen. The GBS and supernatant of bacterial growth medium (conditioned medium; MC) promoted the death of HUVEC and A549 cells. However, the metalloproteases inhibitors treatment restored the cellular viability induced by GBS and MC, suggesting that GBS metalloproteases are involved in the disruption of cell barrier, promoting bacterial dissemination. This study describes for the first time apoptosis and necrosis induced by GBS and MC in HUVEC and A549 cells after 24h incubation, respectively. We also observe reduction of pro-caspase-3 after infection of HUVEC with GBS and MC, suggesting activation of caspase-3. Moreover, the over-expression of pro -apoptotic protein Bax and decrease of anti-apoptotic protein Bcl-2 levels in HUVEC show the involvement of mitochondrial apoptotic mechanism (intrinsic via). Enhanced understanding of the molecular basis of GBS pathogenesis may pinpoint novel bacterial and host molecules that can represent novel therapeutic or immunoprophylactic targets against disease caused by this foremost of neonatal pathogens.

Orientador: Claudia Regina Bonini Domingos / Banca: Luiz Carlos de Mattos / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Paulo Caleb Junior de Lima Santos / Banca: Isabeth da Fonseca Estevão / Resumo: A doença falciforme (DF) é caracterizada por heterogeneidade clínica variando de pessoas com relativamente poucas complicações clínicas e expectativa de vida normal, até aqueles com complicações graves, como hipertensão pulmonar, priapismo, acidente vascular cerebral (AVC), úlceras de perna, episódios de dor, síndrome torácica aguda (STA) e osteonecrose. O tratamento com a hidroxiureia (HU) tem conquistado espaço na terapia adotada pelos clínicos e sua experiência na DF vem sendo acumulada ao longo dos últimos 25 anos. Porém, muitos estudos têm sido elaborados para investigar as variações genéticas que possam explicar o porquê de alguns pacientes tolerarem e respondem ao uso de HU, enquanto, outros ainda precisam ser tratados por terapias alternativas. Diante disso, nosso objetivo foi avaliar a resposta ao tratamento com a HU considerando a influência dos polimorfismos genéticos envolvidos na fisiopatologia da DF. Para isso, usamos a calculadora de gravidade da DF (CGDF); rastreamos os polimorfismos -509C/T (TGFB1), -308G/A (TNFA), 313 A/G (GSTP1), -786T/C (NOS3), nulos (GSTM1 e GSTT1); e avaliamos os marcadores de estresse oxidativo (catalase, glutationa peroxidase-GPx, glutationa S-transferase-GST, glutationa redutase-GR e as espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico-TBARS). O estudo envolveu 520 pacientes, acima de cinco anos de idade, provenientes do Instituto de Hematologia do Rio de Janeiro/RJ-HEMORIO. A CGDF foi validada para os pacientes brasileiros e os escores de gravidade foram relacionados com os marcadores de estresse oxidativo. Em relação aos polimorfismos, a presença do alelo nulo do gene GSTM1 aumentou a chance de ocorrência de priapismo em pacientes com a DF. A mutação do gene TGFB1 mostrou efeito protetor na ocorrência de STA e úlceras de perna, e à presença do alelo mutante para o gene NOS3 diminuiu a chance de ocorrência de retinopatia e priapismo. Para os marcadores bioquímicos,... / Abstract: Sickle cell disease (SCD) is characterized by a very heterogeneous clinical ranging from patients who have normal life expectancy with relatively few complications; others can have severe complications such as pulmonary hypertension, priapism, stroke, leg ulceration, recurrent painful episodes, acute chest syndrome (ACS) and avascular necrosis of bone (AVN). Treatment with hydroxyurea (HU) has become more adopted by medical and HU experience in DF has been accumulated over the last 25 years. However, many studies have been designed to investigate the genetic variations that may explain why some patients tolerate and respond to the use of HU, while others still need to be treated with alternative therapies. In view of this, we aimed to evaluate the response to HU treatment considering the genetic polymorphisms influence involved in the pathophysiology of SCD. For this, we used the calculator severity of DF (CGDF); detected the polymorphisms -509C/T (TGFB1), -308G/A (TNFA), 313 A/G (GSTP1), -786T/C (NOS3), null (GSTM1 and GSTT1), we assessed markers of oxidative stress (catalase, glutathione peroxidase-GPx, glutathione S-transferase-GST, glutathione reductase-GR and the thiobarbituric acid reactive species-TBARS). The study involved 520 patients older than 5 years, from the Instituto de Hematologia do Rio de Janeiro/RJ-HEMORIO. The CGDF was validated for Brazilian patients and severity scores were related to oxidative stress markers. The presence of the GSTM1 null allele increased the occurrence chance of priapism in SCD patients. TGFB1 gene mutation had a protective effect on the occurrence of STA and leg ulcers, and the presence of the mutant allele for the NOS3 gene decreased the occurrence chance of retinopathy and priapism. For biochemical markers, we found that the decreased of enzymes activity (catalase, Gpx and GR), and the increased in GST activity were associated with greater SCD severity. In addition, lipid peroxidation levels ... / Doutor

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mercury is a heavy metal toxic for any living tissue, being kidneys the first target for the inorganic form. Oxidative stress has been pointed as an important molecular mechanism for kidney injury in inorganic mercury poisoning and the interaction of the metal with endogenous thiol-containing molecules, such as δ-aminolevulinate desidratase (δ-ALA-D), seems to contribute to this process. Lycopene and astaxanthin are plentiful carotenoids in tomatoes and algaes and seafoods, respectively. They have been widely studied because of their large antioxidant properties. This work evaluated the ability of lycopene and astaxanthin to prevent HgCl2 toxicity, assessing parameters like δ-ALA-D and glutathione S-transferase (GST) activities, non-protein sulfhydrylic groups content (NPSH), production of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and activities of antioxidant enzymes like superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSH-Px), and catalase (CAT), besides creatinine and uric acid plasma levels and histopathological analyses. Adult Wistar rats received lycopene or astaxanthin, by gavage, on doses of 0, 10, 25, or 50 mg/kg, six hours prior to the administration of 0 or 5 mg/kg HgCl2, yielding 8 experimental groups. After twelve hours of exposure to HgCl2 animals were killed. HgCl2 inhibited renal δ-ALA-D activity and increased TBARS levels in kidney and creatinine levels in plasma along with renal tubular necrosis. Lycopene prevented HgCl2-induced inhibition of δ-ALA-D activity and increase of lipid peroxidation in kidney, but not the increase in plasma creatinine levels or renal tubular necrosis caused by HgCl2. Although astaxanthin have not prevented HgCl2-induced inhibition of δ-ALA-D and increase in plasma creatinine levels, this carotenoid prevented lipid peroxidation and attenuated renal tubular necrosis caused by HgCl2. GPx and CAT activities were enhanced, while SOD activity was depressed, in mercury-treated rats when compared to control and these effects were prevented by some lycopene doses and by all astaxanthin doses evaluated. Some doses of lycopene negativelly affected antioxidant enzymes activities per se and the mechanism involved in this response has not been elucidated yet. Neither HgCl2 nor carotenoids treatment changed the content of NPSH groups or GST activity in kidney or uric acid levels in plasma. Our results indicate that although lycopene and astaxanthin did not prevent HgCl2-induced creatinine increase in plasma, changes in the activity of antioxidant enzymes might be limited by the use of these car / O mercúrio é um metal pesado com toxicidade comprovada, capaz de causar danos em qualquer tecido com o qual tenha contato, sendo o rim o principal alvo para sua forma inorgânica. O estresse oxidativo tem sido apontado como um importante mecanismo molecular para a injúria renal induzida por mercúrio inorgânico e a interação desse metal com moléculas contendo grupos sulfidrílicos, tais como a enzima δ-aminolevulinato desidratase (δ-ALA-D), parece contribuir para esse processo. Licopeno e astaxantina são carotenóides abundantes em tomates e em algas e frutos do mar, respectivamente. Ambos têm sido amplamente estudados por suas propriedades antioxidantes. No presente estudo foi avaliado o efeito do licopeno e da astaxantina sobre a toxicidade do HgCl2 em rins de ratos, utilizando-se como parâmetros a atividade das enzimas δ-ALA-D e glutationa Stransferase (GST), quantidade de grupos sulfidrílicos não protéicos (NPSH), produção de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GSH-Px) e catalase (CAT), além dos níveis plasmáticos de creatinina e ácido úrico e análise histopatológica. Ratos Wistar adultos receberam, por gavage, licopeno ou astaxantina nas doses de 0, 10, 25 ou 50 mg/kg, seis horas antes de receberem uma injeção subcutânea de HgCl2 (0 ou 5 mg/kg), resultando assim, em 8 grupos experimentais. Após doze horas da exposição ao HgCl2, os animais foram sacrificados. O HgCl2 inibiu a δ-ALA-D renal, aumentou a produção de TBARS e níveis plasmáticos de creatinina, além de causar necrose tubular. O licopeno preveniu a inibição da δ-ALA-D e a peroxidação lipídica, mas não preveniu o aumento de creatinina no plasma nem a ocorrência de necrose tubular induzidos pelo HgCl2. Embora a astaxantina não tenha prevenido a inibição da δ-ALA-D e o aumento nos níveis plasmáticos de creatinina, este carotenóide preveniu a ocorrência da peroxidação lipídica e atenuou a necrose tubular causada pelo HgCl2. As atividades das enzimas GSH-Px e CAT aumentaram, enquanto a atividade da SOD diminuiu nos animais tratados com HgCl2 e esses efeitos foram prevenidos por algumas doses de licopeno e por todas as doses de astaxantina avaliadas. Algumas doses de licopeno tiveram efeito negativo sobre as enzimas antioxidantes per se e o mecanismo envolvido nessa resposta ainda não foi elucidado. O tratamento com HgCl2 ou carotenóides não alterou o conteúdo de NPSH ou a atividade da GST no tecido renal, nem os níveis plasmáticos de ácido úrico. Os resultados indicam que embora licopeno e astaxantina não tenham prevenido o aumento nos níveis plasmáticos de creatinina induzido por HgCl2, as alterações nas enzimas antioxidantes podem ser limitadas pelo uso destes carotenóides.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CimariaPROS.pdf: 1137578 bytes, checksum: 6105cd049ff9ace294e10673c0d93fea (MD5) Previous issue date: 2008-08-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The shrimp farming industry is the most profitable area of the aquaculture at Rio Grande do Norte (RN) state, which is one of the largest producers in Brazil. However the infections that affect the shrimp cause major economic losses. The infection is a result of the interaction between the shrimp, the environment and pathogen. The change of these factors may lead to a condition of stress and susceptibility to opportunistic infections. One of these infections caused by Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus (IHHNV) is widely distributed in several countries and affects a wide range of hosts. To optimize conditions for production of Litopenaeus vannamei shrimp, the more species cultivated in Brazil, it is necessary to understand the effects of environmental factors in the susceptibility of this species to infections. The aim of this study was to determine the IHHNV prevalence and to investigate the influence of environmental factors as salinity, temperature, stocking density, dissolved oxygen and rainfall in the IHHNV incidence in L. vannamei grown in farms, in the RN state. To determine the IHHNV prevalence were used 1089 samples of L. vannamei collected in seven farms. To perform the study about the influence of environmental factors, 525 samples of L. vannamei shrimp were collected in eight farms located in regions of low (0-1 ), medium (21-30 ) and high (38-57 ) salinity, using extensive (&#8804;15 shrimp/m2 ), semi-intensive (18-33 shrimp/m2) or intensive (>36 shrimp/m2) stocking density systems. The IHHNV infection was determined in pleopod and hemolymph using the polymerase chain reaction (PCR). The environmental factors were recorded during the collection of animals, using a refractometer to measure the salinity and a multi-parameter meter to measure the temperature and concentration of dissolved oxygen in the water. The IHHNV prevalence in RN was 43% (468 infected shrimp out of 1089), varying on different farms. On the seven farms studied, IHHNV prevalence ranged from 18.6% to 54.8%. The infection rates in the shrimp cultured in low, medium and high salinity were respectively 43.10% (125/290), 31.2% (15/48) and 24.6% (46/187) and was significantly higher in shrimp grown in low salinity (P<0.001). The infection rates in ponds of extensive, semi-intensive and intensive systems were respectively, 28.7%, 28.28% and 47.84%, and was significantly higher in high stocking densities (P<0.001). This study indicated a high IHHNV prevalence and a significant effect of salinity and stocking density, but not of the temperature, rainfall and dissolved oxygen on the IHHNV infection rate in the L. vannamei shrimp cultured in the northeastern Brazil / A carcinicultura ? a ?rea da aquicultura mais rent?vel do Rio Grande do Norte (RN), que ? um dos maiores produtores do Brasil. Por?m, as infec??es que acometem os camar?es v?m causando importantes perdas econ?micas. A infec??o ? resultado da intera??o entre o camar?o, o meio ambiente e o pat?geno. A altera??o desses fatores, pode levar a uma situa??o de estresse e suscetibilidade ? infec??es oportunistas. Uma dessas infec??es, causada pelo v?rus da Infec??o Hipodermal e Necrose Hematopoi?tica (IHHNV), encontra-se largamente distribu?da em v?rios pa?ses e apresenta uma grande variedade de hospedeiros. Para otimizar as condi??es de produ??o do camar?o de cultivo Litopenaeus vannamei, a esp?cie mais cultivada no Brasil, ? necess?rio compreender os efeitos dos fatores ambientais na suscetibilidade dessa esp?cie ?s infec??es. O presente estudo teve por objetivo determinar a preval?ncia do IHHNV e investigar a influ?ncia de fatores ambientais como a salinidade, temperatura, densidade de estocagem, oxig?nio dissolvido e pluviosidade na incid?ncia do IHHNV em fazendas de cultivo do L. vannamei, no estado do RN. Para determinar a preval?ncia do IHHNV foram utilizados 1089 amostras de L. vannamei coletados de sete fazendas. Para a realiza??o do estudo sobre a influ?ncia de fatores ambientais 525 amostras do camar?o L. vannamei foram coletadas em oito fazendas localizadas em regi?es de ?guas oligohalinas (0-1 ), mesohalinas (21-30 ) e hipersalinas (38-57 ), utilizando sistema de densidade de estocagem extensivo (&#8804;15 camar?es/m2), semi-intensivo (18-27 camar?es/m2) e intensivo (>30 camar?es/m2). A infec??o pelo IHHNV foi determinada em ple?podos e hemolinfa utilizando a rea??o da polimerase em cadeia (PCR). Os fatores ambientais foram registrados durante a coleta dos animais nos viveiros das fazendas, utilizando um refrat?metro para medir a salinidade e um medidor multi-par?metro para medir a temperatura e o oxig?nio dissolvido da ?gua. A preval?ncia do IHHNV no RN foi 43% (468 camar?es infectados de 1089), variando nas diferentes fazendas. Nas sete fazendas estudadas, a preval?ncia do IHHNV variou de 18,6% a 54,8%. As taxas de infec??o nas fazendas de ?guas oligohalinas, mesohalinas e hipersalinas foram respectivamente 43,10% (125/290), 31,2% (15/48) e 24,6% (46/187) e foi significativamente maior em camar?es cultivados em ?guas oligohalinas (P<0,001). As taxas de infec??o nos viveiros de sistema extensivo, semi-intensivo e intensivo foram respectivamente, 28,7%, 28,28% e 47,84% e foi significativamente maior em alta densidade de estocagem (P<0,001). Neste trabalho foi encontrado uma alta preval?ncia do IHHNV e um efeito significativo da salinidade e da densidade de estocagem, mas n?o da temperatura, pluviosidade e concentra??o do oxig?nio dissolvido sobre a taxa de infec??o pelo IHHNV no camar?o L. vannamei cultivado no Nordeste brasileiro

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Estreptococos do grupo B (EGB) é a principal causa de sepse e meningite neonatal e tem sido recentemente reconhecido como patógeno responsável por infecções invasivas em adultos imunocomprometidos (idosos ou portadores de doenças crônicas). Os EGB produzem inúmeras enzimas extracelulares, várias das quais interagem com o sistema imune do hospedeiro e são importantes durante a interação EGB-hospedeiro, bem como para o desenvolvimento da doença. Estudos anteriores mostraram que metaloproteases estão envolvidas em várias vias metabólicas em diferentes tipos celulares. Por esta razão, nós decidimos investigar o possível envolvimento de metaloproteases de EGB durante a interação celular e apoptose/necrose induzida pelo micro-organismo em células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC) e da linhagem de epitélio respiratório (A549). Tratamento de EGB com inibidores de metaloproteases (EDTA, EGTA e FEN) não induziu alterações no crescimento bacteriano, mas promoveu alterações na expressão de proteínas de superfície, capacidade adesiva e perfil de sobrevivência intracelular do patógeno. O EGB e o sobrenadante do crescimento bacteriano (meio condicionado; MC) promoveram a morte das células HUVEC e A549. Contudo, o tratamento com inibidores de metaloproteases restauraram a viabilidade celular induzida pelos EGB e o MC, sugerindo que metaloproteases bacteriana estão envolvidas no rompimento da barreira celular, promovendo a disseminação bacteriana. Este trabalho descreve pela primeira vez apoptose e necrose induzidas pelo EGB e MC em HUVEC e células A549 após 24h de incubação, respectivamente. Nós também observamos redução da pró-caspase-3 após infecção das HUVEC com EGB e MC, sugerindo ativação da caspase-3. Além disso, o aumento da expressão da proteína pró-apoptótica Bax e diminuição dos níveis da proteína anti-apoptótica Bcl-2 em HUVEC, demonstram o envolvimento do mecanismo apoptótico mitocondrial (via intrínseca). A melhor compreensão das bases moleculares da patogênese do EGB contribui para identificar novas moléculas bacterianas e hospedeiras que podem representar novos alvos terapêuticos ou imunoprofiláticos contra a doença causada por esse patógeno neonatal. / Group B streptococcus (GBS) is the leading cause of neonatal sepsis and meningitis and has recently been recognized as an increasingly common cause of invasive disease in immunocompromised adults (elderly or chronic diseases). GBS produces a number of extracellular enzymes, several of which interact with the host immune system and are important for the GBS- host interaction and for the development of disease. Previous studies showed that metalloproteases are involved in several metabolic pathways in different cellular types. For this reason, we decided to investigate the possible involvement of GBS metalloproteases during cell interaction and apoptosis/necrosis induced by microorganism in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and epithelial respiratory cells line (A549). Treatment of GBS with metalloproteases inhibitors (EDTA, EGTA and PHEN) did not induce alteration on bacterial growth, but promoted changes in the expression of surface proteins, adhesive capacity and profile of intracellular survival of the pathogen. The GBS and supernatant of bacterial growth medium (conditioned medium; MC) promoted the death of HUVEC and A549 cells. However, the metalloproteases inhibitors treatment restored the cellular viability induced by GBS and MC, suggesting that GBS metalloproteases are involved in the disruption of cell barrier, promoting bacterial dissemination. This study describes for the first time apoptosis and necrosis induced by GBS and MC in HUVEC and A549 cells after 24h incubation, respectively. We also observe reduction of pro-caspase-3 after infection of HUVEC with GBS and MC, suggesting activation of caspase-3. Moreover, the over-expression of pro -apoptotic protein Bax and decrease of anti-apoptotic protein Bcl-2 levels in HUVEC show the involvement of mitochondrial apoptotic mechanism (intrinsic via). Enhanced understanding of the molecular basis of GBS pathogenesis may pinpoint novel bacterial and host molecules that can represent novel therapeutic or immunoprophylactic targets against disease caused by this foremost of neonatal pathogens.

Base teórica: A introdução de agentes biológicos, especialmente os bloqueadores do fator de necrose tumoral (anti-TNF), para o tratamento de doenças reumáticas aumentou o risco de desenvolver tuberculose (TB). O rastreio para infecção tuberculosa latente (ILTB) é fortemente recomendado antes de iniciar a terapia com agentes anti-TNF. Os objetivos deste estudo foram identificar a prevalência de ILTB e TB entre pacientes com doenças reumáticas em uso dos medicamentos anti-TNF. Métodos: Estudo transversal. Foram revisados os registros médicos eletrónicos de todos os doentes adultos (≥ 18 anos) em uso da terapia anti-TNF. Todos os pacientes foram submetidos ao teste tuberculínico (TT) antes de iniciar o tratamento com os medicamentos anti-TNF. Resultados: No total, 176 pacientes foram incluídos no estudo. A idade média de todos os pacientes foi de 51,9 ± 12,4 anos, 34,7% eram do sexo masculino e 90,9% eram brancos. As doenças subjacentes mais comuns foram: Artite Reumatóide (AR) em 89 pacientes (50,6%), Espondilite Anquilosante (EA) em 49 (27,8%) e Artrite Psoriática (AP) em 31 (17,6%). A prevalência de TT positivo foi de 29,5%. O contato domiciliar com TB foi significativamente associado com TT positivo (p = 0,020). Os pacientes com AR apresentaram reações TT menores do que os pacientes com EA (p = 0,022). Houve seis casos de TB (3,4%) diagnosticados durante a terapia anti-TNF. Conclusões: Demonstrou-se alta prevalência de TT positivo (29,5%) em pacientes com doenças reumáticas em uma região com alta prevalência de TB. Nossos dados corroboram a recomendação do Colégio Americano de Reumatologia (ACR) de que os pacientes que vivem em configurações de alta incidência de TB devem ser testados anualmente para ILTB. / Background: The introduction of biological agents, especially the blockers of tumor necrosis factor (anti-TNF), for the treatment of rheumatic diseases increased the risk of developing tuberculosis (TB). Screening for latent TB infection (LTBI|) is strongly recommended before starting therapy with anti-TNF agents. The objectives of this study were to identify the prevalence of LTBI and TB among patients with rheumatic diseases on anti-TNF drugs. Methods: Cross-sectional study. The electronic medical records of all adult patients (≥ 18 years old) undergoing anti-TNF treatment were reviewed. Every patient underwent TST test before starting anti-TNF treatment. Results: In total, 176 patients were included in the study. The mean age of all patients was 51.9 ± 12.4 years, 34.7% were males, and 90.9% were white. The most common underlying diseases were: RA in 89 patients (50.6%), AS in 49 (27.8%), and PA in 31 (17.6%). The prevalence of positive TST was 29.5%. Household contact with TB was significantly associated with a positive TST (p=0.020). RA patients had lower TST reactions than AS patients (p=0.022). There were six cases of TB (3.4%) diagnosed during anti-TNF therapy. Conclusions: We demonstrated a high prevalence of positive TST (29.5%) among patients with rheumatic diseases in a region with high TB prevalence. Our data corroborates the ACR’s recommendation that patients who live in high TB incidence settings should be tested annually for LTBI.

INTRODUÇÃO: Os hepatócitos apresentam papel potencial em iniciar e amplificar a resposta inflamatória aguda no fígado, através da liberação de citocinas pró-inflamatórias, em papel complementar ao exercido pelas células de Kupffer e endoteliais. A invasão bacteriana da célula hepática é um estímulo para que o hepatócito produza citocinas como o TNF-alfa, capaz de induzir sua própria morte por apoptose. O TNF-alfa pode ser tanto um agente citotóxico (induzindo a morte celular), quanto um agente protetor (através da ativação de NF-kB). A morte por apoptose do hepatócito libertaria as bactérias que seriam destruídas pelo sistema imunológico hepático ativado. Salmonella Typhimurium (ST) e Listeria monocytogenes (LM) são patógenos responsáveis por importantes doenças de origem alimentar. O hepatócito é o maior local de replicação bacteriana no fígado. As conseqüências da invasão bacteriana dos hepatócitos e sua repercussão na produção de TNF-alfa e na morte celular necessitam ser melhor xxix avaliadas. MÉTODOS: Nesse estudo procuramos investigar o comportamento dos hepatócitos invadidos por ST e LM sorogrupos 4a, 4b e 1/2a, analisando os seguintes parâmetros: a) morfologia = por microscopia óptica (MO) (hematoxilina e eosina) e por microscopia eletrônica (ME); b) dosagem do TNF-alfa liberado pelos hepatócitos invadidos = o TNF-alfa liberado foi detectado por técnica ELISA no sobrenadante das culturas; c) pesquisa da morte celular por apoptose = avaliada através das técnicas TUNEL e anexina (citometria de fluxo). Para todos os parâmetros foi realizada análise comparativa estatística entre os quatro tipos de bactéria. RESULTADOS: As monocamadas de hepatócitos agredidas por Listeria monocytogenes e Salmonella Typhimurium apresentam ruptura em sua distribuição, e sinais de desorganização citoplasmática e nuclear. Para as bactérias ST, LM 4a, LM 4b e LM 1/2a obtivemos os seguintes valores em seqüência: a) taxa de liberação de TNF-alfa (pg/mL): 146,9±18,38; 94,71±13,89; 94,52±15,66 e 58,16±15,49; b) capacidade de produção de TNF-alfa (pg/mL): -67,20±71,56; -46,49±54,10; -106,3±61,0 e 58,16±15,49; c) taxa de apoptose avaliada por TUNEL em unidade de área (UA): 23,86±1,614; 15,92±0,9343; 21,14±1,421 e 23,93±1,263; d) capacidades de produção de apoptose por TUNEL em UA: -50,67±12,42; 10,81±7,186; - 17,22±10,93 e -40,27±9,712; e) taxas de apoptose por anexina em UA: 12,51±2,052; 23,10±3,481; 26,61±3,414 e 18,57±2,497; f) capacidades de produção de apoptose por anexina em UA: -63,31±15,79; -126,4±26,78; - 142,0±26,26 e -97,75±19,21. CONCLUSÕES: a) ocorre liberação de TNFxxx alfa pelos hepatócitos invadidos, sendo que a Salmonella Typhimurium foi responsável pela maior taxa de liberação de TNF-alfa, e Listeria monocytogenes 4b pela maior capacidade de produção de TNF-alfa; b) ocorre morte por apoptose dos hepatócitos invadidos por bactérias, avaliada através da técnica TUNEL, sendo que Salmonella Typhimurium e Listeria monocytogenes 1/2a foram responsáveis pelas maiores taxas e capacidades de produção de apoptose; c) ocorre morte dos hepatócitos invadidos por apoptose, avaliada através da técnica da anexina, sendo que Listeria monocytogenes 4b foi responsável pelas maiores taxas e capacidades de produção de apoptose; d) os hepatócitos cultivados invadidos pelas bactérias Salmonella Typhimurium e Listeria monocytogenes apresentam alterações morfológicas, com ruptura da distribuição da monocamada, e sinais de desorganização citoplasmática e nuclear / INTRODUCTION: Hepatocytes can play an important role in the initiation or amplification of the hepatic acute inflammatory response, through the release of proinflammatory cytokines. The bacterial invasion of hepatocyte is a stimulus for production of TNF-alpha by these cells, and this phenomenon induces its own death by apoptosis. TNF-alpha is as a cytotoxic agent (inducing cellular death), as a protector agent (through NF-kB activation). The hepatocyte death by apoptosis may release intracellular bacteria that would be destroyed by hepatic immunological system. Salmonella Typhimurium (ST) and Listeria monocytogenes (LM) are important foodborne pathogens. The hepatocyte is the major site of bacterial replication in the liver. The consequences of hepatocytes bacterial invasion must be better evaluated. METHODS: In the present work we show the behavior of hepatocytes invaded by ST and LM serotypes 4a, 4b and 1/2a, through: a) morphology = by optic microscopy (OM) (hematoxylin-eosin staining) and electronic microscopy (EM); b) quantification of TNF-alpha released by hepatocytes = TNF-alpha released was determined by ELISA in culture supernatants; c) evaluation of apoptotic cell death by TUNEL and annexin techniques (flow cytometry). For all parameters were made a statistical comparative analysis among the four types of bacteria. RESULTS: The hepatocytes monolayers invaded by LM and ST presented ruptures in your organization, and signs of nuclear and cytoplasmic disorder. For the bacteria ST, LM 4a, LM 4b and LM 1/2a we obtained the following values respectively: a) rate of TNF-alpha released (pg/mL): 146,9±18,38; 94,71±13,89; 94,52±15,66 and 58,16±15,49; b) capacities of TNF-alpha production (pg/mL): -67,20±71,56; -46,49±54,10; -106,3±61,0 and 58,16±15,49; c) rate of apoptosis by TUNEL in unit of area (UA): 23,86±1,614; 15,92±0,9343; 21,14±1,421 and 23,93±1,263; d) capacities of apoptosis production by TUNEL in UA: -50,67±12,42; 10,81±7,186; - 17,22±10,93 and -40,27±9,712; e) rate of apoptosis by annexin in UA: 12,51±2,052; 23,10±3,481; 26,61±3,414 and 18,57±2,497; f) capacities of apoptosis production by annexin in UA: -63,31±15,79; -126,4±26,78; - 142,0±26,26 and -97,75±19,21. CONCLUSIONS: a) ST was responsible for the major rate of TNF-alpha released and LM 4b was responsible for the major capacity of TNF-alpha production; b) ST and LM 1/2a caused the major rates and capacities of apoptosis,production, evaluated by TUNEL technique; c) LM 4b was responsible for the major rates and capacities of apoptosis production, evaluated by annexin technique; d) the cultured hepatocytes invaded by bacteria ST and LM presented morphological alterations, with monolayer rupture, and signs of nuclear and cytoplasmic disorder

Objetivos: avaliar a associação entre dor oncológica crônica e as citocinas pró-inflamatórias interleucina-6 (IL-6), IL-8, IL-1&#946; e TNF-&#945;, e a interferência destas citocinas na relação entre dor, qualidade de vida relacionada à saúde (QVRS) e desempenho funcional (DF). Método: 220 pacientes ambulatoriais com câncer, que não haviam recebido nenhum tratamento antineoplásico nos últimos 30 dias, foram avaliados pelo Inventário Breve de Dor, Questionário de Dor McGill (MPQ), Inventário de Depressão de Beck, Escala de Desempenho Funcional de Karnofsky e a escala de QVRS, EORTC-QLQ-c30. Os níveis plasmáticos das citocinas foram dosados através do teste imunoenzimático ELISA e comparados entre pacientes com dor leve (G1), moderada a intensa (G2) e sem dor (G3) usando a ANOVA ou o teste de Kruskal-Wallis seguido por análise de múltiplas comparações. Os pacientes do G1 e G2 apresentavam apenas dor oncólogica e estavam em uso de analgésicos. Os do G3 tinham câncer, mas não apresentaram dor ou fizeram uso de analgésicos nos últimos 14 dias. 23 voluntários saudáveis (G4) foram incluídos como controle. A ANCOVA foi utilizada para avaliar o efeito das citocinas na relação dor, QVRS e DF. A análise de Árvore de Classificação e Regressão (CART) avaliou a relação entre citocinas e níveis de dor, ajustada por características clínicas, demográficas e sintomas. As correlações foram avaliadas pelos testes de Spearman e Pearson. Resultados: Os pacientes do G2 (n=49) apresentaram significativamente (p<0,05) maiores níveis de IL-6 e IL-8 que todos os demais grupos. Os níveis do TNF-&#945; e da IL-1&#946; foram maiores no G2 que no G1 (n=76) e G4, mas não diferiram significativamente do G3 (n=95). Entre pacientes com dor (n=125) foram observadas correlações significativas (p<0,05) ou com tendência a significância entre: IL-6 e a pior dor (r=0,23) e o escore total do MPQ (r=0,18); TNF-&#945; e os descritores afetivos do MPQ (r=0,33); IL-8 e escore total do MPQ (r=0,16); dimensão emocional da QVRS e IL-8 (p=-0,26) e IL-6 (r=-0,17); escalas de sintomas de dor e IL-6 (r=0,21), e de fadiga com IL-8 (r=0,14). A ANOVA mostrou que os pacientes do G2 tiveram significativamente pior DF e QVRS que os do G1, G3 e G4, na maioria das escalas. Segundo a ANCOVA apenas a IL-8 moderou o efeito da dor sobre a escala de perda de apetite; e independentemente aumentou a fadiga. A análise de CART selecionou o estádio da doença, a IL-8, a insônia moderada a intensa, a fadiga leve a intensa e a idade <=48 anos como preditoras de dor. O maior percentual de casos com dor moderada a intensa foi observado entre os com estádio IV da doença e IL-8 > 5,20 pg/ml. Conclusões: o aumento das citocinas pró-inflamatórias IL-6, IL-8, IL-1&#946; e TNF-&#945; esteve relacionado ao aumento da dor. A IL-6 e IL-8 estavam associadas à ocorrência de dor moderada a intensa. A IL-8 moderou o efeito da dor sobre a perda de apetite em pacientes com dor, não interferindo no impacto da dor sobre o desempenho funcional, a QVRS geral e os domínios físico, emocional, social e cognitivo da QVRS. A IL-8 e IL-6 estavam independentemente correlacionadas com redução da QVRS emocional e a IL-8 com piora da fadiga em pacientes com dor oncológica. Os resultados sugerem que tratamento com antagonistas/inibidores das citocinas IL-6, IL-8, IL-1&#946; e TNF-&#945; pode contribuir para o alívio da dor em pacientes com câncer / Aims: to examine the association between chronic cancer pain and the pro-inflammatory cytokines interleukin-6 (IL-6), IL-8, IL-1&#946; and TNF-&#945;, as well as the interference of these cytokines in the relationship between pain, health-related quality of life (HRQOL), and performance status (PS). Methods: 220 cancer outpatients, who didn`t receive any antineoplastic treatment in the last 30 days, were evaluated by the Brief Pain Inventory (BPI), McGill Pain Questionnaire (MPQ), Beck Depression Inventory (BDI), Karnofsky Performance Scale (KPS), and a HRQOL measurement, the EORTC-QLQ-30. Plasma cytokine levels were measured using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and were compared among patients with mild (G1), moderate to severe (G2) and without pain (G3) using one-way analysis of variance (ANOVA) or Kruskal-Wallis followed by multiple comparison tests. Patients in G1 and G2 had only cancer pain and were using analgesics. G3 members had cancer but felt no pain and didn`t use analgesics in the last 14 days. Twenty-three healthy volunteers (G4) were included as controls. ANCOVA was used to assess the effect of cytokines on the pain, HRQOL and PS relationship. Associations between pain and cytokines, adjusted by cancer symptoms and clinical and demographic characteristics were also examined using Classification and Regression Tree (CART) analysis. Correlations were assessed by Spearman\'s and Pearson\'s tests. Results: the IL-6 and IL-8 levels in G2 (n=49) patients was significantly (p<0.05) higher than of those in all other groups. The IL-1&#946; and TNF-&#945; levels were significantly higher in G2 than in G1 (n=76) and G4, but not significantly different when compared with G3 (n=95). Among patients with pain (n=125), it was observed significant, or almost significant, correlations between: IL-6 with worst pain (r=0.23) and with the total score of MPQ (r=0.18); TNF-&#945; with MPQ affective domain (r=0.33); IL-8 with total score of MPQ (r=0.16); emotional HRQOL domain and IL-8 (p=-0.26) and IL-6 (r=-0.17) and; between HRQOL pain scale and IL-6 (r=0.21), and fatigue scale and IL-8 (r=0.14). ANOVA showed that PS and HRQOL were significantly worse in G2 than in G1, G3 and G4 in most scales. According to ANCOVA, there was an interaction between pain and IL-8 that increased loss of appetite. IL-8 independently increased fatigue. CART analysis selected disease stage, IL-8, moderate to severe insomnia, mild to severe fatigue and age <=48 years as markers for pain. The highest percentage of patients with moderate to severe pain was observed among those with disease stage IV and plasma level of IL-8 > 5.20 pg/ml. Conclusions: increase of pro-inflammatory cytokines IL-6, IL-8, IL-1&#946; and TNF-&#945; was related to increase in pain. IL-6 and IL-8 were related to moderate to severe pain occurrence. IL-8 was a moderator to the pain effect on loss of appetite in patients with pain but has not interfered neither on pain effect over performance status, nor on general HRQOL nor its physical, emotional, social and cognitive domains. IL-8 and IL-6 were found to be independently correlated with the decrease of the emotional domain scores of HRQOL and the IL-8 with increased fatigue on patients with cancer pain. Results suggest that treatment with IL-6, IL-8, IL-1&#946; and TNF-&#945; cytokine inhibitors/antagonists may provide pain relief in cancer patients

INTRODUÇÃO: Estudos experimentais suportam a evidência de leucopenia persistente desencadeada pela morte encefálica (ME). OBJETIVO: Esse estudo teve como objetivo investigar o comportamento leucocitário na medula óssea e no sangue após a morte encefálica em ratos. MÉTODOS: A morte encefálica foi induzida através da inserção e insuflação rápida de um cateter no espaço intracraniano. Ratos falso-operados (FO) foram apenas trepanados. Decorridas seis horas, as células da medula óssea, coletadas da cavidade femural, foram utilizadas para as contagens total e diferencial e analisadas por citometria de fluxo para a caracterização das subpopulações linfocitárias, a expressão de moléculas de adesão granulocíticas e apoptose/necrose (método de Anexina V/Iodeto de Propídio (PI)). RESULTADOS: Ratos com ME apresentaram uma redução de 30% no número de células da medula óssea devido à redução de linfócitos (40%) e células segmentadas (45%). As subpopulações de linfócitos na medula óssea foram semelhantes nos animais ME e FO (CD3, p=0,1; CD4, p=0,4; CD3/CD4, p=0,4; CD5, p=0,4, CD3/CD5, p=0,2; CD8, p=0,8). A expressão de L-selectina e beta2-Integrinas nos granulócitos também não diferiram entre os grupos (CD11a, p=0,9; CD11b/c, p=0,7; CD62L, p=0,1). Não existem diferenças nas porcentagens de apoptose e de necrose (Anexina V, p=0,73; PI, p=0,21; Anexina V/PI, p=0,29). CONCLUSÃO: Os dados sugerem que a redução na mobilização de células da medula óssea para o sangue, desencadeada pela morte encefálica, não se relaciona a alterações de subpopulações de linfócitos, expressão de moléculas de adesão granulocíticas, ou apoptose e necrose / INTRODUCTION: Experimental findings support the evidence of a persistent leucopenia triggered by brain death (BD). AIMS: This study aimed to investigate leukocyte behavior in bone marrow and blood after BD in rats. METHODS: BD was induced by quickly inflation of an intracranial balloon catheter. Sham operated (SH) rats were trepanned only. Six hours thereafter bone marrow cells harvested from the femoral cavity were used for total and differential counts, and analyzed by flow cytometry to characterize lymphocyte subsets, granulocyte adhesion molecules expression, and apoptosis/necrosis (annexin V/propidium iodide (PI) protocol). RESULTS: BD rats exhibited a 30% reduction in bone marrow cells due to a reduction in lymphocytes (40%) and segmented cells (45%). Bone marrow lymphocyte subsets were similar in BD and SH rats (CD3, p=0.1; CD4, p=0.4; CD3/CD4, p=0.4; CD5, p=0.4, CD3/CD5, p=0.2; CD8, p=0.8). Expression of L-selectin and ?2-integrins on granulocytes did not differ (CD11a, p=0.9; CD11b/c, p=0.7; CD62L, p=0.1). There were no differences in the percentage of apoptosis and necrosis (Annexin V, p=0.73; PI, p=0.21; Annexin V/PI, p=0.29). CONCLUSIONS: Data presented suggest that the down-regulation of the bone marrow triggered by BD is not related to changes in lymphocyte subsets, granulocyte adhesion molecules expression, or apoptosis and necrosis