Uma série de fatores como ambiente, nutrição e doenças podem ser consideradas como estressores em sistemas de produção. Frangos de corte expostos a estressores por períodos prolongados de tempo apresentam de forma geral, redução do ganho de peso e consumo de ração, aumento da conversão alimentar, aumento da média de mortalidade e predisposição a doenças. A vacinação é uma prática essencial para um adequado manejo da produção e o desenvolvimento da imunidade do frango de corte frente a desafios bacterianos e virais presentes no ambiente. O entendimento dos fatores que podem interferir com o sucesso da vacinação é essencial para a otimização da saúde e do bem-estar animal, permitindo a utilização de todo o seu potencial genético e nutricional. Poucos estudos têm enfatizado o efeito do estresse por calor na imunidade celular e humoral de frangos de corte. Este trabalho tem como objetivo estudar o efeito do estresse por calor sobre a imunidade celular (linfócitos B e T), humoral sérica (IgM e IgY) e o peso relativo de órgãos (baço, bursa e fígado) de frangos de corte submetidos a um protocolo de vacinação para a Doença de Newcastle (cepa LaSota). Para tanto, 96 frangos de corte Cobb machos foram aleatoriamente divididos em quarto grupos: grupo 1. Frangos de corte não vacinados expostos à temperatura termoneutra; grupo 2. Frangos de corte vacinados expostos à temperatura termoneutra; grupo 3. Frangos de corte não vacinados expostos ao protocolo de estresse térmico por calor (38±2°C); e grupo 4. Frangos de corte vacinados expostos ao protocolo de estresse térmico por calor (38±2°C). Todas as aves foram alojadas em isoladores com água e ração ad libitum. Foi utilizada uma vacina com o vírus atenuado para Doença de Newcastle (cepa LaSota) administrada em duas doses, aos 7 e aos 14 dias de vida. Os frangos submetidos ao protocolo de estresse foram expostos a uma temperatura de (38±2°C) do segundo até o sexto dia de vida. Os dados obtidos demonstraram que o estresse por calor de forma isolada reduziu o peso relativo do fígado e aumenta aquela do baço e da bursa e induziu uma alteração significativa do perfil de células imunes no sangue periférico das aves, como consequência, observou-se alteração no padrão de imunoglobulinas, o que influenciou diretamente a resposta da ave frente ao desafio ambiental (quando o estresse foi avaliado isoladamente) ou vacinal (quando o estresse foi avaliado juntamente ao desafio vacinal com o vírus da Doença de Newcastle). Dessa forma, sugerimos que o estresse por calor diminuiu a eficácia da resposta vacinal aos frangos de corte, em função de mudanças que induziu no perfil de linfócitos e produção de imunoglobulinas. / A number of factors, such as environment, nutritional status and diseases are stressful for animals during livestock production. It has been shown that broilers exposed to stressors for prolonged periods tend to present decreased weight gain and feed intake and to have an increased feed conversion ratio, increase mortality rate and predisposition to diseases caused by secondary agents. Vaccination is an essential practice for adequate management of the livestock and protection of poultry against bacterial and viral infectious agents. Understanding the factors that modify the success vaccination is essential for optimizing animal health and welfare, thus allowing them to use of all the genetic and nutritional potential they have. Few studies have emphasized the effects of heat stress on cellular and humoral broilers immunity. This study aimed at discussing the effects of heat stress on cellular immunity (B and T lymphocytes) and humoral immunity (IgM and IgY) of broilers undergoing a vaccination protocol for Newcastle disease (LaSota strain). For this purpose, 96 male broilers (Cobb) were random divided into four groups: 1. Unvaccinated broiler chickens exposed to thermoneutral temperature; 2. Vaccinated broiler chickens exposed to thermoneutral temperature; 3. Unvaccinated broiler chickens exposed to a heat stress protocol (38±2°C). 4. Vaccinated broiler chickens exposed to a heat stress protocol (38±2°C). All broilers were housed in isolators and provided water ad lib. We used a live Newcastle vaccine disease virus of LaSota strain given in two doses at 7 and 14 days. The broiler chickens were exposed to heat stress (38±2°C) from the 2nd to 6th day of life. It has been observed that when combined with the vaccination challenge, heat stress was able to change immune cells profile from a B to T cytotoxic and T helper immune cells, keeping this change pattern until the end of the study period (over 19 days). This change in the cellular response pattern modified the ability of the broiler chickens´ immune system to react while challenged by vaccination, reducing its efficiency and making them more susceptible to the disease agent. The data obtained suggest that heat stress by itself induced considerable modifications in the liver, spleen and bursa de Fabricius and induced a significant modification in the profile of immune cells in peripheral blood of birds, with responsive modifications in the pattern of immunoglobulins, directly influencing the response of the broilers against the environmental challenge (when the stress is evaluated separately) or the vaccination (when the stress is measured along the challenge vaccination with Newcastle Disease virus). Therefore, we suggest that the heat stress was capable of reduce the efficacy of the vaccinal response in broiler chickens, related to the modification of the lymphocytes and the production of immunoglobulins.

A adolescência é um período crítico para o desenvolvimento dos indivíduos. Durante esta fase várias estruturas cerebrais responsáveis pelo controle das respostas estressoras atingem sua maturidade. Assim, estressores agudos ou crônicos podem repercutir negativamente e alterar a resposta de estresse bem como o comportamento na vida adulta. O eixo hipotálamo-hipófiseadrenal (HPA) integra o sistema do estresse, cujo controle inibitório está regulado pelos glicocorticoides, os quais agem em receptores dos tipos mineralocorticoide (MR) e glicocorticoide (GR). É desconhecido o papel destes receptores nos efeitos de longa duração induzidos pelo estresse na pré-puberdade em modelos animais. O objetivo deste trabalho foi verificar se o bloqueio dos receptores MR ou GR após o estresse na pré-puberdade previne suas alterações sobre o comportamento exploratório e o controle do eixo HPA, em ratas adultas. Desta forma, ratas pré-púberes, com 26 dias de idade, foram submetidas a uma ou sete sessões diárias de contenção e, em seguida, à administração dos antagonistas MR (Espironolactona) ou GR (RU- 486). Na fase adulta, aos 60 dias de idade, os animais foram avaliados no labirinto em cruz elevado e, no dia seguinte, submetidos novamente à contenção, concomitantemente com coleta seriada de sangue para avaliar a resposta do eixo HPA. Subsequentemente, realizou-se a perfusão do cérebro assim como a coleta das adrenais e timo. Efetuou-se a dosagem de corticosterona por radioimunoensaio e analisou-se a expressão e atividade dos neurônios CRH na região parvocelular medial do núcleo paraventricular do hipotálamo, por imuno-histoquímica. O estresse crônico na pré-puberdade causou redução no peso corporal, atraso na puberdade e diminuição da expressão de CRH e Fos em resposta ao estresse agudo na vida adulta. Não houve efeitos sobre o peso do timo e parâmetros comportamentais. Contudo, RU-486 promoveu aumento da corticosterona e adrenais. O estresse agudo ocasionou avanço da puberdade e associado com RU- 486 ou Espironolactona também diminuiu a atividade dos neurônios CRH em resposta ao mesmo estressor na vida adulta. Estes resultados demonstram que a administração de Espironolactona pode ser uma estratégia promissora para atenuar os efeitos centrais a longo prazo decorrentes do estresse agudo na pré-adolescência / Adolescence is a critical period to the individual\'s development. Several brain structures responsible for the control of stressful responses reach maturity during this phase. Thus, acute or chronic stressors can have a negative effect and alter the stress response as well as behavior in adulthood. The hypothalamus-pituitary-adrenal axis (HPA) is part of the stress system, whose inhibitory control is regulated by glucocorticoids through mineralocorticoid (MR) and glucocorticoid (GR) receptors. It is unknown the role of these receptors in the long-term effects induced by stress in the prepuberty in animals models. The aim of this study was determine whether MR or GR receptor blockade after stress in prepuberty prevents their changes on exploratory behavior and control of the HPA axis in adult female rats. Thus, prepuberty female rats, at 26 days old, were submitted to one or seven daily restraint sessions followed by administration of MR (Spironolactone) or GR (RU-486) antagonists. In adulthood, at 60 days old, the animals were evaluated in the elevated plus maze. In the next day, they were subject again to restraint concurrently with serial blood sampling to evaluate the HPA axis response. Subsequently, it was performed the brain perfusion as well as the collection of the adrenal glands and thymus. It was conducted the dosage of corticosterone by radioimmunoassay and analyzed the expression and activity of CRH neurons in the medial parvocellular subdivision of the paraventricular nucleus of the hypothalamus by immunohistochemistry. Chronic stress in prepuberty reduced the body weight, delayed the puberty and decreased the CRH and Fos expression in response to acute stress in adulthood. There was no effect on thymus weight and behavioral parameters. However, RU-486 increased the corticosterone secretion and adrenal glands weight. Acute stress caused advancement of puberty and associated with RU-486 or Spironolactone also reduced the activity of CRH neurons in response to the same stressor in adulthood. These results demonstrate that Spironolactone administration may be a promising strategy to attenuate the central long-term effects resulting from acute stress in prepuberty.

Orientador: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Maria José Hitomi Nagata / Banca: Álvaro Francisco Bosco / Banca: Ariel Lenharo / Banca: Jamil Awad Shibli / Resumo: As modalidades terapêuticas que envolvem implantes dentais têm se expandido gradativamente, sendo implantados em uma variedade de estruturas ósseas. Dessa forma, o propósito do presente trabalho foi estudar a influência de corticóides no processo inicial de osseointegração de implantes de titânio instalados em maxilas de ratos. Foram utilizados implantes de titânio c.p., grau II, cônico de 1,4mm de diâmetro e 2,7mm de comprimento, com superfície tratada. Trinta e oito ratos wistar tiveram seus primeiros molares superiores esquerdo e direito extraídos. Após 30 dias de reparo alveolar, dois animais foram sacrificados para confirmar o fim desse processo. Os demais animais tiveram os implantes instalados bilateralmente e foram divididos randomicamente em três grupos: Controle (Ctr/n=12) que não receberam nenhum tipo de tratamento; Placebo (Pl/n=12) e Tratado (Tra/n=12), que receberam injeções diárias de 1 ml de solução salina e corticosterona na dosagem de 5mg/kg, respectivamente. Trinta dias após a implantação, todos os animais foram eutanasiados e tiveram a concentração plasmática do corticóide mensurada: Ctr (101,31 ± 26,7 ng/ml), Pla (95,22 ± 25,36 ng/ml) e Tra (281,37 ± 64,72 ng/ml); e o contato osso-implante determinado: Ctr (96,67%), Pla (82,22%) e Tra (15,73%), nos quais o grupo Tra apresentou-se estatisticamente diferente dos demais grupos (p<0,05). Assim, diante da metodologia empregada, foram evidenciadas menor formação óssea e conseqüente redução da área de tecido ósseo neo-formado na interface osso-implante. / Abstract: The therapeutic modalities which involves dental implants has been gradually expanded, being implanted in a variety of bone structures. In this way, the aim of the present work was to study the corticoid influence at the initial process of bone integration of titanium implants installed in rat jaws. It were used titanium implants c.p.; grade II, conic with 1,4mm diameter and 2,7mm length, with treated surface. Thirty eight wistar rats had their first upper left and right molars extracted. After 30 days of alveolar repair, two animals were sacrificed to confirm the end of this process. The others had their implants installed bilaterally and they were splited randomly in three groups: Control (Ctr/n=12) which did not receive any kind of treatment; Placebo (Pla/n=12) and Treated (Tre/n=12) which received 1ml daily shots of salt solution and corticosterone at a dosage of 5mg/Kg, respectively. Thirty days after the implantation, all the animals were euthanasiated and the plasmatic concentration of corticoid was measured: Ctr (101,31 ± 26,7 ng/ml), Pla (95,22 ± 25,36 ng/ml) and Tre (281,37 ± 64,72 ng/ml); and the bone implant contact was determined: Ctr (96,67%), Pla (82,22%) and Tre (15,73%), in which the Tre group presented statistically different from the other groups (p<0,05). Thus, front the employed methodology it was shown lesser bone formation and consequent reduction of the bone tissue area neo-formed at bone-implant interface. / Doutor

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo deste trabalho foi analisar as alterações estruturais e bioquímicas na parede da bexiga resultante do tratamento crônico de ratos pré-púberes com altas doses de corticosterona. Foram estudados 26 ratos Wistar divididos em quatro grupos: T30 foi tratado com corticosterona até 29 dias de idade e morto no dia 30. T65 recebeu o mesmo tratamento, mas foi morto com 65 dias. Cada grupo tinha seu próprio controle (C30 e C65). Os animais foram tratados com injeções intraperitoneais diárias de corticosterona (2 mg/100g peso corporal) entre o 7 e 29 dias de vida. A bexigas foram removidas e processadas para inclusão em parafina. Foram estudados os seguintes elementos da parede vesical: Colágeno, músculo liso, fibras do sistema elástico, densidade vascular e do epitélio. Estes parâmetros foram analisados por métodos morfométricos, imunofluorescência e bioquímica. A densidade vascular na lâmina foi reduzida em 40% (p <0,05) no grupo T65. A organização do colágeno foi alterada em T30 e T65, apesar da concentração de colágeno total não ser alterada. O grupo T65 teve um aumento de fibras do sistema elástico. Não houve diferença na altura e na densidade de células epiteliais entre os grupos. Quanto à densidade de fibras musculares lisas, observamos um aumento de 19% (p <0,05) no grupo T65. A administração de corticosterona na fase pré-púbere provoca modificações estruturais na bexiga de ratos afetando de modo significativo o substrato morfológico sob qual repousa a fisiologia vesical. Foi observado também que estas modificações normalmente aparecem num tempo mais longo após o término do tratamento / The aim of this work was to analyze the structural and biochemical changes on the bladder wall resulting from the chronic treatment of prepubertal rats with high doses of corticosterone. This study included 26 male Wistar rats assigned to four groups: T30 was treated with corticosterone until 29 days of age and killed at day 30, while T65 group received the same treatment but was killed at day 65. Each group had its own control group (C30 and C65). For treated animals, daily intraperitoneal injections of corticosterone (2 mg/100g body weight) were administered between 7th and 29th day of life. Bladders were removed and collagen, smooth muscle, elastic fibers system, vascular density and epithelium were analyzed by morphometrical methods, immunofluorescence, and biochemistry.Vascular density in lamina propria was reduced by 40% (p<0.05) in group T65. Collagen organization was altered in T30 and T65, although total collagen concentration was unchanged. The T65 group had an increase in elastic system fibers. There was no difference in epithelial height and cell density between the groups. Concerning the smooth muscle fibers density we observed a 19% increase (p<0.05) in the T65 group. Our results show that prepubertal administration of corticosterone induces structural modifications in the bladder of rats

Orientador: Roberto de Oliveira Roça / Resumo: Apesar da elevada tecnificação dos frigoríficos, ainda são constatados prejuízos no rendimento e qualidade do produto final decorrentes de falhas durante o transporte de frangos de corte. Objetivou-se neste estudo avaliar perdas provenientes durante o transporte de frangos entre um frigorífico brasileiro e um inglês, através da mensuração da mortalidade de chegada e contusões parciais correlacionando-as com diferentes distâncias granja-abatedouro, assim como com a sazonalidade. Para avaliar o estresse dos animais, foram mensurados níveis de corticosterona relacionados com as diferentes distâncias. Dados de mortalidades de chegada brasileiros foram mais de 600% superiores quando comparados aos ingleses. Durante o verão, observaram-se maiores índices de mortalidade no estabelecimento brasileiro, enquanto o mesmo foi observado durante o inverno no estabelecimento inglês. No Brasil, a mortalidade de chegada foi influenciada pela distância granja-abatedouro no verão, enquanto no estabelecimento inglês foi mais proeminente nas maiores distâncias durante o inverno. Na Inglaterra, contusões parciais permaneceram constantes, independente das distâncias granjaabatedouro, por outro lado, quando avaliada a sazonalidade, as contusões foram superiores no inverno. Taxas de contusões parciais brasileiras foram mais de 1700% superiores quando comparadas às inglesas, e na distância longa foram observados os maiores índices de contusões. Avaliando-se níveis de corticosterona, dados brasileiros ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-21Bitstream added on 2014-11-10T11:58:49Z : No. of bitstreams: 1 000788565_20150121.pdf: 356283 bytes, checksum: 3276919567e151473e1788abb4db5a09 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-23T10:59:21Z: 000788565_20150121.pdf,Bitstream added on 2015-01-23T10:59:53Z : No. of bitstreams: 1 000788565.pdf: 1433793 bytes, checksum: 2b92d3c0d4ec57e0d39cea267d13b5f1 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-05-04T13:08:17Z: 000788565_20180601.pdf, 000788565.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-04T13:09:28Z : No. of bitstreams: 1 000788565_20180601.pdf: 369806 bytes, checksum: 218f3f99e53aa6061d9074553ff60e64 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-06-05T12:59:16Z: 000788565_20180601.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-06-05T13:00:20Z : No. of bitstreams: 1 000788565.pdf: 1471839 bytes, checksum: a6b86534cf13ddfff7c89c9fe4c59fc3 (MD5) / A pitiose é uma doença causada pelo oomiceto denominado Pythium insidiosum e acomete animais domésticos, silvestres e o homem. O tratamento de escolha é o procedimento cirúrgico, porém, dependendo da localização e extensão da lesão, é inviável e as recidivas são frequentes. Até o momento não há protocolos terapêuticos efetivos contra o agente, pois não há fármacos com eficácia comprovada in vivo. Em virtude da gravidade e da ausência de tratamentos específicos, fazem-se necessárias pesquisas por novos protocolos terapêuticos. Desta forma, avaliaram-se o efeito do extrato da casca de barbatimão, ácido tânico purificado, anfotericina B, DMSO e corticosteróide no tratamento da pitiose experimental em coelhos. Foram utilizados um total de 21 coelhos, divididos em 6 diferentes protocolos terapêuticos e observou-se que não houve diferenças entre as formas de tratamento e o grupo controle. Questiona-se o modelo experimental da pitiose, que é único na literatura. Em condições experimentais as lesões são diferentes das naturalmente adquiridas em cavalos e cães. Este modelo experimental talvez não seja o mais apropriado para a avaliação de novas formas de tratamento / Pythiosis is caused by the oomycete Pythium insidiosum and affects domestic and wild animals and man. Treatment of choice for pythiosis is surgery, however, depending on the size and location of the lesion, it is an unfeasible procedure and relapses are frequently observed. Until this moment, there are no effective protocols for treatment, since there are no drugs with proved effectiveness in vivo. Due to the severity and absence of specific treatment for pythiosis, new researches are necessary to search new compounds that can be used in therapeutic protocols. So, it was evaluated the effect of bark extract of “barbatimão”, purified tannic acid, amphotericin B, DMSO and corticosteroid in the treatment of experimental pythiosis in rabbits. It was evaluated 21 rabbits which were divided into six different therapeutic protocols and it was not observed differences among them and control group. It is questioned the experimental model in rabbits, which is unique in literature. The lesions in this experimental model differ from that of natural condition in horses and dogs. This actual experimental model perhaps could not be suitable for new therapeutic protocols evaluation

Orientador: Sandra de Moraes Gimenes Bosco / Banca: Hélio Langoni / Banca: Lúcia Helena O'Dwyer de Oliveira / Resumo: A pitiose é uma doença causada pelo oomiceto denominado Pythium insidiosum e acomete animais domésticos, silvestres e o homem. O tratamento de escolha é o procedimento cirúrgico, porém, dependendo da localização e extensão da lesão, é inviável e as recidivas são frequentes. Até o momento não há protocolos terapêuticos efetivos contra o agente, pois não há fármacos com eficácia comprovada in vivo. Em virtude da gravidade e da ausência de tratamentos específicos, fazem-se necessárias pesquisas por novos protocolos terapêuticos. Desta forma, avaliaram-se o efeito do extrato da casca de barbatimão, ácido tânico purificado, anfotericina B, DMSO e corticosteróide no tratamento da pitiose experimental em coelhos. Foram utilizados um total de 21 coelhos, divididos em 6 diferentes protocolos terapêuticos e observou-se que não houve diferenças entre as formas de tratamento e o grupo controle. Questiona-se o modelo experimental da pitiose, que é único na literatura. Em condições experimentais as lesões são diferentes das naturalmente adquiridas em cavalos e cães. Este modelo experimental talvez não seja o mais apropriado para a avaliação de novas formas de tratamento / Abstract: Pythiosis is caused by the oomycete Pythium insidiosum and affects domestic and wild animals and man. Treatment of choice for pythiosis is surgery, however, depending on the size and location of the lesion, it is an unfeasible procedure and relapses are frequently observed. Until this moment, there are no effective protocols for treatment, since there are no drugs with proved effectiveness in vivo. Due to the severity and absence of specific treatment for pythiosis, new researches are necessary to search new compounds that can be used in therapeutic protocols. So, it was evaluated the effect of bark extract of "barbatimão", purified tannic acid, amphotericin B, DMSO and corticosteroid in the treatment of experimental pythiosis in rabbits. It was evaluated 21 rabbits which were divided into six different therapeutic protocols and it was not observed differences among them and control group. It is questioned the experimental model in rabbits, which is unique in literature. The lesions in this experimental model differ from that of natural condition in horses and dogs. This actual experimental model perhaps could not be suitable for new therapeutic protocols evaluation / Mestre

O transtorno por uso de álcool (TUA) é um transtorno crônico e recorrente, caracterizado pelo uso frequente, perda do controle sobre o uso e sintomas de abstinência quando ocorre a retirada, sendo este processo crítico para a recaída. Durante a síndrome de abstinência de álcool se observam, além de alterações comportamentais, alterações no sistema glutamatérgico, hormônios, neuroinflamação e estresse oxidativo. A N-acetilcisteína (NAC), um modulador do sistema glutamatérgico com propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias, vem sendo considerado um fármaco com potencial efeito sobre a adição a algumas drogas de abuso. Entretanto, seus efeitos sobre a abstinência de álcool são pouco explorados. Desta forma, o objetivo principal desta tese foi avaliar os efeitos do tratamento de curto prazo com NAC sobre o comportamento de ratos abstinentes, bem como sobre alterações na concentração de corticosterona e leptina sérica, citocinas inflamatórias e glutationa além da atividade da enzima glutamina sintetase no tecido encefálico durante a abstinência de álcool em ratos. Para isso, se utilizou dois modelos de exposição crônica ao álcool, com diferentes tempos de abstinência e regimes de administração com NAC. No primeiro experimento, ratos Wistar machos adultos foram administrados com 2 g/kg de álcool ou solução glicosada durante 30 dias, 2 vezes ao dia, via gavagem e tratados com NAC (60 e 90 mg/kg), via intraperitoneal (i.p) ou solução salina (n=10/grupo) durante 4 dias após a cessação das administrações de álcool. Após 24 horas da última administração de NAC ou salina (5 dias de abstinência) os animais foram testados no campo aberto por 5 min, logo após eutanasiados e o sangue coletado para a análise de corticosterona e leptina. Em um segundo experimento, foi executado o mesmo protocolo de tratamento do primeiro experimento, entretanto, após a eutanásia foram coletadas estruturas encefálicas para a análise de citocinas inflamatórias, glutationa e atividade da glutamina sintetase. No terceiro experimento, utilizou-se modelo de administração crônica intermitente, sendo os ratos administrados com 2 g/kg de álcool ou salina, via gavagem, 2 vezes ao dia, 5 dias por semana, durante 3 semanas. Quatro dias antes da retirada do álcool os ratos foram tratados com NAC (60 e 90 mg/kg, i.p) ou salina concomitantemente com álcool ou solução glicosada (n=10/grupo). Vinte quatro horas após a última administração de NAC (1 dia de abstinência) os animais foram testados no campo aberto e após eutanasiados para a análise de corticosterona e leptina. Nossos resultados mostraram que o tratamento com NAC instituído após ou prévio ao início da abstinência preveniu hipolocomoção (5 dias de abstinência) ou ansiedade (24 horas de abstinência) em ratos. NAC também preveniu aumento de costicosterona e leptina após abstinência em ratos independentemente do modelo de exposição crônica utilizado. Adicionalmente, NAC preveniu aumento de citocinas inflamatórias no hipocampo e no córtex frontal de ratos abstinentes, além de prevenir a diminuição da atividade da glutamina sintetase no hipocampo durante a abstinência. O presente estudo mostrou que o os modelos de administração crônico-moderados de álcool induziram sinais e sintomas de abstinência em ratos compatíveis com os observados em humanos e, ambos os esquemas de tratamento com NAC, foram eficazes na prevenção de alterações produzidas pela abstinência de álcool. Tais resultados sugerem a indicação da NAC como um adjuvante na terapia para retirada do álcool e consequente prevenção de recaída. / Alcohol use disorder (AUD) is a chronic and recurrent disorder characterized by frequent use, loss of control of drug intake and the withdrawal symptoms when alcohol is withdrawn, being this process critical for relapse. During alcohol withdrawal syndrome behavioral changes, as well as changes in the glutamatergic system, hormones levels, neuroinflammation and oxidative stress are observed. N-acetylcysteine (NAC), a glutamate-modulating agent, with antioxidant and anti-inflammatory properties has been considered a putative anti-addictive drug. However, its effects on alcohol withdrawal are poorly understood. Thus, the aim of this thesis was to evaluate the short-term effects of NAC treatment on behaviors, leptin and corticosterone serum levels, as well as brain levels of pro-inflammatory cytokines, glutathione and glutamine synthetase activity during alcohol withdrawal in rats. Two different models of chronic alcohol exposure were used. In the first experiment, male Wistar rats were administered with 2 g/kg of alcohol, or glucose solution, during 30 days, twice daily, by gavage and treated with NAC (60 and 90 mg/kg, ip) or saline for 4 days after alcohol cessation. Twenty-four hours after the last NAC administration animals were tested in the open field test and euthanized for later corticosterone and leptin. In the second experiment, we used the same protocol of treatment as the first experiment, however, after euthanasia, brain structures were dissected for inflammatory cytokines, glutathione and glutamine synthetase activity analysis. In the third experiment, we used a model of chronic intermittent administration. Rats were administered with 2 g/kg of alcohol, by gavage, twice daily, 5 days/week, for 3 weeks. Four days before alcohol cessation rats were concomitantly treated with NAC (60 and 90 mg/kg, ip) or saline and alcohol or glucose solution. Twenty four hours after the last administration with NAC rats were tested in the open field test and euthanized for serum corticosterone and leptin analyses. Treatment with NAC during alcohol withdrawal prevented hypolocomotion and the increases of leptin and corticosterone serum levels in abstinent rats. The same treatment also prevented changes of frontal and hippocampal levels of inflammatory cytokines and hipocampal glutamine synthetase activity during withdrawal. When administered prior to alcohol withdrawal, treatment with NAC prevented anxiety and again prevented increases in leptin and corticosterone serum levels during early withdrawal. The present thesis showed that the model of moderate chronic alcohol administration induced alcohol withdrawal signs and symptoms in rats consistent with those observed in humans. and NAC treatment, in two different regimens, was effective in preventing these alcohol withdrawal-related alterations. These results suggest the indication of NAC as an adjuvant therapy for alcohol withdrawal and relapse.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T21:11:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 329321.pdf: 8831525 bytes, checksum: 8c626628cc17f0b0c572902502d81a78 (MD5) Previous issue date: 2014 / A agmatina é um neuromodulador, cuja atividade antidepressiva tem sido mostrada tanto em ensaios pré-clínicos como clínicos. Contudo, os mecanismos celulares e moleculares responsáveis por seu efeito não estão totalmente esclarecidos. Estudos dos últimos 40 anos têm demonstrado que episódios de estresse induzem anormalidades do eixo hipotálamo-pituitária-adrenal e hipersecreção de glicocorticóides os quais estão implicados na fisiopatologia da depressão. O presente estudo verificou a habilidade da agmatina em: i) produzir um efeito antidepressivo no teste da suspensão pela cauda (TSC) após sua administração sub-crônica em camundongos e o envolvimento de vias de sinalização intracelular hipocampal; ii) abolir o comportamento tipo-depressivo no teste do nado forçado (TNF) e o desequilíbrio oxidativo hipocampal induzidos pelo estresse de contenção (EC) em camundongos; iii) proteger células neuronais hipocampais murinas HT22 frente à citotoxicidade induzida pela corticosterona e o envolvimento do fator de transcrição Nrf2; iv) abolir o comportamento tipo-depressivo no TSC e anedônico no splash teste, induzidos pela corticosterona em camundongos e a participação dos sistemas monoaminérgicos, do fator neurotrófico derivado do encéfalo (BDNF), da proteína sináptica sinaptotagmina I (Syt I), das células neurogliais e do fator de transcrição Nrf2. O tratamento sub-crônico com agmatina (0,01 e 0,1 mg/kg, p.o.) produziu um efeito antidepressivo no TSC sem afetar a atividade locomotora dos animais. Adicionalmente, a agmatina (0,001-0,1 mg/kg, p.o.) aumentou a fosforilação de substratos da proteína cinase A (PKA), a fosforilação da proteína cinase B (PKB)/Akt (Ser473), da enzima glicogênio sintase cinase-3ß (GSK-3ß) (Ser9), da cinase regulada por sinal extracelular 1/2 (ERK1/2), da proteína de ligação responsiva ao AMP cíclico (AMPc) (CREB) (Ser133) e o conteúdo de BDNF de uma maneira dose-dependente no hipocampo. Agmatina (0,001-0,1 mg/kg, p.o.) também reduziu a fosforilação da c-Jun N-terminal cinase 1/2 (JNK1/2). A fosforilação da proteína cinase C (PKC) e de p38MAPK não foi alterada em nenhuma condição experimental. Em relação ao modelo de EC em camundongos, este protocolo induziu um comportamento tipo-depressivo no TNF, peroxidação lipídica, aumento da atividade hipocampal das enzimas superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx) e glutationa redutase (GR), reduziu a atividade da catalase (CAT) e aumentou a razão SOD/CAT, um índice de condições pró-oxidativas, mas não afetou os níveis de glutationa reduzida. Agmatina (10 mg/kg, p.o.)aboliu o comportamento tipo-depressivo induzido pelo EC e preveniu a peroxidação lipídica e as alterações nas atividades de SOD, GR e CAT na razão SOD/CAT induzidas pelo EC. Na linhagem de células neuronais hipocampais murinas HT22, o tratamento com agmatina (10 µM) aboliu a produção de espécies reativas de oxigênio e a apoptose induzidas pela corticosterona, de uma maneira dose e tempo-dependentes. A combinação de concentrações sub-efetivas de agmatina e fluoxetina ou imipramina produziu um efeito citoprotetor sinérgico. O efeito neuroprotetor da agmatina foi abolido por ioimbina (antagonista de receptor a2-adrenérgico), cetancerina (antagonista de receptor 5-HT2A), LY294002 (inibidor de PI3K), PD98059 (inibidor de MEK1/2), SnPP (inhibitor da enzima hemoxigenase-1, HO-1) e cicloheximida (inibidor da síntese protéica). Agmatina também aumentou a fosforilação de Akt e de ERK e induziu translocação nuclear de Nrf2 bem como a expressão de HO-1 e da subunidade catalítica da enzima glutamato cisteína ligase (GCLc); a indução dessas proteínas foi abolida por ioimbina, cetanserina, LY294002 e PD98059. Por último, utilizando camundongos Swiss, o tratamento por 21 dias com agmatina (0,1 mg/ kg, p.o) preveniu, de maneira similar ao antidepressivo clássico imipramina, o comportamento tipo-depressivo no TSC e anedônico induzidos pela corticosterona. Além disso, agmatina aumentou os níveis hipocampais de noradrenalina, serotonina (5-HT), e dopamina tanto nos animais controle como nos tratados com corticosterona; e ainda preveniu a diminuição de 5-HT e o aumento de glutamato induzidos pela corticosterona. A agmatina aumentou a fosforilação de CREB nos animais controle; o imunoconteúdo de BDNF maduro (BDNFm), reduziu o conteúdo de BDNF imaturo (pro-BDNF), aumentou a razão BDNFm/pro-BDNF e o conteúdo de Syt I, de HO-1 e de GCLc tanto nos animais controle como nos tratados com corticosterona. Adicionalmente, o tratamento com agmatina foi capaz de prevenir a redução do conteúdo de BDNFm e de Syt I, e a retração e diminuição da quantidade de células astrogliais e microgliais em CA1 hipocampal induzidas pela corticosterona. Agmatina produziu um efeito antidepressivo nos camundongos C57BL/6 Nrf2 (+/+) no TSC e splash teste, mas não nos animais Nrf2 (-/-). O presente estudo ampliou de maneira significativa o conhecimento dos mecanismos celulares e moleculares implicados no efeito antidepressivo da agmatina através de ensaios in vitro e in vivo. Nosso conjunto de resultados indica que o efeito antidepressivo da agmatina parece ser mediado pela sua atuação sobre as principais hipóteses que explicam a fisiopatologia da depressão e terapia antidepressiva: monoaminérgica, neurotrófica, oxidativa eglutamatérgica, indicando seu potencial como adjuvante/monoterapia para o tratamento da depressão.<br> / Abstract: Agmatine is an endogenous neuromodulator, whose antidepressant activity has been shown in preclinical and clinical trials. However, the cellular and molecular mechanisms implicated in its effect are not entirely clarified. Studies over the last 40 years have shown that episodes of stress induce abnormalities in the hypothalamic-pituitary-adrenal axis and hypersecretion of glucocorticoids which are implicated in the pathophysiology of major depression. The present study verified the agmatine's ability to: i) produce an antidepressant-like effect in the tail suspension test (TST) followed its sub-chronic administration in mice and the involvement of hippocampal intracellular signaling pathways in such effect; ii) abolish the depressive-like behavior in the forced swimming test (TNF) and hippocampal antioxidant imbalance induced by acute restraint stress (ARS) in mice; iii) protect HT22 mouse hippocampal cells against the corticosterone-induced cytotoxicity and the involvement of the transcription factor Nrf2 in such effect; iv) abolish the depressive-like behavior in the TST, and anhedonic behavior induced by corticosterone and the involvement of the monoaminergic systems, brain-derived-neurotrophic factor (BDNF), synaptic protein synaptotagmin I (Syt I), neuroglial cells and the transcription factor Nrf2 in such effect. The sub-chronic agmatine (0.01 and 0.1 mg/kg, p.o.) administration produced a significant antidepressant-like effect in the TST and no locomotor effect in mice. Additionally, agmatine (0.001-0.1 mg/kg, p.o.) increased the phosphorylation of protein kinase A (PKA) substrates, protein kinase B (PKB)/Akt (Ser473), glycogen synthase kinase-3ß (GSK-3ß) (Ser9), extracellular signal-regulated kinases 1/2 (ERK1/2) and cAMP response elements (CREB) (Ser133), and BDNF immunocontent in a dose-dependent manner in the hippocampus. Agmatine (0.001-0.1 mg/kg, p.o.) also reduced the c-jun N-terminal kinase 1/2 (JNK1/2) phosphorylation. Neither protein kinase C (PKC) nor p38MAPK phosphorylation was altered under any experimental conditions. Regarding ARS protocol, it caused a depressive-like behavior in the FST, hippocampal lipid peroxidation, and an increase in the activity of hippocampal superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx) and glutathione reductase (GR) activities, reduced catalase (CAT) activity and increased SOD/CAT ratio, an index of pro-oxidative conditions, but did not affect reduced glutathione levels. Agmatine (10 mg/kg, p.o.) was effective to abolish the depressive-like behavior induced by ARS and to prevent the ARS-induced lipid peroxidation and changes in SOD, GR and CAT activities and inSOD/CAT activity ratio. In HT22 hippocampal neuronal cell line, corticosterone induced apoptotic cell death and increased reactive oxygen species production, effects that were abolished in a concentration- and time-dependent manner by agmatine (10 µM) treatment. The combination of sub-effective concentrations of agmatine with fluoxetine or imipramine afforded synergic protection. The neuroprotective effect of agmatine was abolished by yohimbine (a2-adrenoceptor antagonist), ketanserin (5-HT2A receptor antagonist), LY294002 (PI3K inhibitor), PD98059 (MEK1/2 inhibitor), SnPP (heme oxygenase-1 (HO-1) inhibitor), and cycloheximide (protein synthesis inhibitor). Agmatine increased Akt and ERK phosphorylation, and induced the transcription factor Nrf2 and the proteins HO-1 and glutamate cysteine ligase, catalytic subunit (GCLc); induction of these proteins was prevented by yohimbine, ketanserin, LY294002 and PD98059. Finally, in Swiss mice, the depressive-like behavior in the TST and the anhedonic behavior induced by corticosterone were prevented by agmatine (0.1 mg/kg, po) treatment for 21 days, similarly to the classical antidepressant imipramine. Additionally, agmatine increased the hippocampal levels of noradrenaline, serotonin (5-HT) and dopamine in the both control group and corticosterone-treated mice; and also prevented the decreased 5-HT and increased glutamate levels induced by corticosterone. Agmatine induced an increase in CREB phosphorylation in control mice as well as an increase in the mature BDNF (BDNFm), reduction in the immature BDNF (pro-BDNF) immunocontents, increase in the BDNFm/pro-BDNF ratio, and in the Syt I, HO-1 and GCLc immunocontents in the both control and corticosterone-treated mice. Additionally, agmatine treatment was able to prevent the reduction in the immunocontent of BDNFm and Syt I and the atrophy and reduction of astroglial and microglial cells in CA1 hippocampal induced by corticosterone. Agmatine produced an antidepressant-like effect in C57BL/6 Nrf2 (+/+) mice in the TST and splash test, but not in Nrf2 (-/-) mice. The present study extends the available data on the cellular and molecular mechanisms that underlie the antidepressant effect of agmatine by using in vitro and in vivo approachs. Taken together, our results show that the antidepressant effect of agmatine appears to be mediated by its effect on the key hypotheses that explain the pathophysiology of depression and antidepressant therapy: monoaminergic, neurotrophic, oxidative, and glutamatergic, indicating its potential to be used as adjuvant/monotherapy in the management of major depression.

Introdução: o estresse psicológico aumenta a permeabilidade intestinal em roedores e humanos, potencialmente levando a inflamação de baixo grau e aos sintomas em distúrbios gastrintestinais funcionais. No entanto, o efeito do estresse agudo combinado ao estresse da vida crônica, que mimetiza potencialmente melhor a situação humana, é desconhecido. Além disso, há poucos dados disponíveis sobre os efeitos do estresse em intestino delgado versus cólon. Métodos: ratos Wistar foram alocados em quatro protocolos de estresse: 1/ controles; 2/ estresse agudo (isolamento e movimentos limitados); 3/ Crowding stress:crônico e 4/ estresse agudo + estresse crônico. Amostras de jejuno e cólon foram colhidas para estudar a permeabilidade em câmaras deUssing, a expressão gênica de moléculas de junção firmes e a densidade de mastócitos. Níveis de corticosterona no plasma foram medidos. Principais resultados:corticosterona plasmática foi avaliada nas três condições de estresse, teve níveis mais altos na condição de estresse combinado. Permeabilidade do jejuno foi aumentada em todas as condições de estresse e correlacionada com os níveis de corticosterona. O aumento da expressão das claudinas 1, 5 e 8, daocludina e da ZO-1 foi detectado no estado de estresse agudo no jejuno. Em contraste, a permeabilidade do cólon foi aumentada no protocolo de estresse combinado, e a expressão de moléculas das junção firmes permaneceu inalterada. O aumento da densidade de mastócitos foi observado no cólon nos ratos submetidos aos estresses crônico e combinado. Conclusão e inferências:os estresses agudo, crônico e combinado influenciam diferentemente a permeabilidade intestinal, a expressão de moléculas de junção firmes e a atividade dos mastócitos, no jejuno e no cólon. Estes resultados fornecem uma visão mais aprofundada dos mecanismos de hiperpermeabilidade intestinal relacionadas ao estresse. / Background: Psychological stress increases intestinal permeability in rodents and humans, potentially leading to low-grade inflammation and symptoms in functional gastrointestinal disorders through disturbances in brain-gut axis. However, the effect of acute stress on the background of Crhonic life stress, potentially better approaching the human situation, is unknown. Moreover, only limited information is available on the effects in small intestine versus colon in animal model. Methods: Wistar rats were allocated to 4 stress protocols: 1/ sham; 2/ acute stress (isolation and limited movement); 3/ Crhonic crowding stress and 4/ acute + Crhonic stress (n = 8 per group). Jejunum and colon were harvested to study permeability in Ussing chambers, gene expression of tight junction molecules and mast cell density. Plasma corticosterone levels were measured. Key Results: Plasma corticosterone was elevated in all three stress conditions, with the highest levels in the combined stress condition. Permeability of the jejunum was increased in all stress conditions and correlated with corticosterone levels. Increased expression of claudin 1, 5 and 8, occludin and ZO-1 was detected in the acute stress condition in the jejunum. In contrast, colonic permeability was increased in the acute on Crhonic stress protocol only and the expression of tight junction molecules was unaltered. Increased mast cell density was observed in the Crhonic and acute on Crhonic stress condition in the colon only. Conclusion and Inferences: Acute, Crhonic and combined stress differentially affect intestinal permeability, expression of tight junction molecules and mast cells in the jejunum and the colon. These findings provide further insight in the mechanisms of stress-related intestinal hyperpermeability and barrier.