As Doenças Inflamatórias Intestinais (DII) são caracterizadas por resposta inflamatória exacerbada na mucosa intestinal, com desbalanço entre mecanismos pró-inflamatórios e reguladores. Entretanto, até o momento, nenhuma terapia é curativa e vários pacientes são refratários ou intolerantes a elas, necessitando de intervenções cirúrgicas para combater as complicações da doença. Sendo assim, é evidente que novas terapias são necessárias para o controle da progressão das DII. Dessa forma, como a saliva de insetos hematófagos constitui uma fonte importante de moléculas com potencial farmacológico, o objetivo desse trabalho foi avaliar a atividade terapêutica do extrato de glândula salivar (EGS) do Aedes aegypti e suas frações na colite experimental. Para tal, camundongos C57BL/6 foram submetidos à indução de colite pela administração de água contendo 3% de dextran sulfato de sódio (DSS). Os resultados demonstraram melhora na condição clínica e no escore pós-morte dos camundongos tratados com o EGS i.v. ou i.p. Essa melhora foi acompanhada de redução de leucócitos no sangue periférico, principalmente quando os animais foram tratados i.v. Além disso, redução do infiltrado inflamatório e das citocinas patogênicas IL-12, IFN-?, TNF-?, IL- 1? e IL-5, no intestino, foi também associada ao tratamento. Ademais, houve diminuição da frequência de linfócitos TCD4+ produtores de IFN-?, IL-17 e IL-4 no baço e nos linfonodos mesentéricos (LNM) dos animais tratados com EGS. Ainda, uma menor frequência de células CD11b+ no baço e CD49b+ nos LNM também foi detectada nos animais com inflamação intestinal tratados com o EGS. De forma interessante, quando expostos por dois ciclos ao DSS, o tratamento precoce com EGS (1o ciclo) protegeu os camundongos do desenvolvimento da colite após nova indução da inflamação intestinal (2o ciclo), sugerindo que a saliva do A. aegypti possui componentes com capacidade de retardar o aparecimento e a gravidade da recidiva da doença. A melhora na condição clínica associada ao tratamento com EGS parece também estar associada à modulação de populações bacterianas no intestino com características supostamente colitogênicas (Pseudomonas monteilii) e protetoras (Ruminococus champanelensis e Turicibacter sanguinis). De fato, o transplante de microbiota de camundongos tratados com EGS para animais que sofreram indução da colite levou à aparente melhora do escore pós-morte e à redução de leucócitos circulantes. Além disso, o transplante diminuiu a expressão de RNAm das citocinas inflamatórias IFN-? e IL-1?, indicando que alterações na microbiota intestinal podem ser um dos mecanismos pelos quais o EGS modula a colite experimental. Finalmente, experimentos utilizando a cromatografia líquida de alta performance (HPLC) sugerem que uma fração (F3) do extrato bruto da saliva, pode ser a responsável pela melhora observada nos sinais clínicos da doença. De forma geral, o EGS e seus componentes parecem representar uma fonte importante de moléculas imunomoduladoras com potencial terapêutico no tratamento da inflamação intestinal induzida experimentalmente / Inflammatory Bowel Disease (IBD) is an inflammatory disorder characterized by an imbalance between inflammatory and regulatory immune responses at the gut mucosa. However, current therapies are not totally effective and a plenty of patients require repeated surgeries to control disease complications. So, it is clear that novel therapies are still needed to control IBD progression. Thereby, since saliva from bloodsucking arthropods is a rich source of pharmacologically bioactive molecules, the aim of this study was to evaluate the therapeutic activity of Aedes aegypti total (SGE) and fractionated saliva in the treatment of experimental colitis. For this purpose, C57BL/6 male mice were exposed to 3% dextran sulfate sodium (DSS) in drinking water. The results showed an improvement in clinical disease outcome and postmortem scores after SGE treatment, regardless the route of administration used (i.p. or i.v.). This amelioration was accompanied by the systemic reduction in peripheral blood lymphocytes, especially when the i.v route was used. Furthermore, a reduction in the inflammatory area together with a local diminishment of IFN- ?, TNF-?, IL-1? and IL-5 cytokines were observed in the colon of SGE-treated mice. Similarly, a reduction of the frequency of TCD4+ lymphocytes producing IFN-?, IL-17 and IL-4 was observed in spleen and mesenteric lymph nodes (MLN) of SGE-treated mice. A lower frequency of CD11b+ cells in spleen and CD49b+ in MLN was also observed after SGE treatment. Interestingly, early treatment with SGE led to mice protection from a late DSS rechallenging, indicating that the mosquito saliva may present components able to prevent disease relapse. Clinical improvement due to SGE therapy seems to be also related to the modulation of intestinal bacterial population with different characteristics. Thus, SGE-therapy managed to a diminishment of colitogenic (Pseudomonas monteilii) and improvement of protective (Ruminococus champanelensis e Turicibacter sanguinis) bacteria. In fact, microbiota transplantation from SGE-tretaed mice to mice exposed to DSS-colitis improved postmortem scores and induced systemic diminishment in peripheral blood lymphocytes. Additionally, a reduced mRNA levels for the inflammatory cytokines IFN-? and IL-1?, was observed in transplanted mice, pointing to the effects of SGE-therapy in the modulation of gut microbes as one of the mechanisms related to the improvement of disease outcome. Finally, high performance liquid chromatography (HPLC) experiments suggested a major SGE pool fraction (F3) able to ameliorate disease signs. In conclusion, SGE and its components might represent a source of important immunomodulatory molecules with promising therapeutic activity for experimentally induced intestinal inflammation.

Lors de la prise d'un repas sanguin par le moustique Aedes (Ae) aegypti, le virus de la dengue (DENV) est transmis à l'homme avec la salive du moustique. Ce mélange complexe est en partie déposé dans le compartiment cutané extravasculaire lors de la piqûre de moustique. Il est donc important de prendre en compte la triade virus-vecteur-hôte vertébré dans les mécanismes de transmission de ce virus à l'hôte vertébré. Des analyses de génomique et protéomique des glandes salivaires d'Ae. Aegypti infectées ou non par le DENV nous ont permis de mettre en évidence dans les glandes salivaires de moustiques infectés, la surexpression d'un gène codant pour un peptide antimicrobien (PAM) cationique. Nous avons démontré, que ce PAM possède une activité antibactérienne et antivirale contre les virus de la dengue et du chikungunya. Nos travaux soulignent l'importance chez les invertébrés, du compartiment « glandes salivaires » dans la réponse immunitaire innée du moustique. Nous avons également démontré que les kératinocytes humains sont des cellules permissives pour le DENV et que l'infection de ces cellules stimule la réponse immunitaire innée antivirale. Nos travaux démontrent que des extraits de glandes salivaires d'Ae. Aegypti augmentent l'infection du virus de la dengue dans les kératinocytes humains. Nous avons par la suite identifié une protéine salivaire d'Ae. Aegypti (34kDa), qui augmente l'infection du DENV en supprimant la production d'interféron. L'ensemble de ces travaux ont permis de contribuer aux connaissances sur la transmission du DENV, mais aussi d'identifier de nouvelles cibles potentielles pour le contrôle de la réplication virale. / Dengue virus (DENV) transmission is initiated when a blood-feeding Aedes (Ae) aegypti mosquito injects saliva, together with the virus, into the epidermis of its mammalian host. Studies of DENV should, therefore, take into account the triad virus-vector-vertebrate host. We have used functional genomic and proteomic analyses, of the salivary glands of female Ae. Aegypti, to demonstrate that this compartment harbors a potent immune response against DENV, represented by the production of an antimicrobial peptide (AMP). This AMP was found to exert, in addition to its anti-bacterial activity, an anti-viral activity against DENV and Chikungunya. Our data demonstrate, for the first time, the permissiveness of human epidermal keratinocytes to DENV infection. Remarkably, DENV replication in keratinocytes contributes to the establishment of anti-viral innate immunity that might occur shortly after the mosquito bite. To investigate the role of Ae. aegypti saliva in DENV transmission to man, primary human keratinocytes were infected with DENV in the presence of Ae. aegypti salivary gland extract. We show that Ae. aegypti saliva enhances dengue virus infection of human keratinocytes by suppressing innate immune responses. Furthermore, we have found a 34-kDa protein, in the saliva of Ae.aegypti, that strongly enhances DENV replication by suppressing type-I IFN production. This study provides new insights into the role of Ae. aegypti salivary glands and saliva in DENV transmission. The data presented here provide novel targets for the control of DENV replication in mammalian hosts.

A transmissão de parasitas da malária por mosquitos vetores é dependente do desenvolvimento bem sucedido das formas infectantes de Plasmodium sp., especialmente os esporozoítas, que são as formas que infectam o hospedeiro vertebrado. A manipulação genética de mosquitos vetores tem sido uma estratégia alternativa na tentativa de controle da malária. Um componente extremamente importante desta estratégia é a escolha de uma molécula efetora capaz de reduzir a transmissão do patógeno. Microplusina é um peptídeo antimicrobiano rico em cisteína, originalmente descrito como um componente antimicrobiano da hemolinfa e dos ovos de carrapato bovino Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Testes anteriores utilizando o modelo experimental mosquito Aedes aegypti infectado por Plasmodium gallinaceum mostraram que a microplusina é altamente tóxico para esporozoítas de Plasmodium gallinaceum em concentração relativamente baixa, sem apresentar toxicidade aos mosquitos vetores Aedes aegypti. Nosso objetivo foi analisar a expressão da microplusina e seu efeito na infecção de P. gallinaceum em mosquitos transgênicos. Obtivemos quatro linhagens através da integração de um transgene contendo a região promotora do gene da vitelogenina de Ae. aegypti, peptídeo sinal maltase-like I de Ae. aegypti e a sequência codificadora da microplusina (PMOS [3xP3-EGFP-AeVg Micro]). A atividade anti esporozoítas da microplusina expressa pelos mosquitos transgênicos mostrou diferença significante as linhagens. O desenho de novas moléculas utilizando como molde moléculas efetoras existentes e testadas, possibilitará o aperfeiçoamento da expressão de genes exógenos em mosquitos transgênicos, tornando-os refratários ao parasita. / Transmission of malaria parasites by mosquito vectors is dependent on the successful development of Plasmodium sp. infective forms, particularly the sporozoites, which are the forms that enter the vertebrate host. The genetic manipulation of mosquito vectors has been a strategy for malaria control. An extremely important component of this strategy is the effector molecule of choice which reduces parasite transmission. Microplusin is a cysteine-rich antimicrobial peptide originally described as an hemolymph and eggs antimicrobial component of the cattle tick Boophilus microplus. Previous tests using the experimental model Plasmodium gallinaceum infected Aedes aegypti showed that microplusin is highly toxic to P. gallinaceum sporozoites in relatively low concentration, without showing toxicity to the mosquito vector A. aegypti. Our goal was to analyze transgenic mosquitoes expressing microplusin and its effect on infection of P. gallinaceum. We obtained four lines through the integration of transgene that containing the promoter region of the A. aegypti vitelogenin gene, the maltase-like I signal peptide of A. aegypti and microplusin coding sequence (pMos[3xP3-EGFPAeVg-Micro]). The activity anti sporozoites microplusin expressed by transgenic mosquitoes showed significant differences between strains. The design of effector molecules using information from existing and tested molecules as template will enable the improvement of the expression of foreign genes in transgenic mosquitoes, making them resistant to the parasite.

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 elianefavaro_dissert.pdf: 848819 bytes, checksum: b40b52f14300f0d4f8848c5aa126fd3c (MD5) Previous issue date: 2006-03-16 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo / The aims of this study were to identify the best place of residences to install MosquiTRAPs, traps capable of attracting and capturing Aedes aegypti females, to investigate the physiological state of captured females, to measure the entomological indicators for these mosquitoes and to evaluate their relationship with indicators from oviposition traps, adult collection, climatic data and dengue transmission. The research was performed in Mirassol SP, on two different occasions: Studies 1 and 2. For Study 1, an area of twenty blocks was selected, in which MosquiTRAPs were installed in five. Eight traps were set up in four houses of each block: four at indoor sites and four at shaded outdoor sites. These houses were visited during eight weeks. For Study 2, two areas were selected: Area 1 comprising 100 blocks and Area 4 comprising 30 blocks. One MosquiTRAP was installed in each block of Area 1 and four were installed in each block of Area 4. The traps were installed at outdoor sites at the residences and visited once a week. The collection of adult mosquitoes with Nasci aspirators was performed on a weekly basis in one house per block in Area 1 and four houses in Area 4. An oviposition trap was installed in one house of each block in both areas. These activities were performed over 23 weeks. Study 1 revealed that the MosquiTRAPs installed at outdoor sites captured 5 times more females than indoor traps. From the collected Aedes aegypti females, 87.3% were gravid and 86.7% had no blood in the middle intestine. Study 2 showed that only one MosquiTRAP per block is sufficient to quantify the number of females per house; the sensitivities of MosquiTRAPs and adult collections with aspirators to detect the presence of Aedes aegypti females were similar, yet inferior in relation to oviposition traps; the adjusted models for the positivity of MosquiTRAPs included climatic variables and excluded entomological indicators; the maximum values of mean numbers of females per house obtained by MosquiTRAPs and collections with aspirators were compatible with dengue transmission; disease transmission presented a self regressive behavior, although no relationships between the incidences of dengue and the mean number of females captured by MosquiTRAPs or by manual aspirators were identified. / Os objetivos do estudo foram identificar o melhor local da casa para colocação de MosquiTRAPs, armadilhas capazes de atrair e capturar fêmeas de Aedes aegypti, investigar o Estado fisiológico das fêmeas capturadas, medir os indicadores entomológicos obtidos através de MosquiTRAPs para fêmeas de Aedes aegypti e avaliar as relações entre estes, e indicadores obtidos de armadilhas de oviposição, de coletas de adultos, climáticos e de transmissão de dengue. O trabalho foi realizado em Mirassol, SP em duas etapas, estudos 1 e 2. Para o estudo 1 foi selecionada uma área com vinte quarteirões, sendo cinco sorteados para colocação das MosquiTRAPs. Em cada um foram selecionadas quatro casas e em cada uma colocaram-se oito armadilhas: quatro no intradomicílio e quatro no peridomicílio sob cobertura, que foram visitadas durante oito semanas. Para o estudo 2 foram selecionadas duas áreas: uma com 100 quarteirões (área 1) e outra com 30 (área 4). Na área 1 foi instalada uma MosquiTRAP e na 4 foram instaladas quatro MosquiTRAps por quarteirão. Estas foram instaladas no peridomicílio e vistoriadas semanalmente. Coletas de mosquitos adultos foram realizadas semanalmente em um domicílio por quarteirão na área 1 e em quatro na área 4, utilizado-se aspiradores de Nasci. Nas áreas 1 e 4 foram instaladas em uma casa de cada quarteirão uma armadilha de oviposição. Estas atividades foram realizadas durante 23 semanas. O estudo 1 revelou que as MosquiTRAPs instaladas no peridomicílio capturaram aproximadamente 5 vezes o número de fêmeas daquelas no intradomicílio. Das fêmeas de Aedes aegypti coletadas, 87,3% estavam grávidas e 86,7 estavam sem sangue no intestino médio. O estudo 2 mostrou que para a medida da positividade, quanto maior o número de MosquiTRAPs por quadra melhor, mas para a quantificação do número de fêmeas por casa, uma MosquiTRAP por quadra parece ser suficiente; as sensibilidades das MosquiTRAPs e das coletas com aspiradores em detectar a presença de fêmeas de Aedes aegypti foram semelhantes, mas inferiores à sensibilidade das armadilhas de oviposição; os modelos ajustados para a positividade das MosquiTRAPs incluíram variáveis climáticas e excluíram indicadores entomológicos; os valores máximos das médias de fêmeas por casa obtidas para as MosquiTRAPs e coletas com aspiradores foram compatíveis com a transmissão de dengue; a transmissão revelou um comportamento autorregressivo, mas não foram identificadas relações entre as incidência de dengue e as médias de fêmeas capturadas pelas MosquiTRAPs ou coletadas pelos aspiradores manuais.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Tephrosia toxicaria Pers. (Fabaceae) popularmente conhecida como âtimbà de caienaâ, à utilizada na lavoura como defensivo agrÃcola e na pesca para paralisar peixes, devido sua atividade ictiotÃxica. Este trabalho relata o estudo quÃmico de T. toxicaria e avaliaÃÃo das atividades antioxidante e larvicida sobre Aedes aegypti. O estudo quÃmico permitiu o isolamento de dez flavonoides (TTP-1 â luteolina, TTP-3 â 6a,12a-desidro- a-toxicarol, TTP-4 â a-toxicarol, TTP-5 â obovatina, TTP-6 â deguelina, TTP-8 â villosinol, TTP-9 â 12a-hidroxi-a-toxicarol, TTP-10 â sumatrol, TTP-11 â 12a-hidroxirotenona e TTP-12 â tephrosina) â sendo oito deles rotenoides â uma cromona (TTP-13 â 6,7-dimetoxicromona) e a mistura dos esteroides sitosterol e estigmasterol, nas suas formas simples e glicosiladas. Ensaios larvicidas e antioxidantes foram realizados com diversos extratos, partiÃÃes e com alguns dos metabÃlitos secundÃrios isolados. Devido à presenÃa de rotenoides, compostos que tÃm sido utilizados no controle de pragas agrÃcolas desde o sÃculo XIX, o estudo de T. toxicaria se mostrou bastante promissor, com diversas amostras ativas, apresentando atividade comparÃvel à da rotenona, composto utilizado como padrÃo positivo do ensaio larvicida. Os resultados dos ensaios antioxidantes sugerem T. toxicaria como uma fonte potencial desses agentes, provavelmente devido à presenÃa de flavonoides. As substÃncias isoladas foram identificadas por mÃtodos espectromÃtricos e espectroscÃpicos (IV, EM, RMN 1H e RMN 13C), incluindo RMN bidimensional (HMBC, HSQC e COSY) e por comparaÃÃo com dados da literatura. / Tephrosia toxicaria Pers. (Fabaceae) popularly known as "timbà de caiena" is used as pesticide and fishing poison, because its activity icthyotoxic. This work reports the chemical study of T. toxicaria and its larvicidal and antioxidant activities evaluation. Phytochemical investigation led to the isolation of ten flavonoids (TTP-1 â luteolin, TTP-3 â 6a,12a-dehydro-a-toxicarol, TTP-4 â a-toxicarol, TTP-5 â obovatin, TTP-6 â deguelin, TTP-8 â villosinol, TTP-9 â 12a-hydroxy-a-toxicarol, TTP-10 â sumatrol, TTP-11â12a-hydroxyrotenone and TTP-12 â tephrosin) â eight of them rotenoids â one cromone (TTP-13 â 6,7-dimethoxychromone) and the mixture of steroids sitosterol and stigmasterol, in their simple forms and glycosylated. Antioxidant and larvicidal assays were performed with several extracts, partitions and with some of the secondary metabolities isolated. Due to the presence of rotenoids, compounds have been used to control in agricultural pest since the XIX century, the study of T. toxicaria was quite promising, with several active extracts, with activity comparable to that of rotenone, compound used as a positive test. Its antioxidant activity tests shown T. toxicaria as a potential source of these agents, probably due to the presence of flavonoids, compounds characteristic for presenting various types of biological activities. The substances were isolated and its structures determined by spectroscopic and spectrometric methods (IR, EM, 1H NMR and 13C NMR), including two-dimensional NMR (HMBC, HSQC and COSY) and by comparison with literature data.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:26:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Cleyde Barreto Valotto.pdf: 528164 bytes, checksum: 4db4ca9a7a45641fc2cd83c8e861e824 (MD5) Previous issue date: 2009-06-25 / The dengue and yellow fever are caused by Flavivirus, and are an importants problems in public health in the range of tropical and subtropical world. There is only available vaccine for yellow fever. The transmission of both diseases to humans is by the bite of female Aedes aegypti. The vector control is done through the elimination of breeding potential, application of larvicides in collections of water for adults vectors space applications of insecticides. The problems arising from continuous use of chemical insecticides have been the emergence of resistant populations to these products and concern about the environmental damage caused by slow degradation. In search of alternatives for the vector control, studies are being developed with substances of botanical origin, with the aim to control the vectors and preserve the environment. The use of natural insecticides has some advantages when compared to synthetic because they are renewable and have rapid degradation. Moreover, its composition is quite complex, reducing the speed of emergence of resistance and be of low toxicity to mammals, birds and environment. This study presents the morphohistologic and ultrastructural changes of catechist tannin extracted from Magonia pubescens, and the Diterpene extracted from Copaifera reticulata on the larvae of A. aegypti with the objective to evidence the mechanisms of action of these substances. For light microscopy, the 3rd stage larvae were subjected to a solution of catechist tannin 37ppm and the diterpene 9ppm, where they remained for up to 24h. Larvae that reached lethargic state were collected and fixed in 4% in the paraformoldehyde buffer 0.1 M sodium cacodilate pH 7.2, included in resin and the slides stained with hematoxylineosin technique. For electron microscopy, larvae were subjected to the same concentrations of catechist tannin and diterpene, where they remained for 22 h. Larvae that reached lethargic state were collected and dissected and their gut fixed in 2% glutaraldehyde, 2% paraformoldehyde, 3% sucrose in sodium buffer cacodilate 0.1 M pH 7.2 and post fixed in osmium tetroxide at 1% in cacodilate sodium 0.1 M. After this they were contrasted with uranyl acetate 1%, dehydrated, embedded and polymerized. The ultra sections were contrasted with uranyl acetate 3% and lead citrate and were caracterized by eletron microscopy. The changes caused by catechist tannin observed by light 20 and electron microscopy were high vacuolation, absence of cytoplasmic limits, cellular aging, cell disruption, vesicular apical formation with release of cytoplasmic content, increase in intercellular spaces, detachment of cells from the basal lamina and structural change of microvilli. Changes by diterpene by light and electron microscopy were high cytoplasmic vacuolation, cells and nuclei hypertrophy, degeneration of the edge brush, vesicular apical formation with release of cytoplasmic contents of cells, stratification of the epithelium and folds in the peritrophic matrix. / A dengue e a febre amarela urbana são doenças causadas por Flavivirus, constituindo problemas de importância em saúde pública nas faixas tropical e subtropical do mundo. Há apenas vacina disponível para a febre amarela. A transmissão de ambas as doenças ao homem se faz pela picada da fêmea de Aedes aegypti. O controle do vetor é feito através da eliminação dos criadouros potenciais, aplicação de larvicidas em coleções de água e, para os adultos, aplicações espaciais de inseticidas. Os problemas originados do uso contínuo de inseticidas químicos foram o aparecimento de populações resistentes a esses produtos e a preocupação com os danos ambientais provocados pela degradação lenta destes produtos. Na busca de alternativas de controle ao vetor, estudos estão sendo desenvolvidos com substâncias de origem botânica, com o intuito de controlar os vetores e preservar o meio ambiente. A utilização dos inseticidas naturais tem algumas vantagens quando comparados aos sintéticos, por serem renováveis e de degradação rápida. Além disso, a sua composição é bastante complexa, diminuindo a velocidade do aparecimento de resistência e é de baixa toxicidade para mamíferos, aves e meio ambiente. Neste trabalho, apresentam-se as alterações morfohistológicas e ultraestruturais do tanino catéquico extraído da Magonia pubescens, e do Diterpeno extraído da Copaifera reticulata sobre as larvas de A. aegypti a fim de evidenciar os mecanismos de ação dessas substâncias. Para a microscopia de luz, larvas de 3° estádio foram submetidas a soluções a 37ppm de tanino catéquico e 9ppm do diterpeno, onde permaneceram por até 24h. As larvas que atingiram estado letárgico foram coletadas e fixadas em paraformaldeído a 4% em tampão cacodilato de sódio 0.1 M pH 7.2, incluídas em resina e as lâminas coradas pela técnica de Hematoxilina-eosina. Para a microscopia eletrônica, as larvas foram submetidas às mesmas concentrações do tanino catéquico e diterpeno, onde permaneceram por 22 h. As larvas que atingiram estado letárgico foram coletadas e dissecadas e seus tubos digestórios fixados em 2% glutaraldeído, 2% paraformaldeído, 3% sacarose em tampão cacodilato de sódio 0.1 M pH 7.2 e pós fixado em tetróxido de ósmio 1% em cacodilato de sódio 0.1M. Em seguida foram contrastados com acetato de uranila a 1%, desidratados, emblocados e polimerizados. Os cortes 18 ultrafinos foram contrastados com acetato de uranila 3% e citrato de chumbo, depois eletromicrografados. As alterações causadas pelo tanino catéquico observadas pela microscopia de luz e eletrônica foram a alta vacuolização, ausência dos limites citoplasmáticos, morte por autofagia, desorganização celular, formação vesicular apical com liberação de conteúdo citoplasmático, aumento do espaço intercelular, desprendimento de células da lâmina basal e mudança estrutural dos microvilos. As alterações pelo diterpeno, pela microscopia de luz e eletrônica foram alta vacuolização citoplasmática, hipertrofia celular e dos núcleos, degeneração do bordo em escova, formação vesicular apical com liberação de conteúdo citoplasmático das células, estratificação do epitélio e dobras na matriz peritrófica.

Made available in DSpace on 2015-04-22T22:14:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ilia Gilmara Carvalho.pdf: 530450 bytes, checksum: 50f84ac4bf26a69a84cf2a4b2a031978 (MD5) Previous issue date: 2008-12-31 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The study had for objective the detection and typing of the dengue virus, in the vectors Aedes aegypti and Aedes albopictus through the Polimerase Chain Reaction (PCR) using specific primers. During the period of December of 2005 to December of 2006 8984 mosquitoes were collected, of these 827 they were Aedes, being 819 Ae. aegypti (414 females and 405 males) and 8 Ae. albopictus (7 females and 1 male), in 46 neighborhoods of the city of Manaus including all of the geographical areas of the city. The females were grouped in pools from 1 to 10 mosquitoes for microtubes, in agreement with the gender, it dates from collection, neighborhood and stocked to -70C in the same day of the collection, totaling 143 pools (138 of Ae. aegypti and 5 of Ae. albopictus). Those pools were macerated in PBS containing albumin, and a bracket of the softened was removed for inoculation in cell culture, and other bracket was used to accomplish the extraction of the viral RNA. Once extracted, RNA was submitted the reaction of reverse transcription following by the chain reaction of the polimerase (RT-PCR). The positive samples in RT-PCR were submitted the reaction of semi nested PCR and the products of this reaction were resolved in agarose gel to 1,5% with etídio bromide. Of the 143 analyzed pools, 114 (111 of Ae. aegypti and 3 of Ae. albopictus) they were positive for DENV 3, just a pool was shown positive for two sorotipos, DENV 1 and DENV 3. The prevalence pools Ae. aegypti infected with DENV 3 in the city of Manaus was of 53%, being larger in the areas Center-west (70%), South (60%) and West (53%), and smaller in the area East (23%). This is the first report of the detection of DENV 3 in field-caught Ae. albopictus naturally infected in Brazil. The monitoring of the circulation viral in mosquitoes with the use of the technique of RT-PCR allows the previous knowledge of the levels of spread viral in certain areas contributing to determine the time and place to apply the prevention measures and control. / O estudo teve por objetivo a detecção e tipagem do vírus dengue, nos vetores Aedes aegypti e Aedes albopictus por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) utilizando primers específicos. Durante o período de Dezembro de 2005 a Dezembro de 2006 foram coletados 8984 mosquitos, destes 827 eram Aedes, sendo 819 Ae. aegypti (414 fêmeas e 405 machos) e 8 Ae. albopictus (7 fêmeas e 1 macho), em 46 bairros da cidade de Manaus abrangendo todas as zonas geográficas da cidade. As fêmeas de Ae. aegypti e Ae. albopictus foram agrupadas em pools de 1 a 10 mosquitos por microtubos, de acordo com o gênero, data de coleta, bairro e estocado a -700C no mesmo dia da coleta, totalizando 143 pools (138 de Ae. aegypti e 5 de Ae. albopictus). Esses pools foram macerados em PBS contendo albumina, e uma alíquota do macerado foi retirada para inoculação em cultura de célula, e outra alíquota foi utilizada para realizar a extração do RNA viral. Uma vez extraído, o RNA foi submetido a reação de transcrição reversa seguida da reação em cadeia da polimerase (RT-PCR). As amostras positivas na RT-PCR foram submetidas a reação de Semi Nested PCR e os produtos desta reação foram resolvidos em gel de agarose a 1,5% corado com brometo de etídio. Dos 143 pools analisados, 114 (111 de Ae. aegypti e 3 de Ae. albopictus) foram positivos para DENV 3, apenas um pool mostrou-se positivo para dois sorotipos, DENV 1 e DENV 3. A prevalência de mosquitos Ae. aegypti infectados com DENV 3 na cidade de Manaus foi de 80%. Em todas as zonas a prevalência foi maior que 53%, sendo maior nas zonas Centro-oeste (70%), Sul (60%) e Oeste (53%), e menor na zona Leste (23%). Este foi o primeiro achado no Brasil da identificação do DENV 3 em amostras de Ae. albopictus , coletados em campo na forma adulta. O monitoramento da circulação viral em mosquitos com o uso da técnica de RT-PCR permite o conhecimento prévio dos níveis de disseminação viral em determinadas áreas contribuindo para determinar a época e local para aplicar as medidas de prevenção e controle.

Made available in DSpace on 2016-08-19T18:16:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 IRENE ALVES SILVA NERES.pdf: 1064020 bytes, checksum: eb67fb2a16a93cfcd74f485966ae3ff2 (MD5) Previous issue date: 2009-08-07 / FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA E AO DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLÓGICO DO MARANHÃO / This study aimed to evaluate the levels of infestation of Aedes aegypti, and participation of women in the dengue prevention campaign in districts located in peripheral areas of Caxias Maranhão. The collections were made during the dry season in the months August to October of 2007 and rainy season from February to April of 2008, with home visits in 800 buildings in the neighborhoods: Fazendinha, Salobro, Pirajá and cauldrons of 200 homes by neighborhood in which made the inspection of all potential breeding containers of A. aegypti. Recorded the amount of larvae and pupae and / or other factors related to breeding such as the amount of water and containers of positive exposure to the sun, beyond the collection of adult mosquitoes. Closed questionnaires were applied addressing knowledge about A. aegypti and dengue main measures of the 200 women residing in four districts. The results showed that in the dry season were recorded 35 positive containers and rainy 84, showing significant difference between seasons (X² = 29.87, df = 1, p <0001) and group storage container was predominant in both seasons. 3529 immatures forms were found during the dry season and 17,827 in the rainy season. As the exposure of positive containers in the sun it was observed that the containers protected from the sun in two seasons were the most productive, showing percentages above 70% to 60% of larvae and pupae. Regarding the volume of water contained in the containers was positive that in the dry season, those that had prevailed over 100 liters of water with a yield of 73.42% of immature, while in the rainy season from 11 to 50 liters were the majority with 38.53% of immature. Generally women who have interviewed showed satisfactory level of knowledge about dengue, with results significantly higher among women of the neighborhood cauldrons, which was recorded the lowest yield of immature, as the Tukey test (p> 0.05). The results of this study show information about the productivity of immature Aedes aegypti and characteristics peculiar to the breeding of preferred vector, pointing also to involvement of women in the prevention of dengue, serving as a basis for improving the program for control of this virus in the region. / Este estudo objetivou avaliar os níveis de infestação do Aedes aegypti e a participação das mulheres nas campanhas preventivas do dengue em bairros situados em áreas periféricas de Caxias Maranhão. As coletas foram realizadas durante a estação seca nos meses de agosto a outubro de 2007 e chuvosa, de fevereiro a abril de 2008 com visitas domiciliares em 800 imóveis, nos bairros, Fazendinha, Salobro, Pirajá e Caldeirões em 200 casas por bairro, nas quais fez-se a inspeção de todos os recipientes potenciais criadouros do A. aegypti. Registrouse a quantidade de larvas e pupas e/ou outros fatores relacionados com os criadouros como a quantidade de água e exposição dos recipientes positivos ao sol, além da coleta do mosquito adulto. Aplicou-se questionários fechados abordando conhecimento sobre o A. aegypti e principais medidas preventivas do dengue a 200 mulheres residentes nos quatro bairros. Os resultados demonstraram que na estação seca foram registrados 35 recipientes positivos e na chuvosa 84, apresentando diferença significativa entre as estações (X2 = 29,87, gl = 1, p < 0,001) e o grupo armazenamento foi o recipiente predominante nas duas estações. Foram encontrados 3.529 imaturos durante a estação seca e 17.827 na chuvosa. Quanto à exposição dos recipientes positivos ao sol observou-se que os recipientes protegidos do sol nas duas estações foram os mais produtivos, apresentando percentuais acima de 70% de larvas e 60% de pupas. Em relação ao volume de água contida nos recipientes positivos foi observada que na estação seca, predominaram aqueles que tinham acima de 100 litros de água com uma produtividade de 73.42 % de imaturos, enquanto na chuvosa os de 11 a 50 litros foram a maioria, com 38,53% de imaturos. De modo geral as mulheres entrevistadas mostraram que possuem conhecimentos satisfatório sobre dengue, com resultado significativamente maior entre as mulheres do bairro Caldeirões, onde foi registrada a menor produtividade de imaturos, conforme teste de Tukey (p > 0,05). Os resultados deste estudo mostram informações sobre produtividade de imaturos de Aedes aegypti e caracteristicas peculiares aos criadouros preferenciais do vetor, apontando também a participação das mulheres na prevenção do dengue, servindo de base para aprimoramento do programa de controle dessa virose na região.

Le moustique Aedes aegypti représente un problème de santé publique majeur, car il est le principal vecteur des virus de la Fièvre Jaune, de la Dengue, du Chikungunya et du Zika à l’échelle mondiale. Dans la région des Amériques, ce moustique a été introduit, depuis le continent africain au cours du XVIIème siècle. À la Martinique, entre 2013 et 2016, cette espèce a transmis de façon active les virus de le Dengue, du Chikungunya et du Zika, plaçant l’île en situation épidémique. Sur l’île, la Dengue est devenue endémique depuis près de 20 ans, avec 7 grandes épidémies (1995, 1997, 2001, 2005, 2007, 2010, 2013) ; celle de 2010 a touché près de 40 000 personnes et causé 18 décès. Le Chikungunya est apparue en Décembre 2013 et l’épidémie qui a duré jusqu’en Janvier 2015 a touché 72 520 personnes (dont 83 décès). Le Zika est apparu en Décembre 2015 et l’épidémie a duré toute l’année 2016 (36 000 cas estimés au 30 Septembre). C’est dans ce contexte de circulation active des arbovirus, et dans la volonté d’améliorer les connaissances actuelles sur la bioécologie du vecteur Ae. aegypti, qu’a été initié ce travail sur le thème « Aedes aegypti à la Martinique : écologie et transmission des arbovirus ». La détection puis la caractérisation des virus dengue et chikungunya dans les populations naturelles du moustique ont confirmé le rôle vectoriel d’Ae. aegypti. Ces résultats permettent d’envisager la mise en place d’une veille entomo-virologique dans le cadre de la surveillance des virus circulant sur l’île ; cette veille entomo-virologique pouvant avoir une application opérationnelle (contrôle de foyers émergents). Ensuite, des études portant sur l’écologie larvaire du moustique ont été initiées. L’étude physicochimique des eaux des gîtes larvaires, les retombées de deltaméthrine suite à un traitement spatial et leurs impacts sur le développement larvaire et les traits de vie du moustique ont permis de confirmé que le phénomène de résistance aux insecticides des populations locales d’Ae. aegypti est un frein dans la stratégie de lutte contre le vecteur, dans la mesure où le développement de ce dernier n’était pas affecté. À l’échelle locale, ces études combinées, visent à compléter les données et connaissances sur le moustique, en vue d’une gestion plus efficace de ce dernier et des risques sanitaires et épidémiologiques qui lui sont associés. / Aedes aegypti mosquito is a major public health problem because it is the main vector of Yellow Fever, Dengue, Chikungunya and Zika viruses worldwide. In the Americas, the mosquito was introduced from Africa during the seventeenth century. In Martinique, between 2013 and 2016, the species has actively transmitted Dengue, Chikungunya and Zika viruses, placing the island in an epidemic situation. On the island, Dengue has become endemic in nearly 20 years, with 7 major epidemics (1995, 1997, 2001, 2005, 2007, 2010, 2013); the 2010 epidemic affected almost 40,000 people and caused 18 deaths. Chikungunya virus was introduced in December 2013 and the epidemic lasted until January 2015 and affected 72,520 people (including 83 deaths). Zika virus was introduced in December 2015 and the epidemic lasted throughout 2016 (36,000 cases estimated up to September 30th). In this context of active circulation of arboviruses, and the will to improve the current knowledge on the bioecology of the vector Ae. aegypti, we initiated the work on "Aedes aegypti in Martinique : ecology and transmission of arboviruses."Detection and characterization of Dengue and Chikungunya viruses in natural populations of the mosquito have first confirmed the role of Ae. aegypti as the main vector of these arboviruses on the island. These results allow to consider the establishment of a virological monitoring tool for surveillance of viruses circulating on the island; this can have an operational application such as the control of emerging households.Then, studies of larval mosquito ecology have been initiated. Physicochemical studies of breeding sites waters, impact of deltamethrin after spatial spray and their impacts on larval development and mosquito life traits showed no effect on the general reserves of emerging adults confirmed that the phenomenon of insecticide resistance of local populations of Ae. aegypti is an obstacle in the strategy against the vector. Locally, these studies are intended to supplement data and knowledge about the mosquito, for a more efficient management of the sanitary and epidemiological risks associated.

Aedes aegypti é importante vetor de patógeno causador de doença como dengue, febre amarela, febre Chikungunya e Zika. A fêmea realiza repasto sanguíneo a fim de adquirir nutriente para o desenvolvimento dos ovos. Neste contexto, a saliva possui papel fundamental, representando o elo entre o artrópode hematófago, seu hospedeiro vertebrado e o potencial patógeno a ser transmitido. Nessa saliva encontra-se um coquetel farmacológico com diversas atividades biológicas, como a presença de peptídeos antimicrobianos e moléculas com funções imunomoduladoras sobre células do hospedeiro vertebrado, com especial atenção aos macrófagos. Como os macrófagos também estão envolvidos nos mecanismos efetores da resposta contra protozoários do gênero Leishmania e a leishmaniose apresenta-se como uma doença de caráter zoonótico de grande relevância em saúde pública, o objetivo deste trabalho foi de avaliar o efeito do extrato de glândula salivar (EGS) de A. aegypti em infecções por Leishmania. Nossos resultados mostraram aumento da infecção in vivo e in vitro na presença do EGS, sugerindo fortemente que o EGS de A. aegypti é capaz de aumentar a infecção por Leishmania. / Aedes aegypti is an important vector of disease-causing pathogens such as dengue, yellow fever, Chikungunya and Zika fever. The mosquito female takes a blood meal in order to develop the eggs. In this context, a saliva plays a key role, representing the link between the hematophagous arthropod, its vertebrate host and the potential pathogen to be transmitted. During the evolutionary process, these insects developed a salivary cocktail with an arsenal of molecules presenting several immunomodulatory properties in host cells, such as macrophages. As macrophages are also involved in the mechanisms of response against protozoa of the genus Leishmania and leishmaniasis is a zoonotic disease of great relevance in public health, the aim of this work is to evaluate the effect of salivary gland extract (SGE) of A. aegypti in Leishmania infections. Our results showed increased infection, in vivo and in vitro, in the presence of SGE, strongly suggesting that A. aegypti EGS is able to increase infection by Leishmania.