Estudio descriptivo, observacional y transversal. Evalúa la utilidad de epimastigotes formolados de Trypanosoma cruzi mediante la técnica dot-ELISA para el serodiagnóstico de la enfermedad de Chagas. Entre los resultados se observa una sensibilidad de 98% y especificidad del 95%, VPP y VPN de 84% y 99%, respectivamente. La reactividad cruzada de la técnica de dot-ELISA utilizando epimastigotes formolados fue de 12.66% (10/79), principalmente en sueros de pacientes con leishmaniasis. La técnica de dot-ELISA utilizando epimastigotes formolados resulta ser una alternativa sencilla para el serodiagnóstico de tamizaje de la enfermedad de Chagas. / Tesis

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:03:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8832_1.pdf: 827062 bytes, checksum: 9b09883078373037c2ce35a48c27f043 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / O câncer de próstata é um dos cânceres de maior incidência no sexo masculino e tendo em vista a escassez de pesquisas com a população em Pernambuco, se faz necessário estudar a relação do PSA com a idade nos casos de hiperplasia prostática benigna (HPB) e adenocarcinoma prostático, bem como nestes a relação do antígeno prostático específico (PSA) com o escore de Gleason. Estudamos 55 casos de resultados histopatológicos (entre 1996 e 2002) do arquivo do Centro Integrado de Anatomia Patológica Hospital Universitário Osvaldo Cruz, sendo 37 de HPB (média de idade 70,4 anos) e 18 de adenocarcinoma prostático (média de 73,2 anos). Os casos de HPB foram divididos em grupos pelos níveis de PSA total, sendo 37 em P1 (0 = PSAt = 113 ng/mL), 7 em P2 (PSAt = 4ng/mL), 15 em P3 ( 4,1 = PSAt = 10,0 ng/mL), 15 em P4 (PSAt = 10,1 ng/mL), 7 em P5 (PSAt = 4,1 ng/mL) e 30 em P6 (PSAt > 4,1 ng/mL); de acordo com a idade em grupos: 37 em I1 (de 55 a 89 anos), 9 em I2 (= 65 anos) e 28 em I3 (= 65 anos). Os casos de adenocarcinoma prostático foram divididos em grupos de acordo com o PSA total, sendo 18 em P1, 12 em P2, e 6 em P3; de acordo com a idade em grupos: 18 em I1, 4 em I2 e 14 em I3; de acordo com o escore de Gleason em grupos: 18 em G1 (2 a 10), 12 em G2 (2 a 6) e 6 em G3 (7 a 10). Para a análise estatística foram utilizados o teste Quiquadrado, o teste exato de Fisher, o teste de Spearman e Pearson. Valores de p<0,05 foram considerados estatisticamente significantes. Nos casos de HPB não houve diferença entre proporções: Idade (grupos I2 e I3) versus PSA (grupos P2, P3, P4) (p=0,550), Idade (grupos I2 e I3) versus PSA (grupos P5 e P6) (p=0,656), isto pode ser devido a idade mínima em nossos casos ser de 55 anos; houve correlação significativa entre: Idade (grupo I1) versus PSA (grupo P1) (p=0,027). Nos casos de adenocarcinoma prostático não houve diferença entre as proporções: Idade (grupos I2 e I3) versus PSA (grupos P3 e P4) (p=1,000); Escore de Gleason (grupos G2 e G3) versus PSA (grupos P3 e P4)(p= 0,615); não houve correlação significativa entre: Idade (I1) versus PSA (P1) (p=0,265) isto também pode ter sido devido a idade mínima dos nossos casos; e Idade (I1) versus Escore de Gleason (G1) (p=0,925); houve correlação significativa entre: Escore de Gleason (G1) versus PSA (P1) (p=0,016). Nossos resultados permitem concluir que o PSA não pode ser utilizado como marcador preciso para o diagnóstico do câncer de próstata, nem para o diagnóstico diferencial deste com hiperplasia prostática benigna

[EN] The massive intake of dietary antigens is one of the factors involved in the problems around the weaning of livestock species. This has been studied mainly in piglets and calves, which immune response to dietary antigens and their consequences varies depending on the origin of dietary protein, the use of protein raw materials of high antigenicity being in practice limited in the feeding of young animals. However, in rabbits, where digestive problems after weaning are particularly important, information in this regard is very scarce. The overall objective of this study was to determine if, like in other livestock species, immune reactions against the diet also occur in rabbits, by determining IgG immunoglobulin specific to dietary antigens in blood serum, and to compare the antigenicity of different feeds and protein raw materials. Three experiments were performed. In Experiment I, the method of obtaining dietary antigens by pepsin hydrolysis was developed and the presence of IgG antibodies against dietary antigens in rabbit blood serum was checked by Dot Immunoblotting. In Experiment II, an indirect ELISA to determine IgG against dietary antigens in blood serum was developed. In Experiment III, antigenicity of different protein raw materials was studied by measuring IgG against dietary antigens in blood serum by the indirect ELISA developed, as well as their effects on histomorphology and immunohistochemistry of the intestinal mucosa. With the developed methodology: 1) the presence of IgG antibodies against dietary antigens in blood serum of adult and strictly suckling rabbits has been detected, 2) differing IgG antibody response against dietary antigens in blood serum of growing rabbits has been found depending on the protein raw material included in the feed they had consumed, being significantly higher with sunflower meal, wheat gluten, pea and soybean meal than with alfalfa hay and, especially, with fishmeal and 3) no consistent relationship of the IgG antibody response against dietary antigens in blood serum with histomorphological (villus height, crypt depth and ratio between them) or immunohistochemical (T cell counts in the villi and proliferating cells counts in the crypts) traits of the jejunal mucosa nor growth rate could be established. / [ES] La llegada masiva de antígenos dietarios es uno de los factores que intervienen en la problemática que se desarrolla en el destete de los animales productivos. Este hecho ha sido estudiado sobre todo en lechones y terneros, donde se ha visto que la respuesta inmunitaria frente a los antígenos dietarios y sus consecuencias varían según el origen de la proteína de la dieta, recomendándose en la práctica limitar el uso de materias primas proteicas de alta antigenicidad en la alimentación de los animales jóvenes. Sin embargo, en conejos, donde la problemática digestiva tras el destete es particularmente importante, apenas se dispone de información a este respecto. El objetivo general del presente trabajo fue determinar si en conejos, al igual que ocurre en otras especies productivas, se producen reacciones inmunitarias frente a la dieta consumida, mediante la determinación en suero sanguíneo de inmunoglobulinas IgG específicas frente a antígenos dietarios, y comparar la antigenicidad de diferentes piensos y materias primas proteicas. Para ello se realizaron 3 experimentos. En el Experimento I se desarrolló el método de obtención de antígenos dietarios mediante hidrólisis pépsica y se comprobó mediante Dot Immunoblotting la presencia de anticuerpos IgG frente a antígenos dietarios en suero sanguíneo de conejos. En el Experimento II se desarrolló un ELISA indirecto para la determinación de IgG frente a antígenos dietarios en el suero sanguíneo. En el Experimento III se estudió la antigenicidad de diferentes materias primas proteicas determinando los anticuerpos IgG frente a los antígenos dietarios en suero sanguíneo mediante el ELISA indirecto desarrollado, así como los efectos de las mismas sobre la histomorfología e inmunohistoquímicos de la mucosa intestinal. Con la metodología desarrollada: 1) se ha detectado la presencia de anticuerpos IgG frente a antígenos dietarios en el suero sanguíneo de conejas adultas y de gazapos estrictamente lactantes, 2) se ha comprobado que la respuesta de anticuerpos IgG frente a antígenos dietarios en el suero sanguíneo de los gazapos de cebo depende de la materia prima proteica incluida en el pienso que han consumido durante dicho periodo, siendo sensiblemente mayor con harina de girasol, gluten de trigo, guisante y harina de soja que con heno de alfalfa y, sobre todo, que con harina de pescado y 3) no se ha podido establecer una relación consistente de la respuesta de anticuerpos IgG frente a antígenos dietarios en suero sanguíneo ni con los parámetros histomorfológicos (altura de vellosidades, profundidad de criptas y ratio entre ellas) o inmunohistoquímicos (recuentos de linfocitos T en las vellosidades y de células en división en las criptas) de la mucosa yeyunal ni con el crecimiento durante el cebo. / [CAT] L'arribada massiva d'antígens dietaris és un dels factors que intervenen en la problemàtica que es desenvolupa en el deslletament dels animals productius. Aquest fet ha estat estudiat sobretot en garrins i vedells, on s'ha vist que la resposta immunitària enfront dels antígens dietaris i les seves conseqüències varien segons l'origen de la proteïna de la dieta, recomanant-se a la pràctica limitar l'ús de matèries primeres proteiques d'alta antigenicitat en l'alimentació dels animals joves. No obstant això, en conills, on la problemàtica digestiva després del deslletament és particularment important, es disposa de poca informació referent al tema. L'objectiu general del present treball va ser determinar si en conills, igual que ocorre en altres espècies productives, es produeixen reaccions immunitàries enfront de la dieta consumida, mitjançant la determinació en sèrum sanguini d'immunoglobulines IgG específiques enfront d'antígens dietaris, i comparar l'antigenicitat de diferents pinsos i matèries primeres proteiques. Per a això es van realitzar 3 experiments. En l'Experiment I es va desenvolupar el mètode d'obtenció d'antígens dietaris mitjançant hidròlisi pèpsica i es va comprovar mitjançant Dot Immunoblotting la presència d'anticossos IgG enfront d'antígens dietaris en sèrum sanguini de conills. En l'Experiment II es va desenvolupar un ELISA indirecte per a la determinació d'IgG enfront d'antígens dietaris en sèrum sanguini. En l'Experiment III es va estudiar l'antigenicitat de diferents matèries primeres proteiques determinant els anticossos IgG enfront dels antígens dietaris en sèrum sanguini mitjançant l'ELISA indirecte desenvolupat, així com els efectes de les mateixes sobre la histomorfologia i l'immunohistoquímica de la mucosa intestinal. Amb la metodologia desenvolupada: 1) s'ha detectat la presència d'anticossos IgG enfront d'antígens dietaris en el sèrum sanguini de conilles adultes i de llorigons estrictament lactants, 2) s'ha comprovat que la resposta d'anticossos IgG enfront d'antígens dietaris en el sèrum sanguini de conills d'engreixament depèn de la matèria primera proteica inclosa en el pinso que han consumit durant aquest període, sent sensiblement major amb farina de gira-sol, gluten de blat, pèsol i farina de soja que amb fenc d'alfals i, sobretot, que amb farina de peix i 3) no s'ha pogut establir una relació consistent de la resposta d'anticossos IgG enfront d'antígens dietaris en sèrum sanguini ni amb els paràmetres histomorfològics (alçada de vellositats, profunditat de criptes i ràtio entre elles) o immunohistoquímics (recomptes de limfòcits T en les vellositats i de cèl¿lules en divisió en les criptes) de la mucosa jejunal ni amb el creixement durant l'engreixament. / Cano Muñoz, JL. (2016). Antigenicidad de piensos y materias primas proteicas en conejos [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/62864 / TESIS

Made available in DSpace on 2016-06-17T14:14:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1914 bytes, checksum: 7d48279ffeed55da8dfe2f8e81f3b81f (MD5) Tese_Fred_Luciano_Neves_Santos.pdf: 7174621 bytes, checksum: af4e9021f0c8974198df6ec268ccfaf9 (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-05T22:07:11Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Tese_Fred_Luciano_Neves_Santos.pdf.txt: 436440 bytes, checksum: 1d22503c32c1f332f780c4197a546123 (MD5) Tese_Fred_Luciano_Neves_Santos.pdf: 7174621 bytes, checksum: af4e9021f0c8974198df6ec268ccfaf9 (MD5) license.txt: 1914 bytes, checksum: 7d48279ffeed55da8dfe2f8e81f3b81f (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / O diagnóstico da doença de Chagas crônica (DCC) baseia-se em metodologias que usam em sua fase sólida antígenos brutos, semipurificados ou recombinantes, podendo resultar em baixa sensibilidade ou reação cruzada. Uma forma para resolver este problema é o uso de quimeras formadas por epítopos conservados e repetitivos de diferentes estruturas parasitárias em uma única molécula. O nosso objetivo foi caracterizar e avaliar o uso de quimeras em imunoensaios para o diagnóstico da DCC. As quimeras, IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4 foram purificadas por meio de cromatografia e sua pureza avaliada por SDSPAGE. Ensaios de dicroísmo circular (DC) e espalhamento dinâmico da luz (EDL) foram usados para avaliação do raio hidrodinâmico das quimeras, avaliação de sua estabilidade e escolha do sistema tampão que oferecesse o menor estado de agregação molecular. Ensaios sorológicos para detecção de anticorpos anti-Trypanosoma cruzi através de ELISA foram realizados utilizando um painel de 857 amostras positivas para a DCC e 689 negativas. Para avaliação de reação cruzada foram usadas 1079 amostras de diversas doenças endêmicas no país. A purificação foi eficiente uma vez que o SDS-PAGE indicou ausência de degradação das quimeras. As análises de DC e EDL mostraram que as quatro quimeras apresentaram menor tendência de agregação em tampão carbonato pH 9,6, sendo, assim, este o sistema para a sensibilização das placas. Os ensaios sorológicos revelaram valores elevados de sensibilidade (Sen) e especificidade (Esp) para a molécula IBMP-8.4 (Sen-99,3%; Esp- 100%). O desempenho para as demais moléculas foi satisfatório, ficando os valores de Sen e Esp acima de 94%. As moléculas IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 e IBMP-8.4 apresentaram respectivamente 0,46%, 0,85%, 0,46% e 0,37% de reação cruzada. Os resultados apontam que as quimeras atingiram os critérios de proficiência do Ministério da Saúde podendo, dessa forma, ser utilizados em ensaios diagnósticos para a DCC. Chronic Chagas disease (CCD) diagnosis is based on serological methods employing crude, semipurified or recombinant antigens, which eventually may result in low sensitivity or crossreactivity. An alternative method for solving this problem is the use of chimeric molecules composed by conserved and repetitive epitopes of distinct parasite structures. Our objective was to evaluate the use of chimeras in immunoassays for the diagnosis of CCD. The chimeras IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 and IBMP-8.4 were purified by chromatography and their purity assessed by SDS-PAGE. Circular dichroism (CD) and dynamic light scattering (DLS) were used to assess the hydrodynamic radius of the chimeras, to evaluate their stability and to select the buffering system that offers the lowest state of molecular aggregation. Serological tests for detection of anti-Trypanosoma cruzi were performed by ELISA using a panel of 857 positive and 689 negative serum samples for CCD. Cross-reactivity was assessed by using 1079 serum samples from patients with unrelated diseases. The purification was efficient since SDS-PAGE indicated the absence of degradation of chimeric proteins. Analyses of CD and DLS showed that the four chimeras had low aggregation tendency in carbonate buffer, pH 9.6. Serological testing showed high values of sensitivity (Sen) and specificity (Spe) for IBMP-8.4 (Sen-99.3%; Spe-100%). The performance of other molecules was satisfactory, being the Sen and Spe values above 94%. Cross-reaction was observed in 0.46%, 0.85%, 0.46% and 0.37% of the samples tested against IBMP-8.1, IBMP-8.2, IBMP-8.3 and IBMP- 8.4, respectively. The results indicate that the chimeras reached the Brazilian Ministry of Health proficiency criteria and may thus be used in diagnostic assays for CCD.

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Recombinant proteins from Toxoplasma gondii have been used in several experimental models, as well as for serodiagnosis of human toxoplasmosis, particularly to differentiate acute from chronic phases of the infection. In the present study, we evaluated the kinetics of IgM, IgA, and IgG isotypes, in addition to IgG1 and IgG3 subclasses, by testing sequential serum samples from patients with acute toxoplasmosis. It was carried out immunoassays by using SAG2A recombinant antigen and soluble antigen of Toxoplasma (STAg). The avidity of IgG1 antibody was assessed using slot blot assay. Additionally, a ratio between IgG1 and IgG3 subclasses (IgG3:IgG1) was determined and evaluated its degree of association with levels of IgM and IgA specific for STAg and the avidity index of IgG1 specific for SAG2A. The results showed a decreasing kinetic profile for SAG2A and STAg for IgM and IgA. The kinetic profile for the IgG antibody was increasing for both antigens. Compared to the avidity for IgG1, it was observed that sera from an early stage showed a low average avidity of IgG1 for SAG2A while the same samples showed intermediate mean avidity of IgG1 when STAg was used as antigen. In a later phase, the average avidity observed was high for STAg and intermediate for SAG2A in the same tested sera suggesting that SAG2A may be a promising tool for the detection of avidity. Associations between IgG3/IgG1 and specific IgM and IgA levels for STAg and the avidity index of specific IgG1 for SAG2A were found, and together these parameters could be used as valuable tools in the diagnosis of human toxoplasmosis, especially in situations when the determination of different phases is critical. / Proteínas recombinantes de Toxoplasma gondii têm sido utilizadas em diversos modelos experimentais, assim como para o diagnóstico sorológico da infecção humana por este parasito, principalmente com o intuito de diferenciar as fases aguda e crônica da toxoplasmose. Neste estudo, foi avaliada a cinética dos anticorpos IgM, IgA ,IgG e subclasses (IgG1 e IgG3) através de imunoensaios realizados em amostras seqüenciais de soros humanos, provenientes de pacientes com toxoplasmose aguda. Estas amostras foram testadas frennte ao antígeno recombinante SAG2A, utilizando-se como paradigma de comparação o antígeno solúvel total de Toxoplasma (STAg). A avidez do anticorpo IgG1 foi avaliada utilizando a metodologia slot-blot. Adicionalmente, a razão entre as subclasses IgG3 e IgG1 (IgG3:IgG1) foi determinada e avaliada quanto ao grau de associação com os níveis de IgM e IgA específicos para STAg e aos índices avidez de IgG1 específicos para SAG2A. Os resultados demonstraram a presença de níveis decrescentes de IgM e IgA para ambos os antígenos utilizados, enquanto que para o isotipo IgG o perfil cinético demonstrou níveis crescentes para ambas preparações antígênicas. Em relação aos índices de avidez para IgG1, foi observado que amostras de soros de uma fase inicial apresentaram baixa avidez média de anticorpos IgG1 dirigidos para SAG2A, enquanto que as mesmas amostras demonstraram avidez média intermediária de IgG1 quando STAg foi utilizado como antígeno. Já em uma fase mais tardia, a avidez média observada foi alta para STAg e intermediária com SAG2A. A razão entre IgG3:IgG1 obtida no primeiro bimestre foi significantemente maior para SAG2A em comparação com STAg. Tomados em conjunto, os resultados obtidos no presente estudo indicam que a proteína recombinantes SAG2A pode se constituir em uma ferramenta efetiva na diferenciação das fases da infecção humana por T. gondii. / Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Introdução: O sistema de grupo sanguíneo Rh é altamente complexo e polimórfico sendo considerado, depois do sistema ABO, o sistema de maior significado clínico na medicina transfusional. Os anticorpos dirigidos contra os seus antígenos estão envolvidos em reações hemolíticas transfusionais, anemia hemolítica autoimune e doença hemolítica do feto e neonatos. O antígeno D é o mais imunogênico dos antígenos do sistema Rh e sua conformação na superfície das hemácias está disposta como um mosaico de diferentes epítopos. Alterações no gene RHD, que expressa a proteína RhD, podem ser detectadas pela variação na intensidade da reação sorológica, utilizando-se diferentes reagentes anti-D. As alterações ocorrem por diversos mecanismos genéticos e são responsáveis pelo aparecimento dos fenótipos D fraco e D parcial. Essas variantes podem apresentar mudanças qualitativas e/ou quantitativas na proteína RhD e estão frequentemente envolvidas em casos de aloimunização anti-D. A identificação e classificação dos fenótipos RhD variantes possuem alta relevância clínicae, portanto, requerem uma rigorosa investigação molecular, uma vez que os testes sorológicos não são capazes de distinguir entre fenótipos D fraco e D parcial. Dessa forma, esclarecer os resultados fracos ou discrepantes encontrados na sorologia e determinar as variantes RhD têm grande importância para a comunidade científica e, principalmente, para a medicina transfusional. Objetivos: Caracterizar, por métodos moleculares, antígenos RhD variantes em amostras de doadores de sangue da Fundação Hemocentro de Brasília que apresentaram fraca expressão do antígeno RhD. Métodos: Foram selecionadas para extração de DNA e investigação molecular de antígenos RhD variantes 103 de 7983 amostras de doadores de sangue que apresentaram tanto resultados negativo, inconclusivo ou fraco (menor que 2 cruzes) na fenotipagem RhD, realizada por técnica em microplacas, como resultado positivo na confirmação de D fraco. Inicialmente, as amostras foram confirmadas quanto à presença do gene RHD por PCR multiplex RHD regiões íntron4/éxon7. Na sequência, técnicas de PCR alelo específico e RFLP foram utilizadas para triar as variantes D fraco tipos 1, 2, 3 e 4 ou DAR, seguido do sequenciamento de éxons específicos do gene RHD para investigação das demais variantes. As amostras foram avaliadas quanto à zigosidade por dosagem do gene RHD, por qPCR, e quanto à presença do Pseudogene (RHD?) e da deleção do gene RHD, por PCR-SSP. Os resultados encontrados foram interpretados em conjunto com os fenótipos RhCE também analisados. Resultados: Das amostras estudadas, 68,93% foram caracterizadas como RhD parcial; 21,36% como RhD fraco; 1,94% não apresentaram polimorfismos nos éxons do gene RHD e 2,91% apresentaram ausência de éxons RHD indicando a presença de um gene híbrido RHD-CE-D não definido. Entre as amostras RhD fraco, 16,5% eram RHD*fraco tipo 3; 5,8% RHD*fraco tipo 2; 1,94% RHD*fraco tipo 1; 0,97% RHD*fraco tipo 38 e 0,97% RHD*fraco tipo 145. Entre as amostras RhD parcial, 33,01% eram RHD*DAR 3.1; 32,04% RHD*DAR 1.2; 1,94% RHD*DVII; 0,97% RHD* DOL 1; 0,97% RHD* DOL 2. Discussão e conclusão: Nossos resultados demonstraram que as reações atípicas nos testes sorológicos para o antígeno RhD são indicativas da presença de variantes RhD. Os alelos RHD*DAR subtipos foram os mais frequentemente encontrados nas amostras dos doadores de Brasília-Distrito Federal. Esses alelos estão associados à aloimunização anti-D. A caracterização de antígenos RhD variantes por meio da associação de testes sorológicos e métodos moleculares visa, principalmente, determinar os fenótipos/genótipos associados à aloimunização anti-D. Essa caracterização é muito importante para aumentar a segurança transfusional, diminuir a administração desnecessária de imunoprofilaxia anti-D em gestantes e pode, também, colaborar com a preservação dos estoques escassos de unidades de sangue RhD negativo. Além disso, o conhecimento sobre a frequência e distribuição das variantes Rh contribui para a compreensão da origem multirracial da região estudada e auxilia no desenvolvimento de futuros protocolos de genotipagem RHD que estabeleçam estratégias de buscas de unidades de sangue compatíveis para pacientes portadores de variantes RhD. / Introduction: The Rh blood group system is highly complex and polymorphic, and considered, after the ABO system, the system of greater clinical significance in transfusion medicine. Antibodies directed against its antigens are involved in hemolytic transfusion reactions, autoimmune hemolytic anemia and hemolytic disease of the fetus and newborn. Antigen D is the most immunogenic of the Rh system and its conformation on the surface of red blood cells is a mosaic of different epitopes. Changes in the RHD gene, which expresses the RhD protein, can be detected by variations in the intensity of the serological reaction by using different anti-D reagents. The changes occur as a result of several genetic mechanisms and are responsible for the appearance of weak D and partial D phenotypes. These variants may exhibit qualitative and/or quantitative changes in RhD protein and are often involved in anti-D alloimmunization. The identification and classification of variant RhD phenotypes are of high clinical relevance. Therefore, they require a rigorous molecular investigation, since serological tests are not able to distinguish between weak D and partial D phenotypes. Thus, clarifying the weak or discrepant results found in serology and determining RhD variants are of great importance to the scientific community and especially to transfusion medicine. Objectives: To characterize, by molecular methods, variant RhD antigens in donor blood samples from the Blood Center Foundation of Brasília which showed poor expression of the RhD antigen. Methods: A total of 103 out of 7983 samples from blood donors who had negative, inconclusive or weak results (less than 2 crosses) in the microplate technique and also tested positive in the weak D confirmation test were selected for DNA extraction and molecular investigation of the RhD antigen. Initially, the presence of the RHD gene was confirmed in the samples by PCR multiplex RHD intron4/exon7 regions. Then, allele specific PCR and RFLP techniques were used to screen for weak D variant types 1, 2, 3 and 4 or DAR, followed by sequencing of specific exons of the RHD gene to investigate the other variants. Samples were evaluated for zygosity by RHD gene dosage by qPCR and for the presence of Pseudogene (RHD?) and RHD gene deletion by PCR-SSP. The results were interpreted in conjunction with the RhCE phenotypes also analyzed. Results: Of all samples studied, 68.93% were characterized as partial RhD; 21.36% as weak RhD; 1.94% had no polymorphisms in the RHD gene exons and 2.91% had no RHD exons indicating the presence of an undefined RHD-CE-D hybrid gene. Among the weak RhD samples, 16.5% were weak RHD*type 3; 5.8% RHD * weak type 2; 1.94% RHD*weak type 1; 0.97% RHD*weak type 38 and 0.97% RHD* weak type 145. Among the partial RhD samples, 33.01% were RHD*DAR 3.1; 32.04% RHD*DAR 1.2; 1.94% RHD*DVII; 0.97% RHD*DOL 1; 0.97% RHD*DOL 2. Discussion and conclusion: Our results demonstrated that atypical reactions in serological tests for the RhD antigen are indicative of the presence of RhD variants. The RHD*DAR subtype alleles were the most frequently found in donor samples from Brasília - Distrito Federal. These alleles are associated with anti-D alloimmunization. The characterization of variant RhD antigens through the association of serological tests and molecular methods mainly aims to determine the phenotypes/genotypes associated with anti-D alloimmunization. This characterization is very important to increase transfusion safety, reduce unnecessary administration of anti-D immunoprophylaxis in pregnant women and may also contribute to the preservation of scarce RhD negative blood units. In addition, knowledge about the frequency and distribution of Rh variants contributes to the understanding of the multiracial origin of the studied region, and assists in the development of future RHD genotyping protocols that establish compatible blood unit search strategies for RhD variant patients.

A artrite reumatóide (AR) representa uma doença inflamatória crônica de alta prevalência, para a qual ainda não foi estabelecido um tratamento satisfatório. Os objetivos deste estudo foram: 1) investigar o efeito terapêutico da hemopressina e da depleção de neuropeptídeos sobre a artrite induzida por antígeno (AIA); 2) padronizar este modelo em duas linhagens de ratos: Wistar e Sprague Dawley (SD). Ambas as linhagens, exibiram sinais equipotententes de edema e dor; entretanto, a perda de peso, o infiltrado celular e a produção de citocinas foi maior no rato SD, sugerindo uma maior susceptibilidade do SD. O tratamento com hemopressina inibiu esses sinais inflamatórios, mas não preveniu a perda de peso e a gênese de citocinas. Em contraste, a depleção de neuropeptídeos falhou em suprimir os sinais da AIA, excluindo a participação de mecanismos neurovasculares na ação da hemopressina. Embora ainda não estabelecido o mecanismo de ação do efeito anti-artrítico da hemopressina, este achado inédito sugere uma alternativa promissora para o tratamento dessa doença. / Arthritis and other rheumatic conditions are among the most prevalent diseases worldwide and the most frequent cause of disability. There are many treatment options, but an effective treatment has not been established. Our aims were to investigate a possible anti-inflammatory effect of hemopressin and neuropeptide depletion on Met-BSA induced arthritis (AIA); and to establish a suitable rat strain between Wistar and Sprague Dawley (SD) for the study. The classical signs of AIA such as oedema and pain were similar in both strains. But, the cell influx and cytokines production were higher in SD, thus suggesting a higher susceptibility for this strain. The treatment of rats with hemopressin greatly reduced the oedema, pain and cell influx, but did not prevent the body weight loss and cytokines. Depletion of neuropeptides failed to reduce the AIA signs, thus excluding a neurogenic component on hemopressin-induced effect. In conclusion, our findings reveal a potential alternative treatment for arthritis, although the mechanism of action for this peptide is not clear.

Streptococcus pneumoniae é o patógeno causador de diversas doenças com alta mortalidade e morbidade, como meningite e pneumonia. As vacinas disponíveis baseiam-se na resposta contra o polissacarídeo capsular (PS), porém possuem elevado custo e cobertura limitada aos sorotipos vacinais. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da imunização nasal com PspAs recombinantes de família 1 (rPspA1 e rPspA2) e de família 2 (rPspA3, rPspA4 e rPspA5) em um modelo de cocolonização da nasofaringe de camundongos, utilizando isolados que expressam diferentes PspAs (PspA1 ao PspA4). Esse modelo visa analisar a eficácia da vacinação frente à exposição a diferentes pneumococos, uma situação comum, especialmente em crianças. Os experimentos deste projeto avaliaram a colonização com misturas de isolados dos sorotipos 6B e 23F e expressando PspA1, PspA2, PspA3 ou PspA4, mostrando uma análise ampla da cobertura vacinal contra pneumococo das diferentes formulações contendo as variantes do antígeno PspA e a importância desse antígeno para o desenvolvimento de uma nova vacina. / Streptococcus pneumoniae is the cause of several diseases with high mortality and morbidity, such as meningitis and pneumonia. The available vaccines are based on the response against the capsular polysaccharide (PS), but they have a high cost and coverage restricted to the vaccine serotypes. The purpose of this study was to evaluate the efficacy of nasal immunization with recombinant PspAs from family 1 (rPspA1 and rPspA2) and from family 2 (rPspA3, rPspA4 and rPspA5) in a model of co-colonization of the mouse nasopharynx, using isolates expressing different PspAs (PspA1 to PspA4). This model aims to analyze the effectiveness of vaccination upon exposure to different pneumococci, a common situation, especially in children. The experiments in this project assessed colonization with mixtures of isolates of serotypes 6B and 23F, expressing PspA1, PspA2, PspA3 or PspA4, showing a wide vaccination coverage analysis of different formulations containing the PspA variants against pneumococcus and the importance of this antigen to the development of a new vaccine.

Moléculas HLA-DR e co-estimulatórias tem papel central na função imune de leucócitos. Diferentes emulsões lipídicas (EL) podem alterar funções imunes de leucócitos. Para avaliar os efeitos de diferentes EL sobre a expressão de moléculas HLA-DR, CD80 e CD86 presentes na superfície de monócitos/macrófagos (MO/M?) e CD28 e CD152 presentes na superfície de linfócitos T auxiliares (L? CD4) humanos, células mononucleares do sangue periférico de voluntários saudáveis (n=10) foram separadas com uso de Ficoll Hypaque (d=1,007) e incubadas por 48 horas (MO/M?) e 72 horas (L?) em meio RPMI 1640 acrescidas ou não (controle negativo) de diferentes EL comerciais ou misturas experimentais na concentração de 1mg/mL. De acordo com o tipo da emulsão lipídica adicionada ao meio de cultura, as células foram divididas em seis grupos experimentais: a) Controle negativo - células mononucleares cultivadas sem o acréscimo de EL b) TCLn-6 - células mononucleares cultivadas com EL a base de óleo de soja rica em ácidos graxos poliinsaturados tipo n-6 (AGPI n-6), c) TCLn-6/TCLn-3 - células mononucleares cultivadas com mistura experimental contendo 80% da EL a base de óleo de soja e 20% de EL a base de óleo de peixe rica em AGPI tipo n-3, d) TCM/TCLn6 - células mononucleares cultivadas com EL composta por 50% óleo de coco, rico em triglicérides de cadeia média e 50% de óleo de soja, e) TCM/TCLn-3 - células mononucleares cultivadas com mistura experimental contendo 80% de EL composta por 50% óleo de coco e 50% de óleo de soja e 20% de EL a base de óleo de peixe, f) SMOF - células mononucleares cultivadas com a nova EL contendo 30% de óleo de soja, 30% de triglicérides de cadeia média, 25% de óleo de oliva e 15% de óleo de peixe. As células mononucleares foram ativadas pelo uso de 10?g/mL de fitohemaglutinina. A expressão das moléculas de superfície foi analisada por citometria de fluxo. A porcentagem de fluorescência, que indica o número de células expressando as moléculas em estudo e a intensidade de fluorescência, que indica de forma indireta o número de moléculas expressas por células, foram medidas. Os resultados obtidos foram submetidos à teste estatístico Friedman e pós-teste Student-Newman-Keuls, adotando-se nível de significância de p<0,05. Devido às diferenças na expressão basal dos doadores, os resultados de intensidade de fluorescência foram transformados em porcentagem relativa ao controle basal (Basal=100). Nos grupos TCLn-6, TCLn-6/TCLn-3, TCM/TCLn-6, TCM/TCLn-3 e SMOF, a intensidade de fluorescência de moléculas HLA-DR expressas na superfície de monócitos/macrófagos diminuiu (medianas = 87,6; 84,0; 81,0; 85,0 e 80,0 respectivamente) em relação ao controle negativo (CN) (mediana=100,0) p=0,01. Todos os grupos tratados com EL aumentaram o número de linfócitos T auxiliares expressando moléculas CD28 (medianas = 90,9; 90,4; 91,5; 92,6 e 90,1 respectivamente) em relação ao CN (mediana=82,8) p=0,001 e também o número de moléculas CD152 expressas por células na superfície de linfócitos T auxiliares (medianas = 120,6; 108,8; 127,7; 114,6 e 121,3 respectivamente) em relação ao CN (mediana=100,0), p=0,03. Não foram encontradas diferenças estatísticas na expressão de moléculas CD80 e CD86 na superfície de monócitos/macrófagos cultivados com diferentes EL. Ainda não foram encontradas diferenças no número de linfócitos T auxiliares expressando CD152. Finalmente a expressão por células de moléculas CD28 na superfície de linfócitos T auxiliares também não mostrou alteração significante com as diferentes emulsões lipídicas. Conclusão: Emulsões lipídicas parenterais in vitro, diminuem a expressão de moléculas HLA-DR na superfície de monócitos/macrófagos e aumentam a expressão de moléculas CD28 e CD152 na superfície de linfócitos T auxiliares humanos. Estas alterações podem ser um dos mecanismos pelos quais as EL modulam funções de células imunes / HLA-DR and co-stimulatory molecules play a central role on leucocytes immune function. Different lipid emulsions (LE) may change leucocytes immune function. It is of interest to study the effect of different LE on HLA-DR and costimulatory molecules expression. To access the effect of LE on the HLA-DR, CD80 and CD86 expression on monocytes/macrophages (MO/MØ) surface and CD28 and CD152 (CD80/CD86 co-stimulatory molecules receptor) expression on human T helper lymphocytes (LØ CD4) surface we obtained mononuclear cells from peripheral blood of healthy volunteers (n=10) by using ficoll hypaque (d=1.077). The cells were cultured for 48 hours (MOMØ) and 72 hours (LØ CD4) and incubated with RPMI 1640 medium without (negative control) or added with 1mg/mL of commercial or experimental mixtures of five LE. Groups: a) NC - negative control without LE, b) LCTn-6 - n-6 polyunsaturated fatty acids (PUFA) rich LE ( soybean oil), c) LCTFO - 80% of LCT and 20% of n-3 PUFA rich LE (FO) (fish oil), d) MCT/LCT - LE containing 50% of medium chain triglycerides and 50% of n-6 PUFA rich LE, e) MCT/LCTFO - 80% of MCT/LCT LE and 20% of FO LE and f) SMOF - a new LE containing 30% of soybean oil, 30% of medium chain triglycerides, 25% of olive oil and 15% of fish oil. Mononuclear cells were activated by using 10?g/mL of phytohemagglutinin. Surface molecules expression was measured by flow cytometry. Percentage and intensity of fluorescence were recorded and the data were submitted to Friedman statistical test and Student-Newman-Keuls post test (p<0,05). Due the differences in basal expression between donors, prior to statistical tests, data from intensity of fluorescence were transformed of percentage relative of basal expression (where basal=100). All LE groups LCT, LCTFO, MCT/LCT, MCT/LCTFO and SMOF decreased HLA-DR intensity of fluorescence on monocytes/macrophages (mean= 87.6, 84.0, 81.0, 85.0, and 80.0 respectively) in relation to negative control (NC) (mean=100.0) cultured without LE (p=0,01). All LE groups increased the percentage of lymphocytes expressing CD28 (means=90.9, 90.4, 91.5, 92.6 and 90.1 respectively) in relation to control (mean=82.8) p=0,001 and CD152 intensity of fluorescence on lymphocytes cultured with all different LE (mean=120,6; 108,8; 127,7; 114,6 and 121,3 respectively) in relation to NC (mean=100,0), p=0,03. No significant differences were found on CD80 and CD86 expression on monocytes/macrophages surface, CD28 intensity of fluorescence and the percentage of lymphocytes expressing CD152 on lymphocytes cultured with the different studied LE. Conclusion: In vitro parenteral LE decreased HLA-DR expression on human monocytes/macrophages surface and increase co-stimulatory molecules receptor expression on human lymphocytes surface. These changes could be one of the mechanisms of LE modulation of immune cells functions

Mucinas são glicoproteínas altamente O-glicosiladas cuja principal característica estrutural é a presença de -GalNAc ligado aos resíduos hidroxilados de serina e treonina. Em alterações celulares malignas, esse núcleo é exposto como um antígeno carboidrato associado a tumor (Tn) e sua alta expressão em células cancerosas faz dele um alvo para o desenvolvimento de abordagens contra o câncer. Mucinas de Trypanosoma cruzi, agente etiológico da Doença de Chagas, apresentam -GlcNAc ligado à apoproteína, envolvido no processo de sialilação catalisado pela enzima fundamental trans-sialidase (TcTS) mediadora da invasão celular. Sendo o componente glicosídico do antígeno Tn um análogo estrutural e funcional de -GlcNAc, pode influenciar na atividade de TcTS, alvo terapêutico para a Doença de Chagas. Neste contexto, foram sintetizados glicopeptídeos lineares e cíclicos derivados de GalNAc mimetizando sua ocorrência em mucinas tumorais e parasitárias. Doadores e aceptores glicosídicos convenientemente protegidos foram preparados e ligados entre si com -estereosseletividade por dois métodos de glicosilação: perclorato/carbonato de prata (promotor clássico de referência) e brometo de mercúrio (promotor pela primeira vez utilizado para doadores glicosídicos do tipo azidocloreto). Os blocos de glicoaminoácidos obtidos foram acoplados a um segundo resíduo, formando glicodipeptídeos lineares inéditos, que originaram glicodicetopiperazinas funcionalizadas com -GalNAc, igualmente inéditas a literatura, mediante a etapa de desproteção/ciclização. Glicoaminoácidos intermediários contendo -GalNAc foram desprotegidos e submetidos a ensaios de cinética enzimática em TcTS, apresentando expressiva inibição de 57% a 79% da atividade da enzima. Os mesmos blocos foram avaliados quanto à citotoxicidade em células tumorais, apresentando entre 73% e 79% de morte celular na linhagem Jurkat e cerca de 30% na linhagem B16F10. Os resultados ensaios biológicos sugerem que os compostos de interesse preparados podem atuar como inibidores da enzima TcTS e agentes de citotoxicidade seletiva em células tumorais. / Mucins are heavily O-glycosylated glycoproteins which major feature being the presence of -GalNAc bound to hydroxylated protein residues of serine and threonine. In malignant cell transformation this core is exposed as a tumor associated carbohydrate antigen (Tn), and its high-level expression in cancer cells turns it into a target for developing anticancer approaches. Mucins from Trypanosoma cruzi, aetiologic agent of Chagas Disease, display -GlcNAc linking glycans to the apoprotein, involved in the sialilation process catalized by tran-sialidase enzyme (TcTS), essential cell invasion by the parasite. Being Tn antigen an structural and functional analogue of -GlcNAc, it may interfere on TcTS, a therapeutic target Chagas Disease. In this context, linear and cyclic glycopeptides containing GalNAc were synthesized, mimicking their natural occurrence in tumoral and parasite mucins. Glycosidic donors and acceptors, conveniently protected were prepared and bound to each other with -stereoselectivity, though two glycosylation methods: silver perchlorate/carbonate (classical reference promoter) and mercuric bromide (first used as a promoter for azidochloride donors). Glycoaminoacids building blocks obtained were coupled to a second residue, furnishing novel linear glycopeptides, which generated glicodiketopiperazines functionalized with -GalNAc, equally unpublished, upon deprotection/cyclization step. Intermediate -GalNAc-containing glycoaminoacids were deprotected and subjected to kinetic enzymatic assay on TcTS, showing expressive enzyme activity inhibition from 57% to 79%. The same compounds were assessed for cytotoxicity on tumoral cells, showing from 73% to 79% of death for Jurkat cells and about 30% for B16F10 cells. Biological results sugest that the prepared compounds of interest may act as TcTS enzyme inhibitors and selective cytotoxic agents on tumoral cells.