Submitted by Gisele Mara Hadlich (gisele@ufba.br) on 2017-10-25T17:47:02Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Eileen Rocio Niño.pdf: 7543550 bytes, checksum: 4798370bfcbc8992d260a652f2062f9b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-25T17:47:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Eileen Rocio Niño.pdf: 7543550 bytes, checksum: 4798370bfcbc8992d260a652f2062f9b (MD5) / O presente trabalho é derivado do subprojeto 3 intitulado “Calibração de Parâmetros Ópticos e Moleculares de Maturação de Rochas Geradoras Não Convencionais”, do Projeto “Programa: Formação do Centro de Excelência em Geoquímica do Petróleo do Instituto de Geociências da Universidade Federal da Bahia (UFBA) – GEOQPETROL”, em associação com a BG Brasil como apoiadora financeira, através do convênio BG E&P Brasil Ltda – UFBA – FAPEX. A Bacia do Parnaíba está situada na região Nordeste do Brasil, compreendendo uma área de aproximadamente 665.888 Km2. Nessa bacia os primeiros poços comerciais de gás foram descobertos em 2010, e atualmente é a quinta maior produtora de gás natural do Brasil. Esta Dissertação busca ampliar o conhecimento geoquímico para a geração de hidrocarbonetos da Bacia do Parnaíba e, portanto aumentar sua atratividade exploratória. O principal objetivo deste trabalho foi determinar a quantidade, qualidade e maturidade termal da matéria orgânica das 27 amostras de rocha coletadas em dois afloramentos da Formação Pimenteiras (Devoniano), na borda oeste da Bacia do Parnaíba. Devido à relevância geoquímica, foram apresentados os resultados de biomarcadores saturados obtidos do afloramento com 11 amostras, e correlacionados a fim de avaliar as variações relativas do nível do mar. Para tanto, foram realizadas análises de Carbono Orgânico Total (COT), enxofre total, pirólise Rock Eval e isótopos estáveis de carbono nas amostras de rocha. A matéria orgânica solúvel das rochas foi extraída para submetê-las a análises de cromatografia gasosa com detector de ionização em chama e com detector seletivo de massas. Os resultados indicaram a presença de matéria orgânica mista com maior conteúdo terrestre para todas as amostras da Formação Pimenteiras. Entretanto, a matéria orgânica marinha é predominante nas amostras que representam as tendências de transgressão marinha. Além disso, para os afloramentos estudados da Formação Pimenteiras foi verificada a imaturidade das amostras. Com relação ao potencial gerador de hidrocarbonetos, entre 75% e 77% das amostras apresentaram potencial para gerar gás, os percentuais restantes são os correspondentes às amostras com potencial de gerar óleo ou gás. Análises nos extratos da rocha foram realizadas para as amostras do afloramento que evidenciou diferenças notáveis no paleoambiente deposicional, associadas à relação de δ13C e COT. Por conseguinte, foram caraterizadas 11 amostras de rocha através de biomarcadores saturados indicadores da matéria orgânica e do paleoambiente deposicional, com base nas razões de: terpanos tricíclicos C19/C19+C23 e C20/C21, terpanos tricíclicos/17α(H)-hopanos, hopanos/esteranos, TPP/TPP+Dia, gamacerano/C30 hopano e da distribuição de esteranos regulares, junto com a distribuição de n-alcanos e isoprenóides. Os resultados obtidos permitiram evidenciar dois grupos de amostras: o grupo 1 apresentou características de deposição em paleoambiente lacustre salobre/salgado e o grupo 2 mostrou uma significativa contribuição marinha. Esses resultados representaram um excelente exemplo das tendências transgressivas do mar ocorridas no período Devoniano na Bacia do Parnaíba. Este trabalho sugere que através dos biomarcadores saturados, é possível realizar uma reconstrução paleoambiental, indicando a curva relativa do nível do mar em um afloramento.

Submitted by Gisele Mara Hadlich (gisele@ufba.br) on 2017-11-08T17:51:15Z No. of bitstreams: 1 DISSERTA_KAREN_08jun_revGisele.pdf: 3540903 bytes, checksum: 17ef239b13979c2189a27731fa56c0f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-08T17:51:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTA_KAREN_08jun_revGisele.pdf: 3540903 bytes, checksum: 17ef239b13979c2189a27731fa56c0f9 (MD5) / O presente trabalho faz parte do Projeto 4 – Recuperação das Informações Geoquímicas de um Petróleo Altamente Degradado Através da Hidropirólise de seus Asfaltenos, inserido no Programa Formação do Centro de Excelência em Geoquímica do Petróleo do Instituto de Geociências da Universidade Federal da Bahia (UFBA) – GEOQPETROL, com apoio financeiro da BG Brasil E&P. No âmbito das pesquisas geológicas, a Bacia Sedimentar do Paraná é a maior Bacia Brasileira em extensão territorial e está associada a dois Sistemas-Petrolíferos: Irati - Rio Bonito/Pirambóia e Ponta-Grossa – Itararé/Rio Bonito. Tendo como foco principal o estudo investigativo do sistema petrolífero Irati-Pirambóia, os procedimentos analíticos aplicados neste trabalho buscaram correlações geoquímicas através da análise de rochas, betumes e óleos (folhelhos da Fm. Irati e arenitos asfálticos da Fm. Pirambóia), próximos a borda leste desta bacia, de forma a ampliar os conhecimentos envolvendo os processos de biodegradação dos óleos dos reservatórios. Esta pesquisa visou ainda identificar quais amostras de rochas se encontram em estágios mais avançados de degradação, de modo a desenvolver posteriormente o procedimento de hidropirólise dos seus asfaltenos, recuperando dessa forma, algumas das informações geoquímicas perdidas devido aos processos intempéricos sofridos pelos óleos. Em laboratório, foram analisadas 19 amostras de rochas de acordo com a seguinte sequência analítica:Pirólise Rock-Eval, Coluna de Purificação e Fracionamento, Óleo Total por Cromatografia Gasosa (CG) acoplada ao sensor DIC (Detector de Ionização de Chamas), Biomarcadores Saturados por Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massas (CG-EM) e análise isotópica do δ13C por Espectrômetro de Massas acoplado com Cromatografia Gasosa. Os resultados obtidos foram avaliados e interpretados geoquimicamente, baseados nos indicadores de fonte da matéria orgânica, de condições paleoambientais e maturação, sempre considerando e analisando os efeitos da biodegradação de cada amostra. De uma forma geral e qualitativa, os biomarcadores demonstraram que os sedimentos da Fm. Irati foram depositados em ambiente siliciclástico marinho evaporítico. A rocha geradora demonstrou querogênio do Tipo I, porém os valores estão depletados pela maturidade causada por rochas intrusivas (Serra-Geral). Os biomarcadores apresentaram diferentes níveis de biodegradação, inclusive severos. Este fator associado aostress térmico sofrido pelo óleo durante sua geração, dificultaram a determinação e interpretação dos parâmetros geoquímicos utilizados em estudos de correlação rocha-óleo e óleo-óleo. Portanto, para recuperação das informações geoquímicas perdidas, indica-se submeter as amostras de arenitos do ponto 6 – afloramento da Formação Pirambóia (Fazenda Betumita, cidade de Anhembi/SP) à craqueamento térmico através da hidropirólise de seus asfaltenos. Esse procedimento possibilitará a geração de petróleo contendo biomarcadores ocluídos e informações moleculares originais do óleo.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2014-01-21T12:33:06Z No. of bitstreams: 1 T_54.pdf: 3536931 bytes, checksum: 59552db3345f3f24dce1136cf6f46d7c (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-21T12:33:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 T_54.pdf: 3536931 bytes, checksum: 59552db3345f3f24dce1136cf6f46d7c (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou / Apesar do grande esforço na tentativa de controlar a esquistossomose, esta doença continua sendo uma das mais prevalentes no mundo. Novas intervenções são uma prioridade importante para a eliminação da esquistossomose, uma vez que o controle da doença tem sido baseado essencialmente na quimioterapia, a qual não previne a reinfecção. O desenvolvimento de uma vacina para a esquistossomose para proteção a longo prazo, bem como de um novo teste de diagnóstico, constituirá um grande avanço para o controle da doença. A compreensão da resposta imunológica associada com os estados de infecção/proteção pode constituir a base da descoberta de novos antígenos biomarcadores para vacina e diagnóstico para a esquistossomose. Recentes avanços na área pós-genômica têm permitido uma busca mais racional por biomarcadores. Inicialmente, eletroforese bidimensional (2-DE) de extrato proteico total de diferentes fases de desenvolvimento do Schistosoma mansoni foi realizada, obtendo-se um perfil de separação de spots proteicos com boa resolução com os extratos de todas as fases, mas com um perfil distinto entre eles. Posteriormente, proteínas do extrato proteico de verme adulto, total e de tegumento, foram separaradas por 2-DE e, então, incubadas com amostras de soro de indivíduos infectados (INF) e não infectados de área endêmica (NE) e de indivíduos não infectados de área não endêmica (NI) para esquistossomose em experimento de Western-blotting bidimensional (2D-WB). No total, 47 proteínas imunogênicas foram identificadas por espectrometria de massas. Embora a maioria dos spots proteicos sejam imunogênicos aos diferentes pools de soro, nove spots proteicos reagiram exclusivamente com o pool de soro INF e um com o pool de soro NE. Algumas glicoproteínas foram identificadas no extrato proteico total de verme adulto de S. mansoni usando o método Periodic Acid-Schiff e lectina-blotting. No entanto, o tratamento com periodato/borohidreto indicou que a porção glicídica não tem influência sobre a reatividade das proteínas aos diferentes pools de soro utilizados nos experimentos de 2D-WB. Western-blotting de duas proteínas recombinantes, selecionadas dos experimentos de 2D-WB, mostrou um perfil de reconhecimento pelos diferentes pools de soro semelhante ao das proteínas nativas. Dentre as proteínas imunogênicas identificadas nos experimentos de 2D-WB, 27 foram expressas in vitro com sucesso, as quais serão utilizadas em experimentos futuros em um microarranjo de proteínas. A associação de eletroforese bidimensional e Western-blotting permitiu a seleção de um painel de antígenos proteicos capazes de distinguir os estados de suscetibilidade e resistência à esquistossomose mansônica. Estes antígenos poderão ser utilizados como biomarcadores no desenvolvimento de uma vacina e/ou de um novo teste diagnóstico para a doença. / Despite intensive efforts towards schistosomiasis control, the disease is still one of the most prevalent in the world. New interventions are a high priority for the elimination of schistosomiasis, since the disease control has been essentially based on the use of chemotherapy, which does not prevent re-infection. The development of a long term protection and an effective diagnostic assay would be a major breakthrough for schistosomiasis control. Understanding which aspects of the immune responses are associated with infection/protection status may constitute the basis for the understanding of a successful vaccine and could also indicate new diagnostic candidates. Progress on post-genomic technologies resulted in the development of rational and global approaches for the discovery of new biomarkers. Initially, two-dimensional electrophoresis (2-DE) of different developmental stages protein extracts of Schistosoma mansoni were conducted. It was obtained a good separation pattern of the spots that was distinguishable in all the stages evaluated. Subsequently, two-dimensional electrophoresed S. mansoni adult worm protein extracts, total and tegumental, were probed with pooled sera of infected (INF), non-infected individuals from endemic area (NE) and non-infected individuals from non-endemic schistosomiasis area (NI) in a two-dimensional Western-blotting experiment (2D-WB). A total of 47 immunoreactive proteins were identified by mass spectrometry. Although most of the protein spots were immunoreactive to all of the serum pools, nine reacted exclu sively with the INF serum pool, and one with the NE serum pool. Glycoproteins were identified in the S. mansoni adult worm total protein extract using Periodic Acid–Schiff base method and lectin-blotting. However, periodate/borohydride treatment indicated that the glycoprotein glycan portion had no influence on the immunoreaction obtained in the 2D-WB experiments using different serum pools. Western-blotting of two 2D-WB selected recombinant proteins showed a similar serum recognition profile of the native protein. A total of 27 immunoreactive proteins identified by 2D-WB approach were successfully in vitro expressed and will be used in future experiments of protein microarray. The association of two-dimensional electrophoresis and Western-blotting assays allowed the selection of a protein antigens panel capable to diagnose the schistosomiasis mansoni susceptibility/resistance status. These antigens may be used as biomarkers for the development of a vaccine and/or a new diagnostic test for the disease

A Doença de Gaucher (DG) é a doença lisossômica de depósito mais frequente, sendo causada pela deficiência da atividade da enzima β-glicosidase ácida (GBA), que é responsável pela degradação de glicosilceramidas nos lisossomos. Seu déficit resulta no acúmulo intracelular de glicosilceramidas formando as chamadas Células de Gaucher. A DG é dividida em três grupos baseada na ausência (tipo 1) ou presença e gravidade de envolvimento do sistema nervoso central (tipo 2 e 3). A demonstração da deficiência da atividade da GBA é considerada o método padrão ouro para o diagnóstico, sendo complementada pela medida da atividade da enzima quitotriosidase (QT), que é considerada um biomarcador para a DG. Embora a função exata das células de Gaucher ainda permaneça desconhecida, acredita-se que elas secretam fatores que induzem resposta inflamatória e a produção de espécies reativas. Sabe-se que a instituição do tratamento por reposição enzimática (TRE) diminui significativamente a atividade da QT, porém essa diminuição não chega até os níveis de normalidade. A deficiência da GBA na DG também induz uma cascata de eventos, culminando secundariamente na produção de espécies reativas. Visto isso, o objetivo deste trabalho foi mensurar os níveis de citocinas próinflamatórias (IL-6, TNF-α e IL-17a), proteína S100B em pacientes com DG com e sem tratamento por reposição enzimática e relacioná-los com a atividade da QT, e também, determinar o nível de alguns marcadores de dano oxidativo como substancias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), conteúdo de carbonilas, atividade da catalase (CAT) e superoxido dismutase (SOD) e mensurar o conteúdo total de sulfidrilas (SH), marcadores da defesa antioxidante, visando um método auxiliar para o diagnóstico e acompanhamento do tratamento destes pacientes. Observamos que os níveis de IL-6 em pacientes DG sem tratamento foi duas vezes maior do que os encontrados nos indivíduos saudáveis e que a instituição do TRE provoca uma diminuição significativa nos níveis de IL-6 no soro dos pacientes. Também foi observada uma correlação positiva entre os níveis de IL-6 e a atividade da QT, ou seja, quanto maior a atividade da QT, maior os níveis de IL-6 no soro de pacientes em tratamento. Já as outras citocinas pró-inflamatórias mensuradas, TNF-α e IL-17a, não apresentaram diferença significativa entre os indivíduos saudáveis e os pacientes Gaucher, bem como a medida da proteína S100B. Nos fatores oxidativos observamos alterações na CAT, SOD e sulfidrilas, o que sugere que pacientes DG sofrem mudanças na produção de espécies reativas quando comparados aos indivíduos normais. Este aumento na CAT, SOD e sulfidrilas poderia estar relacionado com a prevenção do aumento do peróxido de hidrogênio e a prevenção de danos lipídicos. No entanto, os outros três parâmetros (TBARS, carbonila e relação SOD / CAT) não demonstraram uma diferença significativa entre os grupos. Com isso, concluímos que a IL-6 mostrou-se a melhor ferramenta a ser utilizada juntamente com a QT para auxiliar no diagnóstico e acompanhamento do tratamento de pacientes DG.

Tem sido postulado que os distúrbios psiquiátricos, incluindo a esquizofrenia, estão relacionados com uma redução da expressão do fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF). Nos últimos anos um número crescente de estudos clínicos que avaliaram BDNF no sangue (soro ou plasma obtido do sangue, nesta tese também designado como “periférico”) de indivíduos com esquizofrenia, transtorno bipolar e transtorno depressivo maior foram publicados. Nossos objetivos nesta tese foram verificar se o BDNF periférico está diminuído na esquizofrenia em conjunto com as sintomatologias positiva e negativa, e se aumenta posteriormente no decurso de um tratamento com antipsicóticos. Para isso, realizamos duas metanálises distintas de BDNF periférico em esquizofrenia, incluindo um total de 41 estudos e mais de 7.000 participantes. Níveis periféricos de BDNF no soro e no plasma estão moderadamente reduzidos em pessoas com esquizofrenia quando comparados com controles saudáveis a partir do primeiro episódio psicótico, e esta diminuição é acentuada com a progressão da doença. Além disso, a diminuição do BDNF periférico não se correlaciona com a gravidade dos sintomas positivos e negativos No plasma, mas não no soro, os níveis periféricos de BDNF são sempre aumentados após o tratamento com antipsicóticos, independentemente da resposta do paciente ao medicamento. Depois, queríamos verificar a especificidade dos níveis de BDNF no soro e plasma nos transtornos psiquiátricos maiores. Para isso, foi realizada uma metanálise comparativa de 99 estudos de BDNF no soro e plasma na esquizofrenia, transtorno bipolar e transtorno depressivo maior, e verificamos que os níveis periféricos de BDNF estão igualmente reduzidos em todas essas condições, mas que ele retorna ao normal durante a fase de remissão de transtorno bipolar e transtorno depressivo maior. Em conclusão, há evidências de que a esquizofrenia está relacionada com níveis alterados de BDNF periférico. Se estes níveis de BDNF estão causalmente relacionados com o desenvolvimento da esquizofrenia ou se eles são apenas um epifenômeno nesta patologia ainda precisa ser determinado. Além disso, os níveis de BDNF no soro e plasma são inespecíficos para a esquizofrenia, transtorno bipolar e transtorno depressivo maior, mas podem ser considerados um biomarcador de atividade de doença nessas condições. / It has been postulated that psychiatric disorders, including schizophrenia, are related with a lower expression of brain-derived neurotrophic factor (BDNF). In the last few years an increasing number of clinical studies assessing BDNF in serum and plasma of subjects with schizophrenia, bipolar disorder, and major depressive disorder have been published. The aims in this thesis were to verify if peripheral BDNF is decreased in SZ in tandem with positive and negative symptomatology, and if it increases subsequently in the course of antipsychotic treatment. For this, we conducted two distinct meta-analyses of peripheral BDNF in SZ including a total of 41 studies and more than 7,000 participants. Peripheral BDNF levels in serum and plasma are moderately reduced in persons with SZ when compared to controls following the first episode of psychosis, and this decrease is accentuated with the progression of the disorder. Mostly notably, the extent peripheral BDNF level decrease does not correlate with the severity of positive and negative symptoms. In plasma, but not serum, peripheral BDNF levels are always increased after antipsychotic treatment irrespective of the patient’s response to the medication After, we wanted to verify the specificity of serum and plasma BDNF levels in major psychiatric disorders. For this, we conducted a comparative meta-analysis of 99 studies of serum and plasma BDNF in schizophrenia, bipolar disorder, and major depressive disorder, and verified that peripheral BDNF levels are equally reduced in all these conditions, but that it returns to normal during the remission phase of bipolar disorder and major depressive disorder. In conclusion, there is compelling evidence that SZ is related to altered levels of peripheral BDNF. Whether these BDNF levels are causally related to the development of SZ or if they are merely a pathology epiphenomenon remains to be seen. In addition, serum and plasma BDNF levels are unspecific for schizophrenia, bipolar disorder and major depressive disorder, but can be considered a biomarker of disease activity in these conditions.

O exercício físico vem sendo cada vez mais utilizado como uma intervenção terapêutica para a depressão. Diversos estudos mostram a sua eficácia em episódios depressivos mais leves. Sua eficácia em episódios mais graves como em indivíduos hospitalizados ainda não foi suficientemente estudada. Faltam informações também sobre a existência de fatores que possam predizer ou moderar o efeito antidepressivo do exercício como também informações sobre os potenciais mecanismos ou correlatos biológicos que possam estar associados aos efeitos antidepressivos do exercício em indivíduos deprimidos. A presente tese consiste de quatro artigos, sendo o primeiro uma revisão sistemática sobre os potenciais fatores preditores ou moderadores do efeito antidepressivo do exercício, o segundo, uma revisão sistemática sobre os potenciais mecanismos ou correlatos biológicos do exercício, o terceiro, um ensaio clínico randomizado avaliando os efeitos do exercício físico em pacientes internados com depressão grave, e o ultimo, uma análise dos efeitos do exercício em marcadores de neurogênese e estresse oxidativo. Os resultados encontrados na primeira revisão sugerem que existem vários potenciais candidatos a preditor ou moderador do efeito antidepressivo do exercício físico; entretanto, a literatura não é suficientemente robusta para sugerir de forma consistente sua existência. De acordo com a segunda revisão, o exercício pode potencialmente promover respostas agudas em diversos biomarcadores. No entanto, as respostas crônicas em adaptação ao treinamento parecem ser menos consistentes. Cabe ressaltar que a literatura apresenta diversas limitações importantes, impedindo conclusões mais sólidas, tanto para as respostas agudas quanto para as crônicas. Com o ensaio clinico, evidenciamos que o exercício físico pode ser uma intervenção terapêutica eficaz na redução dos sintomas depressivos e na melhora de alguns domínios da qualidade de vida de participantes hospitalizados com depressão grave. Enquanto no ultimo artigo, utilizando uma amostra do ensaio clinico, foram encontradas diminuições nos níveis séricos de marcadores de stress oxidativo, porem, não houve alterações nos níveis de marcadores de neurogênese. A presente tese avança no entendimento do fenômeno do efeito antidepressivo do exercício, achando pontos a serem explorados em futuras investigações. Demonstra, também, a eficácia do exercício em pacientes hospitalizados com depressão grave. Por ultimo, mostra que existem diversos potenciais mecanismos e correlatos biológicos que possam vir a explicar ou estar associados a este efeito antidepressivo. / Physical exercise has been increasingly exploited as a therapeutic intervention for depression. Several studies have shown its effectiveness in milder severity of depression, however, their effectiveness in severe episodes in hospitalized individuals still needs further investigation. There is also a lack of information about factors that can predict or moderate the antidepressant effect of exercise and the potential mechanisms or biological correlates that are associated with antidepressant effects of exercise in depressed individuals. This thesis consists of four articles. The first is a systematic review of potential predictors or antidepressant effect of exercise moderators. The second is a systematic review of the potential biological mechanisms or correlates of exercise. The third is a randomized clinical trial evaluating the effects of physical exercise in patients hospitalized with severe depression. The last one, is an analysis of the effects of exercise on neurogenesis markers and oxidative stress. The findings of the first review suggest that there are several potential candidates predictors and moderators. However, the literature is not robust enough to suggest any predictor or moderator with greater consistency. According to the second review, exercise can potentially promote acute responses in several biomarkers. On the other hand, the chronic adaptations to exercise training appear to be less consistent. The literature contains several important limitations, preventing more solid conclusions regards the acute and chronic responses. According to the clinical trial, we observed that exercise can be an effective therapeutic intervention in reducing depressive symptoms and improving some domains of quality of life of participants hospitalized with severe depression. Finally, in the fourth article, using a sample of the clinical trial, serum levels of oxidative stress markers decreases were found., However, no changes in the levels of neurogenesis markers were found. This thesis advances in the understanding of the antidepressant effect of exercise phenomenon, finding points to be further explored regarding the predictors and moderators. It also demonstrates the antidepressant effectiveness of physical exercise in hospitalized patients with severe depression. Finally, shows that there are several potential mechanisms and biological correlates that may explain or be associated with this antidepressant effect.

A prevalência da obesidade em crianças e adolescentes tem aumentado em diversos países do mundo, inclusive no Brasil. Esse fato está fortemente relacionado à mudança no estilo de vida e aos hábitos alimentares. A transição nutricional é um fenômeno caracterizado pelo aumento da ingestão de calorias e o consumo alimentar tem sido relacionado à obesidade não somente quanto ao volume de ingestão alimentar como também à composição e qualidade da dieta. O Healthy Eating Index (HEI, índice de alimentação saudável) é uma medida de adesão às recomendações dietéticas americanas. O HEI é composto por um escore de 100 pontos, onde 10 componentes alimentares são avaliados e destinados a avaliar a qualidade da alimentação, com a finalidade de monitorar as mudanças na ingestão dietética ao longo do tempo e como um instrumento base para elaboração das atividades de educação nutricional e promoção de saúde na população. Muitos estudos avaliaram a qualidade da alimentação através desse índice, alguns mostraram associação positiva entre o HEI e a ingestão de nutrientes essenciais. Porém, poucos estudos correlacionaram o HEI com marcadores de perfil lipídico. Este estudo se preocupa com o surgimento de alguns fatores de risco cardiovascular já na infância, e uma das causas relacionadas a esse problema seria o tipo de alimentação que as crianças consomem. Para avaliar a qualidade da dieta e marcadores de perfil lipídico, realizou-se um estudo transversal com a finalidade de investigar a associação entre o HEI e marcadores de perfil lipídico e o índice de massa corporal em escolares de sete e oito anos de idade, de baixo nível socioeconômico. A amostra foi constituída de 305 escolares, sendo 173 meninos e 132 meninas, a média geral de idade foi de 7,7 ± 0,4 anos, o excesso de peso foi diagnosticado em 27,2% das crianças, sendo que 11,5% foram classificadas como obesas. A média geral da pontuação do HEI foi 58,8 ± 7,7. Neste estudo foi encontrada uma elevada proporção de crianças com consumo alimentar que precisa ser melhorado e nenhuma criança com qualidade boa da dieta. Além disso, não foi possível mostrar associação entre o HEI e os níveis de lipídeos séricos nas crianças estudadas. Os resultados desta pesquisa, aliados a estudos de intervenção já feitos, destacam a necessidade de elaborar e implementar políticas e programas de nutrição nas escolas que tenham como alvo as crianças e suas famílias, com o objetivo de aumentar a ingestão de legumes, verduras, frutas e reduzir a ingestão de produtos industrializados, sódio e gorduras. / The prevalence of obesity in children and adolescents has increased in several countries including Brazil. This fact is strongly related to changes in lifestyle and eating habits. The nutrition transition is a phenomenon characterized by increased calorie intake and food consumption has been linked to obesity not only in the amount of food intake as well as the composition and diet quality. The Healthy Eating Index – HEI – is a measure of adherence to U.S. dietary recommendations. HEI is composed of a score of 100 points, in which 10 food components are evaluated and are designed to assess the quality of food, in order to monitor changes in dietary intake over time and as a basic instrument for development activities nutrition education and promotion of health in the population. Many studies have assessed the quality of food through this index, some showed a positive association between the HEI and the intake of essential nutrients. However few studies HEI correlated with markers of lipid profile. This research is concerned with the emergence of some cardiovascular risk factors in childhood and one of the causes related to this problem would be the type of food that children consume. In order to assess the quality of diet and lipid profile markers a crosssectional study was conducted to investigate the association between the HEI and markers of lipid profile and body mass index in schoolchildren of seven and eight years old, low socioeconomic status. The sample consisted of 305 school children, 173 boys and 132 girls, the overall mean age was 7.7 ± 0.4 years, overweight was diagnosed in 27.2% of children, and 11.5 % were classified as obese. The general average HEI score was 58.8 ± 7.7. This study found a high proportion of children with food consumption that needs to be improved and no child with good quality diet. In addition, we could not show an association between the HEI and serum lipid levels in children. The results of this research combined with intervention studies ever made highlight the need to develop and implement policies and nutrition programs in schools that target children and their families in order to increase the intake of vegetables, fruits and reduce the intake of processed products, sodium and fats.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-24 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença sistêmica de caráter granulomatoso, prevalente na América do Sul, causada pelo fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis. O fungo apresenta estrutura complexa de proteínas e glicoproteínas e dentre esses componentes, alguns estão envolvidos na patogenicidade da doença. A recuperação da virulência de isolados por meio de passagem in vivo foi realizada com sucesso em nosso laboratório. Os isolados Pb18 atenuado e virulento foram analisados sob diversos ângulos para confirmação dessa modificação. Os resultados de curva de sobrevida, recuperação de CFU de órgão e histologia, mostraram claramente as diferenças no padrão de patogenicidade desses dois isolados. Outras características também foram avaliadas como morfometria, padrão de crescimento e ultraestrutura celular. Análises de expressão gênica diferencial apontaram um perfil de regulação positiva para genes relacionados ao metabolismo de proteínas, de lipídeos e aminoácidos. Algumas moléculas anteriormente descritas como putativos fatores de virulência foram moduladas positivamante, entre as quais podemos citar a calmodulina, proteína kex-like e hsp70. Entretanto, ainda pouco se sabe sobre estes fatores virulência para maioria dos fungos dimórficos, entre eles o P.brasiliensis. Várias técnicas têm sido utilizadas, sem sucesso, para caracterização destas moléculas. Utilizando a metodologia de Phage display, foram selecionados três fagos que se ligam preferencialmente ao isolado Pb18 virulento. Por meio de ensaio de ligação, o fago p04 foi capaz de distinguir graus de virulência de outros quatro isolados. As imagens obtidas por microscopia confocal mostraram que o pep04, acoplado a 6-FAM, foi internalizado somente por leveduras do isolado virulento. Imagens seriadas indicam marcação do meio intracelular, frequentemente associada ou co-localizada à marcação por DAPI. Estes resultados demonstraram que ambos, pep04 e p04, podem ser considerados biomarcadores de virulência na PCM. Para avaliar as consequências das interações destes biomarcadores com células fúngicas, foram realizados ensaios in vitro e in vivo. O fago p04 foi suficiente para impedir a implantação e disseminação do fungo. Além disso, foi capaz de reduzir o número de CFUs recuperadas de animais tratados com este fago, quando comparado ao controle (fago sem inserto). Experimentos in vitro utilizando o pep04 demostraram a atividade fungicida deste peptídeo contra, apenas, o isolado virulento. Desta foram, estes biomarcadores poderão ser utilizados tanto no diagnóstico, quanto na pratica clínica como adjuvante terapêutico. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a human systemic granulomatous disease, prevalent in South America, caused by a thermodimorphic fungus, Paracoccidioides brasiliensis. This fungus presents complex antigenic structure and some of these components have been related with its pathogenicity, of which little is known. The virulence recovery of isolates by passage in vivo was performed in our laboratory. Attenuated and virulent Pb18 isolates were analyzed from various angles to confirm this change. The results of the survival curve, the number of CFUs and histology, showed clear differences in pathogenicity pattern of these isolates. Other features were also evaluated as morphology, growth curve and cell ultrastructure. Analysis of differential gene expression profile showed positive regulation genes related to metabolisms of proteins, lipids and amino acids. Some molecules, previously described as putative virulence factors, were positive regulated, among which calmodulin, kex-like protein and Hsp70. However, the number of defined virulence factors for dimorphic fungal pathogens, up to now, is relatively small. Several techniques have unsuccessfully been employed to characterize these elusive antigenic structures. Using phage display methodology, three peptide-displaying phages that bound preferentially to virulent isolates of P. brasiliensis were selected. By binding assay, p04 phage distinguished predefined degrees of virulence of isolates. Using confocal microscopy, the homologue synthetic peptide (pep04), labeled with 6-FAM, was internalized by only virulent isolate yeast cells. Sequential optical section imaging indicated that the labeling was within the intracellular milieu and frequently close or overlapping DAPI staining. These results showed that both, phage p04 and pep04, can be considered as biomarkers of virulence in PCM since both bound to virulent P. brasiliensis. To evaluate the consequences of interactions between the biomarkers and fungal cells, in vitro and in vivo experiments were performed. The latter demonstrated that p04 phage was sufficient to prevent the implantation of the fungus in the lungs and its migration to spleen and liver. In addition, this phage reduced colony-forming units in the lungs of mice infected with P. brasiliensis as compared to controls. In vitro experiments showed that pep04 exhibited fungicidal activity only against virulent P. brasiliensis, leaving unaltered the growth of the attenuated isolate. Therefore, these biomarkers may be useful tools for prognosis in PCM and may be possibly used in the routine clinical practice as therapeutic drug adjuvants. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-06-05T20:42:15Z No. of bitstreams: 1 Bruno Antonio Veloso Cerqueira Inflamação, hemólise e ativação celular....pdf: 113176346 bytes, checksum: 334b7eba1166d09c726b10fc80dc284d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-05T20:42:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruno Antonio Veloso Cerqueira Inflamação, hemólise e ativação celular....pdf: 113176346 bytes, checksum: 334b7eba1166d09c726b10fc80dc284d (MD5) Previous issue date: 2011 / Universidade Federal da Bahia. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A anemia falciforme (AF) é uma desordem genética caracterizada por hemólise, estresse oxidativo, infecções recorrentes, estado inflamatório crônico e eventos de oclusão vascular, com ocorrência de crises de dor, danos teciduais e possibilidade de óbito precoce. Os eventos vasculares na AF envolvem a participação de hemácias, leucócitos, células endoteliais, plaquetas, fatores da coagulação e proteínas plasmáticas. Neste estudo, avaliou-se o papel de marcadores hematológicos, de hemólise, inflamação e de ativação celular na fisiopatologia da ativação endotelial na AF. Foi realizado um estudo de corte transversal, seguido por caso-controle. Quarenta e cinco (45) indivíduos com AF em estado estável, com idade média 20,5 anos participaram do estudo. O perfil de hemoglobinas foi confirmado por HPLC. Os marcadores bioquímicos foram investigados por kits específicos; a expressão de moléculas na superfície dos leucócitos por citometria de fluxo e a quantificação de citocinas e moléculas de adesão solúveis por ELISA. Níveis elevados de lactato desidrogenase (LDH) e bilirrubinas foram associados a eventos de Síndrome Torácica Aguda e úlcera de perna, respectivamente. A leucocitose foi observada em pacientes com histórico de hepatomegalia e úlcera de perna. Os pacientes com histórico de terapia transfusional apresentaram concentrações aumentadas da aspartato aminotransferase (AST) e contagem de reticulócitos. Os níveis diminuídos de HDL estiveram associados a eventos de sequestro esplênico e esplenomegalia. A expressão do CD11b em neutrófilos, linfócitos e monócitos foi maior nos pacientes que nos controles; entretanto, a expressão do CD62L nos neutrófilos foi menor nos pacientes do que nos controles antes e após o desafio com o lipopolissacarídeo bacteriano (LPS). A expressão do CD11b e CD32 em neutrófilos teve correlação positiva com plaquetas e com o LDL, respectivamente. A expressão do CD62L em neutrófilos apresentou correlação negativa com plaquetas. A expressão do CD11b e CD18 em linfócitos teve correlação positiva com o ácido úrico e com a molécula de adesão vascular solúvel 1 (VCAM-1s), respectivamente. A expressão do CD62L em linfócitos foi negativamente correlacionada com o número de plaquetas, molécula de adesão intercelular solúvel 1 (ICAM-1s) e TNF-alfa. A expressão do CD32 em monócitos foi menor nos pacientes que nos controles e apresentou correlação negativa com a AST e hemoglobina S. A expressão reduzida do CD32 em monócitos de pacientes foi associada ao aumento da LDH, enquanto que a expressão do CD62L nessas células apresentou correlação positiva com o HDL e com as concentrações de hemoglobina. Os níveis de IL-18 e do ácido úrico foram associados a marcadores de hemólise, de disfunção endotelial e citocinas e podem representar a participação do complexo inflammasome. Os resultados apresentados sugerem o papel importante de biomarcadores na avaliação do perfil clínico de pacientes com AF, além de sugerir a provável influência de moléculas expressas na superfície de leucócitos, da IL-18 e do ácido úrico no processo inflamatório crônico e na gravidade clínica da AF. Acreditamos que a interação desses biomarcadores envolve processos complexos relacionados à hemólise, inflamação e ativação celular com importância na avaliação da gravidade dos eventos vasculares presentes na AF. Em conjunto, todos esses marcadores podem ser considerados como alvos terapêuticos promissores em intervenções clínicas futuras na doença. / Sickle cell anemia (SCA) is a common, severe monogenetic disorder characterized by chronic hemolysis, oxidative stress, frequent infections, a chronic inflammatory state and recurrent occlusions of the microcirculation, resulting in painful crises, organ damage and premature death. Vaso-occlusive episodes in SCA involve interactions between sickle red blood cells, endothelial cells, leukocytes, platelets, coagulation factors and plasma proteins. Herein, we evaluated the role of oxidative stress, inflammation and the profile of cell activation on pathophysiology of vascular occlusion in SCA. We conducted a cross-sectional study, followed by case control study. Forty-five SCA patients without general symptoms, median age 20.5 years, were included in this study. Hemoglobin profile was confirmed by HPLC; biochemical markers by biochemical kits; surface molecule expressions on leukocytes were determined by flow cytometry and the concentration of cytokines and soluble adhesion molecules were measured by ELISA kits. The increase serum levels of lactate dehydrogenase (LDH) and bilirubins were associated with acute thoracic syndrome and leg ulcer respectively. The clinic aspects like hepatomegaly and leg ulcer were associated with increase number of leukocyte. The blood transfusion therapy was associated positively with aspartate aminotransferase (AST) levels and reticulocytes number. The decreased levels of HDL-C were associated with splenic sequestration and splenectomy. The surface CD11b expression of neutrophils, lymphocyte and monocytes in patients was higher than in controls; however, CD62L expression on neutrophils was lower in patients than in controls before and after lipopolysaccharide (LPS) challenge. CD11b and CD32 expression level on neutrophils were positively correlated with platelet counts and LDL-C levels respectively. CD62L expression on neutrophils was negatively correlated with platelet counts. CD11b and CD18 expression levels on lymphocytes were positively correlated with uric acid and soluble vascular adhesion molecule 1(sVCAM-1) levels respectively. CD62L expression on lymphocyte was negatively correlated with platelet count, soluble intercellular adhesion molecule 1 (sICAM-1) and TNF-alpha levels. CD32 expression on monocytes in patients was lower than in controls, further correlated negatively with AST and hemoglobin S. Decrease CD32 expression on monocytes was associated with high LDH levels and CD62L expression was positively correlated with HDL-C and hemoglobin concentration. The IL-18 and uric acid plasma concentrations were correlated closely with markers of hemolysis, endothelial dysfunction and cytokine levels, possibly representing the participation of inflammasome complex. We believe that the interaction of these biomarkers involve complex processes related to hemolysis, inflammation and cellular activation with importance in assessing severity of the vascular events on the SCA. So, together, all these biomarkers can be considered as promising therapeutic targets in future clinical interventions in SCA

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-04-18T18:08:55Z No. of bitstreams: 1 Ana Paula Almeida de Souza Validação de proteinas...pdf: 2348379 bytes, checksum: 16135e91d8da506bd6d51b00312ae853 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-18T18:08:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Paula Almeida de Souza Validação de proteinas...pdf: 2348379 bytes, checksum: 16135e91d8da506bd6d51b00312ae853 (MD5) Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz / O controle das populações de flebotomíneos, a contenção das epidemias nas fases iniciais e a facilitação do diagnóstico precoce dos indivíduos parasitados são estratégias traçadas pela OMS para a vigilância e controle da leishmaniose. Neste contexto, os testes sorológicos utilizando tanto o sonicado de glândula salivar (SGS) dos flebotomíneos quanto o antígeno solúvel de Leishmania (SLA) são importantes ferramentas para o controle/diagnóstico das Leishmanioses. No entanto, os testes realizados a partir da utilização de antígenos obtidos de frações brutas, apesar de apresentarem alta sensibilidade, alguns destes antígenos apresentam reação cruzada com epítopos compartilhados por outros patógenos/vetores. Além disso, o preparo dos antígenos não tem adequada reprodutibilidade devido a grande dificuldade de obtenção e/ou padronização destes. No presente trabalho, objetivamos identificar biomarcadores para a vigilância e o controle das Leishmanioses, utilizando proteínas recombinantes da saliva dos flebotomíneos como biomarcadores de exposição ao vetor e proteínas recombinantes da Leishmania para obtenção de um diagnóstico sorológico mais preciso para a Leishmaniose Tegumentar humana. Numa primeira etapa, foram realizados testes imunoenzimáticos contra as proteínas recombinante da saliva do vetor L. longipalpis (rLJM11 e rLJM17) para estimar a positividade anti-saliva num pequeno número de soros de crianças de uma área endêmica para Leishmaniose Visceral. Foi observado que os soros que reconhecem o SGS do L. longipalpis também reconhecem em diferentes proporções as proteínas rLJM17 e rLJM11. Ademais, as proteína recombinantes foram capazes de detectar a soroconversão anti-saliva de soros de uma segunda área endêmica para LV, havendo aumento no reconhecimento quando utilizadas as duas proteínas recombinantes de forma combinada. Além disso, a análise das curvas ROC evidenciou o desempenho superior da combinação das proteínas rLJM17 + rLJM11. Estes dados foram confirmados com a avaliação das proteínas frente um grande painel de 1.077 amostras de soro de indivíduos de uma outra área endêmica para LV. Nesta etapa, nossos resultados indicam que as proteínas rLJM11+rLJM17 representam uma ferramenta epidemiológica promissora que pode auxiliar na implementação de medidas de controle contra a Leishmaniose Visceral. Numa segunda etapa, testes imunoenzimáticos foram realizados contra uma série de proteínas recombinantes da Leishmania (HSP70, H2A, H2B, H3, H4 e KMP11) a fim de selecionarmos proteínas antigênicas contra soros de pacientes com Leishmaniose Cutânea (LC) e Leishmaniose Mucosa (LM) e que apresentassem elevada especificidade quando testadas contra soros de indivíduos com outras patologias (doença de Chagas, Lúpus Eritematoso Sistêmico, Hanseníase e Tuberculose). Para avaliar a eficácia das proteínas recombinantes foram utilizadas curvas ROC, possibilitando a seleção de antígenos possivelmente mais eficientes que o SLA no imunodiagnóstico da Leishmaniose. As proteínas recombinantes HSP70 e H2A foram selecionadas por apresentarem elevada sensibilidade, sendo reconhecida por anticorpos dos soros de pacientes com LM e LC respectivamente. Na última etapa dos experimentos, utilizando soros de indivíduos que apresentavam outras patologias, observou-se que a reação cruzada diminui frente aos antígenos recombinantes, especialmente para a rHSP70, quando comparamos à observada para o SLA. Nossos resultados mostram a elevada antigenicidade da rHSP70, sugerindo a possibilidade de utilização desta proteína recombinante para o sorodiagnóstico da Leishmaniose Tegumentar. Neste trabalho foi possível identificar e validar o uso de proteínas recombinantes do parasito e da saliva dos flebotomíneos como biomarcadores para o sorodiagnóstico e avaliação da exposição às leishmanioses. / The population control of sand flies, containment of epidemics in the early stages and facilitating early diagnosis of infected individuals are strategies outlined by WHO for surveillance and control of Leishmaniasis. In this context, serologic tests using both the salivary gland sonicate (SGS) of sandflies as soluble Leishmania antigen (SLA) are important tools for the control / diagnosis of Leishmaniasis. However, tests based on the use of antigens derived from crude fractions, despite showing high sensitivity, some of these antigens cross-react with epitopes shared by other pathogens / vectors. Moreover, the preparation of antigens has adequate reproducibility due to difficulty in obtaining and / or standardization of these. In this study, we aimed to identify biomarkers for the surveillance and control of Leishmaniasis, through use of recombinant proteins from the saliva of sandflies as biomarkers of exposure to vector and through the use of recombinant proteins of Leishmania to get a more accurate serodiagnosis for human leishmaniasis. On the first step, ELISAs were performed against the recombinant protein from the saliva of the vector L. longipalpis (rLJM11 and rLJM17) to estimate the positive anti-saliva on a small number of sera from children from an endemic area for VL. It was observed that the sera that recognize the SGS of L. longipalpis also recognize in different proportions of rLJM17 and rLJM11 proteins. Further, each recombinant protein was able to detect anti-saliva seroconversion in sera from a second endemic area for VL, with increase in recognizing when the two recombinant proteins were used in combination. Furthermore, the ROC analysis showed the superior performance of the combination of rLJM17 + rLJM11, these data confirmed using a large panel of 1077 serum samples from individuals from another endemic area for LV. At this stage, our results indicate that proteins rLJM11 + rLJM17 represent a promising epidemiological tool that can assist in the implementation of control measures against Visceral Leishmaniasis. In a second step, ELISAs were performed against a series of recombinant proteins of Leishmania (HSP70, H2A, H2B, H3, and H4 KMP11) so antigenic proteins were selected against serum from patients with cutaneous leishmaniasis (CL) and mucocutaneous leishmaniasis (MCL) and that presented high specificity when tested against sera from patients with other diseases (Chagas disease, Systemic Lupus Erythematosus, Leprosy and Tuberculosis). To identify the effectiveness of recombinant proteins, ROC curves were used to select antigens possibly more efficient than SLA. Recombinant proteins HSP70 and H2A were selected for having high sensitivity in recognizing sera from patients with LM and LC respectively. In the last experimental stage using sera from individuals with other pathologies, it was observed that the reduced cross-reactivity against the recombinant antigen, especially for rHSP70 when compared to that observed for the SLA. Our results show the high antigenicity of rHSP70, suggesting the possibility of using this recombinant protein for serodiagnosis of Leishmaniasis. In this work, it was possible to identify and validate the use of recombinant proteins of the parasite and of the saliva of sandflies as biomarkers for serodiagnosis and assessment of exposure to Leishmaniasis.