OLIVEIRA, Jefferson Soares de. Caracterização bioquímica e atividade citotóxica in vitro e antitumoral in vivo de proteínas do látex de Calotropis procera. 2011. 149 f. : Tese (Doutorado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2011. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-20T14:23:08Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_jsoliveira.pdf: 3281739 bytes, checksum: 7e9d2e21ed1c7ab719fb84e18c80c57c (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T20:35:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_jsoliveira.pdf: 3281739 bytes, checksum: 7e9d2e21ed1c7ab719fb84e18c80c57c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T20:35:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_jsoliveira.pdf: 3281739 bytes, checksum: 7e9d2e21ed1c7ab719fb84e18c80c57c (MD5) Previous issue date: 2011 / Latex of Calotropis procera was described as a source of pharmacologically active proteins such as anti-inflammatory and analgesic activities. This study evaluated the cytotoxic activity in vitro of proteins (LP) recovered from the latex of the medicinal plant C. procera against human cancer cells and the in vivo growth inhibition of Sarcoma 180. LP exhibited significant cytotoxicity for cell lines with IC50 values ranging from 0.11 to 1.36 µg/ml for tested cell lines (HL-60, SF295, HCT-8 and MDA-MB-435). There were no visible effects on the viability or morphology of healthy mononuclear cells exposed to PL (10 µg / ml) for 72 h, showing that PL was selective for malignant cells. Fractionation of PL by ion exchange chromatography (pH 5.0) gave rise to three new protein fractions (PI, PII and PIII) and almost all cytotoxicity present in PL was retained in fraction PI. The cytotoxic effects of PL and PI were diminished when pre-treated with pronase or 2-mercaptoethanol, reinforcing the protein nature of active molecules. PI was absent on cysteine protease activity, indicating that this enzyme abundantly found in PL is not involved in cytotoxicity. Mechanistic studies of LP cytotoxicity using HL-60 cells revealed that PL induces apoptosis probably due to changes in DNA topology since PL interfered in the activity of topoisomerase I. The cytotoxic activity present in PI seems to be performed by the synergic action of different proteins. This hypothesis is suggested since PI subjected to gel filtration chromatography produced distinct protein peaks that shared cytotoxic activity, although with lower extent than PI. Studies on growth inhibition of Sarcoma 180 showed that animals treated with PL by oral (10 or 20 mg/kg) or intraperitoneal (2 or 5 mg/kg) rout reduced tumor growth significantly (up 51.83%, po) and increased life span of transplanted animals for up to four days. The inhibitory activity of tumor growth was lost when the LP was subjected to proteolysis, acidic treatment or collected in iodoacetamide. On the other hand, LP maintained its in vivo activity after heat treatment, suggesting that thermo stable proteins are involved in the suppression of tumor growth. Biochemical parameters such as the enzymatic activity of aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) and the content of urea in serum were not affected in animals treated with LP. Treatment of animals with LP induced increasing of leukocyte numbers and protected from leukopenia induced by 5-FU administration. In addition, no significant changes in the histopathology of liver of animals treated with oral LP were seen. In vivo antitumor activity was retained in the PII and this activity was observed even when animals received a single dose of PII. It seems that the in vivo action of latex proteins is related to an immunestimulant event and not to the cytotoxic action of protein on cells Sarcoma 180. PII-3, recovered after PII fractionation on ion exchange column at pH 6.0, retained the tumor growth inhibition activity found in PII. PII-3 was shown to possess cysteine proteinase and papain inhibitor activities; however is not completely clear weather this molecules are involved in the antitumor activity. This study confirms the pharmacological potential of latex proteins from C. procera to control the development of tumor cells. / O látex de Calotropis procera foi descrito como uma fonte de proteínas farmacologicamente ativas como atividade antiinflamatória e analgésica. O presente trabalho avaliou a atividade citotóxica in vitro das proteínas (PL) recuperadas do látex da planta medicinal C. procera contra células de câncer humano e a inibição do crescimento do Sarcoma 180 transplantado em camundongos. PL apresentou significante citotoxicidade para as linhagens celulares com valores de IC50 variando entre 0,11 a 1,36 µg/ml para as linhagens celulares testadas (HL-60, SF295, HCT-8 e MDA-MB-435). Não foram observados efeitos visíveis sobre a viabilidade ou a morfologia de células mononucleares saudáveis expostas a PL (10 µg / ml) por 72 h, mostrando que PL apresentou seletividade para células tumorais. O fracionamento de PL por cromatografia de troca iônica (pH 5,0) deu origem a três novas frações (PI, PII e PIII) e quase toda citotoxicidade presente em PL ficou retida na fração PI. Os efeitos citotóxicos de PL e PI foram diminuídos quando previamente tratados com pronase, ou 2-mercaptoetanol, sugerindo uma natureza protéica de moléculas ativas. PI não apresentou atividade de proteinase cisteínica, indicando que esta enzima, encontrada em abundância em PL, não está envolvida na citotoxicidade. Estudos do mecanismo da ação citotóxica de PL utilizando células HL-60 revelou que PL induz apoptose celular provavelmente devido a alterações na topologia de DNA, já que PL interferiu na atividade de topoisomerase I. A atividade citotóxica presente em PI parece ser desempenhada pela ação combinada de diferentes proteínas uma vez que PI submetida à cromatografia de filtração em gel gerou picos protéicos distintos que compartilharam atividade citotóxica, embora com menor potência que PI. Estudo de inibição do crescimento do Sarcoma 180 revelou que animais tratados com PL por via oral (10 or 20 mg/kg) ou intraperitoneal (2 or 5 mg/kg) reduziram de modo significativo o crescimento do tumor (em até 51,83%; v.o.) e prolongou o tempo de sobrevivência dos animais transplantados por até quatro dias. A atividade inibitória do crescimento do tumor foi perdida quando a fração PL foi submetida à proteólise, tratamento ácido ou com iodoacetamida. No entanto, PL conservou a sua atividade in vivo após o tratamento térmico, sugerindo que proteínas termoestáveis estão envolvidas na supressão do crescimento tumoral. Os parâmetros bioquímicos, como a atividade enzimática da aspartato aminotransferase (AST) e alanina aminotransferase (ALT) e o teor de uréia no soro, não foram afetados nos animais tratados com PL. PL induziu aumento no número de leucócitos de animais tratados e ainda eliminou completamente a leucopenia induzida pela administração do 5-FU. Em adição, não foram observadas mudanças na histopatologia do fígado de animais tratados com PL por via oral. Atividade antitumoral in vivo ficou retida no PII e esta atividade foi observada mesmo quando animais transplantados receberam uma única dose de PII sugerindo que a ação in vivo de proteínas do látex está relacionada a um evento imunoestimunate de proteínas e não à ação citotóxica sobre as células do Sarcoma 180. PII-3, obtido após fracionamento de PII em coluna de troca iônica em pH 6,0 reteve a atividade de inibição do crescimento tumoral de PII. Esta fração possui atividade de proteinase cisteínica e atividade de inibidor de papaína, porém não é completamente claro o envolvimento dessas moléculas na atividade in vivo. Este estudo confirma o potencial farmacológico das proteínas do látex de C. procera para controlar o desenvolvimento de células tumorais.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / No presente trabalho é descrita a obtenção de hidrazonas derivadas de isoniazida e de seus complexos de cobre(II) e gálio(III) candidatos a protótipos de fármacos antituberculose e antitumoral. Para investigar o efeito da modificação química sobre as bioatividades do fármaco isoniazida, foram preparados cinco derivados hidrazônicos: 2-piridinocarboxaldeído isonicotinoil hidrazona (HPCIH, 1), 2-acetilpiridina isonicotinoil hidrazona (HAPIH, 2), 2-benzoilpiridina isonicotinoil hidrazona (HBPIH, 3), 2-piridinoformamida isonicotinoil hidrazona (HPAmIH, 4) e 2-pirazinoformamida isonicotinoil hidrazona (HPzAmIH, 5), sendo o composto HPAmIH (4) inédito. Análises de ponto de fusão, espectroscopia de infravermelho (IV), espectrometria de massas, ressonância magnética nuclear (RMN), análise elementar e termogravimetria confirmaram a obtenção e pureza das hidrazonas. Foi determinada ainda a estrutura de HPCIH (1) por difração de raios X de monocristal. Essas moléculas foram efetivas em inibir o crescimento de cepas de micobactérias Mycobacterium tuberculosis H37Rv (ATCC 27294) nas concentrações testadas, com exceção de HPzAmIH (5). As hidrazonas HAPIH (2) e HBPIH (3) foram os compostos orgânicos mais ativos (concentração inibitória mínima, CIM = 0,625 g/mL), apresentando atividade antimicobacteriana apenas duas vezes inferior à do fármaco isoniazida.Quanto à ação contra células tumorais, as hidrazonas HAPIH (2) e HBPIH (3) foram as mais potentes contra as linhagens OVCAR-8 (tumor de ovário - humano), HCT-116 (tumor de cólon - humano) e SF-295 (glioblastoma humano), com inibições de 34,98 a 98,63% do crescimento celular, na concentração de 5 g/mL, enquanto que a isoniazida não foi efetiva contra as linhagens estudadas. Para avaliar o efeito da coordenação a metais sobre a atividade farmacológica das hidrazonas, foram sintetizados os complexos de cobre(II) e gálio(III), sendo todos inéditos: [Cu(HPCIH)Cl2]∙H2O (6), [Cu(HAPIH)Cl2]∙H2O (7), [Cu2(HBPIH)2Cl2]Cl2∙4H2O(8), [Cu(HPAmIH)Cl2]∙H2O (9), [Cu(HPzAmIH)Cl2]∙H2O (10), [Ga(HPCIH)2](NO3)32H2O (11), [Ga(HAPIH)(APIH)](NO3)22H2O (12), [Ga(HPAmIH)(PAmIH)](NO3)22H2O(13) e [Ga(HPzAmIH)(PzAmIH)](NO3)2H2O (14). Os complexos foram caracterizados por espectroscopia de IV, análise elementar, condutivimetria, RMN e espectroscopia eletrônica. Em geral, os complexos também demonstraram ação contra M. tuberculosis, sendo que apenas para 6, 9, 10 e 14 foi verificada melhor atividade em relação às hidrazonas livres. Os complexos metálicos foram tanto quanto ou mais ativos contra as células tumorais OVCAR-8, HCT-116 e SF-295 do que as hidrazonas livres. Merecem destaque os complexos 79 e 12, que apresentaram inibição de crescimento celular de 72,2100%, na concentração de 5 g/mL. Os resultados demonstram portanto que em geral os compostos 114 são menos ativos do que a isoniazida contra M. tuberculosis, enquanto que a modificação química do fármaco, formando-se hidrazonas com posterior complexação cobre(II) e gálio(III) constituíram uma estratégia interessante na obtenção de compostos mais potentes contra células tumorais / In this work we describe the synthesis of isoniazide-derived hydrazones and their copper(II) and gallium(III) complexes candidates for drug prototypes to treat antituberculosis and cancer. Five hidrazone derivatives have been prepared in order to investigate the effect of chemical modification on the bioactivities of the drug isoniazid: 2-pyridinecarboxaldehyde isonicotinoyl hydrazone (HPCIH, 1), 2-acetylpyridine isonicotinoyl hydrazone (HAPIH, 2), 2-benzoylpyridine isonicotinoyl hydrazone (HBPIH, 3), 2-pyridineformamide isonicotinoyl hydrazone (HPAmIH, 4) and pyrazineformamide 2-isonicotinoyl hydrazone (HPzAmIH, 5), being HPAmIH (4) unpublished. Melting point, infrared spectroscopy (IR), mass spectrometry, nuclear magnetic resonance (NMR), elemental analysis and thermogravimetric analysis has confirmed the formation of hydrazones as well as its purity. All compounds have been effective in inhibiting the growth of Mycobacterium tuberculosis H37Rv (ATCC 27294) mycobacteria strains in the tested concentrations, except HPzAmIH (5). The hydrazones HAPIH (2) and HBPIH (3) have been the most active compounds (minimum inhibitory concentration, MIC = 0.625 g/mL), which have presented the antimycobacterial activity only two times lower than isoniazid drug. In relation to the action against tumor cells, the hydrazones HAPIH (2) and HBPIH (3) have been the most potent compounds against the cell lines OVCAR-8 (ovarian tumor - human), HCT-116 (colon tumor - human) and SF-295 (glioblastoma - human), with inhibitions from 34.98 to 98.63% of cellular growth at a concentration of 5 g/mL. Isoniazid, in turn, hasnt been effective against all cell lines studied. To evaluate the effect of coordinating the metal on the pharmacological activity of hydrazones, complexes of copper (II) and gallium (III) have been synthesized, being all novel compounds: [Cu(HPCIH)Cl2]∙H2O (6), [Cu(HAPIH)Cl2]∙H2O (7), [Cu2(HBPIH)2Cl2]Cl2∙4H2O(8), [Cu(HPAmIH)Cl2]∙H2O (9), [Cu(HPzAmIH)Cl2]∙H2O (10), [Ga(HPCIH)2](NO3)32H2O (11), [Ga(HAPIH)(APIH)](NO3)22H2O (12), [Ga(HPAmIH)(PAmIH)](NO3)22H2O (13) and [Ga(HPzAmIH)(PzAmIH)](NO3)2H2O (14).The complexes have been characterized by IR spectroscopy, NMR, elemental analysis, conductivimetry and electron spectroscopy. In general, these complexes have also shown action against M. tuberculosis, whereas only 6, 9, 10 and 14 have demonstrated better activity than the free hydrazones. The metal complexes have been equally or more active against human the cancer cell lines OVCAR-8, HCT-116 and SF-295 than the free hydrazones. The complexes 79 and 12 deserve to be highlighted, which have shown 72.2100% inhibition of cell growth in the 5 g/mL concentration. The results therefore demonstrate that in general compounds 114 are less active than isoniazid against M. tuberculosis, while chemical modification of the drug, forming hydrazones and subsequent complexation with the copper (II) and gallium(III) metal ions have been an interesting strategy to obtain compounds more potent against tumor cells

Submitted by Simone Souza (simonecgsouza@hotmail.com) on 2017-09-22T15:04:46Z No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Samantha Soares Ourives.pdf: 1603897 bytes, checksum: 16aacb8659dc1e9902e5038014c2c0ac (MD5) / Approved for entry into archive by Jordan (jordanbiblio@gmail.com) on 2017-09-26T14:26:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Samantha Soares Ourives.pdf: 1603897 bytes, checksum: 16aacb8659dc1e9902e5038014c2c0ac (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-26T14:26:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISS_2014_Samantha Soares Ourives.pdf: 1603897 bytes, checksum: 16aacb8659dc1e9902e5038014c2c0ac (MD5) Previous issue date: 2014-04-25 / CNPq / A malária é uma das doenças parasitárias de maior importância global e é responsável pelas principais causas de morbidade e mortalidade nas áreas tropicais e subtropicais do mundo. Apesar dos esforços para o controle da infecção em diferentes áreas endêmicas, a malária continua em expansão, e as medidas tradicionais de controle da transmissão são pouco eficazes. A resposta imune na malária é complexa, e os mecanismos de ativação e regulação de linfócitos T e suas citocinas ainda são pouco compreendidos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a correlação da parasitemia com o número de plaquetas e leucócitos, e identificar e quantificar as subpopulações específicas de células Th1, Th2, Th17 e Treg, durante a infecção por P. vivax. Avaliando a parasitemia e o número de plaquetas, foi verificado que existe correlação negativa (p<0,0005) entre esses parâmetros e que, dependendo da quantidade de parasitas, os pacientes com malária vivax apresentavam um maior grau de plaquetopenia (p<0,0001). Avaliando o número de parasitas e de leucócitos totais, foi verificada ausência de correlação entre esses parâmetros em pacientes com malária vivax. Além disso, também não foi detectada alteração no número de leucócitos totais quando comparado aos controles sadios. Posteriormente, foi realizada, por meio de citometria de fluxo, a identificação e quantificação das subpopulações de células T: Th1 (CD3+CD4+IFN-γ+), Th2 (CD3+CD4+IL4+), Th17 (CD3+CD4+IL-17+), Treg (CD4+CD25+CD127-) e citotóxica (CD3+CD8+), em pacientes com malária vivax e em controles sadios após cultura de linfócitos previamente isolados do sangue periférico, para verificar a alteração do número dessas subpopulações de linfócitos pela infecção por P. vivax. O percentual da citocina IL-10 também foi avaliado nas células Treg (CD4+CD25+CD127-IL-10+). Os indivíduos infectados por P. vivax apresentaram percentual de células T citotóxica e Th1 aumentadas. Já o percentual de células Th2, Th17 e Tregs não apresentaram diferenças entre os grupos. Porém, o percentual de células Treg que produziam a citocina IL-10 estava aumentado em pacientes com malária vivax, quando comparado aos controles sadios. Finalmente, a avaliação do número de células T CD4+ e T CD8+, indicou que não houve diferenças entre a proporção desses linfócitos em controles sadios e nem durante o processo infeccioso induzido por P. vivax. Em conclusão, pacientes com malária vivax apresentam um aumento no número de células T citotóxicas, Th1 e de células Treg (CD4+CD25+CD127-) produtoras de interleucina-10, indicando que a infecção por P. vivax ativa células específicas que podem participar na imunorregulação contra esse parasita. / Malaria is a parasitic disease of major global importance and is responsible for leading causes of morbidity and mortality in tropical and subtropical areas of the world. Despite efforts to control the infection in different endemic areas, malaria continues to expand, and the traditional transmission control measures are ineffective. The immune response in malaria is complex, and the mechanisms of activation and regulation of T lymphocytes and their cytokines are still poorly understood. The objective of this study was to evaluate the correlation of parasitemia with the number of platelets and leukocytes, and identify and quantify specific subpopulations of Th1, Th2, Th17 and Treg cells in infection by P. vivax. Evaluating the parasitemia and the number of platelets was verified that there is a negative correlation (p<0,0005) between these parameters and that, dependent of the number of parasites, vivax malaria patients showed higher degree of thrombocytopenia (p<0,0001). Evaluating the number of parasites and total leukocytes was observed no correlation between these parameters in patients with vivax malaria. Moreover, it was also not detected change in the number of total leukocytes when compared to healthy controls. Subsequently, was performed by flow cytometry, identification and quantification of T cell subsets: Th1 (CD3+CD4+IFN-γ+), Th2 (CD3+CD4+IL4+), Th17 (CD3+CD4+IL-17+), Treg (CD4+CD25+CD127-) and cytotoxic (CD3+CD8+) in patients with vivax malaria and healthy controls after lymphocyte culture previously isolated from peripheral blood, to verify the change in the number of these subpopulations lymphocytes by infection with P. vivax. The percentage of IL-10 was also evaluated on Treg cells (CD4+CD25+CD127+IL-10). Individuals infected with P. vivax showed increased percentage of Th1 and cytotoxic T cells. The percentage of Th2, Th17 and Treg cells did not differ between groups. However, the percentage of Treg cells that produce IL-10 cytokine was increased in patients with vivax malaria compared to healthy controls. Finally, the evaluation of the number of CD4+ T and CD8+ T cells indicated that there were no differences between the proportion of these lymphocytes in healthy controls or during the infectious process induced by P. vivax. In conclusion, vivax malaria patients show an increase in the number of cytotoxic T cell, Th1 and Treg cells (CD4+CD25+CD127-) producers of interleukin-10, indicating that infection with P. vivax activate specific cells which can participate in the immunoregulation against this parasite.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / No presente trabalho é descrita a obtenção de hidrazonas derivadas de isoniazida e de seus complexos de cobre(II) e gálio(III) candidatos a protótipos de fármacos antituberculose e antitumoral. Para investigar o efeito da modificação química sobre as bioatividades do fármaco isoniazida, foram preparados cinco derivados hidrazônicos: 2-piridinocarboxaldeído isonicotinoil hidrazona (HPCIH, 1), 2-acetilpiridina isonicotinoil hidrazona (HAPIH, 2), 2-benzoilpiridina isonicotinoil hidrazona (HBPIH, 3), 2-piridinoformamida isonicotinoil hidrazona (HPAmIH, 4) e 2-pirazinoformamida isonicotinoil hidrazona (HPzAmIH, 5), sendo o composto HPAmIH (4) inédito. Análises de ponto de fusão, espectroscopia de infravermelho (IV), espectrometria de massas, ressonância magnética nuclear (RMN), análise elementar e termogravimetria confirmaram a obtenção e pureza das hidrazonas. Foi determinada ainda a estrutura de HPCIH (1) por difração de raios X de monocristal. Essas moléculas foram efetivas em inibir o crescimento de cepas de micobactérias Mycobacterium tuberculosis H37Rv (ATCC 27294) nas concentrações testadas, com exceção de HPzAmIH (5). As hidrazonas HAPIH (2) e HBPIH (3) foram os compostos orgânicos mais ativos (concentração inibitória mínima, CIM = 0,625 &#61549;g/mL), apresentando atividade antimicobacteriana apenas duas vezes inferior à do fármaco isoniazida.Quanto à ação contra células tumorais, as hidrazonas HAPIH (2) e HBPIH (3) foram as mais potentes contra as linhagens OVCAR-8 (tumor de ovário - humano), HCT-116 (tumor de cólon - humano) e SF-295 (glioblastoma humano), com inibições de 34,98 a 98,63% do crescimento celular, na concentração de 5 &#61549;g/mL, enquanto que a isoniazida não foi efetiva contra as linhagens estudadas. Para avaliar o efeito da coordenação a metais sobre a atividade farmacológica das hidrazonas, foram sintetizados os complexos de cobre(II) e gálio(III), sendo todos inéditos: [Cu(HPCIH)Cl2]&#8729;H2O (6), [Cu(HAPIH)Cl2]&#8729;H2O (7), [Cu2(HBPIH)2Cl2]Cl2&#8729;4H2O(8), [Cu(HPAmIH)Cl2]&#8729;H2O (9), [Cu(HPzAmIH)Cl2]&#8729;H2O (10), [Ga(HPCIH)2](NO3)3&#61655;2H2O (11), [Ga(HAPIH)(APIH)](NO3)2&#61655;2H2O (12), [Ga(HPAmIH)(PAmIH)](NO3)2&#61655;2H2O(13) e [Ga(HPzAmIH)(PzAmIH)](NO3)2&#61655;H2O (14). Os complexos foram caracterizados por espectroscopia de IV, análise elementar, condutivimetria, RMN e espectroscopia eletrônica. Em geral, os complexos também demonstraram ação contra M. tuberculosis, sendo que apenas para 6, 9, 10 e 14 foi verificada melhor atividade em relação às hidrazonas livres. Os complexos metálicos foram tanto quanto ou mais ativos contra as células tumorais OVCAR-8, HCT-116 e SF-295 do que as hidrazonas livres. Merecem destaque os complexos 7&#61485;9 e 12, que apresentaram inibição de crescimento celular de 72,2&#61485;100%, na concentração de 5 &#61549;g/mL. Os resultados demonstram portanto que em geral os compostos 1&#61485;14 são menos ativos do que a isoniazida contra M. tuberculosis, enquanto que a modificação química do fármaco, formando-se hidrazonas com posterior complexação cobre(II) e gálio(III) constituíram uma estratégia interessante na obtenção de compostos mais potentes contra células tumorais / In this work we describe the synthesis of isoniazide-derived hydrazones and their copper(II) and gallium(III) complexes candidates for drug prototypes to treat antituberculosis and cancer. Five hidrazone derivatives have been prepared in order to investigate the effect of chemical modification on the bioactivities of the drug isoniazid: 2-pyridinecarboxaldehyde isonicotinoyl hydrazone (HPCIH, 1), 2-acetylpyridine isonicotinoyl hydrazone (HAPIH, 2), 2-benzoylpyridine isonicotinoyl hydrazone (HBPIH, 3), 2-pyridineformamide isonicotinoyl hydrazone (HPAmIH, 4) and pyrazineformamide 2-isonicotinoyl hydrazone (HPzAmIH, 5), being HPAmIH (4) unpublished. Melting point, infrared spectroscopy (IR), mass spectrometry, nuclear magnetic resonance (NMR), elemental analysis and thermogravimetric analysis has confirmed the formation of hydrazones as well as its purity. All compounds have been effective in inhibiting the growth of Mycobacterium tuberculosis H37Rv (ATCC 27294) mycobacteria strains in the tested concentrations, except HPzAmIH (5). The hydrazones HAPIH (2) and HBPIH (3) have been the most active compounds (minimum inhibitory concentration, MIC = 0.625 &#61549;g/mL), which have presented the antimycobacterial activity only two times lower than isoniazid drug. In relation to the action against tumor cells, the hydrazones HAPIH (2) and HBPIH (3) have been the most potent compounds against the cell lines OVCAR-8 (ovarian tumor - human), HCT-116 (colon tumor - human) and SF-295 (glioblastoma - human), with inhibitions from 34.98 to 98.63% of cellular growth at a concentration of 5 &#61549;g/mL. Isoniazid, in turn, hasnt been effective against all cell lines studied. To evaluate the effect of coordinating the metal on the pharmacological activity of hydrazones, complexes of copper (II) and gallium (III) have been synthesized, being all novel compounds: [Cu(HPCIH)Cl2]&#8729;H2O (6), [Cu(HAPIH)Cl2]&#8729;H2O (7), [Cu2(HBPIH)2Cl2]Cl2&#8729;4H2O(8), [Cu(HPAmIH)Cl2]&#8729;H2O (9), [Cu(HPzAmIH)Cl2]&#8729;H2O (10), [Ga(HPCIH)2](NO3)3&#61655;2H2O (11), [Ga(HAPIH)(APIH)](NO3)2&#61655;2H2O (12), [Ga(HPAmIH)(PAmIH)](NO3)2&#61655;2H2O (13) and [Ga(HPzAmIH)(PzAmIH)](NO3)2&#61655;H2O (14).The complexes have been characterized by IR spectroscopy, NMR, elemental analysis, conductivimetry and electron spectroscopy. In general, these complexes have also shown action against M. tuberculosis, whereas only 6, 9, 10 and 14 have demonstrated better activity than the free hydrazones. The metal complexes have been equally or more active against human the cancer cell lines OVCAR-8, HCT-116 and SF-295 than the free hydrazones. The complexes 7&#61485;9 and 12 deserve to be highlighted, which have shown 72.2&#61485;100% inhibition of cell growth in the 5 &#61549;g/mL concentration. The results therefore demonstrate that in general compounds 1&#61485;14 are less active than isoniazid against M. tuberculosis, while chemical modification of the drug, forming hydrazones and subsequent complexation with the copper (II) and gallium(III) metal ions have been an interesting strategy to obtain compounds more potent against tumor cells

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 927562 bytes, checksum: 636b817d8fa21526e39f3df100a21156 (MD5) Previous issue date: 2009-03-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Solanum paludosum Moric. (Solanaceae) is an herbaceous species, known popularly as "jurubeba-roxa" in the Northeast of Brazil (AGRA; BHATTACHARYYA, 1999). The chemical and pharmacological studies with root bark of this species showed the presence of glycoalkaloids, and that the ethanol extract and aqueous phase obtained the same parts showed spasmolytic activity (ATAÍDE, 1982; BARBOSA-FILHO et al., 1991; BASÍLIO, 2008). As glycoalkaloids are known to present cytotoxicity and many species of Solanum present spasmolytic activity, decided to study the total alkaloids fraction from root bark of S. paludosum (FAT-SP) on the cytotoxic potential in rat s erythrocytes and to investigate the spasmolytic activity in rat uterus, rat aorta and guinea-pig ileum and trachea. FAT-SP did not show hemolytic activity but presented non-selective spasmolytic effect. The preliminary pharmacological screening showed that FAT-SP on rat uterus, did not inhibit the oxytocin (10-2 IU/mL)-induced phasic contractions, but significantly inhibited the CCh (10-5 M)-induced phasic contractions (IC50 = 178.8 ± 7.1 μg/mL). On guinea-pig trachea, was about 2.2 times more potent in relax the trachea pre-contracted with CCh 10-6 M in the absence (EC50 = 159.4 ± 23.0 μg/mL) than in the presence (EC50 = 353.2 ±15.2 μg/mL) of functional epithelium; on guinea-pig ileum, inhibited the CCh (10-6 M)-induced phasic contractions (IC50 = 129.8 ± 3.7 μg/mL) and was more potent in relation to histamine (10-6 M)-induced contractions (Emax = 18.4 ± 2.3%) and on rat aorta, we observed that FAT-SP relaxes the rat aorta pre-contracted with phenylephrine 3 x 10-7 M of manner more potent in the presence (EC50 = 75.4 ± 6.2 μg/mL) than absence (EC50 = 242.8 ± 11.7 g/mL) of functional endothelium. According with the parameter of potency FAT-SP was more potent on guinea-pig ileum and rat aorta. Thus, we decided to investigate a possible mechanism of action in these organs. FAT-SP relaxed in a significant and concentration dependent manner the guinea-pig ileum pre-contracted with 10-6 M CCh (EC50 = 37.4 ± 3.2 μg/mL) or histamine (EC50 = 54.2 ± 2.9 μg/mL), but not with 40 mM KCl (Emax = 28.6 ± 2.8%). Since, FAT-SP was more potent to relax the ileum pre-contracted with carbachol, this is suggestive the involvement of muscarinic receptors in this effect. This hypothesis was confirmed in functional level by the observation that the FAT-SP shifted to the right the cumulative concentration-response curves to CCh without changing the Emax, which is characteristic of competitive antagonism to the CCh. The relaxation produced by FAT-SP on rat aorta in the presence of L-NAME 10-5 M (EC50 = 147.0 ± 22.1 g/mL), the NO synthase inhibitor, was attenuated, but not in the presence of atropine 10-6 M (EC50 = 93.3 ± 10.0 g/mL), a non-selective muscarinic receptor antagonist, or indomethacin 10-5 M (EC50 = 90.7 ± 13.2 g/mL), a non-selective COX inhibitor, thus suggesting the involvement of the endothelial NO synthase. Furthermore, in the presence of hydroxocobalamin 3 x 10-5 M (EC50 = 294.9 ± 20.4 μg/mL), a scavenger of NO, or ODQ 10-5 M (EC50 = 228.2 ± 30.9 μg/mL), a selective blocker of soluble GC, the relaxation curve of FAT-SP was attenuated, suggesting the involvement NO/CG pathway in the spasmolytic effect of the FAT-SP. / Solanum paludosum Moric. (Solanaceae) é uma espécie herbácea, conhecida popularmente como jurubeba-roxa no Nordeste do Brasil (AGRA; BHATTACHARYYA, 1999). O estudo químico e farmacológico com a casca da raiz desta espécie mostrou a presença de glicoalcalóides, e que o extrato etanólico e a fase aquosa obtidos da mesma parte mostraram atividade espasmolítica (ATAÍDE, 1982; BARBOSA-FILHO et al., 1991; BASÍLIO, 2008). Como muitos glicoalcalóides são conhecidos por apresentarem citotoxicidade e muitas espécies de Solanum apresentam atividade espasmolítica, decidiu-se estudar a fração de alcalóides totais obtida da casca da raiz de S. paludosum (FAT-SP) em relação ao potencial citotóxico em eritrócitos de rato e investigar uma possível atividade espasmolítica em útero de rata, aorta de rato, íleo e traquéia de cobaia. A FAT-SP não mostrou atividade hemolítica, mas apresentou efeito espasmolítico não seletivo. A triagem farmacológica preliminar mostrou que a FAT-SP, em útero de rata, não inibiu as contrações fásicas induzidas por 10-2 UI/mL de ocitocina, mas inibiu de maneira significante as contrações induzidas por 10-5 M de CCh; em traquéia de cobaia, foi cerca de 2,2 vezes mais potente em relaxar a traquéia pré-contraída com 10-6 M de CCh na ausência (CE50 = 159,4 ± 23,0 μg/mL) do que na presença (CE50 = 353,2 ± 15,2 μg/mL) de epitélio funcional; em íleo de cobaia, inibiu as contrações fásicas induzida por 10-6 M de CCh (CI50 = 129,8 ± 3,7 μg/mL) de maneira mais potente em relação às contrações induzidas por 10-6 M de histamina (Emax = 18,4 ± 2,3%) e em aorta de rato, foi observado que a FAT-SP relaxa a aorta de rato pré-contraída com 3 x 10-7 M de fenilefrina de maneira mais potente na presença (CE50 = 75,4 ± 6,2 ug/mL) do que na ausência (CE50 = 242,8 ± 11,7 ug/mL) de endotélio funcional. De acordo com o parâmetro de potência a FAT-SP foi mais potente em íleo de cobaia e aorta de rato. Diante disso, decidiu-se investigar um possível mecanismo de ação nestes órgãos. A FAT-SP relaxou o íleo de cobaia de maneira significante e dependente de concentração pré-contraído com 10-6 M de CCh (CE50= 37,4 ± 3,2 μg/mL) ou de histamina (CE50 = 54,2 ± 2,9 μg/mL), mas não com 40 mM de KCl (Emax = 28,6 ± 2,8%). Visto que, a FAT-SP foi mais potente em relaxaro íleo pré-contraido com carbacol, isto é sugestivo do envolvimeto dos receptores muscarínicos neste efeito. Esta hipótese foi confirmada em nível funcional pela observação de que a FAT-SP deslocou para direita as curvas concentrações-resposta cumulativas ao CCh sem alteração do Emax, o que é característico de antagonismo competitivo ao CCh. O relaxamento produzido pela FAT-SP em aorta de rato na presença de 10-5 M de L-NAME (CE50 = 147,0 ± 22,1 ug/mL), inibidor da sintase do NO endotelial, foi atenuado, mas não na presença de 10-6 M de atropina (CE50 = 93,3 ± 10,0 ug/mL), um antagonista não seletivo dos receptores muscarínicos, ou de 10-5 M de indometacina (CE50 = 90,7 ± 13,2 ug/mL), um inibidor não seletivo da COX, sugerindo assim, a participação da sintase do NO endotelial. Além disso, na presença de 3 x 10-5 M de hidroxocobalamina (CE50 = 294,9 ± 20,4 μg/mL), sequestrador do NO, ou de 10-5 M de ODQ (CE50 = 228,2 ± 30,9 ug/mL), inibidor seletivo da GC solúvel, a curva de relaxamento da FAT-SP foi atenuada, sugerindo a participação da via NO/CG no efeito espasmolítico da FAT-SP.

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:21:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arquivototal.pdf: 11661227 bytes, checksum: e157f4398306766375669b2e52ab9310 (MD5) Previous issue date: 2012-11-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / In this work, we describe the investigation of the Morita-Baylis-Hillman reaction in microwave reactor, under closed vessel conditions to prepare 40 adducts, six novel, using 30 aromatic aldehydes and isatin as electrophiles and acrylonitrile (62a) , methyl acrylate (2), hydroxyethyl acrylate (62b), 2,2-dimethyl-1 ,3-dioxalyl acrylate (62c) and 2,3-dihydroxypropyl acrylate (62d) as Michael acceptors catalyzed by 1, 4-diazabicyclo [2.2.2] octane (DABCO). Most adducts were synthesized efficiently in short reaction times and excellent yields (70-99%) using this reaction protocol. However, this synthetic methodology showed limitations for less reactive substrates due to formation of byproducts and in some cases the formation of the desired adduct was not obtained. The application of low temperatures and / or conventional room temperature protocol led to the adducts preparation in a chemoselective manner. We proved that the formation of 2-hydroxy (4-bromophenyl) methyl acrylate (43) is reversible at 120 ° C, which explains the restriction observed in the preparation of certain adducts using heating by microwave irradiation and successfully protocol employing temperature of 0º C. Preliminary evaluation of cytotoxic activity against cell lines of human leukemia HL-60 was performed, where the nitrilated isatin derivatives adducts (56a and 56b) were the most active. Preliminary studies of antimitotic activity in embryonic cells of sea urchin (Echinometra lucunter) performed with nitrilated adducts containing pyridine rings (49, 47, 20), nitro group (16, 38, 15) and bromine atom attached to the aromatic ring (42) revealed that except 47, all investigated adducts strongly inhibited stages of embryonic development of the first cleavage and morula. Moreover, experimental observations showed no inhibition of microtubule organization, induction of cell necrosis and toxicity of the adducts, suggesting that the blocking mechanism of action of protein synthesis and / or DNA. / Neste trabalho, nós descrevemos a investigação da reação de Morita-Baylis-Hillman em reator de micro-ondas, sob condições de vaso fechado para preparação de 40 adutos, sendo seis inéditos, utilizando 30 aldeídos aromáticos e a isatina como eletrófilos e acrilonitrila (62a), acrilato de metila (2), acrilato de hidroxietila (62b), acrilato de 2,2-dimetil-1,3-dioxalila (62c) e acrilato de 2,3-diidroxipropila (62d) como aceptores de Michael catalisada por 1,4-diazabiciclo [2.2.2] octano (DABCO). A maioria dos adutos foram sintetizados de forma eficiente em curtos tempos reacionais e excelentes rendimentos (70-99%) usando este protocolo reacional. No entanto, esta metodologia sintética apresentou limitações para substratos menos reativos, devido a formação de subprodutos e em alguns casos a não formação do aduto desejado. A aplicação de baixa temperatura e / ou protocolo convencional a temperatura ambiente conduziram a preparação dos adutos de forma quimiosseletiva. Provamos que a reação de formação do acrilato de 2-hidroxi(4bromofenil)metila (43) é reversível a 120° C, fato que explica a limitação observada na preparação de alguns adutos usando aquecimento por irradiação de micro-ondas e o sucesso no emprego de protocolo a temperatura de 0º C. A avaliação preliminar da atividade citotóxica contra linhagem de células de leucemia humana HL-60 foi realizada, onde os adutos nitrilados derivados da isatina (56a e 56b) foram os mais ativos. Estudos preliminares da atividade antimitótica em células embrionárias de ouriço do mar (Echinometra lucunter) realizados com adutos nitrilados contendo anéis piridínicos (49, 47, 20), grupo nitro (16, 38, 15) e átomo de bromo ligados ao anel aromático (42) revelaram que, exceto 47, todos os adutos investigados inibiram fortemente os estágios de desenvolvimento embrionário de primeira clivagem e mórula. Além disso, observações experimentais não demonstraram inibição da organização dos microtúbulos, indução de necrose celular e toxicidade por parte dos adutos, sugerindo como mecanismo de ação o bloqueio da síntese protéica e/ou de DNA.

Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2017-04-18T18:29:45Z No. of bitstreams: 1 Albuquerque, Ricardo Diego Duarte Galhardo de [Dissertação, 2013].pdf: 1940847 bytes, checksum: 38411d5b06ee4d62cbbea2cfa90328df (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-18T18:29:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Albuquerque, Ricardo Diego Duarte Galhardo de [Dissertação, 2013].pdf: 1940847 bytes, checksum: 38411d5b06ee4d62cbbea2cfa90328df (MD5) / Xylopia ochrantha (Mart.) é uma espécie endêmica do Brasil, ocorrendo principalmente na Floresta de Restinga localizada ao longo da costa brasileira. Os estudos químico e biológico presentes neste trabalho são os primeiros relacionados a esta espécie. No estudo fitoquímico, os óleos essenciais das folhas e frutos foram obtidos através de extração por hidrodestilação e analisados por GC-MS e GC-FID. No total, foram identificadas 36 substâncias, das quais, germacreno D, biciclogermacreno e silvestreno (folhas), α-felandreno, β-felandreno e sabineno (frutos) foram os principais componentes identificados. Os fitoesterois campesterol, estigmaesterol e gama-sitosterol, provenientes do extrato hexânico foliar, além dos flavonoides majoritários quercitrina e luteolina-7-O-rutinosídeo, encontrados no extrato de acetato de etila foliar, foram identificados através de análises em CG-EM e CLAE-DAD-EM. Análises realizadas em CCF demonstraram a presença de terpenos, alcaloides e cumarinas, sendo estas, portanto, classes de substâncias representativas da espécie. A atividade antioxidante do óleo essencial e seis extratos das folhas de Xylopia ochrantha foram avaliadas utilizando o método ORAC, com valores na faixa entre 0,42 ± 0,01 e 1,85 ± 0,03 mmolTE / g. A atividade antimicrobiana do óleo essencial e extratos de Xylopia ochrantha também puderam ser analizados através dos métodos de diluição em placas e microdiluição em caldo. O óleo essencial e as partições diclorometânica e de acetato de etila das folhas de Xylopia ochrantha apresentaram atividade contra diferentes cepas de Staphylococcus aureus, além de serem ativos também contra Enterococcus faecalis, Staphylococcus haemolyticcus, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus capitis e Staphylococcus hominis. O extrato diclorometâncio apresentou um MIC de 128 mcg/mL contra ORSA sanguíneo. Nas demais análises, os extratos ativos apresentaram MIC de 512 mcg/mL. O extrato etanólico demonstrou atividade citotóxica contra células de tumor hipofisiário (AtT20), sendo possível observar uma diminuição significativa da proliferação e viabilidade celular dentro de 24 horas / Xylopia ochrantha (Mart.) is a endemic species from Brazil, occurring mainly in the Restinga Forest located along the Brazilian coast. The chemical and biological studies in this work are the first related to this species. In phytochemical study, the extraction of essential oils from leaves and fruits of this species was performed by hydrodistillation and analyzed by GC-MS/GC-FID. In total, 36 compounds were identified, of which germacrene D, bicyclogermacrene, silvestrene (leaves), α-phellandrene, β-phellandrene and sabinene (fruits) were the main components. The phytosterols campesterol, stigmasterol and gamma-sitosterol, from the foliar hexane extract, besides the majority flavonoids quercitrin and luteolin-7-O-rutinoside, found in the foliar ethyl acetate extract, were identified through analysis on GC-MS and HPLC-DAD-MS. Analyzes made in TLC showed the presence of terpenes, alkaloids and coumarins, which are also representative substances of the species. Regarding the study of biological species, the antioxidant activity was held to six extracts and essential oil from the leaves of Xylopia ochrantha using the ORAC method, with values in the range between 0.42 ± 0.01 and 1.85 ± 0.03 mmolTE / g. The antimicrobial activity of essential oil and extracts of Xylopia ochrantha could be analyzed by plate dilution and broth microdilution methods. The essential oil and extracts of dichloromethane and ethyl acetate from leaves of Xylopia ochrantha showed activity against different strains of Staphylococcus aureus, and were also active against Enterococcus faecalis, Staphylococcus haemolyticcus, Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus capitis and Staphylococcus hominis. Dichloromethane extract showed a MIC of 128 mcg / mL against ORSA blood. In other analysis, active extracts showed MIC of 512 mcg / mL. Ethanol extract showed cytotoxic activity against tumor cells of the pituitary (AtT20), where was possible to observe a significant decrease in cell viability and proliferation within 24 hours

This work describes the results obtained from the phytochemical study, chemometric analysis and activity cytotoxic in vitro and in vivo of the leaves Guatteria pogonopus Mart., a species of Annonaceae that occurs in Sergipe. The leaves were subjected to two processes. In the first, the leaves were conducted extraction and the study of the chemical composition of the essential oil, considering the seasonality effect; in the second, the isolation of fixed compounds was performed on order to identify alkaloids. Both studies were evaluated towards the antitumor activity in vitro and in vivo. Yields of essential oils ranged from 0.34 % for the month of October/2012 to 0.10 % for the month of September/2012. This variation can be explained by the climate, which the rainfall was higher in September compared to October. This means that the greater the amount of precipitation, reduced yield. The sesquiterpene hydrocarbons were the main constituents of the oils in the samples, with the highest concentration in the month of July/2012 (71.93 %). They were identified as á- and â-pinene, bicyclogermacrene, germacrene B, ã-patchoulene, spathulenol, á-santalene, (E)-caryophyllene, ã-elemene and globulol. In Principal Component Analysis (PCA), both CP1 and CP2 components can explain 90 % of the total variance. It is remarkable that several compounds have focused on the right of the axis of CP1. This phenomenon explains the regularity of the percentage that appears in each month. The ã-patchouleno, spathulenol and bicyclogermacrene compounds protrude to the left of the axis of CP1. Which are the major compounds of the composition of essential oils predominant in all sampling months. In addition to these one can see (E)-caryophyllene and á-santalene, to a lesser prominence this axis. In Hierarchical Cluster Analysis (HCA) formed groups because of similarities. The results of the in vitro antitumor activity of essential oil showed pronounced cytotoxic activity against NCI-H358M, PC-3M and OVCAR-8 lines. In vivo study oil was able to inhibit tumor growth, thus indicating that the essential oil has a significant antitumor potential. Phytochemical study the alkaloidal sheets from the fraction of methanol extract was possible to date the isolation of six alkaloids encoded as GP-1 (nornuciferine), GP-2 (isocorydine), GP-3 (mixture of the nornuciferine and anonaine), GP-4 (lisycamine) and GP-5 (liriodinene). The identification of the alkaloids was performed by 1D/2D 1H and 13C NMR, MS and GC/MS, and comparison with authentic standards and literature data. The cytotoxicity assay performed with single concentration in the extracts and fractions (50 mg/ml) and basic substances (25 mg/mL) revealed promising results with minimal inhibition of 50 % of at least one tumor cell lines. Among the extracts, fractions and evaluated substance, the alkaloidal fraction and compounds GP-1 were the most active against strains B16-F10 and HepG2. Because the activities presented and in order to obtain the IC50 for these two samples front lines K562, HL-60 cells and PBMC were also evaluated. Both the alkaloidal fraction and the compound GP-1 showed good results. The results indicated that G. pogonopus is a biologically active cytotoxic properties with promising source of compounds. / Este trabalho descreve os resultados do estudo fitoquimico, analise quimiometrica e investigacao citotoxica in vitro e in vivo das folhas de Guatteria pogonopus Mart. uma especie de Annonaceae de ocorrencia em Sergipe. As folhas foram submetidas a dois processos: no primeiro, foi realizada a extracao e o estudo da composicao quimica do oleo essencial, levando em consideracao o efeito da sazonalidade. Enquanto que no segundo, foi realizado o isolamento de compostos fixos visando a identificacao de alcaloides. Ambos estudos foram avaliados frente a atividade antitumoral in vitro e in vivo. Os rendimentos dos oleos essenciais variaram de 0,34% para o mes de outubro/2012 a 0,10% para o mes de setembro/2012. Essa variacao pode ser explicada pelo clima, o qual o indice pluviometrico foi maior para setembro em relacao a outubro. Isso significa, que quanto maior a quantidade de precipitacao, menor o rendimento. Os sesquiterpenos hidrocarbonetos foram os constituintes majoritarios nas amostras dos oleos, com maior concentracao no mes de julho/2012 (71,93%). Os constituintes majoritarios identificados foram Ñ- e £]-pineno, biciclogermacreno, germacreno B, £^-patchouleno, espatulenol, £-santaleno, (E)-cariofileno, £^-elemeno e globulol. Na Analise de Componentes Principais (ACP), as duas componentes CP1 e CP2 conseguem explicar mais de 90% da variancia total dos dados. E possivel notar que varios compostos se concentraram na direita do eixo da CP1. Esse fenomeno explica a regularidade da porcentagem que aparece em cada mes. Os compostos £^-patchouleno, espatulenol e biciclogermacreno se sobressaem para esquerda do eixo da CP1. Os quais sao os compostos majoritarios da composicao dos oleos essenciais predominante em todos os meses de coleta. Na Analise de Agrupamento Hierarquico (AAH) formaram-se grupos devido a semelhancas. Os resultados da atividade antitumoral in vitro do oleo essencial indicaram pronunciada atividade citotoxica contra as linhagens de NCI-H358M, PC-3M e OVCAR-8. No estudo in vivo o oleo foi capaz de inibir o crescimento tumoral, indicando assim, que o oleo essencial apresenta um potencial antitumoral significativo. Do estudo fitoquimico da fracao alcaloidica do extrato metanolico foi possivel ate o momento o isolamento de seis alcaloides codificados como GP-1 (nornuciferina), GP-2 (isocoridina), GP-3 (nornuciferina e anonaina em mistura), GP-4 (lisicamina), GP-5 (liriodenina). A identificacao dos alcaloides foi realizada por RMN de 1H e 13C 1D/2D, EM e CG/EM, bem como comparacao com padroes autenticos e dados da literatura. O ensaio de atividade citotoxica em concentracao unica realizado com os extratos e fracoes (50 £gg/mL) e substancias puras (25 £gg/mL), revelaram resultados promissores com inibicao minima de 50% de pelo menos uma das linhagens tumorais. Entre os extratos, fracoes e substancia avaliadas, a fracao alcaloidica e o composto GP-1 foram os mais ativos contra as linhagens B16-F10 e HepG2. Devido as atividades apresentadas e com o objetivo de se obter a CI50 essas duas amostras tambem foram avaliadas frente as linhagens de celulas K562, HL-60 e PBMC. Tanto a fracao alcaloidica como o composto GP-1 apresentaram bons resultados. Os quais indicaram que G. pogonopus e uma fonte promissora de compostos biologicamente ativos com propriedades citotoxicas.

RODRIGUES, Bárbara Suellen Ferreira. Prospecção de metabólitos secundários citotóxicos oriundos de fungos marinhos isolados de sedimentos do litoral cearense. 2014. 278 f. Tese (Doutorado em Química)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Aline Mendes (alinemendes.ufc@gmail.com) on 2017-01-02T20:38:08Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_bsfrodrigues.pdf: 13430547 bytes, checksum: 6f2c6f85d827bde069859fc89c234d8d (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-04T22:32:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_bsfrodrigues.pdf: 13430547 bytes, checksum: 6f2c6f85d827bde069859fc89c234d8d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-04T22:32:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_bsfrodrigues.pdf: 13430547 bytes, checksum: 6f2c6f85d827bde069859fc89c234d8d (MD5) Previous issue date: 2014 / This thesis reports the investigation of marine fungi as producers of cytotoxic secondary metabolites against the human tumor cell line HCT-116 (colon). The fungal strains investigated in this study were isolated from sediments collected in Ceará coast, thirty-five of them from Mucuripe beach (BRF012-BRF046) and forty-eight from Pecém beach (BRF047-BRF094). All strains were subjected to small-scale cultivation (100 mL of potato-dextrose medium with synthetic sea water) during fourteen days. After the cultivation, the culture media were partitioned with ethyl acetate (EtOAc) and the organic extracts subjected to cytotoxic activity against the cancer cell line HCT-116. Strains that showed the highest percentage of cell growth inhibition, BRF019 (95.5%), BRF079 (100.0%) and BRF082 (100.0%), were selected for bioguided fractionation of the organic extracts. Phylogenetic analyses have identified them as Aspergillus terreus (BRF019) and Dichotomomyces cejpii (BRF079 and BRF082). BRF019 (A. terreus) was cultivated twice in a large scale (6 L and 12 L medium). The bioguided fractionation of EtOAc extracts from the culture medium led to the isolation of five compounds: Terrein, butyrolactone I, II and V, and 6-hidroxymelein. All of them have already been reported in the literature for A. terreus and none showed cytotoxic activity when bioassayed. BRF082 (D. cejpii) was cultivated under the same conditions (15 L and 20 L medium) of BRF019 (A. terreus). The bioguided fractionation of AcOEt extract from the culture medium led to the isolation of an epipolithiodioxopiperazin, gliotoxin, and four analogues: Acetylgliotoxin G, bis(dethio)bis(methylthio)gliotoxin, acetylgliotoxin, 6-acetylbis(methylthio)gliotoxin, besides the quinazolinic alkaloid fiscalin B. These compounds were tested for cytotoxic activity and suggested gliotoxin (IC50 1.02) and acetylgliotoxin G (IC50 2.39) as responsible for the cytotoxicity of the EtOAc extract of D. cejpii. / Este trabalho relata a investigação de fungos marinhos como produtores de metabólitos secundários citotóxicos frente à linhagem de células tumorais humanas HCT-116 – cólon. Os fungos investigados neste trabalho foram isoladas de sedimentos do litoral cearense, sendo trinta e cinco obtidos da praia do Mucuripe (BRF012-BRF046) e quarenta e oito da praia do Pecém (BRF047-BRF094). Todas as linhagens obtidas foram submetidas a cultivo em pequena escala (100 mL de meio batata-dextrose com água marinha sintética) durante quatorze dias. Após o período de cultivo, os meios de cultura foram particionados com acetato de etila (AcOEt) e os extratos orgânicos submetidos a ensaio de atividade citotóxica frente à linhagem de células cancerígenas HCT-116. Os fungos cujos extratos apresentaram o maior percentual de inibição do crescimento celular, BRF019 (95,5 %), BRF079 (100,0 %) e BRF082 (100,0 %), foram selecionados para fracionamento bioguiado dos seus extratos orgânicos. As análises filogenéticas destas linhagens levaram à identificação das mesmas como sendo Aspergillus terreus (BRF019) e Dichotomomyces cejpii (BRF079 e BRF082). BRF019 (A. terreus) foi cultivada duas vezes em grande escala (6 L e 12 L de meio). O fracionamento bioguiado dos extratos AcOEt, provenitentes do meio de cultura, levou ao isolamento de cinco substâncias: Terreína, butirolactonas I, II e V e 6-hidroximeleína. Todas essas substâncias já haviam sido relatadas na literatura para A. terreus e nenhuma apresentou atividade citotóxica quando ensaiada. BRF082 (D. cejpii) foi cultivada nas mesmas condições (15 L e 20 L de meio) de BRF019 (A. terreus). O fracionamento bioguiado do seu extrato AcOEt, proveniente do meio de cultura, levou ao isolamento da epipolitiodioxopiperazina gliotoxina e quatro análogos: Acetilgliotoxina G, bis(detio)bis(metiltio)gliotoxina, acetilgliotoxina, 6-acetilbis(metiltio)gliotoxina, além do alcaloide quinazolínico fiscalina B. Tais substâncias foram submetidas a ensaio de atividade citotóxica, cujos resultados obtidos levaram à atribuição da gliotoxina (IC50 1,02) e da acetilgliotoxina G (IC50 2,39) como responsáveis pela citotoxicidade do extrato AcOEt de D. cejpii.

Na busca por espécies vegetais com atividade antileishmania, selecionaram-se, para o estudo, duas espécies bem conhecidas da família Asteraceae: Artemisia annua L. e Bidens pilosa L. Ambas são reconhecidamente utilizadas na medicina popular, como antiprotozoárias. Apesar de terem sido amplamente estudadas em diversos aspectos, alguns permaneceram inexplorados, até o momento, e foram abordados, neste trabalho. As duas espécies foram analisadas quanto aos aspectos químico e biológico de extratos (hidroetanólico e infuso) e frações orgânicas selecionados, em função da atividade antileishmania in vitro, frente às formas promastigotas de Leishmania amazonensis. Os extratos foram obtidos a partir de órgãos vegetais, em estados de conservação diferentes (in natura, droga) e coletados em fenofases distintas. Extratos e frações orgânicas das espécies estudadas mostraram promissora atividade antileishmania in vitro e baixo nível de citotoxicidade in vitro em células epiteliais humanas (HEP-2). No estudo químico dos extratos e frações bioativos, realizaram-se análises qualitativas e/ou quantitativas de terpenos, flavonóides e de marcadores específicos (artemisinina, quercetina e rutina), avaliando-se a variação da composição dos mesmos, nas diferentes fenofases consideradas. Discutiram-se as possíveis relações existentes entre a composição química e a atividade biológica verificada. Aspectos inéditos do estudo morfoanatômico de partes aéreas de A. annua foram descritos. / Plants are potential sources of new antileishmanial drugs. Two well-known antiprotozoal species were selected, from the Asteraceae family, for this study: Artemisia annua L and Bidens pilosa L. Despite the traditional and scientific accumulated knowledge, some aspects were not investigated before and were the subject of this work. Several extracts (infusions and ethanol 96 &#176;GL) and selected fractions from both species were evaluated according to the different parameters, such as: plant organs and/or parts, growth stages and drying state of starting materials (fresh, drug). Fractions were selected among those more active against promastigotes of Leishmania amazonensis. Ethanol extracts and their fractions showed a high level of in vitro antileishmanial activity and a low cytotoxicity on epithelial human cells (HEP-2). Qualitative and/or quantitative analysis of extracts and fractions were performed for terpenes, flavonoids and selected markers (artemisinin, quercetin and rutin) in order to characterize them and evaluate variations during the different growth stages. Correlations of the chemical composition and the biological activity were discussed. The main anatomical characters of the aerial parts of A. annua were described for the first time and illustrated by photomicrographs.