A prevalência de doenças respiratórias alérgicas tem aumentado, embora de origem multifatorial, a atividade física parece representar um importante contribuinte. Objetivo: Nós hipotetizamos que o condicionamento aeróbio (AC) prévio à sensibilização com OVA, poderia reduzir a inflamação das vias aéreas, através de um desbalanço via Th1/Th2 ou da citocina regulatória (IL-10). Métodos: camundongos BALB/c foram divididos em 4 grupos (n=8): não treinados e não-sensibilizados (controle), treinados e não-sensibilizados (AC), não treinados e sensibilizados-OVA (OVA) e o grupo treinado e sensibilizado (OV+AC). O condicionamento aeróbio foi realizado em esteira ergométrica adaptada para camundongos por 8 semanas, seguidos de sensibilização por OVA ou soro fisiológico. Foram avaliadas a inflamação celular das vias aéreas e peribrônquica, títulos IgE e IgG1, expressão de Th1 (IL-2 e IFN-), Th2 (IL-4, IL-5, IL-13), citocina regulatória (IL -10), PGE2 e remodelamento das vias aéreas. No peribrônquico a expressão de eotaxina, RANTES, ICAM-1, VCAM-1, TGF- e VEGF. Resultados: Os grupos controle e AC tiveram resultados semelhantes nas avaliacões (p> 0,05). O grupo OVA apresentou células inflamatórias nas vias aéreas e região peribrônquica, remodelamento e um aumento da IgG1 e títulos IgE (p <0,05). Apresentou um aumento na expressão de citocinas Th2, mas não Th1, assim como, aumento na expressão de IL-10, ICAM-1, VCAM-1, RANTES, TGF- e VEGF também foram observadas. O grupo OVA+AC apresentou uma menor migração de eosinófilos e linfócitos para as vias aéreas inferiores e titulação de IgG1 e IgE (p<0,05) e menor expressão de citocinas Th2, porém, os níveis Th1 não foram alterados. A inibição da expressão de IL-10, ICAM-1, VCAM-1, RANTES, TGF- e VEGF, assim como, o remodelamento das vias aéreas, também foi observado no grupo OVA+AC (p<0,05). Conclusão: Nossos resultados sugerem que a melhora do condicionamento aeróbio inibi a sensibilização e a inflamação alérgica / Prevalence of allergic respiratory diseases has increased and although its origin likely multifactorial, reduced physical activity seems to represent an important contributor. Objective: We hypothesize that an improvement in aerobic conditioning (AC) previous to OVA sensitization would reduce airway inflammation via either an imbalance Th1/Th2 pathway or regulatory cytokine (IL-10). Methods: BALB/c mice were divided in 4 groups (n=8): non-trained and non-sensitized (Control), AC and non-sensitized (AC), non-trained and OVA-sensitized (OVA), and AC and OVA (OVA+AC). AC was performed in a treadmill (8 weeks) followed by either OVA or saline sensitization. It was evaluated airway and peribronchial cell inflammation, specific OVA-IgE and -IgG1 titers, expression of Th1 (IL-2 and IFN-), Th2 (IL-4, IL-5, IL-13) or regulatory (IL-10) cytokines, PGE2 and airway remodeling. Peribronchial expression of eotaxin, RANTES, ICAM-1, VCAM-1, TGF- and VEGF was also evaluated. Results: AC and control groups had similar results in all evaluated outcome (p>0,05) OVA sensitization induced airway and peribronchial cell inflammation and remodeling and an increase in the IgG1 and IgE titers (p<0,05). An increase in the expression of Th2 but not Th1 cytokines was well as an increase in the expression of IL-10, ICAM-1, VCAM-1, RANTES, TGF- and VEGF was also observed. OVA+AC group presented a lower migration of eosinophils and lymphocytes to the airways and lower titer of IgG1 and IgE (p<0,05). OVA+AC group also presented lower expression of Th2 cytokines however Th1 levels were unchanged. A lower expression of IL-10, ICAM-1, VCAM-1, RANTES, TGF- and VEGF as well as airway remodeling was also observed in OVA+AC group (p<0,05). Conclusion: Our results suggest that improvement in aerobic conditioning inhibit allergic sensitization and inflammation

Avaliou-se prospectivamente 19 pacientes com obstrução infravesical por hiperplasia prostática benigna selecionados pra prostatectomia transvesical. Obteve-se um fragmento da parede da bexiga e quantificou-se o colágeno no epimísio, perimísio e endomísio do detrusor. Amostra vesicais de oito doadores cadavéricos de órgãos serviram como controles. Observou-se padrão focal de aumento do colágeno na camada muscular da bexiga dos pacientes com obstrução. Demonstrou-se que a idade correlaciona-se positivamente com o aumento da quantidade de colágeno com a diminuição da complacência vesical, o aumento da prevalência de hiperatividade detrusora e a maior chance de retenção urinária / We prospectively evaluated 19 patients with bladder outlet obstruction by benign prostatic hyperplasia selected for transvesical prostatectomy. A sample of the bladder wall was obtained and the collagen was measured at the level of epimysium, premysium and endomysium. Bladder samples from eight cadaveric organ donors were used as controls. A focal pattern of collagen increase was observed at the bladder smooth muscle layer of obstructed patients. Age was shown to correlate with increased collagen quantity. Increased collagen quantity also correlated with decreased bladder compliance, higher prevalence of detrusor overactivity and of urinary retention

Tendões são descritos como tecido conjuntivo denso modelado que inserem os músculos aos ossos. Sua principal função é servir como tecido de transição das forças contráteis geradas pelos músculos aos ossos, podendo assim gerar movimentos. Entre todos os tendões, o calcâneo é um dos mais frequentemente lesados. As lesões ocorrem principalmente em homens e são mais frequentes entre a terceira e quarta década de vida. Dentre os vários métodos de sutura existentes, do ponto de vista clínico, a de Kessler-Tajima com os nós entre os cotos é muito utilizada por evitar o estrangulamento da microcirculação. Após a cirurgia o paciente retorna ao trabalho após 85 dias, em média, podendo atingir até 270 dias. O objetivo do presente estudo foi testar a eficiência da aplicação da proteína biocompatível F1, uma proteína extraída a partir do látex natural da Hevea brasiliensis, sobre tendões lesados, buscando uma melhora no reparo, assim como, a influência da sutura-U e de Kessler-Tajima. Alterações musculares decorrentes da lesão no tendão também foram avaliadas. Para isso, utilizamos ratos Sprague Dawley machos de 3 meses, que foram submetidos a tenotomia completa, a lesão foi corrigida com ambas as suturas, seguido da aplicação da proteína e avaliados após duas e quatro semanas. As técnicas utilizadas para análises no tendão foram as de microscopia de luz, microscopia eletrônica de varredura e transmissão, bem como, a síntese de colágeno tipos I e III, TIMP-1 e 2, MMP-2 e 9 por western blot. Para analisar as alterações musculares, a expressão dos genes MuRF1 e Atrogin1 foram quantificadas por RT-qPCR, seguido de análises de contração muscular máxima e teste de fadiga. Os resultados sugerem uma melhora no reparo do tendão no grupo que utilizamos a sutura-U associada à proteína após quatro semanas, devido ao aumento na síntese de colágeno tipo I e a diminuição de MMP-9, assim como, a capacidade de contração muscular máxima retorna aos níveis do grupo controle. A sutura-U também influencia menos na fadiga muscular. / Tendons are described as dense modeled connective tissue which insert the muscles to the bones. Its main function is to serve as transition tissue of the contractile forces generated by muscles to the bones, and thus generate movements. Among all the tendons, the calcaneal is the most frequently injured one. The lesions occur mainly in men and are more frequent between the third and fourth decade of life. Among the several existing suture methods, from a clinical point of view, the Kessler-Tajima with the nodes between the stumps is used to a great extent in order to avoid the microcirculations strangling. After surgery, the patient returns to work after 85 days, on average, and can reach up to 270 days. The objective of this study was to test the efficiency of the application of biocompatible F1 protein, a protein extracted from natural latex from the Hevea brasiliensis, on injured tendons, seeking an improvement in the repair, as well as the influence of the suture-U and Kessler-Tajima. Muscle changes arising from the tendon injury were also evaluated. For this reason, Sprague Dawley male rats at 3 mounths-old were used, which underwent complete tenotomy, the lesion was corrected with both sutures, followed by the application of protein and evaluated after two and four weeks. The techniques used for analyzes in the tendon were the light microscopy, scanning electron microscopy and transmission, as well as the synthesis of collagen types I and III, TIMP-1, -2, MMP-2, and -9 by Western blot. In order to analyze the muscular alterations, the expression of genes MuRF1 and Atrogin1 were quantified by RT-qPCR, followed by analysis of maximum muscle contraction and fatigue testing. The results suggest an improvement in the tendon repair in the group that the suture-U was used associated with protein after four weeks, due to the increase in the synthesis of collagen type I and the decrease of MMP-9, as well as the ability of maximum muscle contraction to return to the levels of the control group. The suture-U also influences on less muscle fatigue.

A terapia de perdas ósseas constitui um dos grandes desafios da área médico-odontológica. Apesar de o enxerto autógeno ainda ser considerado o \"gold standart\", apresenta limitações como a necessidade de um segundo sítio cirúrgico, limitação da quantidade de osso disponível e falta de previsibilidade. A Bioengenharia surgiu como um elemento promissor no tratamento de defeitos ósseos críticos conjugando três elementos principais: as células do paciente, um material carreador e moléculas sinalizadoras. Os materiais carreadores devem ser biocompatíveis, possibilitar a proliferação e diferenciação dos tipos celulares desejados, além de apresentar baixo potencial em desencadear resposta inflamatória. O colágeno tipo I constitui um dos principais produtos da matriz extracelular (MEC) do tecido ósseo sendo, posteriormente, mineralizada. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial carreador de matrizes de colágeno, obtidas de pericárdio bovino submetido a diferentes tempos de hidrólise (24h e 48h). A hipótese foi de que os tempos de hidrólise, a que foram submetidos os materiais, gerando matrizes colagênicas aniônicas, pudessem interferir nos processos de proliferação, diferenciação e mineralização. O potencial em desencadear resposta inflamatória foi avaliado após 24h, 48h e 72h de contato entre as diferentes membranas e macrófagos humanos. As dosagens de mediadores inflamatórios (IL-10, TNF-alfa, TGF-beta e Óxido Nítrico -NO), demonstraram aumento significativo de TGF-beta, em relação ao controle, que desativa macrófagos e estimula proliferação de células e cicatrização. A análise ao microscópio eletrônico de varredura (MEV) e ao microscópio de luz (ML) mostrou que as células osteoprogenitoras, provenientes do endósteo de fêmur de camundongo Balb/c (FOST), proliferaram ao longo dos tempos experimentais sobre a superfície das matrizes colagênicas estudadas. Entretanto, não foram observadas células no interior destas ao longo de todos os tempos experimentais estudados. A observação de picos na dosagem da atividade da fosfatase alcalina (membrana nativa, 28 dias para membrana hidrolisada por 24h e por 48h) e dosagem da presença de cálcio nas membranas (28 dias para membrana nativa e 21 dias para as hidrolisadas), assim como a observação por MET de vesículas compatíveis com o processo de mineralização (21 dias), indicam que houve a diferenciação das células osteoprogenitoras ao longo dos tempos experimentais estudados. Verificou-se maior produção de fosfatase alcalina e cálcio nos materiais hidrolisados em relação à membrana não hidrolisada. A análise por infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) mostrou a presença de ligações fosfato em membranas sem células, independente do tempo experimental, indicando que podem ser decorrentes do tratamento químico necessário para sua obtenção e não do processo de mineralização. A avaliação da capacidade biomimética por espectroscopia de energia dispersiva (EDS) das membranas indicou presença de P e Ca nas membranas avaliadas, mas estes podem não estar associados ao processo de mineralização fisiológica. Concluiu-se que as membranas de pericárdio bovino são biocompatíveis, permitem a proliferação de células osteoprogenitoras em sua superfície. Há indícios de diferenciação celular, mineralização e nucleação de Ca e P. Entretanto, a deficiência na formação de uma porosidade interconectada nas matrizes colagênicas limita a indicação dessas matrizes como carreadores para a bioengenharia óssea. / The therapy of bone defects constitutes one of the great challenges of the medicine and dentistry. Although autogenous is considered \"gold standart\", presents limitations as the necessity of second surgical site, limitation of bone availability and lack of previsibility. Tissue bioengineering appeared as a promising treatment for critical bone defects conjugating three main elements: the patient\'s cells, a scaffold and sinalizing molecules. The biomaterials used as scaffolds must be biocompatible to possibilite proliferation and differentiation of desired cell types, besides presenting low potential to promote inflammatory response. Collagen type I constitutes one of the main products of the extracellular matrix (ECM) of bone tissue, being later mineralized. The objective of this work was to evaluate the carrier potential of anionic collagen matrices, obtained of bovine pericardium submitted to different hydrolysis times (24h and 48h). The hypothesis was that the hydrolysis times, could influence the processes of proliferation, differentiation and mineralization. The potential activation of inflammatory response was evaluated after 24h, 48h and 72h of contact among the different membranes and human macrophages. The quantification of inflammatory mediators (IL-10, TNF-alpha, TGF-beta and NO-2) demonstrated significant TGF-beta increase in relation to the control, that disactivates macrophages and stimulates proliferation of cells and wound healing. Scaning electron microscope (SEM) and light microscope (LM) showed that osteoprogenitor cells, obtained from the endosteum of femur of Balb/c mouse (FOST), had proliferated on the surface of the studied collagenic matrices. However, at the studied experimental times, cells were not observed in the pores of these matrices. The peaks in the quantification of alkaline phosphatase (native membrane, 28 days for matrices hydrolysed for 24h e48h) and quantification of calcium in the membranes (28 days for native membrane and 21 days for the hydrolysed), and vesicles compatible with the mineralization process by transmission electron microscopy - TEM (21 days) indicated differentiation of the FOST cells at the studied experimental times. It was verified higher amount of alkaline phosphatase and calcium in hydrolysed materials in relation to the not hydrolysed. The analysis of Fourier transformed infra red (FTIR) showed phosphate peaks in cell-free membranes, independent of the experimental time, indicating that phosphate could be from membrane chemical treatment and not by mineralization process. The evaluation of biomimetic capacity of the membranes by spectroscopy of dispersive energy (EDS) indicated presence of P and Ca in the evaluated membranes, but they can not be associate to biomineralization. It was concluded that the biomembranes are biocompatible and allow FOST proliferation in its surface. There was an indication of cellular differentiation, mineralization and nucleation of Ca and P. However, the deficience in interconnected porosity in the collagenic matrices limits its indication as scaffolds for tissue bioengineering.

Além das funções mecânicas, sabe-se que o colágeno do tipo I é um dos componentes mais ativos na modulação das atividades biológicas que ocorrem na matriz extracelular (MEC) tais como a adesão celular, a coagulação e a mineralização do osso. Estes eventos ocorrem nos limites do período D, que é provavelmente o domínio funcional que mais prevalece em relação à transferência da informação extracelular para o interior da célula. O objetivo deste trabalho foi estudar as correlações existentes entre as atividades biológicas da MEC e as características estruturais do colágeno do tipo I, principalmente em relação à distribuição topográfica dos aminoácidos (aa) ácidos, básicos e hidrofóbicos. A metodologia empregada foi baseada em informações já existentes sobre a estrutura colágeno do tipo I e suas atividades relacionadas com a MEC. Os resultados mostraram que aa ácidos, básicos e hidrofóbicos formam duas regiões distintas. Em uma delas, aa ácidos e básicos se alojam em áreas delimitadas por aa hidrofóbicos; na outra, aa básicos, ácidos e hidrofóbicos formam aglomerados localizados principalmente nas proximidades dos limites Overlap:Gap. Exceto para os eventos de natureza estrutural são as regiões do colágeno do tipo I mais envolvidas na modulação das atividades da MEC, com a interface Overlap:Gap funcionando como um divisor do controle destas atividades. Enquanto 83,2% das atividades de adesão estão localizadas na zona do Overlap, 93,3% das atividades de natureza estruturais ocorrem a partir da zona limite Overlap:Gap e em direção à zona Gap. Embora nenhuma correlação possa ter sido estabelecida para a resultante de carga, sugere-se que a participação do colágeno do tipo I nas atividades da MEC, possa estar associada a diferenças de interações dos ligantes (carga, massa molecular e hidrofobicidade) com gradientes eletrostático e hidrofóbico existentes ao longo do período D. / Besides mechanical function, it is known today that type I collagen plays a major role in the modulation of many of the activities occurring in the extra-cellular matrix (ECM) such as cell adhesion, coagulation cascade and mineral deposition during bone formation. All these events occur by interaction of cells and ligands within the D-period of collagen microfibrill assembly, which is perhaps the most prevalent module of ECM information in the body. The purpose of this work was the study of correlations between the biological activities of ECM and the structural features of collagen associated with the distribution of acidic, basic and hydrophobic amino acids (aa) within the D period. The methodology used was based on existing information with respect to the structure of type I collagen and its function with respect to ECM activities. The results showed that acidic, basic and hydrophobic aa are found in two major distinct regions: one in which acidic and basic aa are located in areas defined by hydrophobic aa barriers; the other in which acidic, basic and hydrophobic aa forming clusters located preferentially in the boundaries of the Overlap:Gap zones. Except for the structural event, these clusters are the major sites for the interaction involving cell adhesion. The results also suggest that the Overlap:Gap interface function as a borderline for collagen interactions with ECM since 83,2% of the activities related to cell adhesion are located in the Overlap region while 93,3% of the activities of structural nature are enclosed within the limiting zone of Overlap:Gap to the direction of the Gap zone. Although no correlation could be established for net charge along the D period it is suggested that type I collagen participation in the activities of the ECM may also be associated to differences in ligand interactions (charge, molecular mass and hydrophobicity) with the electrostatic and the hydrophobic gradients that exists within the D period.

Materiais bioativos têm a capacidade de interagir com tecidos naturais, provocando reações que favorecem o desenvolvimento de processos como fixação e biodegradação do material implantado, além de regeneração de tecidos. Dessa forma, o objetivo deste trabalho está relacionado ao desenvolvimento de novos biomateriais, os quais foram obtidos a partir de combinações de fases orgânicas e inorgânicas em escala nanométrica, resultando em propriedades aprimoradas, como bioatividade, hidrofilicidade, resistência mecânica e biodegradabilidade. Foram sintetizadas e caracterizadas membranas autossuportadas constituídas por blendas biopoliméricas reforçadas com fosfato de cálcio. Essas blendas foram preparadas a partir da mistura, nas proporções 2,5:2,5 e 3,5:1,5 % (p/v), entre colágeno hidrolisado e polissacarídeos, como quitosana e -carragenana devido as suas notáveis propriedades e a sua semelhança com constituintes da matriz extracelular óssea nativa. A incorporação da fase inorgânica composta por fosfato de cálcio na matriz orgânica se deu por meio de três metodologias diferentes: (1) Precipitação in locu nos interstícios da matriz biopolimérica; (2) Adição das nanopartículas previamente sintetizadas; (3) Adição de hidroxiapatita bovina na matriz biopolimérica. A partir dos resultados obtidos por meio da microscopia eletrônica de varredura (MEV), espectroscopia vibracional na região do infravermelho (FTIR) e difração de raios X (DRX), observou-se que as membranas híbridas formados a partir da metodologia (1), resultaram em deposição homogênea e continua de HAp por toda a matriz biopolimérica. Como consequência, o módulo de Young desses materiais híbridos foi o maior em relação aos valores obtidos para as suas respectivas matrizes biopoliméricas na ausência do mineral, como indicado pelo aumento do módulo de Young até 130% para membranas compostas por quitosana e até 115% para as membranas contendo -carragenana. Verificou-se que a redução da concentração de polissacarídeo na composição das blendas, afeta significativamente o módulo de Young e a taxa de degradação das membranas híbridas em solução salina tamponada de fosfato (PBS, do inglês phosphate buffered saline) a 37°C. Além disso, foi observado que as membranas compostas por quitosana apresentam menor taxa de degradação quando comparadas as membranas híbridas compostos por -carragenana. A incorporação da fase mineral resultou em aumento da hidrofilicidade e energia livre de superfície. A exposição das membranas híbridas ao fluido corporal simulado (SBF, do inglês Simulated body fluid) resultou na deposição de uma camada de fosfato de cálcio sobre a superfície das amostras. A resposta biológica dessas membranas foi avaliada por cultura de osteoblastos, indicando que os materiais contendo quitosana não são tóxicos. No entanto, o mesmo não foi observado para amostras contendo -carragenana, pois essas membranas, devido a elevada taxa de degradação, apresentam baixa estabilidade e integridade no meio de cultura celular. Nanopartículas de prata (NpAg), com tamanho variando de 3-9 nm, foram sintetizadas e incorporadas nas membranas híbridas obtidas pela metodologia 1. Após essa adição, observou-se uma ação antibacteriana contra as bactérias Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa. Esses resultados indicam que as membranas híbridas obtidas neste trabalho podem, potencialmente, ser usadas como membranas de regeneração tecidual guiada temporária em defeitos ósseos / Bioactive materials present the ability to interact with natural tissues, causing reactions that favor the development of processes such as implant and biodegradation of implanted material, as well as tissue regeneration Thus, the objective of this study is to the develop new biomaterials combining organic and inorganic phases at the nanoscale resulting in improved properties such as bioactivity, hydrophilicity, mechanical strength and biodegradation. Herein, hybrid self-supported membranes formed by polymer blends and reinforced with calcium phosphate were synthesized and characterized. These blends were prepared from the combination, in the proportions 2,5 : 2.5 and 3,5 : 1,5 wt%, between hydrolyzed collagen and polysaccharides, such as chitosan and -carrageenan due to its remarkable properties and its similarity to the constituents of the native extracellular matrix. The incorporation of the inorganic phase consisting of calcium phosphate in the organic matrix was performed using three different methodologies: (1) Precipitation in locus in the interstices of the polymer matrix; (2) Addition of previously synthesized nanoparticles; (3) Addition of bovine hydroxyapatite in polymeric matrix. From the results obtained by scanning electron microscopy (SEM), infrared vibration spectroscopy (FTIR) and X-ray diffraction (XRD), it was observed that the hybrid systems formed from the methodology (1) resulted in a homogeneous and continuous deposition of HAp throughout the biopolymer matrix. As a consequence, the Young\'s modulus of these hybrid materials was the higher in relation to the values obtained for the biopolymer matrices in the absence of the mineral, as indicated by the increase of the Young\'s modulus up to 130% for membranes composed by chitosan and up to 115% for the membranes containing -carrageenan. It was noted that the reduction of the polysaccharide concentration in the blends composition significantly affects the Young\'s modulus and the rate of degradation of the hybrid systems in phosphate buffered saline (PBS) at 37 °C. In addition, it was observed that membranes composed of chitosan have a lower degradation rate compared to hybrid membranes composed of -carrageenan. The incorporation of the mineral phase resulted in increased hydrophilicity and surface free energy. Exposure of hybrid membranes to simulated body fluid (SBF) resulted in the deposition of a layer of calcium phosphate under the surface of the samples. The biological response of these membranes was assessed by culturing osteoblasts, indicating that chitosan-containing systems are non-toxic. However, the same was not observed for samples containing carrageenan, because these membranes, due to the high degradation rate, present low stability and integrity in the cell culture medium. Silver nanoparticles (NpAg), ranging in size from 3-9 nm, were synthesized and incorporated into the hybrid membranes obtained by methodology 1. After this addition, an antibacterial action against the bacteria Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa was observed. These results indicate that the hybrid membranes obtained in this study can potentially be used as membranes for temporary guided tissue regeneration in bone defects.

INTRODUÇÃO: Os lasers têm sido utilizados em microcirurgia de laringe, permitindo corte e coagulação simultâneos que, em alguns casos, pode favorecer uma cirurgia exangue e mais precisa. Do ponto de vista vocal, o resultado cirúrgico ideal é aquele em que a lesão é removida com menor dano possível ao tecido adjacente, já que uma cicatrização inadequada da prega vocal pode resultar em disfonia de difícil reparação. O dano colateral dos lasers nos tecidos depende, entre outros fatores, do tipo de laser e de seu comprimento de onda. O laser diodo, quando comparado aos lasers mais utilizados em microcirurgias de laringe, tem como vantagens ser portátil, silencioso, transmite radiação através de uma fibra óptica fina e flexível o que facilita a manipulação do instrumento pelo cirurgião. Entretanto, as reações cicatriciais causadas pelo uso dos diferentes comprimentos de onda do laser diodo (980 nm e 1470 nm) nas pregas vocais ainda não foram estudadas. OBJETIVO: O objetivo desta pesquisa é estudar os efeitos histológicos da variação do comprimento de onda do laser de diodo de 980 nm e 1470 nm, no processo de cicatrização de pregas vocais de coelhos, em 7 e 30 dias após a lesão. MÉTODO: Vinte coelhos machos da raça New Zealand foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos, com cinco animais em cada grupo. Em cada prega vocal foi realizada uma única lesão por 7 segundos, através do contato da ponta da fibra do laser com a superfície do tecido. De um lado, o laser foi ajustado ao comprimento de onda de 980 nm e na prega vocal contralateral 1470nm. Nos grupos I e III, o modo de entrega de energia foi pulsado, enquanto que, nos grupos II e IV, foi contínuo. Após 30 dias (grupos I e II) e 7 dias (grupos III e IV) as laringes foram excisadas e submetidas a coloração com hematoxilina-eosina, além de coloração para colágeno e elastina. A análise histológica realizada foi quantitativa e subjetiva. RESULTADOS: Com o uso do laser diodo foi observado que o tecido apresentava sinais de manipulação (presença de reepitelização e presença de tecido de granulação com fibroblastos). Não foram observadas formações de úlceras, bolhas ou necrose. A extensão linear da lesão fibrótica apresentou diferença significativa, entre os dois comprimentos de onda, sendo maior no laser 980nm, que receberam feixes de laser no modo pulsado, em coelhos sacrificados 7 dias após a lesão. A densidade das fibras colágenas apresentou-se elevada ao uso do laser 1470 nm no mesmo grupo de animais. CONCLUSÃO: O uso de laser diodo demonstrou maior extensão da lesão fibrótica (laser 980 nm, modo pulsado) e maior densidade de colágeno (laser 1470 nm, modo pulsado), em animais na fase inicial (7 dias) da cicatrização. No entanto, ao analisarmos a evolução da cicatrização, tal padrão não fora observado ao longo dos 30 dias. Desta forma, a variação do comprimento de onda do laser diodo, não causou diferenças histológicas significativas na cicatrização inicial / INTRODUCTION: Lasers have been used in endolaryngeal microsurgery, allowing simultaneous cutting and coagulation which, in some cases, may favor a bloodless and more accurate surgery. From a vocal point of view, the ideal surgical outcome is one in which the lesion is removed with the lowest possible damage to the adjacent tissue, since inadequate healing of the vocal fold may result in dysphonia that may be difficult to repair. The collateral damage of the lasers in the tissues depends, among other factors, on the type of laser and its wavelength. The diode laser, when compared to the lasers most used in laryngeal microsurgery, has the advantages of being portable, silent and to the fact it transmits radiation through a thin and flexible optical fiber, which facilitates the manipulation of the instrument by the surgeon. However, the cicatricial reactions caused by the use of different diode laser wavelengths (980 nm and 1470 nm) in the vocal folds have not been studied. OBJECTIVE: The aim of this study is to study the histological effects of diode laser wavelength variation of 980nm and 1470 nm in the healing process of vocal folds of rabbits, 7 and 30 days after the injury. METHOD: Twenty male New Zealand white rabbits were randomized into four groups, with five animals in each group. In each vocal fold, a single spot injury was performed during 7 seconds, through the contact of the tip of the laser fiber with the surface of the tissue. On one side, the laser was adjusted to the wavelength of 980 nm and on the contralateral vocal fold, 1470 nm. In groups I and III, the mode of energy delivery was pulsed, whereas in groups II and IV, it was continuous. After 30 days (groups I and II) and 7 days (groups III and IV) the larynx were excised and stained with hematoxylineosin, in addition to staining for collagen and elastin. The histological analysis was quantitative and subjective. RESULTS: With the use of diode laser, the tissue showed signs of manipulation (presence of reepithelialization and presence of granulation tissue with fibroblasts). No ulcer, blister or necrosis formations were observed. The linear extension of the fibrotic lesion showed a significant difference between the two wavelengths, being higher in the 980 nm laser, which received laser beams in the pulsed mode, in rabbits sacrificed 7 days after the lesion. The density of the collagen fibers was elevated to the use of the 1470 nm laser in the same group of animals. CONCLUSION: The use of diode laser showed a greater extension of the fibrotic lesion (980 nm laser, pulsed mode) and a higher density of collagen (laser 1470 nm, pulsed mode) in animals in the initial phase (7 days) of wound healing. However, when we analyzed the evolution of healing, such pattern had not been observed during the 30 days. Thus, the variation of wavelength of the diode laser did not cause significant histological differences in the initial healing of the vocal folds

Atresia de vias biliares (AVB) é uma hepatopatia colestática específica da criança, de etiologia desconhecida, com evolução para fibrose hepática precoce. AVB é a principal causa de cirrose na infância e principal indicação de transplante hepático pediátrico (Tx). Compreender os fatores envolvidos na progressão da fibrose é fundamental para estabelecer tratamentos efetivos nas hepatopatias crônicas. Identificar padrões histopatológicos associados ao prognóstico da AVB permitiria melhor planejamento dos centros de transplante e adequado aconselhamento familiar. OBJETIVO: Estabelecer padrões de marcadores histopatológicos e de imunofluorescência para colágenos em biópsias hepáticas iniciais e finais de pacientes com AVB submetidos a tratamento cirúrgico. Correlacionar esses marcadores com o prognóstico da doença, definido com base no tempo de evolução até realização do Tx. MÉTODO: Avaliação histológica de alterações biliares e fibrose hepática e histomorfometria da fibrose marcada por picrossírius e da deposição dos colágenos tipos I, III, IV e V marcados por imunofluorescência indireta (IF), em biópsias hepáticas iniciais e finais de 36 pacientes com AVB submetidos à hepatoportoenterostomia de Kasai (KPE) e ao Tx nos últimos 20 anos em nossa instituição. RESULTADOS: A mediana das idades de realização da KPE foi de 12,5 semanas (6-20) e do Tx foi de 27 meses (6-120). Reação ductular e malformação de placa ductal foram mais intensas nas biópsias iniciais (p < 0,05), enquanto fibrose hepática e ductopenia apresentaram padrão progressivo (p < 0,001), sem correlações com a idade de realização da KPE nem com o tempo de evolução até Tx. A morfometria da fibrose hepática marcada pelo picrossírius nas biópsias iniciais apresentou correlação positiva com a idade da KPE (p = 0,01), mas não com a idade do Tx (p = 0,24). A deposição perissinusoidal dos colágenos dos tipos III e V foi mais intensa nas biópsias iniciais (p < 0,01), enquanto os colágenos dos tipos I e IV apresentaram padrão de deposição progressiva (p < 0,01). Pacientes com maior deposição perissinusoidal de colágeno tipo I nas biópsias iniciais apresentaram curva de tempo de evolução até Tx sugerindo pior prognóstico (p = 0,04). CONCLUSÃO: Marcadores histopatológicos de alterações biliares, fibrose hepática e deposição de colágenos apresentaram características evolutivas distintas nas fases inicial e final da AVB, sem correlação com o tempo de evolução até Tx. A morfometria da deposição perissinusoidal de colágeno tipo I em biopsias iniciais marcadas por IF pode ser correlacionada ao tempo de evolução até Tx em pacientes com AVB operada / Biliary atresia (BA) is a specific cholestatic liver disease of unknown etiology that affects children and progresses to early hepatic fibrosis. BA is the main indication of pediatric liver transplantation (LTx). Understanding the factors involved in the progress of fibrosis is essential to establish effective treatment to chronic liver disease. Histopathological markers in liver biopsies could be useful to predict progression to end stage disease and to make it possible to improve planning in transplantation centers and parental orientation. OBJECTIVE: To establish histopathological or immunohistochemical markers in initial or final liver biopsies of BA patients and correlate those markers with prognosis, as defined by progression time lapse until LTx. METHOD: Histological analysis of multiple parameters of biliary alterations and morphometrical assessment of liver fibrosis were performed, besides indirect immunofluorescence assays (IF) for type I, III, IV and V collagens in initial and final liver biopsies of 36 patients with BA submitted to Kasai hepatoportoenterostomy (KPE) and LTx in the last 20 years in a single center. RESULTS: The median of the ages at KPE was 12.5 weeks (6-20) and at LTx was 27 months (6-120). Ductular reaction and ductal plate malformation were more severe in the initial biopsies (p < 0.05), while ductopenia and liver fibrosis were more severe in final biopsies (p < 0.001), though without correlation with age at KPE nor with progression time lapse until LTx. Morphometrical assessment of liver fibrosis marked by picrosirius red in initial biopsies demonstrated positive correlation with age at KPE (p = 0.01) but not with age at LTx (p = 0.24). The perisinusoidal deposition of type III and V collagens was more extended in the initial biopsies (p < 0.01), while type I and IV collagens deposition indicated progression (p < 0.01). Patients with large amounts of perisinusoidal type I collagen in the initial biopsies had worse progression time curve until LTx (p = 0.04). CONCLUSION: Biliary alterations, liver fibrosis and collagens deposition demonstrated distinctive progression findings in the initial or final phases of the BA, without prognostic correlation. Morphometrical assessment of perisinusoidal deposition of type I collagen by IF in the initial biopsies can be correlated with progression time until LTx in patients with post-surgical BA

As nanopartículas poliméricas apresentam grande potencial como nanotransportadores de fármacos, o que torna o estudo de novas composições essencial para seu desenvolvimento. No presente trabalho foram preparadas nanopartículas poliméricas, usando biopolímeros como a quitosana, o colágeno e a gelatina. A metodologia de preparação foi baseada na reticulação iônica da quitosana com tripolifosfato de sódio. Com a finalidade de obter nanopartículas de menores tamanhos foi usada quitosana de baixa massa molar, polímero obtido pela metodologia da degradação oxidativa. A quitina foi extraída do gladio de lula (Loligo sp) que posteriormente foi desacetilada e despolimerizada, obtendo quitosana de 50,4 kDa de massa molar e 81,04 % de grau de desacetilação. As nanopartículas obtidas foram caracterizadas pelas técnicas FTIR, MEV, DLS e potencial Zeta. Foram obtidas nanopartículas das misturas quitosana/gelatina/tripolifosfato com tamanhos de até 236,9 ± 1,6 nm e índice de polidispersividade de 0,13 ± 0,02. Também foram obtidas nanopartículas dequitosana/colágeno/tripolifosfato com tamanhos de até <br /> 251,9 ± 2,9 nm e índice de polidispersividade de 0,20 ± 0,02. Foi encontrado aumento do tamanho das nanopartículas quando é aumentado a quantidade de proteína na nanopartícula. Também foi avaliado o potencial das nanopartículas como nanotransportadores mediante a incorporação de uma molécula de prova como o ácido pícrico, composto escolhido pelo baixo valor da constante de dissociação ácida, que facilitaria a incorporação devido a uma possível interação com a quitosana. Foi encontrada uma quantidade incorporada de 7,39 ± 0,13 % e 6,44 ± 0,23% para nanopartículas de quitosana/gelatina/tripolifosfato e quitosana/colágeno/tripolifosfato, respectivamente. Os estudos de liberação mostraram que a saída do ácido pícrico é rápida quando são usadas nanopartículas preparadas com gelatina comparando-se com partículas com colágeno que originam uma liberação mais lenta do ácido pícrico. Estudos da cinética de liberação usando modelos matemáticos revelaram que as curvas de liberação seguem o mecanismo de difusão. / Polymeric nanoparticles present big potential as drug nanocarrier, therefore the study of new compositions is essential for their development. In this study was prepared polymeric nanoparticles using biopolymers such as chitosan, collagen and gelatin. The preparation methodologies were based on the ionic reticulation of chitosan with sodium tripolyphosphate. In order to obtain small size nanoparticles it was used chitosan of low molecular weight; this polymer was obtained by oxidative depolymerization. Chitin was extracted from squid pens (Loligo sp) and subsequently it was deacetylated and depolymerized, getting a chitosan with 50.4 kDa of molecular weight and 81.04 % of deacetylation degree. The nanoparticles were characterized by FTIR, SEM, DLS and Z potential. From the chitosan/gelatin/tripolyphosphate mixtures it was obtained nanoparticles with size up to 236.9 ± 1.6 nm and 0.13 ± 0.02 of polydispersity index. Also, were obtained nanoparticles of chitosan/collagen/tripolyphosphate with size up to 251.9 ± 2.9 nm and 0.20 ± 0.02 of polydispersity index. Was foundan increase in nanoparticles size when increasing the protein quantity in the nanoparticle. The potential of nanoparticles as nanocarrier was evaluated with one test molecule, the picric acid. This compound was selected for the low value of acid dissociation constant facilitating the incorporation due to a possible interaction with chitosan. The content loading was of 7.39 ± 0.13 % and 6.44 ± 0.23% for chitosan/gelatin/tripolyphosphate nanoparticles and chitosan/collagen/tripolyphosphate nanoparticles respectively. The release studies showed that the picric acid delivery is quick when nanoparticles prepared with gelatin were used. The nanoparticles prepared with collagen originate backwardness in the picric acid delivery. Release kinetic studies using mathematic models showed that the release curve have a diffusion mechanism.

O colágeno é a proteína mais abundante em mamíferos, sendo o tipo I a forma prevalente. Essa proteína possui propriedades interessantes, como baixa imunogenicidade e toxicidade, biocompatibilidade, além de promover o reconhecimento, adesão e diferenciação celular através de sequências RGD (arginina-glicina-aspartato). Por isso, o colágeno é utilizado na composição de diversos biomateriais. Contudo, após a implantação in vivo, a degradação do material por colagenases endógenas pode ocorrer rapidamente, limitando sua utilização. A funcionalização com plasma frio pode superar essa limitação, sendo capaz de adicionar uniformemente grupos funcionais na superfície de materiais e ser modulada para preservar ou alterar de maneira seletiva as propriedades do material. Este estudo buscou funcionalizar o pericárdio bovino (PB) – composto principalmente por colágeno tipo I – utilizando plasma frio a fim de obter um novo biomaterial. Para isso, amostras de PB foram tratadas com plasma de argônio e CO2 a 2,45GHz e 500 W em um intervalo tempo dede 0s (PBCT) a 240s (PB240) com incrementos de 30s. As amostras foram analisadas por espectroscopia de infravermelho e a validação da análise foi realizada através de modelagem molecular computacional. O material foi caracterizado por microscopia óptica e eletrônica de varredura, ângulo de contato e capacidade higroscópica. A biocompatibilidade do PB tratado foi verificada pela implantação do material na camada subcutânea de camundongos Balb/c durante 3, 7 15 e 30 dias. Os resultados mostraram que as modificações causadas pelo tratamento com plasma foram tempo dependente. Após 120s de tratamento (PB120) houve a adição de grupos éster na forma de ligações crosslink sem alterações à estrutura proteica. Entretanto, após 150s foi observado o início de um processo de etching e degradação do colágeno, acentuado aos 240s. Além disso, o tratamento provocou um aumento na hidrofobicidade da superfície do material. A implantação subcutânea mostrou que não houve perda na biocompatibilidade do nos grupos tratados quando comparado ao controle. Dessa forma, verificou-se que o tratamento com plasma pode ser modulado para modificar o colágeno sem que haja perdas em suas propriedades de interesse. Novos estudos são necessários para a adequação da funcionalização com plasma, direcionando-a para modificações desejadas e aplicações específicas do biomaterial. / Collagen is the most commonly found protein in mammals and Type I is its most prevalent type. This protein shows interesting properties as low immunogenicity and toxicity, biocompatibility, besides the ability to promote cell recognition, differentiation and induce cell attachment through RGD (arginine-glycine-aspartate) sequences. Due to these characteristics, collagen is used in many biomaterials. However, after in vivo implantation, the degradation of the material by endogenous collagenases can occur too soon, impairing its application. Cold plasma functionalization can overcome this limitation; it is able to add evenly new functional groups on materials’ surfaces and can be tailored to preserve or alter selectively the bulk properties of the material. Therefore, this study aimed the functionalization of bovine pericardium (PB) – material composed of collagen type I – using cold plasma in order to obtain a new biomaterial. PB was treated with argon (Ar) and carbon dioxide (CO2), microwave power source 2.45Hz, 500 W. The treatment was carried out from 0 (PBCT) up to 240s (PB240), with a 30s increment. The samples were analysed by FTIR-ATR and the analysis validation was done through computing molecular modelling. The material was characterized by optical microscopy, SEM, contact angle and swelling. PB biocompatibility was assessed through subcutaneous implantation of the material in mice Balb/c for 3, 7, 15 and 30 days. The results indicated the changes caused by plasma treatment were time-dependent. By 120s of treatment (PB120) ester groups were added in the material, forming crosslink bonds without modification within the protein structure while 150s of treatment caused the beginning of an etching process and collagen degradation, which was more distinct at 240s; there was also an increase in the hydrophobicity on the surface of the treated material. The subcutaneous implantation test showed there wasn’t biocompatibility loss of treated PB when compared to control. Therefore, it was verified that plasma treatment can be tailored to modify collagen without impairing its properties of interest. New studies are necessary to suit plasma functionalization according the desired modifications and specific applications of the biomaterial. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior