As leucemias correspondem a 30% dos tumores pediátricos, e constituem as neoplasias mais frequentes em indivíduos com menos de 15 anos. Apesar da elevada taxa de cura, frequentemente a ela está associada resistência à quimioterapia e efeitos colaterais tardios. Por isso, novas estratégias de tratamento, diagnóstico e prognóstico são necessárias. O fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) e seus receptores de quinase relacionados à tropomiosina (tropomyosin related kinase, ou Trk) estão envolvidos com muitos processos na medula óssea (MO). Entretanto, o papel do BDNF em leucemias agudas (LA) pediátricas ainda não é bem conhecido. O objetivo desse estudo foi analisar os níveis de BDNF em amostras de MO ou sangue periférico (SP) de crianças com LA, e iniciar a caracterização dos efeitos de agonistas e antagonistas de neurotrofinas sobre culturas primárias de leucemias linfóides agudas em diferentes momentos terapêuticos Foram coletadas amostras de MO ou SP de crianças e adolescentes com leucemia linfóide aguda (LLA), crianças e adolescentes com leucemia mielóide aguda (LMA), e indivíduos saudáveis (IS) da mesma faixa etária. Para análise dos níveis séricos de BDNF utilizou-se kit de imuno-ensaio enzimático tipo sanduíche. Quando comparados aos IS os níveis de BDNF de pacientes com LA, ao diagnóstico, foram significativamente menores. Resultados similares foram observados nos pacientes durante indução, consolidação, diagnóstico e tratamento de recidiva. Da mesma forma, os níveis de BDNF foram inferiores em pacientes que receberam transfusão de plaquetas e, ao diagnóstico naqueles pacientes que foram a óbito. Para a caracterização dos efeitos de agonistas e antagonistas de neurotrofinas em cultura de células, amostras de pacientes ao momento do diagnóstico e no momento de indução do tratamento foram utilizadas. Os linfócitos foram extraídos e, após plaqueamento, as células foram tratadas com BDNF (Sigma, B3795), NGF (Sigma, SRP3015) e K252a (Sigma, 05288) por 72 horas. A viabilidade foi avaliada pelo método de exclusão por azul de Tripan. Devido às dificuldades no cultivo das células, esses dados ainda estão em análise. / Leukemias account for 30% of pediatric tumors and are the most frequent cancers in people under 15 years. Despite the high cure rate, often it is associated with resistance to chemotherapy and late side effects. Therefore, new strategies for treatment, diagnosis and prognosis are necessary. The brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and their kinase receptor related tropomyosin (tropomyosin related kinase, and Trk) are involved in many processes in bone marrow (BM), however, the role of BDNF in acute leukemias (AL) pediatric it is not well known. The aim of this study was to analyze the BDNF levels in BM samples or peripheral blood (PB) of children with AL, and start the characterization of the effects of agonists and antagonists on neurotrophin primary cultures of acute lymphoblastic leukemias in different therapeutic moments. BM or PB samples were collected from children and adolescents with acute lymphoblastic leukemia (ALL), children and adolescents with acute myeloid leukemia (AML), and healthy individuals (HI) of the same age. For analysis of serum levels of BDNF was used sandwich enzyme immunoassay kit. When compared to HI, BDNF levels in patients with AL at diagnosis were significantly lower. Similar results were observed in patients during induction, consolidation, diagnosis and treatment of relapse. Similarly, BDNF levels were lower in patients receiving platelet transfusion and at diagnosis in patients that died. To characterize the effects of agonists and antagonists for neurotrophin in cell culture, samples of patients at diagnosis and at the time of induction treatment were used. Lymphocytes were extracted and, after plating, cells were treated with BDNF (Sigma B3795), NGF (Sigma, SRP3015) and K252a (Sigma, 05288) for 72 hours. Viability was assessed by exclusion of trypan blue method. Due to difficulties in cell culture, these data are still under analysis.

Os efeitos de preparações de plasma rico em plaquetas (PRP) sobre a atividade osteogênica in vitro e in vivo em contato com biomateriais são divergentes na literatura. O objetivo do presente estudo foi avaliar a expressão e/ou atividade de marcadores iniciais da diferenciação osteoblástica em culturas de células osteogênicas crescidas sobre titânio (Ti) e expostas a coquetel de fatores de crescimento e proteínas PRP-símile (coquetel de FCs). Células osteoblásticas primárias derivadas de calvárias de ratos recém-nascidos foram cultivadas em meio osteogênico e expostas, nos 7 primeiros dias, a coquetel de FCs nas diluições 1:1 (FCs), 1:10 (FCs/10), 1:100 (FCs/100) e 1:1000 (FCs/1000). Foram avaliados, nos tempos de 7, 10 e 14 dias: 1) os aspectos morfológicos e a imunomarcação de sialoproteína óssea (BSP) e osteopontina (OPN), por epifluorescência; 2) a proliferação celular, por ensaio de MTT; 3) a expressão de RNAm para o fator de transcrição Runx2, BSP e fosfatase alcalina (ALP), por PCR em tempo real; 4) a atividade de ALP, clivada da fração de membrana; 5) quantificação da mineralização, por extração do vermelho de Alizarina. Os resultados mostraram inibição da formação dos nódulos de matriz mineralizada em culturas FCs e atraso em seu desenvolvimento em FCs/10 e FCs/100, em comparação a FCs/1000 e controle. A expressão de Runx2, BSP e ALP era menor em todas as culturas expostas ao coquetel de FCs em 7 dias, sendo que para Runx2 e BSP notava-se o efeito concentração-dependente em 10 dias. Menores valores de atividade de ALP foram observados nas culturas FCs e FCs/10, com efeito concentração-dependente e correlação positiva com a mineralização em 7 dias, mas não em 10 e 14. Os resultados permitem concluir que a exposição ao coquetel de FCs inibe e/ou atrasa a diferenciação osteogênica de culturas primárias sobre Ti. Adicionalmente, a atividade de ALP de membrana pode ser considerada também um marcador inicial de diferenciação osteoblástica, indicativo do potencial osteogênico no modelo in vitro utilizado. / The effects of platelet-rich plasma (PRP) preparations on the in vitro and in vivo osteogenic activity in contact with biomaterials have been subject of debate and controversy in the literature. The aim of the present study was to evaluate the expression and/or activity of early markers of osteoblast differentiation in cultured osteogenic cells grown on titanium (Ti) and exposed to a PRP-like cocktail of growth factors and proteins (GFs cocktail). Primary osteoblastic cells derived from newborn rat calvarial bone were cultured in an osteogenic medium (control group) and exposed during the first 7 days of culture to the following dilutions of GFs cocktail: 1:1 (GFs), 1:10 (GFs/10), 1:100 (GFs/100) and 1:1000 (GFs/1000). At days 7, 10 and 14 of culture, the following parameters were assessed: 1) morphology and immunolabeling for bone sialoprotein (BSP) and osteopontin (OPN) by epifluorescence microscopy; 2) cell proliferation by MTT assay; 3) mRNA expression for the osteoblast markers Runx2, BSP and alkaline phosphatase (ALP) by real time PCR; 4) ALP activity following ALP cleavage from cell membrane; 5) mineralization by Alizarin red extraction. The results showed no mineralized nodules for the GFs group and a delayed nodule formation for GFs/10 and GFs/100 compared with GFs/1000 and control. Whereas Runx2, BSP and ALP mRNA levels were lower for all cultures exposed to the GFs cocktail at day 7, a concentration-dependent effect was noticed only for Runx2 and BSP at day 10. The GFs cocktail showed a concentration-dependent effect on ALP activity, with the lowest values for GFs and GFs/10 cultures and a positive correlation with mineralization at day 7 but not at day 10 or 14. In conclusion, inhibited and/or delayed osteogenic differentiation take place in primary cultures grown on Ti and exposed to the GFs cocktail. In addition, membrane ALP activity can also be considered an early marker of osteoblast differentiation, indicative of the in vitro osteogenic potential in the model used.

O sarcoma de Ewing (SE) é um dos mais agressivos tipos de câncer pediátrico. Apesar dos significativos avanços no tratamento dessa doença, ainda há uma grande necessidade no aumento das taxas de cura, redução da toxicidade quimioterápica e redução da resistência ao tratamento. Tem sido proposto que SE provém de precursores neuronais, podendo ter sua fisiologia afetada, pois, por neurotrofinas (NTs). Examinamos a influência de receptores de NTs (Trks) em SE. Foram avaliadas a expressão proteica de NTs (NGF e BDNF) e seus receptores (TrkA e TrkB, respectivamente) em amostras de tumores de pacientes com SE, e a expressão de mRNA nas linhagens celulares RD-ES e SK-ES-1. O tratamento das linhagens com o pan-inibidor de Trks (K252a) modificou a morfologia celular e diminuiu a expressão de mRNA de NGF, TrkA, BDNF e TrkB. Ainda, a inibição de Trks diminuiu drasticamente a proliferação e capacidade clonogênica celular. Efeitos sinérgicos foram observados quando as células foram tratadas em conjunto com baixas doses de quimioterápicos, tanto em células selvagens de SE, quanto nas quais induzimos quimiorresistência. Esse estudo sugere, pela primeira vez, que a inibição de Trks reduz a proliferação e sobrevivência celular em SE, além de aumentar a sensibilidade ao tratamento quimioterápico. / Ewing's sarcoma (ES) is one of the most aggressive types of pediatric cancer. Despite significant advances in the treatment of this disease, there is still a great need in increasing cure rates, reducing chemotherapy toxicity and treatment resistance. It has been proposed that ES might derive from neuronal precursors and may be influenced, therefore, by neurotrophins (NTs). We have examined the influence of Trk neurotrophin receptors in ES. Protein expression of NTs (NGF and BDNF) and their receptors (TrkA, and TrkB, respectively) was detected in tumor samples from patients with ES, and mRNA expression was analyzed in the RD-ES, SK-ES-1 cell lines. Treating cells with a Trk Pan-inhibitor (K252a) altered cell morphology and decreased the mRNA expression of NGF, TrkA, BDNF, and TrkB. In addition, Trk inhibition dramatically decreased cell proliferation and clonogenic capacity. Synergistic effects were observed when cells were treated in combination with low doses of cytotoxic chemotherapeutics, both in normal ES cells and cells in which chemoresistance was induced. The results suggest for the first time that Trk inhibition can reduce the proliferation and survival of ES cells and sensitize them to cytotoxic chemotherapy.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2018-09-13T21:42:04Z No. of bitstreams: 1 2017 - Andr? William Masseaux Vidal J?nior.pdf: 1275550 bytes, checksum: d2d211215832b8ab2e53ab8d6da5ae4b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-13T21:42:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017 - Andr? William Masseaux Vidal J?nior.pdf: 1275550 bytes, checksum: d2d211215832b8ab2e53ab8d6da5ae4b (MD5) Previous issue date: 2017-02-15 / It was proposed by this study to evaluate two protocols (PA and PB) to obtain autologous canine PRP, which is easy to perform in an ambulatory (semiautomatic method) and of good quality (platelet concentration, qualitative evaluation of platelet morphology and low contamination with Erythrocytes), to later propose different therapeutic indications of these PRPs as tissue modulating agents, according to the observed cellular leukocyte pattern. For this purpose, 20 dogs (Canis lupus familiaris) were used at the UFRRJ (HV) Veterinary Hospital, males and females, aged between 1 and 7 years (mean 4 years), considered clinically and hematologically healthy for elective surgeries and / or routine consultations. After adequate trichotomy and antisepsis, 8 mL of blood were collected by venipuncture of the jugular, being immediately packed in two 4 mL flasks, vacuntainer type, containing sodium citrate 3,2%. Protocol A using double centrifugation with 210 xG and 370 xG and protocol B using double centrifugation with 140 x G and 330 x G. PRP samples obtained from each protocol were used to count platelets, erythrocytes and leukocytes in the Neubauer chamber, differential leukocyte counting and observation of platelet morphology in smears. Data (mean and standard deviations) were analyzed by the 95% probability t test (p <0,05) using Pearson's correlation to test the relationship between platelet and erythrocyte counts, platelets and leukocytes and leukocytes in Relation to red blood cells. There was a very weak negative correlation between platelets and leukocytes (? = -0,03), weak negative between platelets and erythrocytes (? = -0,3) and strong positive correlation between leukocytes and erythrocytes (? = 0,75). Although Protocol B did not reach the desired one million platelets average (979300 ? 79631 cells / ?L), both protocols, A and B (4,42 ? 1,61 and 3,85 ? 1,55 times more platelets than Total blood, respectively) (p <0,05) were efficient in concentrating platelets. The cytoplasmic prolongations evidencing platelet activation were present in 26,55 ? 6,72% of platelets of protocol A and 26,25 ? 7,03% in those of protocol B (p> 0,05). A and B presented a small number of red blood cells (p> 0,05), which were considered to be contaminants of the samples and, for the quantity of leukocytes, protocol A presented more white blood cells (p <0,05) than protocol B with higher concentrations of basophils , and lymphocytes. / Foi proposto por esse estudo avaliar dois protocolos (PA e PB) para obten??o de PRP canino aut?logo, de f?cil execu??o em ambulat?rio (m?todo semiautom?tico) e de boa qualidade (capacidade de concentra??o de plaquetas, avalia??o qualitativa da morfologia das plaquetas e reduzida contamina??o com eritr?citos), para posteriormente propor diferentes indica??es terap?uticas desses PRP como agentes moduladores de recupera??o tecidual, de acordo com o padr?o celular leucocit?rio observado. Para isso foram utilizados 20 c?es (Canis lupus familiaris) atendidos no Hospital Veterin?rio da UFRRJ (HV), machos e f?meas, com idade variando entre 1 e 7 anos (m?dia 4 anos), considerados saud?veis clinica e hematologicamente que se destinavam para cirurgias eletivas e/ou consultas de rotina. Ap?s tricotomia e antissepsia adequadas, eram coletados 8 mL de sangue por venopun??o da jugular sendo imediatamente acondicionados em dois frascos de 4 mL, do tipo vacuntainer, contendo citrato de s?dio a 3,2%. O protocolo A utilizando centrifuga??o dupla com 210 xG e 370 xG e protocolo B utilizando centrifuga??o dupla com 140 xG e 330 xG. Amostras de PRP obtidas a partir de cada protocolo foram destinadas a contagem de plaquetas, hem?cias e leuc?citos em c?mara de Neubauer, contagem diferencial dos leuc?citos e observa??o da morfologia das plaquetas em esfrega?os. Analisou-se os dados (m?dias e desvios padr?o) pelo Teste t com 95% de probabilidade (p<0,05) utilizando-se correla??o de Pearson para testar a rela??o entre a contagem de plaquetas e hem?cias, plaquetas e leuc?citos e leuc?citos em rela??o as hem?cias. Houve correla??o negativa muito fraca entre plaquetas e leuc?citos (?= -0,03), negativa fraca entre plaquetas e hem?cias (?= -0,3) e correla??o positiva forte entre leuc?citos e hem?cias (?=0,75). Embora o protocolo B n?o tenha alcan?ando a m?dia um milh?o de plaquetas desejado (979300 ? 79631 c?lulas/?L), ambos os protocolos, A e B (4,42 ? 1,61 e 3,85 ? 1,55 vezes mais plaquetas que o sangue total, respectivamente) (p<0,05) foram eficientes em concentrar plaquetas. Os prolongamentos citoplasm?ticos evidenciando ativa??o plaquet?ria estiveram presentes em 26,55 ? 6,72 % das plaquetas do protocolo A e 26,25 ? 7,03 % nas do protocolo B (p>0,05). PA e PB apresentaram reduzido n?mero de hem?cias (p>0,05) consideradas contaminantes das amostras e, quanto a quantidade de leuc?citos, o protocolo A apresentou mais gl?bulos brancos (p<0,05) que o protocolo B com maiores concentra??es de bas?filos, segmentados e linf?citos.

A interação entre as vias de sinalização dos estrógenos e fatores de crescimento está relacionada a maior agressividade dos tumores de mama. Assim, o objetivo deste trabalho foi verificar a interação entre as vias do E2 e do EGF no controle da expressão dos genes HNRPK, PAWR e PHLDA1 nas células MCF-7 (ER+) e MDA-MB-231 (ER-). Nas células MCF-7, o EGF e o E2 diminuíram a expressão do PAWR e aumentaram a expressão de PHLDA1. A inibição do ER pelo ICI resultou no aumento da expressão de PAWR sendo que a adição do E2 ou do EGF diminuiu sua expressão sem retomar os níveis observados nos tratamentos com E2 ou EGF isoladamente. Para o gene PHLDA1, o efeito do E2 e do EGF não variou após o tratamento com ICI. Nas células MDA-MB-231, a ação do EGF foi mais efetiva sobre a expressão de PAWR. A via ERK1/2 é importante na ativação do ER pelo EGF. O efeito do EGF sobre o PHLDA1 ocorre através da ativação das vias ERK1/2 e p38 MAPK. Estes resultados mostram a interação entre as vias do E2 e do EGF no controle da expressão do PAWR, mas não do PHLDA1. / The crosstalk between estrogens and growth factors pathways has been associated with breast cancer aggressiveness. Based on this, the present study aimed to determine the possible crosstalk between E2 and EGF pathways on the HNRPK, PAWR and PHLDA1 expression regulation in MCF-7 (ER+) and MDA-MB-231 (ER-) cells. In MCF-7 cells, treatments with E2 and EGF decreased PAWR expression and increased PHLDA1 expression. The ER inhibition by the ICI treatment resulted in increased PAWR expression. The E2 or EGF addition down-regulated its expression without a return to the levels observed after the E2 or EGF treatments alone. To the PHLDA1 gene, the effect of E2 and EGF treatments did not change after the ICI treatment. In MDA-MB-231 cells, the EGF effect was more significant on the PAWR gene expression control. The ERK1/2 pathway is important to the ER activation by EGF. The EGF effect over the PHLDA1 is dependent on the ERK1/2 and p38 MAPK activation. These findings suggest a crosstalk between E2 and EGF pathways on the PAWR expression control but not to PHLDA1.

O leite materno constitui uma rica fonte de nutrientes e peptídeos. O desmame precoce (DP) induz o aumento da proliferação e da diferenciação celular, e pode ser uma condição estressante capaz de elevar a corticosterona (CORT). Neste estudo, investigamos a interação entre padrão alimentar, CORT, TGF<font face=\"Symbol\">a e TGF<font face=\"Symbol\">b na regulação da proliferação celular na mucosa gástrica de ratos em desenvolvimento pós-natal. Utilizamos ratos Wistar em DP a partir do 15ºd, e observamos o aumento de CORT aos 16, 17 e 18d (p<0,05). No 17ºd, encontramos nível alto de TGF<font face=\"Symbol\">a e baixo de TGF<font face=\"Symbol\">b1 na mucosa gástrica (p<0,05). Para avaliarmos a ação da CORT, usamos o RU486, que ao reduzir a ação hormonal, estimulou a proliferação celular nos animais amamentados e DP (p<0,05), sem alterar os níveis de TGF<font face=\"Symbol\">a e TGF<font face=\"Symbol\">b. A sinalização para esses fatores foi estudada, e RU486 reduziu a ativação de ERK1/2 (p<0,05) no DP. Concluímos que a corticosterona circulante possui efeito antiproliferativo sobre a mucosa gástrica de ratos, e sua ação parece direta sem depender da regulação dos níveis de TGF<font face=\"Symbol\">a e TGF<font face=\"Symbol\">b. / Milk is a source of nutrients and active peptides. Early weaning (EW) leads to the increase of cell proliferation and differentiation, and can characterize a stressful condition to induce corticosterone (CORT). In the current study we investigated the interaction among dietary pattern, CORT, TGF<font face=\"Symbol\">a and TGF<font face=\"Symbol\">b on the regulation of cell proliferation in gastric mucosa of developing rats. We used Wistar rats submitted to EW on the 15thd, and we observed higher CORT levels throughout EW (p<0.05). At 17d, we also found higher TGF<font face=\"Symbol\">a and lower TGF<font face=\"Symbol\">b1 in the gastric mucosa (p<0.05). To evaluate CORT action, we used RU486 which antagonized the hormone and increased cell proliferation in both suckling and EW pups (p<0.05), without changing TGF<font face=\"Symbol\">a and TGF<font face=\"Symbol\">b1 levels. The signaling pathways triggered by these factors were studied and RU486 reduced ERK1/2 phosphorylation (p<0.05) in EW. We conclude that CORT is repressive for cell proliferation in the rat gastric mucosa, and its action seems to be direct, i.e. independent of TGF<font face=\"Symbol\">a and TGF<font face=\"Symbol\">b regulation.

O corpo lúteo é uma glândula endócrina temporária que regula tanto o ciclo estral quanto a prenhez, apresentando extrema dependência de aporte sanguíneo adequado. O tratamento superovulatório aumenta a concentração sérica de progesterona (P4) e conseqüentemente as taxas de concepção e de prenhez. Esse trabalho objetivou quantificar a vascularização dos corpora lútea (CLL) de animais controle e superovulados, correlacionando-a com a P4 sérica e expressão de VEGF e seus receptores. Foram utilizadas 30 búfalas, cujos CLL foram divididos em cinco grupos: superovulados (receberam 400 mg de FSH divididos em doses diárias decrescentes: 80 mg, 60 mg, 40 mg e 20mg a cada 12 horas durante 4 dias), corpos hemorrágicos (CH), corpo lúteo maduro (CL), CL em regressão (CR) e corpo albicans (CA), que não receberam nenhum tratamento. Três CLL de cada grupo foram fixados em formol tamponado para quantificação da densidade vascular e imunolocalização de VEGF, VEGFR-1 e VEGFR-2. Os três restantes foram injetados com resina Mercox para análise da microvascularização. Amostras de sangue foram coletadas e a P4 mensurada através de RIA convencional. A densidade capilar média encontrada foi de 37,78 ± 8,89; 17,8 ± 3,33; 11,92 ± 3,57; 10,83 ± 2,42 e 3,46 ± 1,66 vasos/ mm2 respectivamente para os cinco grupos, indicando maior vascularização (p<0,001) para o grupo superovulado. A microvasculatura apresentou comportamento semelhante para ambos os grupos, revelando apenas maior densidade da rede capilar dos CLL de animais superovulados, o que se refletiu nos valores séricos de progesterona que foram significativamente maiores (p<0,05) para estes animais, com concentração média de 5,58 ( 0,97ng/ml vs 2,02 ( 0,16 ng/ml para os animais controle na mesma fase. O VEGF, bem como seus receptores (VEGFR-1 e VEGFR-2) foram encontrados imunohistoquimicamente no CLL de búfalas. A imunoreatividade para o VEGF e receptores, pode ser observada nas células endoteliais e luteínicas a partir do 2° dia após a ovulação (p.o.) até a fase de corpo lúteo em regressão (17° dia p.o.), com forte reação nas fase luteínicas inicial e média. A imunoreatividade foi mais intensa nos animais submetidos a superovulação. / Corpus luteum is a temporary organ, which regulates the estrous cycle and pregnancy; it is extremely dependent on vascularization. During corpus luteum life span P4 production is associated with an increase of capillary number known as angiogenesis. The angiogenic process is modulated by many factors, including VEGF (vascular endothelial growth factor), which is considered the most important of them. Hyperstimulation of ovarian function, a largely spread technique employed in cattle raising, is associated with high levels of estradiol and P4, as well as an increase of capillary invasion of the new formed CL. This study intended to quantify the vascularization of normal and superovulated corpora lutea (CLL), trying to correlate this parameter with blood P4 concentrations and expression of VEGF and its receptors. For that purpose thirty buffalo cows were divided into five groups: superovulated (received 400 mg FSH divided in decreasing doses of 80 mg, 60 mg, 40 mg e 20mg 12/12h during 4 days), corpus hemorragicans (CH), mature corpus luteum (CL), regression CL (CR) e corpo albicans (CA), that received no treatment and were slaughtered at days 2, 9, 17 and 26 after ovulation. After slaughter ovaries were collected and corpora lutea prepared as follows: three animals from each group had their CLL fixed in buffered formol solution, cut into 0,5 cm pieces, dehydrated in increasing ethanol concentrations, cleared in xylene and embedded in paraffin using conventional procedures. Five µm slices were prepared for quantification of vascular density and immunolocalization of VEGF, VEGFR-1 and VEGFR-2. The ovaries of the remaining animals were injected with Mercox resin through ovarian artery in order to have the microvascularization evaluated by electron scanning microscopy. Blood samples were collected and P4 measured through conventional RIE. Capillary density during CL life span was 37,78 ± 8,89; 17,8 ± 3,33; 11,9 ± 3,57; 10,83 ± 2,42 and 3,46 ± 1,66 vessels/ mm2 respectively for superovulated (CS), CH, CL, CR and CA, indicated higher vascularization (p<0,001) for superovulated group. The microvasculature showed similar behavior: the density of capillary network was higher in CLL of superovulated animals. Values of serum progesterone were significantly higher (p<0,05) for CS animals: 5,58 ± 0,97 ng/ml vs 2,02 ± 0,16 ng/ml for control animals in the same stage of estrous cycle. The VEGF system and its receptors (VEGFR-1 e VEGFR-2) were immunolocalized in CLL of buffalo cows. The immunoreactivity could be detected in endothelial and luteal cells since day two post ovulation (p.o.) until the stage of regression corpus luteum (Day 17 p.o.), with strong immunostaining at the early and midluteal phase. The immunostaining was more intense in CLL of animals submitted to superovulation.

O exercício físico intermitente tem se mostrado uma modalidade de elevado gasto calórico e, mesmo quando praticado em altas intensidades, pode ser mantido por grandes períodos de tempo. A suplementação com carboidratos tem sido utilizada e estudada como forma de manutenção do desempenho esportivo. O exercício físico intermitente e a suplementação com fontes carboidratadas produzem alterações hormonais condizentes com as alterações orgânicas provenientes da sua prática. O eixo GH/IGF-I é afetado por ambas as intervenções. Objetivou-se estabelecer um protocolo de treinamento intermitente de alta intensidade para ratos e verificar os efeitos da administração de solução de glicose a 10% sobre as concentrações sanguíneas de lactato e glicemia, além de verificar alterações séricas de GH, IGF-I, IGFBP-I e corticosterona relacionadas à prática deste tipo de exercício físico. Foram verificadas também as concentrações musculares (gastrocnêmio e sóleo) e hepáticas de glicogênio, bem como a expressão gênica do IGF-I e do IGF-Ir nestes tecidos. Para tal, quarenta (40) ratos Wistar machos foram separados em 8 grupos (n=5/grupo): TEC (Treinados, exercitados, com suplementação de carboidrato), TES (Treinados, exercitados, sem suplementação de carboidrato), TNC (Treinados, não exercitados, com suplementação de carboidrato), TNS (Treinados, não exercitados, sem suplementação de carboidrato), SEC (Sedentários, exercitados, com suplementação de carboidrato), SES (Sedentários, exercitados, sem suplementação de carboidrato), SNC (Sedentários, não exercitados, com suplementação de carboidrato), SNS (Sedentários, não exercitados, sem suplementação de carboidrato). O protocolo de exercício físico consistiu de um minuto correndo em esteira a 110% da velocidade final do teste máximo e 30 segundos a 40% desta, num total de 60 minutos, sendo o treinamento de noventa (90) dias. Como resultado foi verificado que o exercício físico agudo se mostrou uma forma de aumentar a expressão gênica de IGF-I, já o treinamento fez com que houvesse uma redução nesta expressão. O aumento da IGFBP-I ocorreu somente em ratos treinados, que apresentaram também uma maior expressão gênica de IGF-Ir no músculo gastrocnêmio quando não suplementados. Os animais não exercitados apresentaram níveis séricos de GH superiores aos exercitados. A corticosterona mostrou concentrações mais elevadas em ratos sedentários do que treinados, com ou sem exercício físico agudo. Conclui-se que o exercício físico agudo em ratos pode, em alguns hormônios estudados, produzir resultados divergentes dos esperados, já o treinamento prolongado tende a reverter as concentrações destes. / The intermittent exercise has been shown to be a kind of high caloric expenditure and, even when practiced at high levels, can be maintained for long periods of time. Supplementation with carbohydrate has been used and studied in order to maintain athletic performance. The intermittent exercise and supplementation with carbohydrate sources produce hormonal changes consistent with the organic changes from its practice. The GH/IGF-I axis is deeply affected by both interventions. The objective was to establish a protocol for high-intensity intermittent training for rats and assess the effects of administrating a glucose solution (10%) on blood concentrations of lactate and glucose in addition to investigating changes in serum GH, IGF-I, IGFBP-I and corticosterone related to the practice of this type of exercise. Also, it was analized the muscle (gastrocnemius and soleus) and hepatic concentrations of glycogen and gene expression of IGF-I and IGF-Ir in these tissues. For such, forty (40) male wistar rats were divided into eight groups (n=5/ group): TEC (trained, exercised with carbohydrate supplementation), TES (trained, exercised without carbohydrate supplementation), TNC (trained, nonexercised with carbohydrate supplementation), TNS (trained, nonexercised without carbohydrate supplementation), SEC (sedentary, exercised with carbohydrate supplementation), SES (sedentary, exercised without carbohydrate supplementation), SNC (sedentary, nonexercised with carbohydrate supplementation), SNS (sedentary nonexercised without carbohydrate supplementation). The protocol consisted of one minute on a treadmill running at 110% of maximum test speed and thirty seconds at 40% of a total 60 minutes (90 days training). As a result it was found that acute exercise proved to be a way to increase gene expression of IGF-I, since the training had led to a reduction in this expression. The increase in IGFBP-I occurred only in trained rats, which also had a higher gene expression of IGF-Ir in the gastrocnemius muscle, when not supplemented. The animals that did no exercise had higher serum GH levels than those exercised. The corticosterone showed higher concentrations in sedentary than in trained rats with or without acute exercise. We conclude that acute exercise in rats may, in some hormones, produce different results from those expected, since the prolonged training tends to reverse these concentrations.

Alterações em estruturas específicas do SNC, em particular, no sistema fronto-límbico, assim como a diminuição das células neuronais e gliais parece estar envolvida com a fisiopatologia do Transtorno do Humor Bipolar (THB). A glia exerce um importante papel no SNC, entre os quais, a produção de neurotrofinas, em especial, o Fator de Crescimento Neurotrófico derivado de Células da Glia (GDNF). Um marcado aumento dos níveis séricos de GDNF em pacientes deprimidos (F= 42.31; p=0.004; one-way ANOVA) e maníacos (F= 42.31; p=0.001; one-way ANOVA) foi demonstrado neste estudo, sugerindo um possível envolvimento desta neurotrofina com o THB. Por outro lado, alterações nos fatores neurotróficos afetam os mecanismos de plasticidade sináptica, podendo contribuir para as deficiências cognitivas apresentadas pelos pacientes. Deficiências cognitivas, em especial, as falhas de memória são descritas, as quais influenciam a funcionalidade destes indivíduos, principalmente a nível ocupacional e social. As altas taxas de disfuncionalidade apresentadas pelos pacientes e a falta de padronização dos instrumentos usados nos estudos para avaliar funcionalidade, nos levaram ao desenvolvimento de uma escala. A Escala Breve de Funcionalidade (FAST) é um instrumento de rápida e fácil aplicação desenvolvida para usar em psiquiatria, em especial, paciente com THB. A FAST avalia objetivamente seis áreas específicas da funcionalidade, tais como autonomia, trabalho, cognição, relacionamentos interpessoais, finanças e lazer. A validação da escala foi realizada através de testes psicométricos, tais como: consistência interna (alfa de Cronbach’s igual a 0.909), validade concorrente comparada com a GAF (r=-0.903; p<0.001), test-retest (0.98; p<0.01), validade em detectar diferenças entre episódios agudos (maníacos: 40.44±9.15 e deprimidos 43.21±13.34) e períodos de remissão (18.55±13.19; F=35.43; p<0.001) e análise fatorial. Os resultados obtidos foram muito positivos, tornando o instrumento válido e prontamente disponível para o uso na prática clínica e investigação. Palavras-chave: transtorno do humor bipolar, GDNF, glia, neurotrofinas, funcionalidade, disfuncionalidade, escalas de funcionalidade. / Alterations in specific structures of CNS, in particular, fronto-lymbic system, and a reduction of neurons and glial cells appear to be involved in the pathophysiology of bipolar disorder. Glial cells have an important role in the CNS, for example, the production of neurotrophins, especially, Glial Cell Line-derived Neurotrophic Factor (GDNF). In this study, we showed a marked increased in the serum levels of GDNF in depressive (F= 42.31; p=0.004; one-way ANOVA) and manic bipolar patients (F= 42.31; p=0.001; one-way ANOVA), which suggested that GDNF could be involved in the physiopathology of bipolar disorder. On the other hand, alterations in the neurotrophic factors hinder synaptic plasticity mechanisms, may result in cognitive impairment in bipolar patients. In particular, memory difficulties have been reported here, and these difficulties influence occupational and social functioning in these subjects. High rates of functional impairment showed by bipolar patients and a lack of standardization of the instruments available to assess functioning in the studies motivated us to development the scale. The Functioning Assessment Short test (FAST) is a rapid instrument and easy to apply developed to use in psychiatry, especially, bipolar patients. It assesses six specific domains of functioning, such as autonomy, occupational functioning, cognitive functioning, financial issues and leisure time. The validation of FAST was performed by psychometric tests such as internal consistency (Cronbach’s alpha: 0.909), concurrent validity compared to the GAF (r=-0.903; p<0.001), validity as a discriminative measure to detect the difference between euthymic (18.55; F=23.59; p<0.001) and acute patients (manic: 38.50; depressive: 42.38; mixed: 43.21), factorial analysis and test-retest reliability (0.953; p<0.01). The FAST scale showed strong psychometric properties and it is now available for use in both clinical practice and investigation settings.

O exercício físico intermitente tem se mostrado uma modalidade de elevado gasto calórico e, mesmo quando praticado em altas intensidades, pode ser mantido por grandes períodos de tempo. A suplementação com carboidratos tem sido utilizada e estudada como forma de manutenção do desempenho esportivo. O exercício físico intermitente e a suplementação com fontes carboidratadas produzem alterações hormonais condizentes com as alterações orgânicas provenientes da sua prática. O eixo GH/IGF-I é afetado por ambas as intervenções. Objetivou-se estabelecer um protocolo de treinamento intermitente de alta intensidade para ratos e verificar os efeitos da administração de solução de glicose a 10% sobre as concentrações sanguíneas de lactato e glicemia, além de verificar alterações séricas de GH, IGF-I, IGFBP-I e corticosterona relacionadas à prática deste tipo de exercício físico. Foram verificadas também as concentrações musculares (gastrocnêmio e sóleo) e hepáticas de glicogênio, bem como a expressão gênica do IGF-I e do IGF-Ir nestes tecidos. Para tal, quarenta (40) ratos Wistar machos foram separados em 8 grupos (n=5/grupo): TEC (Treinados, exercitados, com suplementação de carboidrato), TES (Treinados, exercitados, sem suplementação de carboidrato), TNC (Treinados, não exercitados, com suplementação de carboidrato), TNS (Treinados, não exercitados, sem suplementação de carboidrato), SEC (Sedentários, exercitados, com suplementação de carboidrato), SES (Sedentários, exercitados, sem suplementação de carboidrato), SNC (Sedentários, não exercitados, com suplementação de carboidrato), SNS (Sedentários, não exercitados, sem suplementação de carboidrato). O protocolo de exercício físico consistiu de um minuto correndo em esteira a 110% da velocidade final do teste máximo e 30 segundos a 40% desta, num total de 60 minutos, sendo o treinamento de noventa (90) dias. Como resultado foi verificado que o exercício físico agudo se mostrou uma forma de aumentar a expressão gênica de IGF-I, já o treinamento fez com que houvesse uma redução nesta expressão. O aumento da IGFBP-I ocorreu somente em ratos treinados, que apresentaram também uma maior expressão gênica de IGF-Ir no músculo gastrocnêmio quando não suplementados. Os animais não exercitados apresentaram níveis séricos de GH superiores aos exercitados. A corticosterona mostrou concentrações mais elevadas em ratos sedentários do que treinados, com ou sem exercício físico agudo. Conclui-se que o exercício físico agudo em ratos pode, em alguns hormônios estudados, produzir resultados divergentes dos esperados, já o treinamento prolongado tende a reverter as concentrações destes. / The intermittent exercise has been shown to be a kind of high caloric expenditure and, even when practiced at high levels, can be maintained for long periods of time. Supplementation with carbohydrate has been used and studied in order to maintain athletic performance. The intermittent exercise and supplementation with carbohydrate sources produce hormonal changes consistent with the organic changes from its practice. The GH/IGF-I axis is deeply affected by both interventions. The objective was to establish a protocol for high-intensity intermittent training for rats and assess the effects of administrating a glucose solution (10%) on blood concentrations of lactate and glucose in addition to investigating changes in serum GH, IGF-I, IGFBP-I and corticosterone related to the practice of this type of exercise. Also, it was analized the muscle (gastrocnemius and soleus) and hepatic concentrations of glycogen and gene expression of IGF-I and IGF-Ir in these tissues. For such, forty (40) male wistar rats were divided into eight groups (n=5/ group): TEC (trained, exercised with carbohydrate supplementation), TES (trained, exercised without carbohydrate supplementation), TNC (trained, nonexercised with carbohydrate supplementation), TNS (trained, nonexercised without carbohydrate supplementation), SEC (sedentary, exercised with carbohydrate supplementation), SES (sedentary, exercised without carbohydrate supplementation), SNC (sedentary, nonexercised with carbohydrate supplementation), SNS (sedentary nonexercised without carbohydrate supplementation). The protocol consisted of one minute on a treadmill running at 110% of maximum test speed and thirty seconds at 40% of a total 60 minutes (90 days training). As a result it was found that acute exercise proved to be a way to increase gene expression of IGF-I, since the training had led to a reduction in this expression. The increase in IGFBP-I occurred only in trained rats, which also had a higher gene expression of IGF-Ir in the gastrocnemius muscle, when not supplemented. The animals that did no exercise had higher serum GH levels than those exercised. The corticosterone showed higher concentrations in sedentary than in trained rats with or without acute exercise. We conclude that acute exercise in rats may, in some hormones, produce different results from those expected, since the prolonged training tends to reverse these concentrations.