CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O feijÃo caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.] à um alimento de grande importÃncia comercial, sendo a principal fonte alimentÃcia em algumas regiÃes, como no Nordeste brasileiro. Infelizmente, o feijÃo-de-corda està sujeito ao ataque de vÃrios patÃgenos e pestes, acarretando perdas considerÃveis em sua produtividade. Para diminuir essas perdas, existem diversos mÃtodos quÃmicos que sÃo largamente utilizados, porÃm o uso indiscriminado de fungicidas tem causado danos ao meio ambiente e aos seres vivos. Na busca de alternativas ecologicamente saudÃveis, uma opÃÃo promissora seria a induÃÃo de mecanismos de defesa da prÃpria planta atravÃs de molÃculas elicitoras. Diante do exposto, o presente trabalho teve como objetivo elicitar respostas de defesa em feijÃo-de-corda atravÃs do uso de galactomanana sulfatada isolada de Adenanthera pavonina e induzir a resistÃncia ao fungo Colletotrichum gloeosporioides. Doze dias apÃs germinaÃÃo, plantas de feijÃo-de-corda (Vigna unguiculata) foram tratadas com galactomana de A. pavonina (nas concentraÃÃes de 100 mg/L e 200 mg/L), na ausÃncia ou presenÃa do fungo C. gloeosporioides (inoculado apÃs 6 h do tratamento com carboidrato) por 6, 12, 24 e 48 h, tendo sido realizadas as anÃlises bioquÃmicas nos extratos protÃicos obtidos das folhas primÃrias. Para as enzimas POX e APX ocorreu um significativo aumento a partir de 12 h do tratamento com a galactomanana. Em relaÃÃo a atividade das enzimas antifungicas βGLU e CHI, as plantas tratadas com a galactomanana, no geral, apresentaram um aumento acima de 50% em relaÃÃo ao controle. AnÃlises macroscÃpicas revelaram que as folhas tratadas com 200 mg/L da galactomanana e infectadas com o C. gloeosporioides apresentaram lesÃes necrÃticas visivelmente reduzidas em relaÃÃo ao controle. Ademais, a galactomana nÃo foi capaz de inibir a germinaÃÃo de esporos e crescimento vegetativo do fungo C. gloeosporioides in vitro. A partir dos resultados obtidos neste trabalho, conclui-se que, a galactomanana isolada de A. pavonina à capaz de aumentar a tolerÃncia da cultura de feijÃo-de-corda (V. unguiculata) contra o fungo C. gloeosporioides. / Cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp.] is a food of great commercial importance, being the main food source in some regions such as northeastern Brazil. Unfortunately, cowpea is subject to attack by various pathogens and pests, causing considerable losses in productivity. To reduce these losses, there are several chemical methods that are widely used, but the indiscriminate use of fungicides has caused damage to the environment and living beings. In search of alternative environmentally friendly, a promising option would be the induction of defense mechanisms of the plant itself through elicitor molecules. Given the above, this study aimed to elicit defense responses in cowpea through the use of galactomannan isolated from Adenanthera pavonina and induce resistance to Colletotrichum gloeosporioides. Twelve days after germination, cowpea plants (Vigna unguiculata) were treated with A. pavonina galactomannan (at concentrations of 100 mg/L and 200 mg/L) in the absence or presence of the fungus C. gloeosporioides (inoculated 6 hours after treatment with carbohydrate) for 6, 12, 24 and 48 h were carried out on biochemical analysis of protein extracts obtained from primary leaves. For enzymes POX and APX a significant increase occurred after 12 h of treatment with the galactomannan. With respect to antifungal activity of the enzymes and βGLU CHI, the plants treated with the galactomannan in general, showed an increase above 50% compared to control. Macroscopic analysis revealed that the leaves treated with 200 mg/L of galactomannan and infected with C. gloeosporioides showed necrotic lesions visibly reduced compared to control. Furthermore, the galactomannan was unable to inhibit the germination of spores and vegetative growth of the fungus C. gloeosporioides in vitro. The results of the present study indicate that galactomannan isolated from A. pavonina can increase crop tolerance of cowpea (V. unguiculata) against the fungus C. gloeosporioides.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:33:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_raquel_rosa_costa.pdf: 808388 bytes, checksum: 18bdb94a8d12b8f7a746b7ee2613012a (MD5) Previous issue date: 2011-06-27 / he main objective of this work was to introduce the gene bvlI with confirmed potential antifungal of lectin from Bauhinia variegata, Apple Tree (Malus domestica Borkh) cv. Gala, to establish resistance to fungus Coletotrichum gloeosporioides, causing Leaf Spot. Multiplication experiments were performed in vitro regeneration of leaf explant culture and two protocols via Agrobacterium tumefaciens transformation aimed at inserting the gene bvll. The multiplication of shoots the medium that has best results was MS supplemented with 0.1 mg L-1 ANA and 8.3 mg L-1 2iP and, for the regeneration of the best responses were obtained with using MS, supplemented with 30 g L-1 sorbitol, 0.5 mg L-1 ANA and 5 mg L-1 TDZ, reaching a rate of 94.5% of regenerations. As regards the processing protocols, which showed best results was the P1 Protocol, which through analysis of PCR were obtained 15% shoots containing the gene bv/l. However, the expression of BVLI protein was not detected by Dot Blot, indicating the need for further procedure, such as refinement of protein extraction protocol, as well as utilization other techniques of analyses, such as Real Time. / O objetivo principal do presente trabalho foi introduzir o gene bvlI com potencial antifúngíco confirmado da lectina de Bauhinia variegata, em macieira (Malus domestica Borkh), cv. Gala, para estabelecer resistência ao fungo Coletotrichum gloeosporioides, causador da Mancha Foliar. Foram realizados experimentos de multiplicação in vitro, regeneração de explantes foliares e, dois protocolos de transformação via Agrobacterium tumefaciens visando a inserção do gene bvll. Na multiplicação de brotações o meio que apresentou melhores resultados foi o MS suplementado com 0,1 mg L-1 ANA e 8,3 mg L-1 de 2iP e, para a regeneração as melhores respostas foram obtidas com meio MS, suplementado com 30 g L-1 de sorbitol, 0,5 mg L-1 ANA e 5 mg L1 de TDZ, atingindo um percentual de 94,5% de regenerações. Quanto aos protocolos de transformação, o que apresentou melhores resultados foi o protocolo P1, no qual através da análise de PCR foram obtidas 15% de brotações contendo o gene bv/l. No entanto, a expressão da proteína BVLI não foi detectada através de Dot Blot, indicando a necessidade de novos procedimentos, como refinamento do protocolo de extração de proteínas, bem como utulização de outras técnicas de análises, como Real Time.

O mamão (Carica papaya L.) é um fruto nativo de clima tropical e comercializado em todo o mundo. O Brasil é um dos grandes produtores e consumidores destes frutos, porém, anualmente, são perdidas aproximadamente 10 toneladas dos frutos devido ao escasso controle de qualidade e, principalmente, às doenças pós-colheita, como a antracnose, ocasionada pelo fungo Colletotrichum gloeosporioides. O objetivo do presente estudo foi avaliar a associação de óleo essencial e película de carboximetilcelulose a fim de controlar a antracnose em mamão e monitorar os efeitos deste tratamento nas características físico-químicas e de aparência dos frutos. A pesquisa foi realizada em duas etapas: a primeira com caráter fitopatológico, e a segunda, quanto à qualidade físico-química e de aparência dos frutos tratados. Na primeira etapa foram realizados os seguintes testes: eficiência in vitro da Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos óleos de Eucaliptus staigeriana, Lippia sidoides e Pimenta pseudocaryophyllus e suas misturas sobre o fungo C. gloeosporioides pelos métodos de diluição em ágar e modelo matemático de Gompertz; avaliação do óleo selecionado (o que apresentou a menor CIM), em relação à composição química; Concentração Mínima Fungicida (CMF) e eficiência in vivo (determinação da incidência e severidade). Na segunda etapa, foram avaliadas as qualidades físico-químicas (cor, perda de massa, firmeza, taxa respiratória, acidez titulável, teor de sólidos solúveis e ratio) e de aparência (presença de murchamento e podridão) nos frutos após a aplicação do óleo essencial associado à película. Na primeira etapa, os óleos essenciais de L. sidoides, E. staigeriana, P. pseudocaryophyllus e suas misturas apresentaram ação inibitória nos experimentos in vitro contra C. gloeosporioides. O melhor desempenho foi do óleo de L. sidoides, que apresentou concentração inibitória mínima de 125 ppm no método de diluição em ágar, e 75,3 ppm pelo modelo matemático de Gompertz. A concentração fungicida mínima encontrada foi 62 ppm pelo método de caldo. Quanto à composição de L. sidoides, o timol, que possui ação antifúngica reconhecida, foi encontrado como composto majoritário. Os resultados da avaliação in vivo mostraram que os menores valores de severidade ocasionada por C. gloesporiodes foram observadas no tratamento envolvendo a associação da película de carboximetilcelulose com o óleo essencial de L. sidoides, quando aplicados preventivamente, porém não inibiu a incidência da doença. Na segunda etapa do estudo, os resultados demonstraram que a utilização da película de carboximetilcelulose em associação com o óleo essencial de L. sidoides (375 ppm) conservou por 9 dias as características físico-químicas e de aparência dos mamões, enquanto que no controle e no tratamento somente com a película, 5 e 7 dias, respectivamente. Com base nos dados obtidos, concluiu-se que os óleos essenciais de Lippia sidoides, Eucaliptus staigeriana e Pimenta pseudocaryophyllus e suas misturas binárias 1:1 possuíram ação antifúngica contra C. gloeosporioides. Lippia sidoides demonstrou ser altamente eficaz em menor dose, e que a associação deste óleo (375 ppm) com a película de carboximetilcelulose (0,25%) contribuiu efetivamente para o aumento da vida útil dos mamões armazenados a 22°C, conservando suas características físico-químicas e de aparência por 9 dias. / The papaya (Carica papaya L.) is a tropical fruit and it is commercialized around the world. Brazil is one of the major producers and consumers of these fruits, but approximately 10 tons of fruits are lost annually due to poor quality control and especially postharvest diseases such as anthracnose, caused by Colletotrichum gloeosporioides fungus. The objective of the present study was to evaluate the association of essential oil and carboxymethylcellulose film in order to control the anthracnose in papaya and to monitor the effects of this treatment on its physicochemical and appearance characteristics. The research had two stages: the first one had phytopathological character and the second one regarding the physicochemical quality and appearance of treated fruits. In the first stage, the following tests were carried out: Determination in vitro of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) for the Eucalyptus staigeriana, Lippia sidoides and Pimenta pseudocaryophyllus oils and their mixtures on C. gloeosporioides fungus by agar dilution and Gompertz mathematical model; Evaluation for the selected oil (the oil presenting the lowest MIC), of its chemical composition; Minimum Fungicidal Concentration (MFC) and in vivo efficiency (by incidence and severity determination). In the second stage it was evaluate the physicochemical qualities (color, weight loss, firmness, respiratory rate, titratable acidity, soluble solids content and ratio) and appearance (presence of shriveling and rot) of fruits after oil application associated with film. In the first stage, the essential oils of L. sidoides, E. staigeriana, P. pseudocaryophyllus and their mixtures showed inhibitory action in the in vitro experiments on C. gloeosporioides. The best oil was L. sidoides, it had a minimum inhibitory concentration of 125 ppm by agar dilution method and of 75.3 ppm by Gompertz mathematical model. The minimum fungicide concentration found was 62 ppm by the both method. About the composition of the L. sidoides oil, thymol, which has been reported as presenting antifungal activity, was found as its major compound. The results of in vivo evaluation showed that the lowest values of disease severity caused by C. gloesporiodes were present in the treatment involving the association of carboxymethylcellulose film with L. sidoides, when it was applied preventively, but it did not inhibit disease incidence. In the second stage of the study the results showed that the use of carboxymethylcellulose film in association with L. sidoides (375 ppm) preserved the physicochemical and appearance characteristics of papaya fruits for 9 days, whereas in the control and treatment with the film sole, it preserved for 5 and 7 days, respectively. Based on the obtained data, it was concluded that the essential oils of Lippia sidoides, Eucalyptus staigeriana and Pimenta pseudocaryophyllus and their 1:1 binary mixtures had antifungal action on C. gloeosporioides. Lippia sidoides, which proved to be highly effective, was more prominent, and the association of this oil (375 ppm) with the carboxymethylcellulose film (0,25%) effectively contributed to increased lifespan of stored papayas at 22°C, preserving its physicochemical and appearance characteristics for 9 days.

Orientador: Norberto da Silva / Resumo: Espécies de Stylosanthes estão amplamente distribuídas em regiões tropicais e subtropicais das Américas, África e sudeste da Ásia, sendo o Brasil o principal centro de origem e diversidade do gênero, com 25 das 45 espécies descritas ocorrendo naturalmente em várias regiões do País. O gênero adapta-se a diferentes condições edafoclimáticas, apresentando melhor potencial de uso no Brasil. A antracnose, causada por Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., forma anamórfica de Glomerella cingulata (Stonem.) Spauld. & Scherenk tem sido o principal entrave à ampla utilização de Stylosanthes. Em 2000, o Centro Nacional de Pesquisa de Gado de Corte (Embrapa Gado de Corte), da Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (Embrapa), lançou a cultivar Estilosantes Campo Grande, constituída por uma mistura física de populações derivadas de 11 introduções de S. capitata e seis de S. macrocephala. Tais populações foram selecionadas durante seis gerações pelo método de "bulk". Ainda, para a composição da cultivar, misturou-se as sementes das populações selecionadas nas proporções de 80% e 20%, respectivamente. Conforme foi desenvolvida, pressupõe-se que a cultivar seja composta de indivíduos geneticamente diferentes, porém não se sabe ao certo a proporção dos mesmos, fato que dificulta saber ao longo do tempo se a composição da cultivar mantém-se ou não a mesma. Assim, realizou-se este trabalho com os objetivos de identificar a existência de variabilidade de progênies originárias da referida cultivar e selecionar germoplasma com alto grau de resistência à antracnose e performance agronômica. Este projeto foi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: Species of the genus Stylosanthes are widely distributed in tropical and subtropical regions of the Americas, Africa, and Asia. The main center of origin and diversity is Brazil, the native habitat of 25 of the 45 described species. The genus is adapted to a variety of edaphic and climatic conditions and showed good potential as a cultivated forage in Brazil. Anthracnose, caused by Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., the anamorphic form of Glomerella cingulata (Stonem.) Spauld & Scherenk, has been the main limitation to the commercial utilization of Stylosanthes. In 2000, the National Beef Cattle Research Center (Embrapa Beef Cattle), from Brazilian Agricultural Research Corporation (Embrapa) released Stylosanthes cv. Campo Grande, it is a physical mixture of hybrid-derived progenies of 11 accessions of S. capitata and six lines of S. macrocephala. The resulting populations were advanced through six generations of bulk seed production. Seeds of the two species were mixed in the proportion of 80% and 20%, respectively, to form the new cultivar. Due to its origin, the cultivar was considered as composite of genetically diverse individuals. However, the actual composition and its long-term maintenance remained unknown factors. Consequently, this project was initiated with the objective to identify the degree of variability among component progenies in the cultivar and select germplasm with a high degree of anthracnose resistance and agronomic performance. The project was carried out at Embrapa Beef Cattle, Campo Grande-MS, from 2000 to 2002. In the first instance, individual plants were raised in the green house from single seed obtained from commercial samples of the cultivar. Some 294 S. capitata plants and 124 of S. macrocephala have been established... (Complete abstract, click electronic address below). / Doutor

Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. / Made available in DSpace on 2012-10-17T08:53:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-graduação em Recursos Genéticos Vegetais, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-24T23:50:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 274964.pdf: 1041847 bytes, checksum: 78f57ef1cf2c57cdff4ea5a802c1bb57 (MD5) / Este trabalho teve como objetivo avaliar e comparar os mecanismos de defesa inata e induzida pela aplicação de ulvana à infecção de Colletotrichum gloeosporioides em macieira. Para tanto, plântulas resistentes foram tratadas com água destilada aos 6 dias antes da inoculação (DAI), enquanto que suscetíveis foram pulverizadas com ulvana (10mg/mL). Plântulas foram inoculadas com C. gloeosporioides e a severidade da Mancha Foliar de Glomerella (MFG) foi avaliada diariamente de 4 a 10 dias pós-inoculação (DPI), baseada na estimativa visual da porcentagem de tecido necrosado. Aos 10 DPI, todas as folhas foram destacadas e escaneadas para determinar a área foliar necrosada usando o Software Quant. A germinação dos conídios e a formação de apressórios de C. gloeosporioides foi avaliada às 24, 48 e 72 horas após a inoculação (HAI) na 2a e 3a folha expandida de plântulas. Discos foliares foram coletados, clareados e conservados em lactoglicerol até o exame em microscópio óptico. As atividades de peroxidases e glucanases foram determinadas em tecidos remanescentes da 2a e 3a folha expandida de plântulas de macieira às 24, 48 e 72 HAI. Plântulas com resistência inata nunca apresentaram sintomas da MFG. A ulvana pulverizada aos 6 DAI reduziu significativamente a severidade da MFG em plântulas. A germinação de conídios de C. gloeosporiodes não foi alterada pela resistência inata ou induzida por ulvana. O desenvolvimento de estruturas de infecção em plântulas resistentes foi semelhante às testemunhas, no entanto a pulverização com ulvana inibiu a formação de apressórios e elongamento do tubo germinativo do fungo. A resistência inata e induzida por ulvana aumentou a atividade de POX em plântulas de macieira, mas a atividade de GLU não foi alterada. Em suma, a resistência inata da macieira a MFG parece estar relacionada ao rápido reconhecimento do C. gloeosporioides com maior atividade de POX às 24 HAI. A redução da MFG por ulvana foi associada à menor formação de apressórios e elongamento do tubo germinativo de C. gloeosporioides, além do aumento da atividade de POX em plântulas às 72 HAI. / This study aimed to evaluate and compare the innate defense mechanisms and induced by the application of ulvan by infection of Colletotrichum gloeosporioides in apple. The resistance seedlings were treated with distillated water (control) 6 days before inoculation (DBI), while susceptible was sprayed with ulvan (10 mg/mL). Seedlings were inoculated with C. gloeosporioides and severity Glomerella Leaf Spot (GLS) was assessed daily from 4 to 10 days post-inoculation (DPI), based on visual estimation of the percentage of necrotic tissue. At 10 DPI all the leaves were detached and scanned to determine leaf area necrosis using Software Quant. Conidial germination and appressoria formation of C. gloeosporioides was evaluated at 24, 48 and 72 hours after inoculation (HAI) in 2nd and 3rd expanded leaf of seedlings. For this, foliar discs (9mm) were collected, leached and maintained in lactoglicerol until microscopical examination. The peroxidases and glucanases activity was determined in tissue remaining of the 2nd and 3rd expanded leaf of seedlings apple at 24, 48 and 72 HAI. Seedlings with innate resistance never showed symptoms of GLS. Ulvan sprayed at 6 DBI significantly reduced the severity of the GLS in seedlings. Conidial germination of C. gloeosporioides was not changed by either innate resistance or induced by ulvan. The development of structures of infection in resistance seedlings was similar to controls, however the ulvan spraying inhibited appressorium formation and germ tube elongation of fungus. Both innate resistance and induced by ulvan increased the POX activity of apple seedlings, but the activity of GLU was not changed. In sum, the innate resistance of apple against GLS seems to be related to the rapid recognition of C. gloeosporioides with increased activity of POX at 24 HAI. Disease reduction by ulvan was associated with a lesser appressorium formation and germ tube elongation of C. gloeosporioides, as well as enhanced POX activity in seedlings at 72 HAI.

SILVA, Fredy Davi Albuquerque. Homeostase redox, genes associados e a resistência do feijão-de-corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.] ao fungo hemibiotrófico Colletotrichum gloeosporioides [(Penz) Penz & Sacc.]. 2015. 145 f. Tese (Doutorado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2015. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-28T15:47:22Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_fdasilva.pdf: 13172308 bytes, checksum: eec041dd293481a11b32a2b64584598a (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T14:43:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_fdasilva.pdf: 13172308 bytes, checksum: eec041dd293481a11b32a2b64584598a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T14:43:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_fdasilva.pdf: 13172308 bytes, checksum: eec041dd293481a11b32a2b64584598a (MD5) Previous issue date: 2015 / Colletotrichum gloeosporioides is an important hemibiotrophic pathogen with a broad host range that causes substantial crop losses. Recent data have shown that the hypersensitive response (HR) is one event involved in the resistance of cowpea (V.unguiculata) genotype BR-3 against C.gloeosporioides (LPVD-1 isolate). Several studies have been undertaken on the defense mechanism of plant to hemibiotrophic pathogen, but overall they remain poorly understood. Previously, we have compared changes in protein expression induced in resistant cowpea genotype after infection with C.gloeosporioides using a proteomic approach. Based on these results, in the present study, we evaluated the defense responses induced by C.gloeosporioides in V.unguiculata associated with oxidative burst, accumulation of reactive oxygen species (ROS) such as superoxide anion (O2•-), hydrogen peroxide (H2O2) as well expression of antioxidant genes using RT-qPCR analysis. At the same time, we analyzed the C.gloeosporioides infection kinetics by optical microscopy (OM) and scanning electron microscopy (SEM). Increased O2•- and H2O2 was detected in cowpea 2 hours after inoculation (hai) using NBT and DAB staining, respectively. Spectrophotometric measurements showed two peaks H2O2 production, 2 and 12 hai, showing a biphasic kinetics. The increase of H2O2 was accompanied by lipid peroxidation 2 and 48 hai. OM and SEM analyzes showed that C.gloeosporioides was able to generate germ tubes and structures such as apressoria and develop under the surface of the leaves. However, despite of the development and attempt to infection, ultra-structural changes were observed on the surface of conidia and hyphae, 8 hai led to no infection of host cells. Analysis by RT-qPCR demonstrated that the genes VuFeSODI and VuCuZnSODII are up- regulated in chloroplasts at 4 hai, while the gene VuCuZnSODI was well up-regulated 12 hai. In relation to genes associated to scavenging of H2O2, VuPrxIIBCD showed a strong up-regulated of transcript at 2 hai while that VuAPXI showed up-regulated only 12 hai. VuCATI and VuCATII showed that the quantitative level of transcript expression was up- regulated 12 hai, indicating that they are important in the maintenance of H2O2 in peroxisomes. Contrarily, VuPrxIIE transcript was down-regulated in the early hours after inoculation, but showed increased expression levels at 48 hai suggesting participate in the regulation of H2O2 in chloroplasts. The present study indicates that H2O2 has an important role in the initial defense strategies of cowpea acting against C.gloeosporioides and functioning as a signaling molecule. Furthermore, genes associated with antioxidant defenses studied here seem to be involved, in combination with other molecules, in the regulation of H2O2 levels toward preventing cell death and regulating the cell redox homeostasis, important events in the resistance mechanisms of plants to pathogens. / Colletotrichum gloeosporioides é um importante patógeno hemibiotrófico com uma ampla gama de hospedeiros que causa perdas substanciais de colheitas. Dados recentes mostraram que a resposta hipersensitiva (HR) é um evento envolvido na resistência do feijão-de-corda (V.unguiculata) genótipo BR-3 contra C.gloeosporioides (isolado LPVD-1). Vários estudos têm sido realizados sobre os mecanismos de defesa de plantas a patógenos hemibiotróficos, mas em geral eles continuam a ser mal compreendidos. Anteriormente, comparamos mudanças na expressão de proteínas induzidas em genótipos resistentes de feijão-de-corda após a infecção com C. gloeosporioides utilizando uma abordagem proteômica. Com base nesses resultados, no presente estudo, avaliamos as respostas de defesa induzidas por C.gloeosporioides em V.unguiculata associadas com a explosão oxidativa, o acúmulo de espécies reativas de oxigênio (EROs), como o ânion superóxido (O2•-), e o peróxido de hidrogênio (H2O2), bem como a expressão de genes antioxidantes, utilizando análise por RT-qPCR. Ao mesmo tempo foi analisada a cinética de infecção de C.gloeosporioides por microscopia óptica (MO) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). O aumento de O2•- e H2O2 foi detectado em feijão-de-corda, 2 horas após a inoculação (hai) utilizando coloração por NBT e DAB, respectivamente. A quantificação espectrofotométrica demonstrou dois picos de produção de H2O2, 2 e 12 hai, mostrando uma cinética bifásica. O aumento de H2O2 foi acompanhado por peroxidação lipídica 2 e 48 hai. As análises de MO e MEV mostraram que C.gloeosporioides foi capaz de gerar estruturas tais como tubos germinativos e apressórios e se desenvolver sob a superfície das folhas. No entanto, apesar do desenvolvimento e tentativa de infecção, alterações ultra-estruturais foram observadas na superfície de conídios e hifas 8 hai levando a não infecção de células hospedeiras. Análise por RT-qPCR demonstrou que os genes VuFeSODI e VuCuZnSODII apresentaram aumento de expressão 4 hai, enquanto que o gene VuCuZnSODI foi bem expresso 12 hai. Em relação aos genes associados à regulação de H2O2, VuPrxIIBCD mostrou uma forte aumento de transcristos em 2 hai enquanto que, VuAPXI mostrou aumento de expressão apenas 12 hai. VuCATI e VuCATII mostram aumento de expressão quantitativa dos transcritos 12 hai, indicando que eles são associados a manutenção de H2O2 em peroxissomos. Contrariamente, a expressão dos transcritos de VuPrxIIE foi reprimida nas primeiras horas após a inoculação, contudo, apresentaram níveis aumentados de expressão em 48 hai, sugerindo participar na regulação de H2O2 nos cloroplastos. O presente estudo indica que H2O2 tem um papel importante nas estratégias de defesa iniciais de feijão-de-corda, agindo contra C.gloeosporioides e funcionando como uma molécula sinalizadora. Além disso, os genes associados com defesas antioxidantes estudados parecem estar envolvidos, em combinação com outras moléculas, na regulação dos níveis de H2O2 para prevenir a morte celular e regular a homeostase redox, eventos importantes nos mecanismos de resistência de plantas a patógenos.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-07Bitstream added on 2014-06-13T18:45:56Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_cd_dr_botfca.pdf: 609895 bytes, checksum: 7c6e8a8db45c92e029290feb971d57fa (MD5) / Espécies de Stylosanthes estão amplamente distribuídas em regiões tropicais e subtropicais das Américas, África e sudeste da Ásia, sendo o Brasil o principal centro de origem e diversidade do gênero, com 25 das 45 espécies descritas ocorrendo naturalmente em várias regiões do País. O gênero adapta-se a diferentes condições edafoclimáticas, apresentando melhor potencial de uso no Brasil. A antracnose, causada por Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., forma anamórfica de Glomerella cingulata (Stonem.) Spauld. & Scherenk tem sido o principal entrave à ampla utilização de Stylosanthes. Em 2000, o Centro Nacional de Pesquisa de Gado de Corte (Embrapa Gado de Corte), da Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (Embrapa), lançou a cultivar Estilosantes Campo Grande, constituída por uma mistura física de populações derivadas de 11 introduções de S. capitata e seis de S. macrocephala. Tais populações foram selecionadas durante seis gerações pelo método de “bulk”. Ainda, para a composição da cultivar, misturou-se as sementes das populações selecionadas nas proporções de 80% e 20%, respectivamente. Conforme foi desenvolvida, pressupõe-se que a cultivar seja composta de indivíduos geneticamente diferentes, porém não se sabe ao certo a proporção dos mesmos, fato que dificulta saber ao longo do tempo se a composição da cultivar mantém-se ou não a mesma. Assim, realizou-se este trabalho com os objetivos de identificar a existência de variabilidade de progênies originárias da referida cultivar e selecionar germoplasma com alto grau de resistência à antracnose e performance agronômica. Este projeto foi... . / Species of the genus Stylosanthes are widely distributed in tropical and subtropical regions of the Americas, Africa, and Asia. The main center of origin and diversity is Brazil, the native habitat of 25 of the 45 described species. The genus is adapted to a variety of edaphic and climatic conditions and showed good potential as a cultivated forage in Brazil. Anthracnose, caused by Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc., the anamorphic form of Glomerella cingulata (Stonem.) Spauld & Scherenk, has been the main limitation to the commercial utilization of Stylosanthes. In 2000, the National Beef Cattle Research Center (Embrapa Beef Cattle), from Brazilian Agricultural Research Corporation (Embrapa) released Stylosanthes cv. Campo Grande, it is a physical mixture of hybrid-derived progenies of 11 accessions of S. capitata and six lines of S. macrocephala. The resulting populations were advanced through six generations of bulk seed production. Seeds of the two species were mixed in the proportion of 80% and 20%, respectively, to form the new cultivar. Due to its origin, the cultivar was considered as composite of genetically diverse individuals. However, the actual composition and its long-term maintenance remained unknown factors. Consequently, this project was initiated with the objective to identify the degree of variability among component progenies in the cultivar and select germplasm with a high degree of anthracnose resistance and agronomic performance. The project was carried out at Embrapa Beef Cattle, Campo Grande-MS, from 2000 to 2002. In the first instance, individual plants were raised in the green house from single seed obtained from commercial samples of the cultivar. Some 294 S. capitata plants and 124 of S. macrocephala have been established... (Complete abstract, click electronic address below).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-20Bitstream added on 2014-06-13T19:45:05Z : No. of bitstreams: 1 leptokarydis_ih_dr_araiq.pdf: 4347278 bytes, checksum: 74059159e4a0a5ee40f9805bfa0d6f0d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os fungos, diferente dos vegetais são heterotróficos, mais especificamente quimiorganotróficos, por suas características específicas pertencem a um reino separado. Alguns dos fungos através de sua evolução se especializaram em invadir os espaços intercelulares das plantas passando a sobreviver dentro dos seus hospedeiros, não provocando nenhuma patologia. Estes microrganismos são denominados de fungos endofíticos. A disputa por alimentos entre os fungos no interior das espécies vegetais, gerou a necessidade dos fungos produzirem metabolitos secundários com atividades contra outros microrganismos, podendo assim demarcar seu território. Todo este processo deve acontecer de forma a não causar patologias na planta que é a fonte de seu alimento, em alguns casos essas relações de mutualismo e comensalismo se aprimoraram sendo muito comum alguns vegetais possuirem fungos endofíticos protegendo contra pragas insetos e patógenos. Este trabalho descreve o isolamento e a purificação dos fungos endofíticos associados às folhas, caules, raízes e sementes da espécie vegetal Michela champaca. Foram isolados 8 fungos, sendo 3 dos caules, 4 das folhas, 1 das raízes, nenhum fungo foi isolado das sementes. Os extratos brutos produzidos por estes fungos em caldo de dextrose e batata foram avaliados quimicamente (CLAE-DAD e RMN1H) e submetidos à bioensaios para avaliação da potencialidade anticancerígena, antifúngica e anticolinesterásica. Todos os extratos apresentaram atividade contra os fungos fitopatogênicos Cladosporium cladosporioides e Cladosporium sphaerospermum e 40% apresentaram atividade frente às linhagens mutantes de Saccharomyces cerevisiae. Após esta triagem, os fungos endofíticos Mc-8R (ainda não identificado) e Colletotrichum gloeosporioides (Mc-7F) foram selecionados para estudo químico/biológico. / Some fungal species, through their evolution, have specialized in invading plants and surviving inside their hosts causing no warm them. These microorganisms have been called endophytic which in the invasion process, produce chemical substances that inhibit competitors to invade their neighborhood and thus survive in harmony with the host. This work seeks to evaluate the chemical diversity of substances from endophytic fungi associated to Michelia champaca L. that present biological activity by isolating and identification of their secondary metabolites. This work resulted in the isolation of eight fungi species and selection of 2 strains which presented strong antifungal activity against Cladosporium cladosporioides and C. sphaerospermum, both of them pathogenic fungus; and a weak antitumor activity against mutant strains of Saccharomyces cerevisiae. The first one was codified as Mc-8R and chromatographic fractionation of its EtOAc extract allowed the identification of the Pirenocines A (1), E (2) and B (3) and the Pirenochaetic acids, C (4), A (5) and B (6), and in addition to the novel (7) and (8). Ergosterol (9), was found in the hexanic extract obtained from growing Mc-8R in rice, and the Ergosterol peroxide (10), which was isolated from the hexanic extract in corn. The other selected fungi species was identified as Colletotrichum gloeosporioides. The fractioning of its EtOAc extract led to the isolation of the known substances as Uracil (11), cyclo-(S*-Pro-S*-Tyr) (12), cyclo-(S*-Pro-S*-Val) (13), 2-Aminophenyl acetic acid (2-APA), (14), p-Hydroxyphenylacetic acid (15), 4-Hydroxybenzamide (16) and (2-Hydroxy-phenyl)- acetic acid (17), in addition to the novel compounds (18) and (19). 2-Hexylidene-3-methylsuccinic acid (20) was also identified as major compound from the fungus Mc-C3, (Xylaria sp.).

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:05:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4548_1.pdf: 2041335 bytes, checksum: 6afe35486289b0c1f985f873d76b7857 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / A antracnose, causada pelo fungo Glomerella cingulata (anamorfo Colletotrichum gloeosporioides), é a doença mais importante da cultura do cajueiro. Com objetivo de estudar a variabilidade genética (por RAPD e ITS do rDNA) e a patogenicidade de isolados de C. gloeosporioides obtidos de cajueiros de v´arias regi oes do Estado de Pernambuco, utilizou-se dezoito isolados de cajueiro provenientes dos municípios de Igarassu, Goiana, São João, Brejão, Garanhuns e Itambé, Estado de Pernambuco. Para o estudo do RAPD utilizou-se os primers OPA-02, OPA-11, OPW-07, OPW-20 e OPX-07 e para o estudo da região ITS1-5.8S-ITS2 do rDNA utilizou-se os primers universais ITS1 e ITS4. Os produtos das amplificações foram digeridos separadamente com cada uma das enzimas de restrição DraI, HaeIII e MspI. O teste de patogenicidade foi realizado com folhas destacadas de cajueiro cv. EMBRAPA C.P. 09. Pelo método de UPGMA do RAPD, agrupou-se os isolados em dois principais grupos com 15% de similaridade, sendo o Grupo I subdividido em cinco grupos e o Grupo II em quatro. A amplificação da região ITS resultou num fragmento de 590 pb para todos os isolados e o isolado Cg15, obtido de inflorescência, apresentou um segundo fragmento de 620-630 pb. Os produtos de amplificação da região ITS do rDNA não apresentaram sítio de restrição para a enzima DraI, e entre as enzima HaeIII e MspI, esta ´ultima evidenciou um maior polimorfismo entre os isolados. A análise de agrupamento para o RFLP do ITS evidenciou a formação de dois grupos distintos com 50% de similaridade, com o Grupo I dividindo-se em dois grupos com cerca de 65% de similaridade e o Grupo II subdividiu-se em dois grupos, um com 60% e o outro formado pelo isolado Cg17, obtido de caule. De acordo com o teste de patogenicidade todos os isolados são patogênicos à cv. EMBRAPA C.P. 09, sendo Cg02 e Cg03 os mais agressivos