Submitted by LETICIA VILMA DOS SANTOS VIEIRA null (leticiavieir@hotmail.com) on 2017-09-22T15:22:13Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_Letícia Vilma dos Santos Vieira.pdf: 2517417 bytes, checksum: 934c0060d04d2bb79afa7cb1c1f7b10a (MD5) / Approved for entry into archive by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com) on 2017-09-27T18:54:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vieira_lvs_me_araca.pdf: 2517417 bytes, checksum: 934c0060d04d2bb79afa7cb1c1f7b10a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-27T18:54:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vieira_lvs_me_araca.pdf: 2517417 bytes, checksum: 934c0060d04d2bb79afa7cb1c1f7b10a (MD5) Previous issue date: 2017-08-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Na inflamação alérgica, a histamina desencadeia papel crucial na indução de sintomas, tais como vasodilatação, broncoconstrição e produção de muco. O objetivo deste estudo foi investigar os efeitos da histamina na inflamação e no remodelamento das vias aéreas, avaliando para tanto a produção de muco e colágeno em modelo murino de inflamação pulmonar. Camundongos Balb/c machos de 20-25g foram estimulados, por via intratraqueal, com histamina em diferentes concentrações (10, 50 e 100 µM) e avaliados após 6, 24 e 48 horas. A partir dos dados resultantes do ensaio dose-resposta, foi realizado tratamento farmacológico, onde animais foram separados em 5 grupos (6 camundongos por grupo): Grupo 1 (PBS), controle não estimulado; Grupo 2 (Histamina), controle estimulado; Grupo 3 (Histamina + Loratadina); Grupo 4 (Histamina + Dexametasona) e Grupo 5 (Histamina + Dexametasona e Loratadina). Analisamos a migração de leucócitos no lavado broncoalveolar (LBA) e no tecido pulmonar. As alterações estruturais no tecido pulmonar e na traqueia foram avaliadas por análise histopatológica, bem como a produção de muco e deposição de colágeno usando Alcian blue/Periodic Acid Shiff e Tricômio de Masson, respectivamente. O sobrenadante do LBA e o tecido pulmonar foram coletados para quantificar os níveis SCF e CCL3 por ELISA de captura. A expressão gênica de Muc5ac, Gob-5, Col1a2 e receptores de histamina foi avaliada por RT-PCR em tempo real. Nossos resultados demonstram que a histamina induz inflamação das vias aéreas, com presença de infiltrado leucocitário no LBA e no tecido pulmonar. Além disso, os animais estimulados com histamina demonstraram aumento significativo na expressão gênica de Muc5ac, Gob-5 e Col1a2 no tecido pulmonar, produção SCF e CCL3 no LBA e pulmão, bem como apresentaram alterações estruturais na traqueia e no tecido pulmonar, tais como infiltrado leucocitário, presença de células caliciformes, produção de muco e depósito de colágeno. O pré-tratamento com dexametasona (DEX) inibiu a migração leucocitária no LBA e tecido pulmonar, e também diminuiu a expressão gênica de Muc5ac no tecido pulmonar, diminuiu a produção de SCF e CCL3 no LBA e pulmão, bem como reduziu a produção de muco e a deposição de colágeno no pulmão. Já o pré-tratamento com loratadina (LOR), bloqueador de H1, inibiu parcialmente a migração celular no LBA, mas não no tecido pulmonar, enquanto que a associação farmacológica entre DEX e LOR diminuiu significativamente a migração leucocitária tanto no LBA como no tecido pulmonar. Com base nos dados acima, sugere-se que a histamina induz inflamação das vias aéreas, promovendo a migração de leucócitos possivelmente através da produção de SCF e CCL3, bem como provoca alterações estruturais na traqueia e no tecido pulmonar, tais como produção de muco, deposição de colágeno, e esses efeitos tem a participação dos receptores H1 e H4. / In allergic inflammation, histamine exerts a crucial role in the induction of symptoms, such as vasodilation, bronchoconstriction and mucus production. The aim of this study was to investigate the effects of histamine in inflammation and airway remodeling, evaluating the mucus production and collagen in a murine model of pulmonary inflammation. Male Balb/c mice of 20-25g were challenged by intratracheal instillation of histamine at different concentrations (10, 50 and 100 μM) and evaluated after 6, 24 and 48 hours. From the data resulting from the dose-response assay, pharmacological treatment was performed, and animals were separated into 5 groups (6 mice per group): Group 1 (PBS), non-challenged control; Group 2 (Histamine), challenged control; Group 3 (Histamine + Loratadine); Group 4 (Histamine + Dexamethasone) and Group 5 (Histamine + Dexamethasone and Loratadine). We analyzed the recruitment of leukocytes in bronchoalveolar lavage (BAL) and lung tissue. Structural changes in lung tissue and trachea were assessed by histopathological analysis, as well as mucus production and collagen deposition using Alcian blue/Periodic Acid Shiff and Masson's Trichrome, respectively. BAL supernatant and lung tissue were collected for SCF and CCL3 levels quantification by capture ELISA. The gene expression of Muc5ac, Gob-5, Col1a2, and histamine receptors was evaluated by RT-PCR real time. Our results demonstrated that histamine induces airway inflammation, with presence of leukocyte infiltrate in BAL and lung tissue. In addition, histamine-challenged animals demonstrated a significant increase in the gene expression of Muc5ac, Gob-5 and Col1a2 in lung tissue, SCF and CCL3 production in BAL and lung, as well as structural changes in the trachea and lung tissue, such as leukocyte infiltrate, presence of goblet cell, mucus production and collagen deposition around the airways. Dexamethasone pre-treatment (DEX) inhibited leukocyte recruitment in BAL and lung tissue, decreased gene expression of Muc5ac in lung tissue, decreases SCF and CCL3 production in BAL and lung, as well as mucus production and collagen deposition in the lung. Already pre-treatment with loratadine (LOR), an H1 blocker, partially inhibited cell migration in BAL, but not in lung tissue, whereas the pharmacological association between DEX and LOR significantly reduced leukocyte recruitment in both the BAL and the lung tissue. Putting the above data together, we suggest that histamine induces airway inflammation, promoting the recruitment of leukocytes possibly through the production of SCF and CCL3, as well as causes structural changes in the trachea and lung tissue, such as mucus production, collagen deposition, and these effects might be mediated by H1 and H4 receptors.

O teste alérgico intradérmico (TID) é uma importante ferramenta no diagnóstico dos alérgenos implicados nas reações de hipersensibilidade mediada por IgE. O objetivo deste estudo foi avaliar o TID em eqüinos não alérgicos com extratos alergênicos de Cynodon dactylon, Lolium multiflorum, Paspalum notatum, Culex sp. e Aedes aegipty, e três concentrações de histamina, em dois volumes diferentes, e baseado nos resultados, verificar a acurácia do TID em eqüinos alérgicos. Foram realizados TID em 17 eqüinos não alérgicos com três concentrações de cada extrato (1:2000v/w, 1:4000v/w e 1:8000v/w) e três concentrações de histamina (0,1mg/ml, 0,05mg/ml e 0,025mg/ml), em dois volumes (0,1 e 0,05ml). Baseado nos resultados obtidos, foram realizados TID em seis eqüinos alérgicos utilizando os extratos na concentração de 1:2000v/w, a histamina na concentração de 0,025mg/ml, em um volume de 0,05ml. Nos eqüinos não alérgicos, nenhuma das três concentrações dos extratos testados nos dois volumes mostrou-se irritativa. Concentrações maiores de histamina provocaram halos maiores e levemente mais túrgidos, e quanto maior o volume injetado, maiores as reações Os TID realizados em eqüinos alérgicos mostraram confiabilidade dos resultados por evidenciar hipersensibilidade individual e não provocar reações irritativas. Em conclusão, as diferentes concentrações dos estratos testados em eqüinos não alérgicos não provocaram reações falso positivas (irritantes). O volume de 0,05ml é mais recomendado para realização dos TID pois as aplicações com 0,1ml produziram reações maiores, prejudicando a sensibilidade do teste. A concentração de 0,025mg/ml da solução de histamina provocou a formação de halos menores, permitindo maior acurácia do cut off no TID. Os extratos alergênicos testados em equinos alérgicos não provoraram reações em todos os animais, o que poderia ser considerado uma reação irritativa. Os equinos alérgicos apresentaram reações positivas diferentes, de acordo com a hipersensibilidade individual, demonstrando sensibilização alérgica verdadeira. / The intradermal test (IDT) is an important tool in the diagnosis of allergens involved in IgE-mediated hypersensitivity reactions. The aim of this study was to evaluate the IDT in nonallergic horses with allergenic extracts of Cynodon dactylon, Lolium multiflorum, Paspalum notatum, Culex sp. and Aedes aegypti, and three histamine concentrations, in two different volumes, and based on the results, verify the accuracy of IDT in allergic horses. IDT was performed on 17 nonallergic horses with three concentrations of each extract (1:2000v/w, 1:4000v/h and 18000v/w) and three histamine concentrations (0,1mg/ml, 0,05mg/ml and 0,025mg/ml) in two volumes (0,1 and 0,05ml). Based on the results obtained, IDT was performed in six allergic horses using extracts at the concentration of 1:2000v/w, histamine at a concentration of 0.025mg/ml, in a volume of 0,05ml. In nonallergic horses, none of the three concentrations of the extracts tested in the two volumes were irritant. Larger concentrations of histamine provoked larger and slightly more turgid wheals, and the larger the volume injected, the greater the reactions The IDT performed in allergic horses showed reliability of the results because they demonstrated individual hypersensitivity and did not provoke irritative reactions. In conclusion, the different concentrations of extracts tested in nonallergic horses did not provoke false positive (irritant) reactions. The volume of 0,05ml is more recommended for execution of IDT because the applications with 0,1ml produced larger reactions, impairing the sensitivity of the test. The concentration of 0,025mg/ml of the histamine solution caused the formation of smaller wheals, allowing a better accuracy of the cut off in the IDT. The allergenic extracts tested in allergic horses did not provoke reactions in all the animals, what could be considered an irritative reaction. Allergic horses presented different positive reactions, according to individual hypersensitivity, demonstrating true allergic sensitization.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-27T14:57:21Z No. of bitstreams: 1 Rodrigo Barbosa Acioli de Oliveira.pdf: 1281699 bytes, checksum: af3b5b3f4c17c790ad47750c27fe13be (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-27T14:57:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigo Barbosa Acioli de Oliveira.pdf: 1281699 bytes, checksum: af3b5b3f4c17c790ad47750c27fe13be (MD5) Previous issue date: 2009-02-27 / The objective of this study was to obtain information regarding tuna fish quality captured in the northwestern coast of Brazil from December 2007 until December 2008. The levels of histamine in export type tuna caught in the coast of Rio Grande do Norte by the technique of pelagic trawl were determined. It was investigated the efficiency of two objective parameters of quality, levels of bioactive amines and color evaluation, which were related to the classification performed by a trained evaluator. The influence of the capture of live or dead fish on the quality of meat was also investigated. Among the 180 samples of fresh tuna analyzed, 95% did not contain histamine. Only nine samples contained histamine at levels that ranged between 4.92 and 6.90 mg/kg. The results indicated that the practices of handling and fishing gear used by companies of Rio Grande do Norte, Brazil, ensured the achievement of good quality fish. The levels of bioactive amines in 68 samples of tuna categorized into six levels of quality by experienced painelist were determined. The polyamines(spermine and spermidine), were found, however, the levels did not differ suggesting that this parameter objective in itself was not sufficient to distinguish the different levels of quality of yellowfin tuna and bigeye tuna. No significant differences were found in the values of the colorimetric coordinates (CIEL*, CIEa*, CIEb* and CIEC*) in samples of tuna classification 1, 2+, 2H, 2, 2- and 3. The conditions dead or alive at the time of slaughter showed no influence on the production of bioactive amines indicating that other factors may be involved. However, the samples were in excellent state of freshness, because were found significant levels of spermine and spermidine, rather low levels of cadaverine, putrescine, histamine, tyramine, phenylethylamine, agmatine, serotonin and tryptamine. / Este trabalho teve como objetivo obter informações sobre a qualidade dos atuns capturados na região nordeste do Brasil. Os teores de histamina de atuns tipo exportação capturados no litoral do Rio Grande do Norte pela técnica de espinhel pelágico foram determinados de dezembro de 2007 a dezembro de 2008. Investigou-se a eficiência de dois parâmetros objetivos de qualidade, teores de aminas bioativas e avaliação cor, que foram relacionados com a classificação realizada por um avaliador treinado. A influência da captura de peixes vivos ou mortos sobre a qualidade da carne também foi investigada. A presença de histamina não foi detectada em 95% das 180 amostras de atum fresco analisadas. Apenas nove amostras continham histamina em teores que variaram de 4,92 a 6,90 mg/kg. Estes resultados indicaram que as práticas de manipulação e a arte de pesca utilizadas pelas empresas do Rio Grande do Norte, Brasil, asseguraram a obtenção de peixes de boa qualidade. Os teores de aminas bioativas em 68 amostras de atum categorizadas em seis níveis de qualidade por avaliador experiente foram determinados. Foram encontradas as poliaminas espermina e espermidina, no entanto, os teores não diferiram entre si indicando que esse parâmetro objetivo por si só não era suficiente para distinguir os diferentes níveis de qualidade da albacora laje e albacora bandolim. Também não foram encontradas diferenças significativas nos valores das coordenadas colorimétricas (CIE L*, CIE a*, CIE b* e CIE C*) nas amostras de atum da classificação 1, 2+, 2H, 2, 2- e 3. As condições vivo ou morto no momento de abate demonstraram não exercer influência sobre a produção de aminas bioativas indicando que outros fatores podem estar envolvidos, porém, as amostras encontravam-se em excelente estado de frescor, pois foram encontrados teores significativos de espermina e espermidina, em detrimento de baixos teores decadaverina, putrescina, histamina, tiramina, feniletilamina, agmatina, serotonina e triptamina.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-03-16T12:11:21Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daniel da Costa Batista - 2017.pdf: 13510690 bytes, checksum: 72bb332e8655396e33e3861a0a294b3e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-03-20T13:13:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daniel da Costa Batista - 2017.pdf: 13510690 bytes, checksum: 72bb332e8655396e33e3861a0a294b3e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-20T13:13:05Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daniel da Costa Batista - 2017.pdf: 13510690 bytes, checksum: 72bb332e8655396e33e3861a0a294b3e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Inflammation is defined to be a beneficial response, dynamic and adaptive of body against any aggressor agent, be it of chemical, physical or biological nature, aimed at neutralizing this agent, as well as tissue repair. During the inflammatory process are produced and/or released biomolecules that will promote the maintenance of this process as well as the emergence of events called "cardinal signs of inflammation" as pain, heat, swelling and redness which if not properly addressed can result in loss of injured tissue function. Histamine, a biogenic amine synthesized from L-histidine amino acid exerts its physiological action by binding to histamine receptors called H1R, H2R, H3R and H4R which are characterized by belonging to the class of GCPR. In recent years there has been reported a number of research on the role of the H4R receptor in inflammatory processes, since it is expressed in immune cells membrane regulating the chemotaxis induced by histamine and the synthesis of compounds such as the prototype JNJ7777120 (8), capable of modulating such receptor once there are no drugs that acts front this mechanism of action available in the market. In search a line of research aimed at planning, synthesis and pharmacological evaluation of new candidates prototype anti-inflammatory drugs, we describe in this paper the design, synthesis and pharmacological evaluation of new N-arilheterocycles derivatives (34a-34p and 34'a), designed from the rings bioisosterism strategy from prototype JNJ7777120 (8), with possible future therapeutic applications. In this sense the LQFM182 derivative (34a) was subjected to investigation of their anti-inflammatory properties in the mice paw edema models and pleurisy induced by carrageenan, as well as evaluation of MPO activity and quantification of IL-1β and TNF-α cytokines was able of promoting a reduction of 87% in the levels of the latter, coming to be most effective in dose used when compared to dexamethasone, which promoted an 82% reduction in TNF-α levels. / A inflamação é definida por ser uma reação benéfica, dinâmica e adaptativa do organismo frente a qualquer agente agressor, seja este de natureza química, física ou biológica, visando a neutralização deste agente, bem como o reparo tecidual. Durante o processo inflamatório são produzidas e/ou liberadas biomoléculas que irão promover a manutenção deste processo, bem como o surgimento de eventos denominados “sinais cardinais da inflamação” como dor, calor, edema e rubor que se caso não forem devidamente resolvidos poderão resultar na perda da função do tecido lesado. A histamina, uma amina biogênica sintetizada a partir do aminoácido L-histidina, exerce suas ações fisiológicas ao se ligar a receptores histaminérgicos denominados H1R, H2R, H3R e H4R os quais, são caracterizados por pertencerem a classe dos GCPR. Nos últimos anos tem sido relatado um grande número de pesquisas relacionadas ao papel do receptor H4R no processo inflamatório, uma vez que o mesmo se encontra expresso na membrana de células do sistema imune regulando a quimiotaxia induzida por histamina e, a síntese de compostos, como o protótipo JNJ7777120 (8), capazes de modular tal receptor haja visto que ainda não há fármacos, disponíveis no mercado, que atuem por meio deste mecanismo de ação. No âmbito de uma linha de pesquisa que visa o planejamento, a síntese e a avaliação farmacológica de novos candidatos a protótipos de fármacos anti-inflamatórios, descrevemos neste trabalho o planejamento, a síntese e a avalição farmacológica de novos derivados N-arilheterocíclicos (34a-34p e 34’a), desenhados a partir da estratégia de bioisosterismo de anéis a partir dos protótipos JNJ7777120 (8), com possíveis aplicações terapêuticas futuras. Neste sentido o derivado LQFM182 (34a) foi submetido a investigação de suas propriedades anti-inflamatórias nos modelos de edema de pata e pleurisia induzidos por carragenina em camundongos, bem como na avaliação da atividade da MPO e quantificação das citocinas IL-1β e TNF-α sendo capaz de promover uma redução de 87% nos níveis desta última, chegando a ser mais efetivo, na dose utilizada, quando comparado a dexametasona, a qual promoveu uma redução de 82% dos níveis de TNF-α.

Vários estudos utilizando modelos animais têm demonstrado que estruturas límbicas como amídala (AMD), hipocampo dorsal (HD) e córtex pré-frontal medial (CPFm) participam na consolidação da memória associada às emoções. Considerando que a síntese de novas proteínas é necessária para o processo de consolidação de memórias, e que a combinação entre o uso de inibidores de síntese proteica e diferentes intensidades de estímulo incondicionado têm gerado respostas comportamentais distintas com relação à consolidação da memória emocional, o presente trabalho se propôs a investigar a hipótese de a consolidação da memória aversiva na AMD, no HD e no CPFm, associada a síntese proteica, ocorre de maneira diferenciada nessas três estruturas, de acordo com a intensidade do estímulo aversivo, bem como se a expressão de genes envolvidos na transmissão histaminérgica seria modificada ao longo das fases da memória emocional aversiva. O objetivo do presente estudo foi avaliar o papel da síntese proteica na AMD, HD e CPFm no processo de consolidação de uma memória aversiva baseada em condicionamento aversivo moderado ou intenso; investigar a expressão de genes ligados a transmissão histaminérgica na AMD, HD e CPFm após o condicionamento aversivo intenso. Para este fim dois experimentos foram realizados: No experimento 1 a anisomicina (ANI) foi microinjetada bilateralmente na AMD ou HD ou CPFm de camundongos antes de serem submetidos a tarefa de esquiva inibitória do tipo step-down utilizando duas intensidades de estímulo incondicionado: moderada ou intensa. No experimento 2, as variações da expressão dos genes da enzima HDC (histidina descarboxilase responsável pela síntese de histamina) e dos receptores H1, H2 e H3 foram analisadas em diferentes espaços temporais através da reação de polimerase em cadeia em tempo real. Os resultados do experimento 1 demonstram que microinjeção de ANI no CPFm prejudica a consolidação da memória de esquiva inibitória com estímulo incondicionado moderado ou intenso, porém quando administrada intra-AMD e intra-HD, a ANI só prejudica a consolidação da memória de esquiva inibitória com estímulo incondicionado intenso. No experimento 2 demonstra que durante a consolidação da memória aversiva intensa há diminuição nos níveis de expressão dos genes: HDC no HD, Hrh3 na AMD, Hrh1 e Hrh3 no CPFm. Já na fase de evocação, na AMD há aumento e diminuição na expressão dos genes HDC e Hrh3, respectivamente; no HD há aumento na expressão dos genes Hrh2 e Hrh3 e no CPFm há aumento na expressão do gene HDC e diminuição nos genes Hrh1 e Hrh3. Durante a reconsolidação há diminuição na expressão dos genes HDC e Hrh3 e aumento do gene Hrh1 na AMD. No DH há aumento com relação ao gene Hrh1, e no CPFm há aumento do gene HDC e diminuição na expressão dos genes Hrh1 e Hrh3. No presente estudo conclui-se que em situações com moderado grau de aversividade, a consolidação dessa experiência não dependerá de síntese proteica na AMD e no HD, mas sim no CPFml. No entanto, em situações com elevado grau de aversividade, a síntese proteica na AMD, HD e CPFm é essencial para a consolidação de tal experiência. Além disso, os genes HDC, Hrh1, Hrh2 e Hrh3 se expressam distintamente na AMD, HD e CPFm ao longo da escala temporal da consolidação, evocação e reconsolidação da formação de memórias de medo. / Several studies using animal models have shown that limbic structures like the amygdala (AMG), dorsal hippocampus (DH) and medial prefrontal cortex (mPFC) are involved in emotional memory consolidation. Whereas the synthesis of new proteins is necessary for memory consolidation process, and that opposite results related to the interaction of protein synthesis inhibitors and foot-shock intensity on memory consolidation have been reported, the present study aims to investigate the hypothesis of protein synthesis in AMG, the DH and mPFC associated with the consolidation of aversive memory occurs differently in these three structures, according to the intensity of the aversive stimulus and the expression of proteins involved in histaminergic transmission would be modified during the process of consolidation and emotional expression of aversive memory. The aim of this study was to evaluate the role of protein synthesis in AMG, DH and mPFC in consolidation of aversive memory based on moderate and intense conditioning; to investigate the expression of proteins related to histaminergic transmission in AMG, DH and mPFC after intense aversive conditioning. For this purpose two experiments were performed: in experiment 1 the anisomycin (ANI) was bilaterally microinjected into AMG or DH or mPFC of mice before being submitted the step-down inhibitory avoidance task using two unconditioned stimulus intensities: moderate or intense. In experiment 2, the variations in the gene expression of HDC enzyme (histidine decarboxylase - responsible for histamine synthesis) and the H1, H2 and H3 receptors were analyzed at different temporal spaces by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). The results of the first experiment demonstrate that microinjection of ANI in mPFC impairs the consolidation of inhibitory avoidance memory with moderate or intense unconditioned stimulus, however when administered intra-AMG and intra DH, ANI only impairs the consolidation of inhibitory avoidance memory under an intensive unconditioned stimulus. The experiment 2 demonstrates that during the consolidation of intense aversive memory there is a decrease of the genes expression levels: HDC in the dorsal hippocampus, Hrh3, Hrh1 in the amygdala, and Hrh3 in the medial prefrontal cortex. During retrieval the HDC and Hrh3 genes expression levels are increased and decreased, respectively in the AMG; the Hhr2 and Hrh3 genes expression levels are increased in the DH, and in the mPFC the HDC gene expression level is increased, and the Hrh1 and Hrh3 are decreased. During reconsolidation the amygdalas HDC and Hrh3 genes expression levels are decreased and the Hrh1 gene is increased. In the DH the Hrh1 gene levels are elevated and in the mPFC the HDC gene expression level is increased and the Hrh1 and Hrh3 are decreased. In the current study we conclude that under moderate aversiveness situations, the consolidation of this experience does not depend on protein synthesis in the AMG and in the DH, but in the mPFC. However, in situations with a high level of adversity, protein synthesis in this three structures are essential for the consolidation of such experience. In addition, the histaminergic genes are distinctly expressed in the AMG, DH and mPFC along the time scale of consolidation, retrieval and reconsolidation of the formation of fear memories.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Recent studies have indicated that nearly half of all surgical patients present a picture of moderate to severe pain what become important to understand the mechanisms involved postoperative pain to be better treat it. Previous studies have shown that incisions can cause mast cell degranulation. Thus, the aim of this study was to investigate the involvement of mast cells and its inflammatory mediators, histamine, serotonin and tryptase in a model of postoperative pain in mice. The depletion of mast cell mediators produced by repeated pre-treatment with compound 48/80 (1, 3, 10 and 10 μg/paw), that promote mast cell degranulation, prevented postoperative nociception (98 ± 23% of inhibition) and reduced histamine and serotonin levels (88 ± 4% and 68 ± 10%, respectively) and tryptase activity (82 ± 14% of reduction) in paw tissue. Furthermore, plantar surgery produced immense mast cell degranulation, as assessed by histology and confirmed by the increased levels of serotonin (three fold higher) and histamine (fifteen fold higher) and by increased activity of tryptase (two fold higher) in the perfused tissue after surgery. Accordingly, pre-treatment with the mast cell membrane stabilizer cromoglycate (200 μg/paw, i.pl.) prevented mechanical allodynia (inhibition of 96 ± 21%) and an increase in histamine (44 ± 10% of inhibition) and serotonin (73 ± 5% of inhibition) levels and prevented the tryptase release (100% of inhibition) induced by plantar surgery. Finally, local treatment with H1 (promethazine, 100 μg/paw, i.pl.), 5-HT3 (ondansetron, 10 μg/paw, i.pl.), 5-HT2A (ketanserin, 5 μg/paw, i.pl.) or PAR-2 (ENMD-1068, 10-100 nmol/paw) receptor antagonists or with the tryptase inhibitor (gabexate, 0.01-1 nmol/paw) partially decreased postoperative nociception in mice. Thus, mast cell activation mechanisms as well as release of mast cells inflammatory mediators and activation of its respective receptors are interesting targets for the development of novel therapies to treat postoperative pain. / Estudos recentes indicam que praticamente a metade de todos os pacientes submetidos à procedimentos cirúrgicos apresentam um quadro de dor moderada à severa, o que torna importante entender os mecanismos envolvidos na dor pós-operatória para melhor tratá-la. Dados da literatura demonstram que incisões podem causar a degranulação de mastócitos. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar o envolvimento dos mastócitos e seus mediadores inflamatórios, serotonina, histamina e triptase, em um modelo de dor pós-operatória em camundongos. A depleção dos mediadores dos mastócitos produzida pelo pré-tratamento repetido com o composto 48/80 (1, 3, 10 e 10 μg/pata), que promove degranulação de mastócitos, preveniu a nocicepção pós-operatória (98 ± 23% de inibição) e reduziu os níveis de histamina e serotonina (88 ± 4 % e 68 ± 10%, de redução, respectivamente) e a atividade da triptase (82 ± 14% de redução) no tecido da pata. Além disso, a cirurgia plantar produziu grande degranulação dos mastócitos, como avaliado por histologia e confirmado pelo aumento dos níveis de serotonina (três vezes maior) e histamina (quinze vezes maior) e pelo aumento na atividade da triptase (duas vezes maior) no perfusato tecidual após a cirurgia. O pré-tratamento com o estabilizador da membrana celular dos mastócitos, cromoglicato (200 μg/pata, i.pl.), preveniu a nocicepção mecânica (inibição de 96 ± 21%) e o aumento dos níveis de histamina (44 ± 10% de inibição) e serotonina (73 ± 5% de inibição), bem como preveniu a liberação de triptase (100% de inibição) induzida pela cirurgia plantar. Finalmente, o tratamento local com os antagonistas dos receptores H1 (prometazina, 100 μg/pata, i.pl.), 5-HT3 (ondansetrona, 10 μg/pata, i.pl.), 5-HT2A (cetanserina, 5 μg/pata, i.pl.) ou PAR-2 (ENMD-1068, 10-100 nmol/pata) ou com o inibidor da triptase (gabexato, 0,01-1 nmol/pata) reduziu parcialmente a dor pós-operatória em camundongos. Assim, os mecanismos de ativação de mastócitos, bem como a liberação dos seus mediadores inflamatórios e conseqüente ativação dos seus respectivos receptores são alvos interessantes para o desenvolvimento de novas terapias para tratar a dor pós-operatória.

The consumption of fermented goods has been related with outbreaks of foods intoxications, like these biogenic amines have been associated to the consummations of these products. The aims went to assess the potential of amines formation in dry fermented sausage added or not with starter and fiber, determination of amines formation in cooked salami added or not with organic acids. The dry fermented sausages were fabricated and cased in artificial collagen no eatable gut then, ripening under controlled conditions of temperature, moisture and air stream. The cooked salamis were added with organic acids (lactic and citric), cased in artificial collagen no eatable gut and cooked. The products were according to the microbiologic available legal patterns. The histamine reached amounts of 145,61; 93,38 and 130,10 mg·kg-1 and the tyramine reached amounts of 67,05; 70,28 and 71,87 mg·kg-1 for the dry fermented sausages treatments: control, starter and starter and fiber respectively. The histamine in the cooked salami treatments: control, lactic acid and citric acid reached amounts of 48,06; 55,37 and 49,16 mg·kg-1 and the tyramine reached amounts of 11,00; 11,06 and 11,35 mg·kg-1 respectively. There were no differences at the level tested (p<0,05). In conclude the starter did not avoid the amine formation, attributed to the polluting bacterium found already in the raw materials. The temperature and the organic acids did not influence in the final amounts of amines in the cooked salami. The taste assess was not influenced by the presence of amines. The addition of glucose and sucrose avoided larger amines amounts in the fermented salami and the wheat fiber did not interfere in the metabolism of the microorganisms. / O consumo de alimentos fermentados tem sido relacionado com surtos de intoxicações alimentares e as aminas biogênicas são associadas ao consumo destes produtos. Os objetivos foram avaliar o potencial de formação de aminas em salame tipo Italiano, adicionado ou não, de cultura starter e fibra; determinar a formação de aminas no salame cozido, adicionado ou não de ácidos orgânicos. Os salames foram elaborados e embutidos em tripa artificial de colágeno não comestível. Maturados sob condições de temperatura, umidade e velocidade do ar controlados. Na fabricação do salame cozido, foram adicionados ácidos orgânicos (láctico e cítrico), embutidos em tripa artificial de colágeno não comestível e as peças cozidas. Os produtos se apresentaram conforme os padrões microbiológicos vigentes. A histamina alcançou valores de 145,61; 93,38 e 130,10 mg·kg-1 e a tiramina valores de 67,05; 70,28 e 71,87 mg·kg-1 para os tratamentos do salame controle, starter e starter e fibra respectivamente. A histamina alcançou valores de 48,06; 55,37 e 49,16 mg·kg-1 e a tiramina valores de 11,00; 11,06 e 11,35 mg·kg-1 para os tratamentos do salame cozido controle, ácido láctico e ácido cítrico respectivamente. Não houve diferenças ao nível testado (p<0,05). Conclui-se que o starter comercial não evitou a formação de aminas, atribuída às bactérias contaminantes encontradas já nas matérias-primas. A temperatura e os ácidos orgânicos não influenciaram nos níveis finais de aminas no salame cozido. A análise sensorial não foi influenciada pela presença das aminas. A adição de glicose e sacarose evitou maiores acúmulos de aminas no salame fermentado e a fibra de trigo não interferiu no metabolismo dos microrganismos.

INTRODUÇÃO: A Urticária Crônica é caracterizada pelo aparecimento de pápulas eritematosas, pruriginosas recorrentes e transitórias que duram por mais de seis semanas. Na maioria dos pacientes a causa é indeterminada, definida como idiopática (UCI), entretanto, um sub-grupo apresentam autoanticorpos contra a cadeia alfa do receptor de alta afinidade para IgE (FceRI), que são expressos na superfície de mastócitos e basófilos, tornando-os células alvo nesta doença. OBJETIVOS: Avaliar em pacientes com UCI, submetidos ao teste intradérmico de soro autólogo (ASST), o perfil de ativação dos basófilos, pela intensidade de expressão de marcadores de ativação/desgranulação e pela capacidade dos basófilos em responder aos estímulo com a IL-3 e anticorpo anti-IgE. Além disto, a presença de fator liberador de histamina foi avaliado nos soros dos pacientes. METODOLOGIA: Pacientes com UCI (n= 37) foram selecionados no Ambulatório de Urticária do Departamento de Dermatologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP e submetidos ao ASST. O grupo controle foi constituído por indivíduos saudáveis (n=38). A análise da expressão de FceRI, CD63, CD123 e CD203c em basófilos de sangue periférico foi realizada por citometria de fluxo. No ensaio in vitro de estimulação dos basófilos com anti-IgE, as células foram previamente incubadas com IL-3. O ensaio de liberação de histamina mediada por soros de pacientes com UCI foi realizado com três diferentes doadores de leucócitos e a histamina liberada dosada por ELISA de competição. RESULTADOS: Há um baixo número de basófilos no sangue periférico nos pacientes com UCI, coincidente com o baixo nível sérico de histamina. Os escassos basófilos no sangue periférico mostram elevada expressão de FceRI e uma regulação positiva da expressão de CD203c e CD63, independentemente do ASST. A análise funcional dos basófilos, mostra que somente a incubação com IL-3 recombinante já induz aumento significante da expressão de CD203c e da liberação de histamina dos basófilos de pacientes com UCI, que são intensificados com o estímulo por anticorpos anti-IgE após 15 e 40 minutos em relação ao grupo controle. Já a expressão de CD63 em basófilos após estímulo com anti-IgE, aumentou somente nos basófilos de indivíduos sadios, uma vez que os níveis de expressão basal estavam previamente aumentados. A presença de autoanticorpos liberadores de histamina foi analisada nos soros de pacientes com UCI. Três experimentos independentes foram realizados, evidenciando a ocorrência de 17% de positividade. CONCLUSÕES: Os resultados mostram que na UCI, os basófilos são sensibilizados in vivo, por fatores além dos autoanticorpos anti-FceRI e que funcionalmente, estão hiper-reativos a estímulos imunológicos. A presença de fatores séricos liberadores de histamina, independente do ASST, enfatiza que o teste intradérmico é sugestivo de autorreatividade e não de autoimunidade na UC / INTRODUCTION: Chronic Urticaria is characterized by recurrent, transitory, pruritic and erythematous wheals present for at least six weeks. In most patients the cause is unknown, defined as idiopathic (CIU), however, a sub-group has autoantibodies against the alfa chain of the high affinity IgE receptor (FceRIa) expressed on mast cells and basophils surface making it the target cells in this disease. OBJECTIVES: To evaluate in CIU patients, undergone autologous serum skin test (ASST), the activation profile of the basophils assessed by the expression of activation/degranulation markers and by the ability to release histamine in response to IL-3 priming and cross-linking with anti-IgE antibodies. Furthermore, the presence of histamine releasing factor in sera of patients was evaluated. METHODS: CIU patients (n = 37) were selected from the Dermatological Outpatient Clinic of the Hospital das Clínicas de São Paulo (HC-FMUSP) and submitted to the ASST. The control group consisted of healthy subjects (n=38). The analysis of the expression of FceRI, CD63, CD123 and CD203c on basophils from peripheral blood was assessed by flow cytometry. For the in vitro stimulation with anti-IgE antibodies, the cells were previously primed with human recombinant IL-3. The histamine release assay mediated by sera from patients with CIU was performed with three different donors of leukocytes and released histamine measured by competition ELISA. RESULTS: There is a low number of basophils in peripheral blood of patients with CIU, reflecting a low serum levels of histamine. The scarce basophils in peripheral blood show high expression of FceRI and an up-regulation of CD203c and CD63 marker expression, independently of the ASST. The functional analysis of basophils, revealed that recombinant IL-3 per se induces a significant increase in CD203c expression and the histamine release from basophils of patients with CIU, which are enhanced followed for 15 and 40 minutes of anti-IgE estimulation. The expression of CD63 in basophils upon anti-IgE stimulation, increased only in basophils of healthy individuals, since the baseline levels of CD63 expression on basophils of patients was already up-regulated. The presence of histamine release factors was examined in sera from CIU patients. Three independent experiments were performed, showing the occurrence of 17% of positivity. CONCLUSION: The results show that in CIU, the basophils are primed in vivo due to factor other than autoantibodies anti-FceRI and they have an hyperactive status to the immunological stimuli. The presence of serum histamine releasing factors, independent of the ASST, emphasizes that the intradermal test is suggestive of autorreactivity and not for autoimmunity in UC

INTRODUÇÃO: A Urticária Crônica é caracterizada pelo aparecimento de pápulas eritematosas, pruriginosas recorrentes e transitórias que duram por mais de seis semanas. Na maioria dos pacientes a causa é indeterminada, definida como idiopática (UCI), entretanto, um sub-grupo apresentam autoanticorpos contra a cadeia alfa do receptor de alta afinidade para IgE (FceRI), que são expressos na superfície de mastócitos e basófilos, tornando-os células alvo nesta doença. OBJETIVOS: Avaliar em pacientes com UCI, submetidos ao teste intradérmico de soro autólogo (ASST), o perfil de ativação dos basófilos, pela intensidade de expressão de marcadores de ativação/desgranulação e pela capacidade dos basófilos em responder aos estímulo com a IL-3 e anticorpo anti-IgE. Além disto, a presença de fator liberador de histamina foi avaliado nos soros dos pacientes. METODOLOGIA: Pacientes com UCI (n= 37) foram selecionados no Ambulatório de Urticária do Departamento de Dermatologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP e submetidos ao ASST. O grupo controle foi constituído por indivíduos saudáveis (n=38). A análise da expressão de FceRI, CD63, CD123 e CD203c em basófilos de sangue periférico foi realizada por citometria de fluxo. No ensaio in vitro de estimulação dos basófilos com anti-IgE, as células foram previamente incubadas com IL-3. O ensaio de liberação de histamina mediada por soros de pacientes com UCI foi realizado com três diferentes doadores de leucócitos e a histamina liberada dosada por ELISA de competição. RESULTADOS: Há um baixo número de basófilos no sangue periférico nos pacientes com UCI, coincidente com o baixo nível sérico de histamina. Os escassos basófilos no sangue periférico mostram elevada expressão de FceRI e uma regulação positiva da expressão de CD203c e CD63, independentemente do ASST. A análise funcional dos basófilos, mostra que somente a incubação com IL-3 recombinante já induz aumento significante da expressão de CD203c e da liberação de histamina dos basófilos de pacientes com UCI, que são intensificados com o estímulo por anticorpos anti-IgE após 15 e 40 minutos em relação ao grupo controle. Já a expressão de CD63 em basófilos após estímulo com anti-IgE, aumentou somente nos basófilos de indivíduos sadios, uma vez que os níveis de expressão basal estavam previamente aumentados. A presença de autoanticorpos liberadores de histamina foi analisada nos soros de pacientes com UCI. Três experimentos independentes foram realizados, evidenciando a ocorrência de 17% de positividade. CONCLUSÕES: Os resultados mostram que na UCI, os basófilos são sensibilizados in vivo, por fatores além dos autoanticorpos anti-FceRI e que funcionalmente, estão hiper-reativos a estímulos imunológicos. A presença de fatores séricos liberadores de histamina, independente do ASST, enfatiza que o teste intradérmico é sugestivo de autorreatividade e não de autoimunidade na UC / INTRODUCTION: Chronic Urticaria is characterized by recurrent, transitory, pruritic and erythematous wheals present for at least six weeks. In most patients the cause is unknown, defined as idiopathic (CIU), however, a sub-group has autoantibodies against the alfa chain of the high affinity IgE receptor (FceRIa) expressed on mast cells and basophils surface making it the target cells in this disease. OBJECTIVES: To evaluate in CIU patients, undergone autologous serum skin test (ASST), the activation profile of the basophils assessed by the expression of activation/degranulation markers and by the ability to release histamine in response to IL-3 priming and cross-linking with anti-IgE antibodies. Furthermore, the presence of histamine releasing factor in sera of patients was evaluated. METHODS: CIU patients (n = 37) were selected from the Dermatological Outpatient Clinic of the Hospital das Clínicas de São Paulo (HC-FMUSP) and submitted to the ASST. The control group consisted of healthy subjects (n=38). The analysis of the expression of FceRI, CD63, CD123 and CD203c on basophils from peripheral blood was assessed by flow cytometry. For the in vitro stimulation with anti-IgE antibodies, the cells were previously primed with human recombinant IL-3. The histamine release assay mediated by sera from patients with CIU was performed with three different donors of leukocytes and released histamine measured by competition ELISA. RESULTS: There is a low number of basophils in peripheral blood of patients with CIU, reflecting a low serum levels of histamine. The scarce basophils in peripheral blood show high expression of FceRI and an up-regulation of CD203c and CD63 marker expression, independently of the ASST. The functional analysis of basophils, revealed that recombinant IL-3 per se induces a significant increase in CD203c expression and the histamine release from basophils of patients with CIU, which are enhanced followed for 15 and 40 minutes of anti-IgE estimulation. The expression of CD63 in basophils upon anti-IgE stimulation, increased only in basophils of healthy individuals, since the baseline levels of CD63 expression on basophils of patients was already up-regulated. The presence of histamine release factors was examined in sera from CIU patients. Three independent experiments were performed, showing the occurrence of 17% of positivity. CONCLUSION: The results show that in CIU, the basophils are primed in vivo due to factor other than autoantibodies anti-FceRI and they have an hyperactive status to the immunological stimuli. The presence of serum histamine releasing factors, independent of the ASST, emphasizes that the intradermal test is suggestive of autorreactivity and not for autoimmunity in UC

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:19:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5467.pdf: 2078884 bytes, checksum: ea4b65ac9862fb8231836d4cc2d57339 (MD5) Previous issue date: 2013-08-12 / Financiadora de Estudos e Projetos / Experimental studies indicate that the cerebellum works not only in motor control but performs more complex tasks, such as the consolidation of emotional memory. The purpose of this study was to evaluate the effects of actions of thioperamide (THIO), histaminergic H3 receptor antagonist, in the consolidation of emotional memory in mice through the cerebellar vermis. To this was done two experiments. Experiment 1 used the elevated plus maze (EPM) as the test apparatus, and the experiment 2 used the Inhibitory Avoidance Test (IAT). In both experiments were utilized four experimental groups of male mice of Swiss Albino strain, weighing between 25-35g. All animals were submitted to surgical procedure that consisted in the implementation of the guide cannula in the cerebellar vermis. In each experiment there was one control group that was treated with saline (SAL), and three groups that received pharmacological treatment of THIO different concentrations: 0.06, 0.3 and 1.5 ng/0.1&#956;l. The tests were done on two consecutive days (exposure and reexposure), and drug treatment occurred immediately after exposure. The data were analyzed using analysis of variance (ANOVA) of a track followed by the Duncan test (P <0.01). It was concluded that, in both experiments, the data of previous exposure groups pharmacological treatment did not differ significantly and were grouped in pool. In experiment 1 the reduction of exploration of the open arms on reexposure was considered indicative of learning and memory. The data of experiment 1 pointed out a deficit of emotional memory consolidation for the group with lower dose of THIO (0.06ng /0.1&#956;l), because the data of this group showed no statistical difference in relation to the pool for the variables %OAE and %TAE. The other groups (0.3 and 1.5 ng/0.1 &#956;l), had a reduction in exploratory activity. There was also a statistical difference between the groups of reexposure, being the smallest group of THIO, statistically different from SAL and the two groups of larger doses used in this study did not show this difference. None of the doses used THIO intervened in locomotor activity of the animals, because there was no difference in the variable EAE. In experiment 2 was indicative of learning and memory latency increase on reexposure. The latency increase was observed in groups SAL, 0.06 and 0.3ng/0,1 &#956;l compared with the pool. There was no difference for the group 1.5 ng/0.1 &#956;l. Among the group data of reexposure, there was a difference of 0.3 THIO groups and 1.5 ng/0.1 &#956;l compared to the control, and this difference was not observed in group THIO 0.06. / Trabalhos experimentais apontam que o cerebelo não atua somente no controle motor, mas realiza tarefas mais complexas, como a consolidação da memória emocional. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da atuação da Tioperamida (TIO), antagonista do receptor histaminérgico H3, na consolidação da memória emocional de camundongos via vermis cerebelar. Para isso foi realizado dois experimentos. O experimento 1 utilizou o labirinto em cruz elevado (LCE) como aparato de teste, e o experimento 2 a esquiva inibitória (EI). Em ambos os experimentos foram utilizados 4 grupos experimentais de camundongos machos, da cepa Suiço Albino, pesando entre 25-35 g. Todos os animais foram submetidos ao procedimento cirúrgico que consistiu na implantação da cânula guia no vermis cerebelar. Em cada experimento havia um grupo controle, que foi tratado com salina (SAL), e três grupos que receberam tratamento farmacológico de diferentes concentrações de TIO: 0,06, 0,3 e 1,5 ng/0,1&#956;l. Os testes foram realizados em dois dias consecutivos (exposição e reexposição), sendo que o tratamento farmacológico ocorreu imediatamente após a exposição. Os dados foram analisados utilizando-se a análise de variância (ANOVA) de uma via, seguida do teste de Duncan (p<0,01). Foi constatado que, em ambos os experimentos, os dados dos grupos da exposição anteriores ao tratamento farmacológico não apresentaram diferença estatística e foram agrupados em pool. No experimento 1 a diminuição da exploração dos braços abertos na reexposição foi considerada indicativo de aprendizado e memória. Os dados do experimento 1 apontaram déficit da consolidação da memória emocional para o grupo de menor dose de TIO (0,06 ng/0,1&#956;l), pois os dados deste grupo não apresentaram diferença estatística em relação ao pool, para as variáveis porcentagem de entrada em braços abertos (%EBA) e porcentagem de tempo gasto nos braços abertos ( %TBA). Os demais grupos (0,3 e 1,5 ng/0,1&#956;l) apresentaram redução da atividade exploratória. Houve também diferença estatística entre os grupos da reexposição, sendo o menor grupo de TIO estatisticamente diferente do SAL e os dois grupos de maiores doses utilizados neste estudo, não apresentaram esta diferença. Nenhuma das doses de TIO utilizadas interferiram na atividade locomotora dos animais, pois não houve diferença na variável EBF. No experimento 2 foi indicativo de aprendizagem e memória o aumento da latência na reexposição. O aumento da latência foi observado nos grupos SAL, 0,06 e 0,3 ng/0,1&#956;l em comparação com o pool, e não houve diferença para o grupo 1,5 ng/0,1&#956;l. Entre os dados dos grupos da reexposição, houve diferença dos grupos TIO 0,3 e 1,5 ng/0,1&#956;l em comparação ao controle, e não foi observada esta diferença em relação ao grupo TIO 0,06. Os resultados do experimento 2 indicam facilitação da consolidação da memória emocional para o grupo de dose intermediária de TIO (0,3 ng/0,1&#956;l) e prejuízo para a maior dose de TIO (1,5 ng/0,1&#956;l).