As infecções humanas com a filaria Mansonella ozzardi ocorrem em focos situados em regiões tropicais e subtropicais da América Central e do Sul e frequentemente coexistem com outras doenças endêmicas tropicais. Na Amazônia brasileira, as infecções são geralmente assintomáticas e a maior parte delas, consequentemente, deixam de ser diagnosticada. As filarioses crônicas, geralmente não tratadas, podem criar um ambiente imunorregulador, caracterizado pela expansão de linfócitos T produtores de IL-10, que mediam a supressão de respostas proliferativas de células T frente a antígenos específicos bem como a antígenos não-relacionados. Neste trabalho, utilizamos marcadores de ativação celular (CD69 e HLA-DR) e de atividade reguladora (CD39, CTLA-4, OX40, GITR, LAG3, PD-1, LAP-TGF-β e TNFRII) para caracterizar populações de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) em indivíduos infectados por M. ozzardi bem como em controles saudáveis de uma área endêmica deste parasito na Amazônia Brasileira. A análise de PBMCs, por citometria de fluxo multiparamétrica de 49 pacientes infectados por M. ozzardi, mostrou que pacientes e controles apresentam proporções similares de Treg clássicas circulantes, no entanto, indivíduos infectados apresentam um aumento da proporção de células CD4+ e células T reguladoras (Tregs) que expressam a molécula CD39. Células Treg CD39+ parecem definir uma população distinta entre as Treg, pois ao compararmos os marcadores de regulação e ativação entre Tregs CD39+ e CD39- encontramos proporções aumentas destes marcadores nas Treg CD39+. O bloqueio dessa molécula em condições de reestimulo celular aumenta a produção de citocinas inflamatórias e diminui a produção de IL-10 confirmando seu papel regulador. / Human infections with the filarial parasite Mansonella ozzardi are common in areas of tropical and subtropical Central and South America and often coexist with other endemic tropical diseases, such as malaria. In the Amazonian Basin of Brazil, infections are typically asymptomatic; most of them will remain undiagnosed. These chronic, untreated filarial infections are potentially associated with a regulatory immune environment, dominated by IL-10-producing T-cells, which mediate the suppression of T-cell proliferation in response to filarial and non-related antigens. Here, we used markers of cell activation (CD69 and HLA-DR) and regulatory activity (CD39, CTLA-4, OX40, GITR, and TNFRII) to characterize peripheral-blood mononuclear cell (PBMCs) subpopulations in individuals infected with |M. ozzardi and in healthy controls living in an area of M. ozzardi endemicity in the Brazilian Amazon. Multiparameter flow cytometry analysis of PBMCs from 49 malaria patients showed that patients and controls have similar proportions of classic circulating Tregs, however, the proportion of CD4 + cells and Tregs expressing the CD39 (an ectonucleotidase that regulates the balance of immune responses through Phosphohydrolysis of ATP, an inflammatory molecule in adenosine, an anti-inflammatory molecule), is increased in infected patients. CD39+Treg cells seem to define a distinct population among Tregs, compare activation and regulatory markers between CD39+ and CD39- Tregs - we found increased proportions of these markers in the CD39+ Tregs. Blocking this molecule under cellular restimulation conditions increases production of inflammatory cytokines and decreases IL-10 production, improving its regulatory role.

Orientador: Lenice do Rosário de Souza / Resumo: Segundo dados do Programa Conjunto das Nações Unidas sobre HIV/Aids (UNAIDS), existem atualmente 36,9 milhões de pessoas vivendo com HIV no mundo. A disponibilização e eficácia da terapia antirretroviral (TARV) permitiu uma mudança no cenário desta pandemia, reduzindo consideravelmente a mortalidade associada à aids. Devido à redução da carga viral plasmática do HIV (CV) para níveis indetectáveis, a TARV permite que ocorra a recuperação de células T CD4+, principal alvo do vírus, e melhora no prognóstico das pessoas que vivem com o HIV/aids (PVHA). Entretanto, as mudanças no compartimento de linfócitos T CD8+, responsáveis pelo controle da replicação viral, são relativamente pouco entendidas durante os vários estágios da infecção. Desta forma, o presente estudo, de caráter retrospectivo, teve o objetivo de avaliar, a partir do levantamento das contagens de células T CD8+, as possíveis correlações entre esta variável e a evolução clínica da infecção, considerando as contagens de células T CD4+, quantificações da CV, tempo de TARV, classe terapêutica utilizada, aparecimento de infecções oportunistas e desfecho clínico (paciente assintomático, progressão para aids ou morte). Para isso, foram analisados 200 prontuários eletrônicos de PVHA acompanhadas no Serviço de Ambulatórios Especializados de Infectologia “Domingos Alves Meira” (SAEI-DAM) e diagnosticadas a partir de 2012. Para a análise dos dados, foram realizados os testes, binomial negativa, correlação de Pearson e analisad... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

A atopia caracteriza-se pela tendência de um indivíduo a produzir IgE em quantidade elevada, em resposta a um alérgeno específico, levando ao desenvolvimento de asma, rinite ou eczema. Todavia, a manifestação do fenótipo da alergia depende da interação de fatores genéticos e exposição a alérgenos ambientais. Desta forma, o alérgeno é processado e apresentado aos linfócitos T, que desenvolvem uma resposta imune Th2, exacerbada característica da atopia. A principal célula que está envolvida na comunicação entre a imunidade inata e adaptativa é a célula dendrítica (DC) cuja função é capturar, processar e apresentar o antígeno aos linfócitos. As DCs imaturas capturam o antígeno e migram do tecido para o órgão linfóide periférico, onde elas se diferenciam em DCs maduras e apresentam o antígeno aos linfócitos T naive. Assim, os linfócitos T naive podem se diferenciar em subtipos de linfócitos efetores como: linfócitos Th1 e Th2. Esses linfócitos auxiliam na produção de anticorpos pelos linfócitos B na resposta imune humoral contra patógenos específicos. O sistema imune humoral compreende cinco classes de imunoglobulinas: IgG, IgM, IgD, IgE e IgA e sua produção sofre influência da imunidade celular. Desta forma, alérgenos provenientes de ácaros como, Dermatophagoides pteronyssinus, podem levar à inflamação alérgica, alterando a produção de anticorpos. Tendo em vista evidências que demonstram a interação das DCs com anticorpos, propomos investigar sua influência na apresentação dos principais alérgenos da poeira domiciliar e sua modulação sobre a resposta imune em indivíduos alérgicos e não alérgicos. / Atopy is characterized by the trend of an individual to produce high amounts of IgE in response to a specific allergen, leading to the development of asthma, rhinitis or eczema. However, the manifestation of the allergy phenotype depends on the interaction of genetic factors and exposure to environmental allergens. In this way, the allergen is processed and presented to the T lymphocytes, which develop a Th2 immune response, exacerbated characteristic of atopy. The main cell that is involved in the communication between innate and adaptive immunity is the dendritic cell (DC) whose function is to capture, process and present the antigen to lymphocytes. Immature DCs capture the antigen and migrate from the tissue to the peripheral lymphoid organ, where they differentiate into mature DCs and present the antigen to naive T lymphocytes. Thus, naive T lymphocytes can differentiate into subtypes of effector lymphocytes such as Th1 and Th2 lymphocytes. These lymphocytes assist in the production of antibodies by B lymphocytes in the humoral immune response against specific pathogens. The humoral immune system comprises five classes of immunoglobulins: IgG, IgM, IgD, IgE and IgA and their production is influenced by cellular immunity. In this way, allergens from mites such as Dermatophagoides pteronyssinus, can lead to allergic inflammation, altering the production of antibodies. In view of evidence demonstrating the interaction of DCs with antibodies, we propose to investigate their influence on the presentation of the main house dust allergens and their modulation on the immune response in allergic and non-allergic individuals.

Um mecanismo de tolerância periférica estudado é mediado por células T reguladoras (Tregs) que expressa o marcador CD25 e o fator de transcrição FoxP3. Estudamos o papel das Tregs nos fenômenos de imunossupressão na resistência e susceptibilidade genética dos hospedeiros contra o fungo. Animais A/J e B10.A foram depletados de células CD25 e outro grupo recebeu Ig de rato. Na 2ª semana de infecção, a depleção de células CD25 resultou em doença menos grave em ambas as linhagens com intenso afluxo de linfócitos T e macrófagos somente nos animais A/J. Na 10ª semana, a depleção de células CD25 também resultou em doença menos grave com aumento dos níveis de citocinas em ambas as linhagens. Neste período, entre os grupos controle, somente os animais A/J apresentaram aumento de linfócitos T e macrófagos. Em conclusão, os animais A/J apresentaram aumento da ativação da resposta imune enquanto que animais B10.A não desenvolveram eficiente ativação da resposta adaptativa mas que podem ter apresentado uma imunidade inata mais eficiente no controle do crescimento fúngico. / A mechanism for studying peripheral tolerance is mediated by regulatory T cells (Tregs) expressing the marker CD25 and the transcription factor FoxP3. We studied the role of Tregs in the mechanism of immunosuppression in genetic susceptibility and resistance of host against the fungus. A/J and B10.A mice were depleted of CD25 and control group received rat Ig. In the second week post infection, the depletion of CD25 cells resulted in low severity of disease in both mouse strains, with an intense influx of T lymphocytes and macrophages only in A/J. At 10 weeks, the depletion of CD25 also resulted in low severity disease with increased levels of cytokines in both mouse strains. Moreover, between the control group, only A/J mice showed an increase of T lymphocytes and macrophages. In conclusion, A/J mice showed increased activation of the immune response, whereas B10.A mice that had not developed efficient activation of the adaptive immune response, but that probably had an innate immunity that was more effective in controlling fungal growth.

A artrite induzida por pristane (PIA) em camundongos HIII (resistentes) e LIII (suscetíveis) foi usada para estudar mecanismos inflamatórios e imunes atuantes na fase pré-clínica da doença, os quais são pouco conhecidos. Estudos anteriores mostraram diferenças significativas na produção de citocinas nos animais HIII e LIII na fase pré-clínica da PIA, sugerindo forte influênica no fenótipo de PIA. A PIA foi induzida apenas por via intraperitoneal nos animais LIII, com intensa infiltração de neutrófilos, linfócitos, monócitos e macrófagos, altos níveis de IL-12p40 e maior expressão de genes de citocinas inflamatórias após a injeção de pristane. Por outro lado, na linhagem HIII houve aumento de eosinófilos e neutrófilos, mas redução de monócitos e linfócitos. Não observamos diferenças nos níveis de TNF-<font face=\"Symbol\">&#945;, IFN-<font face=\"Symbol\">g, IL-12p70, IL-17, IL-10. Concluímos que a intensidade e o tipo de resposta inflamatória na fase inicial da PIA podem ser mecanismos envolvidos na diferença de resistência/ susceptibilidade entre as linhagens HIII e LIII. / Pristane-induced arthritis (PIA) in HIII (resistant) and LIII (susceptible) mice was used in this work to characterize the cellular and molecular alterations of the pre-clinical phase of the disease, of which little is known. Previous reports showed significant differences in cytokine production of HIII and LIII mice in the pre-clinical phase of PIA, suggesting a strong influence on PIA phenotype. PIA was induced only by the intraperitoneal route in LIII animals, which showed intense infiltration of neutrophils, lymphocytes, monocytes and macrophages, with high levels of IL-12p40 after pristane injection. Inflammatory cytokine genes were also upregulated in LIII mice. On the other hand, HIII strain had increased eosinophils and neutrophils, but reduced monocytes and lymphocytes. No significant differences were found in TNF-<font face=\"Symbol\">&#945;, IFN-<font face=\"Symbol\">g, IL-12p70, IL-17, IL-10 levels. We conclude that the intensity and type of inflammatory response in the initial phase of PIA may be different mechanisms involved in resistance / susceptibility between HIII and LIII mice.

Paracoccidioidomicose é adquirida pela via respiratória e o óxido nitrico (NO) está envolvido na eliminação de patógenos. Nós propusemos investigar o papel do NO na doença em animais NO-/- sintase deficientes (iNOS-/-) e seu grupo WT. Na 2ª semana de infecção, a ausência de NO resultou em doença menos grave com aumento dos níveis de TNF-a acompanhado com o intenso afluxo de linfócitos T e macrófagos para os pulmões. Na 10ª semana, os animais iNOS-/- desenvolveram alta carga fúngica nos pulmões com menor afluxo de celulas T ativadas e macrófagos e presença de células T reguladoras CD4+CD25+FoxP3+ nos pulmões. Somente os animais iNOS-/- desenvolveram lesões pulmonares organizadas em granulomas, embora não foi detectado diferença na mortalidade para ambos os grupos. As diferenças morfológicas nas lesões foram abolidas pela depleção de TNF-a que induziu nos animais iNOS-/- uma mortalidade precoce e intenso afluxo inflamatório nos pulmões. Além disso, a depleção de linfócitos TCD8+ resultou em doença mais grave e menor recrutamento celular pulmonar nos animais iNOS-/-. / Paracoccidioidomycosis is acquired by the respiratory route and nitric oxide (NO) is involved in the killing of pathogens, we aimed to investigate the role of NO in the course of the disease using NO- synthase deficient (iNOS-/-) and WT mice. At week 2 postinfection, NO absence resulted in less severe infection associated with increased TNF-a levels besides a massive influx of activated T cells and macrophages to the lungs. By week 10, iNOS-/- mice developed increased fungal burdens allied with less pronounced influx of activated T cells and macrophages and increased presence of regulatory CD4+CD25+FoxP3+ T cells to the lungs. Only iNOS-/- mice developed organized pulmonary granulomas, although no differences in the mortality rates were detected. The differences in the morphology of lesions were partially abrogated by TNF-a depletion which, induced a precocious mortality of iNOS-/- and massive influx of inflammatory pulmonary cells. Indeed, the CD8+T cells depletion developed a more severe infection with less recruitment of pulmonary cells in iNOS-/- mice.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-12-04T17:58:38Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoEfeitoProtetor.pdf: 1613941 bytes, checksum: 367436baf933f8daa67c171995e6584b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-12-05T16:29:03Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoEfeitoProtetor.pdf: 1613941 bytes, checksum: 367436baf933f8daa67c171995e6584b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-05T16:29:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoEfeitoProtetor.pdf: 1613941 bytes, checksum: 367436baf933f8daa67c171995e6584b (MD5) Previous issue date: 2012 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O mercúrio pode ser encontrado em diversas formas, sendo a orgânica como metilmercúrio (MeHg), considerada a mais tóxica. Facilmente absorvido por via oral, se acumula na cadeia trófica e se amplifica em carnívoros aquáticos, principalmente em peixes, daí o risco maior para as populações que deles se alimentam preferencialmente, como os ribeirinhos Amazônidas. O efeito neurotóxico dessa forma de mercúrio tem sido amplamente demonstrado através de estudos epidemiológicos e experimentais. Alguns desses estudos também mostraram que hormônios e substâncias antioxidantes podem agir protegendo o organismo contra a ação deletéria do mercúrio. A prolactina é um destes hormônios que apresenta ação protetora, mas age também como citocina pró-inflamatória. Desde que o MeHg pode também agir como uma substância imunotóxica, procuramos neste trabalho estudar a ação citoprotetora da PRL em cultivos contínuos de linhagem B95-A de linfócitos de primata afim de avaliar sua fragilidade ao MeHg e sua reatividade a ação da PRL. Com o objetivo de avaliar a integridade funcional dos linfócitos expostos ao MeHg utilizou-se teste de reação colorimétrica para 3-(4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difenil tetrazólio bromide (MTT), o qual detecta atividade metabólica mitocondrial. Para avaliar a resposta imune do linfócito, medidas da concentração do fator de necrose tumoral alfa (TNF α) no sobrenadante do cultivo, foram realizadas por ELISA. É uma citocina pró-inflamatória liberada em resposta a agressão celular de diferentes causas, incluindo estresse oxidativo, um dos efeitos agudos mais evidentes do MeHg, além disso, esta citocina também poder responder a regulação prolactinérgica em linfócitos humanos. Após 18 horas de exposição do cultivo a crescentes concentrações do metal (0,1; 1, 5, 10 e 50 μM) verificou-se significativa diminuição do tipo dose-dependente da viabilidade celular a partir de 1 μM (35%) e progressivamente até 50 μM (80%), quando poucas células íntegras foram encontradas nos cultivos. Um efeito bifásico em forma de “sino” ocorreu na liberação de TNF α, onde concentrações mais baixas de MeHg inibiram (0,1 e 1 μM), a intermediária estimulou (5 μM) e as duas maiores (10 e 50 μM) voltaram a inibir. A prolactina também diminuiu a viabilidade celular, em cerca de 30%, somente na dose mais elevada (10 nM). Por outro lado, na dose de 1 nM a PRL preveniu a diminuição de 40% da viabilidade celular resultante a exposição ao MeHg a 5 μM. Esta dose de 1 nM de PRL foi a única a estimular a liberação de TNF α, mas curiosamente, reverteu a liberação desta citocina quando associada a 5 μM de MeHg, concentração que igualmente estimulou a secreção de TNF α. Os resultados confirmaram a toxidade do MeHg para linfócitos de primatas (linhagem B95-A) e sua reversão por uma possível ação protetora da PRL. Um efeito bifásico na secreção de TNF α resultou da exposição ao MeHg, sugerindo a presença de diferentes mecanismos citotóxicos resultantes a ação mercurial. Por outro lado, a PRL foi pouco efetiva em estimular a secreção daquela citocina, invertendo esta resposta quando associada ao MeHg. No entanto, estes resultados são preliminares e carecem de um estudo mais acurado para sua completa elucidação. / Mercury can be found in several forms, as being organic methylmercury (MeHg), considered the most toxic. Readily absorbed orally, accumulates in the food chain and is amplified in aquatic carnivores, especially in fish, hence the greater risk to populations that preferentially feed on them, such as riparian Amazonian populations. The neurotoxic effect of this form of mercury has been widely demonstrated by epidemiological and experimental studies. Some of these studies have also shown that hormones and antioxidants may act by protecting the body against the deleterious effects of mercury. Prolactin is a hormone that has such protective action, but also acts as a proinflammatory cytokine. Since MeHg can also act as an immunotoxic substance, we have studied the cytoprotective action of PRL in continuous cultures of strain B95-A primate lymphocytes in order to assess their vulnerability to MeHg and its responsiveness to the action of PRL. In order to assess the functional integrity of lymphocytes exposed to MeHg we used to test color reaction for 3 - (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT), which detects activity mitochondrial metabolism. To evaluate the immune response of lymphocytes, measures of tumor necrosis factor alpha (TNF α) concentration in the middle were performed by ELISA. It is a proinflammatory cytokine released in response to cellular injury from different causes, including oxidative stress, one of the most obvious acute effects of MeHg, and this cytokine also be able to answer prolactin regulation in human lymphocytes. After 18 hours of cultivation exposure to increasing concentrations of the metal (0.1, 1, 5, 10 and 50 mM) showed significant decrease in dose-dependent cell viability from 1 mM (35%) and progressively up to 50 mM (80%), when few intact cells were found in the cultivation. A biphasic effect in a "bell" shaped occurred in the release of TNF-α, where lower concentrations of MeHg inhibited (0.1 and 1 mM) stimulated the intermediate (5 mM) and the two largest (10 and 50 mM) returned to inhibit. Prolactin also decreased the cell viability by about 30% only at the highest dose (10 nM).Moreover, at a dose of 1 nM prevented PRL 40% decrease in cell viability due to exposure to 5 mM MeHg. This dose of 1 nM PRL was the only one to stimulate the release of TNF-α, but curiously reversed the release of this cytokine when combined with 5 mM of MeHg, concentrations that also stimulated the secretion of TNF-α. The results confirmed the toxicity of MeHg to lymphocytes of primates (strain B95-A) and its reversion by possible protective action of PRL. A biphasic effect on the secretion of TNF α resulted from MeHg exposure, suggesting the presence of different mechanisms of cytotoxic action resulting from mercury. Moreover, PRL was less effective in stimulating the secretion of that cytokine, reversing this response when the associated with MeHg. However, these results are preliminary and require a more accurater study for their complete elucidation.

A presente tese aborda os principais aspectos da biologia do vírus Epstein-Barr (EBV), suas relações com doenças, seu potencial uso como ferramenta para a biologia celular e a reprodutibilidade desta célula para o auxílio no diagnóstico de Erros Inatos do Metabolismo (EIM) através da medida de atividades de hidrolases lisossômicas. Os objetivos deste trabalho foram investigar as alterações celulares e morfológicas nos linfócitos B infectados com EBV, afim de confirmar a transformação celular nos 12 dias de cultura, para certificação do protocolo empregado; determinar a atividade, no momento da coleta (12 dias de cultivo) e imediatamente após 180, 365 e 730 dias de criopreservação em nitrogênio líquido, das enzimas β-galactosidase, β-glicosidase, a-galactosidase, a- glicosidase e a-iduronidase em Linhagens Celulares Linfoblastóides (LCL) transformados com EBV de indivíduos normais e determinar a atividade, no momento da coleta (12 dias de cultivo) e imediatamente após 180 dias de criopreservação das enzimas β-glicosidase, a-galactosidase e a- iduronidase em LCLs transformados com EBV de pacientes com doenças de Gaucher e Fabry e Mucopolissacaridose tipo I. Este trabalho mostrou que o protocolo empregado foi eficiente na transformação de linfócitos B pelo EBV através das 3 ferramentas utilizadas: imunohistoquímica, microscopia eletrônica de transmissão e microscopia confocal. Foram observados, através destes instrumentos, o aparecimento de clusters celulares, vacúolos citoplasmáticos, binucleação e aumento no conteúdo de organelas, o que é esperado em células infectadas por EBV. Foi observado também que as células cultivadas por 12 dias com EBV apresentavam a atividade da β-glicosidase e da a-iduronidase diferente significativamente daquela de linfócitos não infectados. Após 6 meses, 1 e 2 anos de criopreservação das células transformadas com EBV, em nitrogênio líquido, as enzimas β-galactosidase, β-glicosidase, a-galactosidase, a-glicosidase e a-iduronidase mantiveram suas atividades semelhantes aquelas após 12 dias de cultivo celular. O mesmo ocorreu quando utilizamos amostras de pacientes com doença de Gaucher, Fabry e Mucopolissacaridose tipo I após 6 meses de criopreservação. Este trabalho mostrou que o protocolo empregado foi eficiente na transformação de linfócitos B pelo vírus Epstein Barr e que uma vez congeladas até pelo menos 1 ano em nitrogênio líquido, todas as enzimas analisadas mantém suas atividades semelhantes aquelas após 12 dias de cultivo celular. / The present study addresses the main aspects of the biology of the Epstein-Barr virus (EBV) and its relationships with diseases, its potentials as a tool in cell biology, and the reproducibility of EBV-infected cells to assist in the diagnosis of Inborn errors of metabolism (IEM) using a measure of the activities of lysosomal hydrolases. The objectives of this study were (i) to investigate the cellular and morphological changes in B-lymphocytes infected with EBV to confirm cell transformation within the 12-day culturing period in order to verify the applicability of the method; (ii) to determine the activity of the enzymes β- galactosidase, β-glucosidase, α-iduronidase, α-galactosidase and α- glucosidase in lymphoblastoid cell lines at the moment of collection (12-day culturing) and immediately after 180, 365 and 730 days in lymphoblastoid cell lines (LCLs) transformed with EBV of normal individuals frozen in liquid nitrogen and (iii) to determine the activities of the enzymes β-glucosidase, α- galactosidase and α-iduronidase at the moment of collection (12 days of culturing) and immediately after 180 days in LCLs transformed by the EBV of patients with Gaucher and Fabry diseases and with muccopolysaccharidosis type I frozen in liquid nitrogen. The results showed that the protocol was efficient to transform B-lymphocytes by EBV using three tools: immunohistochemistry, transmission electron microscopy and confocal microscopy. The technique afforded to observe the emergence of clusters, cytoplasm vacuoles, binucleatoon and increased organelle contents, which are expected in EBV-infected cells. Also, it was observed that cells cultured with EBV for 12 days presented β-glucosidase and α-iduronidase significantly different from that of non-infected lymphocytes. Activity of the enzymes β- galactosidase, β-glucosidase, α-galactosidase. α-glucosidase and α- iduronidase measured after 180, 635 and 730 days in cryopreservation of EBVtransformed cells in liquid nitrogen were similar to that of samples after 12-day culturing of cells. The same was observed when we used samples from patients with Gaucher, Fabry and muccopolysaccharidosis type I after a 6-month cryopreservation period. This study shows that the protocol was efficient in transforming B-lymphocytes by EBV and that the activities of all enzymes frozen for at least one year in liquid nitrogen remained similar to that of samples collected after 12-day culturing.

Submitted by Márcio Ropke (ropke13marcio@gmail.com) on 2017-06-14T11:39:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Avaliação imunoistoquímica de neutrófilos e linfócitos no fronte invasivo do.pdf: 669377 bytes, checksum: 4b3ab148e2d476d517ef09b5f5eebc1a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-14T11:39:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Avaliação imunoistoquímica de neutrófilos e linfócitos no fronte invasivo do.pdf: 669377 bytes, checksum: 4b3ab148e2d476d517ef09b5f5eebc1a (MD5) Previous issue date: 2015-12-10 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul - FAPERGS / Pacientes com carcinoma espinocelular (CEC) de lábio apresentam prognóstico favorável em comparação aos pacientes com a lesão intraoral. O estadiamento clínico da lesão é a principal forma de avaliação do prognóstico do CEC oral, além dos sistemas de gradação histológica dos tumores. A análise do budding tumoral (BT) e do infiltrado inflamatório na região do fronte invasivo tumoral (FIT) podem configurar-se como fatores prognósticos complementares, já que para alguns tipos de câncer, entre eles o CEC intraoral, BT positivo, contagem elevada de neutrófilos no tumor, sangue ou ambos e razão neutrófilos/linfócitos (RNL) aumentada representam um pior prognóstico para os pacientes. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença e a RNL no FIT, bem como a associação desses achados com o grau histológico de malignidade (GHM) dos tumores e o BT em uma amostra de CEC de lábio. Revisou-se os arquivos do Centro de Diagnóstico das Doenças da Boca da Faculdade de Odontologia da Universidade Federal de Pelotas, buscando-se lesões submetidas a biópsias excisionais de CEC em lábio inferior e classificando-as segundo um sistema de classificação do GHM. Realizou-se técnica imunoistoquímica com os anticorpos CD66b e CD3 para avaliação de neutrófilos e linfócitos, respectivamente. O anticorpo AE1/AE3 foi empregado para a classificação do BT. Neutrófilos CD66b+ e linfócitos CD3+ foram analisados semi-quantitativamente no FIT. De um total de 43 casos, 36 (83,7%) eram tumores bem diferenciados e 32 (74.4%) não apresentavam BT. Observou-se baixa infiltração de neutrófilos e alta de linfócitos (índices 0,8 e 2,0, respectivamente) na região do FIT, acarretando baixa RNL na mesma região. Portanto, a alta diferenciação tumoral, os poucos casos exibindo BT positivo e a baixa RNL no FIT podem estar associadas ao melhor prognóstico do CEC labial. / Patients with lip squamous cell carcinoma (LSCC) present favorable prognosis compared to those with intraoral lesion. Clinical staging of lesion is the main way of assessing the prognosis of oral squamous cell carcinoma (OSCC), followed by the histological grading systems. Analysis of tumor budding (TB) and the inflammatory infiltrate in the tumoral invasive front (TIF) can be configured as additional prognostic factors, since for some types of cancers, including intraoral SCC, findings as TB positive, high counting of neutrophils in tumor, blood or both and increased neutrophils/lymphocytes ratio (NLR) represent a worse prognosis for the patients. The aim of this study was to evaluate the presence and the NLR in the TIF, and the association of these findings with the histological malignancy grading (HMG) of tumors and the TB in a LSCC sample. The files from the Center of Diagnosis of Oral Diseases, Dental School, Federal University of Pelotas were reviewed searching specimens from excisional biopsies of lower LSCC (LLSCC) and classifying them according to a HMG system. Immunohistochemistry was performed with CD3 and CD66b antibodies for evaluation of neutrophils and lymphocytes, respectively. The antibody AE1/AE3 was used for the identification of TB. CD66b+ neutrophils and CD3+ lymphocytes were analyzed semi-quantitatively in the TIF. From a total of 43 cases, 36 (83.7%) represented well differentiated tumors, 32 (74.4%) showed none TB. There were low neutrophil and high lymphocyte infiltrations (indexes 0.8 and 2.0, respectively) in the TIF, leading to a low NLR in the same region. Therefore, the high differentiation grading, the few BT positive cases and the low NLR in the TIF may be associated with better prognosis in LSCC.

Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-03-03T14:36:30Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ana Caroline de Souza Barnabé - 2012.pdf: 955092 bytes, checksum: 1c7e4c5347d5c7994c39252d1f1f2fef (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-04T12:04:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ana Caroline de Souza Barnabé - 2012.pdf: 955092 bytes, checksum: 1c7e4c5347d5c7994c39252d1f1f2fef (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T12:04:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Ana Caroline de Souza Barnabé - 2012.pdf: 955092 bytes, checksum: 1c7e4c5347d5c7994c39252d1f1f2fef (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2012-02-24 / In this study, 300 1 day-old male Cobb chicks were used to evaluate, with the objective of evaluating the effects of phytogenic additives on performance, gut integrity and immune system of broilers inoculated with Salmonella enterica serovar Enteritidis (SE). The birds were divided into five treatments with six repetitions each. Treatment (Ttm) 1 - group inoculated orally with 0.1 mL of sterile buffered saline 0.85% (placebo), Ttm 2 - phytogenic received additives in the feed at a dosage of 0.10 kg/ton feed of the initial age until 35 days (Contr. FA); Ttm 3 - group inoculated orally with 0.5 mL of buffered saline 0.85%, containing approximately 5.0X105 CFU/0.5mL Salmonella enterica serovars Enteritidis (Contr. positive SE); Ttm 4 - group inoculated orally with 0,5 mL of buffered saline 0.85%, containing approximately 5.0X105 CFU/0.5mL of SE and received as antimicrobial growth promoter (AGP) bacitracin methylene disalicylate at a dosage of 55 ppm in the feed until 35 days of age (SE + AGP); Ttm 5 - group inoculated orally with 0.5 mL of buffered saline 0.85%, containing approximately 5.0X105 CFU/0.5 mL SE received phytogenic additives in the feed at a dosage of 0.10 kg/ton of feed of 1 to 35 days old (SE + FA). Performance was evaluated and six birds for treatment were weighed, sacrificed and the pH of the gastrointestinal tract was measured. Fragments were collected duodenum and jejunum to histomorphometric analysis, morphometric lymphocyte count. There was significant difference in the period 1-35 of the experiment the average weight and weight gain of groups without microbial challenge, and feed conversion in the group feed with phytogenic. We observed greater higher villus height to 14 days in the duodenum and greater villus:crypt to the group that received phytogenic The pH was influenced by the AGP in the colon and caecum. There was no significant effect of treatment on biometry of organs and Salmonella groups. There was lymphoid depletion in spleen, bursa and caecal tonsils was variable, with a predominance of mild and moderate depletion. It is concluded that the additives phytogenic control the effects of SE in broilers as expressed in the performance, especially in the feed conversion, and histomorphometric of the intestine, although it has not prevented the migration of the SE for the lymphoid organs, as well as not stimulate the proliferation of lymphoid cells in broilers. / No presente estudo, foram utilizados 300 pintos com um dia de idade, machos, linhagem Cobb, com o objetivo de avaliar os efeitos dos aditivos fitogênicos sobre desempenho, a integridade intestinal e o sistema imunológico de frangos de corte inoculados experimentalmente com Salmonella enterica sorovar Enteritidis (SE). As aves foram divididas em cinco tratamentos com seis repetições cada. Tratamento (Ttm) 1 - grupo inoculado por via oral, com 0,1 mL de solução salina tamponada e esterilizada a 0,85% (Placebo); Ttm 2 - recebeu os aditivos fitogênicos na ração na dosagem de 0,10 kg/ tonelada de ração da fase inicial aos 35 dias de idade (Contr. AF); Ttm 3 - grupo inoculado via oral, com 0,5 mL de solução salina tamponada a 0,85%, contendo aproximadamente 5,0 X 105 UFC/0,5 mL de Salmonella enterica sorovar Enteritidis (Contr. positivo SE); Ttm - 4 - grupo inoculado por via oral, com 0,5 mL de solução salina tamponada a 0,85%, contendo aproximadamente 5,0 X 105 UFC/0,5 mL de SE e que recebeu como antimicrobiano promotor de crescimento (APC) a bacitracina metil dissilicato na dosagem de 55 ppm na ração até os 35 dias de idade (SE + APC); Ttm 5 - grupo inoculado por via oral, com 0,5 mL de solução salina tamponada a 0,85%, contendo aproximadamente 5,0 X 105 UFC/0,5 mL de SE que recebeu os aditivos fitogênicos na ração na dosagem de 0,10 kg/ tonelada de ração do 1º aos 35 dias de idade (SE + AF). Foram realizadas análises de desempenho e seis aves por tratamento foram pesadas, sacrificadas e o pH do trato gastrintestinal foi aferido . Coletou-se fragmentos de duodeno e jejuno para análises histomorfométricas, morfometrias e contagem de linfócitos. Observou-se diferença significativa, durante o período de 1-35 final do experimento no peso médio e no ganho de peso dos grupos sem desafio microbiano, além de melhor conversão alimentar no grupo alimentado com aditivos fitogênicos. Observou-se maior altura dos vilos aos 14 dias no duodeno e maior relação vilo:cripta para o grupo que recebeu fitogênicos O pH foi influenciado pelo APC no cólon e ceco. Não houve efeito significativo dos tratamentos sobre a biometria dos órgãos e Salmonella nos grupos. Observou-se a depleção linfóide nos baços, bursas e tonsilas cecais foi variável, com predominância de depleção discreta e moderada. Conclui-se que os aditivos fitogênicos controlam os efeitos da SE em frangos de corte como expresso nos dados de desempenho, especialmente na conversão alimentar, e dados histomorfométricos do intestino, embora não tenha impedido a migração da SE para os órgãos linfóides, bem como não estimulam a proliferação de células linfóide nos frangos de corte.