Made available in DSpace on 2016-04-04T12:45:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 pricilla_oliveira_ioc_dout_2007.pdf: 1378604 bytes, checksum: f0dbf6910f9fd7228967184a959a3bd6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / expansão e a urbanização da leishmaniose visceral (LV) em Mato Grosso do Sul tornaram a doença um problema de saúde pública no Estado. Para conhecer o comportamento clínico e epidemiológico da LV em indivíduos infectados pelo HIV, foi estudada uma série de 23 casos atendidos em dois hospitais da capital, Campo Grande, região Centro-Oeste do Brasil, de janeiro de 2000 a dezembro de 2006. Foram incluídos os pacientes com resultado sorológico positivo para o HIV documentado no prontuário e cultura positiva para Leishmania sp. em aspirado de medula óssea. Oitenta e sete por cento dos pacientes eram do sexo masculino, com mediana de idade de 37 anos (variando de 21 a 56 anos) Todos os pacientes foram procedentes de Mato Grosso do Sul. 34,8% dos pacientes apresentavam o uso de drogas injetáveis como categoria de exposição para o HIV. A maioria dos pacientes apresentava imunodeficiência avançada, com 80% dos pacientes com contagem de linfócitos T CD4+ inferior a 200 células/mm3 (mediana - 44,5 células/mm3) durante o primeiro episódio de LV. Apesar deste fato, ambas as doenças foram diagnosticadas simultaneamente em 43% dos pacientes. Todos os pacientes infectados pelo HIV com LV apresentaram febre e 78% hepatoesplenomegalia. Os pacientes apresentaram graus variados de diminuição das células sangüíneas e de anormalidades bioquímicas A pesquisa direta de Leishmania sp. em aspirado de medula óssea demonstrou alta positividade (87%) nos pacientes estudados. Cinco pacientes foram tratados exclusivamente com antimoniato de meglumina, cinco pacientes exclusivamente com desoxicolato de Anfotericina B e doze pacientes foram tratados com ambas as terapias, por reação adversa ou falha ao antimoniato de meglumina. Uma a duas recidivas por paciente foram observadas em 56,7% dos casos. Somente um paciente foi a óbito em conseqüência da LV / The outspread and urbanization of visceral leishma niasis in Mato Grosso do Sul becoming the disease a public health problem in the state. To know the clinical and epidemiological characteristics of visceral leishmaniasis in HIV patients, a series of 23 patients attended in Campo Grande, center west region of Brazil, from 2000 to 2006, was studied. We selected the patients with HIV and bone marrow culture positive for leishmaniasis The medi an age of patients was 37 years (range 21*56), 87% were male, All the patients live d in Mato Grosso do Sul, 34.8 percent of patients had intravenous drug use as the ir HIV transmission category. The majority of patients had advanced HIV disease, 80 p ercent had CD4+T cells count less than 200 cells/mm 3 and a median of 44.5 cells/mm3 during the first ep isode of visceral leishmaniasis. Despite of this fact, both diseases were diagnosed at the same time in 43 percent of the patients. All HIV in fected patients with visceral leishmaniasis presented fever, 78 percent presented enlargement of the liver and spleen. The patients presented varying degrees of b lood cytopenias and biochemical abnormalities. Diagnosis was also achieved in 87% o f the patients with the detection of Leishmania amastigotes in Giemsa*stained smears from aspirate s of bone marrow Five patients were treated only with meglumine anti moniate, four patients were treated with only amphotericin B and twelve patient s were treated with both therapies. One or two relapses were seen in 56.7 pe rcent of patients. Only one patient died due to leishmaniosis

Made available in DSpace on 2016-05-11T13:01:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 monica_barragan_ioc_dout_2016.pdf: 13009899 bytes, checksum: abc5f4810f4467645ebd92d9f74a39e2 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A desnutrição proteica é considerada um fator de risco primário para o desenvolvimento da leishmaniose visceral (LV), contudo, as bases imunológicas desta associação são majoritariamente desconhecidas. Este trabalho pretendeu determinar os efeitos da desnutrição proteica no timo e baço de camundongos BALB/c infectados com L. infantum. Os animais foram submetidos à dieta controle (CP, 14% em proteína) ou baixa em proteína (LP, 4% em proteína). Após sete dias de dieta, cada grupo foi dividido em dois e cada um foi infectado com L. infantum (CPi, e LPi). As dietas foram mantidas após a infecção e os animais foram eutanasiados 14 dias pós-infecção. Os animais LPi mostraram uma desnutrição moderada e uma diminuição significativa no peso do timo e baço, acompanhado de níveis séricos reduzidos de IGF1 e Leptina e de IGF1 hepático obedecendo aos padrões esperados em um quadro de desnutrição proteica. Além disso, animais LPi apresentaram uma carga parasitaria significativamente maior que animais CPi. A desnutrição e infecção induziram danos na arquitetura tímica, gerando alterações na distribuição de laminina e fibronectina, e redução na secreção de varias citocinas e quimiocinas no fluido intersticial tímico tais como: IL-12, CCL5, CXCL12, IGF1, CXCL9 e CXCL10, sugerindo que a entrada de progenitores ao timo e sua maturação intratímica e migração pode estar comprometida nestes animais A análise proteômica deste fluido permitiu gerar um perfil de proteínas secretadas tímicas e revelou a importância de proteínas exossomais na fisiologia do timo, assim como a participação de vias metabólicas como a fosforilação oxidativa e \03B2-oxidação de ácidos graxos na proliferação e diferenciação dos timócitos LPi. O baço, por sua vez, apresentou desorganização tecidual e diminuição no número de folículos, assim como uma redução significativa de moléculas pró-inflamatórias e de moléculas envolvidas na quimiotaxia no fluido intersticial esplênico de animais LPi (IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-12, IGF1, CCL5, CXCL12, CXCL9 e CXCL10). Esta diminuição se correlaciona positivamente com a carga parasitaria esplênica incrementada, e pode ser uma causa da mesma. A análise proteômica do fluido intersticial esplênico revelou um aumento na abundância de proteínas relacionadas com estresse oxidativo sugerindo um desequilibro no estado oxidante/anti-oxidante em animais LPi. Observou-se também uma diminuição na abundância de proteínas envolvidas na via das pentoses fosfato e na síntese de purinas indicando potenciais defeitos na proliferação de esplenócitos. A identificação de proteínas envolvidas na resposta pró-inflamatória e quimiotaxia, cuja abundância estava diminuída, reforça os resultados moleculares relatados no grupo LPi. Em síntese, identificaram-se novos elementos na patogênese da LV, tanto no timo quanto no baço, que contribuem ao entendimento do aumento da susceptibilidade a desenvolver LV quando há uma condição desnutrição pré-existente / Protein malnutrition is considered a primary risk factor for the development of visceral leishmaniasis (VL); however, the immunological bases of this association are mainly unknown. This thesis aims to determine the effects of protein malnutrition in the thymus and spleen of BALB/c mice infected with L. infantum. The animals were fed with control (CP, 14% protein) or low-protein (LP, 4% protein) diet. After seven days of diet, each group was divided in two and one of them was infected with L. infantum (CPi, and LPi). The diets were maintained after infection and animals were euthanized after 14 post-infection. LPi animals showed a moderate malnutrition and a significant decrease in thymus and spleen weight. This was accompanied by a reduced serum levels of IGF1 and Leptin, and hepatic IGF1, showing the expected patterns of protein malnutrition. In addition, malnutrition induced a significant increase in the splenic parasite load of infected animals. Malnutrition and infection induced damage to the thymic architecture, causing changes in the distribution of laminin and fibronectin, and a reduction in the secretion of various cytokines and chemokines such as IL-12, CCL5, CXCL12, IGF1, CXCL9 and CXCL10 into the thymic interstitial fluid, suggesting that the entrance of progenitors into the thymus and intrathymic maturation and migration can be compromised in these animals. Quantitative proteomic analysis of this fluid allowed the identification thymic secreted proteins and revealed the importance of exosomal proteins in the thymus physiology. Proteomics also revealed that metabolic pathways such as oxidative phosphorylation and β-oxidation of fatty acids are potentially involved in the proliferation and differentiation of LPi thymocytes. Malnutrition also induced a drastic disorganization of splenic architecture including a severe reduction in the number of follicles, as well as a significant decrease of pro-inflammatory and chemotactic molecules in the splenic interstitial fluid of LPi animals (IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-12, IGF1, CCL5, CXCL12, CXCL10 and CXCL9), which is related to the increased splenic parasitic load. Proteomic analysis of splenic interstitial fluid revealed increased abundance of proteins related to oxidative stress suggesting an imbalance in the oxidant/anti-oxidant state in LPi animals. On other hand, proteins with decreased abundance were mainly involved in the pentose phosphate pathway and purine synthesis suggesting potential defects on splenocytes proliferation. Also, a decreased abundance of proteins associated with proinflammatory response and chemotaxis was observed in the splenic interstitial fluid, supporting the molecular data obtained in the LPi group. In summary, we identified new elements in the pathogenesis of VL both in the thymus as the spleen that contribute to the understanding of the increased susceptibility to develop VL when a malnutrition condition pre-exists. / 2100-03-04

Submitted by MARIA LUANA ALVES null (marialuana.alves@yahoo.com) on 2016-05-03T01:22:40Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao prontissima.pdf: 2895955 bytes, checksum: be473eaface6279971e2b88213feefe9 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-05-04T20:03:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alves_ml_me_ilha.pdf: 2895955 bytes, checksum: be473eaface6279971e2b88213feefe9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-04T20:03:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alves_ml_me_ilha.pdf: 2895955 bytes, checksum: be473eaface6279971e2b88213feefe9 (MD5) Previous issue date: 2016-03-03 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose visceral (LV), doença causada pelo protozoário Leishmania infantum e transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis, é considerada um problema de saúde pública no Brasil. O objetivo deste trabalho foi realizar um estudo epidemiológico sobre a ocorrência da LV em cães e gatos e de flebotomíneos em dois abrigos de animais, durante o período de um ano, no município de Ilha Solteira, SP. Amostras de material biológico foram coletadas de 192 cães e de 197 gatos, para realização de exames sorológicos por meio do ensaio imunoenzimático indireto (ELISA), da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para ambas espécies animais e da reação intradérmica de Montenegro para cães. Dos cães examinados, 17,2% (33/192) estavam sorologicamente positivos para LV pelo método ELISA, 19,8% (38/192) pela RIFI e 45,4% (15/33) pela reação intradérmica. Para cães, a concordância entre as técnicas sorológicas foi classificada de razoável a boa, mas quando comparadas à reação de Montenegro foi considerada ruim. No inquérito felino das 197 amostras, a soroprevalência foi de 32,4% (64/197) e 31,9% (63/197) no ELISA e RIFI, respectivamente. Embora a maioria dos cães e dos gatos entregue nos abrigos já estivesse infectada, seis cães e cinco gatos infectaram-se no interior desses abrigos, após algum tempo de permanência nesses recintos. Um total de 131 flebotomíneos foram capturados por meio das armadilhas luminosas, colocadas no interior dos dois abrigos durante o período de dois anos. Os fatores de riscos associados à LV foram determinados estatisticamente pela análise univariada, com valor significativo (p ≤ 0,05), onde o porte pequeno dos cães, o uso de coleira de deltametrina e o diagnóstico precoce foram variáveis determinantes que influenciaram a positividade dos animais, ou seja, as duas últimas variáveis determinaram significativamente na diminuição de casos positivos da doença nos abrigos. Concluiu-se que os animais desses abrigos estavam vulneráveis a essa parasitose por se tratarem de locais com a presença de flebotomíneos vetores e de animais positivos para LV, oferecendo risco para a disseminação da doença no município. / Visceral leishmaniasis (VL), a disease caused by Leishmania infantum and transmitted by the sand fly Lutzomyia longipalpis, is considered a public health problem in Brazil. The study aimed to carry out an epidemiological study on the occurrence of VL in dogs and cats, and sand flies during the period of one year in two animal shelters from Ilha Solteira, SP. A total of 197 and 192 biological material samples were collected, respectively from cats and dogs for serological survey by an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and an indirect fluorescent antibody test (IFAT) for both species of animals, and the intradermal reaction of Montenegro (only for dogs). During the study with dogs, 17,2% (33/192) were serologically positive for LV by ELISA, 19,8% (38/192) by IFAT and 45,4% (15/33) by the intradermal method. The correlation analysis between the serological techniques was ranged from reasonable to good for dogs, but was bad when compared to the Montenegro reaction. The feline seroprevalence was 32,4% (64/197) and 31,9% (63/197) for ELISA and IFAT, respectively. Although the most of dogs and cats in shelters were infected, six dogs and five cats infected inside the shelters. A total of 131 sand flies were captured by the light traps in both shelters, during two years. The risk factors, statistically determined by univariate analysis (p ≤ 0.05), demonstrated that the small size of the dogs, the use of deltamethrin collar and the precocious diagnosis, significantly influenced the animals positivity for VL. It was concluded that these animal shelters were vulnerable to this parasitic infection because of the presence of sand flies and positive animals for LV. / FAPESP: 2014/12609-2

Submitted by MAYARA LÚCIA DEL CISTIA null (mayara_ldc@hotmail.com) on 2016-06-22T17:02:08Z No. of bitstreams: 1 DissertaçãoMestrado2016_MAYARA_LUCIA_DEL_CISTIA.pdf: 6292986 bytes, checksum: 65cf54ead8c847cc5c6ad551395790c9 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-06-23T19:19:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 delcistia_ml_me_arafcf.pdf: 6292986 bytes, checksum: 65cf54ead8c847cc5c6ad551395790c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-23T19:19:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 delcistia_ml_me_arafcf.pdf: 6292986 bytes, checksum: 65cf54ead8c847cc5c6ad551395790c9 (MD5) Previous issue date: 2016-05-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As leishmanioses são um grupo de doenças causadas pelo gênero Leishmania e colocam em risco 350 milhões de pessoas no mundo. Após o sequenciamento do genoma de algumas espécies de Leishmania spp., estudos moleculares de suas formas celulares (amastigotas e promastigotas) trouxeram informações importantes sobre sua biologia e potencial aplicação no aperfeiçoamento ou desenvolvimento de técnicas diagnósticas e terapêuticas. Nesse contexto, este projeto visou avaliar o gene LinJ.36.419 de Leishmania infantum (syn. Leishmania chagasi) e seu produto quanto a potencial aplicação no dsenvolvimento de novas abordagens diagnósticas. Ensaios de PCR quantitativa mostraram que a expressão deste gene é maior em formas amastigotas, estágio responsável pela manifestação da doença, podendo corresponder a um potencial marcador diagnóstico. Um fragmento de 255 aminoácidos da proteína Lc36 foi caracterizado quanto ao seu potencial antigênico utilizando ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados mostraram especificidade de 74% e sensibilidade de 78% (99% de confiança), com acurácia de 76%, em uma população escolhida randomicamente. Análises adicionais mostraram reação cruzada pouco significativa para soro de cães infectados com Leptospira interrogans e Toxoplasma gondii, e revelaram reação cruzada contra soro de cães infectados por Babesia canis e Ehrlichia canis, todos organismos infecciosos comuns em cães. Análises de bioinformática mostraram que a proteína Lc36 possui um domínio denominado DNA polimerase sigma (COG5260) comum a vários organismos, associado a atividades de replicação, recombinação e reparo de ácidos nucléicos, o qual pode ser responsável pelas reações cruzadas observadas. Dessa forma, outro fragmento (297 aminoácidos) da proteína Lc36, sem a região de domínio conservado, foi expresso para nova caracterização do potencial antigênico com o objetivo de melhorar a especificidade do teste em estudo para aplicação em diagnóstico sorológico de leishmaniose visceral canina. Adicionalmente, bons resultados foram obtidos com ensaios para avaliar a potencial aplicação do gene Lc36 em diagnóstico molecular de leishmaniose visceral por meio do par de oligonucleotídeos RT36 específicos para L.infantum. Os ensaios mostraram que a reação foi capaz de detectar cerca de 5 células do parasita, revelando elevada sensibilidade do teste. Dessa forma, ambos os testes avaliados neste trabalho se mostraram promissores e serão explorados em projetos futuros. / Leishmaniasis are diseases caused by Leishmania genus protozoan and endanger 350 million people worldwide. After genomic sequencing of Leishmania spp., molecular studies of their cycle forms (amastigotes and promastigotes) brought important information, which can contribute to the development of new diagnostic approaches and treatments. In this study we evaluated the potencial application of the Leishmania infantum (syn. Leishmania chagasi) gene Lc.36.4190 and its encoded protein for development of new diagnostic approaches. Quantitative PCR assays showed that the gene is more expressed in intracellular amastigotes, the stage related to the clinical manifestation of these diseases, thus presenting potential to be a diagnostical target. We evaluated antigenic features of a 255 aminoacids fragment of the Lc36 protein using immunoenzimatic assay (ELISA). The results showed specificity of 74% and sensibility of 78% (99% of confidence) and accuracy of 76%, in a randomically chosen population. Additional analysis showed low cross-reaction against Leptospira interrogans and Toxoplasma gondii, and showed cross-reaction against Babesia canis and Ehrlichia canis, all infective organisms common in dogs. Bioinformatics analysis showed that the protein Lc36 contains one DNA polymerase sigma domain (COG5260) found on several organisms, being related to nucleic acid replication, recombination and repair, and might be related to the crossreactions observed. Thus, another fragment (297 aminoacids) of the Lc36 protein, without the conserved domain region, was expressed for a new antigenic characterization to improve the specificity of the canine visceral leishmaniasis serological test. Moreover, good results were obtained on experiments performed to evaluate the potential application of the Lc36 gene on molecular diagnostics using a L. infantum specific pair of primers, RT36. The assays detected approximately 5 parasites, which displays a good sensibility result. Therefore, both serological and molecular tests evaluated in this study are promising and will be explored in future studies.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GloriaRGM_ TESE.pdf: 1372694 bytes, checksum: 5d2a22de8c374313099583a70edbaca6 (MD5) Previous issue date: 2013-05-10 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Leishmaniose visceral (LV) ? uma doen?a, potencialmente, fatal cujo agente etiol?gico nas Am?ricas ? a esp?cie Leishmania infantum. No Brasil, a LV era uma doen?a predominantemente rural at? os anos 80, quando epidemias passaram a ocorrer nas grandes cidades, devido ? migra??o da popula??o para periferia dos centros urbanos, especialmente, na regi?o nordeste. A infec??o por leishmania pode evoluir com um amplo espectro cl?nico que ? dependente da resposta imune desenvolvida pelo hospedeiro. Notadamente, 80% a 90% da infec??o humana ? subcl?nica ou assintom?tica, mas os fatores que determinam a evolu??o para doen?a n?o s?o completamente esclarecidos. O controle da infec??o por leishmania ? dependente da imunidade celular mediada por IFN-&#61543;. Est? demonstrado que a leishmania suprime a resposta microbicida do macr?fago. Estudos pr?vios sugerem que o perfil gen?tico do hospedeiro contribui para a evolu??o cl?nica ap?s a infec??o. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da Interleucina 10 na patog?nese da LV e avaliar a express?o de genes envolvidos na resposta imune, frente ? infec??o por L. infantum. Foram avaliados pessoas com LV, com infec??o assintom?tica por leishmania e doadores de sangue oriundos da ?rea end?mica para LV. Os fen?tipos foram determinados por avalia??o cl?nica, determina??o de presen?a de anticorpo antileishmania (Ac) e resposta celular (DTH). A an?lise da express?o g?nica foi realizada com amostras de RNA isoladas de pessoas na fase aguda da doen?a e tr?s meses ap?s o tratamento, utilizando c?lulas mononucleadas do sangue perif?rico, ap?s estimula??o com ant?geno sol?vel de leishmania (SLA). A m?dia IL-10 s?rico nos diferentes grupos foi: LV 91,73pg/mL ? 63,62 (n=229), DTH-AC+ 20,15pg/mL ? 25,67 (n=40), DTH+AC- 11,32pg/mL ? 10 (n=72), DTH+AC+ 9,88pg/mL ? 5,59 (n=32), DTHAC- 3,01pg/mL ? 6,59 (n=145), (p<0,01). Nas pessoas assintom?ticas, com cultura de sangue positiva para leishmania e anticorpos antileishmania positiva, a m?dia de IL-10 foi 2,18pg/mL (n=60). As pessoas com LV na fase inicial do tratamento apresentaram n?veis mais elevados de IL-10, quando comparados com os demais fen?tipos (P< 0,0001). Pessoas com o fen?tipo DTH-AC+, apresentaram n?veis de IL-10 maiores que os demais grupos com infec??o assintom?tica ou potencialmente expostos a Leishmania (DTH+AC-, DTH+AC+ e DTH-AC-). A m?dia de IL-10 entre homens e mulheres com LV foi de 103,77pg/mL ? 3,89 e 64,06pg/mL ? 4,78 mostrando uma diferen?a significativa (p<0,0001). No grupo de doadores n?o houve diferen?a significativa entre o sexo masculino 1,64pg/mL ? 6,48 e feminino 0,89pg/mL ? 11,33. Contudo os n?veis de IL-10 foram significativamente superiores na LV (p<0,0001) apontando o papel relevante desta citocina na patog?nese da doen?a. Foram identificados 362 genes com express?o diferencial entre a fase sintom?tica e p?s-recupera??o. Entre os genes expressos na fase aguda foram identificados genes relacionados ao metabolismo lip?dico, APOC1 (p<0,055 fold change -1,68), ao ciclo da ur?ia ARG1 (p<0,05 fold change -2,89) e um gene envolvido no processo biossint?tico da glicina DHFR (p<0,01 fold change -2,15). Genes codificadores de prote?nas relacionadas ? infec??o aguda, como, quimiocinas CXCL5 (p 0,032 fold change 1,92), CXCL10 (p<0,051 fold change 2,63), CCL22 (p 0,046 fold change 2,00) foram super expressos ap?s a recupera??o (tr?s meses ap?s tratamento). A compara??o da express?o g?nica evidenciou, entre outros dados, supress?o de genes de quimiocinas (CXCL5 e CXCL10), indu??o dos genes da bioss?ntese de lip?deos (APOC1) e da Arginase1. Os dados indicam vias, at? ent?o n?o relatadas, possivelmente envolvidas na patog?nese da infec??o por Leishmania infantum. A an?lise de microchips de DNA ? uma importante ferramenta para estudar a express?o g?nica global; ao mesmo tempo a IL-10 ? um marcador de doen?as e sua inibi??o ou via relacionada pode ser um potencial alvo terap?utico

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-04-26T19:16:12Z No. of bitstreams: 1 DiegoGomesTeixeira_DISSERT.pdf: 3901094 bytes, checksum: 8c230a0e1503d41ddbfe3f8758b2dbce (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-04-28T21:48:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DiegoGomesTeixeira_DISSERT.pdf: 3901094 bytes, checksum: 8c230a0e1503d41ddbfe3f8758b2dbce (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T21:48:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DiegoGomesTeixeira_DISSERT.pdf: 3901094 bytes, checksum: 8c230a0e1503d41ddbfe3f8758b2dbce (MD5) Previous issue date: 2015-07-02 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A Leishmaniose ? uma doen?a infecciosa que at? o momento n?o possui uma vacina capaz de eliminar o parasita do hospedeiro, sendo tratada apenas por meio de drogas pouco eficientes e de alto custo. Essa doen?a normalmente se apresenta formando ulcera??es na pele, mucosas e v?sceras. Os pa?ses mais atingidos por esse parasita encontram-se nas regi?es tropicais do planeta, e afeta aproximadamente dois milh?es de pessoas a cada ano. Acredita-se que no continente americano a esp?cie Leishmania infantum tenha sido introduzida pelos imigrantes durante o processo de coloniza??o dos pa?ses da Am?rica Central e do Sul. Nas ?ltimas d?cadas, estudos v?m mostrando que a expans?o urbana associada com o fluxo de pessoas para regi?es muito povoadas est?o contribuindo para uma expans?o no n?mero de reservat?rios para o parasita, influenciando uma maior varia??o de suas caracter?sticas g?nicas. Tais varia??es gen?ticas v?m sendo associadas ao perfil sintomatol?gico dos parasitas em seus hospedeiros, principalmente humanos. No estado do Rio Grande do Norte, Brasil, foram isolados e sequenciados o genoma de 20 cepas de L. infantum as quais apresentaram diferentes padr?es sintomatol?gicos (sintom?tico e assintom?tico) e com diferentes per?odos de isolamento, 5 na d?cada de 1990 e 15 nos anos recentes. Apesar dos diferentes padr?es cl?nicos o genoma dos isolados apresentaram alto grau de identidade entre si, at? mesmo os isolados da d?cada de 90 quando comparados com os recentes. Entretanto, as poucas varia??es foram suficientes para a identifica??o de padr?es de agrupamentos dos isolados por meio de an?lises de componentes principais, mostrando que os isolados dos anos recentes se encontram mais homog?neos na popula??o. An?lises de reconstru??o filogen?tica utilizando m?todos Bayesianos foram realizadas e observou-se a manuten??o nos padr?es de agrupamento j? vistos nos resultados anteriores, al?m disso foi gerado um expanded bayesian skyline plot por onde foi poss?vel constatar o crescimento da popula??o gen?mica de L. infantum quando comparado com a d?cada de 1990. Foram observadas altera??es no n?mero de c?pias cromoss?micas em todos os isolados, entretanto apenas o cromossomo 31 se apresentou como exclusivamente triss?mico. O presente trabalho apresenta ind?cios de padr?es nos genomas de isolados de L. infantum relacionando-os ?s caracter?sticas cl?nicas dos hospedeiros. / Leishmaniasis is a complex of diseases with no preventable or therapeutic vaccine available. There is only a small set of drugs for treatment of these diseases, which evolve with distinct clinical outcomes from skin ulcers, to mucosal involvement or visceralization. The type of clinical presentation usually is associated with the infecting species of Leishmania. Leishmania infantum is the visceralizing species, causing visceral leishmaniasis, in Latin America, Europe and northern Africa and was introduced in the Americas by Europeans during colonization. Visceral leishmaniasis used to be a sporadic disease found in rural areas Northeast of Brazil, however with urbanization, outbreaks have been reported in periurban areas of major cities. L. infantum infection can evolve with control of the parasite without apparent clinical symptoms, with only a minority developing symptomatic disease. The reasons why one evolve with selfresolution and others develop full blown disease is not entirely understood, but seems to include host genetic susceptibility, comorbidity, sand fly exposure and potentially genetic variation in the infecting Leishmania species. Our ongoing study, have shown structural genome variations in several clinical Leishmania isolates obtained from people infected in the State of Rio Grande do Norte. Despite the different clinical patterns, the isolates? genomes showed a high identity degree to each other, even the ones isolated from the 90 compared with the latest. However, the few found changes were sufficient for the isolation of the distinct groups by a principal component analysis, showing that the isolates from more recent years are more homogeneous among the population. Phylogenetic analyzes using Bayesian reconstruction methods have been made and supported the grouping patterns already seen in the foregoing results. Moreover by an Expanded Bayesian Skyline Plot it was possible to observe the growth of the genomic population of L. infantum compared with the 1990s. Changes were observed in the number of chromosome copies in all strains, but only chromosome 31 is presented as exclusively trisomic. This work presents evidence on patterns of L. infantum isolated genomes relating them to clinical characteristics of their hosts.

Células produtoras de IFN-? e IL-17A são envolvidas na proteção contra infecção por Leishmania infantum (L. infantum). Ainda não está claro como o sistema imune coordena, ou o parasito manipula, o balanço entre Th1 e Th17 durante a leishmaniose visceral (LV). Utilizando RNAseq, PCR array e citometria de fluxo, nós demonstramos que, enquanto o padrão Th1 é altamente induzido, o perfil Th17 é inibido durante a infecção por L. infantum, e que as células B compõem uma fonte importante de IL-17A nesse modelo. Usando animais Nod2-/- e Rip2-/- nós caracterizamos essa via como um regulador negativo de células Th17 na LV. Por outro lado, a potente indução de Th1 foi dependente da sinalização via NOD2-RIP2 em células dendríticas CD8??+XCR1+, o que foi crucial para produção de IL-12 através da fosforilação de p38 e JNK. Como consequência, camundongos Nod2-/- e Rip2-/- tiveram defeito na resposta Th1, aumento de Th17, e maiores cargas parasitárias comparado com camundongos WT. Juntos, os dados mostram que a via de NOD2-RIP2 desempenha um papel importante na modulação da resposta imune adaptativa e promove proteção contra LV causada por L. infantum / IFN-? and IL-17A-producing cells are described to be related to protection against Leishmania infantum (L. infantum) infection. How the immune system coordinates, or the parasite manipulates, the balance between Th1 and Th17 during visceral leishmaniasis (VL) is still unknown. We showed here that Th17 is suppressed during L. infantum infection and B cells are an important source of IL-17A in this model. By using Nod2-/- and Rip2-/- mice we characterized this pathway as a negative regulator for Th17 cells in VL. On the other hand, the high level of Th1 induction was dependent on the NOD2-RIP2 signaling in CD8?+XCR1+ dendritic cells (DCs), which was crucial for IL-12 production through the phosphorylation of p38 and JNK. As a consequence, Nod2-/- and Rip2-/- mice showed a Th1 defective response, more Th17, and higher parasite loads compared to WT mice. Together, the data demonstrate that NOD2-RIP2 signaling pathway plays a role in shaping adaptive immunity and promotes protection against VL caused by L. infantum

Submitted by Andre Moraes Queiroz (andre.moraesqueiroz@ufpe.br) on 2015-04-14T14:48:21Z No. of bitstreams: 2 Dissertacão Lidiane da Silva.pdf: 1595979 bytes, checksum: 6e0559b19331a737f1c70c137c3d162a (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-14T14:48:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacão Lidiane da Silva.pdf: 1595979 bytes, checksum: 6e0559b19331a737f1c70c137c3d162a (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / FACEPE / A Leishmaniose Visceral Americana (LVA) é uma doença infecciosa grave altamente letal se não tratada. A taxa de infecção de cães pela Leishmania infantum é considerada como um parâmetro importante no monitoramento epidemiológico da LVA, visto que esta doença é considerada pela Organização Mundial de Saúde (OMS) como uma das seis maiores epidemias de origem parasitária do mundo. O presente estudo objetivou determinar a taxa de infecção de cães pela L. infantum no município de Serra Talhada - PE e avaliar a relação entre polimorfismos nos genes beta-defensina e lectina ligadora de manose (MBL) destes animais e a infecção pela L. infantum. Foram utilizadas amostras de sangue de cães errantes de Serra Talhada, que foram submetidas a extração de DNA e consequentemente PCR em tempo real. Utilizando os primers Linf 1B a qPCR detectou a presença de seis cães infectados de 86 avaliados (~7% de cães infectados). Nas sequencias avaliadas para o marcador de defensina foram observados nove sítios polimórficos, dos quais, nenhum apresentou associação significativa com a infecção por L. infantum, porém o haplótipo formado pela união desses SNPs apresentou uma forte associação com a L. infantum (p = 0,029 e OR = 37.36 (1.55 – 903.16)). Para MBL2 apenas um indel foi encontrado e não apresentou associação significativa com L. infantum, obtendo um valor de p<0,21, possivelmente por apresentar um baixo número de indivíduos infectados e polimorfismos nas sequencias obtidas.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Visceral Leishmaniasis (VL) is a disease of systemic infectious and the most severe clinical form is associated with an intense inflammatory response. Triggering Receptor Expressed on Myeloid Cells 1 (TREM-1) is a cell surface receptor constitutively expressed in neutrophils and monocytes and plays a key role in the innate immune response, being able to amplify and regulate the inflammatory response. Its activation and expression is synergistic to the activation of TLR 2 and 4, which culminates in the activation of microbicidal mechanisms. Its soluble serum form, sTREM-1, has been described in inflammatory diseases such as sepsis and rheumatoid arthritis, acting as TREM-1 pathway inhibitor. Since TREM-1 pathway is associated with neutrophils activation, cells that constitute the first host’s line of defense and a major source of TREM-1, the aim of the present study was to evaluate serum levels of sTREM-1 in patients with VL and investigate the effect of Leishmania infantum on the modulation of TREM-1 in neutrophils. Thereby, sera from patients with different clinical forms of VL were collected before and after treatment to measure serum levels of sTREM-1 by ELISA. In addition, neutrophils from healthy human donors were purified from peripheral blood and exposed to L. infantum at a rate of 1, 5 and 10 parasites per neutrophil to evaluate the release of sTREM-1 in the supernatant. Ultimately, the expression of surface TREM-1 in neutrophils exposed to L. infantum, as well as the gene expression of TREM-1, DAP12 and IL-8 by Real-time PCR was evaluated. Patients with severe VL presented elevated serum levels of sTREM-1 compared to serum levels of other clinical forms. Comparing the patients with severe VL with the other groups (classic VL D0, D30 and D180; DTH+; CTR), an AUC above 0.8 was observed with a value of p≤0.01 in all ROC curves. The best discriminating power of the ROC curve was between severe VL of classic VL D30 with a sensitivity of 93.75% and specificity of 87.50%. Serum levels of sTREM-1 were positively correlated with liver size and negatively correlated with the number of leukocytes from VL patients. In vitro experiments with neutrophils from healthy donors demonstrated that the release of sTREM-1 into the culture supernatant was associated with an increased parasite rate of L. infantum, and the time of exposure. In addition, flow cytometry has demonstrated that exposure by L. infantum reduces the frequency, MFI and iMFI of TREM-1 on the surface of infected neutrophils, and increases the gene expression of TREM-1, DAP12 and IL-8. In this work, it was described for the first time that TREM-1 is modulated by the presence of L. infantum, its soluble form being elevated in the severe form of VL and modulated in neutrophils. / A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença de infecção sistêmica e a forma clínica mais grave está associada a uma intensa resposta inflamatória. O Triggering Receptor Expressed on Myeloid Cells 1 (TREM-1) é um receptor de superfície celular constitutivamente expresso em neutrófilos e monócitos e desempenha um papel fundamental na resposta imune inata, sendo capaz de amplificar e regular a resposta inflamatória. Sua ativação e expressão é sinérgica a ativação de TLR 2 e 4, que culmina na ativação de mecanismos microbicidas. Sua forma sérica solúvel, sTREM- 1, tem sido descrita em doenças inflamatórias como sepse e artrite reumatoide e atua como um inibidor da via TREM-1. Uma vez que a via TREM-1 está associada a ativação de neutrófilos, células que constituem a primeira linha de defesa e uma fonte principal de TREM-1, o objetivo do presente trabalho foi avaliar os níveis séricos de sTREM-1 nos pacientes com leishmaniose visceral e investigar o efeito da Leishmania infantum na modulação de TREM-1 em neutrófilos. Para isso, soros de pacientes com diferentes formas clínicas da LV foram coletados antes e após o tratamento para mensurar os níveis séricos de sTREM-1 por ELISA. Além disso, neutrófilos de doadores humanos sadios foram purificados a partir de sangue periférico e expostos à L. infantum com uma taxa de 1, 5 e 10 parasitos por neutrófilo, para avaliar a liberação do sTREM-1 no sobrenadante. Por fim, foi avaliada a expressão de TREM-1 de superfície em neutrófilos expostos à L. infantum, bem como a expressão gênica de TREM-1, DAP12 e IL-8 por PCR em Tempo Real. Pacientes com a forma grave da LV apresentaram níveis séricos elevados de sTREM-1 comparados aos níveis séricos das outras formas clínicas. Comparando os pacientes com LV grave com os demais grupos (LV clássica D0, D30 e D180; DTH+; CTR) foi observada uma AUC acima de 0,8 com valor de p≤0,01 em todas as curvas ROC. O melhor poder de discriminação da curva ROC foi entre LV grave de LV clássica D30 com uma sensibilidade de 93,75% e especificidade de 87,50%. Os níveis séricos de sTREM-1 foram correlacionados positivamente com o tamanho do fígado e negativamente com o número de leucócitos dos pacientes com LV. Experimentos in vitro com neutrófilos de doadores saudáveis demonstraram que a liberação de sTREM-1 no sobrenadante da cultura estava associada à um aumento da taxa de parasitos de L. infantum, e ao tempo de exposição. Além disso, através da citometria de fluxo foi demonstrado que a exposição por L. infantum reduz a frequência, MFI e iMFI de TREM-1 na superfície de neutrófilos infectados, e aumenta a expressão gênica de TREM-1, DAP12 e IL-8. Nesse trabalho foi descrito, pela primeira vez, que o TREM-1 é modulado pela presença da L. infantum, sendo sua forma solúvel elevada na forma grave da LV e modulada em neutrófilos.

Le nombre de co-infections VIH-1/Leishmania ne cesse d’augmenter dans les zones d’endémicité. La leishmaniose viscérale est souvent causée par Leishmania infantum et se caractérise par le parasitisme incontrôlé des viscères. Dans la présente étude, nous avons exposé des cellules B provenant d’amygdales humaines aux amastigotes de Leishmania infantum et avons observé une augmentation de l’expression de plusieurs marqueurs d’activation ainsi qu’une augmentation dose-dépendante de la sécrétion de l’IL-10. Les milieux conditionnés extraits de cultures de cellules B exposées à Leishmania ont un effet inhibiteur sur l’activation des lymphocytes T CD4+ et sur la réplication du VIH-1 dans ces cellules. Ainsi, l’exposition des cellules B à Leishmania favorise leur activation et induit la sécrétion de facteurs solubles ayant des propriétés régulatrices qui modulent la réplication du VIH-1 dans les lymphocytes T CD4+. / The number of HIV-1/Leishmania co-infections is increasing in areas of endemicity. Visceral leishmaniasis is often caused by Leishmania infantum and is characterized by an uncontrolled parasitization of viscera. In this study, we exposed B cells from human tonsils to amastigotes of Leishmania infantum and observed an upregulation in the expression of several activation markers as well as a dose-dependent increase in the secretion of IL-10. Conditioned media from cultures of B cells exposed to Leishmania had an inhibitory effect on the activation of CD4+ T lymphocytes and on HIV-1 replication in these cells. Thus, the exposure of B cells to Leishmania promote their activation and induces the secretion of soluble factors with regulating properties that modulate replication of HIV-1 in CD4+ T cell.