Introdução: A infertilidade tem sido reconhecida como mais uma das patologias relacionadas à obesidade. O aumento da gordura corporal e a resistência à insulina (RI) são correlacionados inversamente com a testosterona sérica e afetam o pulso GnRH-LH/FSH, o que pode prejudicar as funções das células de Leydig e Sertoli, interferindo na liberação de hormônios sexuais, produção e maturação dos espermatozóides. A hiperleptinemia parece também influenciar a fertilidade do mesmo modo que a sua deficiência No entanto, a modulação da reprodução masculina pelo estado nutricional precisa ser melhor elucidada. Objetivo: Avaliar o estado nutricional e alterações metabólicas em indivíduos com subfertilidade atendidos no ambulatório de reprodução assistida de um hospital público. Métodos: Estudo caso-controle. Os pacientes foram selecionados através do setor de Reprodução Assistida do HCPA. Foram considerados casos aqueles com alterações no espermograma (OMS, 1999) e controles aqueles homens sem alterações no espermograma e/ou que já tenham filhos. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do HCPA e todos assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. Foram avaliados peso, altura, circunferência da cintura e quadril, e gordura corporal por dobras cutâneas seguindo protocolo de Jackson e Pollock (1978). Foram dosados: glicose, colesterol total, HDL-c, triglicerídeos (TG), hemoglobina glicada, leptina, hormônio folículo estimulante, hormônio luteinizante, prolactina, insulina, SHBG, estradiol, testosterona. Foram estimados: RI através do índice HOMA-IR e LDL-c pela fórmula de Friedewald. Resultados: Foram avaliados 68 homens (35 casos e 33 controles). Não houve diferenças no estado nutricional entre casos e controles, por parâmetros antropométricos e bioquímicos. A mediana do índice de massa corporal foi cerca de 26 kg/m2 para casos e controles. O perfil lipídico, glicêmico, insulínico e leptinemia não diferiram entre os grupos. Níveis mais elevados de FSH e estradiol foram detectados nos homens com sub-fertilidade. No entanto, os níveis de testosterona e SHBG foram semelhantes entre os grupos. Níveis aumentados de IMC, gordura corporal, circunferência de cintura e quadril, insulina, leptina e índice HOMA estão associados a níveis séricos mais baixos de testosterona, correlações estas que também podem ser observadas com a SHBG. Níveis séricos de testosterona e SHBG apresentaram correlação positiva com o HDL-col, enquanto que os níveis aumentados de TG se correlacionaram negativamente com os valores de SHBG. Apesar de não haver diferenças entre os valores de LH entre os grupos, surpreendentemente os níveis deste hormônio se correlacionaram negativamente com o IMC, níveis de insulina e índice HOMA apenas no grupo caso, evidenciando mais uma vez, a influência dos parâmetros antropométricos e metabólicos na reprodução masculina. Conclusões: Na população estudada, a presença de obesidade parece não ser uma característica da sub-fertilidade masculina. A leptinemia aumentada está associada à redução dos níveis séricos de testosterona e SHBG, independentemente da presença de obesidade. O aumento da adiposidade corporal e marcadores de RI estão fortemente associados a menores níveis séricos de hormônios sexuais como testosterona e LH, indispensáveis a uma espermatogênese adequada. Mais estudos são necessários para detectar alterações nutricionais e metabólicas nos homens brasileiros sub-férteis. / Introduction: Current evidence indicates that infertility is a disorder linked to obesity. Both the increased body adiposity and insulin resistance (IR) have been associated with lower serum concentrations of testosterone and the impairment of the Leydig and Sertoli cells functions by changing GnRH-LH/FSH pulsatility which modifies sex hormones releasing, production and maturation of sperm. The hiperleptinemia, also found in obese individuals seems to affect the fertility by the same way as its lack. However, the modulation of the male reproduction by the nutritional status needs more scientific evidence. Objective: To evaluate the nutritional status and metabolic alterations in subjects with sub-fertility who attended at the Assisted Reproduction Sector of a public hospital. Methods: Case-control study. Subjects: All the men who attended at the Assisted Reproduction Sector of the Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Cases: all the men with altered spermogram, according to WHO criteria (1999); controls: men who presented a normal spermogram and/or with children. The project was approved by the research ethics committee of the university hospital and an informed written consent was obtained from each man. Weight, height, waist and hip circumferences were evaluated. The body fat composition was obtained using seven skinfolds thickness according to Jackson and Pollock (1978). It was measured: glucose, total-cholesterol, HDL-cholesterol, triglycerides, glycated hemoglobin, leptin, follicle-stimulating hormone, luteinizing hormone, prolactin, insulin, sex hormone binding globulin, estradiol, testosterone. There were estimated: IR by HOMA-IR index and LDL-cholesterol using the Friedewald formula. Results: Sixty-eight men were analyzed (35 cases and 33 controls). Cases and controls were not different in relation to the nutritional status by anthropometric and biochemical parameters. The median for the body mass index (BMI) was 26 kg/m2 for both cases and controls. The lipid, glycemic, insulin and leptin profile did not differ between the two groups. Higher values for FSH and estradiol were detected in the men with sub-fertility. However, testosterone and SHBG values were similar for the two groups. Increased values for BMI, body fat, waist and hip circumferences, insulin, leptin and HOMA-IR are associated with lower testosterone and SHBG serum levels. These two hormones were positively correlated with HDL-col and SHBG correlated negatively with triglycerides. Despite the LH values not differ between cases and controls, the values correlated negatively with BMI, serum insulin and HOMA-IR exclusively for the men with sub-fertility, showing clear evidence for the influence of anthropometric and metabolic parameters in the male reproduction. Conclusions: In the studied population, obesity does not appear to be a characteristic of men with sub-fertility. The increased leptin is associated with decreased serum levels of testosterone and SHBG, regardless of the presence of obesity. Increased adiposity and markers of insulin resistance is strongly associated with lower serum levels of sex hormones such as testosterone and LH, which are essential to a proper spermatogenesis. More studies are needed to detect evidence of nutritional and metabolic changes in sub-fertile individuals in Brazilian men.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-26. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:45Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10806.pdf: 1743333 bytes, checksum: 379793d92e9d86096d10c579b33c757e (MD5) / A hormônio protéico produzido pelo gene-ob e denominado leptina, é um produto originário do tecido adiposo, circula pelo plasma e afeta o balanço energético interagindo em receptores presentes no hipotálamo. A leptina desempenha um papel importante na regulação de uma variedade de funções fisiológicas, incluindo controle de ingestão alimentar, temperatura corporal e manutenção do peso corporal. A ausência ou resistência a leptina pelo organismo causa obesidade mórbida, diabetes e hipogonadismo. A estrutura terciária da molécula da leptina revela a presença de quatro hélices, cujo padrão é típico das citocinas. Com o objetivo de identificar a região da molécula responsável pela expressão de sua atividade biológica foram sintetizados seis fragmentos peptídicos cujas estruturas foram escolhidas de acordo com a estrutura tridimensional da leptina. Em estudos anteriores do nosso grupo, dois peptídeos, AchLEP92- 115-NH2 (IV) e Ac-[Ser117]-hLEP116-140-NH2 (V), foram reconhecidos pelo receptor da leptina presentes em células HP-75, confirmando outros trabalhos da literatura que também apontavam que é nesta região da molécula que deve estar presente o epitopo funcional da leptina. Neste trabalho, uma nova série de fragmentos, cujas estruturas primárias estão contidas na região dos fragmentos IV e V, foram sintetizados e os efeitos dos mesmos na variação do peso corporal e no consumo de alimento quando administrados no ventrículo cerebral de ratos normais foram avaliados. Os peptídeos foram sintetizados pelo método da fase sólida manual pela estratégia t-Boc. Os mesmos foram purificados por cromatografia liquida de alta eficiência e foram caracterizados por análise de aminoácidos e cromatografia liquida acoplada a um espectrômetro de massas. Estudos conformacionais dos peptídeos também foram realizados por Dicroísmo Circular com o objetivo de correlacionar a estrutura com a atividade biológica dos fragmentos. Dentre os compostos estudados, o melhor resultado foi obtido com o fragmento AchLEP110- 119-NH2 (VI) que se mostrou ser mais ativo que a própia leptina e foi equipotente com o [D-Leu4]-OB3, que até então era o fragmento mais ativo descrito na literatura. Embora haja a necessidade de refinamentos, esse tipo de abordagem pode oferecer uma interessante base para o desenvolvimento de compostos correlacionados com a leptina com potencial de aplicação em estudos de obesidade humana ou na medicina veterinária. / The protein hormone produced by the ob-gene and denominated leptin, a product originating from adipose tissue, circulates in the plasma and affects the energy balance by interacting with the hypothalamus. Leptin plays an important role in the regulation of a variety of physiological functions, including food intake, body temperature and body weight maintenance. Total absence or resistance to leptin causes morbid obesity, diabetes and hypogonadism. The tertiary structure of the leptin molecule reveals the existence of a fourhelix bundle that is characteristic of the short-helix cytokines. To identify regions of the leptin molecule responsible for its bioactivity, we have synthesized six peptides based on the protein three-dimensional structure. Our results indicated that the fragments AchLEP92- 115-NH2 (IV) and Ac-[Ser117]-hLEP116-140-NH2 (V) were recognized by leptin receptor present in hp-75 cells, in agreement with the obtained by other authors, validating that this region of the molecule contain the functional epitope of the leptin molecule. In the present study, a new series of peptides encompassing the region of fragments IV and V of leptin were synthesized, and their effects on body weight and food intake were assessed when administered into the lateral cerebroventricle of normal rats. Peptides were synthesized by the solid phase methodology, purified by RP-HPLC and characterized by LC/ESI-MS. We also performed a conformational study of the peptides by circular dichroism in order to correlate the biological activity and secondary structure of the leptin fragments. Out off the new series of compounds, the best results were obtained with the fragment Ac-hLEP110-119-NH2 (VI) which showed to be more active than leptin and equipotent to [D-Leu4]-OB3 the most active leptin fragment described in the literature so far. Although the peptide fragments design needs refinement, this kind of approach may offer the basis for the development of leptin-related compounds with potential application in human obesity or veterinary medicine. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Objetivo: Verificar a associação entre os níveis de leptina do leite materno maduro e os escores de dobras cutâneas aos três e seis meses de vida de crianças expostas a diferentes ambientes intrauterinos. Metodologia: Trata-se de um estudo observacional longitudinal, para o qual foram recrutados pares de mães e crianças residentes em Porto Alegre. Foram excluídas puérperas com teste positivo para HIV, doenças hipertensivas específicas da gravidez, hipertensão arterial sistêmica crônica ou gestacional, crianças gemelares, prematuras, com doenças congênitas ou necessidade de internação hospitalar. Os pares foram divididos, conforme a exposição ao ambiente intrauterino, em grupo Diabetes Mellitus (DM), Tabaco, Pequeno para Idade Gestacional (PIG) e Controle. As entrevistas foram realizadas um, três e seis meses após o parto, e foram coletados dados antropométricos da mãe e da criança, além de informações sobre a alimentação desta. Na entrevista de um mês de vida, foi coletada amostra de leite materno, analisada para quantificação da leptina. Quanto aos procedimentos estatísticos, foi considerado o nível de significância de 5%. Para comparação entre variáveis categóricas e contínuas, quando paramétricas, foi utilizado o teste ANOVA com post hoc de Tukey, e para variáveis não paramétricas, foi utilizado o teste de Kruskal-Wallis com post hoc de Dunn. Na comparação entre variáveis categóricas, foi utilizado o teste de qui-quadrado de Pearson ou Exato de Fisher. Ao analisar variáveis contínuas, foi aplicada a correlação de Spearman. Resultados: Foram analisados os dados de 127 pares mãe-criança, sendo 18 no grupo DM, 34 no grupo Tabaco, 16 no grupo PIG e 59 no grupo Controle. A quantidade de leptina no leite materno não diferiu entre os grupos (p = 0,59). Houve correlação significativa positiva entre a quantidade de leptina do leite e o Índice de Massa Corporal (IMC) materno, a dobra cutânea tricipital (DCT) e a dobre cutânea subescapular (DCSE) maternas (p < 0,001). Sem considerar o tipo de alimentação, não houve correlação entre a leptina e as variáveis antropométricas da criança (p > 0,05). Dentre as crianças amamentadas exclusivamente aos três meses de vida, a leptina do leite materno correlacionou-se negativamente com o escore Z da DCT aos três meses (r = -0,447; p = 0,032) e seis meses (r = -0,499; p = 0,015), além do peso aos três (r = -0,408; p = 0,043) e seis meses de vida (r = -0,443; p= 0,034). Também houve correlação negativa com o ganho de peso do nascimento aos seis meses (r = -0,472; p = 0,023) e de um a três meses (r = -0,396; p = 0,050). Conclusão: A leptina, oferecida através do aleitamento materno exclusivo, atua na regulação do balanço energético corporal da criança, influenciando precocemente variáveis antropométricas. / Objective: Assess the association between mature breast milk leptin and skinfold thickness Z scores at 3 and 6 months of life of infant exposed to different intrauterine environments. Methods: This is a longitudinal study, for which mother and newborn pairs were recruited from 24-48 hours postpartum in three public hospitals in Porto Alegre city, Brazil. Exclusion criteria were mothers who test positive for HIV, with hypertensive disorders, newborn from twin gestation, preterm (gestational age <37 weeks), with malformations at birth, or requiring hospitalization. Pairs were divided as exposure to intrauterine environment in Diabetes Mellitus (DM), Tobacco, Small for Gestational Age (SGA) and Control group. Interviews occurred in postpartum, 1, 3 and 6 months of infant's life, where mother and infant anthropometric data were collected and information about infant’s complementary food was asked. The breast milk sample was collected in the 1 month interview. About statistical procedures, a significance level of 5% was considered. To compare categorical and continuous variables, was used the ANOVA test with Tukey post hoc, when parametric. For nonparametric variables, was used Kruskal -Wallis test with Dunn post hoc. When comparing categorical variables, was used the chi-square of Pearson or Fisher's exact test. To analyze continuous variables, the Spearman correlation was applied. Results: Data of 127 pairs were analyzed, 18 in DM group, 34 Tobacco, 16 SGA and 59 Control. Value of leptin in breast milk did not differ between groups (p = 0.59). There was a significant positive correlation between leptin milk and maternal anthropometric variables in the overall sample (p < 0.001) and between the groups (p< 0.05). Without considering infant's complementary feeding, there was no correlation between leptin and infant anthropometric variables (p > 0.05). However, among the infants exclusively breastfed at 3 months, leptin significantly negative correlated with Z score of triceps skinfold thickness at 3 (r = -0.447; p = 0.032) and 6 months (r = -0.499; p=0.015), infant weight at 3 (r = -0.408; p = 0.043) and 6 months (r = -0.443; p = 0.034), weight gain from birth to 6 months (r = -0.472; p = 0.023) and from 1 to 3 months (r = -0.396; p = 0.050) in the overall sample. Conclusion: Among the infants exclusively breastfed, leptin in mature milk acts in body energy balance and may impact early infant anthropometric variables.

O Crack atua como um potente estimulante do sistema nervoso central, bloqueando a recaptação pré-sináptica de noradrenalina e dopamina, produzindo alto nível destes neurotransmissores nos receptores pós-sinápticos, ocasionando efeitos de prazer. O uso de drogas e a vulnerabilidade social podem resultar em desnutrição, causando danos à saúde. Além disso, peptídeos relacionados com o apetite podem estar regulando o uso de drogas. A leptina, um peptídeo produzido principalmente pelo tecido adiposo, informa ao cérebro a presença de energia, induzindo o bloqueio do neuropeptídio Y (NPY), diminuindo o apetite. Nossa hipótese é que a leptina possa estar regulando, além da ingestão de alimentos, o consumo de drogas. Não existem estudos na literatura sobre o estado nutricional de usuários de crack (com métodos bioquímicos e antropométricos), nem pesquisas que avaliam a relação da leptina com a gravidade do uso da droga. Assim, o objetivo desta tese foi avaliar o estado nutricional e os níveis séricos de leptina em usuários de crack e suas correlações com variáveis antropométricas, bioquímicas e gravidade de consumo da droga (crack). O artigo 1 da presente tese é uma análise transversal de 108 usuários, onde avaliamos o índice de massa corporal (IMC), composição corporal por bioimpedância (BIA), parâmetros bioquímicos e correlacionamos com a gravidade do uso da droga. O artigo 2 compreende uma análise dos níveis séricos de leptina, e suas correlações com IMC, BIA e gravidade do uso de crack em 40 indivíduos. Como principal achado do artigo 1, demonstramos que maioria dos indivíduos possui um IMC dentro da normalidade, no entanto, as análises bioquímicas indicaram alterações, mostrando que, embora os usuários de crack não possuam baixo peso, apresentam outras deficiências nutricionais específicas. No artigo 2, sugerimos que a leptina possa estar envolvida com a gravidade do uso de drogas, talvez em uma forma similar à modulação da ingestão de alimentos. / Crack is a potent central nervous system stimulant, inhibiting the presynaptic reuptake of noradrenaline and dopamine, producing high levels of these neurotransmitters at postsynaptic receptors, causing pleasure effects. Drug use and vulnerability can lead to malnutrition, causing a number of health consequences. In addition, appetite-related peptides may be regulating drug use. Leptin, a peptide produced primarily by adipose tissue, communicates the brain about energy reserves, inhibiting NPY and decreasing appetite. Our hypothesis is that leptin may be regulating, in addition to food intake, drug use. There are no studies that report crack users nutritional status (with biochemical and anthropometric methods), or about the relationship between leptin and the severity of drug use. Thus, the objective of this study was to evaluate the nutritional status and leptin serum levels, in crack users, and its correlations with anthropometric, biochemical and crack severity variables. The article 1 of the present study is a cross-sectional analysis, about nutritional status of 108 users. We evaluated BMI, body composition, biochemical parameters and correlated with the severity of drug use. Article 2 is a study about serum levels of leptin, and its correlations with BMI, BIA and severity of crack use in 40 individuals. As the main finding of article 1, we demonstrated that most individuals have a BMI within the normal range, however, biochemical analysis indicated below-expected parameters, showing that, Crack users are not underweight but have other specific nutritional deficiencies, which are also considered malnutrition. In paper 2, we suggest that leptin may be involved in the severity of drug use, perhaps in a similar way to food intake signaling.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O tecido adiposo é um grande reservatório de mediadores biologicamente ativos, tais como as adipocinas.As principaissãoa leptina, a resistina e a adiponectina,que estão presentes em processos inflamatórios e podem estar diretamente ligadas à doença periodontal. Os ácidos graxos teriam um papel regulador sobre essas adipocinas. O objetivo do trabalho foicomparar as concentrações de leptina, resistina e adiponectina e de ácido docosahexaenoico (DHA), ácido docosapentaenoico(DPA), ácido eicosapentaenoico(EPA) e ácido araquidônico (AA),no sangue dos pacientes com periodontite crônica generalizada e com gengivite. Como objetivo secundário, avaliar a razão entreessas substâncias no soro desses pacientes.Participaram do estudo 15 pacientes sistemicamente saudáveis com periodontite crônica generalizada (grupo teste, idade média: 45.7 9.4 anos) e 15 com gengivite (grupo controle, idade média 32.1 7.8 anos). Foram registrados os parâmetros médicos e periodontais e amostras sanguíneas foram coletadas. As concentraçõesno soro de ácidos graxos foram analisadas por cromatografia gasosa e as adipocinas foram analisadas pelo método multiensaio multiplex. Ascomparações entre as variáveis foram analisadas pelo teste Mann-Whitneye as correlações pelo teste de Spearman. Não houve diferença significante entre os níveis de adipocinas entre os grupos. Quanto aos níveis de DHA, DPA, EPA e AA, houve diferença significativamente maior para o grupo de pacientes com periodontite comparado ao grupo com gengivite.As razões entre res/DHA, res/AA, adipon/DHA, adipon/AA e adipon/DPA foram significantemente menores para o grupo periodontite. Não houve correlação entre as adipocinas e os parâmetros clínicos analisados e entre os níveis de adipocinas e ácidos graxos. Concluímos que aperiodontite crônica generalizada apresenta diferenças significativamente maiores nos níveis dos ácidos graxos quando comparada à gengivite.As adipocinas, resistina e adiponectina,apresentaram uma tendência a valores menores no grupo periodontite. Os resultados das razões sugerem uma menor proporção de resistina e adiponectina em relação aos ácidos graxos na periodontite. / Adipose tissue is a large reservoir of biologically active mediators, such as adipokines. The main ones are leptin, resistin and adiponectin, which are present in inflammatory processes and can be directly linked to periodontal disease. Fatty acids might have a regulatory role on these adipokines. The aim of this study was to compare the concentrations of leptin, resistin and adiponectin and docosahexaenoic acid(DHA), docosapentaenoic acid (DPA), eicosapentaenoic acid(EPA) and arachidonic acid (AA), in the blood of patients with generalized chronic periodontitis and gingivitis. Secondary objective was to evaluate the ratio of these substances in the serum of these patients. Participants were 15 systemically healthy patients with chronic periodontitis (test group, mean age: 45.7 9.4 years) and 15 with gingivitis (control group, mean age 32.1 7.8 years). We recorded medical and periodontal parameters and collected blood samples. Serum concentrations of fatty acids were analyzed by gas chromatography and adipokines were analyzed by multiplex bead immunoassay. Comparisons between variables were analyzed by Mann - Whitney test and correlations using the Spearman test. There was no significant difference between the levels of adipokines between groups. Considering the levels of DHA, DPA, EPA and AA, there was difference significantly higher for the group of patients with periodontitis compared to the group with gingivitis. The ratios res/DHA, res/AA, adipon/DHA, adipon/AA and adipon/DPA were significantly lower for the group periodontitis. There was no correlation between adipokines and clinical parameters analyzed and between levels of adipokines and fatty acids. We conclude that generalized chronic periodontitis differs significantly higher levels of fatty acids when compared to gingivitis. Adipokines, resistin and adiponectin, showed a tendency to lower values in periodontitis. Reasonss results suggest a smaller proportion of adiponectin and resistin in relation to the fatty acids in periodontitis.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O consumo materno de dieta hiperlipídica saturada durante a gestação e lactação favorece o desenvolvimento obesidade e anormalidades metabólicas na prole. Este trabalho teve como objetivo testar a hipótese de que a prole proveniente de mães alimentadas com dieta hiperlipídica durante a gestação e lactação desenvolve obesidade e anormalidades metabólicas e de que essas alterações estão associadas a resistência central a leptina. As ratas grávidas da linhagem C57BL/6 (n=20) foram alimentadas com dieta standard chow (SC; 19% de lipídeos) ou dieta hiperlipídica (HF; 49% de lipídeos) durante todo período de gestação e lactação. Após o desmame, a prole de machos foi dividida em quatro grupos experimentais, de acordo com a dieta das mães e da prole: SC(mães)/SC(prole), SC/HF, HF/SC e HF/HF (n=12/gp). As características metabólicas foram avaliadas pela curva de ganho de peso; medida da pressão arterial; glicose de jejum, área sob a curva no teste oral de tolerância a glicose; concentrações de triglicerídeos hepáticos e estimativa da esteatose hepática; análise plasmática de insulina e leptina e; distribuição e análise morfológica do tecido adiposo. Para analisar a sensibilidade a leptina, os quatro grupos originais foram subdivididos em dois grupos cada (veículo ou leptina-5g) para verificar a resposta alimentar (g) após o tratamento agudo intracerebroventricular (ICV) e a sinalização hipotalâmica de leptina. A dieta HF durante o período pós-desmame (grupo SC/HF), durante gestação e lactação (grupo HF/SC), ou ambos os períodos (grupo HF/HF), promoveu aumento da massa corporal. No que concerne as alterações hepáticas e a ação da insulina, a dieta HF durante o período perinatal favoreceu 25% de esteatose hepática, hiperinsulinemia e hiperleptinemia, enquanto os demais grupos experimentais SC/HF e HF/HF, demonstraram um padrão mais exacerbado. A avaliação da distribuição e morfometria do tecido adiposo demonstra o importante papel da dieta HF perinatal em amplificar a habilidade de estocar gordura visceral na prole. Considerando a ação central da leptina nos grupos tratados, a resposta alimentar mostrou-se atenuada em SC/HF, indicando o efeito determinante da dieta pós-desmame sobre a ação da leptina nesse modelo. Os resultados indicam fortemente que a dieta HF materna afeta a saúde da prole adulta. Especificamente, a prole programada apresenta esteatose hepática, hipertrofia de adipócitos, aumento de gordura visceral, hiperleptinemia e resistência a insulina. Esse fenótipo não está associado a resistência central a leptina na prole aos três meses de idade. / Maternal high-fat diet consumption during pregnancy and lactation causes metabolic abnormalities (MA) (similar to metabolic syndrome in humans) in the rodents offspring. We tested the hypothesis that the offspring of dams fed a high fat diet during pregnancy and lactation develop MA and leptin resistance.Pregnant C57BL6 mice (n=20) were fed either standard chow (SC; 19% fat) or a high fat diet (HF; 49% fat). After weaning, male offspring were divided into four groups according to the diet of dams and offspring: SC(dams)/SC(offspring), SC/HF, HF/SC and HF/HF (n=12/group). MA were characterized by weight gain curve measured weekly; tail-cuff systolic pressure; fast glucose and areas under the curve after oral glucose tolerance test; fat mass depots; leptin and insulin concentrations, all performed at 12 weeks of age.To analyze leptin sensitivity, each group was divided into two groups (vehicle or leptin-5g) to identify the feeding response and pSTAT3 expression after acute intracerebroventricular (ICV) treatment (n=6/group). The HF schedule during post-weaning (SC/HF group), during gestation and lactation (HF/SC group), or both periods (HF/HF group), increased body mass in experimental groups. In respect to hepatic alterations and insulin action, the HF diet during gestation and lactation caused 25% of liver steatosis, hiperinsulinemia and hiperleptinemia, whereas SC/HF and HF/HF presented worst patterns. The fat distribution and morphometry pointed for the key role of HF during gestation and lactation in amplify the ability to store fat in the offspring. Considering the central leptin action in offspring treated groups, SC/HF was not responsive to leptin treatment, which strong indicates the determining effect of post-weaning diet upon leptin action in this model. The compelling results indicate that maternal HF schedule during pregnancy and lactation affects the offpring health. Specifically, programmed offspring presented liver steatosis, adipocyte hipertrophy, increased visceral fat, hiperleptinemia and insulin resistance. This phenotype was not associated with central leptin resistance in offspring at 3 month-age.

Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A leptina tem um papel importante na regulação do sistema reprodutivo além de seu papel principal na regulação do peso corporal e ingestão alimentar. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da administração de leptina durante o período neonatal na função testicular da prole adulta. Vinte e quatro filhotes de 12 mães foram divididos em 2 grupos: Grupo leptina: injetados com 50 L de leptina (80ng/gPC, subcutânea) nos primeiros 10 dias de vida e Grupo Controle: injetados com o mesmo volume de solução salina. Todos os animais foram sacrificados aos 90 dias de vida. Parâmetros analisados: consumo alimentar, massa corporal, crescimento linear, data de início da puberdade, perfil lipídico, níveis séricos de estradiol e testosterona, expressão gênica (PCR em tempo real) e expressão proteica (Western blot) de ObRa, OBRb, aromatase, AR, ER, morfometria testicular, número, morfologia e viabilidade de espermatozoides. Os dados foram expressos como média erro padrão. A significância estatística foi determinada pelo teste t de Student. A Injeção de leptina levou a uma redução (p&#8804;0,008) no consumo alimentar a partir do dia 26 ao 40 e do dia 70 em diante, enquanto que a massa corporal (p&#8804;0,03) e o crescimento linear (p&#8804;0,05) foram reduzidos do dia 26 até o dia 45. O peso da hipófise (p&#8804;0,0006), hipotálamo (p&#8804;0,01), próstata (p&#8804;0,003), testículo (p&#8804;0,008) e epidídimo (p&#8804;0,004) e bexiga (p&#8804;0,009) foram significativamente reduzidos pela injeção de leptina. A Injeção de leptina adiantou o início da puberdade (C=45,0 0,3; L=41,6 0,3; dias, P&#8804;0,0001). Em relação ao perfil lipídico, a administração de leptina gerou um aumento nos níveis séricos de TG (C= 116,5 15,9; L=172,6 19,7; ng/dL, P&#8804;0,05) e uma redução nos níveis de HDL (C=33 1,5; L = 24 3,5; ng/dL, P&#8804;0,02). Os níveis séricos de testosterona também foram reduzidos pela leptina (C=5,2 1,0; L=1,1 0,3; ng/mL, P&#8804;0,003). Todos os genes avaliados por PCR em tempo real mostraram um aumento na sua expressão: Obra (C=0,32 0,04; L=0,69 0,16; P&#8804;0,04), OBRb (C=0,37 0,06; L=0,71 0,16; P&#8804;0,03), AR (C=0,28 0,02; L=0,71 0,16; P&#8804;0,02), Aromatase (C=0,31 0,04; L=0,53 0,09; P&#8804;0,04), ER-&#945; (C=0,79 0,03; L=0,93 0,03; P&#8804;0,01), ER-&#946; (C=0,29 0,03; L=0,73 0,16; P&#8804; 0,02). Por outro lado, a expressão proteica de OBR (C=4,4 0,29; L=6,6 0,84; P&#8804;0,05), ER-&#945; (C=0,4 0,02; L=0,6 0,05; P&#8804;0,03) e aromatase (C=0,4 0,03; L=0,5 0,02; P&#8804;0,04) aumentaram, enquanto que a expressão proteica de AR (C=0,16 0,01; L=0,09 0,01; P&#8804;0,009) foi reduzida pela administração de leptina. A análise morfométrica mostrou que a leptina levou a um aumento da área total do túbulo seminífero (C=64,6 3,1; L=56,1 2,1;&#956;m, P&#8804;0,01), aumento da área luminal (C=40,6 2,3; L= 48,7 0,9; &#956;m P&#8804; 0,004) e na altura do epitélio (C=21,5 1,2; L=24,6 1,1; &#956;m, P&#8804;0,03), enquanto que o comprimento do túbulo seminífero foi reduzido no grupo tratado (C=2200 350; L= 1100 110;cm, P&#8804;0,006). A administração de leptina levou a um aumento no número total de espermatozoides (C=20x107 2x107; L=30x107 5x107;Cls/mL, P&#8804;0,009) e no número de anormalidades (C=40,6 1,9; L=45,8 1,2, P&#8804;0,049). Podemos concluir que a leptina tem um papel importante na morfologia e função testicular. A leptina parece ter efeito direto neste tecido uma vez que a expressão gênica e proteica de OBR, AR, ER e aromatase foram alterados pela administração da leptina. / Leptin has an important role in regulating the reproductive system besides its main role in the regulation of body weight and food intake. The aim of this study was to evaluate the effect of leptin administration during the neonatal period in the testis function of the adult offspring. Twenty-four pups from 12 dams were separated into 2 groups: Leptin group: injected with 50&#956;L of leptin (80ng/gBW, subcutaneous); control group: injected with the same volume of saline solution for the first 10 days of life. All animals were killed at 90 days of life. Parameters analyzed: Body weight, linear growth and food consumption; onset of puberty, lipid profile, testosterone and estradiol serum levels, gene (Real time PCR) and protein expression (Western blot) of OBRa, OBRb, aromatase, AR, ER, testicular morphometry, spermatozoa number, morphology and viability. Data were expressed as mean standard error. Statistical significance was determined by students t-test. Leptin injection led to a reduction in food consumption (p&#8804;0.008) from day 26 to 40 and from day 70 onward while body weight (p&#8804;0.03) and linear growth (p&#8804;0.05) were reduced from 26 to 45 days of life. Pituitary (p&#8804;0.0006), hypothalamus (p&#8804;0.01), prostate(p&#8804;0.003), testis (p&#8804;0.008), epididymis(p&#8804;0.004) and bladder (p&#8804;0.009) weights were significantly reduced by leptin injection. Leptin injection also advanced the onset of puberty (C=45.0 0.3; L=41.6 0.3; days, P&#8804;0.0001). In relation to lipid profile, leptin administration led to an increase in TG (C=116.5 15.9; L=172.6 19.7; ng/dL, P&#8804;0.05) and a reduction in HDL (C=33 1.5; L=24 3.5; ng/dL, P&#8804;0.02) serum levels. Testosterone serum levels (C=5.2 1.0; L=1.1 0.28; ng/mL, P&#8804;0.003) were also reduced by leptin. All gene evaluated by real time PCR showed an increase in its expression: OBRa (C=0.32 0.04; L=0.69 0.16; P&#8804;0.04), OBRb (C=0.37 0.06; L=0.70 0.16; P&#8804;0.03), AR (C=0.28 0.02; L=0.71 0.16; P&#8804;0.02), Aromatase (C=0.31 0.04; L=0.53 0.09; P&#8804;0.04), ER-&#945; (C=0.79 0.03; L=0.92 0.03; P&#8804;0.01), ER-&#946; (C=0.29 0.03; L=0.7286 0.16; P&#8804;0.02). On the other hand, the protein expression of OBR (C=4.4 0.29; L=6.6 0.84; P&#8804;0.05), ER-&#945; (C=0.4 0.02; L=0.44 0.02; P&#8804;0.03) and aromatase (C=0.4 0.03; L=0.5 0.01;AU, P&#8804;0.04) were increased while AR (C=0.16 0.01; L=0.09 0.01; P&#8804;0.009) was reduced by leptin administration. The morphometric analysis showed that leptin led to an increase in the total area (C=64.6 3.1; L=56.1 2.1; &#956;m P&#8804;0.01) and luminal areas (C=40.6 2.3; L=48.7 0.9; &#956;m P&#8804;0.004) and in the epithelial height (C=21.5 1.2; L=24.6 1.1; &#956;m P&#8804;0.03), while the length of seminiferous tubule was reduced (C=2200 350; L= 1100 110; cm P&#8804;0.006). Leptin administration led to an increase in the total number of spermatozoa (C=20x107 2x107; L=30x107 5x107; P&#8804;0.009) and in the number of abnormalities (C=40.6 1.9; L=45.8 1.2; P&#8804;0.049). We can conclude that leptin has an important role in the morphology and testis function. The leptin effect seems to be direct in this tissue since the gene and protein expression of OBR, AR, ER and aromatase and spermatozoa number were changed by leptin administration.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Neste estudo investigamos as consequências da restrição protéica materna durante a lactação sobre a resposta de timócitos da prole jovem de ratos Wistar (grupo D), identificando o papel da leptina nas alterações encontradas. Observamos que, quando comparados ao grupo controle, os animais do grupo D apresentaram, aos 30 dias de vida, uma diminuição significativa tanto do peso corporal quanto do timo. Contudo, não observamos alterações no número de timócitos, no perfil de células CD4/CD8 ou na resposta proliferativa destas células. Sistemicamente, o grupo D não apresentou alterações nos níveis séricos de corticosterona ou no conteúdo nuclear do seu receptor (GR) em timócitos. Apesar dos animais D não apresentarem alterações nos níveis circulantes de leptina, a expressão do seu receptor, ObRb, estava aumentada nos timócitos. Esta alteração foi acompanhada pela amplificação da resposta de sinalização da leptina nestas células, observada por um aumento na ativação de JAK2 e STAT3 após a incubação com leptina. Os timócitos isolados do grupo D apresentaram uma diminuição significativa na taxa de apoptose espontânea quando comparados ao grupo controle. Corroborando estes resultados, demonstramos que os timócitos dos animais D apresentam um aumento na expressão da proteína antiapoptótica Bcl-2 e uma redução da expressão da proteína próapoptótica Bax, além de um maior conteúdo de Pró-caspase-3, entretanto, não encontramos alterações no conteúdo de Bad. Além disso, timócitos do grupo D apresentaram um maior conteúdo da subunidade p65 do NF&#312;B no núcleo, associado a uma menor expressão de I&#312;B&#945; no citoplasma. Finalmente, observamos um aumento na expressão do RNAm para o gene ob (leptina) mas não para o gene db (receptor) no microambiente tímico dos animais D. Em conjunto, nossos dados mostram que a restrição protéica durante a lactação afeta a homeostase tímica, induzindo uma maior atividade de leptina, que protege os timócitos da apoptose na prole jovem, sugerindo que esses animais poderiam ser mais suscetíveis a alterações na resposta imune na vida aduta. / In this study, we investigated the consequences of maternal protein deprivation during lactation on thymocyte responses of the offspring Wistar rats (PD group) and the role of leptin in these alterations. Compared to group C, PD animals showed at 30 days of age, lower body and thymus weights, with no alteration in the thymocyte number or any difference in the profile of T cell subsets, or in their proliferative response. Similar circulating levels of corticosterone and GR nuclear contents were detected in thymic cells of PD or control groups. In contrast, despite the rats from PD group did not present alterations in leptin circulating levels, the expression of leptin receptor ObRb was enhanced in their thymocytes. This change was accompanied by an amplification in leptin signaling response of thymocytes from PD rats, which showed an increase in JAK2 and STAT3 phosphorylation after stimulation with leptin. Moreover, the thymic cells from PD rats presented a decreased rate of spontaneous apoptosis when compared to controls. Accordingly, higher expression of both the anti-apoptotic protein Bcl-2 and Procaspase-3 and lower expression of pro-apoptotic protein Bax were detected in PD thymocytes, however, the pro-apoptotic protein bad expression was similar between the groups. Thymocytes from PD group also exhibited a constitutive higher nuclear content of p65 NFkB associated to a lower IkB content in the cytoplasm. Finally, although there was no change in db genic (leptin receptor) expression in PD thymocytes, a higher expression of mRNA for ob gene (leptin) was observed in the thymic microenvironment from PD animals. Taken together, the results show that maternal protein deprivation during lactation affects thymic homeostasis, inducing leptin activity, which protect thymocytes from apoptosis in young progeny and, perhaps,may prone these animals for alterations in immune response in adult life.

Objetivos: Leptina e grelina são hormonios relacionados a regulação da ingestão alimentar e consequentemente o controle de peso. Como tem sido descrito até agora, os valores normais desses hormônios estão sujeitos a grande variabilidade. Devido a falta de estudos que contemplem os valores totais de grelina total, grelina acilada, leptina, insulina e glicose em crianças, esse estudo tem o objetivo de avaliar esses hormônios e comparar com as variáveis antropométricas em crianças eutróficas de 4 meses a 10 anos. Pacientes e métodos: É um estudo transversal que avaliou 111 crianças de 4 meses a 10 anos de idade. Foram consideradas eutróficas crianças de até 5 anos com valores de IMC para idade entre -2,0 e +2,0 escores-z, e crianças maiores de 5 anos com valores entre -2,0 e +1,0 escores-z, de acordo com a OMS 2009. Os participantes foram selecionados de uma população saudável com pequeno procedimento cirúrgico ou revisão de saúde programada. As crianças foram categorizadas em três grupos: V 24 meses (n = 10); 25-60 meses (n = 22); > 60 meses (n = 27). As amostras de sangue foram coletadas com um jejum mínimo de 3 horas e máximo de 14 horas. As concentrações de grelina total, grelina acilada e leptina foram dosadas pelo kit commercial ELISA (Linco Research, St Charles-MI, US). A concentração de Insulina foi testada com o kit ELISA (Diagnostics System Laboratories, INC Webster-TX, USA) e a de Glicose com o kit comercial GlicosePAP liquiform® (Labtest Diagnóstica – Lagoa Santa-MG, Brasil). Variáveis que apresentaram distribuição normal foram comparadas com o teste t de Student e analizadas com ANOVA, e as que apresentaram distribuição assimétrica foram comparadas pelo teste de Kruskal-Wallis e analizadas pelo teste de Mann-Whitney. As correlações foram testadas pelos coeficientes de Pearson ou Spearman. O nível de significância utilizado foi 0,05. Resultados: A média de idade foi 60 meses (mín-máx 35-91 meses). A mediana (percentis 25-75) dos valores de grelina acilada, grelina total, grelina desacilada, leptina e insulina foram 1,374 pg/ml (949-1,875); 288 pg/ml (212-450); 1,086 pg/ml (711-1,393); 1,53 ng/ml (1,11-2,77) e 15,5 ^U/ml (12,1-23,5), respectivamente. A média ± DP da glicose foi 88,6 ± 13,1. A média do escore-z do IMC/I encontrada foi -0,16 ± 0,78 para meninos e -0,04 ± 0,83 para meninas. Foi encontrada uma correlação inversa da grelina total, acilada e desacilada com a idade [rs= -0,455 (P < 0,001); rs= -0,313 (P = 0,001); rs= -0,484 (P < 0,001)], respectivamente. Ocorreu uma relação direta da leptina com IMC/I e com a idade [(rs = 0,190 (P = 0,046); rs = 0,429 (P < 0,001)], respectivamente. Conclusões: Os resultados observados nas dosagens e as correlações encontradas de grelina com faixa etária e leptina com sexo feminino e parâmetros antropométricos podem ser úteis para comparação com crianças que são portadoras de alterações de apetite. / Objective: Leptin and ghrelin are hormones related to regulation of food intake and consequently body weight control. Normal values of these hormones are subject to a great variability as has been described so far. Due to the lack of studies regarding plasma levels of total and acylated ghrelin and serum levels of leptin, insulin and glucose in young children, this study aimed to assess these hormones and compare with body mass index (BMI) in healthy well-nourish children aged 4 months -10 years old. Methods: Cross-sectional study evaluated 118 children aged 4-129 months old with BMI-for-age values were within -2.0 and +2.0 SD z-scores for children under 5 years and within -2.0 and +1.0 SD for children over five years, according to WHO 2009. Subjects were enrolled from a population referred to minimal surgeries and routine medical check up. All subjects were categorized into 3 groups: d 24 months (n = 10); 25-60 months (n = 22); > 60 months (n = 27). Blood samples were collected following a minimum of 3-hour and a maximum of 14 hours fasting period. Total and acylated ghrelin and leptin concentrations were assessed by ELISA commercial kit (Linco Research, St Charles-MI, US). Insulin was assessed by ELISA commercial kit (Diagnostics System Laboratories, INC Webster-TX, USA) and glucose by ELISA commercial kit GlicosePAP liquiform® (Labtest Diagnóstica – Lagoa Santa-MG, Brazil). Variables with normal distribution were compared by Student´s t test and analysis of variance (ANOVA). Variables with asymmetric distribution were analyzed by Kruskal-Wallis and Mann-Whitney U tests. Correlation between continuous variables was assessed by Pearson or Spearman correlation coefficient test. The level of significance used was 0.05. Results: Total and acyl ghrelin, leptin and glucose were detected in all samples with a median (P 25-75) concentration in the whole group of 1.374 (949-1.875) pg/mL, 288 (212-450) pg/mL, 1.53 (1.11-2.77) ng/mL and 15.5 (12.1-23.5) ^U/mL, respectively. Glucose media ± SD concentration was 88.6 ± 13.1 mg/dL.Conclusions: Ghrelin showed an inverse correlation between and age and leptin a direct correlation between anthropometric parameters and gender in healthy wellnourished children. Insulin and glucose didn’t correlate with any variable.

Introdução e objetivo: Anorexia e desnutrição são causas importantes de desnutrição nas crianças e adolescentes com cirrose. A grelina e a leptina são hormônios envolvidos na homeostase energética, possuem efeitos antagônicos e estão associadas com anorexia em cirróticos. O objetivo deste estudo é avaliar as concentrações de grelina, leptina, insulina e glicose, e o estado nutricional entre crianças e adolescentes cirróticos e hígidos. Métodos: Estudo transversal prospectivo, realizado com 39 crianças e adolescentes com cirrose (66,7% atresia biliar) idade entre 2,5 e 188 meses, sendo 51,3% do sexo feminino e 51,3% eram Child-Pugh A; 41%, B e 7,7%, C respectivamente, e 39 controles hígidos pareados por sexo e idade. As concentrações de grelina, leptina, insulina e glicose foram dosadas pelo método de ELISA. Amostras de sangue foram coletadas pelo menos após 3 horas de jejum. A gravidade da doença hepática foi avaliada pela classificação de Child-Pugh e pelo escore PELD e/ou MELD. A avaliação antropométrica foi realizada pelos índices de estatura para idade, prega cutânea tricipital e a classificação foi determinada de acordo com os padrões WHO 2009 e Frisancho 2008. Resultados: A grelina apresentou correlação inversa com a idade. Os valores medianos (percentil 25-75) de grelina acilada foram significativamente menores nos cirróticos do que nos controles [140,3 (93,9-269,7) pg/ml versus 277,8 (209,9-557,8) pg/ml, P=0,003]. Os valores medianos da grelina total e desacilada dos cirróticos foram 913,4 pg/ml (760,8- 1443,7) e 1397,8 pg/ml (815,27-2.047) respectivamente. Os valores medianos da leptina, insulina e glicose não foram significativamente diferentes entre os cirróticos e os controles (P=0,421; P=0,908; P=0,851). A grelina acilada foi associada com a gravidade e classificação de Child-Pugh, e a grelina desacilada com o escore PELD `15. A leptina apresentou correlação positiva com os parâmetros antropométicos, hematócrito e hemoglobina. Os cirróticos desnutridos apresentaram níveis diminuídos de leptina quando comparados aos cirróticos bem nutridos (P=0,023). Conclusões: A concentração diminuída de grelina acilada e aumentada de grelina total e desacilada relacionaram-se com a gravidade da doença hepática, enquanto os níveis séricos de leptina com desnutrição em crianças e adolescentes cirróticos. A insulina e a glicose não apresentaram associação com as variáveis estudadas. / Introduction and Objective: Anorexia and undernutrition state are a problem of paramount importance in children and adolescents with cirrhosis. Ghrelin and leptin are the main hormones involved in the control of food intake and body weigth, having antagonic effects and being associated with anorexia in cirrhotic patients. This study aimed to investigate the relationship between fasting ghrelin, leptin, insulin and glucose concentrations; and the nutritional status in pediatric cirrhotic patients, comparing with sex- and age-matched healthy controls. Methods: Cross-sectional study evaluated 39 children with cirrhosis (biliary atresia as etiology in 66.7%) aged between 2.5 and 188 months, 51.3% female were evaluated, 51.3% were Child-Pugh A; 41%, B and 7.7%, C. Other 39 healthy children matched for sex and age, taken as controls, were also evaluated. Blood samples were collected at least after 3-hours fasting. Fasting total ghrelin, acyl grelin, leptin, insulin and glucose levels were measured using a commercial ELISA kit. Severity of liver disease was assessed by Child-Pugh classification, and PELD or MELD score. Antropometric papameters including, body fat mass and height for age were determined and classified according to WHO 2009 and Frisancho 2008 standard reference. Results: Plasma ghrelin levels showed an inverse correlation with age. Median values (25-75 centile) of acylated ghrelin were significantly lower in cirrhotics than in healthy controls [142 (93-278) pg/ml vs 275 (208-481) pg/ml, P=0.001]. Median values of leptin, insulin and glucose were not significantly different between cirrhotics and controls (P=0.421; P=0.908; P=0.851). Ghrelin levels were associated with the severity of Child-Pugh classification and PELD or MELD scores `15. Ghrelin levels did not associate with gender and causes of cirrhosis. Leptin levels were correlated positively with anthropometric parameters, hematocrit and hemoglobin. Undernourished cirrhotic patients had lower leptin levels than wellnourished (P=0.023). Conclusion: Plasma acyl ghrelin concentration are lower and total and desacyl ghrelin were higher and associated with cirrhosis severity, whereas leptin was associated with undernourishment in children and adolescents with cirrhosis. Insulin and glucosis werent associated with any variable.