A lipoproteína de alta densidade (HDL) tem várias ações protetoras contra o desenvolvimento de doenças cardiovasculares, como remover o excesso de colesterol dos tecidos periféricos. No entanto, outros aspectos do metabolismo da HDL, como o transporte de colesterol das outras classes de lipoproteínas para a HDL devem ser avaliados para verificar a sua ação protetora. Sendo assim, nosso objetivo foi verificar, em hamsters, se a dieta hiperlipídica altera fatores relacionados ao metabolismo da HDL, tais como a composição da fração HDL e a transferência simultânea de lípides para a HDL. Trinta e nove hamsters Golden Syrian adultos machos receberam uma dieta hiperlipídica contendo 0,5% colesterol e 10% de óleo de coco (n=20, grupo dieta hiperlipídica) ou uma ração comercial usual (n=19, grupo controle) por 15 semanas. Os animais foram sacrificados e amostras de sangue foram coletadas para determinação do perfil lipídico, atividade da paroxonase 1 (PON1), da proteína de transferência de éster de colesterol (CETP) e da proteína de transferência de fosfolípides (PLTP), bem como a composição em lipídes da fração HDL. A transferência simultânea de colesterol livre (CL), éster de colesterol (EC), triglicérides (TG) e fosfolípides (FL) é baseada na troca de lípides ocorrida entre uma nanoemulsão lipídica artificial, marcada radioativamente com 14C-CL e 3H-TG ou 14C-FL e 3H-EC, e a HDL. Após precipitação química da nanoemulsão e das demais lipoproteínas, a capacidade da HDL em receber lípides foi quantificada pela medida da radioatividade presente na HDL. Além disso, a aorta e o fígado dos hamsters foram coletados para a determinação da composição em lípides e para análise histológica. Em relação ao perfil lipídico o colesterol total, HDL-C, n-HDL-C, FL, CL e EC foram maiores no grupo dieta hiperlipídica comparado ao grupo controle, já a concentração de TG não diferiu entre os grupos. A concentração de CL e EC da fração HDL foram maior no grupo dieta hiperlipídica. A transferência de 14C-CL, 3H-TG, 14C-FL e 3H-EC, bem como a atividade da CETP e da PLTP foram maiores no grupo dieta hiperlipídica. A atividade da PON1 não diferiu entre os grupos. A composição de CL da aorta foi maior no grupo dieta hiperlipídica comparado ao controle, no entanto o diâmetro interno e externo da aorta não diferiu entre os grupos. No grupo dieta hiperlipídica, a composição de EC, CL, TG e FL do fígado e o diâmetro dos hepatócitos foi maior do que no grupo controle. Dessa forma, a dieta hiperlipídica, i.e., enriquecida com colesterol e gordura saturada, em hamsters, modifica a composição em CL e EC da fração HDL, a sua capacidade em receber lípides, bem como outros aspectos relacionados ao seu metabolismo, o que pode alterar as propriedades antiaterogênicas da HDL. / High density lipoprotein (HDL) is known to protect against cardiovascular disease by removing the excess of cholesterol from peripheral tissues. However, other aspects of the HDL metabolism, as the transport of cholesterol of the other classes of lipoproteínas for the HDL should be sought to evaluate its protective action. Here, we tested the hypothesis whether a hyperlipidemic diet, in hamsters, alters the composition of the HDL fraction and ability of HDL to simultaneously receive lipids. Thirty-nine adult male Golden Syrian hamsters were fed hyperlipidemic diet containing 0.5% cholesterol and 10% coconut oil (n=20, hyperlipidemic diet group) or a regular chow diet (n=19, control group) for 15 wk. Then the animals were sacrificed and blood samples were collected for determination of plasma lipids, paraoxonase 1 (PON1), cholesteryl ester transfer protein (CETP) and phospholipid transfer protein (PLTP) activities, and lipids composition of the HDL fraction. Simultaneous transfer of phospholipids (PL), free cholesterol (FC), cholesteryl esters (CE) and triglycerides (TG) from an artificial lipidic nanoemulsion to HDL was performed in an in vitro assay, in which a nanoemulsion doubled labeled with either 14C-FC and 3H-TG or 14C-PL and 3H-CE was incubated with plasma and the radioactivity was counted in the HDL fraction after chemical precipitation. The aorta and the liver of the hamsters were collected for determination of the lipids composition and histological analysis. Plasma total cholesterol, HDL-C, n-HDL-C, CE, FC and PL were greater in the hyperlipidemic diet group than in the control group. However, TG levels were similar between the groups. Compared with the control group, the hyperlipidemic diet group had higher FC and CE in the HDL plasma fraction. Also, the transfer rates of 14C-FC, 3H-TG, 14C-PL and 3H-CE, CETP and PLTP were greater in the hyperlipidemic diet group compared with control group. PON1 activity was equal in both groups. The content of FC in the aorta tissue was greater in hyperlipidemic diet group, but the internal and external diameters of the aorta were equal in both groups. In hyperlipidemic diet group, the content of CE, FC, PL and TG in the liver and the diameter of the hepatocytes were greater than that measured in control group. The hyperlipidemic diet, i.e., dietary cholesterol and saturated fat, in hamsters, alters the FC and CE composition of the HDL fraction and lead to a disturbance in the ability of HDL to receive lipids. And consequently, may alter the antiatherogenic properties of this lipoprotein.

No diabete melito tipo (DM) 2, a glicoxidação da LDL favorece o acúmulo de colesterol nos macrófagos da parede arterial, enquanto que as modificações da HDL alteram o transporte reverso do colesterol e reduzem sua capacidade ateroprotetora. O objetivo deste estudo foi avaliar a concentração de colesterol livre (CL) e esterificado (CE) em macrófagos, resultante da incubação conjunta de LDL e HDL isoladas de indivíduos portadores de DM 2 (D) com controle glicêmico inadequado, ou de indivíduos controles não diabéticos (C). LDL e HDL isoladas do plasma por ultracentrifugação por gradiente descontínuo de densidade foram incubadas simultaneamente (100g proteína/mL de meio) em macrófagos de peritônio de camundongos, durante 48 h, a 37°C, de acordo com os seguintes esquemas: LDL(C); LDL(C)+HDL(C); LDL(C)+HDL(C) pool; LDL(D); LDL(D)+HDL(D) ou LDL(D)+ HDL(C) pool. O conteúdo celular de CL e CE (linoleato, oleato e palmitato) foi analisado por HPLC (g/mg de proteína celular). A idade, IMC e triglicérides plasmáticos, assim como a glicemia de jejum e HbA1c, eram maiores no grupo DM, em comparação com o grupo C. Nas incubações com LDL(D) + HDL(D), observou-se maior conteúdo celular de colesterol total (607 ± 99; p = 0,033) e esterificado (430 ± 86; p = 0,023) em comparação com LDL(D) (356 ± 73; 209 ± 51, respectivamente), e somente do colesterol esterificado comparado com LDL(D) + HDL(C) pool (208 ± 70; p = 0,023). Os macrófagos com LDL(D) + HDL(D) apresentaram maior conteúdo de colesterol total (607 ± 99; p = 0,01), CL (177 ± 21; p = 0,03) e CE (430 ± 86; p = 0,02) em comparação com LDL(C) + HDL(C) pool (266 ± 66, 89 ± 16 e 176 ± 53, respectivamente). O acúmulo de colesterol esterificado nos macrófagos foi decorrente da maior formação de colesterol linoleato e oleato. A análise da composição das HDL(D) mostrou menor conteúdo de apo A-I em relação aos lípides, comparada com HDL(C). Em conclusão, a incubação simultânea de LDL(D) + HDL(D) provocou maior acúmulo de colesterol em macrófagos, em comparação à incubação de LDL(D) isoladamente ou de LDL(C) + HDL(C) pool. Estes resultados sugerem que a HDL de portadores de DM 2 mal compensados favorece o maior acúmulo de colesterol em macrófagos. / The development of atherosclerosis in type 2 diabetes mellitus (DM2) is associated with lipoprotein (LP) modifications. Glycoxidized LDL increases macrophage cholesterol accumulation whereas HDL modifications impair the reverse cholesterol transport and atheroprotective properties. The objective of this study was to evaluate the cholesterol content of mouse peritoneal macrophage (MPM) after their simultaneous incubation with LDL+HDL or LDL alone from poorly controlled DM2 (D, n=11), and from non-diabetic control individuals (C, n=11). LP were isolated by discontinuous density gradient ultracentrifugation and incubated (100g protein/mL) with MPM (48h), according to the following protocol: LDL(C); LDL(C)+HDL(C); LDL(C)+HDL(C) pool; LDL(D); LDL(D)+HDL(D) or LDL(D)+ HDL(C) pool. The cellular contents of free (FC) and of esterified cholesterol (EC: linoleate, oleate and palmitate) were measured by HPLC (g/mg of cell protein). Age, BMI, fasting plasma glucose, HbA1c and triglycerides were higher in D as compared to C. The incubation with LDL(D)+HDL(D) increased MCM TC (mean ± SEM) (607 ± 99; p = 0,033) and EC (430 ± 86; p = 0,023) contents compared to LDL(D) alone (356 ± 73; 209 ± 51, respectively). Also, MPM EC content was higher compared to LDL(D)+HDL(C)pool (208 ± 70; p = 0,023). MPM incubated with LDL(D)+HDL(D) presented greater contents of TC (607 ± 99; p = 0,01), FC (177 ± 21; p = 0,03) and of EC (430 ± 86; p = 0,02) compared to the LDL(C)+HDL(C)pool (266 ± 66, 89 ± 16 e 176 ± 53, respectively). The cellular EC content was ascribed to accumulations of linoleate and oleate. Analysis of the HDL composition showed higher lipid/apo A-I ratio in HDL(D) compared to HDL(C). In conclusion, the simultaneous incubation of LDL(D)+HDL(D) induces greater cholesterol accumulation in macrophage compared to LDL(D) and LDL(C)+HDL(C)pool. These results suggest that uncontrolled DM2 HDL favours the cellular cholesterol accumulation.

Anticorpos (Ac) anti-oxLDL estão envolvidos no desenvolvimento da lesão aterosclerótica. Induzimos a produção desses Ac através da imunização com oxLDL. Avaliamos os perfis lipídico e de Ac anti-oxLDL e anti-pepD (pepD é um peptídeo derivado da apoB). Animais apoE-/- possuem maiores níveis de lípides sorológicos em comparação com animais C57Bl/6, exceção da HDL. A imunização oxLDL não alterou este perfil. A imunização aumentou os títulos dos Ac IgM, IgG e IgG1 anti-oxLDL. Animais C57Bl/6, mas não os apoE-/- tiveram aumento dos Ac IgM anti-pepD após a imunização. Acreditamos que o aumento de anticorpos IgG1 deve-se ao adjuvante usado. A aterosclerose pode ocorrer com maior freqüência, em indivíduos portadores de doenças renais crônicas. Para estudar essa interferência submetemos os animais a um modelo de isquemia e reperfusão renal (I/R). A I/R promoveu aumento da concentração de TG, podendo agravar a aterosclerose. O aumento de Ac IgG anti-oxLDL promovidos pela I/R sugere que o processo inflamatório desencadeado por este procedimento, aumenta a oxidação de LDL. Desta forma, concluímos que a I/R pode ser considerado um procedimento pró-aterosclerótico que não pode ser revertido pela imunização com oxLDL. / Oxidized LDL (oxLDL) antibodies (Ab) are involved in the development of the atherosclerotic lesion. We induced the formation of such Ab through immunization with oxLDL. We evaluate the lipids and antibody (anti-oxLDL and anti-pepD pep D is a peptide derived from apolipoprotein B) profile. The apoE-/- mice used have higher seric levels of most lipids than C57Bl/6 animals, the exception being HDL. The oxLDL immunization does not change this profile. The immunization increased anti-oxLDL Ab e IgM, IgG and IgG1 titers. Anti-pepD IgM Ab increased with immunization in C57Bl/6 animals only, and not in apoE-/-. We believe the increased IgG1 Ab due to the adjuvant used. Atherosclerosis has a higher incidence in individuals with chronic renal conditions. In order to study such interference, we submitted the animals to a renal ischemia and reperfusion model (I/R). The I/R procedure increased TG concentration, what can make atherosclerosis more severe. The increase in IgG anti-oxLDL antibody caused by I/R suggests that the inflammation process set by the procedure increases LDL oxidation. This way, we conclude that the I/R can be considered a pro-atherosclerotic procedure. The oxLDL immunization was not able to revert the atherogenic effect caused by I/R model.

Introdução São escassas as evidências do impacto dos padrões de atividade física (AF) e local de residência (rural e urbano) para a dislipidemia e ao perfil lipídio. Objetivos Avaliar a associação dos padrões de atividade física e local de residência (urbano e rural) com dislipidemia. Associar a correlação do gasto energético estimado em Mets e valores e frações de colesterol e triglicérides. Metodologia Estudo Transversal em coorte prospectiva, com 4551 indivíduos com idade entre 35 e 70 anos de áreas urbana e rural. A AF foi avaliada utilizando o Questionário Internacional de Atividade Física (IPAQ). Foi realizada regressão múltipla para a associação de AF e local de residência com o tipo de dislipidemia. A regressão linear foi realizada para avaliar o efeito da AF e local de residência nos valores e frações de colesterol e triglicérides. Resultados A prevalência de baixa AF no rural foi de 5,1 por cento (mulheres 4,3 por cento e homens 6,0 por cento ), urbano 11,2 por cento (7,9 por cento mulheres e 5,5 por cento homens), p<0,001. A dislipidemia ocorreu em 75,3 por cento do rural e 68 por cento do urbano (p<0,001). Em mulheres 80,6 por cento do rural e 65,7 por cento do urbano (p<0,001), homens 69,1 por cento do rural e 71 por cento do urbano (p=0,369). O perfil lipídico das mulheres em mediana foi: colesterol total (CT) rural 194,51 mg/dl, e urbano 201,5 mg/dl (p<0,001), HDL rural 44,5 mg/dl e urbano 50,1 mg/dl (p<0,001) LDL rural 120,3 mg/dl e urbano 122,6 mg/dl (p=0,35), triglicérides rural 127,1 mg/dl e urbano 117,8 (p<0,001). Em homens as medianas foram: CT rural 189,5 mg/dl e urbano 196,1 mg/dl (p=0,002), HDL rural 40,2 mg/dl e urbano 41,8 mg/dl (p<0,001), LDL rural 118,3 mg/dl e urbano 121,4 mg/dl (p=0,5), triglicérides rural 131,1 mg/dl l e urbano 147,0 mg/dl (p=0,001). A dislipidemia por HDL baixo foi a mais frequente. AF domiciliar, transporte e trabalho estão associados com a redução do risco de dislipidemia. Em mulheres, o efeito no HDL da AF domiciliar foi no rural 1,001 mg/dl (p=0,021) e no urbano 1,114 mg/dl (p<0,001). Em homens do grupo urbano, o efeito de AF de transporte foi -1,42 mg/dl (p<0,001) no LDL. O efeito da AF de trabalho no HDL foi no rural 1,002 mg/dl (p<0,001) e urbano 0,042 mg/dl (p=0,04) Conclusão Existem fortes indícios da interação da atividade física e local de residência com as dislipidemias e perfil lipídico. As associações encontradas entre as atividades físicas domiciliar, transporte e trabalho e dislipidemias sugerem caminhos complementares nas estratégias de prevenção de doenças cardiovasculares na população brasileira. / Introduction There is scarce evidence about the impact of physical activity (PA) and residence area (rural and urban) on dyslipidemia and lipid profile. Objectives To assess the association between patterns of physical activity, residence area (rural or urban) and dyslipidemia. To assess the correlation between energy expenditure in estimated Mets and total cholesterol, HDL, LDL and l triglycerides levels. Methodology A cross sectional evaluation in a prospective cohort with 4551 individuals aged between 35 and 70 years from rural and urban areas. The PA was assessed using the International Physical Activity Questionnaire (IPAQ). Multiple logistic regression was performed to determine the association between PA and residence area and the type of dyslipidemia. Linear regression was used to determine the effect of PA on the cholesterol, HDL, LDL and triglycerides levels. Results The prevalence of low PA in rural individuals was 5.1 per cent (4.3 per cent women and 6.0 per cent men), urban 11.2 per cent (7.9 per cent women and 5.5 per cent men), p<0,001. Dyslipidemia was present in 75.3 per cent of rural and 68 per cent of urban individuals (p<0.001). In rural women 80.6 per cent and urban women 65.7 per cent (p <0.001), rural men 69.1 per cent and urban men 71 per cent (p=0.369). The medians of lipid levels among women were: total cholesterol (CT) 164,5 mg/dl rural and 201,5 mg/dl urban (p<0,001), HDL 44,5 mg/dl rural and 50,1mg/dl (p<0,001), LDL 120,3 mg/dl rural e 122,6 mg/dl urban (p=0,35), triglycerides 127,1 mg/dl rural e 117,8 urban (p<0,001). Among men the medians of lipid levels were CT 189,5 mg/dl rural e 196,1 mg/dl urban (p=0,002), HDL 40,2 mg/dl rural e 41,8 mg/dl urban (p<0,001), LDL 118,3 mg/dl rural e 121,4 mg/dl urban (p=0,5), triglycerides 131,1 mg/dl rural e 147,0 mg/dl urban (p=0,001). Low HDL level was the most frequent. Household, transportation and occupational PA are associated with reduced risk of dyslipidemia. The effect of household PA on HDL level was 1,001 mg/dl among rural women (p=0.021) and 1,114 mg/dl (p<0.001) among urban women. In urban men, the effect of transportation PA on LDL level was -1.42 mg/dl (p<0.001). The effects of occupational PA on HDL level was 1.002 mg/dl among rural men (p<0.001) and 0.042 mg/dl among urban men (p=0.04). Conclusion There are strong indications about the interaction of physical activity and residence area with dyslipidemia and lipid profile. The observed associations between household, transportation, occupational physical activities and dyslipidemia suggest complementary ways in strategies for cardiovascular disease prevention in the Brazilian population.

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Os antígenos protéicos da membrana externa parecem ser a melhor alternativa para substituir as vacinas atualmente disponíveis, porém, após diversos estudos, nenhum apresentou resultados satisfatórios. O objetivo deste trabalho foi avaliar antígenos recombinantes e preparações vacinais, capazes de conferir proteção de amplo espectro, em hamsters (Mesocricetus auratus). Neste estudo, quatro novas proteínas recombinantes de Leptospira spp foram obtidas e testadas no modelo de leptospirose aguda em hamster para avaliar vacinas experimentais. A análise in silico do genoma de L. interrogans sorogrupo Icterohaemorrhagie sorovar Copenhageni cepa FIOCRUZ L1-130 foi realizada para identificar genes alvo potenciais para o desenvolvimento de vacinas de subunidade. Quatro genes foram selecionados para expressão de proteínas recombinantes em sistema de expressão heteróloga em Escherichia coli: lic10260, lic10365, lic11207 e lic11360, que codificam para prováveis lipoproteína de membrana externa. Os genes foram amplificados a partir do DNA genômico de L. borgpeterseni sorogrupo Ballum cepa 4E. Os procedimentos de clonagem resultaram nos vetores recombinantes pAE/lic10260, pAE/lic10365, pAE/lic11207 e pAE/lic11360. As proteínas recombinantes foram eficientemente expressas nesse sistema de expressão e posteriormente, utilizadas na imunização de hamsters que foram subsequentemente desafiados com dose letal de L. borgpeterseni sorovar Ballum 4E. A resposta imune humoral induzida pelas proteínas foi avaliada por ensaio imunoenzimático (ELISA) e verificou-se que, pelo menos uma das formulações vacinais para cada proteína produziu resposta humoral significativa estatisticamente (p < 0,05). As proteínas rLIC10260, rLIC10365, rLIC11207 e rLIC11360 mostraram-se imunogênicas, tornando promissora sua utilização como vacinas contra leptospirose. / Leptospirosis is a widespread zoonosis caused by spirochetes from genus Leptospira. The disease is considered a problem in both public health and veterinary areas, affecting mainly tropical and subtropical developing countries. In veterinarian medicine, leptospirosis is an important disease for both clinic and production sectors due to the public health risks, reproductive failures and death, culminating in considerable economic losses for the area. Animal vaccination is taken as a prevention measure, however the acquired protection by the vaccines is, in most cases, weak and allows the spreading of the disease. The outer membrane antigens seems to be the best alternative to substitute the currently available vaccines, however, after several studies, none of them presented satisfactory results. The aim of the present work was the production and evaluation of four recombinant antigens in order to elicit broad spectrum protection in hamster, the susceptible experimental model (Mesocricetus auratus). An in silico analysis in L. interrogans serogroup icterohaemorrhagie serovar Copenhageni strain FIOCRUZ L1-130 was run in order to identify potential genes for subunit vaccine development. Four genes were selected, amplified, cloned into vectors and expressed in Escherichia coli: lic10260, lic10365, lic11207, lic11360. These gene products are potential outer membrane lipoproteins and were amplified from L. borgpeterseni serugroup Ballum strain 4E. The cloning procedures resulted in the recombinant vectors pAE/LIC10260, pAE/LIC10365, pAE/LIC11207 and pAE/LIC11360 and its purified products were inoculated in hamsters and their humoral response was evaluated per Enzyme-linked Immunossorbent Assay (ELISA). It was possible to verify that at least one of the vaccinal preparations for each protein was able to induce statistically significant humoral response (p < 0.05). The four obtained proteins showed immunogenic response, making them promising recombinant antigens for use against leptospirosis.

A disfunção endotelial é um dos componentes básicos tanto da origem como das complicações de algumas doenças cardiovasculares, principalmente aquelas devidas a aterosclerose. Fatores de risco que compõe a Síndrome Metabólica (SMet) interferem na integridade endotelial por causarem marcante estresse oxidativo e conseqüente disfunção endotelial. Os benefícios de um treinamento físico de longa duração sobre o endotélio e sobre a concentração das lipoproteínas já são conhecidos. Entretanto, ainda restam lacunas de conhecimento dos efeitos que um treinamento de curta duração produziria em pacientes portadores de Síndrome Metabólica. Para elucidarmos este assunto, estudamos 40 indivíduos sedentários sendo 30 portadores de SMet e 10 normais para controle. Vinte dos pacientes com SMet (10 mulheres e 10 homens) realizaram treinamento físico (TF) aeróbio de moderada intensidade, em bicicleta ergométrica, por um período de 3 meses. A reatividade vascular e testes funcionais in vitro das lipoproteínas HDL e LDL foram realizados antes e depois do TF. Os resultados indicam melhora na unção endotelial, porém sem mudanças do índice de massa corpórea e dos níveis lipídicos. Houve redução da circunferência abdominal e dos níveis de Triglicérides. Os testes funcionais revelaram que, apesar de não terem ocorrido alterações na concentração, houve melhora funcional das lipoproteínas. Portanto, exercício de curta duração melhora a funcionabilidade endotelial e das lipoproteínas. / Endothelial dysfunction is one of the basic components of origin and complications of some cardiovascular diseases, especially those consequent to atherosclerosis. Risk factors that compose the Metabolic Syndrome (MetS) modify the endothelial integrity causing significant oxidative stress and consequent endothelial dysfunction. The long-term exercise training benefits in lipoproteins concentration and endothelium are already known. However, the effects of short-term training in endothelial function and in LDL, HDL quantitative and functional profile are still doubtful, especially in patients with MetS. To address this issue, we studied 40 sedentary persons, 30 with MetS and 10 controls. Twenty of those with MetS (10 women and 10 men) were subjected to a 3 times/week moderate intensity controlled training load for 3 months on a bicycle ergometer. Vascular reactivity and in vitro HDL, LDL functional laboratorial tests were analyzed before and after the training. The results revealed that exercise training improved the endothelial function. There was no significant change in body mass index, but some reduction in the abdominal circumference was observed. Total cholesterol and lipoprotein concentrations were not affected by exercise, but triglyceride levels were reduced and lipoprotein subfractions functional tests significantly improved. Therefore, short-term exercise improves endothelium and lipoprotein functionability.

Entre 5,3 e 12% das mulheres com endometriose apresentam a forma mais severa da doença, com comprometimento profundo do intestino, cujo principal tratamento é cirúrgico, porém com alta taxa de complicações: recorrência das lesões, fístulas, hemorragias, infecção, suboclusão intestinal e disfunção vesical e/ou intestinal. O tratamento medicamentoso visa inibir o crescimento dos focos por meio do bloqueio ovariano, com boa redução da dor, mas sem diminuição dos nódulos endometrióticos, e maiores efeitos colaterais pela longa duração do tratamento. Atualmente, drogas podem ser acopladas a nanopartículas que tenham afinidade com tecidos doentes, de forma a serem entregues diretamente aos mesmos, sem efeitos sistêmicos significativos e com eficácia superior no controle das lesões. Há evidências de que células em alta divisão apresentam maior captação de LDL que células normais, para síntese de membrana. Em diversos tipos de câncer, doenças reumatológicas, aterosclerose, mieloma múltiplo e na cardiomiopatia diabética, a necessidade significativamente maior de LDL permitiu bons resultados terapêuticos acoplando-se um quimioterápico à LDE (nanoemulsão artificial semelhante à LDL e que se liga ao mesmo receptor). Na endometriose, assim como no câncer, há fatores de crescimento e citocinas associados à multiplicação celular, e também há superexpressão dos receptores de LDL nas lesões de endometriose. Além disso, mulheres com endometriose intestinal apresentam níveis plasmáticos menores de LDL que o grupo sadio. Este estudo avaliou a captação da emulsão de LDE marcada radioativamente pelos receptores na superfície do foco endometriótico, para posteriormente testar a capacidade da LDE de interiorização celular. Tratou-se de um estudo-piloto comparativo entre três grupos: endometriose intestinal e não-intestinal, e sem endometriose. Antes do tratamento cirúrgico, foi determinado o perfil lipídico das pacientes e foi injetada a LDE marcada. Foi dosada a radioatividade das amostras de tecidos coletados (endometriose intestinal e não-intestinal, peritôneosadio e endométrio tópico). Na comparação entre os grupos, não houve diferença significativa nos parâmetros (p > 0,01), possivelmente devido à amostra pequena. Mas o grupo com endometriose intestinal tendeu a apresentar um IMC mais baixo que os demais, com maior sintomatologia álgica e níveis mais altos de LDL. A captação de LDE no peritôneosadio foi maior no grupo com endometriose não intestinal. O endométrio tópico e os focos de endometriose intestinal captaram mais LDE que os de não-intestinal, sugerindo maior divisão celular e menos fibrose. A comparação da captação da LDE por local mostrou uma tendência a captação decrescente entre endométrio tópico, peritôneo sadio e lesão de endometriose. Como os focos de endometriose (intestinal ou não) captaram de maneira significativa a LDE, conclui-se que há consumo aumentado de LDL nas lesões de endometriose, assim como no câncer e nas doenças inflamatórias. Não houve diferença dos níveis de colesterol plasmático na captação da LDE, comprovando a entrega direta da nanoemulsão aos tecidos em alta divisão celular, independente das lipoproteínas séricas. Estes resultados abrem caminho para novos estudos de avaliação da nanotecnologia como opção terapêutica às cirurgias radicais, com menores complicações e sem efeitos colaterais sistêmicos / Between 5.3% and 12% of women with endometriosis present the most severe form of disease, with deep intestinal involvement, mainly treated by surgery, which has a high rate of complications: recurrence of lesions, fistulas, hemorrhage, infection, intestinal subocclusion and bladder and / or bowel dysfunction. Drug treatment aims to inhibit foci growth by means of ovarian blockage, with good reduction of pain, but with no effect on endometriotic nodules, and frequent side effects due to the long duration of treatment. Currently, drugs can be coupled to nanoparticles that have affinity with compromised tissues, in order to be delivered directly to them, without significant systemic effects and with superior efficacy in the control of lesions. There are evidences that cells in high division have higher uptake of LDL than normal cells, for membrane synthesis. In several types of cancer, rheumatic diseases, atherosclerosis, multiple myeloma and in diabetic cardiomyopathy, the significantly greater need for LDL allowed good therapeutic results by coupling a chemotherapeutic to LDE (an artificial nanoemulsion similar to LDL that binds to the same receptor). In endometriosis, as well as in cancer, there are growth factors and cytokines associated with cell multiplication, and there is also overexpression of LDL receptors in endometriosis lesions. In addition, women with intestinal endometriosis have higher plasma LDL levels than healthy ones. This study evaluated the uptake of radioactively labeled LDE emulsion by receptors on the surface of endometriotic foci, to later test the LDE capacity of cellular interiorization. It was a comparative pilot study between three groups: patients with intestinal and non-intestinal endometriosis, and without endometriosis. Before surgical treatment, the lipid profile of patients was determined and labeled LDE nanoemulsion was injected. The radioactivity of the collected tissue samples (intestinal and non-intestinal endometriosis, healthy peritoneum and topical endometrium) was measured. In the comparison between groups, there was no significant difference in parameters (p > 0.01), possibly due to the small sample. But the group with intestinal endometriosis tended to present a lower BMI than others, with greater pain symptomatology and higher levels of LDL. LDE uptake in healthy peritoneum was higher in the non-intestinal endometriosis group. The topical endometrium and foci of intestinal endometriosis uptaked more LDE than non-intestinal ones, suggesting greater cell division and less fibrosis. Comparison of LDE uptake per site showed a tendency toward decreasing uptake between topical endometrium, healthy peritoneum and endometriosis lesion. As endometriosis foci (intestinal or not) have uptaked LDE on a significant level, the conclusion might be that there is an increased consumption of LDL by endometriosis lesions, as well as in cancer and inflammatory diseases. There was no difference between plasma cholesterol levels and LDE uptake, demonstrating the direct delivery of the nanoemulsion to tissues in high cell division, independent of serum lipoproteins. These results open the way for new studies evaluating nanotechnology as a therapeutic option for radical surgeries, with lower complications and no systemic side effects

Estudos anteriores em nosso laboratório demonstraram que pacientes portadores de DAC apresentam diferenças no metabolismo do CL e CE de uma nanoemulsão artificial rica em colesterol (LDE), nos quais o CL apresentou maior remoção plasmática e depósito arterial. Dando continuidade a esta linha de pesquisa, neste trabalho foram avaliadas a cinética plasmática, representada pela taxa fracional de remoção (TFR), e a captação do 3H-colesterol livre (3H - CL) e 14C - colesterol esterificado (14C - CE) da LDE por segmentos arteriais e por órgãos de coelhos normais (n=17) e coelhos submetidos à indução de aterosclerose por dieta rica em colesterol (1%) (n=13). Além disso, avaliou-se a captação in vitro do 3H CL e do 14C CE da LDE por células endoteliais aórticas de coelhos. Por último, foi avaliada a influência da inibição da enzima lecitina-colesterol aciltransferase (LCAT), e indiretamente, a esterificação do CL em ratos normais (n=9) e tratados com diazepam (n=9). Em coelhos que receberam dieta normal, não houve diferença entre a remoção plasmática do 3H - CL e do 14C - CE. Em coelhos que desenvolveram hiperlipidemia e aterosclerose através de dieta rica em colesterol, o 3H - CL foi removido mais rapidamente da circulação do que o 14C - CE (p<0,05), entretanto houve maior captação de 14C - CE do que de 3H - CL no arco aórtico (p<0,05). Em ambos os grupos, os principais órgãos captadores de colesterol da LDE foram fígado, pulmão, adrenais e baço (p<0,05). Tanto a TRF quanto a captação hepática de 3H - CL e 14C - CE foram menores no grupo que recebeu a dieta rica em colesterol. Em células endoteliais aórticas de coelhos, a captação de 3H - CL foi maior que a de 14C CE independente da massa de LDE incubada (p<0,01). Em ratos, não houve diferença entre a captação das duas formas de colesterol da LDE pela aorta no grupo controle, entretanto, quando a atividade da LCAT foi diminuída pelo tratamento com diazepam, a captação arterial de 3H - CL foi maior do que a de 14C - CE (p< 0,01). A hiperlipidemia e distúrbios no processo de estabilização do colesterol, favorecem a dissociação entre o CL e o CE das lipoproteínas, e podem elevar o risco de desenvolvimento da aterosclerose, assim como agravar o processo de aterogênese. / I n previously studies, it was shown that free cholesterol (FC) and cholesterol ester (CE) of a cholesterol-rich nanoemulsion (LDE) behaves differently in patients with coronary artery disease (CAD). The FC plasma clearance and arterial deposition is greater than CE. In the present study we evaluate the plasma kinetics, estimated by the fractional clearance rate (FCR), and the tissue uptake of 3H-free cholesterol (3H FC) and of 14C cholesterol ester (14C - CE) of LDE by arterial segments and organs of rabbits with (n=13) and without atherosclerosis (n=17). Furthermore, it was evaluated the in vitro uptake of 3H FC and 14C - CE by rabbit aortic endothelial cells. Finally, it was evaluated the inhibition of the enzyme lecithin-cholesterol acyltransferase (LCAT), and indirectly, the FC esterification in rats non-treated (n=9) and treated with diazepam (n=9). In rabbits without atherosclerosis that received an standard diet there was no difference between the plasma clearance of 3H FC and 14C CE. In rabbits with hyperlipidemia and atherosclerosis induced by the cholesterol-rich diet the 3H - FC was removed faster than 14C - CE (p<0.05), however the arch aortic uptake of 14C CE was greater than of 3H - FC (0p<0.05). In both groups, liver, lungs, adrenals and spleen were the principal sites of LDE cholesterol uptake. The FCR and tissue uptake were smaller in rabbits with than those without atherosclerosis. In rabbit aortic endothelial cells the 3H - FC uptake was greater than 14C CE independently of incubated LDE mass (p<0.01). In control rats there was no difference on the arterial uptake of both cholesterol forms of LDE, but when the LCAT activity was diminished by the diazepam treatment, the arterial uptake of 3H FC were greater than 14C CE (p< 0.01). The hyperlipidemia and cholesterol stability alterations may lead to dissociation between lipoproteins FC and CE. This dissociation may increase the risk for atherosclerosis and likewise enhance the severity of atherosclerosis.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-05-24T17:14:51Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Nut_ Anna Karla Roriz.pdf: 600029 bytes, checksum: a128c03681b70e123b2a092659ad818d (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-05-29T20:06:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Nut_ Anna Karla Roriz.pdf: 600029 bytes, checksum: a128c03681b70e123b2a092659ad818d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-29T20:06:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Nut_ Anna Karla Roriz.pdf: 600029 bytes, checksum: a128c03681b70e123b2a092659ad818d (MD5) / O excesso de gordura abdominal visceral vem sendo apontado como provável mediador da relação entre distúrbios metabólicos e a ocorrência de eventos cardiovasculares e outras morbidades. A antropometria tem sido estudada enquanto método alternativo para estimativa da gordura visceral e os exames bioquímicos têm boa correlação com esta gordura. Objetivo: Avaliar o desempenho da antropometria na predição de gordura visceral e verificar a existência de correlação entre os exames bioquímicos e a área de tecido adiposo visceral (ATAV) identificada pela tomografia computadorizada em adultos e idosos. Desenho: Validação, Transversal. Metodologia: Duzentos indivíduos foram estratificados por idade, massa corporal e sexo, sendo submetidos à realização da tomografia computadorizada –TC, antropometria (Diâmetro Abdominal Sagital -DAS, Circunferência da Cintura- CC e Razão Cintura-Quadril-RCQ) e à determinação das lipoproteínas: colesterol total- CT e frações, triglicérides-TG, da glicemia e do ácido úrico. Foi realizada análise descritiva, correlação de Pearson para as variáveis de distribuição normal e correlação de Spearman para as variáveis de distribuição não normais, curva ROC e Testes de médias para verificar diferenças entre a média da ATAV de acordo com os pontos de corte dos exames bioquímicos (p <0,05). Resultados: A média da CC foi mais elevada nos idosos quando comparada aos adultos do mesmo sexo. Para o DAS, verificou-se que a média foi maior entre os homens idosos (21,29cm) e a menor média foi observada entre as mulheres adultas (19,4cm). Os idosos de ambos os sexos apresentaram maiores valores de RCQ que os adultos. Foram encontradas correlações superiores a 0,7 (p=0,000) entre o DAS, CC e a ATAV em homens adultos e idosos e para as mulheres adultas. O RCQ apresentou as menores correlações. Os pontos de corte do DAS de melhor sensibilidade e especificidade foram iguais entre os homens (Adultos: 20,2cm/ Idosos: 20,2cm) e diferentes entre as mulheres (Adultas: 21,05cm/ Idosas: 19,9cm). As áreas sob a curva ROC ultrapassaram 0,80 com valores de p=0,000. Os pontos de corte da CC que identificaram uma ATAV 130cm2 foram de 90,2cm e de 92,2cm para os homens (adultos e idosos, respectivamente), enquanto que, para as mulheres, os valores encontrados foram de 92,3cm (adultas) e 88,2cm (idosas). Os idosos apresentaram maiores valores da ATAV, glicemia, ácido úrico e CT. As maiores correlações foram encontradas entre a ATAV e os TG e o VLDL-c (r > 0,5; p < 0,05) em ambos os grupos etários e o acido úrico (r > 0,42; p < 0,05). A média da ATAV mostrou-se sempre mais elevada quando os valores do TG e glicemia estavam alterados, em ambos os grupos etários. Conclusões: A CC e o DAS foram os indicadores que obtiveram melhor desempenho na identificação da gordura visceral. A maioria dos exames apresentou forte correlação com a ATAV identificada pela TC em adultos e idosos. Em idosos, a ATAV de risco para alterações metabólicas parece ser superior ao preconizado para os adultos. / Salvador

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-10-18T17:05:09Z No. of bitstreams: 1 Marcos Soares Vieira.Atividades das paraoxanase... 2013.pdf: 1230050 bytes, checksum: 912c1ef5707ad9fba3fa861c29a41e7e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-18T17:05:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcos Soares Vieira.Atividades das paraoxanase... 2013.pdf: 1230050 bytes, checksum: 912c1ef5707ad9fba3fa861c29a41e7e (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Doenças cardiovasculares (DCV) são as principais causas de morbidade e mortalidade do ocidente, aparecendo como causa mais frequente de óbitos nos países desenvolvidos e em desenvolvimento. Alterações no metabolismo das lipoproteínas estão diretamente relacionadas ao aumento do risco de DCV. Objetivos: Avaliar o remodelamento da partícula HDL determinando a capacidade de incorporação de fosfolipídeos na HDL, a atividade da paraoxonase/aril-esterase (PON), dentre outros marcadores plasmáticos relacionados ao metabolismo da HDL, além da influência da hipertrigliceridemia neste processo. Casuística e Métodos: Estudo de corte transversal, com amostragem por conveniência. Foram avaliados ambulatorialmente 66 indivíduos do sexo masculino, idade entre 32 e 75 anos (média: 51,1), distribuídos em dois grupos, não-hipertrigliceridêmicos (NHipTRI) e hipertrigliceridêmicos (HipTRI), estes últimos estratificados em dois níveis, HipTRI HDL-C≥40 e HipTRI HDL-C<40. Foram realizados testes estatísticos paramétricos e não-paramétricos, utilizando o software GraphPad Prism 5.01 (USA), e as diferenças foram consideradas significantes quando p<0,05 para intervalo de confiança de 95%. Resultados: Não foram observadas diferenças nas prevalências dos fatores de risco para DCV, como sedentarismo, etilismo, hipertensão, diabetes e tabagismo, entre os grupos. A atividade da PON e a incorporação de fosfolipídeos foram similares nos três grupos estudados. O tamanho estimado da partícula HDL foi maior no grupo NHipTRI (0,29±0,05), do que nos grupos hipertrigliceridemicos: HipTRI HDL ≥40 (0,26±0,03), e HipTRI HDL<40 (0,24±0,05). No grupo NHipTRI foi encontrada correlação linear positiva entre a atividade da PON e apoA (r=0,3908, p=0,0484, Pearson). Já no grupo HipTRI HDL≥40 houve correlação positiva entre PON e apoB (r=0,5678, p=0,0342, Pearson). Por outro lado, no grupo HipTRI HDL<40 houve correlação linear negativa entre apoB e incorporação de fosfolipídeos na HDL (r=-0,5144, p=0,0290, Pearson). Conclusão: Desta forma, os resultados sugerem que a hipertrigliceridemia interfere não só no remodelamento da HDL, como também sua capacidade antioxidante. / Cardiovascular diseases (CVD) are the leading causes of morbidity and mortality in the western world and is the major cause of death in developed and developing countries. Lipoprotein metabolism is directly related to the risk of developing CVD. Objectives: this study aimed to evaluate HDL particle remodeling, determining HDL ability to incorporate phospholipids, paraoxonase (PON) activity, among others plasma markers related to HDL metabolism, besides the influence of hypertriglyceridemia in this process. Casuistic and Methods: a cross-sectional study with convenience sampling, were carried out with 66 subjects outpatient males, aged between 32 and 75 years old (mean: 51.1), into nonhypertriglyceridemic (NHipTRI) and hypertriglyceridemic (HipTRI) groups, the HipTRI group were stratified in HipTRI com HDL-C ≥ 40 mg/dL and HipTRI com HDL-C <40 mg/dL. Parametric and non-parametric statistic tests were performed in GraphPad Prism 5.01 (USA), and differences were considered significant when p <0.05 to C.I of 95%. Results: there were no differences in the prevalence of CVD risk factors, such as sedentarism, alcohol drinkers, hypertension, diabetes, and tobacco users in the groups. PON activity and phospholipids incorporation were similar in the three groups. The estimated size of HDL particles was greater in NHipTRI (0.29 ± 0.05) when compared to hypertriglyceridemic groups: HipTRI HDL≥40 mg/dL (0.26 ± 0.03) and HipTRI HDL>40 mg/dL (0.24 ± 0.05). In NHipTRI group positive linear correlation was found between PON activity and apoA (r = 0.3908, p = 0.0484, Pearson). In HipTRI HDL≥40 mg/dL group, positive correlation were found between PON and apoB (r = 0.5678, p = 0.0342, Pearson). On the other hand, HipTRI HDL<40 mg/dL shows a negative linear correlation between apoB and phospholipids incorporation into HDL (r = -0.5144, p = 0.0290, Pearson). Conclusion: the results suggest that hypertriglyceridemia can affect both remodeling of particles HDL, as their antioxidant capacity.