Lippia alba é uma espécie nativa, conhecida como erva cidreira , utilizada na medicina popular para o tratamento de distintas afecções. Estudos farmacológicos atribuem a sua atividade antimicrobiana aos terpenóides presentes no óleo essencial. Considerando a variação na composição de óleos essenciais de L. alba, o presente trabalho teve por objetivo determinar a composição química do óleo essencial de sete acessos de L. alba coletados no sul do Brasil, e avaliar a atividade antimicrobiana dos mesmos sobre um painel de 22 espécies bacterianas e 9 espécies de leveduras. Os óleos essenciais foram extraídos por hidrodestilação e analisados por Cromatografia gasosa e Cromatografia gasosa acoplada a um detector seletivo de massas. A atividade antimicrobiana (Dose de inibição 50% e Concentração inibitória mínima) foi determinada através do método de diluição seriada (0 a 10 mg/ml) em microplacas, com avaliação do crescimento por absorbância a 595nm. Para a determinação de Dose de inibição 50% e Concentração inibitória mínima foram consideradas as concentrações de óleo essencial que reduzidam o crescimento em 50% e 90%, respectivamente. A atividade bactericida e bacteriostática foi deteminada após 3h de tratamento dos microrganismos com a Concentração inibitória mínima pré-determinada para cada óleo. Com base nos seus componentes majoritários, os resultados permitiram caracterizar os sete acessos de L. alba como pertencentes aos quimiotipos: citral, 1,8-cineol/cânfora, linalol, linalol/mirceno/cânfora, carvona/cariofileno, linalol/1,8-cineol/germacreno D, e limoneno. Entre os quimiotipos, o óleo essencial citral exibiu o espectro antimicrobiano mais amplo, inibindo tanto bactérias como leveduras. Óleos com alta concentração de carvona/cariofileno e limoneno foram particularmente eficientes sobre leveduras, enquanto os quimiotipos linalol e linalol/1,8-cineol/germacreno D exibiram atividade inibitória sobre várias bactérias Gram positivas e negativas. Na Concentração inibitória mínima, o quimiotipo citral mostrou ação bactericida sobre leveduras e Salmonella sp. Entretanto, outros óleos apresentaram apenas efeito bacteriostático sobre a maioria dos microrganismos avaliados. Em geral, nossos resultados confirmam a atividade dos óleos essenciais de L. alba sobre microrganismos de importância clínica e industrial, mas apontam a necessidade de avaliação adequada da composição dos mesmos afim de escolher aquele mais efetivo para o controle de um microrganismo específico. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-04T18:06:34Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Fernanda Formolo.pdf: 1268224 bytes, checksum: 2cde3df8d5929f9192359c2c9beb98df (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-04T18:06:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Fernanda Formolo.pdf: 1268224 bytes, checksum: 2cde3df8d5929f9192359c2c9beb98df (MD5) / Lippia alba is a native species, known as "erva cidreira", currently used in folk medicine for the treatment of several diseases. Pharmacologic studies attributed their antimicrobial activity to the terpenoids present in the essential oils. Considering the variation on essential oil composition among L. alba accessions, the present work aimed to determine the essential oil composition of seven accession of L. alba collected in South Brazil, and to evaluate their antimicrobial activity against a panel of 22 bacterial and 9 yeast species. Essential oils were extracted by hydrodistillation and analyzed by GC and GC/MS. Antimicrobial activity (ID50 and MIC) were determined by a serial dilution method (0 to 10 mg/ml) on microplates with growth evaluation by absorbance at 595nm. For ID50 and MIC determination were considered the essential oil concentrations that reduced microbial growth on 50% and 90%, respectively. Bactericidal and bacteriostatic activities were determined after 3h treatment of the microorganisms with their individual MIC of each essential oil. Based on their main constituents, the results allowed characterizing the seven accessions of L. alba as chemotypes: citral, 1,8-cineol/camphor, linalool, linalool/mircene/camphor, carvone/caryophyllene, linalool/1,8-cineol/germacrene D, and limonene. Among these chemotypes, citral essential oils showed the largest antimicrobial spectrum, inhibiting both bacteria and yeasts. Oils with high concentration of carvone/caryophyllene, and limonene, were particularly effective against yeasts, and oils from chemotypes linalool and linalool/1,8-cineol/germacrene D exhibited inhibitory activity against several Gram positive and negative bacteria. At the MIC, citral showed bactericide effect on yeasts and Salmolella. However, other oils showed just bacteriostatic effects on most microorganisms. In general, our results confirm the activity of L. alba essential oils on both clinical and industrial microorganisms, but point out the necessity to properly evaluate essential oil composition to choose those more effective for the control of a specific microorganism.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work was divided into three parts focusing two main topics: the study of volatiles compouds of P. graveolens and the study of the essential oil of L. alba and its evaluation of insecticidal activity against Spodoptera frugiperda. The chapter 2 approuch the study of the volatile compounds of the leaves of P. graveolens extracted by dynamic headspace using Porapak Q® as adsorbent and in nature peat, a novel adsorbent in the extraction of plant volatiles, and the results were compared with those obtained by hidrodestilation. The results showed that hydrodistilation (HD) was more efficient for extracting linalool and citronellyl formate. While citroneol, geraniol and geranyl tiglate were obtained in greater quantity by dynamic headspace using in nature peat (HSD-T), isomenthone, 6,9- guaiadiene and - muurolene by headspace using Porapak Q® (HSD-P). The study of conversion proved that geraniol converts in linalool when geraniol is subjected to water vapor and high temperature, nevertheless a small ratio. This also prove, in parts, the high percentage of linalool obtained by HD compared to HSD-T and HSD-P. The chapter 3 approuch the study of the essential oils of 9 accessions of L. alba collected in 4 states of Brazil using statistical methods and checking the accessions with the best essential oil content. The statistical methods of hierarchical cluster analysis (HCA) and Principal component analysis (PCA) were used to prove the experimental data and confirmation of training groups. Three groups representatives of the three chemotypes were formed: Group I was characterized by linalool and 1,8-cineole; group II, by limonene and carvone; and group III by neral and geranial. In chapter 4 was approached the evaluation of insecticidal activity of the essential oils of P. graveolens (PEL-001) and L. alba (accessions LA-10, LA-22 and LA-57) and also of the main compounds (geraniol, linalool, 1,8-cineole, limonene, carvone) against S. frugiperda via topical aplication. The test of topical application showed that the essential oils of P. graveolens (PEL-001) and L. alba (accessions LA-10, LA-22, LA-57) showed acute toxicity against larvae of S. frugiperda, causing mortality of up to 100% at a dose 192 μg/larvae. / O presente trabalho foi dividido em 3 partes os quais abordam 2 temas centrais: estudo dos compostos voláteis de Pelargonium graveolens e do óleo essencial de Lippia alba e avaliação de atividade inseticida frente à Spodoptera frugiperda. O capítulo 2 abordou o estudo dos voláteis das folhas de P. graveolens extraídos por headspace dinâmico utlizando Porapak Q® como adsorvente e turfa in natura, um adsorvente inédito empregado na extração de voláteis de plantas, sendo os resultados comparados com àqueles obtidos por hidrodestilação. Os resultados mostraram que a hidrodestilação (HD) foi mais eficiente na extração de linalol e formiato de citronelila. Enquanto citronelol, geraniol e tiglato de citronelila foram obtidos em maior proporção por headspace dinâmico utilizando turfa in natura como adsorvente (HSD-T), isomentona, 6,9- guaiadieno e -muuroleno foram identificados em maior proporção por headspace dinâmico utilizando Porapak Q® (HSD-P). O estudo de conversão comprovou que geraniol se converte em linalol, quando o geraniol é submetido a vapor d água e altas temperaturas, porém a um pequeno percentual. Isso também comprova, em partes, o alto percentual de linalol obtido por HD em relação à HSD-T e HSD-P. A extração do hidrolato revelou variações na composição volátil em comparação com os outros métodos de extração. O Capítulo 3 abordou o estudo dos óleos essenciais de 9 acessos de L. alba coletados em 4 estados do Brasil empregando métodos estatísticos e verificando os acessos com melhores teor de óleo essencial. Os métodos estatísticos de análise hierárquica de agrupamentos (HCA) e análise de componentes principais (PCA) foram empregados para comprovar os dados experimentais e confirmar a formação dos grupos. Três grupos, representando os três quimiotipos, foram formados, dos quais o grupo I foi caracterizado por linalol e 1,8-cineol, grupo II por limoneno e carvona e grupo III por neral e geranial. No capítulo 4 foi abordado a avaliação de atividade inseticida dos óleos essenciais de P. graveolens (PEL-001) e L. alba (acessos LA-10, LA-22 e LA-57), bem como dos seus principais compostos majoritários (geraniol, linalol, 1,8-cineol, limoneno e carvona) frente à S. VII frugiperda. O ensaio de aplicação tópica mostrou que óleos essenciais de P. graveolens (PEL-001) e L. alba (acessos LA-10, LA-22, LA-57) apresentaram toxicidade aguda nas lagartas S. frugiperda, ocasionando mortalidade de até 100% na dose 192 μg/lagarta.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham.) is a medicinal and aromatic plant, native Northeast Region of Brazil, which has an essential oil widely used for its properties as bactericide, fungicide, molluscicide, and larvicide. This paper aimed to characterize and evaluate the performance of accessions of pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham.) native to various States of the Northeast Region, kept in Germplasm Bank at São Cristóvão, Sergipe, Brazil. The first chapter presents the general introduction, the literature review on genetic resources and sustainability of agroecosystems, origin, ethnobotany, and germplasm characterization (morphological, agronomic and chemical). The second chapter presents and discusses the data on the morphological and agronomic characterization of accessions of pepper-rosmarin cultivated in field with seedlings from stem cuttings, using a randomized complete block design with two replications. The evaluated variables were: plant height, fresh and dry matter from leaves and stem, width and length of leaves, color of leaves and stem, crown shape, and content and yield of essential oil. Results showed morphological differences among accessions for color of stem, crown shape, plant height, width and length of leaves and ratio length/width of leaves. For agronomic variables, there were significant differences for content and yield of essential oil with the best and worst performance for accessions LSID-005 and LSID-105, respectively. Third chapter presents the data on performance evaluation of pepper-rosmarin, during two years of field cultivation, for the variables: plant height, fresh and dry matter of stem and leaves, content and yield of essential oil, and the content of chemical components of the essential oil. The higher averages found for content (7,68 %) and yield (56,46 mL plant- 1) essential oil were produced by the accession LSID-105, in 2005, and by LSID-102, in 2006, respectively. The higher averages for content of thymol (90,82 %) and carvacrol (56,05 %) were obtained from the accessions LSID-003 and LSID-104, respectively, both in 2006. The accession LSID-104, native to Sergipe State, presented carvacrol as major chemical component. All the other accessions presented thymol as major chemical component. All the accessions, in both years, presented phenotypical variability for all the evaluated variables, except for content of terpil-4-ol. Fourth chapter presents the evaluation of influence of dry and rainy seasons on the performance of accessions of pepper-rosmarin, using the variables: plant height, dry matter of leaves, content and yield of essential oil and content of chemical components of the essential oil. For the majority of the studied accessions, the thymol content was higher during the rainy season. LSID-102 accession presented high yield of essential oil (56,46 mL plant- 1) and thymol content between 47,97 % and 64,95 %. LSID-003 accession yielded 10,06 mL plant-1 of essential oil amd thymol content of 90,02 %. LSID-104 accession presented high content of carvacrol (54,68%) and low content of thymol (7,88 %). Fifth chapter presents the evaluation of the influence of leaves dehydration (at 40 °C for 5 days) on the content of essential oil and its chemical components of 11 accessions of pepper-rosmarin harvested during dry and rainy season. Generally, drying of leaves modified the content of most of the chemical constituents. In relation of the major iv chemical constituents, drying modified thymol content, but did not modified the carvacrol content of the essential oil of the pepper-rosmarin accessions. / Alecrim-pimenta (Líppia sidoides Cham.) é uma planta medicinal e aromática, nativa do Nordeste do Brasil, cujo óleo essencial é utilizado em virtude de suas propriedades bactericida, fungicida, moluscida e larvicida. Este trabalho visou caracterizar e avaliar o comportamento de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.), de vários Estados do Nordeste do Brasil, mantidos em Banco Ativo de Germoplasma em São Cristóvão. No primeiro capítulo, apresentou-se a introdução geral do trabalho, o referencial teórico sobre recursos genéticos e sustentabilidade de agroecossistemas, a origem, os aspectos botânicos e de uso de alecrim-pimenta, a conservação de recursos genéticos e a caracterização de germoplasma (caracterização morfológica, agronômica e química). O segundo capítulo consistiu da caracterização morfológica e agronômica de acessos de alecrim-pimenta cultivados em campo, utilizando-se delineamento experimental em blocos ao acaso com duas repetições. Foram avaliadas as variáveis: altura de planta, massa fresca e seca de folha e caule, largura e comprimento de folha, cor de folha, formato de copa, teor e rendimento de óleo essencial. Os resultados mostraram diferenças morfológicas nos acessos para as variáveis: cor de caule, formato de copa, altura de planta, comprimento e largura de folha e relação comprimento/largura de folha. Para as características agronômicas, foram evidenciadas diferenças significativas para teor e rendimento óleo essencial, sendo o acesso LSID-005 o mais promissor e o acesso LSID-105 o menos promissor. No terceiro capítulo estudou-se o comportamento de acessos de alecrim-pimenta em dois anos de cultivo, e foram avaliadas as variáveis: altura de planta, massa fresca de caule e folha, teor, rendimento e teores dos constituintes químicos do óleo essencial. As maiores médias encontradas para os caracteres teor e rendimento de óleo essencial foram do acesso LSID-105, com 7,68 % no ano de 2005, e do acesso LSID-102, com 56,46 mL planta-1 no ano de 2006, respectivamente. As maiores médias de timol e de carvacrol foram encontradas no acesso LSID-003, com 90,82 % e do acesso LSID-104, com 56,05 % respectivamente, ambos no ano de 2006. O acesso LSID-104, oriundo do Estado de Sergipe, apresentou como constituinte químico majoritário o carvacrol. Os demais acessos têm o timol como constituinte químico majoritário. Todos os acessos, nos dois anos de cultivo, apresentaram variabilidade fenotípica para todas as variáveis analisadas, exceto para teor de terpil 4-ol. No quarto capítulo, avaliou-se a influência das épocas seca e chuvosa no comportamento de acessos de alecrim-pimenta, avaliandose as variáveis: massa fresca e seca de folha, teor e rendimento do óleo essencial e os teores dos constituintes químicos do óleo essencial. Observou-se que, para a maioria dos acessos de alecrim-pimenta estudados, o teor de timol é maior na época chuvosa do que na seca. O acesso LSID-102 apresentou alto rendimento de óleo essencial, porém com teor de timol entre 47,97 % e 64,95 %. O acesso LSID-003 apresentou rendimento de óleo essencial de 10,06 mL planta-1 e teor de timol de 90,02 % e, o acesso LSID-104 apresentou alto teor de carvacrol (média de 54,68 %) e baixo teor de timol (média de 7,88 %). No quinto capítulo, estudou-se a influência da secagem das folhas no óleo essencial de acessos de alecrim-pimenta. Testou-se a influência da secagem das folhas a 40º C por cinco dias em 11 acessos de alecrim-pimenta, colhidas nas estações seca e chuvosa. Avaliaram-se o teor de óleo essencial e os teores dos constituintes químicos no ii óleo essencial. A secagem proporcionou redução de teor de óleo essencial de alecrimpimenta quando colhido na estação seca. Em geral, a secagem alterou os teores da maioria dos constituintes químicos. Em relação aos constituintes químicos majoritários, a secagem alterou o teor de timol, mas não alterou o teor de carvacrol do óleo essencial de acessos de alecrim-pimenta.

Lippia alba é uma espécie nativa, conhecida como erva cidreira , utilizada na medicina popular para o tratamento de distintas afecções. Estudos farmacológicos atribuem a sua atividade antimicrobiana aos terpenóides presentes no óleo essencial. Considerando a variação na composição de óleos essenciais de L. alba, o presente trabalho teve por objetivo determinar a composição química do óleo essencial de sete acessos de L. alba coletados no sul do Brasil, e avaliar a atividade antimicrobiana dos mesmos sobre um painel de 22 espécies bacterianas e 9 espécies de leveduras. Os óleos essenciais foram extraídos por hidrodestilação e analisados por Cromatografia gasosa e Cromatografia gasosa acoplada a um detector seletivo de massas. A atividade antimicrobiana (Dose de inibição 50% e Concentração inibitória mínima) foi determinada através do método de diluição seriada (0 a 10 mg/ml) em microplacas, com avaliação do crescimento por absorbância a 595nm. Para a determinação de Dose de inibição 50% e Concentração inibitória mínima foram consideradas as concentrações de óleo essencial que reduzidam o crescimento em 50% e 90%, respectivamente. A atividade bactericida e bacteriostática foi deteminada após 3h de tratamento dos microrganismos com a Concentração inibitória mínima pré-determinada para cada óleo. Com base nos seus componentes majoritários, os resultados permitiram caracterizar os sete acessos de L. alba como pertencentes aos quimiotipos: citral, 1,8-cineol/cânfora, linalol, linalol/mirceno/cânfora, carvona/cariofileno, linalol/1,8-cineol/germacreno D, e limoneno. Entre os quimiotipos, o óleo essencial citral exibiu o espectro antimicrobiano mais amplo, inibindo tanto bactérias como leveduras. Óleos com alta concentração de carvona/cariofileno e limoneno foram particularmente eficientes sobre leveduras, enquanto os quimiotipos linalol e linalol/1,8-cineol/germacreno D exibiram atividade inibitória sobre várias bactérias Gram positivas e negativas. Na Concentração inibitória mínima, o quimiotipo citral mostrou ação bactericida sobre leveduras e Salmonella sp. Entretanto, outros óleos apresentaram apenas efeito bacteriostático sobre a maioria dos microrganismos avaliados. Em geral, nossos resultados confirmam a atividade dos óleos essenciais de L. alba sobre microrganismos de importância clínica e industrial, mas apontam a necessidade de avaliação adequada da composição dos mesmos afim de escolher aquele mais efetivo para o controle de um microrganismo específico. / Lippia alba is a native species, known as "erva cidreira", currently used in folk medicine for the treatment of several diseases. Pharmacologic studies attributed their antimicrobial activity to the terpenoids present in the essential oils. Considering the variation on essential oil composition among L. alba accessions, the present work aimed to determine the essential oil composition of seven accession of L. alba collected in South Brazil, and to evaluate their antimicrobial activity against a panel of 22 bacterial and 9 yeast species. Essential oils were extracted by hydrodistillation and analyzed by GC and GC/MS. Antimicrobial activity (ID50 and MIC) were determined by a serial dilution method (0 to 10 mg/ml) on microplates with growth evaluation by absorbance at 595nm. For ID50 and MIC determination were considered the essential oil concentrations that reduced microbial growth on 50% and 90%, respectively. Bactericidal and bacteriostatic activities were determined after 3h treatment of the microorganisms with their individual MIC of each essential oil. Based on their main constituents, the results allowed characterizing the seven accessions of L. alba as chemotypes: citral, 1,8-cineol/camphor, linalool, linalool/mircene/camphor, carvone/caryophyllene, linalool/1,8-cineol/germacrene D, and limonene. Among these chemotypes, citral essential oils showed the largest antimicrobial spectrum, inhibiting both bacteria and yeasts. Oils with high concentration of carvone/caryophyllene, and limonene, were particularly effective against yeasts, and oils from chemotypes linalool and linalool/1,8-cineol/germacrene D exhibited inhibitory activity against several Gram positive and negative bacteria. At the MIC, citral showed bactericide effect on yeasts and Salmolella. However, other oils showed just bacteriostatic effects on most microorganisms. In general, our results confirm the activity of L. alba essential oils on both clinical and industrial microorganisms, but point out the necessity to properly evaluate essential oil composition to choose those more effective for the control of a specific microorganism.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Lippia gracilis Schauer is a plant that belongs to the Verbenaceae family, is known as “alecrim-da-chapada” or “alecrim-de-tabuleiro”, and occure in the caatinga biome. Because of its bioactive potential, the essential oil of L. gracilis is been tested for control of different agriculture and livestock pests and diseases. One of these pests is the coconut mite, Aceria guerreronis (Acari: Eriophyidae), an important pest of the coconut crop in Brazil. The objective of this study was to evaluate the toxicity and repellency of the essential oil of two genotypes of L. gracilis and their major compounds thymol and carvacrol against the coconut mite (A. guerreronis). Adults of the coconut mite were subjected to increasing concentrations of the essential oils of the genotypes LGRA-106 and LGRA-109, of thymol and carvacrol, allowing the estimation of the lethal concentrations (LC). In addition to toxicity, the repellency of essential oils of L. gracilis, thymol and carvacrol was evaluated by releasing mites in the center of an arena with half area sprayed and the other half unsprayed. The analysis of the chemical composition of the essential oils of L. gracilis identified thymol (52.41%) and carvacrol (49.36%) as the major compounds for genotypes LGRA-106 and LGRA-109, respectively. The genotype LGRA-106 showed higher toxicity (LC50 = 4.73 μL/mL) to the coconut mite compared to the genotype LGRA-109 (LC50 = 30.99 μL/mL). The toxicity of LGRA-106 did not differ from its major compound thymol (LC50 = 5.34 μL/mL). The essential oil of LGRA-106 was 2.3 times more toxic than its major compound thymol at LC90. The LC50 and LC99 of genotypes LGRA-106 (4.73 and 13.18 μL/mL), LGRA-109 (30.99 and 54.33 μL/mL) and carvacrol (6.84 and 45.97 μL/mL) repelled the coconut mite after 24 h of exposure. The LC50 and LC99 of thymol (5.34 and 56.35 μL/mL) presented a neutral effect on the coconut mite after 24 h of exposure. We can conclude that the essential oil of genotype LGRA-106 has potential for development of a product to control the coconut mite. / Lippia gracilis Schauer é uma planta pertencente à família Verbenaceae popularmente conhecida como “alecrim-da-chapada” ou “alecrim-de-tabuleiro” e própria do bioma caatinga. Devido ao potencial bioativo, o óleo essencial de L. gracilis vem sendo testado para o controle de diferentes pragas e doenças na agricultura e pecuária. Uma destas pragas é o ácaro-da-necrose Aceria guerreronis (Acari: Eriophyidae), importante praga da cultura do coqueiro no Brasil. O objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade e repelência do óleo essencial de dois genótipos de L. gracilis e seus compostos majoritários timol e carvacrol ao ácaro-da-necrose (A. guerreronis). Adultos do ácaro-da-necrose foram submetidos a concentrações crescentes dos óleos essenciais dos genótipos LGRA-106 e LGRA-109 de L. gracilis, de timol e carvacrol, possibilitando a estimativa das concentrações letais (CL). Adicionalmente à toxicidade, foi avaliada a repelência dos óleos essenciais de L. gracilis, timol e carvacrol por meio da liberação de ácaros no centro de uma arena com metade pulverizada e metade não pulverizada. A análise da composição química dos óleos essenciais de L. gracilis identificou o timol (52,41%) e o carvacrol (49,36%) como compostos majoritários dos genótipos LGRA-106 e LGRA-109, respectivamente. O genótipo LGRA-106 apresentou maior toxicidade (CL50 = 4,73 μL/mL) ao ácaro-da-necrose em comparação com LGRA-109 (CL50 = 30,99 μL/mL). A toxicidade do LGRA-106 não diferiu do seu composto majoritário timol (CL50 = 5,34 μL/mL). O óleo essencial do LGRA-106 foi 2,3 vezes mais tóxico que do seu composto majoritário timol para CL90. A CL50 e a CL99 dos genótipos LGRA-106 (4,73 e 13,18 μL/mL-1), LGRA-109 (30,99 e 54,33 μL/mL-1) e de carvacrol (6,84 e 45,97 μL/mL-1), repeliram o ácaro-da-necrose após 24 h de exposição. A CL50 e CL99 de timol (5,34 e 56,35 μL/mL) apresentaram efeito neutro sobre o ácaro-da-necrose após 24 h de exposição. Conclui-se que o óleo essencial do genótipo LGRA-106 apresenta potencial para desenvolvimento de um produto para o controle do ácaro-da-necrose.

O potencial farmacológico de espécies do gênero Lippia no tratamento de infecções é conhecido popularmente, assim foi considerado o estudo da atividade da Lippia salviaefolia nativa do cerrado brasileiro. O objetivo do trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana de extratos de Lippia salviaefolia Cham. e sua citotoxicidade, visando aplicação como conservante natural em formulações cosméticas. O ensaio antimicrobiano foi realizado através do método de difusão em placa e determinação do CMI por de microdiluição em microplacas, utilizando os microrganismos: P. aeruginosa ATCC 9027, S. aureus ATCC 6538, E. coli ATCC 8739, C. albicans ATCC 10231. Desenvolveu-se e avaliou-se a estabilidade acelerada de cremes, geis e xampus contendo o extrato de Lippia salviaefolia. As formulações de melhor desempenho quanto à estabilidade foram submetidas ao teste de eficácia de conservante. Avaliou-se segurança das formulações in vitro, em substituto cutâneo dermo-epidérmico por meio de estudos histológicos e o teste de citotoxicidade em cultura de queratinócitos humanos. No teste de atividade antimicrobiana verificou-se que a fração de acetato de etila e a fração de clorofórmio foram frações mais ativas com CMI de 0,2 % para bactérias e fungos. Os testes de eficácia de conservante das formulações contendo fr. ac. etila de L. salviaefolia apresentaram atividade antimicrobiana para bactérias e C. albicans em creme, gel e xampu, para A. niger apresentaram atividade adequada somente em xampu. No teste de citoxicidade foi verificado segurança em concentrações a partir de 0,05 %. Sendo que na concentração de 0,2 %, correspondente ao CMI, se atinge a faixa de segurança apenas com meia hora de contato. Os resultados sugerem que a fração de acetato de etila da Lippia salviaefolia Cham. pode ser utilizada como conservante natural em produtos cosméticos. / The pharmacological potential of species of the Lippia in the treatment of infections has been known popularly, thus was considered the study of the activity of the native salviaefolia Lippia of the Brazilian Cerrado. The purpose of the work was to evaluate the antimicrobial activity of extracts of Lippia salviaefolia Cham. and its citotoxicy aiming the application as natural preservative in cosmetic formulations. The assay antimicrobial was carried through the method of diffusion in plate and determination of the MIC by microdilution, having used the microorganisms: P.aeruginosa ATCC 9027, S. aureus ATCC 6538, E. coli ATCC 8739, C. albicans ATCC 10231. It has developed and evaluated the stability of creams, gels and xampus with the extract of Lippia salviaefolia Cham. The formulations of the best stability performance have submitted to preservative efficacy test. The safe of the formulations has histological evaluated by in vitro. In the test of antimicrobial activity it has verified that the ethyl acetate and the chloroform fraction have been the most active and with CMI of 0.2 % for bacteria and fungus. The tests of effectiveness of preservatives have showed of the formulations contend the ethyl acetate fraction presented antimicrobial activity for bacteria and C. albican in cream, gel and shampoo. On the other hand, against A.niger it has been suitable activity in shampoo. In the citotoxity test, the 0,05 % ethyl acetate fraction has presented interval of security. And in the concentration of 0,2%, corresponding to CMI, safety\'s strip is just reached with half hour of contact. The results have suggested that the ethyl acetate extract of the Lippia salviaefolia Cham. should be used as natural preservative in cosmetic products.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-04-26T15:25:01Z No. of bitstreams: 1 alineamaliadovale.pdf: 14261579 bytes, checksum: 2f07c357436da6480d7aa53e8394fa36 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-12T15:47:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alineamaliadovale.pdf: 14261579 bytes, checksum: 2f07c357436da6480d7aa53e8394fa36 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T15:47:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alineamaliadovale.pdf: 14261579 bytes, checksum: 2f07c357436da6480d7aa53e8394fa36 (MD5) Previous issue date: 2010-02-26 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Lippia alba (Verbenaceae), popularmente conhecida no Brasil como erva cidreira, é amplamente distribuída nas Américas, onde ocorre em praticamente todos os tipos de ambientes, sendo muito cultivada para uso medicinal. A espécie apresenta grande plasticidade fenotípica, sendo possível observar variações quanto ao hábito, filotaxia, forma e dimensão das folhas, o que dificulta sua classificação taxonômica e a sua utilização na farmacologia. Análises anteriores revelaram a existência de diferentes quimiotipos com diferentes atividades farmacológicas. A proposta deste trabalho foi entender a ampla variação fenotípica existente em L. alba, por meio de uma abordagem multidisciplinar, utilizando 32 acessos da espécie coletados em diferentes regiões do Brasil e mantidos sob as mesmas condições ambientais. Além disso objetivou-se contribuir para a caracterização dos acessos e entender melhor os padrões de especiação em Lippia. Dentre os acessos analisados foram encontradas variações morfológicas tanto em caracteres vegetativos quanto em caracteres reprodutivos. Por meio da estimativa da quantidade de DNA por citometria de fluxo foi possível dividir os acessos em sete grupos com quantidades significativamente diferentes de DNA. Os grupos variaram de 2,31 pg a 6,70 pg de DNA. Na contagem cromossômica realizada por análises em células meióticas e mitóticas foram observados seis números cromossômicos diferentes, 2n=30, 2n=34, 2n=51, 2n=58, 2n=60 e 2n=93, evidenciando níveis de ploidia diferentes na espécie. Na análise palinológica foram observados grãos de pólen com abertura di, tri ou tetracolporadas. Os grupos com acessos diplóides e com menores quantidades de DNA apresentaram apenas grãos tricolporados. Os grãos di e tetracolporados foram observados em acessos com maiores níveis de ploidia. Apesar dos resultados do presente estudo não terem auxiliado na divisão de grupos morfológicos bem definidos, eles demonstram que mesmo sob condições controladas os acessos apresentaram variações morfológicas evidenciando a existência de variação genética como um fator importante para explicar a grande plasticidade fenotípica observada. A existência de níveis de ploidias diferentes sugere que a espécie Lippia alba pode estar em processo de especiação. Além das variações morfológicas e citogenéticas, as variações estomáticas e palinológicas reforçam essa conclusão. / Lippia alba (Verbenaceae), commonly known as erva cidreira in Brazil, is largely widespread in the Americas, where it grows in almost all environments. It is frequently grown for medicinal use. The species presents a high phenotypic plasticity, varying in habit, phyllotaxy, leaf form and size, thus putting difficulties to its taxonomical classification and use in pharmacology. Past analyses revealed the existence of different chemotypes with different pharmacological activities. The proposal of this work was understanding the great phenotypic variation observed in L. alba by making use of a multidisciplinary approach, using 32 accessions of the species collected in different Brazilian regions, and maintained in the same environmental conditions. Furthermore, another goal was characterizing the acessions and to better understand the speciation patterns ocurring in Lippia. Were found morphological variations, among the analyzed accessions, in vegetative and reproductive characters. As a result of estimating DNA quantity by means of flow cytometry, it was possible to split the accessions in seven groups with significant different quantities of DNA. Groups varied between 2.31pg and 6.70pg of DNA. In the chromosomal counting made by means of analyses in meiotic and mitotic cells, were observed six distinct chromosomal numbers (2n=30, 2n=34, 2n=51, 2n=58, 2n=60 e 2n=93), showing different ploidal levels in the species. In the pollen grains analysis were observed di, tri or tetracolporate pollen aperture. Groups with diploid accessions and smaller amounts of DNA showed only tricolporate grains. Even though the results of this study have not contributed in the division of well-defined morphological groups, they demonstrate that even under controlled conditions the accessions present morphological variations showing the existence of genetic variation as an important factor for explaining the great phenotypic plasticity observed. The existence of different ploidal levels suggests that L. alba can be in progress of speciation. Besides morphological and cytogenetic variations, those stomatal and palynological reinforces this conclusion.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-06-21T14:43:48Z No. of bitstreams: 1 viniciuscariusdesouza.pdf: 3785363 bytes, checksum: 7063d6c5f5cef353643903ad5f125c48 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-07T19:09:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 viniciuscariusdesouza.pdf: 3785363 bytes, checksum: 7063d6c5f5cef353643903ad5f125c48 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-07T19:09:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 viniciuscariusdesouza.pdf: 3785363 bytes, checksum: 7063d6c5f5cef353643903ad5f125c48 (MD5) Previous issue date: 2016-03-03 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Lippia alba, popularmente conhecida por erva-cidreira, é uma espécie vegetal amplamente distribuída pelas Américas e encontrada praticamente em todo o território brasileiro. Esta espécie possui importante uso na medicina tradicional para o tratamento de cólicas, indigestão, náuseas, espasmos, diarreia, disenteria, doenças respiratórias, problemas hepáticos e no tratamento de sífilis e gonorreia. As folhas de L. alba, as quais são preparadas sob a forma de infusão ou decocção e ingeridas por via oral, produzem um óleo essencial rico em moléculas iso-prenóides denominadas terpenóides. Estes compostos não são apenas de interesse farmacológico, mas também industrial já que são usados na confecção de fragrâncias. A composição dos óleos essenciais pode variar em função de diferentes fatores abióticos e genotípicos, como por exemplo nível de ploidia. Neste contexto, os objetivos deste trabalho foram caracterizar o transcriptoma de folha da espécie L. alba e buscar sequencias putativas de enzimas envolvidas na produção de metabólitos secundários. O transcriptoma foi sequenciado pela plataforma Miseq (Illumina) com bibliotecas pairedend de 300 bp. O sequenciamento resultou em um total de 47.498.310 reads paired-end (23.749.155 reads para cada end sequenciado) de 35-308 bp, compreendendo 12.148.327.567 nucleotídeos (-12 Gb). A montagem de novo dos transcritos foi processada a partir do software Trinity que gerou 193.532 transcritos, sendo 128.209 unigenes, com o valor de N50 igual a 1.187 bp. Um total de 86.122 ORF (Open Read Frame) foi obtido e a seguir submetido ao algoritmo de alinhamentos BlastP, o qual encontrou 75.533 sequências com referência no banco de dados NR (Non-Redundant) de proteínas. Aproxima-damente, 78,4% dessas sequências foram anotadas funcionalmente a partir do pipeline utiliza-do pelo software Blast2GO. As análises das sequências anotadas revelaram prováveis enzimas para síntese de terpenóides como geraniol e linalol/nerolidol. Para validação da montagem e anotação, foram realizados ensaios de qPCR para amplificação de sequências de 13 genes para controles endógenos e 4 genes de terpeno sintases. Os resultados obtidos aqui corroboram outros estudos de transcriptoma de espécies não modelo usando tecnologias de sequenciamento de alto-desempenho. / Lippia alba, popularly known as erva-cidreira, is a widely distributed specie in Americas and it is found throughout Brazil. This specie has important using in popular medicine for cramp-ing, indigestion, nausea, diarrhea, dysentery, respiratory diseases, liver disorders treatment and infectious diseases such as syphilis and gonorrhea. The leaves of L. alba, which are pre-pared by infusion or decoction and orally ingested, producing an essential oil rich in terpene compounds. These compounds are of pharmacological and industrial interest, due to their use in fragrance preparation. Interestingly, the composition of essential oils change according to different abiotic factors and genetic variations such as ploidy level. In this context, the aims of this work were to characterize the transcriptome of leaves of L. alba (linalool chemotype) and to search putative enzymes sequences involved in production of secondary metabolites. The transcriptome was sequenced by Miseq platform (Illumina) running pair-end libraries 300 bp. The sequencing resulted in 47,498,310 reads (23,749,155 reads for each end sequenced) of 35-308 bp, comprising 12,148,327,567 nucleotides (-12 Gb). The de novo assembly of tran-scripts was processed by Trinity software and generated 193,532 transcripts, in 128,209 uni-genes, with N50 equal to 1,187 bp. 86,122 ORFs (Open Read Frame) were obtained and sub-mitted to BlastP algorithm, finding 75,533 sequences included in NR (Non-Redundant) pro-tein database. Approximately 78.4% of these sequences were functionally annotated using Blast2Go pipeline. Analysis of annotated sequences revealed putative enzymes for synthesis of terpenoids such as geraniol and linalool/nerolidol. For assembly and annotation validation, qPCR assay were realized by amplification of 13 endogenous control genes and 4 terpene synthases genes. The results found here corroborate transcriptome studies in non-model or-ganisms using high-performance sequencing technologies.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Lippia alba (Mill.) N. E. Brown is a native medicinal plant of South America. Known popularly as false-melissa , its leaves and roots are used in the treatment of some illnesses, including some of infective etiology. The presence of essential oils, among other metabolites with recognized antimicrobial activity, can explain its medicinal use. This paper describes the chemical analyses and antimicrobial activity of the essential oils from Lippia alba at different seasons of the year, as well as the bio-guided fractionation, the isolation and the structure elucidation of its main constituents. Lippia alba was cultivated in São Luiz Gonzaga, RS, Brazil, and its leaves were collected in 2005 and 2006 in the middle period (January, April, July and October) of each season. A voucher specimen (SMDB n° 10.050) was deposited in the herbarium of the Department of Biology, UFSM. The extraction of the essential oils was performed by the hydrodistillation method of fresh leaves. The oils were analyzed by GC-MS and their constituents were identified by the comparison of Kovat s retention indexes and mass spectra with literature data. The essential oil was fractionated by CC over silica gel for the isolation of germacrene D-4-ol and linalool, both identified by GC-MS, 13C and 1H NMR, DEPT-135, COSY and HETCOR. The antimicrobial activity of the essential oils, fractions and isolated compounds were determined by the broth microdilution method. The essential oil showed qualitative and semi-quantitative variability in relation to the seasons of the year. The yield ranged from 0.3 to 0.6%, being lower in winter and higher in summer, autumn and spring. The essential oil was composed of monoterpenoids (69 - 84%) and sesquiterpenoids (6 - 24%), being most of them oxygenated and hidrocarbonated, respectively. Moreover, the major compounds (> 15%) were not the same between the years of the analysis. The seasonal variability influenced the antimicrobial activity of the essential oils. With the exception of P. aeruginosa, all other microorganisms were susceptible to the essential oil. The most sensitive ones were S. cerevisiae (MIC and MFC of 800 μg/mL for the oil obtained in January), S. aureus (MIC of 800 μg/mL and MBC of 1600 μg/mL for the oils obtained in April and July) and K. pneumoniae (MIC and MFC of 1600 μg/mL for the oil extracted in July). In view of the antimicrobial activity, winter and summer are the best seasons for the collection and extraction of essential oils. The bio-guided fractionation of the essential oil showed that the fractions containing greater amounts of oxygenates are more active than those containing hydrocarbon compounds. Germacrene D-4-ol presented activity against S. cerevisiae (MIC and MFC of 200 μg/mL), P. zopfii (MIC and MFC of 400 μg/mL) and S. aureus (MIC and MBC of 800 μg/mL), while linalool was inactive against the tested microorganisms up to 3200 mg/mL. / Lippia alba (Mill.) N. E. Brown é uma planta medicinal nativa da América do Sul. Conhecida popularmente como falsa-melissa , suas folhas e raízes são empregadas no tratamento de várias doenças, incluindo algumas de etiologia infecciosa. A presença dos óleos essenciais, entre outros metabólitos com reconhecida atividade antimicrobiana, pode explicar o seu uso como medicinal. Este trabalho descreve a analise química e a atividade antimicrobiana dos óleos essenciais de Lippia alba nas diferentes estações do ano, bem como o fracionamento bio-guiado, o isolamento e a elucidação estrutural dos seus principais constituintes. Lippia alba foi cultivada no município de São Luiz Gonzaga, RS, Brasil, e suas partes aéreas foram coletadas no período médio de cada estação (janeiro, abril, julho e outubro) durante o ano de 2005 e 2006. Material testemunha (SMDB n° 10.050) encontra-se depositado no Herbário do Departamento de Biologia da UFSM. Para a realização dos experimentos, foram utilizadas as folhas frescas. A extração dos óleos essenciais foi realizada pelo método da hidrodestilação. Os óleos foram analisados por CG-EM e seus constituintes identificados pela comparação dos índices de retenção de Kovats e espectros de massas com dados da literatura. O óleo essencial também foi fracionado por CC sobre gel de sílica até o isolamento do germacreno D-4- ol e do linalol, ambos identificados por CG-EM, RMN 13C e 1H, DEPT-135, COSY e HETCOR. A atividade antimicrobiana dos óleos essenciais, das frações e das substâncias isoladas foi determinada pelo método de microdiluição em caldo. O óleo essencial apresentou variabilidade qualitativa e semiquantitativa em relação às estações do ano. O rendimento variou na ordem de 0,3 a 0,6%, sendo menor no inverno, e maior no verão, outono e primavera. O óleo essencial foi composto de monoterpenóides (69 - 84%) e sesquiterpenóides (6 24%), sendo a maioria deles oxigenados e hidrocarbonados, respectivamente. Os compostos majoritários (>15%) não foram os mesmos entre os diferentes anos de análise. A variabilidade sazonal, por sua vez, influenciou a atividade antimicrobiana dos óleos essenciais. Com exceção de P. aeruginosa, todos os outros microorganismos foram sensíveis ao óleo essencial de pelo menos uma estação. Os microorganismos com menor CIM foram S. cerevisiae (CIM e CFM de 800 μg/mL para o óleo obtido em janeiro), S. aureus (CIM de 800 μg/mL e CBM 1600 μg/mL para os óleos obtidos em abril e julho) e K. pneumoniae (CIM e CBM de 1600 μg/mL para o óleo extraído em julho). Tendo em vista a atividade antimicrobiana, o inverno e o verão constituem as melhores épocas para a coleta e extração dos óleos essenciais. O fracionamento bio-guiado do óleo essencial mostrou que frações contendo maiores quantidades de compostos oxigenados são mais ativas do que aquelas contendo compostos hidrocarbonados. Germacreno D-4-ol apresentou atividade contra S. cerevisiae (CIM e CFM de 200 μg/mL), P. zopfii (CIM e CFM de 400 μg/mL) e S. aureus (CIM e CBM de 800 μg/mL), ao passo que linalol foi inativo contra os microorganismos testados até a concentração de 3200 mg/mL.

Lippia sidoides Cham (alecrim pimenta) é uma planta medicinal e aromática nativa do nordeste brasileiro, se extrai o óleo essencial para uso bactericida, fungicida, moluscida e larvicida. O presente trabalho avaliou o efeito da idade de corte, horário de colheita e condições para as plantas de Lippia sidoides Cham. sobre a produção do seu óleo essencial nas condições da região sul do Tocantins. A extração do óleo essencial foi realizada por hidrodestilação em aparelho Clevenger, pelo tempo de uma hora e vinte minutos igualmente para todas as amostras. Foram realizados três experimentos. No experimento 1, comparou-se a produção de óleo essencial das plantas aos 90, 120, 150, 180, 210 e 240 DAT. No experimento 2, comparou-se o teor do óleo de amostras de folhas colhidas nos horários de 0, 4, 8, 12, 16 e 20 horas. E, no experimento 3, comparou-se o teor de óleo essencial em função de temperatura (30, 40 e 50ºC) e tempo de secagem (24, 48 e 72 horas). A tendência de maior teor de óleo seria em torno dos 87,5 DAT, diminuindo para cortes anteriores ou posteriores a esta. Os maiores valores para massa seca situando-se aos 210 DAT seguindo-se a tendência de redução desta variável a partir do citado período. Os maiores valores de produtividade de óleo essencial por planta ocorrem em torno dos 220 DAT, evidenciando essa data como a de tendência de maior produtividade. Conclui-se, que aos 220 dias após o transplantio ocorre uma produção de 5,75 g de óleo essencial por planta, alcançado a produtividade de óleo essencial de 57,5 kg ha-1. O tempo na secagem não influenciou no teor de óleo essencial. Porém a temperatura de 40 °C proporciona máxima conservação do óleo essencial de Lippia sidoides Cham. e consequentemente maior teor do mesmo. / Lippia sidoides Cham. (Rosemary pepper) is a native medicinal and aromatic plant in northeastern Brazil, extract the essential oil for use bactericide, fungicide, molluscicide and larvicide. This study evaluated the effect of cutting age, harvest time and conditions for the plant Lippia sidoides Cham. on the production of essential oil in the conditions of southern Tocantins region. The essential oil extraction was performed by hydrodistillation in Clevenger apparatus, the time of one hour and twenty minutes for all samples equally. Three experiments were conducted. In one experiment, we compared the production of essential oil from plants at 90, 120, 150, 180, 210 and 240 DAT. In experiment 2, compared the leaf samples Oil content collected at the times of 0, 4, 8, 12, 16 and 20 hours. And in experiment 3 compared the essential oil content in function of temperature (30, 40 and 50 ° C) and drying time (24, 48 and 72 hours). The tendency to higher oil content would be around 87.5 DAT decreasing to previous cuts or subsequent thereto. The highest values for dry mass standing at 210 DAT followed the downward trend of this variable from that period. The largest essential oil yield per plant values occur around 220 DAT, showing that date as the greater productivity trend. It follows that to 220 days after transplanting is a production of 5.75 g of essential oil per plant, achieved the essential oil yield of 57.5 kg ha-1. The drying time did not influence the essential oil content. However, the temperature of 40 ° C provides maximum conservation of essential oil of Lippia sidoides Cham. and consequently higher content thereof.